Молекулярно-генетическая характеристика штаммов Mycobacterium tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат медицинских наук Желткова, Екатерина Александровна

• Желткова, Екатерина Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Желткова, Екатерина Александровна

Страница

Перечень условных обозначений

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Механизмы возникновения лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis к основным противотуберкулезным препаратам 1О

1.1. изониазиду

1.2. рифампицину

1.3. этамбутолу

1.4. пиразинамиду

1.5. фторхинолонам

1.6. стрептомицину и другим ингибиторам синтеза протеаз

Глава 2. Проблемы в установлении лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis и роль молекулярно-генетических методов 27 Собственные исследования

Глава 3. Материалы и методы

3.1. Штаммы M.tuberculosis (МБТ) 34 3.2 Определение лекарственной чувствительности МБТ к изониазиду и рифампицину бактериологическим методом

3.3. Определение лекарственной чувствительности к рифампицину и изониазиду молекулярно генетическими методами

3.4.Методы молекулярно-генетического типирования штаммов МБТ

3.4.1. Сполиготипирование

3.4.2. VNTR-типирование

3.4.3. RFLP IS6110 типирование

3.5. Статистическая обработка полученных результатов

Глава 4. Изучение лекарственной чувствительности к рифампицину и изониазиду штаммов МБТ

Глава 5. Сполиготипирование штаммов МБТ по числу спейсерных последовательностей DR-локуса

Глава 6. Типирование штаммов МБТ по вариабельному числу точных тандемных повторов

Глава 7. Генотипирование штаммов МБТ по RFLPIS

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическая характеристика штаммов Mycobacterium tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью»

Актуальность темы. В последнее время ТБ вышел на первое место по смертности (около 3 миллионов смертей в год) [59]. Из ежегодно регистрируемых новых больных более 7000 человек умирают каждый день [163]. Данные уровни смертности только частично отображают угрозу глобального распространения ТБ. Более 80% больных ТБ находятся в продуктивном возрасте от 15 до 49 лет. Хотя ТБ всегда являлся эндемичным заболеванием, в большинстве развивающихся стран его опасность увеличилась из-за распространения ВИЧ инфекции, обширной социальной реструктуризации вследствие быстрого развития промышленности и военных конфликтов [26]. Таким образом, можно предположить, что ТБ является новой мировой угрозой здоровью людей.

В России уровень заболевания ТБ увеличивался с 1950 до 1990 гг. Самые низкие показатели заболевания и смертности были рекордными в 1991 году (34.0/100000 и 8.1/100000 соответственно). К 1999 году эти показатели повысились до 85.2/100000 и 20.0/100000 соответственно [57,129]. Средний возраст больных ТБ снизился, отражая высокие уровни новых случаев трансмиссии. Данные по ЛУ для РФ в целом скудные, информация, сравнимая с международными данными, была представлена ВОЗ только для 2 из 89 областей. В Ивановской и Томской областях ТБ с МЛУ был зафиксирован в 1998-1999 гг. в 9.0% и 6.5 % соответственно [162].

Для повышения эффективности борьбы с ТБ ВОЗ выпустила рекомендации по его лечению, которых придерживаются большинство стран мира [89]. Рекомендации были созданы с тем, чтобы унифицировать курсы химиотерапии для предотвращения развития устойчивости микобактерий к ПТП, возникающей в результате использования неправильных схем лечения. Тем не менее, отмечена тенденция к увеличению уровня смертности, которая связана с появлением новых штаммов МБТ, устойчивых к нескольким или ко всем современным ПТП [59,112]. Туберкулез, вызванный штаммами МБТ с

МЛУ, сопровождается высоким уровнем смертности (50-70%) с относительно коротким интервалом (4-16 недель) от постановки диагноза до смерти [52]. В большинстве стран увеличились случаи заболевания ТБ с МЛУ, что затрудняет контролировать программы по ТБ, особенно в развивающихся странах, где достаточно высок уровень заболеваемости (48%) [40]. Высокий уровень инфицирования и смертности от ТБ требует быстрого выявления МЛУ штаммов, очагов и путей их распространения. С этой целью разрабатываются методы молекулярного типирования, позволяющие по генетическим маркерам охарактеризовать особенности штаммов, выделенных от больных ТБ. В последнее время это направление интенсивно развивается, в частности, в отношении штаммов МБТ с ЛУ. Однако практически нет публикаций по комплексному молекулярно-генетическому анализу штаммов МБТ с МЛУ, и нет однозначных выводов по этой проблеме, которая и обусловила актуальность нашего исследования.

Поэтому целью настоящего исследования являлось изучение особенностей генотипа штаммов Mycobacterium tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью при типировании по комплексу наиболее известных молекулярно-генетических маркеров, на примере штаммов МБТ, выделенных от больных из региона Средней Волги - г. Самары и Самарской области.

Задачи работы:

1. Изучить спектр мутаций в генах rpoB, katG и inhA, связанных с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду, штаммов Mycobacterium tuberculosis, выделенных от больных туберкулезом.

2. Провести типирование штаммов Mycobacterium tuberculosis по числу спейсерных последовательностей DR-локуса (сполиготипирование).

3. Выполнить типирование штаммов МБТ по вариабельному числу точных тандемных повторов (VNTR-типирование).

4. Протипировать штаммы Mycobacterium tuberculosis по полиморфизму длин рестрикционных фрагментов, содержащих вставочную последовательность 1S6110 (RFLP IS6110 -типирование).

5. Провести сравнительный анализ результатов комплексного генотипирования штаммов Mycobacterium tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью и штаммов чувствительных к рифампицину и к изониазиду.

Научная новизна.

Анализ спектра мутаций в генах rpoB, katG, inhA в штаммах М.tuberculosis, одновременно устойчивых к рифампицину и изониазиду, выявил значительное преобладание микобактерий туберкулеза с сочетанными мутациями в 531 кодоне гена гроВ и в 315 кодоне гена katG.

Дана характеристика штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью по комплексу наиболее известных эпидемиологических маркеров - по сполиготипу, VNTR и RFLP 1S6110. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Методом INNO-LiPA и Macroarray было показано, что 72,2% штаммов МБТ с МЛУ имеют сочетанные мутации в 531 кодоне гена гроВ и в 315 кодоне гена katG,

2. Сполиготипирование показало, что 84,5 % штаммов МБТ с МЛУ относятся к Beijing кластеру.

3. VNTR-типирование продемонстрировало, что 75,3 % штаммов МБТ с МЛУ относятся к кластеру 42435.

4. Типирование по RFLP 1S6110 показало, что 81,8 % штаммов МБТ с МЛУ относятся к W-кластеру.

Практическая значимость.

Комплексная молекулярно-генетическая характеристика штаммов МБТ по генетическим маркерам позволяет при выделении от больных ТБ штаммов либо Beijing, либо 42435 VNTR, либо W кластеров, либо с сочетанными мутациями в 531 кодоне гена гроВ и 315 кодоне гена katG, отнести их к МБТ, потенциально имеющим МЛУ. Регион, в котором зафиксировано преобладание штаммов с подобными особенностями генома, считать эпидемически неблагоприятным, требующим неотложных мер по проведению противотуберкулезных мероприятий.

Благодаря тому, что определение точечных мутаций в генах гроВ, kalG, inhA относится к быстрым методам анализа, а также может быть применено не только при изучении культур МБТ, но и при анализе диагностического материала от больных ТБ, внедрение в практику фтизиатрии молекулярно-генетических методов позволит ускорить выявление лекарственно-устойчивых штаммов МБТ. Все это в совокупности будет способствовать усовершенствованию комплекса мероприятий по предотвращению распространения штаммов с МЛУ.

Внедрение в практику.

Генотипирование штаммов МБТ по нескольким молекулярно-генетическим маркерам внедрено в работу отдела микробиологии ГУ ЦНИИТ РАМН. Материалы диссертации используются при чтении цикла лекций аспирантам и ординаторам ГУ ЦНИИТ РАМН, а также на курсах усовершенствования врачей-лаборантов бактериологических лабораторий из различных регионов России.

Апробация работы, публикации. Основные результаты диссертации доложены: на 4-й Всероссийской научно-практической конференции "Генодиагностика инфекционных заболеваний" (2002), на научно-практическом симпозиуме "Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении" в рамках международной конференции "Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины" (2002), на конгрессе Европейского общества микробиологов в Дубровниках (2002), на заседании секции микробиологии и иммунологии туберкулеза Московского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (2002, 2003), на конференции молодых ученых (2003).

Работа апробирована на совместном заседании отдела микробиологии и иммунологии ГУ ЦНИИТ РАМН (30.10.2003 г.)

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения и обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 131 странице машинописного текста, иллюстрирована 22 рисунками и 13 таблицами. Список литературы содержит 22 отечественных и 147 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Желткова, Екатерина Александровна

выводы

1. Анализ спектра точечных мутаций в генах, связанных с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду, показал, что 60,8% штаммов М.tuberculosis имели мутации в гене гроВ, 58,8% - в генах katG и inhA. Наибольшее число рифампицин-устойчивых М.tuberculosis несли мутации в 531 кодоне гена гроВ {11,1%). Преобладающими среди изониазид-устойчивых были штаммы с мутацией в 315 кодоне гена katG (92,3%).

2. Генотипирование по эпидемиологическим маркерам М.tuberculosis, выделенных от больных туберкулезом из региона Средней Волги, выявило высокую кластеризацию штаммов: 69,3%» из них относились к Beijing кластеру, 59,3% - к 42435 VNTR кластеру, 73,8% - к W группе по RFLP 1S6110. Тюремные учреждения являлись очагом штаммов с выше обозначенной генетической характеристикой. Клональное распространение штаммов M.tuberculosis свидетельствует о неблагополучной эпидемической ситуации по туберкулезу в регионе Средней Волги.

3. Изучение лекарственной чувствительности штаммов к рифампицину и изониазиду показало, что 48,7%) из них принадлежали к M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью (устойчивые одновременно к рифампицину и изониазиду). Анализ спектра точечных мутаций в генах гроВ, katG, inhA выявил, что 72,2%) штаммов несли сочетанные мутации в 531 кодоне гена гроВ (Ser53 l>Leu) и в 315 кодоне гена katG.

4. Сполиготипирование продемонстрировало различное распределение по сполиготипам среди штаммов с множественной лекарственной устойчивостью и чувствительных к рифампицину и изониазиду. 84,5% M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью относились к штаммам Beijing кластера, что достоверно (р<0,001) отличало их от чувствительных, среди которых Beijing и Т группы встречались практически с одинаковой частотой (41,0% и 33,0% соответственно).

5. VNTR-типирование показало, что доля штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью, относящихся к 42435 кластеру (76,0%), была достоверно (р<0,001) выше, чем у чувствительных (30,0%). Доля штаммов 22232 VNTR группы (3,0%) была достоверно (р<0,05) ниже, чем у чувствительных (17,0%).

6. Типирование по RFLP IS6II0 выявило, что среди штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью преобладали штаммы W группы (81,8%), что достоверно (р<0,05) отличало их от чувствительных (46,2%).

7. Молекулярно-генетическое типирование показало, что, несмотря на то, что эпидемиологические маркеры не связаны с лекарственной устойчивостью (штаммы Beijing кластера, 42435 VNTR и W групп были обнаружены как среди лекарственно-устойчивых, так и среди чувствительных M.tuberculosis), выявлено значительное преобладание перечисленных генотипов среди штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Желткова, Екатерина Александровна, 2004 год

1. Вишневский Б.И., Вишневская Е.Б. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза на северо-западе России // Пробл. туб.- 2003.-№ 5.- стр. 42-45.

2. Генерозов Э.В., Акопиан Т.А., Владимирский М.А., Шипина Л.К., Иртуганова О.А., Говорун В.М. Прямой генетический анализ резистентности к рифампицину изолятов M.tiiberculosis в образцах мокроты // Пробл. туб.- 2003.- № 4.- стр. 49-52.

3. Голышевская В.И., Мартынова Л.П., Севастьянова Э.В. Современные методы микробиологической диагностики туберкулеза // Русский Мед. Журнал.-2001.-№4.-стр. 15-19.

4. Голышевская В.И., Севастьянова Э.В., Воронина Г.А. Определение лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis методами пропорций и абсолютных концентраций // Пробл. туб,- 2001.- № 3.- стр. 51-53.

5. Дорожкова И.Р., Попов С.А., Медведева И.М. Мониторинг лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза в России за 1979-1998 гг. // Пробл. туб.- 2000.- № 5.- стр. 19-23.

6. Марьяндышев А.О., Тунгусова О.С., Кауган Д., Сандвен П. Молекулярная эпидемиология туберкулеза в Баренцевом регионе России и Норвегии // Пробл. туб.- 2001.- № 36.- стр. 17-19.

7. Тунгусова О.С., Марьяндышев А.О. Молекулярные механизмы формирования лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза (обзор литературы) // Пробл. туб.- 2001.- № 6.- стр. 48-50.

8. Тунгусова О.С., Марьяндышев А.О. Молекулярная генетикамикобактерий туберкулеза // Пробл. туб.- 2003.- № 2,- стр. 43-46. Ю.Михайлович В.М., Лапа С.А., Грядунов Д.А., Стрижков Б.Н., Соболев

9. A.Ю. и др. Использование методов гибридизации и ПЦР на специализированном ТБ-микрочипе для обнаружения рифампицинрезистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis II Бюлл. экспер. биол. и мед.- 2001.- Т.131. № l.-стр. 112-117.

10. Нарвская О.В., Мокроусов И.В., Оттен Т.Ф., Вишневский Б.И. Генетическое маркирование полирезистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis, выделенных на Северо-Западе России // Пробл. туб. -1999 -№ 3. стр. 39-41.

11. Приказ №558 МЗ РФ от 08.06. 1978 г. "Об унификации микробиологических методов при туберкулезе". -М. -1978.

12. Приказ №109 МЗ РФ от 21.03.2003 г. "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации". -М. -2003.

13. Салина Т. Ю., Морозова Т. И., Федотов Э.А., Переселенцева Е.С., Завалев

14. B.И. Сравнительное изучение эффективности разных методов диагностики туберкулеза // Пробл. туб.- 2000.- № 2.- стр. 43-44.

15. Сидоренко С.В. Современные проблемы диагностики и лечения туберкулеза //Антибиотики и химиотерапия.- 1999.- № 8.- стр. 3-5.

16. Скрягина Е.М., Залуцкая О.М., Рот А., Маух X., Николенко Е.Н. Выявление микобактерий туберкулеза различными методами // Пробл. туб.- 2001.- № 3.- стр. 56-58.

17. Скрягина Е.М., Залуцкая О.М., Рот А., Маух X., Николенко Е.Н. Тестирование лекарственной чувствительности микобактерий туберкулезас использованием различных методов // Пробл. туб.- 2001.- № 5.- стр. 4345.

18. Черноусова Л.Н. Современные тенденции и возможности микробиологической диагностики туберкулеза // Русский Мед. журнал -2002.-№ 10.- стр. 697-698.

19. Шемякин И.Г., Степаншина В.Н., Иванов И.Ю., Коробова О.В., Анисимова В.А. Характеристика клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis с использованием молекулярно-биологических методов //. Мол. генетика, микробиол. и вирус.- 2003.- № 1,- стр. 32-40.

20. Anh D.D., Borgdorff M., Van L.N., Lan N.T.N., van Gorkom Т., Kremer K. et al. Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype emerging in Vietham // Emerg. Infect. Dis.- 2000.- Vol. 6.- P. 302-305.

21. Banerjee A., Dubnau E., Quemard A., Balasubramanian V., Um K.S., Wilson T. et al. InhA, a gene encoding a target for isoniazid and ethionamide in Mycobacterium tuberculosis II Science.- 1994.- Vol. 263.- P. 227-230.

22. Barnes P., Blotch A.B., Davidson B.T., Snyder Jr. D.E. Tuberculosis in patients with immuno-deficiency virus infection // N. Engl. J. Med.- 1991.- Vol. 324.- P. 1664-50.

23. Bifani P.J., Mathema В., Kurepina N.E. and Kreiswirth B.N. Global dissemination of the Mycobacterium tuberculosis W-Beijing family strains // Trends in Microbiol. 2002. - Vol. 10. - P. 45-52.

24. Bifani P.J., Plikaytis B.B., Kapur V., Stockbauer K., Pan X., Lutfey M.L. et al. Origin and interstate spread of a New York City multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis clone family // JAMA.- 1996.- Vol. 275.- P. 452457.

25. Bloom B.R., Murray C.J.L. Tuberculosis: commentary on a reemergent killer// Science.- 1992.- Vol. 257.- P. 1055-64.

26. Brown T.J., Tansel O., and French G.L. Simultaneous identification and typing of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates by analysis of pncA and rpoB // J. Med. Microbiol.- 2000.- Vol .49.- P. 651-656.

27. Canetti G. The tubercle bacillus in the pulmonary lesion of man // Springer Publishing Сотр. New York. 1955.

28. Canetti G., Rist N., Grosset J. Primary drug resistant in tuberculosis // Am. Rev. of Tuberc. and Pulmon. Dis.- 1964.- Vol. 90,- P. 792-799.

29. Canetti G., Le Lirzin M., Porven G., Rist N., and Grumbach F. Some comparative aspects of rifampin and isoniazid // Tubercle.- 1968.- Vol. 49,- P. 367-376.

30. Canetti G., Fox W., Khomenko A. et al. Advances in techniques of testing mycobacterial drug sensitivity and the use of sensitivity tests in tuberculosis control programmes. // Bull. World Health Organ.- 1969.- Vol. 41P. 21-43.

31. Chae H.Z., Chung S.J., Rhee S.G. Thioredoxin-dependent-peroxidase from yeast //J. Biol. Chem.- 1994.- Vol. 269.- P. 276-280.

32. Cohn D.L., Flavia В., Raviglione M.C. Drug-resistant tuberculosis: review of the worldwide situation and the WHO/IUATLD global surveillance project // Clin. Infect. Dis.- 1997.- Vol. 24.- P. 121-130.

33. Cole S.T. Mycobacterium tuberculosis: drug-resistance mechanisms // Trends Microbiol.- 1994.- Vol. 2.- P. 411-415.

34. Dale J.W. Mobile genetic elements in mycobacteria // Eur. Respir. J. Suppl.-1995.- Vol. 20.-P. 633-648.

35. Dahle U.R., Sandven P., Heldal E., and Caugant D.A. Molecular epidemiology of Mycobacterium tuberculosis in Norway // J. Clin. Microbiol.- 2001.- Vol. 39.- P. 1802-1807.

36. Dale J., Nor R., Ramayah S. et al. Molecular epidemiology of tuberculosis in Malaysia// J. Clin. Microbiol.- 1999.- Vol. 153.- P. 1265-1268.

37. Davis J. Inactivation of antibiotics and the dissemination of resistance genes // Science.- 1994.- Vol. 264.- P. 375-382.

38. De Viedma G.D. Rapid detection of resistance in Mycobacterium tuberculosis: review discussing molecular approaches // Clin. Microbiol. Infect. -2003.- Vol. 9.- P. 349-359.

39. Demple В., Halbrook J. Inducible repair of oxidative DNA damage in Escherichia coli II Nature. 1983.- Vol. 304.- P. 466.

40. Dessen A., Quemard A., Blanchard J.S., Jacobs W.R. Jr, Sacchettini J.C. Crystal structure and function of the isoniazid target of Mycobacterium tuberculosis II Science. 1995.- Vol. 267.- P. 1638-1641.

41. Dooley S.W., Jarvis W.R., Martone W.J., Snyder D.E. Jr. Multi-drug resistant tuberculosis editorial. // Ann. Intern. Med.- 1992. Vol. 117.- P. 257-258.

42. Drake J.W. The distribution of rates of spontaneous mutation over viruses, prokaryotes, and eukaryotes // Ann. N. Y. Acad. Sci.- 1999. Vol. 870. - P. 100-107.

43. Driscoll J.R., Bifani P.J., Mathema В., McGarry M.A., Zickas G.M., Kreiswirth B.N., and Taber H.W. Spoligologos: a bioinformatic approach to displaying and analyzing Mycobacterium tuberculosis data // Emerg. Infect. Dis.- 2002. Vol. 8.- P. 1306-1309.

44. Drobniewski F.A. and Balabanova Y.M. The diagnosis and management of multiple drug resistant tuberculosis at the beginning of the new millenium // Int. J. Infect. Dis.- 2002. Vol. 6. - P. 21-31.

45. Drobniewski F.A., Caws M., Gibson A., and Yong D. Modern laboratory diagnosis of tuberculosis // Lancet 2003. - Vol. 3.- P. 141-147.

46. Dye C. Tuberculosis 2000-2010: control, but not elimination // Int. J. Tuberc. Dis.- 2000.-Vol. 4.-P. 146-152.

47. East African/ British Medical Research Councils. Controlled trial of five short course regimens of chemotherapy regimens for pulmonary tuberculosis // Am. Rev. Respir. Dis.- 1981. Vol. 123. - P. 165-170.

48. Fluit A.D., Visser M.R., and Schmitz F.J. Molecular detection of antimicrobial resistance // Clin. Microbiol. Rev.- 2001. Vol. 14. - P .836-871.

49. Filiol I., Driscoll J.R., van Soolingen D., Kreiswirth B.N., Kremer K., Valetudie G. et al. Global distribution of Mycobacterium tuberculosis spoligotypes // Emerg. Infect. Dis.- 2002 Vol. 8. - P. 1347-1350.

50. Frothingam R., and Meeker-O'Connell W.A. Genetic diversity in the Mycobacterium tuberculosis complex based on variable numbers of tandem repeals // Microbiol. 1998.- Vol. 144.- P. 1189-1196.

51. Garg S.K., Tiwary R.P., Singh R., Malhotra D., Ramnani V.K., Prasad G.B., Chandra R. et al. Diagnosis of tuberculosis: available technologies, limitations, possibilities // J. Clin.Lab. Anal. 2003. - Vol. 17.- P. 155-163.

52. Gay J.D., Young D.R., Roberts G.D. In vitro activities of norfloxacin and ciprofloxacin against Mycobacterium tuberculosis,M. avium complex, M. chelonei, M. fortuitre, and M. kansasii II Antimicrob. Agents Chemother. -1984.-Vol. 26.-P. 94-96.

53. Gillespie S.H. Evolution of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis: Clinical and Molecular Perspective // Antimicrob. Agents and Chemother. -2002.- Vol. 46.- № 2.- P. 267-274.

54. Glynn J.R., Whiteley J., Bifani P.J., Kremer K. and Van Soolingen D. Worldwide Occurrence of Beijing/W strains of Mycobacterium tuberculosis: a systematic review // Emerg. Infect. Dis.- 2002. Vol. 8. - P. 843-849.

55. Grange J.M. Drug-resistance and tuberculosis elimination // Bulletin Intern. Union Against Tuberc. And Lung Dis.- 1990. Vol. 65.- P. 57.

56. Heep M., Rieger U., Beck D., Lehn N. Mutations in the beginning of the rpoB gene can induce resistance to rifamycins in both Helicobacter pylory and Mycobacterium tuberculosis II Antimicrob. Agents Chemother.- 2000.- Vol. 44.- P. 1075-1077.

57. Heifets L.B., Lindohlm-Levy P.J. Pyrazinamide sterilizing activity in vitro against semidormant Mycobacterium tuberculosis populations// American Rev. of Resp. Dis.- 1992.-Vol. 145.- P. 1223-1225.

58. Heym В., Zhang Y., Poulet S., Young D., and Cole S.T. Characterization of the katG gene encoding a catalase-peroxidase required for the isoniazid susceptibility of Mycobacterium tuberculosis II J. Bacteriol.-1993.- Vol. 175.-P. 4255-4259.

59. Неуш В., Honore N., Truffot-Pernot C., Banerjee A., Schurra C., Jacobs W.R. Jr. Et al. Implications of multidrug resistance for the future of short-course chemotherapy of tuberculosis: a molecular study // Lancet.- 1994.- Vol. 344.- P. 293-298.

60. Heym В., Saint-Joanis В., and Cole S.T. The molecular basis of isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis II Tuberc. Lung Dis.- 1999.- Vol. 79.-P. 267-271.

61. Kamerbeek J., Schouls L., Kolk A., Van Agterveld M., Van Soolingen D. et al. Simultaneous detection and strain differentiation of Mycobacterium tuberculosis for diagnosis and epidemiology // J. Clin. Microbiol.- 1997,- Vol. 35.- P. 907-914.

62. Karunakaran P., and Davies J. Genetic antagonism and hypermutability in Mycobacterium smegmatis // J. Bacteriol.- 2000.- Vol.182.- P.3331-3335.

63. Kirchausen Т., Wang J.C., Harrison S.C. DNA gyrase and its complexes with DNA: direct observation by electron microscopy // Cell.- 1985.- Vol. 41.- P. 933-943.

64. Konno K., Nagayama H., Oka S. Nicotinamidase in mycobacteria: a method for distinguishing bovine type tubercle bacilli from other mycobacteria // Nature.-1959.-Vol. 184.-P. 1743-4.

65. Konno K., Feldman F.M., McDermot W., Pyrazinamide susceptibility and amidase activity of tubercle bacilli // Am. Rev. Resp. Dis.- 1967.- Vol. 95.- P. 461-467.

66. Koshi A., Vareldzis В., Styblo K. Multi-drug resistant tuberculosis and control // Res. Microbiol.- 1993.- Vol. 144.- P. 104-110.

67. Kruuner A., Hoffner S.E., Sillastu H., Danilovits M., Levina K., Svenson S.B. et al. Spread of drug-resistant pulmonary tuberculosis in Estonia // J. Clin, Microbiol.- 2001.- Vol. 39.- P. 339-345.

68. Maggliozzo R.S., Marcinkeviciene J.A. Evidence for isoniazid oxidation by oxypressors mycobacterial catalase-oxidase // J. Am. Chem. Society.- 1996.-Vol. 118.- P. 1303-4.

69. Levin M.E., Hatfull G.F. Mycobacterium smegmatis RNA polymerase: DNA supercoling, action of rifampin and mechanism of rifampin resistance // Mol. Microbiol.- 1993.- Vol. 8.- P. 277-285.

70. Lipsitch M., and Levin B.R. Population dynamics of tuberculosis treatment: Mathematical models of the roles of non-compliance and bacterial heterogenety in the evolution of drug resistance // Int. J. Tuberc. Lung Dis.- 1998.- Vol. 2.- P. 187-199.

71. Masur H. Recommendations on prophylaxis and therapy for disseminated Mycobacterium avium complex disease in patients infected with HIV virus // N. Engl. J. Med.- 1993.- Vol. 329.- P. 828-833.

72. Middlebrook G. Isoniazid-resistance and catalase activity of tubercle bacilli. // Am. Rev.Tuberc.- 1954.- Vol. 69.- P. 471-472.

73. Mitchison D. The segregation of streptomycin resistant variants of Mycobacterium tuberculosis into groups with characteristic resistance // J. Gen. Microbiol.- 1951.- Vol. 5.- P. 596-604.

74. Mitchison D.A. Mechanism of drug action in short action in short course chemotherapy // Bulletin International Union Against Tuberculosis.- 1985.-Vol. 65.- P. 30-37.

75. Mitchison D.A. The action of antituberculosis drugs in short-course chemotherapy//Tubercle.- 1985.- Vol. 66.- P. 219-225.

76. Mokrousov I., Narvskaya O., Otten Т., Vyazovaya A., Limeschenko E., Steklova L., Vyshnevskyi B. Phylogenetic reconstruction within Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype in northwestern Russia // Res. Microbiol.- 2002.- Vol. 153.- P. 629-637.

77. Morris S.L., Bai G.H., Suffys P., Portillo-Gomez L., Fairchok M., Rouse D. Molecular mechanisms of multidrug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis H J. Infect. Dis.- 1995.- Vol. 171.- P. 954-960.

78. Moss A.R., Alland D., Telzak E., Hewlett D.Jr., Sharp V., Chiliade P., La Bombardi V. et al. A city-wide outbreak of a multiple-drug resistant strain of Mycobacterium tuberculosis in New York // Int. J. Tuberc. Lung. Dis.- Vol. 1.-P. 115-121.

79. Musser J.M. Antimicrobial agents resistance in Mycobacterium: molecular generic insignts // Clin. Microbiol. Rev. 1995.- Vol. 8. - P. 496-514.

80. Nash KA, Gaytan A, Inderlied C.B. Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis by use of a rapid, and specific RNA/RNA mistmatch assay//J Infect Dis.-1997.-Vol. 176.- P. 533-536.

81. Park Y-K., Bai G-H., and Kin S-J. Restriction fragment length polymorphism analysis of Mycobacterium tuberculosis isolated from countries in the Western Pacific region // J. Clin. Microbiol.- 2000.- Vol.38.- P. 191-197.

82. Perelman M.I. Tuberculosis in Russia // Int. J. Tuberc. Lung Dis.- 2000.-Vol.4.-P. 1097-1103.

83. Pfyffer G.E., Strassle A., van Gorcum Т., Portaels F., Rigouts L., Mathieu C., Mirzoyev F., Traore H., and van Embden J.D.A. Multidrug-resistant tuberculosis in prison inmates, Azerbaijan // Emerg. Infect. Dis.- 2001.- Vol. 7.-P. 855-861.

84. Pyle M.M. Relative numbers of resistant tubercle bacilli in sputa of patients before and during treatment with streptomycin // Proc. Staff. Meet. Mayo. Clin.- 1947.- Vol. 22.- P. 465-473.

85. Qian L., Abe C., Lin T-P., Yu M-C., Cho S-N., Wang S., and Douglas J.T. RpoB genotypes of Mycobacterium tuberculosis Beijing family isolates from East countries //J. Clin. Microbiol.- 2002.- Vol. 40.- P. 1091-1094.

86. Rattan A., Kalia A., and Ahmad N. Multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis', molecular perspectives // Emerg. Infec. Dis. 1998.- Vol. 4.- P. 195-209.

87. Ravins M., Bercovier H., Chemtob D., Fishman Y., and Rahav G. Molecular epidemiology of Mycobacterium tuberculosis infection in Israel // J. Clin. Microbiol.- 2001.- Vol. 39.- P. 1175-1177.

88. Rinder II., Dobner, P., Feldmann, K., Rifai, M., Bretzel, G., Rusch-Gerdes, S., and Loscher, T. Microb. Drug Resist.- 1997.- Vol. 3. P. 195-197.

89. Scorpio A., Zhang Y. Mutations in pncA, a gene encoding pyrazinamidase/nicotinamidase, cause resistance to the antituberculous drug pyrazinamide in tubercle bacillus // Nat. Med.- 1996.- Vol. 2.- P. 662-667.

90. Sebban M., Mokrousov I., Rastogi N., and Sola C. A data-mining approach to spacer oligonucleotide typing of Mycobacterium tuberculosis II Bioinformatics.-2002.- Vol. 18.- P. 235-243.

91. Sherman D.R., Sabo P.J., Hickey M.J., Arain T.M., Mahairas G.G., Yuan Y. et al. Disparate responses to oxidative stress in saprophytic and pathogenic mycobacteria // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1995.- Vol. 92.- P. 6625-6629.

92. Sherman D.R„ Mdluli K., Hickey M.J., Arain T.M., Morris S.L., Barry S.E.III, Stover C.K. Compensatory ahpC gene expression in isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis. II Science.- 1996.- Vol. 272.- P. 1641-1643.

93. Shilova M.V., Dye C. The resurgence of ТВ in Russia // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci.- 2001.- Vol. 356.- P. 1069-75.

94. Shimao Т. Drug-resistance in tuberculosis control // Tubercle.- 1987.-Vol.68 (suppl.).- P. 5-15.

95. Shoeb H.A., Bowman B.U., Ottolenghi A.C., Merola A.J. Peroxidase-mediated oxidation of isoniazid // Antimicrob. Agenrs Chemother.- 1985,- Vol. 27.- P. 399-403.

96. Soini H., Xi Pan, Amin A., Graviss E.A., Siddiqui A., and Musser J.M. Characterization of Mycobacterium tuberculosis isolates from patients in Houston, Texas, by spoligotyping // J. Clin. Microbiol.- 2000.- Vol. 38.- P. 669676.

97. Somoskovi A., Parsons L.M., and Salfinger M. The molecular basis of resistance to isoniazid, rifampin, and pyrazinamide in Mycobacterium tuberculosis И Respir. Res.- 2001.- Vol. 2.- P. 164-168.

98. Spratt B.G. Resistance to antibiotics mediated by target alterations // Science.- 1994.- Vol. 264.- P. 388-393.

99. Sreevatsan S., Pan X., Zhang Y., Kreisworth B.N., Musser J.M. Mutations associated with pyrazinamide resistance in pncA of Mycobacterium tuberculosis complex organisms // Anyimicrob. Agents Chemother.- 1997.- Vol. 41.- P. 636640.

100. Sreevatsan S., Stockbauer K.E., Pan X, Kreisworth B.M., Moghazeh S.L., Jacobs W.R. Jr, et al. Ethambutol resistance in Mycobacterium tuberculosis: critical role of embB mutations // Antimicrob. Agents Chemother.- 1997.- Vol. 41.- P. 1677-1681.

101. Takayama K., Armstrong E.L., Kunugi K.A., Kilburn J.O. Inhibition by ethambutol of mycolic acid transfer into the cell wall of Mycobacterium smegmatis И Antimicr. Agents Chemother.- 1979.- Vol. 16.- P. 240-242.

102. Takayama K., Kilburn J.O. Inhibition of synthesis of arabinogalactan by ethambutol in Mycobacterium smegmatis II Antimicr. Agents Chemother.-1989.-Vol. 33.-P. 1493-1499.

103. Telenti A., Imboden P., Marchesi F., Lowrie D., Cole S., Colston M.J. et al. Detection of rifampicin-resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis II Lancet.- 1993.- Vol. 341,- P. 647-650.

104. Telenti A, Imboden P, Marchesi F, Schmidheini T, and Bodmer Т., Detection of rifampin-resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis II Antimicrob. Agents Chemother. -1993. -Vol. 37 -P. 2054-2058.

105. Telenti A., Philipp W.J., Sreevatsan S., Bernasconi C., Stockbauer K.E., Weites B. et al. The emZ?operon, a gene cluster of Mycobacterium tuberculosis involved in resistance to ethambutol //Nat. Med.- 1997.- Vol. 3.- P. 567-570.

106. Thomas J.P., Baughan C.O., Wilkinson R.G., Stephard R.G. A new synthetic compound with anti-tuberculous activity in mice: ethambutol // Am. Rev. Respir. Dis.- 1961.- Vol. 83.- P. 891-893.

107. Van Embden J.D.A., Cave M.D., Crawford J.T., Dale J.W., Eiscnach K.D. et al. Strain identification of Mycobacterium tuberculosis by DNA fingerprinting: Recomendations for a standardized methodology // J. Clin. Microbiol.- 1993.-Vol. 31.- P. 406-409.

108. Van Soolingen D. Molecular epidemiology of tuberculosis and other mycobacterial infections: main methodologies and achievements // J. Intern. Med.- 2001.- Vol. 249.- P. 1-26.

109. Vareldzis B.P., Grosset J., De Kantor I., Crofton J, Laszlo A. et al. Drug-resistant tuberculosis: laboratory issues // Tubercle and Lung Dis.- 1994,- Vol. 75.- P. 1-7.

110. Victor Т. et al. Detection of mutations in drug resistance genes of Mycobacterium tuberculosis by dot-blot hybridization strategy // Tuber. Lung. Dis.- 1999. Vol. 79.- P. 343-348.

111. Watterson S.A., Wilson S.M., Yates M.D., Drobniewski F.A. // Comparison of three molecular assays for rapid detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis // J. Clin. Microbiol. 1998,- Vol. 36.- P. 1969-73.

112. Watterson S.A., Drobniewski F.A. Modern laboratory diagnosis of mycobacterial infections // J. Clin. Pathol.- 2000.- Vol. 53.- P. 727-732.

113. Williams D.L., Waguespack C., Eisenach K., Crawford J.T., Portaels M., Salfinger M. et al. Characterization of rifampicin-resistance in pathogenic mycobacteria // Antimicrob. Agents Chemother.- 1994.- Vol. 38.- P. 23802386.

114. Wilmont C.J.R., Critchlow S.E., Eperon I.C., Maxwell A. The complex of DNA gyrase and quinolone drugs with DNA forms a barrier to transcription by RNA polymerase // J. Mol. Biol.- 1994.- Vol. 242.- P. 351-363.

115. Winder F.G., and P.B. Collins. Inhibition by isoniazid of synthesis of mycolic acids in Mycobacterium tuberculosis II J. Gen. Microbiol.- 1970,- Vol. 63.-P. 41-48.

116. Winder F.G. Mode of action of the antimycobacterial agents and associated aspects of the molecular biology of the mycobacteria // -C. Ratledge and J. Stanford (ed.), The biology of the mycobacteria, Academic Press. 1982.- Vol. 1. -P. 353-438.

117. Woodley C.L., Kilburn J.O., David H.L., Silcox V.A. Susceptibility of mycobacterium to rifampin // Antimicrob. Agents Chemother.- 1972.- Vol. 2.-P. 245-249.

118. World Health Organization// International Union against tuberculosis. Antituberculosis drug resistance. Geneva: The organization; 2000.

119. World Health Organization report on ТВ epidemic. Global ТВ programme. Geneva: The organization.- 1997.

120. Yates M.D., Drobniewski F.A., Wilson S.M. Evalution of a rapid PCR-based epidemiological typing method for routine studies of Mycobacterium tuberculosis II J. Clin. Microbiol.- 2002.- Vol. 40.- P. 712-714.

121. Youatt J. A review of the action of isoniazid // Am. Rev. Respir. Dis. -1969.- Vol .99.-P. 729-749.

122. Yuen L.K.W., Leslie D., and Coloe P.J. Bacteriological and molecular analysis of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis strains isolated in Australia// J. Clin. Microbiol.- 1999.- Vol. 37.- P. 3844-3850.

123. Zhang Y., Heym В., Allen В., Young D., and Cole S. The catalase-peroxidase gene and isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis II Nature.- 1992,- Vol. 358.- P. 591-593.

124. Zhang Y., Garbe Т., Young D. Transformation with katG restores isoniazid-sensitivity in Mycobacterium tuberculosis isolates resistant to a range of drug concentrations //Mol. Microbiol.- 1993.- Vol. 8,- P. 521-524.

125. Zhang Y., Telenti A. Genetics of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis II Molecular Genetics of Mycobacteria. Edited by Hatful GF, Jacobs WR Jr. Washington DC:ASM Press.- 2000.- P. 235-254.