Молекулярно-генетическая модификация бактерий рода Bordetella для создания рекомбинантных препаратов для профилактики коклюша тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, доктор наук Синяшина Людмила Николаевна

• Синяшина Людмила Николаевна
• доктор наук
• 2017

Оглавление диссертации доктор наук Синяшина Людмила Николаевна

СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Детерминанты вирулентности бактерий рода Bordetella 1.1.1. Регуляция вирулентности бактерий рода Bordetella

1.1.2. Факторы вирулентности бактерий рода Bordetella

1.2. Вакцинопрофилактика коклюша и распространенность бактерий Bordetella pertussis с мутациями в генах основных факторов вирулентности

1.3. Иммунитет к бактериям Bordetella pertussis при заболевании и вакцинации

1.3.1. Гуморальный иммунный ответ к бактериям Bordetella pertussis

1.3.2. Клеточно-опосредованный иммунный ответ к бактериям

Bordetella pertussis

1.4. Молекулярно-генетические подходы к созданию новых препаратов для профилактики коклюша

ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы 2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Разработка методической базы для молекулярно-генетической модификации бактерий рода Bordetella

2.2.1.1. Отбор реципиентных бактерий рода Bordetella для конструирования рекомбинантных бактерий B.pertussis. Отработка условий конъюгации для передачи рекомбинантных плазмид в клетки бактерий рода Bordetella

2.2.1.2. Конструирование плазмид широкого круга хозяев, содержащих природный и мутантный оперон ptx

2.2.1.3. Конструирование рекомбинантных бактерий B.bronchiseptica и B.pertussis, содержащих нативный и мутантный оперон ptx в составе плазмид

2.2.1.4. Конструирование плазмид не способных реплицироваться в бактериях рода Bordetella и содержащих мутантный оперон ptx

2.2.1.5. Конструирование плазмид не способных реплицироваться в бактериях рода Bordetella и содержащих мутантный фрагмент гена dnt

2.2.2. Конструирование рекомбинантных аттенуированных бактерий B.pertussis, содержащих мутантную форму оперона ptx и нокаутную мутацию в гене dnt генома B.pertussis

2.2.2.1. Конструирование рекомбинантных аттенуированных бактерий B.pertussis, содержащих мутантную форму оперона ptx в геноме B.pertussis

2.2.2.2. Конструирование рекомбинантных аттенуированных бактерий B.pertussis, содержащих мутантную форму оперона ptxPl и нокаутную мутацию в гене dnt бактерий B.pertussis 4М

2.2.2.3. Конструирование рекомбинантных аттенуированных бактерий B.pertussis, содержащих нокаутную мутацию в гене dnt и ptxP3 мутантного оперона ptx

2.2.3. Иммунобиологическая характеристика сконструированных бактерий

B.pertussis

2.2.3.1. Изучение стабильности молекулярной структуры и характеристик рекомбинантных аттенуированных бактерий B.pertussis 4М и B.pertussis

4М^ после 15 пересевов на искусственной питательной среде и пяти пассажей в легких мышей

2.2.3.2. Защитные свойства рекомбинантных аттенуированных бактерий

В.реПтзгя

2.2.3.3. Характеристика токсичности и безопасности кандидатной рекомбинантной живой коклюшной вакцины интраназального применения в экспериментах с лабораторными животными

2.2.4. Разработка нового теста определения защитной активности коклюшных вакцин

2.2.5. Разработка препарата кандидатной рекомбинантной цельноклеточной коклюшной вакцины на основе инактивированных аттенуированных бактерий B.pertussis 4М генотипа р1хР1

2.2.6. Возможности применения сконструированных рекомбинантных бактерий В.реПтзгя

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЦКВ (ККВ) - цельноклеточная (корпускулярная) коклюшная вакцина

БКВ - бесклеточная (ацеллюлярная) коклюшная вакцина

АКДС - адсорбированная коклюшно - дифтерийная - столбнячная вакцина ( с цельноклеточным коклюшным компонентом)

АКДС - адсорбированная коклюшно - дифтерийная - столбнячная вакцина ( с бесклеточным коклюшным компонентом)

рЖКВ - рекомбинантная живая коклюшная вакцина

рЦКВ - рекомбинантная цельноклеточная коклюшная вакцина

ЛД50 - половина летальной дозы

Тх- Т-хэлперы

ФНО - фактор некроза опухоли Аг - антиген Атт- антитела

- иммуноглобулины ( А, М, G) КТ - коклюшный токсин КаТ - коклюшный анатоксин ПРН - пертиакти, белок 69 кД 69 кД - пертактин, белок 69 кД ФИМ - фимбрии

ОСО - отраслевой стандартный образец МС - международный стандарт МЕ/мл- международные единицы в мл р1хА - аллель гена коклюшного токсина ргп1- аллель гена пертактина йш2-1 йшЗА - аллели гена фимбрий

ptxP1/ptxP3 - генотипы бактерий B.pertussis

КТ* - токсоид коклюшного токсина

ЛСА- лейкоцитоз стимулирующая активность

ГСА - гистамин сенсибилизиующая активность

АЦТ - аденилатциклазный токсин

ГЭ - геном-эквивалент

ИФА - иммуноферментный анализ

КОЕ - колониеобразующие единицы

КУА - казеиново-угольный агар

БЖ - среда Борде-Жангу

АГГ - агглютиногены

ЛПС - липополисахаридный токсин

ДНТ - дермонекротический токсин ДНА - дермонекротическая активность

ЛД - летальная доза

МЗЕ - международные защитные единицы МОЕ - международные оптические единицы ПЦР - полимеразная цепная реакция РНГА - реакция непрямой гемааглютинации ТЦТ - трахеальный цитотоксин ФГА - филаментозный гемагглютинин bvg - bordetella virulence gene Fim - фимбриальные белки

IgA - иммуноглобуллин А

IgG - иммуноглобуллинG

IL (ИЛ) - интерлейкин

plt - pertussis toxin liberation genes

ptx - гены, кодирующие субъединицы коклюшного токсина

Th1 - Т-хелперы 1 типа

Th2 - Т-хелперы 2 типа

ИНФ - интерферон

п.н. - пар нуклеотидов

м.к. - микробные клетки

ГМТА - гексаметилентетрамин

ФНО - фактор некроза опухоли

CHO - клетки яичника китайского хомячка

MHC - главный комплекс гистосовместимости

PBS - фосфатный буфер

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическая модификация бактерий рода Bordetella для создания рекомбинантных препаратов для профилактики коклюша»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Бактерии рода Bordetella - B.pertussis, B. parapertussis и B.bronchiseptica известные под названием «классические» Bordetellae, экспрессируют целый ряд факторов вирулентности, позволяющих колонизировать дыхательные пути природных хозяев, ослаблять иммунитет и вызывать заболевание. Бактерии B..pertussis и B. parapertussis - производные двух независимых штаммов бактерий B.bronchiseptica, возбудителя бронхисептикоза у животных, эволюционировали, как специфические патогенны для человека. В процессе эволюции произошла потеря части бактериального генома, перестановка и инактивация генов предшественника. Единственным известным на сегодняшний день носителем бактерий B.pertussis в естественных условиях является человек. Бактерии B.pertussis - вызывают высококонтагиозное респираторное заболевание коклюш, передаются воздушно капельным путем. До появления вакцин во второй половине двадцатого века, коклюш сопровождался высокой детской смертностью. Первоначальный успех от массовой вакцинации, привел к тому мнению, что коклюш находится под сдерживающим контролем. Тем не менее, до сих пор во всем мире ежегодно регистрируется более 400 тысяч смертельных случаев, связанных с коклюшем делая его шестой инфекцией по частоте детской смертности от инфекций (1). Коклюш возрождается даже в развитых странах, где профилактика коклюша входит в национальный календарь прививок и обеспечивается программами плановой вакцинации детей первого года жизни (2, 3). В некоторых странах частота коклюша в последние 20 лет возросла почти в 10 раз (4). Эпидемиология коклюша неожиданно изменилась, все чаще болеют подростки и взрослые (2). Одной из причин этого является затухание коллективного вакцинного иммунитета уже в подростковом возрасте. У взрослых коклюш часто протекает в атипичных формах, его трудно диагностировать и во многих случаях

заболевание остается незамеченным. Однако инфицированные бактериями В.реПтзгя взрослые составляют значительный резервуар для передачи возбудителя не вакцинированным детям самого раннего возраста, составляющими группу риска для развития тяжелых форм коклюша с высокими показателями смертности. Вакцинацию против коклюша обычно начинают с двух или трех месячного возраста, в зависимости от типа вакцин и при отсутствии противопоказаний. Для достижения оптимального уровня защиты необходимо не менее трех иммунизаций с интервалом в 1,5 месяца. Таким образом, необходимый защитный иммунитет у ребенка достигается не ранее шестимесячного возраста.

В настоящее время вакцинацию против коклюша проводят цельноклеточной (корпускулярной) коклюшной (ЦКВ или ККВ) и бесклеточной (ацелюлярной) коклюшной (БКВ или аКВ) вакцинами в составе коклюшно-дифтерийно-столбнячной адсорбированной вакцины (АКДС или АаКДС).

ЦКВ содержат инактивированные бактериальные клетки возбудителя коклюша. Эффективность ЦКВ как монопрепарата, так и в составе АКДС была убедительно доказана многочисленными отечественными и международными исследованиями. Однако в ряде случаев применение АКДС сопровождалось осложнениями. Побочные эффекты связывали с коклюшным компонентом АКДС и присутствием в ней формалина, мертиолята и адьювантов. Реактогенность ЦКВ в большинстве случаев не была доказана, тем не менее началась компания массовых отказов от вакцинации АКДС. Отказ от вакцинации АКДС привел к резкому росту коклюша в ряде европейских стран и необходимости разработки новых, более безопасных вакцин.

В большинстве развитых стран ЦКВ были заменены БКВ, содержащими очищенные протективные антигены возбудителя коклюша. На протяжении последних 20 - 25 лет АаКДС широко используются в

экономически развитых странах - США, Японии, Австралии, Германии, и ряде других стран Европы. БКВ содержат от одного до пяти протективных антигенов, выделенных из вирулентных бактерий B.pertussis. Инактивированный коклюшный токсин (КТ) является обязательным компонентом всех БКВ. Необходимость очистки коклюшных антигенов и химической инактивации токсинов обусловливает высокую стоимость АаКДС и ограниченную доступность для массовой вакцинации, особенно, в развивающихся странах, на которые сегодня приходится основная доля детской смертности от коклюша. Не смотря на относительную безопасность БКВ наличие в них формальдегида или мертиолята, и адьювантов не исключают возможных осложнений после вакцинации. К тому же, исследования последних десятилетий показали, что иммунитет после БКВ сохранается в течение 5-7 лет, тогда как после вакцинации ЦКВ - более длительный, до 10 лет и приближается к постинфекционному иммунитету, сохраняющемуся порядка 15-ти лет. Согласно выводам ВОЗ, использование БКВ является одной из причин роста заболеваемости коклюшем в развитых странах, особенно, в тех, где для первичной иммунизации применяют АаКДС (5). Наблюдается циркуляция бактерий B.pertussis, имеющих мутации в генах, кодирующих белки входящие в состав БКВ и изменению вирулентности возбудителя коклюша. Это обстоятельство, а также отсутствие противобактерийного иммунитета после вакцинации БКВ, способствует снижению эффективности применяемых вакцин и снижению коллективного иммунитета.

Рост заболеваемости среди подростков и взрослых, низкая продолжительность поствакцинального иммунитета привели к необходимости ревакцинации детей и взрослых и, как следствие, увеличению расходов на профилактику коклюша. Наличие неконтролируемого резервуара инфекции в виде не вакцинированных детей и не иммунных взрослых, особенно в семьях с новорождёнными и в детских коллективах требует максимально ранней вакцинации детей против коклюша.

Многочисленные исследования показали, что иммунная система новорожденных недостаточно зрелая для того, чтобы эффективно развивать защитный иммунитет, опосредованный современными коклюшными вакцинами (5). У новорожденных детей недостаточна выработка уИФН, являющегося индикатором иммунного ответа клеток ТЫ, необходимого для защитного иммунитета. У детей привитых БКВ антиген - специфичный уИФН в достаточном количестве вырабатывается только через 6 и более месяцев (6). В тоже время, при заболевании бактерии В.реПтзгя индуцируют сильный поддающийся измерению антиген-специфичный иммунный ответ типа ТЫ даже у очень маленьких детей в возрасте около 1 месяца, что позволяет предположить, что вакцины способные имитировать природное инфицирование могут оказаться эффективными даже у новорожденных (6).

Эти наблюдения, а также рост заболеваемости коклюшем в ряде развитых стран, особенно среди детей первого года жизни, приводит к необходимости разработки новых безопасных препаратов. Разработку необходимых препаратов для профилактики коклюша, возможно, осуществить посредством молекулярно-генетической аттенуации бактерий В.реПтзгя, снижающей вирулентность возбудителя, но сохраняющего способность колонизировать респираторный тракт и индуцировать защитный иммунитет.

Препарат для интраназального введения имитирующего естественный путь проникновения бактерий В.реПтзгя возможно будет использовать для однократной иммунизации не только подростков и взрослых, но и новорожденных детей на первом месяце жизни.

На основе рекомбинантных аттенуированных бактерий В.реПтзгя также возможно конструировать штаммы-продуценты протективных антигенов - компонентов для БКВ, а также модифицировать производственные «вакцинные» штаммы не требующие дополнительной химической инактивации при приготовлении ЦКВ.

Степень разработанности проблемы

Попытки отбора и получения аттенуированных бактерий B.pertussis для вакцинации против коклюша предпринимались на всей истории вакцинации против коклюша. К наиболее удачным вариантам аттенуации бактерий B.pertussis можно отнести Ага-мутанты с нарушенным метаболизмом, обеспечивающим снижение вирулентности и уменьшение времени переживания бактерий в организме хозяина (7). Полученные в 2014 г. Ага-мутанты изучаются в качестве кандидата для живой противококлюшной вакцины(8). Такой подход может быть перспективным, однако основным его недостатком является отсутствие информации о механизме влияния соответствующих мутаций на вирулентность возбудителя

(9).

На протяжении последних 20-30 лет проведено много молекулярно-генетических исследований по изучению структуры и регуляции экспрессии генов вирулентности бактерий B.pertussis (7, 8, 9). Определена структура и ферментативная активность токсинов B.pertussis и большинства протективных антигенов и эпитопов. Длительное применение БКВ позволило уточнить роль отдельных факторов вирулентности в формировании поствакцинального иммунитета (10а). К моменту начала нашего исследования была определена ведущая роль коклюшного токсина (КТ) в противококлюшном иммунитете. В настоящее время показано, что для полного освобождения от бактериальной инфекции необходим клеточный иммунный ответ, опосредованный Т-хелперными клетками типа ТЫи ТЫ7. Защитный иммунитет, генерированный ЦКВ, в значительной степени опосредован клетками ТЫи ТЫ7, тогда как БКВ индуцируют сильные ответные реакции антител ТМ.

Наиболее важными для начала настоящей работы были результаты изучения токсической активности КТ и картирование участков, ответственных за проявление его ферментативной активности. Картированы несколько мутаций в опероне ptx, обеспечивающих практически полное

12

устранение ферментатативной (токсической) активности КТ и сохранение исходной конформации его протективных эпитопов. Проведен ренгеноструктурный анализ КТ.

В 80-х годах опубликованы кодирующие последовательности КТ и дермонекротического токсина бактерий рода Bordetella. В конце 90-х опубликованы первые полные последовательности геномов бактерий B.pertussis, B.parapertussis и B.bronchisetptica (11).

В конце 90-х годов показана возможность осуществления генетического обмена между бактериями B.pertussis и E.coli. Начаты исследования по конструированию гетерологичных продуцентов протективных антигенов B.pertussis (КТ, ФГА, ПРН) - компонентов бесклеточных коклюшных вакцин. Показана возможность использования бактерий B.pertussis в качестве вектора для конструирования поливалентных живых вакцин.

В нашем институте совместно с Уфимскиим НИИВС им. Мечникова Минздрава СССР были отработаны методы выделения КТ из вирулентных бактерий B.pertussis, созданы и зарегистрированы тест-системы ИФА для определения КТ, продуцируемого бактериями, и противококлюшных антител в сыворотке крови человека. Выделены и охарактеризованы очищенные препараты КТ, проведена вакцинация доноров, получены и зарегистрированы препараты иммуноглобулинов для лечения коклюша (12 - 14).

Цель работы: конструирование и иммунобиологическая характеристика аттенуированных бактерий B.pertussis для создания новых рекомбинантных препаратов для профилактики коклюша.

Задачи исследования:

1.Разработать методическую базу молекулярно-генетической модификации бактерий рода Bordetella.

2.Сконструировать аттенуированные бактерии B.pertussis, продуцирующих иммуногенную нетоксичную форму КТ и лишённых активности дермонекротического токсина.

3.Изучить иммунобиологические характеристики, стабильность генетической структуры и защитные свойства аттенуированных бактерий B. pertussis.

4.Изучить безопасность аттенуированных бактерий B. pertussis в экспериментах на лабораторных животных.

5.Разработать новый метод для оценки защитных свойств живых аттенуированных бактерий B. pertussis по выживаемости мышей при интраназальном заражении рекомбинантными бактериями B.bronchiseptica продуцирующими нативный коклюшный токсин.

6.Разработать кандидатный профилактический препарат для инраназального применения и провести доклинические исследования.

Научная новизна

В России исследований по молекулярно-генетической модификации вирулентных бактерий рода Bordetella не проводится. Нами впервые сформулирована задача конструирования аттенуированных бактерий B.pertussis и создания препарата для интраназальной однократной иммунизации на основе живых клеток с возможностью их модификации по мере накопления циркулирующих штаммов с мутациями в генах протективных антигенов, позволяющими возбудителю «ускользать» от поствакцинального иммунитета. Генетически модифицированные бактерии B.pertussis должны быть способны колонизировать дыхательные пути подобно естественному инфицированию, индуцировать местный иммунный ответ и формировать защитный иммунитет не вызывая развития патологического процесса.

Разработана методическая база молекулярно-генетической модификации

бактерий рода Bordetella. Впервые в России разработаны методы

скрещивания и передачи генетической информации от бактерий E.coli в

14

бактерии рода Bordetella. На основе различных векторов сконструированы плазмиды содержащие нокаутную мутацию в гене дермонекротического токсина (dnt) и двойную мутацию в опероне ptx, инактивирующую ферментативную активность КТ. Один вариант плазмид, не способных реплицироваться в бактериях рода Bordetella, предназначен для аллельного обмена и внесения соответствующих мутаций в хромосому вирулентных бактерий рода Bordetella. Второй, сконструированный на базе плазмиды широкого круга хозяев, содержащий мутантный вариант оперона ptx, - для конструирования штаммов-суперпродуцентов токсоида КТ.

Впервые на основе бактерий «вакцинных» штаммов, применяемых в Россиии для производства ЦКВ, сконструированы изогенные аттенуированные бактерии B.pertussis «довакцинного» генотипа ptxPl -B.pertussis 4M (реципиент B.pertussis 475 серовара 1.2.3), B.pertussis B.pertussis 232 (реципиент 231серовара 1.0.3) и B.pertussis 135 (реципиент B.pertussis 134 серовара 1.2.0), содержащие нокаутную мутацию в гене дермонекротического токсина (dnt) и две точечные мутации в опероне ptx, продуцирующие иммуногенную нетоксичную форму коклюшного токсина и лишенные активности дермонекротического токсина.

Впервые, на основе штамма B.pertussis 475 серовара 1.2.3 сконструированы аттенуированные бактерии B.pertussis 4M KS, содержащие «поствакцинный» генотип ptxP3 оперона ptx.

Впервые показана возможность продукции рекомбинантными аттенуированными бактериями B.pertussis иммуногенной нетоксичной формы коклюшного токсина.

Рекомбинантные бактерии B.pertussis могут быть использованы в качестве безопасных продуцентов протективных коклюшных антигенов для создания бесклеточных коклюшных вакцин и диагностических препаратов.

Впервые сконструированы рекомбинантные бактерии Ptx+B.bronchiseptica 8220-17, продуцирующие и секретирующие нативный КТ.

Впервые на основе аттенуированных бактерий B.pertussis 4М ^ генотипа ptxР3 разработан препарат кандидатной рекомбинантной живой коклюшной вакцины (рЖКВ) для интраназального применения. Проведено доклиническое изучение препарата кандидатной рЖКВ, определена ее эффективность и безопасность.

Впервые на основе инактивированных аттенуированных бактерий B.pertussis 4М генотипа ptxР1 разработан препарат кандидатной рекомбинантной цельноклеточной коклюшной вакцины (рЦКВ) для парентерального введения.

Полученные результаты указывающие на то, что исследование кандидатных вакцинных штаммов с «новым» генотипом, сконструированных из изогенных бактерий «старых» генотипов, разрешённых к применению в качестве вакцинных, могут быть ограничены доклиническими исследованиями их токсичности и безопасности.

Проведено сравнительное изучение безопасности и эффективности сконструированных нами изогенных аттенуированных бактерий имеющих «вакцинный» ptxР1 и «новый» ptxР3 генотипы, а так же не изогенных аттенуированных бактерий B.perussis. Показано полное соответствие характеристик аттенуированных бактерий ожидаемым параметрам.

Показана потенциальная возможность использования сконструированных аттенуированных бактерий B.perussis в качестве безопасного компонента ЦКВ.

Впервые разработан способ оценки защитной активности живых аттенуированных бактерий B.pertussis по выживаемости мышей при интраназальном заражении с помощью рекомбинантных бактерий Рtx+B.bronchiseptica 8220-17

Сконструированы аттенуированные бактерии B.pertussis и гетерологичные штаммы - продуценты КТ и токсоида, которые могут быть использованы для

выделения КТ и токсоида с целью последующего производства диагностических тест-систем, и специфических противотоксических иммуноглобулинов для лечения тяжёлых форм коклюша.

Практическая значимость

Результаты исследований показывают, что сконструированые аттенуированные бактерии B.pertussis, продуцирующие нетоксичную иммуногенную форму коклюшного токсина и лишённые токсической активности дермонекротического токсина могут служить основой для создания новых рекомбинантных препаратов для профилактики коклюша. Разработанная кандидатная рекомбинантная живая коклюшная вакцина для интраназального введения удобна для иммунизации всех возрастных групп населения, что отвечает задачам здравоохранения в РФ для управляемых инфекций.

Показана возможность использования инактириворанных аттенуированных бактерий B.pertussis для приготовления рекомбинантной цельноклеточной коклюшной вакцины парентерального применения.

Результаты, полученные в ходе выполнения диссертационной работы, вошли в патенты Российской Федерации: 2455024(13)С1 « Аттенуированные бактерии Bordetella pertussis, вакцина против возбудителя коклюша»; 2015148021/14(073867) «Способ оценки защитной активности коклюшных вакцин». Авторское свидетельство №1686840 «Рекомбинантная плазмидная ДНК RSPT1, кодирующая коклюшный токсин и штамм бактерий Bordetella bronchiseptica - продуцент коклюшного токсина». Авторское свидетельство №1497802«Способ получения протективных антигенов бактерий Bordetella pertussis».

Доклинические исследования кандидатной живой коклюшной вакцины интраназального применения на основе аттенуированных бактерий B.pertussis, выявили высокую эффективность и безопасность препарата в

экспериментах с лабораторными животным и позволили получить разрешение на проведение первой фазы клинических исследований.

Разработан способ оценки защитной активности живых аттенуированных бактерий B.pertussis с помощью рекомбинантных бактерий Рtx+ B.bronchiseptica 8220-17 по выживаемости мышей при интраназальном заражении.

Проведено сравнительное изучение безопасности и эффективности сконструированных нами изогенных аттенуированных бактерий имеющих «довакцинный» р1хР1 и «новый» р1хР3 генотипы, а так же не изогенных аттенуированных бактерий B.pertussis. Показано полное соответствие характеристик аттенуированных бактерий B.pertussis ожидаемым параметрам. Полученные результаты показали, что исследование кандидатных для рекомбинантных вакцин штаммов с «новым» генотипом, сконструированных из изогенных бактерий B.pertussis «довакцинных» генотипов и разрешённых к применению в качестве вакцинных возможно будет ограничивать доклиническими исследованиями безопасности.

Сконструированы аттенуированные бактерии B.pertussis и гетерологичные штаммы - продуценты КТ и токсоида, которые могут быть использованы для выделения КТ и токсоида с целью последующего производства диагностических тест-систем, и специфических противотоксичнеских иммуноглобулинов для лечения тяжёлых форм коклюша.

Сконструированы рекомбинантные бактерии Рtx+ B.bronchiseptica 8220-17, продуцирующие полноценный нативный коклюшный токсин и разработан новый способ для оценки защитных свойств живых аттенуированных бактерий B.pertussis при интраназальном заражении мышей с использованием рекомбинантных бактерий.

Список научных трудов

Синяшина Л.Н., Лапаева И.А., Иванов Д.Б., Гусева М.В. Способ получения коклюшных протективных антигенов. Авт.свидетельство № 1497802, 01.04.1989.

Шумаков Ю.Л., Кириллов М.Ю., Бутчер С., Нечаева Е.В., Руниберг-Ньюман К., Синяшина Л.Н., Каратаев Г.И. Нуклеотидная последовательность и свойства транспозоноподобной структуры, клонированной из хромосомы BORDETELLA PERTUSSIS. Генетика, 1993, т.29, №7, с.1061 - 1069.

Кириллов М.Ю., Шумаков Ю.Л., Нечаева Е.В., Синяшина Л.Н., Каратаев Г.И. Нуклеотидная последовательность и свойства инвертированного повторяющегося элемента хромосомы BORDETELLA PERTUSSIS. Генетика, 1993, т.29, №8, с.1267 - 1277.

Нечаева Е.В., Синяшина Л.Н., Амелина И.П., Кириллов М.Ю., Каратаев Г.И. Конструирование модельного штамма B.PERTUSSIS, продуцирующего токсоидную форму КТ. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1994,№5, 33.

Синяшина Л.Н., Воронцов В.В., Семин Е.Г., Честков А.В., Цыганков Ю.Д., Каратаев Г.И. bvg-негативная регуляция перемещений повторяющихся последовательностей в клетках Bordetella pertussis.Генетика, 2005, т.41, №12, с.1608 - 1616.

Воронцов В.В., Сивов И.Г., Умяров А.М., Синяшина Л.Н., Каратаев Г.И. Функциональная активность транспозазы /^-элемента Bordetella pertussis в клетках Escherichia coli. Генетика, 2006, т.42, №1, с.39 - 48.

Синяшина Л.Н., Каратаев Г.И. Молекулярное подтверждение лизогенности микроорганизмов рода Bordetella и характеристика умеренного бактериофага Bordetella parapertussis 662-2. Генетика, 2006, т. 42, №3, с. 339 - 348.

Каратаев Г.И., Марков А.П., Синяшина Л.Н., Миллер Г.Г., Клицунова Н.В., Титова И.В., Семин Е.Г., Гончарова Н.И., Покровская М.С., Амелина И.П., Амоако К., Смирнов Г.Б. Сравнительное изучение роли yadA, invA и psaA генов в патогенности YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2008, №4, с. 10 - 21.

Синяшина Л.Н., Нечаева Е.В., Амелина И.П., Каратаев Г.И. Конструирование аттенуированных бактерий BORDETELLA PERTUSSIS,

продуцирующих иммуногенную нетоксичную форму коклюшного токсина. ЖМЭИ, 2009, №6, с.89 - 94.

Умяров А.М., Синяшина Л.Н., Амелина И.П., Даценко К.А., Большакова Т.Н., Добрынина О.Ю., Каратаев Г.И. Влияние оперона bvgAS Bordetella pertussis на формирование и разрешение коинтегратов плазмиды с хромосомой в мутантах Escherichia coli К12 с нарушениями в общих компонентах фосфоенолпируватзависимой фосфотрансферазной системы. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2010, №1, с.9 - 13.

Синяшина Л.Н., Синяшина Л.С., Семин Е.Г., Амелина И.П., Каратаев Г.И. Конструирование аттенуированных бактерий BORDETELLA PERTUSSIS, утративших активность дермонекротического токсина и продуцирующих измененную нетоксичную форму коклюшного токсина. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2010, №3, с.31 - 36.

Каратаев Г.И., Синяшина Л.Н., Медкова А.Ю. Способ диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя и диагностический набор. Патент на изобретение № 2506316, 10.02.2014.

Медкова А.Ю., Матуа А.З., Синяшина Л.Н., Шевцова З.В., Семин Е.Г., Миквабиа З.Я., Каратаев Г.И. Гиппоаллергенная инновационная живая коклюшная вакцина на основе генетически аттенуированных бактерий BORDETELLA PERTUSSIS. Аллергология и иммунология, 2014, т.15, №3, с.219.

Медкова А.Ю., Матуа А.З., Семин Е.Г., Шевцова З.В., Конджария И.Г., Кубрава Д.Т., Каратаев Г.И., Синяшина Л.Н. Защитная активность живой коклюшной вакцины на основе аттенуированных бактерий BORDETELLA PERTUSSIS.Медицинская иммунология, 2015, т.17, с.275.

Медкова А.Ю., Синяшина Л.Н., Румянцева Ю.П., Воронина О.Л., Кунда М.С., Каратаев Г.И. Накопление авирулентных инсерционных BVG мутантов BORDETELLA PERTUSSIS при экспериментальной инфекции лабораторных мышей. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2013, №4, с.22 - 26.

Медкова А.Ю., Каратаев Г.И., Шевцова З.В., Матуа А.З., Семин Е.Г., Амичба А.А., Синяшина Л.Н., Конджария И.Г., Баркая В.С., Миквабиа З.Я., Гинцбург А.Л. Эпизоотический очаг коклюша у обезьян вида Papio gamadryas. Журнал инфектологии, 2015, т.7, №3, с. 103-111.

Г. И Каратаев, Синяшина Л.Н, Медкова А.Ю., Сёмин Е.Г. Инсерционная инактивация оперона вирулентности в популяции персистирующих бактерий Bordetella pertessis. Генетика, 2016, т.52, № 4, с. 422-430.

МедковаА.Ю., Синяшина Л.Н., Боковой А.Г., Каратаев Г.И. Выявление инсерционных авирулентных Bvg мутантов Bordetella pertussis у больных коклюшем, острой респираторной инфекцией и у "практически здоровых " людей. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2013, №4, с. 32-37.

Медкова А.Ю., Сёмин Е.Г., Синяшина Л.Н., Каратаев Г. И. Иммунный ответ у обезьян вида Macaca mulatta при интраназальном введении искусственно аттенуированных бактерий Bordetella pertussis, перспективных для совершенствования противококлюшных вакцин. Медицинская иммунология, 2011, т.13, №4-5, с.320.

А.Ю. Медкова, Л.Н. Синяшина, А.Г. Боковой, Г.И. Каратаев. Персистенция бактерий Bordetella pertussis и изменение структуры популяции возбудителя коклюша, регистрируемые методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) Материалы (тезисы) международной научной конференции «Генетика и биотехнология XXI века: проблемы, достижения, перспективы». - Минск, 8-11 октября 2012 г.

А.Ю. Медкова, Л.Н. Синяшина, Г.И. Каратаев.Обезьяны как модель для изучения персистенции и иммунного ответа при интраназальном введении бактерий Bordetella pertussis Материалы Сочинской второй международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии». Сочи-Адлер 2011, т.1, с.107-113.

А.Ю. Медкова, Л.Н. Синяшина, Е.Г.Сёмин, Г.И. Каратаев. Доклиническое изучение защитной активности живой коклюшной вакцины интраназального применения Материалы Всероссийского ежегодного конгресса «Инфекционные болезни у детей: диагностика, лечение и профилактика». Журнал инфектологии, 2015, т.7, №4, с.90.

А.Ю. Медкова, Л.Н. Синяшина, Амичба А.А., Шевцова З.В., Матуа А.З., Сёмин Е.Г., Лядова И.В., Цыганов Е.Н., Конджария И.Г., Баркая В.С., Миквабиа З.Я., Каратаев Г.И. Иммуногенность и безопасность живой коклюшной вакцины на модели обезьян вида макака резус. Материалы Сочинской третьей международной научной конференции

«Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии». Сочи-Адлер 2016, т.1, с.97-105.

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Синяшина Людмила Николаевна, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Crowcroft NS, Stein C, Duclos P, Birmingham M. How best to estimate the global burden of pertussis? Lancet Infect Dis. 2003 Jul;3(7):413-8.

2. Heininger U1, Cherry JD. Pertussis immunisation in adolescents and adults-Bordetella pertussis epidemiology should guide vaccination recommendations. Expert Opin Biol Ther. 2006 Jul;6(7):685-97.

3. Mattoo S, Cherry JD. Molecular pathogenesis, epidemiology, and clinical manifestations of respiratory infections due to Bordetella pertussis and other Bordetella subspecies. Clin Microbiol Rev. 2005; 18:326-382. doi: 10.1128/CMR.18.2.326-382.2005.

4. Heininger U, Kleemann WJ, Cherry JD; A controlled study of the relationship between Bordetella pertussis infections and sudden unexpected deaths among German infants. Pediatrics. 2004 Jul;114(1):e9-15.

4a Cherry JD, Paddock CD, Greer PW, Heininger U. The respiratory pathology in infants with sudden unexpected deaths in whom respiratory specimens were initially PCR-positive or PCR-negative for Bordetella pertussis. Infection. 2011 39(6).p.545-8. doi: 10.1007/s15010-011-0164-y.

5. WHO. Pertussis vaccines: WHO position aper. Wkly Epidemiol Rec 2010; 85:385e400.

56 WHO. Global routine vaccination coverage, 2011.Wkly Epidemiol Rec2012;44:432e5.

5a N.H. Carbonetti, C.H. Wirsing von Konig, Ruiting Lan, et al Highlights of the 11th International Bordetella Symposium: from Basic Biology to Vaccine Development. Clinical and Vaccine Immunology, 2016 V. 23 N.11. p.842-850

6.Cornford-Nairns, R., G. Daggard1, T. Mukkur. Construction and Preliminary Immunobiological Characterization of a Novel, Non-Reverting, Intranasal Live Attenuated Whooping Cough Vaccine Candidate. J. Microbiol. Biotechnol. (2012), 22(6), 856-865

7. Bock A, Gross R. The BvgAS two-component system of Bordetella spp.: a versatile modulator of virulence gene expression. Int. J Med Microbiol. 2001; 291(2).p.119-30.

8. Cummings CA, Bootsma HJ, Relman DA & Miller JF Species- and strain-specific control of a complex, flexible regulon by Bordetella BvgAS.(2006) J Bacteriol 188: 1775-1785.

9.König J, Bock A, Perraud AL, Fuchs TM, Beier D, Gross R.Regulatory factors of Bordetella pertussis affecting virulence gene expression.J Mol Microbio lBiotechnol. 2002 May;4(3):197-203.

10. Giorgio Fedele, Antonio Cassone, Clara Maria Ausiello.T-cell immune responses to Bordetella pertussis infection and vaccination .FEMS Pathogens and Disease, 2015 73,7doi: 10.1093/femspd/ftv051.

10a Jolanda Brummelman, Mieszko M. Wilk, Wanda G.H. Han,Crecile A.C.M. van Els, Kingston H.G. Mills. Roads to the development of improved pertussisvaccines paved by immunology. FEMS Pathogens and Disease, 2015, Vol. 73, No. 8doi: 10.1093/femspd/ftv067.

10 6 Shelly Bolotin, Eric T. Harvill, Natasha S. Crowcroft. What to do about pertussis vaccines? Linking what we know about pertussis vaccine effectiveness, immunology and disease transmission to create a better vaccine FEMS Pathogens and Disease, 2015, Vol. 73, No. 8doi: 10.1093/femspd/ftv057. 10b. Matthieu Domenech de Celled, Felicia M. G. Magpantay, Aaron A. King

Pejman Rohani. The pertussis enigma: reconciling epidemiology, immunology and evolution Proc. R. Soc. B 283: 20152309.http://dx.doi.org/10.1098/rspb.2015.2309 10r R Higgs , SC Higgins , PJ Ross, KHG Mills .Immunity to the respiratory pathogen Bordetella pertussis. Mucosallmmunology 2012, 20 doi: 10.1038/mi.2012.54

11. Parkhill J., Sebaihia M., Preston A. et al. Comparative analysis of the genome sequences of Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis and Bordetella bronchiseptica//Nat. Genet. - 2003. - V. 35. - P. 32-40

12. В.Д. Смирнов, Л.Г. Пригожина, Л.П. Котова, Р.А.Сюндюкова. Штамм бактерий Bordetella pertussis, используемый в качестве продуцента экзотоксина. Авторское свидетельство № 1387398, 1987

13. В.Д. Смирнов, Л.Г. Пригожина, Л.П. Котова, Р.А. Сюндюкова. Способ получения коклюшной вакцины. Авторское свидетельство №1253135, 1986

14. В.Д. Смирнов.,А.Н. Терегулова, Р.В.Максютов, Р.А.Сюндюкова. Способ определения антител к экзотоксину коклюшных бактерий методом иммуноферментного анализа. Авторское свидетельство №16987-883, 1991.

15. World Health Organization 2010 Pertussis vaccines: WHO position paper.Wkly Epidemiol. Rec. 85,385-400.

16. Centers for Disease Control and Prevention. Pertussis United States, 19972000 // Morb. Mortal. Wkly. Re P. - 2001.- V. 51.- P. 73-76.

17. Mooi F.R., van Loo I. H., King A. J.Adaptation of Bordetella pertussis to vaccination: a cause for its reemergence? // Emerg. Infect. Dis. - 2001. - V. 7. - P. 526-528.

18. Preziosi M. P., Yam A., Wassilak S. G. et al. Epidemiology of pertussis in a West African community before and after introduction of a widespread vaccination program // Am. J. Epidemiol. - 2002.- V. 155.- P. 891-896

19. Cherry J.D., Heininger U. Pertussis and other Bordetella infections //In R. D. Feigin, J. D. Cherry, G. J. Demmler, and S. Kaplan (ed.), Textbook of pediatric infectious diseases, 5th ed. The W. B. Saunders Co, Philadelphia,Pa. -2004.-P.1588- 1608.

20. Crowcroft N.S., Booy R., Harrison T. et al. Severe and unrecognised: pertussis in UK infants //Arch. Dis. Child. - 2003. - V. 88, р. 802-806

21. Hester SE, Goodfield LL, Park J, Feaga HA, Ivanov YV, Bendor L, Taylor DL, Harvill ET Host Specificity of Ovine Bordetella parapertussis and the Role of Complement. PLoS One. 2015 Jul 9; 10(7):e0130964.

22. Register K.B., Boisvert A., Ackermann M.R. Use of ribotyping to distinguish

Bordetellabronchiseptica isolates //Int. J. Syst. Bacteriol.-1997. -V. 47, p.678-683.

23. Raffel TR, Register KB, Marks SA, Temple L. Prevalence of Bordetella avium infection in selected wild and domesticated birds in the eastern USA. J Wildl Dis.2002;38:40-46. doi: 10.7589/0090-3558-38.1.40.

24. Wintzingerode F., Schattke A, Siddiqui R.A.et al. Bordetella petriis isolated from an anaerobic biorea, and emended description of genus Bordetella // Int. J. SystEvol. Microbiol.- 2001.- V. 51.- P. 1257- 1265.

25. Shepard C.W., Daneshvar M.I., Kaiser R.M. et al. Bordetella holmesii bacteremia: a newly recog-nized clinical entity among asplenic patients // Clin Infect Dis- 2004. - V. 38. - P. 799-804.

25a. Livovsky DM, Leibowitz D, Hidalgo-Grass C, Temper V, Salameh S, Korem M.ABordetella holmesii meningitis in an a splenic patient with systemic lupus erythematosus. MedMicrobiol. 2012 Aug; 61(Pt 8):1165-7.

26. Gadea I, Cuenca-Estrella M, Benito N, Blanco A, Fernandez-Guerrero ML, Valero-Guillen PL, et al. Bordetella hinzii, a "new" opportunistic pathogen to think about. J Infect.2000;40:298-299. doi: 10.1053/jinf.2000.0646.

26a. Jiyipong T, Morand S, Jittapalapong S, Raoult D, Rolain JM. Bordetellahinzii in rodents.Southeast Asia Emerg Infect Dis. 2013;19:502-503. doi: 10.3201/eid1903.120987.

27. Halim I, Ihbibane F, Belabbes H, Zerouali K, El MN. Isolation of Bordetellatrematumfrom bacteremia. Ann BiolClin (Paris) 2014;72:612-614.

28. New species of Bordetella, Bordetellaansorpii sp. nov., isolated from the purulent exudate of an epidermal cyst.Ko KS, Peck KR, Oh WS, Lee NY, Lee JH, Song JHJ ClinMicrobiol. 2005 May; 43(5):2516-9.

29. Fry NK, Duncan J, Malnick H, Cockcroft PM. The first UK isolate of Bordetellaansorpif from an immunocompromised patient. J Med Microbiol. 2007;56:993-995. doi: 10.1099/jmm.0.47078-0.

30. Parkhill J., Sebaihia M., Preston A. et al. Comparative analysis of the genome sequences of Bordetella pertussis, Bordetellaparapertussis and Bordetellabronchiseptica //Nat. Genet. - 2003. - V. 35. - P. 32-40

31. Park J, Zhang Y, Buboltz AM, Zhang X, Schuster SC, Ahuja U, et al. Comparative genomics of the classical Bordetella subspecies: the evolution and exchange of virulence-associated diversity amongst closely related pathogens. BMC Genomics. 2012;13:545. doi: 10.1186/1471-2164-13-545.

32. Diavatopoulos DA, Cummings CA, Schouls LM, Brinig MM, Relman DA, Mooi FR.Bordetella pertussis, the causative agent of whooping cough, evolved from a distinct, human-associated lineage of B. bronchiseptica. PLoSPathog. 2005;1:e45. doi: 10.1371/journal.ppat.0010045.

33. Weyrich LS, Rolin OY, Muse SJ, Park J, Spidale N, Kennett MJ, Hester SE, Chen C, Dudley EG, HarvillET.A Type VI secretion system encoding locus is required for Bordetellabronchiseptica immunomodulation and persistence in vivo. .PLoS One. 2012; 7(10):e45892.

34. Harvill ET, Goodfield LL, Ivanov Y, Smallridge WE, Meyer JA, Cassiday PK, et al. Genome Sequences of Nine Bordetellaholmesii Strains Isolated in the United States.GenomeAnnounc. 2014;2:e00438-14. doi: 10.1128/genomeA.00438-14.

35. Sebaihia M, Preston A, Maskell DJ, Kuzmiak H, Connell TD, King ND, et al. Comparison of the genome sequence of the poultry pathogen Bordetellaavium with those ofB. bronchiseptica, B. pertussis, and B. parapertussis reveals extensive diversity in surface structures associated with host interaction. J Bacteriol. 2006;188:6002-6015. doi: 10.1128/JB.01927-05.

36.The missing link: Bordetellapetrii is endowed with both the metabolic versatility of environmental bacteria and virulence traits of pathogenic Bordetellae.BMC Genomics. 2008 Sep 30; 9():449.

37. Gross R, Guzman CA, Sebaihia M, et al.Draft Genome Sequences of Six Bordetellahinzii Isolates Acquired from Avian and Mammalian Hosts.GenomeAnnounc. 2015. 19; 3(2):.

38. Chang DH, Jin TE, Rhee MS, Jeong H, Kim S, Kim BC. Draft Genome Sequence ofBordetellatrematum. StrainHR18. GenomeAnnounc. 2015;3:e01357-14.

39. Bodo Linz, Yury V. Ivanov, Andrew Preston, et al. Acquisition and loss of virulence-associated factors during genome evolution and speciation in three clades of Bordetella specie.BMC Genomics.2016; 17: 767. doi: 10.1186/s12864-016-3112-5s

39а. (в первом вар 80)deGouw , D . , Diavatopoulos , D . A . , Bootsma , H . J . , Hermans , P . W . Mooi , F . R . Pertussis: a matter of immune modulation . FEMS Microbiol.Rev. 35 ,441 - 474 ( 2011 ).

396. Mishra M, Parise G, Jackson KD, Wozniak DJ, Deora RTheBvgAS signal transduction system regulates biofilm development in Bordetella..J Bacteriol. 2005 Feb;187(4):1474-84

39в. N.Cattelan, P.Dubey, L. Arnal1,et al.Bordetellabiofilms: a lifestyle leading to persistentinfectionsFEMS Pathogens and Disease, 2016, Vol. 74, No. 1.doi: 10.1093/femspd/ftv 108

39r.Zimna K, Medina E, Jungnitz H & Guzman CA (2001) Role played by the response regulator Ris in Bordetellabronchiseptica resistance to macrophage killing. FEMS MicrobiolLett 201: 177-180.

40. LoicCoutte, Camille Locht Investigating pertussis toxin and its impact on vaccination. FutureMicrobiol. (2015) 10(2), 241-254

40a. Ryan , M . , McCarthy , L . , Rappuoli , R . , Mahon , B . P .&Mills , K . H . Pertussis toxin potentiates Th1 and Th2 responses to co-injected antigen: adjuvant action is associated with enhanced regulatory cytokine production and expression of the co-stimulatory molecules B7-1, B7-2 and CD28 .Int. Immunol. 10 ,651 -662 ( 1998 ).

406.R Higgs, SC Higgins, PJ Ross, KHG Mills, Immunity to the respiratory pathogen BordetellapertussisMucosalImmunology2012.doi: 10.1038/mi.2012.54

41. Hewlett EL. A commentary on the pathogenesis of pertussis. Clinical infect dis 1999; 28:94-8

42. Locht C, Keith J.M. Pertussis toxin gene: nucleotide sequence and genetic organization // Science - 1986. - V. 232. - P. 1258-1264

43. Pizza M., Covacci A., Bartoloni A. Et al. Mutants of pertussis toxin sutable for vaccine development // Science. - 1989. - V. 246. - P. 497-500.

44. Loosmore S., Cockle S., Zealey G., et al. Detoxification of pertussis toxin by site- directed mutagenesis: a review of connaught strategy to develop a recombinant pertussis vaccine //Mol. Immunol. - 1991. V. 28. N 3. - P. 235- 238.

45. Loosmore S.M., Zealey G., Cockle S., et al. Characterization of pertussis toxin analogs containing mutations in B-oligomer subunits // Infect. Immun. - 1993. - V. 61. - N 6. - P. 2316- 2324.

46. Hallander HO, Olin P, Reizenstein E, Storsaeter J. A controlled trial of a two-component cellular, a five-component acellular, and a whole-cell pertussis vaccine // N Engl J Med - 1996. - V. 334. - P. 349-355

47. Masuda, M., Minami, M., Shime, H., Matsuzawa, T., and Horiguchi, Y. Identification of areceptor-binding domain of Bordetelladermonecrotic toxin (2002). Infect. Immun. 70, 998-1001

48.Fukui A, Horiguchi Y: Bordetelladermonecrotic toxin exerting toxicity

through activation of the small GTPase Rho. J Biochem 2004,136(4):415-419.

49. Matsuzawa T, Fukui A, Kashimoto T, Nagao K, Oka K, Miyake M, Horiguchi Y. J Biol Chem. 2004 Jan 23;279(4):2866-72. Epub 2003 Nov 3. Bordetella dermonecrotic toxin undergoes proteolytic processing to be translocated from a dynamin-related endosome into the cytoplasm in an acidification-independent manner.

49a. Brockmeier SL, Register KB, Magyar T, Lax AJ, Pullinger GD, Kunkle RA: Roleof the dermonecrotic toxin of Bordetellabronchiseptica in thepathogenesis of respiratory disease in swine. Infect Immun 2002,70(2):481-490. 496. Aya Fukui-Miyazaki1, Shigeki Kamitani1, Masami Miyake2, YasuhikoHoriguchi. Association of Bordetelladermonecrotic toxinwith the extracellular matrix.BMC Microbiology 2010, 10:247

50. Pullinger G.D., Adams T.E., Mullan P.B. et al. Cloning, expression, and molecular characterization of the dermonecrotic toxin gene of Bordetella spp. // Infect Immun. -1996. - V. 64.- P. 4163-71.

51. Kang, Mi Lan1, Sang Gyun Kang1, Hu-Lin Jiang2, Ding-Ding Guo2, Deog Yong Lee1, NabinRayamahji ,YeonSoo Seo1, Chong Su Cho2, and Han Sang Yoo. Chitosan Microspheres Containing Bordetellabronchiseptica Antigens as Novel Vaccine Against Atrophic Rhinitis in Pigs. J. Microbiol. Biotechnol. (2008), 18(6), 1179-1185

52. 146 Cookson B.T., Cho H.L., Herwaldt L.A., Coldman W.F. Biological activities and chemical composition of purified tracheal cytotoxin of B. pertussis // Infect. Immun. - 1989. - V. 57. - P. 2223- 2229.

53. 147 Cookson B.T., Tyler B.N., Coldman W.F. Primary structure of the peptidoglycan-derived tracheal cytotoxin of Bordetella pertussis // Biochemistry. -1989. - V. 28. - P. 1744- 1749.

54. Ho'ltje, J. V., D. Mirelman, N. Sharon, and U. Schwarz. 1975. Novel type of mureintransglycosylase in Escherichia coli. J. Bacteriol. 124:1067-1076).

55. Goldman W.E. Tracheal cytotoxin of Bordetella pertussis // In: Pathogenesis and immunity in Pertussis. Ed. by A.C. Waldlaw and R. Parton. - 1988. - P. 231245.

56. Goldman W.E., Collier J.L., Coockson R.T. et al. Tracheal cytotoxin of B. pertussis: biosynthesis, structure and specificity // In: Proceeding of the sixth international symposium on pertussis. C.R. Manclark (Ed). Dept. of Health and Human Services. U.S. Public Health Service Befhesd M.D. - 1990. - P. 5- 12.

57. Wilson R. Read R., Thomas M. Et al. Effect ofBordetellaprertussisinfectiion on human respiratory epithelium in vivo and in vitro // Infect. Immun. - 1991. - V. 59. - P. 337-345.

58. Heiss, L. N., J. R. Lancaster, Jr., J. A. Corbett, and W. E. Goldman. 1994. Epithelialautotoxicity of nitric oxide: role in the respiratory cytopathology of pertussis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:267-270.

59. Tod a. Flak,f linda n. Heiss, jacquelyn t. Engle, and william e. Goldman Synergistic Epithelial Responses to Endotoxin and a NaturallyOccurringMuramyl Peptide infection and immunity, Mar. 2000, p. 1235-1242.

60. Kaneko T, Goldman WE, Mellroth P, Steiner H, Fukase K, Kusumoto S, Harley W, Fox A, Golenbock D, Silverman N. Monomeric and polymeric gramnegative peptidoglycan but not purified LPS stimulate theDrosophila IMD pathway. Immunity. 2004 May;20(5):637-49.

61. Joao Gamelas Magalhaes1, Dana J. Philpott, Marie-Anne Nahori et al. Murine Nod1 but not its human orthologue mediates innate immune detection of tracheal cytotoxin EMBO reports 2005.V0L 6 . NO 12.P.1201-1207.

62. J. T. Park: Why does Esc.herichia coli recycle its cell wall peptides? Mol.Microbiol 17, 421-426 ,1995

63. S.Mattoo , A.K. Foreman-Wykert, P.A. Cotter, J. F. Miller mechanisms of bordetella pathogenesis. 2001. Frontiers in Bioscience 6, N 1, e168-e186.

64.Mielcarek N, Debrie AS, Raze D, Bertout J, Rouanet C, et al. (2006) Live attenuated B. pertussis as a single-dose nasal vaccine against whooping cough. PLoSPathog2(7): e65. DOI: 10.1371/journal.ppat.0020065.

65. Masin J, Osicka R, Bumba L, Sebo P. Bordetellaadenylatecyclase toxin: a unique combination of a pore-forming moiety with a cell-invading adenylatecyclase enzyme. Pathog Dis. 2015; 73:ftv075

66. Gross M.K., Au D.C., Smith A.L., Storm D.R. Targeted mutations that ablate either the adenylatecyclase or hemolysin function of the bifunctionalcyaA toxin of Bordetella pertussis abolish virulence // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 1992. - V. 89. - P. 4898-4902.

67. Lenz DH, Weingart CL, Weiss AA. Phagocytosed Bordetella pertussis fails to survive in human neutrophils. Infec Immun 2000; 68:956-9).

68. Eby JC, Gray MC, Hewlett EL. Cyclic AMP-mediated suppression of neutrophil extracellular trap formation and apoptosis by the Bordetella pertussis adenylatecyclase toxin. Infect Immun. 2014; 82:5256-5269.

69. Weiss AA, Hewlett EL, Myers GA, Falkow S. Pertussis toxin and extracytoplasmic adenylate cyclase as virulence factors of Bordetella pertussis. J Infect Dis 1984; 150:219-22.

70.Wang X, Maynard JA. The Bordetella adenylate cyclase repeat-in-toxin (RTX) domain is immunodominant and elicits neutralizing antibodies. J Biol Chem. 2015; 290:3576-3591.

71. Preston , A . et al. Genetic basis for lipopolysaccharide O-antigen biosynthesis in Bordetellae. Infect. Immun. 67 ,3763 - 3767 ( 1999

72. Harvill , E . T .et al. Multiple roles for Bordetellalipopolysaccharide molecules during respiratory tract infection .Infect. Immun. 68 ,6720 - 6728 ( 2000 ).

73. Higgins , S . C .et al. Toll-like receptor 4-mediated innate IL-10 activates antigen-specifi c regulatory T cells and confers resistance to Bordetella pertussis by inhibiting inflammatory pathology .J. Immunol. 171 ,3119 - 3127 ( 2003 ).

74.Watanabe M, Takimoto H, Kumazawa Y, Amano K. Biological properties of lipopolysaccharides from Bordetella species. J Gen Microbiol 1990; 136:489-93)

75.Higgins , S . C . , Jarnicki , A . G . , Lavelle , E . C .&Mills , K . H . TLR4 mediates vaccine-induced protective cellular immunity to Bordetellapertussis: role of IL-17-producing T cells . J. Immunol. 177 ,7980 - 7989 ( 2006 ).

77. Coutte L., Willery E., Antoine R. et al. Surface anchoring of bacterial subtilisin important for maturation function // Mol. Microbiol. - 2003. - V. 49. - P. 529-539.

78. 112 Locht , C . , Bertin , P . , Menozzi , F . D .&Renauld , G . The filamentoushaemagglutinin, a multifaceted adhesion produced by virulent

Bordetellaspp .Mol. Microbiol. 9 ,653 - 660 ( 1993 ).

79. 114 . Perez Vidakovics , M . L . , Lamberti , Y . , van der Pol , W . L . , Yantorno , O . Rodriguez , M . E .Adenylatecyclase influences filamentous haemagglutinin-mediated attachment of Bordetella pertussis to epithelial alveolar cells .FEMS Immunol. Med. Microbiol. 48 ,140 - 147 ( 2006 )

80. Erich V. Scheller and Peggy A. CotterBordetellafilamentous hemagglutinin and fimbriae:criticaladhesins with unrealized vaccine potential. FEMS Pathogens and Disease, 2015, Vol. 73, No. 8.doi: 10.1093/femspd/ftv079

81. Mattoo Y.S., Yuk M. H. The Bvg virulence control system regulates biofilm formation in Bordetellabronchiseptica // J. Bacteriol. - 2004. - V. 186. - P. 56925698.

82.Tuomanen E.J., Nedelman J.O., Hendley, Hewlett E.. Species specificity of Bordetella adherence to human animal ciliated respiratory epithelial cells // Infect. Immun. - 1983. - V. 42. - P. 692-695.

83. Manuela Zlamy. Rediscovering Pertussis Front Pediatr. 2016 Jun 8;4:52. doi: 10.3389/fped.2016.00052. eCollection 2016.

83a. Scheller EV , Cotter PA . Bordetella filamentous hemagglutinin and fimbriae: critical adhesins with unrealizedvaccine potential. Pathog Dis. 2015 Nov;73(8):ftv079. doi: 10.1093/femspd/ftv079. Epub 2015 Sep 27.

836. Zhang L1, Prietsch SO, Axelsson I, HalperinSA.Acellular vaccines for preventing whooping cough in children.Cochrane Database Syst Rev. 2014 Sep 17;(9):CD001478. doi: 10.1002/14651858.CD001478.pub6.

83b. Karen M. Farizo, Drusilla L. Burns, Theresa M. Finn, Marion F. Gruber, and R. Douglas Pratt Clinical Evaluation of Pertussis Vaccines: US Food and Drug Administration Regulatory Considerations. Pertussis Vaccines: Regulatory Issues • JID 2014:209 (Suppl 1) • S28

84. Warfel JM, Zimmerman LI, Merkel TJ. 2014 Acellular pertussis vaccines protect against disease but fail to prevent infection and transmission in a nonhuman primate model. Proc. Natl Acad. Sci. USA 111, 787-792. (doi: 10.1073/ pnas.1314688110).

85. Robinson A., Ashworth L.A., Irons L.I.. Serotyping Bordetella pertussis strains // Vaccine - 1989. - V. 7. - P. 491-494.

86. Livey G., Dugleby C.J., Robinson A. Cloning and nucleotide sequence analysis of serotype 2 fimbrial subunit gene of Bordetella pertussis // Mol. Microbiol. -1987. - V. 1. - P. 203- 209.

87.Mooi F.R., terAvest A., Han G.J., Van der Heicle. Structure of Bordetellapertussis gene coding for the serotype 3 fimbrial subunit // FEMS Microbiol. Lett. - 1990. - V. 66. - P. 327-332.

88.Guevara C, Zhang C, Gaddy JA, et al. Highly differentiated human airway epithelial cells: a model to study host cell-parasite interactions in pertussis. Infect Dis (Lond). 2016; 48:177-188.

89. Everest , P . Li J, Douce G, .et al. Role of the Bordetella pertussis P.69/pertactin protein and the P.69/pertactin RGD motif in the adherence to and invasion of mammalian cells . Microbiology 142 (Pt 11) , 3261 - 3268 ( 1996 ).

90. Roberts , M . , Fairweather NF, Leininger E, . et al. Construction and characterization of Bordetella pertussis mutants lacking the vir-regulated P.69 outer membrane protein . Mol. Microbiol. 5 ,1393 - 1404 ( 1991 ).

91. Novotny , P . , Chubb , A . P . , Cownley , K . &Charles , I . G . Biologic and protective properties of the 69-kDa outer membrane protein of Bordetella pertussis : a novel formulation for an acellular pertussis vaccine . J. Infect. Dis. 164 ,114 -122 ( 1991 ).

92. Cherry , J . D . , Gornbein , J . , Heininger , U . &Stehr , K . A search for serologic correlates of immunity to Bordetella pertussis cough illnesses . Vaccine 16 ,1901 - 1906 ( 1998 ).

93. Hijnen , M . et al. Epitope structure of the Bordetella pertussis protein P.69 pertactin, a major vaccine component and protective antigen .Infect. Immun. 72 ,3716 - 3723 ( 2004 ).

94. Charles I. G., Dougan G., Pickard D. et al. Molecular cloning and characterization of protective outer membrane protein P.69 from Bordetella pertussis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1989. - V. 86. - P. 3554-3558

95.Cornelis , G . R .The type III secretion injectisome .Nat. Rev. Microbiol.4 ,811 - 825 ( 2006 ).

96. Mattoo S., Yuk M. H., Huang., L. L., Miller J. F.. Regulation of type III secretion in Bordetella // Mol. Microbiol. - 2004. - V. 52. - P. 1201- 1214.

97.Fennelly , N . K .et al. Bordetella pertussis expresses a functional type III secretion system that subverts protective innate and adaptive immuneresponses.Infect. Immun. 76 ,1257 - 1266 2008 ).

98. Centers for Disease, C. & Prevention. . Notes from the fi eld: Pertussis -California, January-June 2010 .MMWR Morb.Mortal. Wkly. Rep. 59 ,817 ( 2010 ).

99. Barret , A . S . Ryan A, Breslin A, et al. Pertussis outbreak in northwest Ireland, January - June

2010 .Euro Surveill. 15 ,pii=19654 ( 2010 ).

100 .Roper , K . Outbreak of pertussis, 1 January to 31 March 2009 .Commun.

Dis. Intell. 33 ,36 - 37 ( 2009 ).

101. Octavia , S . Sintchenko V, Gilbert GL,et al. Newly emerging clones of Bordetella pertussis carrying prn2 and ptxP3 alleles implicated in Australian Pertussis epidemic in 2008 - 2010 J. Infect. Dis. 205 ,1220 - 1224 ( 2012 ).

102. R.Thorstensson,B.Trollfors,N. Al-Tawil,et al.Phase I Clinical Study of a Live Attenuated Bordetella pertussis Vaccine - BPZE1; A Single Centre, Double-Blind, Placebo-Controlled, Dose-Escalating Study of BPZE1 Given Intranasally to Healthy Adult Male VolunteersPLoS One. 2014; 9(1): e83449

103. Mooi FR. 2010 Bordetella pertussis and vaccination: the persistence of a genetically monomorphic pathogen. Infect. Genet.Evol. 10, 36-49. (doi:10. 1016/j.meegid.2009.10.007)

104. Bart MJ et al. 2014 Global population structure and evolution of Bordetella pertussis and their relationship with vaccination.mBio 5, e01074. (doi: 10.1128/mBio.01074-14)

105. E.Heikkinen, Kallonen T, Saarinen L et al. Comparative genomics of Bordetella pertussis reveals progressive gene loss in Finnish strains.PLoS ONE. 2007; 19. 2(9): e904.

106. Yinghua Xu1, Bin Liu, KirsiGröndahl-Yli-Hannuksila, Yajun Tan, Lu Feng, TeemuKallonen, Lichan Wang1, Ding Peng, Qiushui He, Lei Wang Shumin Zhang. Whole-genome sequencing reveals the effect of vaccination on the evolution of Bordetella.

107. Mahon , B . P ., Sheahan , B . J . , Griffin , F . , Murphy , G . &Mills , K . H .Atypicaldisease after Bordetella pertussis respiratory infection of mice withtargeted disruptions of interferon-gamma receptor or immunoglobulinmu chain genes J. Exp. Med. 186 ,1843 - 1851 ( 1997 ).

108. Barbic , J . , Leef , M . F . , Burns , D . L .&Shahin , R . D . Role of gamma interferon in natural clearance of Bordetella pertussis infection . Infect.Immun. 65 ,4904 - 4908 ( 1997 ).

109. Ryan , M . et al. Bordetella pertussis respiratory infection in children is

associated with preferential activation of type 1T helper cells . J. Infect.Dis. 175 ,1246 - 1250 ( 1997 ).

110 . Mascart , F . et al. Bordetella pertussis infection in 2-month-old infants promotes type 1T cell responses . J. Immunol. 170 ,1504 - 1509.( 2003 ).

111. Ryan , M . et al. Distinct T-cell subtypes induced with whole cell and acellular pertussis vaccines in children . Immunology 93 ,1 - 10 ( 1998 ).

112. Ausiello , C . M . , Urbani , F . , la Sala , A . , Lande , R . &Cassone , A . Vaccineandantigen-dependent type 1 and type 2 cytokine induction afterprimary vaccination of infants with whole-cell or acellularpertussisvaccines .Infect. Immun. 65 ,2168 - 2174 ( 1997 ).

113. Storsaeter , J . , Hallander , H . O . , Gustafsson , L . &Olin , P . Levels of antipertussisantibodies related to protection after household exposure toBordetellapertussis .Vaccine 16 ,1907 - 1916 ( 1998 ).

114. Taranger , J . et al. Correlation between pertussis toxin IgG antibodies inpostvaccination sera and subsequent protection against pertussis .J. Infect. Dis. 181 ,1010 - 1013 ( 2000 ).

115. Granstrom , M . , Olinder-Nielsen , A . M . , Holmblad , P . , Mark , A . & Hanngren , K . Specifi c immunoglobulin for treatment of whooping cough . Lancet 338 ,1230 - 1233 ( 1991 ).

116 . Olin , P . , Rasmussen , F . , Gustafsson , L . , Hallander , H . O .Heijbel , H .Randomised controlled trial of two-component, three-component, and five-componentacellular pertussis vaccines compared with whole-cellpertussis vaccine. Ad Hoc Group for the Study of Pertussis Vaccines .Lancet 350 ,1569 -1577 (1997 ).

117. Gustafsson L . , Hallander H . O . , Olin P . , Reizenstein , E . Storsaeter , J .A controlled trial of a two-component acellular, a five-componentacellular, and a whole-cell pertussis vaccine . N. Engl. J. Med. 334 ,349 - 355 ( 1996 ).

118. Trollfors , B Taranger J, Lagergârd T,. et al. A placebo-controlled trial of a pertussis-toxoid vaccine .N. Engl. J. Med. 333 ,1045 - 1050 ( 1995 ).

119 .Mills , K . H . , Barnard , A . , Watkins , J . &Redhead , K . Cell-mediated

immunity to Bordetella pertussis : role of Th1 cells in bacterial clearancein a murine respiratory infection model . Infect. Immun. 61 ,399 - 410.( 1993 ).

120 73 .Mills , K . H . , Ryan , M . , Ryan , E . &Mahon , B . P . A murine model in whichprotection correlates with pertussis vaccine efficacy in children reveals complementary roles for humoral and cell-mediated immunity inprotection against Bordetella pertussis . Infect. Immun. 66 ,594 - 602.( 1998)

121 58 . Mills , K . H . Immunity to Bordetellapertussis .Microbes Infect. 3 ,655 -677.( 2001)

122. 72 .Mahon , B . P . , Brady , M . T .&Mills , K . H . Protection against Bordetellapertussisin mice in the absence of detectable circulating antibody:implications for long-term immunity in children .J. Infect. Dis. 181 ,2087 - 2091, ( 2000 ).

123 74 .Leef, M . , Elkins , K . L . , Barbic , J . &Shahin , R . D . Protective immunity toBordetella pertussis requires both B cells and CD4(+) T cells for key functions other than specifi c antibody production . J. Exp. Med. 191 ,1841 - 1852 ( 2000 ).

124 73 Mills , K . H . , Ryan , M . , Ryan , E . &Mahon , B . P . A murine model in whichprotection correlates with pertussis vaccine efficacy in children reveals complementary roles for humoral and cell-mediated immunity inprotection against Bordetella pertussis . Infect. Immun. 66 ,594 - 602. ( 1998 ).

125. Golovkina T. V. ,Shlomchik M. , Hannum L. ChervonskyA.Organogenic role of B lymphocytes in mucosal immunity .Science 286 ,1965 - 1968 ( 1999 )

126. Hellwig , S . M . , van Spriel , A . B . , Schellekens , J . F . , Mooi , F . R .vandeWinkel , J . G . Immunoglobulin A-mediated protection against Bordetella pertussisinfection .Infect. Immun. 69 ,4846 - 4850 ( 2001 ).

127. 57 .Quinello , C . , Quintilio , W . , Carneiro-Sampaio , M . &Palmeira , P . Passiveacquisition of protective antibodies reactive with Bordetella pertussis in newborns via placental transfer and breast-feeding . Scand. J. Immunol.72 ,66 - 73 ( 2010 ).

128. 79 .Langrish , C . L .et al. IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation . J. Exp. Med. 201 ,233 - 240 ( 2005 ). 129 84 .Ausiello , C . M . , Lande , R . , la Sala , A . , Urbani , F . Cassone , A . Cell mediated immune response of healthy adults to Bordetellapertussisvaccineantigens .J. Infect. Dis. 178 ,466 - 470 ( 1998 ).

130. Higgins , S . C . , Jarnicki , A . G . , Lavelle , E . C .&Mills , K . H . TLR4 mediatesvaccine-induced protective cellular immunity to Bordetellapertussis:role of IL-17-producing T cells . J. Immunol.177 ,7980 - 7989 (2006 ).

131. Fennelly , N. K .et al. Bordetella pertussis expresses a functional type IIIsecretion system that subverts protective innate and adaptive immune responses .Infect. Immun. 76 ,1257 - 1266 ( 2008 ).

132. Cua , D . J .Tato , C . M . Innate IL-17-producing cells: the sentinels of theimmunesystem .Nat. Rev. Immunol. 10 ,479 - 489 ( 2010 ).

133. Agarwal , S . K Gourh P, Shete S, .et al. Association of interleukin 23 receptor polymorphismswith anti-topoisomerase-I positivity and pulmonary hypertension insystemicsclerosis .J. Rheumatol. 36 ,2715 - 2723 ( 2009 ).

134. Paddock , C . D . Sanden GN, Cherry JD, et al. Pathology and pathogenesis of fatal Bordetella

pertussisinfection in infants . Clin. Infect. Dis. 47 ,328 - 338 ( 2008 ).

135. Zepp , F . Knuf M, Habermehl P et al. Pertussis-specifi c cell-mediated immunity in infants aftervaccination with a tricomponentacellular pertussis vaccine .Infect.Immun. 64 ,4078 - 4084 ( 1996 ).

136. White , O . J . Rowe J, Richmond P, et al.Th2-polarisation of cellular immune memory to neonatalpertussis vaccination . Vaccine 28 ,2648 - 2652 ( 2010 ).

137. Ryan , E . J . , Nilsson , L . , Kjellman , N . , Gothefors , L . & Mills , K . H . Boosterimmunization of children with an acellular pertussis vaccine enhancesTh2

cytokine production and serum IgE responses against pertussistoxin but not against common allergens . Clin. Exp. Immunol. 121 ,193 - 200 ( 2000 ).

138. Ausiello , C . M . et al. Cell-mediated immune responses in four-year-old

children after primary immunization with acellular pertussis vaccines.Infect. Immun. 67 ,4064 - 4071 ( 1999 ).

139. Skowronski , D . M . et al. Injection-site reactions to booster doses of acellular pertussis vaccine: rate, severity, and anticipated impact .

Pediatrics 112 ,e453 ( 2003 ).

140. McGuirk , P . , Mahon , B . P . , Griffin , F . &Mills , K . H . Compartmentalizationof T cell responses following respiratory infection with Bordetellapertussis :hyporesponsiveness of lung T cells is associated withmodulated expression of the co-stimulatory molecule CD28 . Eur. J.Immunol. 28,153 - 163 ( 1998 ).

141. Zachariadis , O . , Cassidy , J . P . , Brady , J . & Mahon , B . P . gammadeltaT cells regulate the early inflammatory response to Bordetella pertussisinfection in the murine respiratory tract . Infect. Immun. 74 ,1837 - 1845

(2006)

142. Dunne , A . et al. Inflammasome activation by adenylatecyclase toxin directs Th17 responses and protection against Bordetella pertussis .

J. Immunol. 185 ,1711 - 1719 ( 2010 ).

143. Mahon, B. P., Mills, K. H. Interferon-gamma mediated immune effectormechanisms against Bordetellapertussis.Immunol.Lett.68 ,213 - 217.( 1999 ).

144. Canthaboo , C . , Xing , D . , Wei , X . Q .&Corbel , M . J .Investigation of role ofnitric oxide in protection from Bordetella pertussis respiratory challenge. Infect. Immun. 70 ,679 - 684 ( 2002 ).

145. 34 .McGuirk P .?Mills , K . H . A regulatory role for interleukin 4 in differentialinflammatory responses in the lung following infection of mice primed

with Th1- or Th2-inducing pertussis vaccines . Infect. Immun. 68 ,1383 - 1390 ( 2000 ).

146.Fedele , G . et al. Bordetella pertussis commits human dendritic cells to promote a Th1/Th17 response through the activity of adenylatecyclase toxin and MAPK-pathways . PLoS One 5 ,e8734 ( 2010 ).

147. Andreasen , C . , Powell , D . A . &Carbonetti , N . H . Pertussis toxin stimulates IL-17 production in response to Bordetella pertussis infection in mice . PLoS One 4 ,e7079 ( 2009 ).

148. Zhang , X . , Goel , T . , Goodfield , L . L . , Muse , S . J . &Harvill , E . T . Decreasedleukocyte accumulation and delayed Bordetella pertussis clearance inIL-6-/- mice . J. Immunol. 186 ,4895 - 4904 ( 2011 ).

149. Warfel JM, Zimmerman LI, Merkel TJ. 2014 Acellular pertussis vaccines protect against disease but fail to prevent infection and transmission in a nonhuman primate model. Proc. Natl Acad. Sci. USA 111, 787-792. (doi: 10.1073/ pnas.1314688110)

150. Warfel JM, Merkel TJ. 2013. Bordetella pertussis infection induces a mucosalIL-17 response and long-lived Th17 and Th1 immune memory cells

in nonhuman primates. Mucosal Immunol6:787-796. http://dx.doi.org /10.1038/mi.2012.117.

151. Raupach B1, Kaufmann SH.Bacterial virulence, proinflammatory cytokines and host immunity: how to choose the appropriate Salmonella vaccine strain? Microbes Infect. 2001 Nov-Dec;3(14-15):1261-9.

152. Stevenson, A., and M. Roberts. 2003. Use of Bordetella bronchiseptica and Bordetella pertussis as live vaccines and vectors for heterologous antigens. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 37:121-128.

153. Stevenson, A., and M. Roberts. 2002. Use of a rationally attenuated Bordetella bronchiseptica as a live mucosal vaccine and vector for heterologous antigens. Vaccine20:2325-2335.

154. DallaPozza T, Yan H, Meek D, Guzman CA, Walker MJ.. Vaccine.Construction and characterisation of Salmonella typhimuriumaroA simultaneously expressing the five pertussis toxin subunits. 1998 Mar;16(5):522-9

155. Zhao Z, Xue Y, Wu B, et al. Subcutaneous vaccination with attenuated Salmonella enterica serovar Choleraesuis C500 expressing recombinant filamentous hemagglutinin and pertactin antigens protects mice against fatal infections with both S. enterica serovar Choleraesuis and Bordetella bronchiseptica. Infect Immun. 2008 May;76(5):2157-63. Epub 2008 Feb 11

156. B. Abomoelak, K. Huygen, L. Kremer, et al .Humoral and cellular immune responses in mice immunized with recombinant Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin producing a pertussis toxin-tetanus toxin hybrid protein.

Infectionandlmmunity, October 1999, p. 5100-5105, Vol. 67, No. 10.

157. Paradis, F. W., F. Shareck, C. Dupont, D. Kluepfel, and R. Morosoli. Expression and secretion of beta-glucuronidase and pertussis toxin S1 by Streptomyces lividans. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1996,45:646-65.

158. S/F. Lee, Robert J. M., S.A. Halperin,et al. Surface expression of a protective recombinant pertussis toxin S1 subunit fragment in Streptococcus gordonii.

Infection and Immunity, March 1999, p. 1511-1516, Vol. 67, No. 3

159. Mallaley PP, Halperin SA, Morris A, MacMillan A, Lee SF. Expression of a pertussis toxin S1 fragment by inducible promoters in oral Streptococcus and the induction of immune responses during oral colonization in mice. Can J Microbiol. 2006 May;52(5):436-44.

160. I. Chen, T.M. Finn, L.Yanqing et al. A recombinant live attenuated strain of Vibrio cholerae induces immunity against tetanus toxin and Bordetella pertussis tracheal colonization factor. Infect Immun, April 1998, p. 1648-1653, V. 66, No. 4

161. A.Stevenson, M.Roberts. Intranasal immunisation against tetanus with an attenuated Bordetella bronchiseptica vector expressing FrgC: improved immunogenicity using a Bvg-regulated promoter to express FrgC. Vaccine 2004 22;22(31-32):4300-5.

162. Paul Mann, Use of a Genetically Defined Double Mutant Strain of Bordetella bronchiseptica Lacking Adenylate Cyclase and Type III Secretion as a Live Vaccine, Infection and Immunity, July 2007, p. 3665-3672, Vol. 75,

162 a. Akio Abe, Kanna Nagamatsu, Mineo Watanabe The Bordetellatype III secretion system: its application to vaccine development. Microbiol Immunol2008; 52: 128-133doi: 10.1111/j.1348-0421.2008.00028.

162 б. N. K. Fennelly, F. Sisti, S. C. Higgins, et all Bordetella pertussis expresses a functional type III secretion system that subverts protective innate and adaptive immune responses. Infection and Immunity, 2008, p. 1257-1266, Vol. 76, N.3

163. N. Mielcarek, A.S.Debrie, D.Raze, et al. Live Attenuated B. pertussisas a Single-Dose Nasal Vaccineagainst Whooping Cough. PLoSPathogens. 2006 Jul;2(7):e65.

164. Camille Locht A common vaccination strategy to solve unsolved problems of tuberculosis and pertussis? Microbes and Infection 10 (2008) 1051e1056

165. СиняшинаЛ.Н., НечаеваЕ.В., Амелина И.П., Каратаев Г.И. Конструирование аттенуированных бактерий Bordetella ertussis, продуцирующих иммуногенную, нетоксичную форму коклюшного токсина. ЖМЭИ, 2009, №6,стр.89-94

165а. Синяшина Л.Н., Синяшина Л.С., Семин Е.Г., Амелина И.П., Каратаев Г.И. Конструирование генетически аттенуированных бактерий Bordetella

pertussis утративших активность дермонекротического токсина и продуцирующих измененную нетоксичную форму коклюшного Молек. Генетика, микробиология 2010, №3, ст. 31-36

166. Terpe K. Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems. Appl Microbiol Biotechnol. 2003 Jan;60(5):523-33;

167п. Lamla T, Erdmann V.A. The Nano-tag, a streptavidin-binding peptide for the purification and detection of recombinant proteins. Protein Expr Purif. 2004 Jan;33(1):39-47.

69. Лящук А.М. Получение и характеристика рекомбинантного белка TUL4, потенциального компонента генно-инженерной субъединичной вакцины против туляремии. Дис. канд.биол.наук. М.: ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. 2005.

170. Nicosia A. Bartoloni A, Perugini M, Rappuoli R. Expression and immunological properties of the five subunits of pertussis toxin. Infect Immun. 1987 Apr;55(4):963-7.

1 9 * 9 q 9 "2

171. Song F. Lee,1,2 Scott A. Halperin,2,3 Danny F. Salloum,2 Ann MacMillan,3 and Annette Morris Mucosal Immunization with a Genetically Engineered Pertussis Toxin S1 Fragment-Cholera Toxin Subunit B Chimeric Protein Infection and Immunity, April 2003, p. 2272-2275, Vol. 71, No. 4

171а. Boucher, P., H. Sato, Y. Sato, and C. Locht. 1994. Neutralizing antibodies and immunoprotection against pertussis and tetanus obtained by use of a recombinant pertussis toxin-tetanus toxin fusion protein. Infect. Immun. 62:449456.

172. Mallaley PP, Halperin SA, Morris A, MacMillan A, Lee SF Expression of a pertussis toxin S1 fragment by inducible promoters in oral Streptococcus and the

induction of immune responses during oral colonization in mice. Can J Microbiol.2006 May;52(5):436-44

173. Ruth Elena Soria-Guerra , Sergio Rosales-Mendoza,Criso' foroMa'rquez-Mercado ,Rube'nLo'pez-Revilla ^Rosalba Castillo-Collazo^ A' ngel Gabriel Alpuche-Soli'sTransgenic tomatoes express an antigenic polypeptide containing epitopes of the diphtheria, pertussis and tetanus exotoxins, encoded by a synthetic genePlant Cell Rep (2007) 26:961-968. DOI 10.1007/s00299-007-0306-y

174. Lee C.K. Roberts A, Perrin S. Expression of pertussis toxin in Bordetella bronchiseptica and Bordetella parapertussis carrying recombinant plasmids. Infect Immun. 1989, May;57(5):1413-8.

175. Asgarian-Omran H1, Amirzargar AA, Arjmand M, Eshraghian M, Nikbin B, Eshraghi S, Mahdavi M, Khoshnoodi J, Jeddi-Tehrani M, Rabbani H, Shokri F.Expression, Purification and Characterization of Three Overlapping Immunodominant Recombinant Fragments from Bordetella pertussis Filamentous Hemagglutinin. Avicenna J Med Biotechnol. 2013 Jan; 5(1):20-8.

175a Jinyong Z1, Xiaoli Z, Weijun Z, Ying G, Gang G, Xuhu M, Quanming Z Fusion expression and immunogenicity of Bordetella pertussis PTS1-FHA protein: implications for the vaccine development. Mol Biol Rep. 2011 Mar;38(3): 1957-63. doi: 10.1007/s11033-010-0317-6. Epub 2010 Sep 28.

176. Cheung GY1, Xing D, Prior S, Corbel MJ, Parton R, Coote JG.Effect of different forms of adenylate cyclase toxin of Bordetella pertussis on protection afforded by an acellular pertussis vaccine in a murine model. Infect Immun. 2006 Dec;74(12):6797-805. Epub 2006 Sep 18.

177. Powthongchin B, Angsuthanasombat C.High level of soluble expression in Escherichia coli and characterisation of the CyaA pore-forming fragment from a Bordetella pertussis Thai clinical isolate. Arch Microbiol. 2008 Feb;189(2):169-74.

178. Hijnen M, van Zoelen DJ, Chamorro C, van Gageldonk P, Mooi FR, Berbers G, Liskamp RM.A novel strategy to mimic discontinuous protective epitopes using a synthetic scaffold.Vaccine. 2007 Sep 17;25(37-38):6807-17.

178а. Hijnen M1, de Voer R, Mooi FR, Schepp R, Moret EE, van Gageldonk P, Smits G, Berbers GA The role of peptide loops of the Bordetella pertussis protein P.69 pertactin in antibody recognition. Vaccine. 2007 Aug 1;25(31):5902-14. Epub 2007 Jun 8.

179. Lu S1, Wang S, Grimes-Serrano JM. Current progress of DNA vaccine studies in humans.Expert Rev Vaccines. 2008 Mar;7(2):175-91. doi: 10.1586/14760584.7.2.175.

180. Логунов Д.Ю., Народицкий Б.С., Гинцбург А.Л., Воробьев А.А. Генетические вакцины. Вестник российской академии медицинских наук 2005.№1.Ст.1-14.

181. Kamachi K1, Arakawa Y Development of safer pertussis DNA vaccine expressing non-toxic C180 polypeptide of pertussis toxin S1 subunit.Vaccine. 2007 Jan 22;25(6): 1000-6. Epub 2006 Oct 9.

182. Fry SR1, Chen AY, Daggard G, Mukkur TK.Parenteral immunization of mice with a genetically inactivated pertussis toxin DNA vaccine induces cell-mediated immunity and protection. J Med Microbiol. 2008 Jan;57(Pt 1):28-35.