Молекулярно-генетическая причина остеопетроза в Чувашии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Близнец, Елена Александровна

• Близнец, Елена Александровна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Близнец, Елена Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений.----------------—

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫИ

Классификация, общая характеристика остеопетроза.—.

Этиопатогенез. Молекулярные основы остеопетроза

Ген ТСПЮI (ген Т-клеточного иммунного регулятора 1).

Ген СЬСЫ7 (хлорного канала 7)-.

Другие гены, ответственные за развитие остеопетроза.

Эпидемиология остеопетроза

Остеопетроз в Чувашии.—----------------—

Неравновесие по сцеплению

Тонкое генетическое картирование наследственных заболеваний.

МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объекты исследования.—.

Выделение геномной ДНК-----------------------------------------------------------------—

Культивирование кожных фибробластов

Выделение тотальной РНК и обратная транскрипция------------------------------—

Генетические маркерыввСР-анализ и автоматическое секвенирование.

Анализ мутации807+5С>А в гене ТСПИИ

Неравновесие по сцеплению

Расчет возраста мутации.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Картирование гена--------------------------------------------------—.

Идентификация мутации.

Анализ последствий мутации807+5С>А в гене ТСШС1^

Исследование уровня экспрессии мутантной мРНК

Последствия других мутаций в гене ТСГОС1.

Разработка и практическое применение систем идентификации мутации с.807+50А в гене ТСИНИ

Популяционные исследования частоты мутации807+5С>А в гене ТСИКИ

Неравновесие по сцеплению.

Возраст" мутации

Заключение диссертации по теме «Генетика», Близнец, Елена Александровна

1 В фуппе больных аутосомно рецессивным остеопетрозом из Чувашии выявлено полное неравновесие по сцеплению по 4 м полиморфным маркерам тесно сцеплен ным с геном TCIRGI При этом ассоциация с заболеванием оказалась статистически достоверной для 3 х из маркеров СА повтор из клона АС034259 dbSNP 884826 и D11S987 У всех б01ьных обнаружен один гаплотип в гомозиготном состоянии Эти данные подтверждают влияние эффекта основателя на накопление остеопетроза в Чувашии и позволяют картировать локус заболевания в области гена TCIRGI 2 У всех больных остеопетрозом из Чувашии в гене TCIRGI обнаружено единственное изменение нуклеотиднои последовательности ранее не описанная мутаиия с 807+5G>A (lVS8+5g->a) в гомозиготном состоянии 3 Исследование экспрессии мутантной мРНК показало что замена с 807+5G>A приво дит к нарушению процесса сплайсинга в интроне 8 гена TCIRGI и образованию нон сенс-транскрипта при этом уровень его снижен по сравнению с уровнем нормально го транскрипта в клетках гетерозиготного носителя мутации 4 Разработана система молекулярно генетических методов для простой и быстрой идентификации вьшвленной мутации в целях диагностики заболевания а также скрининговая тест-система на основе метода real time PCR для выявления гетерози готного носительсгва мутации с 807+5G>A 5 Установлена популяционная частота 1юсителеи патологической мутации среди ly вашей Частота мутации оказалась оавной 1 68% а расчетная частота заболевания 1 3500 новорожденных Эти результаты хорошо соотносятся с данными генетико эпидемиологического исследования где встречаемость остеопетроза оказалась рав НОИ 1 3900 новорожденных а расчетная частота гетерозиготных носителей 3 15% Обнаружена высокая частота мутации с 807+5G>A и в марийской народности Час тога мутации оказалась равной О 84% а расчетная частота заболевания 1 14 000 новорождениьг< В популяционных выборках удмуртов и башкир мутация с 807+5G>A не вьшвлена 6 У 1увашеЙ и марийцев выявлен общий гаплотип хромосом несуших с 807+5G>A что говорит об общем происхождении данной мутации для обеих популяции и под тверждает историческую общность указанных народностей 7 На основе анализа гаплотипов хромосом несущих мутантныи аллель произведена оценка возраста> мутации в чувашской популяции которая составила 880 + 260 лет что не противоречит историческим данным список ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ А V Genetic mapping of autosomal recessive Chuvash osteopetrosis Human ge nome meeiing 2004, Berlin, Germany, 4-7 April 2004 P275 Genet 2005 V 13. supp! 1 P 279 4 Близнец Е.А , Гинтер В К , Кириллов А Г, Зинченко Р А , Тверская С М , По ляков А В Молекулярно-генетическое исследование аутосомно-рецессивного остеопетроза в Чувашии V съезд Российского общества медицинских генети ков, Уфа, 2005 5 Близнец Е. Л Тверская С М , Зинченко Р А , Абрукова А В , Г интер Е К Поляков А В (2006) "Экспрессионный анализ мутации с 807+5g>a в гене TCIRG1, ответственной за остеопетроз в Чувашии " Медицинская генетика 22- 6 Близнец Е. А , Зинченко Р А , Тверская С М , Никулин М В , Кириллов А Г , Гинтер Е К , Поляков А В (2006) «Популяционная частота и возраст мутации в c807+5G>A, являющейся причиной аутосомно-рецессивного остеопетроза в Чув2ипкк»^Медицинская генетика 2006, т 5, № 9(51), с 9-14 7 Е Bliznetz, RZinchenko, S Tverskaya, А Polyakov Estimating the gene frequency of malignant autosomal recessive osteopetrosis in Volga-Ural region populations of Russia and dating the mutation in Chuvashiya European Journal of Human Genet-

ics,y 14 Supp I May 6-9, 2006 Амстердам, P 0226, p 149 8 Близнец Е.А , Вассерман Н Н , Поляков А В (2006) «Молекулярные методы диагностики распространенных наследственных чувашских болезней» Меди цинская генетика 2006,т5, Приложение 1, с 10-13 9 Зинченко Р Л Ельчинова Г И , Тимковская С Е , Петрова И В , Шокарев Р А , Близнец Е.А, Тверская С М, Поляков А В Дифференциация этнических групп России по генам наследственных болезней Медицинская генетика 2005, т 4, № 4 , с 190 10 Кириллов А Г, Близнец Е.А., Поляков А В , Гинтер Е К «Аутосомно рецессивный остеопетроз» гл в коллективной монографии «Генетическая структура и наследственные болезни Чувашской популяции» под редакцией Гинтера Е К и Зинченко Р А Издательский дом "Пегас", Чебоксары 2006, 232-