Молекулярно-генетическая диагностика малярии: эффективность и возможности оптимизации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат наук Гринев, Александр Борисович

• Гринев, Александр Борисович
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Гринев, Александр Борисович

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Современные проблемы диагностики малярии

1.1. Световая микроскопия

1.2. Диагностические экспресс - тесты для диагностики малярии

1.3. ПЦР как метод точной диагностики малярии

Глава.2. Эндемичная лимфома Беркитта как результат микст-инфекции вируса Эпштейн-Барр и Plasmodium falciparum

2.1. Вирус Эпштейн-Барр как кофактор в патогенезисе лимфомы Беркитта

2.2. Варианты воздействия Plasmodium falciparum на патогенез лимфомы Беркитта

2.3. Генетические перестройки при эндемичной лимфоме Беркитта

2.3.1. V (D) J рекомбинация

2.3.2. Транслокация с - myc/IgH

ЧАСТЬ И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. Материалы и методы исследования

3.1. Материалы

3.2. Реактивы и оборудование

3.3. Методы

Глава 4. Характеристика завозной малярии в городе Москве в период 2010 -

2012 г.г

4.1. Частота и видовая структура завоза малярии из разных эндемичных регионов мира

4.2. Возрастная структура больных завозной малярией

Глава 5. Применение метода Nested PCR для диагностики малярии

5.1. Применение Nested PCR с использованием в качестве источника ДНК препарата «толстая капля»

5.2. Применение Nested PCR с использованием в качестве источника ДНК эритроцитарного сгустка

5.3. Сравнительный анализ диагностической эффективности проведения Nested PCR по препарату «толстая капля» и эритроцитарному сгустку

Глава 6. Анализ на наличие / отсутствие транслокаций (8;14)(q24;q32) у

носителей малярийных паразитов и ЭБВ

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выводы

Практические рекомендации

Список используемой литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

DNA Star- DNASTAR Inc.

FISH- метод метафазного кариотипирования и флуоресцентной гибридизации

IgH - Immunoglobulin heavy chain LMP1 - Latent membrane protein 1 LPS - Bacteria llipopolysaccharide

NCBI- National Center for Biotechnology Information PBS - фосфатный буфер

Pfemp - Plasmodium falciparum eukaryotic membrane protein PCR - Polymerase chain reaction RPMI - Roswell Park Memorial Institute TP A - Tissue plasminogen activator

V (D) J рекомбинация - от названий участков, которые подвергаются реорганизации:V-variable, D- diversity, J-joining

ЛБ - лимфома Беркитта

ПЦР - полимеразная цепная реакция

рДНК - рибосономальная ДНК

ТАЕ буфер - трис-ацетатный буфер

ТЭС - телячья эмбриональная сыворотка

ЭБВ - вирус Эпштейн- Барр

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическая диагностика малярии: эффективность и возможности оптимизации»

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы диссертационного исследования

Малярия является одной из наиболее серьезных и трудноразрешимых проблем в странах с тропическим и субтропическим климатом [42]. Число больных зарегистрированных в 101 стране мира составляет 216 млн. (ВОЗ,2011), из них 81% - в странах Африки; умирает за год до 900 тыс. больных малярией, 91% из них также в странах Африки; 86% умерших от малярии в мире составляют дети до 5 лет. Наибольший процент летальных исходов - до 98% приходится на тропическую малярию, вызываемую Plasmodium falciparum.

В период проведения настоящего диссертационного исследования, по данным Федерального бюджетного учреждения здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве», было зарегистрировано 115 обращений с диагнозом малярия. При этом в 2010 году было зарегистрировано 48 обращений, в 2011 таких обращений было 32, а в 2012 году 35. Из этих данных следует, что, несмотря на тот факт, что количество обращений с диагнозом малярия в год не постоянно, оно, так или иначе, не опускается ниже определенного минимального уровня. В данных условиях проблемы ранней постановки точного диагноза и адекватного лечения выходят на первый план. Известно, что поздняя диагностика тропической малярии приводит тяжёлым клиническим последствиям - к развитию наиболее опасной - церебральной формы, инфекционно-токсическому шоку и других смертельных осложнений. Поздняя диагностика трёхдневной малярии ведёт к серьёзным эпидемиологическим последствиям - созданию условий для возникновения в городе случаев малярии вторичных от завозных.

В настоящее время существуют различные методики, направленные на выявление наличия малярийных паразитов в крови больного. Прежде всего,

это микроскопическое исследование мазка крови больного, которое является на сегодняшний день «золотым стандартом» диагностики в маляриологи [27,148]. Подобное исследование позволяет обнаружить паразитов в течение полутора-двух часов после забора крови, однако этот метод не лишен некоторых недостатков: относительно низкая эффективность при незначительном количестве паразитов в мазке крови или, если они присутствуют на пороге чувствительности метода, а также трудность дифференциальной диагностики вида паразита на стадии юного трофозоита.

Наряду с микроскопическим исследованием препаратов крови в настоящее время используются так называемые экспресс - тесты [35]. Это удобный и быстрый способ постановки диагноза, особенно в случаях отсутствия квалифицированной медицинской помощи. Однако и этот вид диагностического исследования имеет определенные ограничения в эффективности, так как экспресс-тесты пока разработаны не для всех видов паразитов и значительно уступают в чувствительности стандартным паразитологическим исследованиям препаратов крови.

В последние десятилетия в практику диагностики инфекционных болезней, в том числе и малярии, вошли высокоэффективные и чувствительные молекулярно-генетические методы на основе полимеразной цепной реакции (далее ПЦР). Источниками ДНК плазмодиев малярии для ПЦР могут служить: препарат «толстая капля», сгусток, образованный после центрифугирования цельной венозной крови, или кровь, собранная на бумажный фильтр.

Кроме того, представляют научный и практический интерес методы, позволяющие определить наличие генетических отклонений не только на молекулярно-биологическом уровне (метод ПЦР), а на цитогенетическом уровне. В этом плане важное место отводят методам метафазного

кариотипирования и флуоресцентной гибридизации in situ - FISH

(Fluorescence in situ hybridization). Последний метод превосходит первый в чувствительности и точности, следовательно - в адекватности диагностики.

Для качественного улучшения диагностики малярии в современных условиях, наряду с использованием стандартных методов постановки диагноза, актуальным становится разработка и внедрение в практику точных молекулярно-генетических и цитогенетических методов, что поможет значительно эффективнее решать существующие научные и практические проблемы маляриологии.

Цель исследования

Оптимизация проведения молекулярно-генетических методов диагностики малярии и анализ возможности генетических перестановок при микст-инфекции завозной малярии и вируса Эпштейн-Барр с помощью современных цитогенетических методов.

Задачи исследования

1) Изучение эффективности и совершенствование существующего метода проведения Nested PCR с препаратом «толстая капля» в качестве источника ДНК малярийного плазмодия.

2) Разработка и изучение возможности применения в практике диагностики малярии метода Nested PCR с эритроцитарным сгустком в качестве источника ДНК паразита.

3) Сравнительный анализ эффективности и трудозатратности при проведении Nested PCR с разными источниками ДНК малярийного плазмодия.

4) Выявление Эпштейн-Барр вирусной инфекции у больных малярией при помощи метода ПЦР.

5) Анализ кариотипа больного малярией на предмет наличия у него специфичных для лимфомы Беркитта генетических изменений (транслокаций).

Объект и предмет исследования.

Объектом исследования являлись граждане, больные завозной малярией, проходящие лечение в Городской клинической инфекционной Больнице №2 г. Москвы.

Предметом исследования являлись:

1) Кровь больного, взятая в виде препарата «толстая капля».

2) Венозная кровь больного, взятая в пробирке с этилендиаминтетрауксусной кислотой (далее ЭДТА) в качестве антикоагулянта.

3) Венозная кровь больного, взятая в пробирку с гепарином в качестве антикоагулянта.

4) Плазма больного в пробирке Эпендорф.

Теоретическая и методологическая основа исследования.

Теоретической основой для данного диссертационного исследования послужили публикации, в зарубежных и в российских научных периодических изданиях. Исходя из изучения данного материала, был сделан вывод о недостаточной изученности, поднимаемой диссертационным исследованием, проблематики на изучаемой территории.

В качестве методологической основы исследования были использованы как общенаучные методы, такие как эксперимент и анализ набранного

материала, так и специфические методы исследования: ПЦР, микроскопическая диагностика, FISH.

База исследования.

Информационной и методической базой для проведения исследования являлись:

1) Городская клиническая инфекционная больница №2 г. Москвы.

2) Федеральное бюджетное учреждение здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве».

3) Федеральное государственное бюджетное учреждение «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П.Чумакова» Российской академии медицинских наук.

Научная новизна диссертационного исследования.

1) Показана высокая эффективность и специфичность метода ПЦР для диагностики малярии.

2) Впервые применён метод выделения ДНК паразита из эритроцитарного сгустка для постановки Nested ПЦР с целью диагностики малярии. Показана высокая эффективность и сравнительно незначительная трудозатратность при использования данного биосубстрата.

3) Впервые проведено исследование кариотипа Эпштейн-Барр вирус — позитивных больных завозной малярией на территории Москвы на наличие транслокаций, выявляемых при диагностике лимфомы Беркитта. Транслокаций, характерных для эндемичной лимфомы Беркитта, у больных завозной малярией и в группе контроля, не обнаружено.

Положения, выносимые на защиту.

1) Впервые в разработан метод выделения ДНК из эритроцитарного сгустка, образованного после центрифугирования крови больного, для проведения реакции ПЦР.

2) Установлено, что метод выделения ДНК из эритроцитарного сгустка превосходит метод выделения ДНК из препарата «толстая капля» в точности и достоверности результата.

3) Полученные результаты работы послужили основанием для внесения дополнения в методику диагностики малярии при помощи Nested PCR по препарату «толстая капля».

4) Продемонстрирована зависимость реакции Nested PCR от качества препарата «толстая капля».

5) Показано, что при наличии микст-инфекции вируса Эпштейн-Барр и завозной малярии, вызванной Plasmodium falciparum и другими видами малярийных паразитов, у больных, зарегистрированных в городе Москве, не наблюдались специфичные для данной микст-инфекции транслокации, характерные в эндемичных очагах малярии.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Метод Nsted PCR с эритроцитарным сгустком в качестве источника ДНК паразита, предложенный в данной работе, может быть внедрен в практическую диагностику малярии с целью улучшения точности и достоверности постановки диагноза. Полученная в результате проведенной работы информация может быть полезна для полноты понимания процессов происходящих в организме больного при сочетании двух патогенов -Эпштейн-Барр вируса герпеса человека и малярийных плазмодиев.

Результаты диссертационной работы нашли применение в учебном процессе на кафедре биологии и общей генетики ГОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РФ» и кафедре инфекционных болезней с курсом эпидемиологии ФГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов». Предложенная модификация метода Nested PCR использовалась для уточнения видовой принадлежности в диагностике отдельных случаев завозной малярии в ИКБ 2. Апробация диссертации.

Апробация диссертации проведена на научной конференции кафедры биологии и общей генетики Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова ( июль 2013 г.).

Материалы диссертации были доложены на Первой молодежной научно-практической школы-конференции по естественным, техническим, медицинским наукам и биотехнологиям в Российском университете дружбы народов (июнь 2013 г.)

Публикации по теме диссертации.

По теме диссертации опубликовано 3 статьи, из них 2 в журналах, поименованных в перечне ВАК России.

Диссертация написана на 111 листах и состоит из титульного листа; оглавления; введения, отражающего цели и задачи исследования; обзора литературы по проблематике диссертации; обзора используемых материалов и методов; изложения оригинальных собственных материалов; выводов; обсуждения результатов; библиографического списка, составленного в соответствии с «ГОСТ Р 7.0.5 - 2008 - Библиографическая ссылка» и состоящего из 157 источников (в числе которых 44 российских и 133 иностранных); иллюстративного материала состоящего из 26 рисунков и 5 таблиц и списка сокращений.

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Современные проблемы диагностики малярии.

Диагностика малярии как отрасль медицинского теоретического и практического знания является одним из приоритетных направлений во всей паразитологической диагностической практике. Существует множество публикаций, поднимающих и освещающих различные проблемы маляриологии, среди которых важное место занимают вопросы диагностики малярии, т.к. от корректного диагноза зависит адекватность оказываемого лечения, соответственно и прогноз исхода болезни [19,20,30]. Вопрос корректной и быстрой диагностики стоит наиболее остро в случаях, когда у больного предполагается диагноз «тропическая малярия», вызываемая Plasmodium falciparum [48,52,59]. Это связанно, прежде всего, с тем, что именно при тропической малярии развиваются наиболее тяжелые и злокачественные формы болезни: например церебральная форма малярии, нередко являющаяся причиной смерти больного [30,148].

Современная диагностическая практика имеет множество методов, позволяющих с большей или меньшей скоростью и точностью определить вид возбудителя, вызвавшего у пациента малярию. В рамках данной работы будут рассмотрены наиболее важные, используемые в практической медицине: микроскопическое исследование толстой капли и мазка крови больного на стекле, методы диагностики при помощи экспресс - тестов и методы диагностики малярии, основанные на полимеразной цепной реакции (ПЦР).

1.1. Световая микроскопия.

На сегодняшний день световая микроскопия остается «золотым стандартом» лабораторной диагностики малярии[148]. Этот метод, успешно применяющийся на протяжении длительного времени, обоснованно считался основным и, по мнению многих авторов, таковым может надолго остаться в практике маляриологических исследований, даже несмотря на разработку и внедрение новых альтернативных методов диагностики [119]. Согласно методическим указаниям по паразитологической диагностике малярии, подготовленным и изданным Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского Первого Московского государственного медицинского университета им.И.М Сеченова, целью исследования препаратов крови является обнаружение бесполых и половых форм возбудителя. Для этого используют препараты крови, приготовленные методом «тонкого мазка» и «толстой капли», окрашенные в соответствии с методикой Романовского-Гимза. Микроскопическое изучение препарата «толстая капля» является основным методом, т.к. он позволяет обнаружить малярийных плазмодиев, в том числе и при низкой паразитемии, что достигается большим, по сравнению с «тонким мазком», объемом крови в препарате. Данный метод оценивают как достаточно чувствительный, т.к. даёт положительный результат при наличии 8 паразитов в одном микролитре крови. Микроскопическое исследование при правильной организации проведения работы позволяет поставить диагноз спустя полтора-два часа после забора крови.

Однако, суть методики приготовления препарата «толстая капля» такова, что окраска по Романовскому-Гимза производится при нефиксированной капле крови, что может приводить к изменению морфологических особенностей паразитов и делать дифференциальную диагностику затруднительной. Для проведения точной дифференциальной диагностики малярии - определения вида плазмодия, используется препарат «тонкий мазок», где перед

окрашиванием капля крови фиксируется, что предотвращает изменения морфологии паразита под воздействием реактивов, используемых для окраски [27].

Не вызывает сомнения то, что микроскопическое исследование препаратов крови «толстая капля» и «тонкий мазок» является хорошо зарекомендовавшим себя и достаточно чувствительным и точным методом диагностики малярии. Однако также можно обнаружить определенные недостатки данного метода. Как было отмечено выше, чувствительность микроскопирования не превышает 8 паразитов на один микролитр, что затрудняет диагностику в случаях, когда количество паразитов в крови больного меньше указанного порога чувствительности (что может произойти, например, в результате самолечения), поэтому метод микроскопирования может не дать достоверных результатов, необходимых для построения адекватного лечения. Более низкая чувствительность микроскопического исследования относительно других методов хорошо изучена и описана в литературе [117,130,131,139 и др.]. Следующим важным фактором, существенно влияющим на эффективность микроскопии, является зависимость результатов исследования от человеческого фактора, т. е. уровня квалификации и опыта конкретного врача-лаборанта, который просматривает препарат крови больного. Микроскопист может испытывать затруднения с проведением дифференциальной диагностики и постановкой верного диагноза в случае, если морфология паразита была изменена в результате лечения или самолечения больного. Поиски ученых и разработчиков диагностических методов в последние десятилетия увенчались появлением новых способов более оперативной постановки диагноза, в частности систем экспресс-анализа малярии.

1.2. Диагностические экспресс - тесты для диагностики малярии.

Диагностические экспресс - тесты для диагностики малярии, разработанные и внедренные в медицинскую практику в конце двадцатого века, являются

часто применяемым инструментом и в современной условиях. Создание подобных систем, необходимых для быстрой и точной постановки диагноза, стало возможным в рамках программы ВОЗ (1992), которая основывалась на том, что одним из приоритетных направлений в диагностике малярии должно стать создание легких в использовании диагностических систем для жителей стран, где малярия является широко распространенным эндемичным заболеванием. Учитывая тот факт, что уровень жизни большинства жителей таких регионов, как правило, низкий, ставилась задача создания тестовых систем, которые не просто были бы просты в использовании, но и доступны широкому кругу лиц [29]. В этот период разрабатывались и внедрялись в практику диагностики многих инфекционных и паразитарных болезней методы иммунохроматографической экспресс - диагностики. Суть метода иммунохроматографии состоит в следующем: нанесенный образец (цельная кровь, сыворотка, плазма и другие биологические объекты) движется по мембране и доходит до зон, где находятся специфически связывающиеся агенты (антитела или антигены). В этих зонах происходит связывание тестируемого белка (антигена), находящегося в образце со специфическими антителами к нему. В присутствии тестируемого вещества в пробе на мембране появляются одна или две четко окрашенные полосы, свидетельствующие о негативном или позитивном результате теста. Тесты имеют высокую специфичность, вероятность ложноположительного ответа практически нулевая. Иммунохроматографическая экспресс-диагностика позволяет проводить вне лаборатории анализы практически лабораторного качества и получить результат в течение нескольких минут. Кроме того, подготовка медицинского персонала для работы с такими тест-системами занимает также минимальное количество времени. Для диагностики малярии уже предложены много десятков разновидностей подобных экспресс -тестов, большинство из которых предназначены для выявления инфекции Plsamodium falciparum, меньше для инфекции Plsamodium spp. (без идентификации вида), есть отдельные предложения по выявлению

одновременно P.falciparum и P.vivax. He менее важен и тот факт, что большинство одноразовых коммерческих экспресс-тестов стоят порядка нескольких долларов, что делает их весьма доступными для широкого спектра пользователей. Возможность применения разных экспресс - тестов для диагностики малярии в Российской Федерации была подробно рассмотрена в ряде отечественных публикаций [10,29,35].

Несмотря на тот факт, что различные коммерческие экспресс-тесты отлично зарекомендовали себя в очагах малярии, они не лишены некоторых недостатков. Прежде всего, как было сказано выше, это специфичная комплементарность только к некоторым видам возбудителя. Кроме того, нельзя не отметить, что чувствительность коммерческих экспресс - тестов сравнительно невысокая и равна примерно 20 паразитам в микролитре крови, что делает их малопригодными в условиях, когда необходим срочный корректный диагноз вне эндемичного очага (особенно важно при подозрении на тропическую малярию), а также при проведении эпидемиологического обследования.

1.3. ПЦР как метод точной диагностики малярии.

Постановка точного диагноза в неясных случаях заболевания малярией, необходимость проведения дифференциального диагноза между рецидивом малярии и повторным заражением, широкие эпидемиологические исследования на эндемичных территориях и некоторые другие обстоятельства послужили поводом для поиска диагностических решений, отвечающих требованиям о наивысшей чувствительности. Одним из методов, отвечающих этим высоким требованиям, является полимеразная цепная реакция (ПЦР), успешно используемая для диагностики многих инфекционных болезней. Суть данной реакции заключается в том, что непосредственному анализу подвергается некий биосубстрат, взятый у больного с целью обнаружения в нем ДНК паразитов. Сам по себе процесс проведения реакции состоит из нескольких стадий: собственно забора

биологического материала, который проводится в соответствии с применяемой методикой; выделения ДНК паразита из биосубстрата; приготовления реакционной смеси, в которую добавляют специфичные для данного вида паразита праймеры и термостабильную ДНК полимеразу; собственно реакции ПЦР, которая в свою очередь делится на три этапа. Первый этап - денатурация - нагревание матрицы ДНК с целью разъединения цепей путем разрыва водородных связей. Второй этап - отжиг праймеров. На этом этапе происходит присоединение праймеров к сайт -специфичным участкам материнской матрицы ДНК, за счет снижения температуры. Третий этап-элонгация, во время которой происходит синтез дочерней цепи ДНК на матрице, при этом праймеры являются затравками. Цикл повторяется некоторое количество раз, после чего исходный продукт подвергают детекции на агарозном геле с использованием различных систем гель - документации [40]. Принципиальная схема ПЦР показана на рисунке 1.

В случае, когда ПЦР проводится с целью дифференциальной диагностики малярии, подобному многократному клонированию подвергается ген рибосомальной ДНК (далее рДНК), именуемый - 18S, и отвечает за синтез рибосомальной РНК [13]. У малярийных паразитов известно три типа рибосомальных генов различной структуры, которые экспрессируются на разных стадиях жизненного цикла. Каждая из этих стадий отличается скоростью репликации и структурными отличиями функционально активных рибосом. В геноме паразитов рибосомные гены представлены 4-8 рибосомными оперонами, которые генетически не связаны между собой и разбросаны по различным участкам генома. При этом важно отметить, что ген 18S является структурно детерминированным. Наличие вариабельных и консервативных участков в рибосомальных генах позволяет создавать различные тест-системы для дифференциальной ПЦР диагностики, поэтому

большинство разработанных методик ПЦР диагностики направлено на выделение р.ДНК малярийных паразитов [13,33].

5' 3'-

5'.

1®

.3' ■5'

.3'

3'-

■5'

3'-

51

.3'

-У

1

©

5'_

.3'

у-

1

Рисунок 1. Схематичное изображение первого цикла ПЦР

•у

(1) Денатурация при 94—96 °С. (2) Отжиг. (3) Элонгация. (4) Завершение

первого цикла.

Метод ПЦР для использования в диагностике малярии разрабатывался достаточно быстро. Спустя несколько лет после открытия Кэри Муллисом ПЦР и публикации статьи, посвященной этому открытию [133], появляются первые научные статьи, освещающие вопросы применения ПЦР как передового молекулярно-генетического метода анализа ДНК [61,91]. Параллельно с ними появляются статьи о возможности изучения в целях диагностики рибосомальной ДНК [111,129] и применении полимеразы, выделенной из термофильной бактерии Thermus aquaticus (7ад-полимераза) [132]. И уже в конце двадцатого века появляются первые публикации о применении ПЦР для проведения диагностики малярии. Также описывается и обнаружение сочетанных заражений двумя видами паразитов, которые не удавалось обнаружить при помощи микроскопии [53,139,146]. В дальнейшем стали выходить в свет публикации с информацией о том, что ПЦР превосходит микроскопию в чувствительности и точности постановки диагноза [137,148]. Причем появлялись данные о нахождении микст -инфекций (инфекция двумя и более видами паразитов одновременно) там, где их не обнаружил микроскопист [114].

В последнее время поиски наивысшей чувствительности в микробиологических реакциях привели к появлению модификации ПЦР, при которой стало возможным двухстадийное проведение амплификации, названное Nested PCR. Суть модификации заключается в том, что в качестве результата первой амплификации получали множественные копии ДНК, соответствующие роду того или иного возбудителя, а затем добавляются именно эти ампликоны (участки ДНК, ограниченные праймерами) в качестве матрицы во вторую реакцию, к которой прикрепляются уже видоспецифичные праймеры. Таким образом, во второй реакции образуются ампликоны, соответствующие виду возбудителя. За время прохождения двух полных циклов амплификации накапливается суммарно вдвое больше

ампликонов. Это способствует обнаружению ДНК возбудителя даже при минимальном содержании ее в пробе.

Применение в широкой диагностической практике Nested PCR также является темой для научного изучения, которое отражено как в отечественной, так и в зарубежной литературе. Так, например, имеются статьи, в которых описаны случаи, когда при помощи Nested PCR удавалось обнаружить микст - инвазии [137]. Был продемонстрирован случай, когда при помощи микроскопии препаратов крови определенного числа больных было обнаружено 3 микст-инфекции, а при помощи Nested PCR выявлен 31 случай [138]. При помощи описываемой модификации ПЦР удавалось выявить у больных редкие виды инфекции плазмодиями с высокой точностью, что затруднительно установить при микроскопической дифференциальной диагностике [150].

При помощи ПЦР оказалась также возможна дифференциальная диагностика на уровне штаммов возбудителей малярии, что в свою очередь может послужить залогом адекватного и оперативного лечения [65,66,97,149 и др.]. Также в некоторых статьях приведены и детально разобраны методики постановки ПЦР с целью дифференциальной диагностики различных штаммов (например, штамма Чессон, P. vivax), указаны нуклеотидные последовательности праймеров и составы реакционных смесей [145]. Так же, была описана возможность применения Nested PCR для диагностики рецидивов тропической малярии, вызванной лекарственно устойчивыми штаммами P.falciparum [33].

Для успешной дифференциальной диагностики малярии используется и такая разновидность ПЦР, как real-time PCR, в основе которой лежит возможность отслеживать количество накопившихся в реакционной смеси ампликонов в процессе амплификации в режиме реального времени за счет применения специальных амплификаторов компьютерных программ. Такая методика в

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гринев, Александр Борисович, 2013 год

Список используемой литературы

1. Аль-Махаджи, Аруа Ахмед Клинические и сероэпидемиологические особенности лимфомы Беркитта в Республике Йемен : автореф. дис. канд. мед.наук наук: 14.00.29. М., 1998. 23 с.

2. Баранова A.M. Малярия в Греции // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2012. №2. С. 45-46.

3. Баранова А. М. Почему не укоренилась малярия в современной России // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. №2. С. 22-24.

4. Баранова A.M. Современные противомалярийные препараты, рекомендованные всемирной организацией здравоохранения для лечения и химиотерапии малярии// Медицинская паразитология и паразитарные болезни . 2007. №3. С. 56-59.

5. Баранова А. М. Элиминация малярии: мониторинг и оценка // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2008. №3. С. 51-54.

6. Барях Е.А., Кравченко С.К., Обухова Т.Н., Звонков Е.Е., Кременецкая A.M., Клясова Г.А., Терехова А.Ю., Воробьев А.И. Лимфома Беркитта: клиника, диагностика, лечение //Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика М.: Издательский дом "Практическая медицина", 2009. С. 137-146.

7. Гл. ред. М. С. Гиляров; Редкол.: А. А. Бабаев, Г. Г. Винберг, Г. А. Заварзин и др. Биологический энциклопедический словарь.. 2-е изд., исправл. изд. М.: Сов. Энциклопедия, 1986., 864 с.

8. Д.В.Самарин Современные подходы к диагностике Эпштейна-Барр вирусной инфекции // Юишчна ¡мунолопя. Алерголопя. Гнфектолопя. 2008. №2. С. 15-18.

9. Державина Т.Ю. с соавт. Мониторинг за малярией в Тульской области, как результат системного взаимодействия с референс центром// Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. №2. С. 24-27.

10. Дин Конг JTe Эффективность и специфичность КАТ-теста при экспресс-диагностике тропической малярии // Медицинская паразитология и паразитарные болезни . 2002. №2. С. 17-20.

11. Д. Мейл, Д. Бростофф, Д. Рот, А. Ройтт Иммунология. 7 (оригинальное) изд. М.: Логосфера, 2007. 568 с.

12. Еровиченков A.A. Лечение тропической малярии. Новые препараты и перспективы.// Клиническая фармакология и терапия . 2000. №4. С. 86-88.

13. Иванова Н.В., Морозов E.H., Кукина И.В. и др. Последовательность ITS1,5,8S и ITS2 рДНК А-типа Plasmodium vivax и разработка метода ретроспективной диагностики поокрашенным препаратом крови «толстая капля»//Молекулярная биология . 2001. №3. С. 515-525.

14. Иванова Т.М., Тимошенко Н.И., Баранова А.М Малярия в Москве (2006-2007 гг.): мониторинг ситуации и оценка противомалярийных мероприятий // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2009. №1. С. 11-15.

15. Иванов Т. Н. Природные и социальные условия,способствующие восстановлению местной передачи трехдневной малярии в Московском регионе // Здоровье населения и среда обитания. 2005. №10. С. 30-33.

16. Исаева Т. М. Динамика антител к вирусу Эпштейна-Барр как дополнительный диагностический и прогностический критерий при опухолях головы и шеи: автореф. дис. . канд. мед. 14.00.14. Наук: Томск, 1990 20 с.

17. Каримов С. С. Современная маляриологическая ситуация в Таджикистане // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2008. №1. С. 33-36.

18. Киселев Ф. JI. Вирус-ассоциированные опухоли человека // Биохимия. 2000. №65. С. 68-77.

19. Кожевникова Г.М. Иванова Т.Н. Токмалаев А.К. Ходжаева Н.М. Диагностика и лечение малярии.// Терапевтический архив . 2007. №11. С. 1720.

20.Кожевникова Г.М. Токмалаев А.К. Малярия: трудности диагностики и лечения.// Медицина критических состояний . 2009. №2. С. 4-6.

21. Колпаков А. Д. Количественное распределение личинок малярийных комаров в различных типах мест обитания. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. №2. С. 33-35.

22.Коровина H.A. Горяйнова А.Н. Ваджих Абдулла Фара Современные особенности течения малярии, вызванной Plasmodiumfalciparum, у детей. // Педиатрия . 2006. №6. С. 109-113.

23.Ларина С.Н.,Сахарова Т.В., Чебышев Н.В. Генетическая устойчивость к малярии // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2009. №2. С. 10-14.

24.Махнев М. В. Малярия у военнослужащих :современные клинико-эпидемиологические и энтомологические аспекты // Воен.-мед.журн. 2006. №21. С. 31-59.

25.Миронова В. А. Тенденции изменения климата и малярия в Московском регионе // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2006. №4. С. 20-25.

26. Павленко О.А. Роль вируса Эпштейна-Барра в патологии верхних отделов пищеварительного тракта у детей // Дальневосточный медицинский журнал. 2009. №3. С. 53-55.

27. Паразитологическая диагностика малярии: Методические указания / Рабинович СА, Кукина ИВ, Максаковская ЕВ, Морозов EH., М.: Федеральный центр госэпиднадзора Минздрава России, 2001. 36 с.

28. Перевозкин В.П., Гордеев М.И. и соавт. Популяционно-видовая структура комаров рода Anopheles долины верхнего Рейна, ФРГ // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. №2. С. 27-33.

29. Попов А.Ф., Никиоров Н.Д., Иванис В.А. и др Диагностика тропической малярии с помощью экспресс-методов // Клиническая лабораторная диагностика . 2004. №1. С. 46-48.

30. Попов А.Ф., Токмалаев А.К., Никифоров Н.Д. Малярия. М.: Издателство Российского университета дружбы народов, 2004. 271 с.

31. Попова Н.И. Попов А.Ф. Чирков В.П. Камара Ф. Лекарственно-устойчивая тропическая малярия в Гвинейской республике (западная Африка)// Медицинская паразитология и паразитарные болезни . 2003. №2. С. 41-43.

32. Попова Н.И. Попов А.Ф. Чирков В.П. Мороков B.C. Лама Н. Эффективность мефлокина, галофантрина и коартема при лечении тропической малярии.// Медицинская паразитология и паразитарные болезни . 2002. № 1.С. 28-29.

33. Рабинович С.А. Дао Л.Д. Ха Н.В. Применение NestednLJP для дифференциальной диагностики рецидива falciparum- малярии при лекарственной устойчивости или повторных проявлениях в результате инфекции.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины . 2002.. №10. С. 440-442.

34. Рабинович С.А., Иванова Т.Н., Токмалаев А.К., Половинкина H.A., Голуб В.П., Ерохина Ю.В., Нгуен Ван Ха.Малярия в мегаполисе: современные аспекты диагностики, лечения и профилактики // Вестник Российского Университета Дружбы Народов. 2007. №2. С. 53-57.

35. Рабинович С.А. и др. Эффективность экспресс-теста КАТ-P. F. (" КАТ Medical" ЮАР) среди популяций лекарственно-устойчивых паразитов // Медицинская паразитология и паразитарные болезни . 2006. №2. С. 10-12.

36. Рафиев Х.К., Гаибов А.Г., Базарова Л.М.и др Миграция населения и заболеваемость малярией в Республике Таджикистан // Эпидемиология и инфекционные болезни : Научно-практический журнал. 2004. №3. С. 19-21.

37. Севостьянова Н. В. Особенности и механизмы экспрессии молекулярно-биологических маркеров опухолевого роста при раке легкого: дис. . докт. мед. Наук 14.00.14. Томск, 2004. С. 18-21.

38. Сергиев В.П., Баранова A.M.,Соколова М.И. Малярия: актуальные проблемы для стран Европейского региона Всемирной Организации Здравоохранения // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2009. №1. С. 3-8.

39. Усенбаева Н.Т., Баранова A.M., Гордеев М.И., Шайкевич Е.В., Горячева И.И. Изучение популяции возбудителя трехдневной малярии и возможности ее укоренения на территории Кыргызстана // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. №1. С. 36-40.

40. Фролов H.A., Суханов Ю.С., Асади-Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) // Москва. 1996. С. 33.

41. Хусаинова Н.Г. и соавт. Мониторинг ситуации и оценка противомалярийных мероприятий в Республике Узбекистан // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2010. №1. С. 33-36.

42. Чебышев Н.В., Далин М.В., Гусев В.К., Гузикова Г.С., Карпенко Л.П., Демченко А.Н. Атлас по зоопаразитологии. 3-е изд. М.: Издательство АОЗТ "Интерхим", 2004. 173 с.

43. Шилова О. Ю. Ассоциация рака гортани с онкогенными вирусами папилломы человека и Эпштейна-Барр: дис. канд. биол. наук: 14.00.16, Новосибирск, 2008. 163 с.

44. Ярилин А.А. Иммунология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 749 с.

45.AdamsJ.M., HarrisA.W., PinkertC.A., atall. The c-myc oncogen driven by immunoglobuline enhancer induces lymphoid malignancy in transgenic mice // Nature. 1985. №318. C. 533-538.

46. Arcinas M., Heckman C.A., Mehew J.W. et al. Molecular Mechanisms of Transcriptional Control of Bcl-2 and c-myc in Follicular and Transformed Lymphoma // Cancer Research. 2001. №61. C. 5202-5206.

47. Baruch D.I., Pasloske B.L., Singh H.B., Bi X., Ma X.C., Feldman M., Taraschi T.F., Howard R.J. Cloning the P. falciparum gene encoding PfEMPl, a malarial variant antigen and adherence receptor on the surface of parasitized human erythrocytes // Cell. 1995. №1. C. 77-87.

48. Basco L.K., Ringwald P. Molecular epidemiology of malaria in Yaounde, Cameroon. Analysis of recrudesce and reinfection in patients with uncomplicated falciparum malaria // Am.J. Trop.Med.Hyg. 2000.№63.C. 215-221.

49. Bassing C.H., Swat W., Alt E. The mechanism and regulation of chromosomal V(D)J recombination. // Cell. 2002. №109. C. 45-55.

50. Baxter J., Sauer S., Peters A., John R., Williams R., Caparros M.L., Arney K, Otte A., Jenuwein T., Merkenschlager M., Fisher A.G. Histone hypomethylation is an indicator of epigenetic plasticity in quiescent lymphocytes. // EMBO J. . 2004. №23. C. 4462-4472.

51. Berger C at al. Dynamycs of Epstein-Barr virus DNA levels in serum during EBV-association disease //J.Med.Viral. 2001. №64. C. 505.

52. Brockman A.,et All Amplifications of genetic markers to the identification of recrudescent P.falciparum infection on the northwestern border of Tailand // Am. J. Trop.Med.Hyg. 1999.№60.C. 14-21.

53. Brown AE, Kain KC, Pipithkul J, Webster FIK. Demonstration by the polymerase chain reaction of mixed Plasmodium falciparum and P. vivax infections undetected by conventional microscopy. // Trans R Soc Trop Med Hyg.. 1992. №6. C. 9-12.

54. Andrade B.B., Reis-Filho A., Barros M.B., Souza-Neto M.S., Nogueira L.N., Fukutani K.F., Camargo E.P., Luis M.A. Camargo, Barral A., Duarte A., Barral-Netto M.. Towards a precise test for malaria diagnosis in the Brazilian Amazon: comparison among field microscopy, a rapid diagnostic test, Nested PCR, and a computational expert system based on artificial neural networks // Malaria Journal .2010. №9. C. 117.

55. Butenko Z. A., Phylchenkov A. A. Modern concepts of viral oncogenesis: fundamental and applyied aspects // Experemental Oncology. 2000. №22. C. 239245.

56. Burkitt D. A Sarcoma involving the jaw in Afrikan children //Br. J. Surg., 1958. №46.0.218-223

57. Calame K.L., Lin K.L.,Tunyaplin C. Regulatory mechanisms that determine the development and function of plasma cells. // Annu. Rev. Immunol. . 2003. №21. C. 205-230.

58. Carville A., Mansfield K.G. Comparative pathobiology of macaque lymphocryptoviruses // Сотр. Med. . 2008. №58. C. 57-67.

59. Chaiyaroj S.C. et all. Analis of mefloquine resistance and amplification of pfmdr 1 in multidrug - resistant P.falciparum isolate from Tailand // Am.J. Trop.Med.Hyg. 1999.№61.C. 780-783.

60. Charles A., Janeway Jr., Paul Travers, Mark Walport,Mark J Shlomchik Immunobiology.. 5th edition.H3fl. New York: Garland Science, 2001. 732 c.

61. Chebab F.F. Molecular diagnostics: present and future // Human Mutations. 1993. №5. C. 321-330.

62. Chene A., Donati D.,Oremc J., Bjorkmanb A., Mbidded E.R., Kirondee F., Wahlgrena M.,Bejarano M.T. Endemic Burkitt's lymphoma as a polymicrobial disease: New insights on the interaction between Plasmodium falciparum and Epstein-Barr virus // Seminars in Cancer Biology . №19.C. 411-420.

63. Chene A, Donati D, Ortlieb J., Guerreiro-Cacais A, Levitsky V., Qijun C, Kerstin I.F, Orem J., Kironde F., Wahlgren M., Maria Teresa Bejarano. A Molecular link between Malaria and Epstein-Barr virus Reactivation // Plos Patogens. 2007. №June. C. 826-834.

64. Chen Q., Heddini A., Barragan A., Fernandez V., Pearce S.F., Wahlgren M. The semiconserved head structure of Plasmodium falciparum erythrocyte membrane protein 1 mediates binding to multiple independent host receptors // J Exp Med.. .2000. №l.C. 1-10.

65. Claudia F. Golenda, JUN LI, Ronald R. Continuous in vitro propagation of the malaria parasite Plasmodium vivax // Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 1997. №94. C. 6786-6791.

66. Cole-Tobian J.L., Zimmerman P.A., King C.L. High-throughput identification of the predominant malaria parasite clone in complex blood stage infections using a multi-SNP molecular haplotyping assay. // Am J Trop Med Hyg. . 2007 .№1.C. 12-19.

67. Collado M., Blasco M.A., Serrano M. Cellular senescence in cancer and aging // Cell. 2007. №130. C. 223-233.

68. Croce C.M., Thierfelder W., Erikson J., Nishikura et al. Transcriptional activation of an unrearranged and untranslocated c-myc oncogene by translocation of a C lambda locus in Burkitt. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983 №22. C.6922-6926.

69. Dalton W.S., Bergsagel P.L., Kuehl W.M., Anderson K.C. Multiple myeloma. //Hematology. 2001. C. 157-177.

70. Danis K.,Baka A.,Lenglet A. et al.// Euro.Surveillance.2011, No.42.vol. 16

71. De Jong D, Balague Ponz O. The molecular background of aggressive B cell lymphomas as a basis for targeted therapy // NatureJ Pathol.. 2011. №223. C. 274282.

72. Della-Ferra R., Bregni M.. Erikson J. at all. Human c-myc oncogen is located on the region of chromosome 8 that is translocated in Burcitt Limphoma cells // Proc. Natl.. 1982. №79. C. 7824-7827.

73. Derge J.G., Martos L.M., Tagamets M.A., Chang S.Y., Chakrabarty M. Identification of a critical period during the S phase for activation of the Epstein -Barr virus by 5-iododeoxyuridine // Nat New Biol. 1973. №244.C. 214-217.

74. De T.G. Epidemiologic of Burkitt's lymphoma: evidance for a casual assocition with EBV.// Epidemiologic Reviews, 1979.№ 36. C.692-698

75. Di Renzo L., Altiok A., Klein G., Klein E. Endogenous TGF-beta contributes to the induction of the EBV lytic cycle in two Burkitt lymphoma cell lines // Int J Cancer. 1994. №57. C. 914-919.

76. Donati D., Espmark E., Kironde F, Edwards R., Mbidde K, Kamya M., Lundkvist A.,Wahlgren M.,Bejarano M.T., Kerstin I. Falk Clearence of circulating Epstein-Barr virus DNA in children with acute malaria after antimalaria treatment // The Journal of Infection Diseases . 2006. №193. C. 971-977.

77. Donati D., Mok B., Chene A., Xu H., Thangarajh M., et al. Increased B cell survival and preferential activation of the memory compartment by a malaria polyclonal B cell activator // J Immunol. 2006. №177. C. 3035-3044.

78. Donati D., Zhang L.P., Chen Q., Chene A., Flick K., et al. Identification of a polyclonal B-cell activator in Plasmodium falciparum // Infect Immun. 2004. №72.C. 5412-5418.

79. Dworkin J, Janvier M, Treaba D, Gardner A. Trouble from the tropics: challenges in managing malaria in rhode island. // R .1. Med. J. . 2013. № 1. C. 4042.

80. Epstein M.A., Achong B.G., Barr Y.M. Virus particles in cultured lymphblasts from Burkitt's Lymphoma // Lancet. 1964. №1. C. 702-703.

81. Erikson J., Nishikura K., ar-Rushdi A., et al. Translocation of an immunoglobulin kappa locus to a region 3' of an unrearranged c-myc oncogene enhances c-myc transcription // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 1983. №24. C. 7581-7585.

82. Faggioni A, Zompetta C, Grimaldi S, Barile G, Frati L, et al. Calcium modulation activates Epstein-Barr virus genome in latently infected cells // Science . 1986. №232. C. 1554-1556.

83. Fernandez V., Hommel M., Chen Q., Hagblom P., Wahlgren M. Small, clonally variant antigens expressed on the surface of the Plasmodium falciparum-infected erythrocyte are encoded by the rif gene family and are the target of human immune responses // J Exp Med.. 1999. №10. C. 1339-1404.

84. Fries K.L., Miller W.E., Traub N.R. Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 blocks p53-mediated apoptosis through the induction of the A20 gene // J. Virol. 1996. №70. C. 8653-8659.

85. Gostissa M., Yan C.T., Bianco J.M., Cogné M., Pinaud E., Alt F.W. Longrange oncogenic activation of Igh-c-myc translocations by the Igh 3' regulatory region // Nature. 2009. №10. C. 803-807.

86. Graham M., Adams J.M. Chromosome 8 breakpoint far 3' of the c-myc oncogene in a Burkitt's lymphoma 2;8 variant translocation is equivalent to the murine pvt-1 locus // EMBO J. . 1986. №11. C. 2845-2851.

87. Guidos C.J., Williams C.J., Grandal I., Knowles G., Huang M.T., Danska J.S. V(D)J recombination activates a p53-dependent DNA damage checkpoint in scid lymphocyte precursors // Genes Dev.. 1996. №10. C. 2038-2054.

88. Harris N., Jaffe E., Diebold J. et al. World Health Organisation Classification of Neoplastic Disease of the Hematopoetic and Limphoid Tissues: Report of the

Clinical Advisory Committee Meeting - Airlie House, Virginia // J. Clin. Oncol.. 1999. №17. C. 3835-3849.

89. Harris N., Jaffe E, Stein H. et al. A revised European-American classification of lymphoid neoplasms: a proposal from the International Lymphoma Study Group // Blood.. 1994. №84. C. 1361-1392.

90. Henderson S, Rowe M, Gregory C. Et al. Induction of bcl-2 expression by Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 protects infected B cells from programmed cell death // Cell. 1991. №7. C. 1107-1115.

91. Henry A. Erlich PCR technologies: Principles and Applications of DNA amplification // M Stockton Press. 1989. C. 264.

92. Helmby H.,Cavelier L., Pettersson U., Wahlgren M. Plasmodium falciparum-infected erythrocytes express unique strain-specific antigens on their surface // Infect. Immun.. 1993. №61. C. 284-288.

93. Jankovic M., Casellas R., Yannoutsos N., Wardemann H., Nussenzweig M.C. RAGs and regulation of autoantibodies. // Annu. Rev. Immunol.. 2004. № 22. C. 485-501.

94. Jankovic M., Nussenzweig A., Nussenzweig M.C. Antigen receptor diversification and chromosome translocations // Nature immunology. 2007. №8. C. 801-808.

95. Jankovic M., Robbiani D.F., Dorsett Y., Eisenreich T., Xu Y., Tarakhovsky A., Nussenzweig A., Nussenzweig M.C. Nussenzweig MC. Role of the translocation partner in protection against AID-dependent chromosomal translocations. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2011. №107. C. 187-192.

f r

96. Kezia K.G. Scopell, Cor J.F. Fontes, Alvaro C Nunes, Maria F Horta, Erika M Braga Low sensitivity of Nested PCR using Plasmodium DNA extracted from stained thick blood smears: an epidemiological retrospective study among subjects with low parasitaemia in an endemic area of the Brazilian Amazon region // Malaria Journal. 2004. №10. C. 3-8.

97. Kho W.G., Chung J.Y., Hwang U.W., Chun J.H., Park Y.H., Chung W.C. Analysis of polymorphic region of GAM-1 gene in Plasmodium vivax Korean isolates. // Korean J Parasitol.. 2001. №4. C. 313-318.

98. Krangel M.S. Gene segments selection in V(D)J recombination: accessibility and beyond // Nature Immunology. 2003. №7. C. 624-630.

99. Kramer M.H.H., Hermans J., Wijburg E., et al. Clinical Relevance of BCL2, BCL6, and MYC Rearrangements in Diffuse Large B-Cell Lymphoma // Blood. 1998. №9. C. 3152-3162.

100. Kraus M., Alimzhanov M.B., Rajewsky N., Rajewsky K. Survival of resting mature B lymphocytes depends on BCR signaling via the Igalfa/beta heterodimer. // Cell. 2004. №111. C. 787-800.

101. Kumar-Sinha C., Tomlins S.A., Chinnaiyan A.M. Recurrent gene fusions in prostate cancer // Nature reviews. 2008. №8. C. 497-511.

102. Kuppers R. Mechanisms of B-cell lymphoma pathogenesis // Nature reviews. 2005. №5. C. 251-262.

103. Laichalk L.L., Thorley-Lawson D.A. Terminal differentiation into plasma cells initiates the replicative cycle of Epstein-Barr virus in vivo // J Virol. 2005. №79. C. 1296-1307.

104. Lam K.M., Syed N., Whittle H., Crawford D.H. Circulating Epstein-Barr virus-carrying B cells in acute malaria // Lancet. 1991. №337. C. 876-878.

105. Lamikanra A.A., Dobaño C., Jiménez A., Nhabomba A., Tsang H.P., Guinovart C., Manaca M.N., Quinto L., Aguilar R., Cisteró P., Alonso P.L., Roberts D.J., Mayor A. A direct comparison of real time PCR on plasma and blood to detect Plasmodium falciparum infection in children. // Malar J. . 2012. №15. C. 11-20.

106. Lima N.F., Bastos M.S., Ferreira M.U. Plasmodium vivax: reverse transcriptase real-time PCR for gametocyte detection and quantitation in clinical samples. // Exp Parasitol. 2012 .№132.C. 348-354.

107. Loeb L., Loeb K., Anderson J. Multiple mutation and cancer // Proc. Natl. Acad. Sci.. 2003. №3. C. 776-781.

108. Magrath I. The pathogenesis of Burkitt's lymphoma. // Adv. Cancer Res.. 1990. №55. C. 133-270.

109. Manolov G., Manolova Y., Klein G. et al. Alternative involvement of two cytogenetically distinguishable breakpoints on chromosome 8 in Burkitt's lymphoma associated translocations // Cancer Genet Cytogenet. . 1986. №2. C. 95-99.

110. Marcu K.B., Bossone S.A., Patel A.J. myc function and regulation // Annu RevBiochem.. 1992. №61. C. 809-860.

111. Mc. Cutchan T.F. The ribosomal genes of Plasmodium // Int.Rev.Cytol. 1986. №99. C. 295-309.

112. Moormann A.M., Chelimo K., Sumba O.P., Lutzke M.L., Ploutz-Snyder R., et al. Exposure to holoendemic malaria results in elevated Epstein-Barr virus loads in children // J Infect Dis . 2005. №191. C. 1233-1238.

113. Nateghpour M., Ayazian Mavi S. , Keshavarzl H., Rezaeil S., Abedi F. , Edrissian G.H., Raeisi A. Molecular Monitoring of Plasmodium vivax Infection after Radical Treatment in Southeastern Iran // Iranian J Arthropod-Borne Dis. 2010. №1.C. 24-30.

114. Nicolas S., William O. R., Lucy O., Isabelle J., Sandra I., Linda D., Sophy C., Sean H., Monidarin C., Duong S., François-Xavier B., Frédéric A., Christophe R. Sub-microscopic malaria cases and mixed malaria infection in a remote area of high malaria endemicity in Rattanakiri province, Cambodia: implication for malaria elimination // Malaria Journal .2010. №9. C. 108.

115. Niedobitek G. at All. Epstein-Barr virus persistence and virus-associated tumours // Lancet. 1994. №343.C. 333-335.

116. Nussenzweig A. Michel C. Origin of Chromasomal Traslocations in Limphoid Cancer. // Cell. 2010. № 141., C.2

117. Omer S, Khalil E, Ali H. Submicroscopic and multiple Plasmodium falciparum infections in pregnant Sudanese women. // N Am J Med Sci. 2011. №3.C. 137-141.

118. Parkin D.M., Pisani P.,Munoz N., Ferlay J. The global health burden of infection associated cancer // Cancer Surv.. 1999. №3. C. 5-33.

119. Payne D. Use and limitations of light microscopy for diagnosing malaria at the primary health care level // Bull World Health Organ. 1988. №5. C. 621-626.

120. Preudhomme C., Dervite I., Wattel E., et al. Clinical significance of p53 mutations in newly diagnosed Burkitt's lymphoma and acute lymphoblastic leukemia: a report of 48 cases // J Clin Oncol. 1995. №13. C. 812-820.

121. Raeisi A, Gouya MM, Nadim A, Ranjbar M, Hasanzehi A, Fallahnezhad M, Sakeni M, Safari R, Saffari M, Mashyekhi M, Ahmadi Kahnali A, Mirkhani V, Almasian E, Faraji L, Paktinat Jalali B, Nikpour F. Determination of Malaria Epidemiological Status in Iran's Malarious Areas as Baseline Information for Implementation of Malaria Elimination Program in Iran. // Iran J Public Health.. 2013 Mar . №42(3). C. 326-333.

122. Rajewsky K. Clonal selection and learning in the antibody system. // Nature. 1996. №381. C. 751-758.

123. Ramiro A.R., Jankovic M., Callen E., Difilippantonio S., Chen H.T., McBride K.M., Eisenreich T.R., Chen J., Dickins R.A., Lowe S.W., et al. Role of genomic instability and p53 in AID-induced c-myc-Igh translocations // Nature. 2006. №440. C. 105-109.

124. Rasti N., Falk K.I., Donati D., Gyan B.A., Goka B.Q., et al. Circulating Epstein-Barr virus in children living in malaria-endemic areas // Scand J Immunol. 2005. №61. C. 461-465.

- 125. Rasti N., Wahlgren M., Chen Q. Molecular aspects of malaria pathogenesis // FEMS Immunol Med Microbiol. 2004. №1. C. 9-26.

126. Rebbeck T. R. Molecular epidemiology of the human glutathione S-transferase genotypes GSTM1 and GSTT1 in cancer susceptibility // Cancer Epidemiol. Biomark.Prev.. 1997. №6. C. 733-743.

127. Reiter A., Schrappe M., Tiemann M., et al. Improved treatment results in childhood B-cell neoplasms with tailored intensification of therapy: a report of the Berlin-Frankfurt-Munster Group Trial NHL-BFM-90. // Blood. 1999. №10. C. 3294-3306.

128. Rickinson A.B., Kieff E. Epstein-Barr virus. Field's virology.4th edition.H3fl. Philadelphia: Lippincott-Raven. pp. 2575-2627.: Lippincott-Raven, 2001. 25752627 c.

129. Robertson J., Ross A.M.At all DNA in forensic science -theory, techniques and applications // Elis horwood series in forensic science.. 1990. C. 195.

130. Rodulfo H., De Donato M., Mora R., Gonzalez L., Contreras C.E. Comparison of the diagnosis of malaria by microscopy, immunochromatography and PCR in endemic areas of Venezuela // Brazilian Journal of Medical and Biological Research . 2007 .№40.C. 535-543.

131. Roper C, Elhassan I.M., Hviid L., Giha H., Richardson W., Babiker H., Satti G.M., Theander T.G., Arnot D.E. Detection of very low level Plasmodium falciparum infections using the nested polymerase chain reaction and a reassessment of the epidemiology of unstable malaria in Sudan. // Am J Trop Med Hyg. 1996 .№4.C. 325-331.

132. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Scharf S.G., Higuchi R., Horn G.T., Mullis K.B., Erlich H.A. Primer-Directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase. // Science . 1988 .№239.C. 487—491.

133. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A., Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. // Science . 1985 .№20. C. 1350-1354.

134. Scian M. J. Modulation of gene expression by tumour-derived p53 mutants // Cancer Res.. 2004. №20. C. 7447-7454.

135. Schlissel M.S., Durum S.D., Muegge K. The interleukin 7 receptor is required for T cell receptor y locus accessibility to the V(D)J recombinase. // J. Exp. Med.. 2000. №191. C. 1045-1050.

136. Shokoples S., Mukhi S.N., Scott A.N., Yanow S.K. Impact of routine realtime PCR testing of imported malaria over four years of implementation in a clinical laboratory. // J Clin Microbiol.. 2013. №3. C. 195-213.

137. Sedigheh Z., Sohaila T. N., Ahmad Z. Navid D. D. Detection of malaria parasites by Nested PCR in south-eastern, Iran: Evidence of highly mixed infections in Chahbahar district // Malaria Journal. 2002. №10. C. 1-2.

138. Sedigheh Z., Qutbuddin K., Faezeh G., Ahmad R., Waqar B., Najibullah S., Mandana A., Muhammad S. M., Saber G, Masoud S., Honda A., Ghasem Z., Navid D. D. Detection of mixed Plasmodium falciparum & P. vivax infections by Nested PCR in Pakistan, Iran & Afghanistan // Indian Journal of Medical Research .2010. №July. C. 31-35.

139. Sethabutr O, Brown AE, Panyim S, Kain KC, Webster HK, Echeverria P. Detection of Plasmodium falciparum by polymerase chain reaction in a field study. //J Infect Dis.. 1992. №1. C. 145-148.

140. Showe L.C., Ballantine M., Nishikura K., et al. Cloning and sequencing of a c-myc oncogene in a Burkitt's lymphoma cell line that is translocated to a germ line alpha switch region // Mol. Cell. Biol.. 1985. №3. C. 501-509.

141. Showe L.C., Moore R.C., Erikson J., Croce C.M. MYC oncogene involved in a t(8;22) chromosome translocation is not altered in its putative regulatory regions // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 1987. №9. C. 2824-2828.

142. Singh B., Cox-Singh J., Miller A.O., Abdullah M.S., Snounou G., Rahman H.A. Detection of malaria in Malaysia by nested polymerase chain reaction amplification of dried blood spots on filter papers. // Trans R Soc Trop Med Hyg. . 1996. №5. C. 519-521.

143. Skok, J. A. et al. Nonequivalent nuclear location of immunoglobulin alleles in B lymphocytes //Nature Immunol. 2001. № 2. C. 848-854.

144. Slack G.W., Gascoyne R.D. MYC and aggressive B-cell lymphomas. // Adv Anat Pathol.. 2011. №18. C. 219-228.

145. Snewin V.A., Khouri E., Wattavidanage J., Perera L., Premawansa S., Mendis K.N., David P.H. A new polymorphic marker for PCR typing of Plasmodium vivax parasites. // Mol BiochemParasitol. 1995. №71. C. 135-138.

146. Snounou G., Viriyakosol S., Zhu X.P., Jarra W., Pinheiro L., do Rosario V.E., Thaithong S., Brown K.N. High sensitivity of detection of human malaria parasites by the use of nested polymerase chain reaction // Mol Biochem Parasitol. . 1993. №2. C. 315-320.

147. Stanhope-Baker P., Hudson KM., Shaffer A.L., Constantinescu A., and Schlissel M.S. Cell type-specific chromatin structure determines the targeting of V(D)J recombinase activity in vitro. // Cell. 1996. №85. C. 887-897.

148. Stephanie P. Johnston, Norman J. Pieniazek, Maniphet V. Xayavong,Susan B. .Slemenda, Patricia P. Wilkins, and Alexandre J. da Silva. PCR as a Confirmatory Technique for Laboratory Diagnosis of Malaria // J Clin Microbiol. 2006. №3. C. 1087-1089.

149. Surendra K. P., Anju V., Tridibes A., Rajpal S. Y. Ashiwy K., Alex E., Manoj K. D., Neeru S., Surya K. S., Moshahid A. R., Aditya P. D. Hema J. Allelic dimorphism of Plasmodium vivax gam-1 in the Indian subcontinent // Malaria Journal. 2006. №5. C. 90.

150. Tiek Ying Lau, Wan Fen Joveen-Neoh, Ka Lung Chong. Molecular detection of plasmodium knowlesi in the Interior Division of Sabah, Malasian,Borneo. // 2011 International Conference on Food Engineering and Biotechnology . 2011. №9.

151. Thompson M.P., Kurzrock R. Epstein-Barr Virus and pancer II Clin Cancer Res. 2004. №10. C. 803-821.

152. Tomita N. BCL2 and MYC dual-hit lymphoma/leukemia. // J Clin Exp Hematop.. 2011. №51. C. 7-12.

153. Wang C.X., Li X.Y., Xiao H. Epstein-Barr virus-encoded latent membrane protein 1 activates NF-kB via a mechanism involving TRAF2 in nasopharyngeal carcinoma // Ai Zheng. 2000. №19. C. 517-520.

154. Wing Y.A., Horsman D.E., et al. Mantle cell lymphoma, 8q24 translocations // Haematologica. 2000. №11. C. 1225-1227.

155. Whittle H.C., Brown J., Marsh K., et al. T-cell control of Epstein-Barr virusinfected B cells is lost during P. falciparum malaria // Nature . 1984. №312. C. 449-450.

156.Yancopoulos G.D.Alt F.W. Developmentally controlled and tissue-specific expression of unrearranged VH gene segments. // Cell. 1985. № 40 .C. 271-278.

157. Zur Hausen H., O'Neill F.J., Freese U.K., Hecker E. Persisting oncogenic herpesvirus induced by the tumour promotor TPA. //Nature . 1978. №272. C. 373375.

158. World Malaria Report 2011. WHO, Geneva.248 p.