Молекулярно-генетическая диагностика и мониторинг терапии хронического миелоидного лейкоза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Вельченко, Мария Владимировна

• Вельченко, Мария Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Вельченко, Мария Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Молекулярно-генетические механизмы патогенеза хронического миелоидного лейкоза.

1.2. Молекулярно-генетические основы терапии хронического миелоидного лейкоза ингибиторами тирозинкиназ.

1.3. Молекулярно-генетическая диагностика и мониторинг эффективности терапии хронического миелоидного лейкоза ингибиторами тирозинкиназ

1.4. Молекулярно-генетические механизмы резистентности к терапии хронического миелоидного лейкоза ингибиторами тирозинкиназ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика пациентов.

2.2. Стандартное цитогенетическое исследование клеток костного мозга.

2.3. Количественная оценка экспрессии химерного онкогена BCR-ABL типа р210.

2.4. Определение первичной последовательности гена

BCR-ABL методом прямого ДНК секвенирования.

2.5. Статистическая обработка данных.

Глава 3. Молекулярно-генетические исследования минимальной остаточной болезни у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом.

Глава 4. Анализ рефрактерности у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом.

Глава 5. Анализ рефрактерности у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом с мутациями гена BCR-ABL и без мутаций.

Глава 6. Анализ мутаций гена BCR-ABL у резистентных к терапии иматинибом пациентов с хроническим миелоидным лейкозом

Глава 7. Сравнительный анализ определения первичной последовательности ДНК и кДНК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическая диагностика и мониторинг терапии хронического миелоидного лейкоза»

Актуальность исследования

Хронический миелоидный лейкоз (XMJI) - клональное миелопролиферативное заболевание, для которого характерна специфическая приобретенная генетическая аномалия — «филадельфийская хромосома» (Ph-хромосома). Ph-хромосома возникает в результате реципрокной транслокации между 9 и 22 хромосомами, образуя химерный онкоген BCR-ABL. На момент клинической и гематологической манифестации хронического миелоидного лейкоза обычно в костном мозге при цитогенетическом исследовании выявляется 95-100% Ph-положительных клеток (Kantarjian Н., Talpaz М., Giles F. et al., 2006; Branford S., 2007; Goldman J. M., 2007).

Заболеваемость хроническим миелоидным лейкозом составляет 1-1,5 случая на 100 000 населения в год (15%-20% от всех случаев гемобластозов у взрослых) (Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А. и соавт., 2005). Высокая социальная значимость хронического миелоидного лейкоза обусловлена преимущественным поражением людей трудоспособного возраста: пик заболеваемости наблюдается в 30-50 лет.

Современная терапия XMJI препаратом иматиниба мезилат, относящегося к группе противоопухолевых ингибиторов BCR-ABL тирозинкиназ, позволяет добиться значительного подавления опухолевого клона клеток и восстановить нормальное кроветворение, что приводит к значительному увеличению бессобытийной выживаемости больных. Полный цитогенетический ответ, при котором в гемопоэтических клетках не выявляется Ph-хромосома, является стандартным критерием эффективности терапии больных хроническим миелоидным лейкозом, определяющим благоприятный прогноз заболевания (Туркина А.Г., Хорошко Н.Д.,

Дружкова Г.А. и соавт., 2005; Зарицкий А.Ю., Ломана Е.Г., Виноградова О.Ю. и соавт., 2007; Goldman J. М., 2007).

Несмотря на впечатляющие результаты терапии хронического миелоидного лейкоза иматинибом, у 15-20% пациентов отсутствует ответ на это лечение. Эту группу пациентов определяют как группу рефрактерных к терапии иматинибом пациентов (Shah N.P., 2007). Помимо этого, примерно 4% пациентов, получающих лечение иматинибом, ежегодно "теряют" ответ на эту терапию, что закономерно приводит к появлению клинико-гематологических признаков прогрессии XMJI. В настоящее время считают, что основной причиной потери ответа в 42% - 90% случаев являются мутации киназного домена гена BCR-ABL (Baccarani М., Saglio G., Goldman J., Hochhaus A., et al., 2006). Роль мутаций в развитии вторичной резистентности хорошо изучена, в то время как роль мутаций в развитии рефрактерности требует уточнения. Недостаточно изучена взаимосвязь между выявляемыми у больных хроническим миелоидным лейкозом мутациями и развитием рефрактерности к терапии.

Данные молекулярно-генетических исследований у больных хроническим миелоидным лейкозом, достигших цитогенетической ремиссии, показывают, что, несмотря на получение полного цитогенетического ответа, никогда не удается добиться полной эррадикации опухолевого клона клеток (Туркина А.Г., Челышева Е.Ю., 2004; Мисюрин А.В., Аксенова Е.В., Крутов А.А. и соавт., 2007). При этом у большинства больных сохраняется многолетняя клинико-гематологическая и цитогенетическая ремиссия заболевания, а у некоторых - развивается рецидив патологического процесса. Это позволяет предположить, что остаточная болезнь, определяемая по количеству BCR-ABL позитивных клеток, не является единственным прогностическим фактором, определяющим вероятность развития рецидива хронического миелоидного лейкоза и вторичной резистентности к терапии иматинибом. Вероятно, только сочетание определенного уровня опухолевых клеток с характером приобретенных мутаций гена BCR-ABL является решающим прогностическим фактором, определяющим эффективность терапии иматинибом.

Цель исследования

Оценить клинико-прогностическую значимость молекулярно-генетических исследований в диагностике хронического миелоидного лейкоза и детекции минимальной остаточной болезни, а так же — в анализе характера мутаций киназного домена гена BCR-ABL у больных хроническим миелоидным лейкозом, получающих лечение иматинибом.

Задачи исследования

1. Оценить информативность метода количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени в диагностике и мониторинге эффективности терапии хронического миелоидного лейкоза иматинибом.

2. Оценить достоверность исследования минимальной остаточной болезни при терапии хронического миелоидного лейкоза иматинибом по сравнению с цитогенетическим исследованием.

3. Оценить информативность различных способов выражения результатов количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени по отношению к результатам цитогенетического исследования.

4. Определить уровень экспрессии гена BCR-ABL характерный для развития рефрактерности и для оптимального ответа на проводимую терапию иматинибом.

5. Определить факторы, ассоциирующиеся с развитием рефрактерности к терапии иматинибом у больных хроническим миелоидным лейкозом.

6. Оценить вклад мутаций киназного домена гена BCR-ABL в формирование первичной резистентности у пациентов с хроническим миелолейкозом к терапии иматинибом.

Научная новизна исследования

Впервые на основе данных количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени и данных цитогенетического исследования костного мозга произведена характеристика минимальной остаточной болезни у больных хроническим миелоидным лейкозом, проживающих на юге России.

Сопоставлены различные способы выражения результатов количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени и данные цитогенетических исследований костного мозга, оценена их клинико-прогностическая значимость.

Определены факторы, ассоциирующиеся с развитием рефрактерности к терапии иматинибом у больных хроническим миелоидным лейкозом.

Дана характеристика спектра и частоты мутаций гена BCR-ABL у рефрактерных к терапии иматинибом пациентов.

Практическая значимость

Установлено, что определение уровня экспрессии гена BCR-ABL значительно повышает достоверность оценки минимальной остаточной болезни при терапии хронического миелоидного лейкоза иматинибом. На основании сопоставления результатов цитогенетического исследования и метода количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени установлен прогностически значимый уровень экспрессии гена BCR-ABL для развития рефрактерности и уровень экспрессии, ассоциированный с успешным ответом на проводимую терапию хронического миелоидного лейкоза. Установлен наиболее информативный способ выражения результатов количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени. Определена значимость мутационного анализа гена BCR-ABL в оптимизации и индивидуализации терапии хронического миелоидного лейкоза.

Основное положение диссертации, выносимое на защиту

Целесообразность молекулярно-генетической диагностики и мониторинга терапии хронического миелоидного лейкоза иматинибом.

Апробация материалов исследования

Диссертация апробирована на совместной конференции кафедры гематологии и трансфузиологии ФПК и JLJLL1C РостГМУ и кафедры патологической анатомии, судебной медицины и генетики ФПК и ППС РостГМУ 5 мая 2009 года.

Основные положения диссертации доложены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием

Высокотехнологичные методы диагностики и лечения сердечно-сосудистых и эндокринных заболеваний» (20-21 сентября 2007 года, г. Санкт-Петербург), на II ежегодной научно-практической конференции ЮФО «Диагностика и мониторинг эффективности терапии XMJI в ЮФО» (14 декабря 2007 года, г.Ростов-на-Дону), на XX Интернациональном Конгрессе генетиков (12-17 июля 2008 года, г. Берлин, Германия), на Европейском Конгрессе Генетиков 2008 (31 мая - 3 июня, 2008 год, г. Барселона, Испания), на III ежегодной научно-практической конференции ЮФО «Диагностика и мониторинг эффективности терапии XMJI в ЮФО» (13-14 декабря 2008 года, г.Кисловодск), на VI Симпозиуме с международным участием «Биологические основы терапии онкологических заболеваний» (29-31 января 2009 года, г. Москва).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 149 страницах, состоит из введения, обзора литературы, характеристики клинического материала, методов исследования, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических

Заключение диссертации по теме «Онкология», Вельченко, Мария Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Применение количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени, в сочетании со стандартным цитогенетическим исследованием, значительно повышает информативность и достоверность лабораторных критериев диагностики и оценки эффективности терапии хронического миелоидного лейкоза.

2. Определение уровня экспрессии гена BCR-ABL значительно повышает достоверность оценки минимальной остаточной болезни при терапии хронического миелоидного лейкоза иматинибом по сравнению с цитогенетическим исследованием. Установлено, что у 75% больных с полным цитогенетическим ответом отмечается персистирование опухолевого клона.

3. Результаты количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени, выраженные в виде десятичного логарифма снижения экспрессии (Alog) по отношению к базовому уровню, корелируют с результатами стандартного цитогенетического исследования в наиболее высокой степени (г=-0,83).

4. Снижение уровня экспрессии гена BCR-ABL менее чем на 1 log по сравнению с базовым уровнем экспрессии свидетельствует о развитии резистентности к проводимому лечению иматинибом. Снижение уровня экспрессии гена BCR-ABL более чем на 3 log относительно базового уровня ассоциируется с успешным ответом на проводимую терапию ХМЛ (р<0,05).

5. Развитие рефрактерности к терапии иматинибом у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом обусловлено началом терапии в позднюю хроническую фазу (более 12 месяцев с момента постановки диагноза) (р<0,01).

6. Мутации киназного домена гена BCR-ABL обнаруживаются у 21,7%) пациентов с первичной резистентностью к терапии иматинибом и являются одним из значимых факторов в ее развитии. Среди обнаруженных мутаций киназного домена гена BCR-ABL мутации Р-петли обнаруживаются в 57% случаев.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для мониторинга минимальной остаточной болезни в динамике оптимально производить исследование с помощью количественной ПЦР в реальном времени 1 раз в 3 месяца.

Стабильно высокий уровень и/или нарастание экспрессии гена BCR-ABL в клетках периферической крови в динамике при полном цитогенетическом ответе является показанием к проведению цитогенетического исследования для исключения развития цитогенетического рецидива. При этом также необходимо проводить обследование на предмет выявления мутаций киназного домена BCR-ABL для решения вопроса о возможном изменении тактики терапии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Вельченко, Мария Владимировна, 2009 год

1. Домрачева Е.В., Захарова А.В., Асеева Е.А. Прогностическое значениедополнительных хромосомных аномалий при XMJI // Гематология и трансфузиология. 2005.- № 4.- С.37-42.

2. Дяченко Л.В., Захарова А.В., Асеева Е.А., Туркина А.Г., Хорошко Н.Д.,

3. Водинская Л.А., Удовиченко А.И., Домрачева Е.В. Молекулярно-цитогенетический мониторинг различных режимов терапии у больных хроническим миелолейкозом // Терапевтический Архив 2004. — Т. 7. -№7.-С. 41-44.

4. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г. Перспективы фармакотерапии ХМЛ //

5. Эффективная фармакотерапия. — 2006. № 1. — С. 38-42.

6. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г., Виноградова О.Ю., Дружкова Г.А., Круглов

7. Зарицкий А.Ю., Ломаиа Е.Г., Виноградова О.Ю., Дружкова Г.А.,

8. Круглов С.С., Туркина А.Г., Хорошко Н.Д. и др. Резистентность при терапии

9. Гливеком у больных хроническим миелолейкозом в фазе акселерации // Гематология и трансфузиология. — 2007.- №2.- С. 17-24.

10. Ломаиа Е.Г., Огородникова Ю.С., Мартынкевич И.С. и др. Прогностическиефакторы эффективности терапии Гливеком больных хроническим миелолейкозом // Вестник гематологии. — 2005.- Т. 1.- С. 14-21.

11. Ломаиа Е.Г. Клиническое значение мониторинга минимальной остаточнойболезни при хроническом миелолейкозе: Автореф. дис. . канд. мед. наук. С.-П.; 2007.

12. Мещеряков А.А. Гливек — патогенетическая терапия злокачественныхновообразований // Современная онкология. 2002: - Т. 4.- № 1. — С.123- 125.

13. Мисюрин А.В., Аксенова Е.В., Крутов А.А., Лукьяненко А.В., Финапгутина

14. Ю.П., Сучкова М.В., Тихонова В.В., Челышева Е.Ю., Солдатова И.Н., Туркина А.Г., Хорошко Н.Д. Молекулярная диагностика хронического миелолейкоза // Гематология и трансфузиология. 2007.- № 2.- С.35-40.

15. Монымалиев К.Т., Говорун В.М. Перспективы применения методов ДНКдиагностики в лабораторной службе. Часть 1 (лекция) // Клиническая лабораторная диагностика. 2000.- № 4,- С.25-32.

16. Монымалиев К.Т., Говорун В.М. Перспективы применения методов ДНКдиагностики в лабораторной службе. Часть 2 (лекция) // Клиническая лабораторная диагностика. — 2000.- № 5.- С.25-32.

17. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. М.: Медиа1. Сфера, 2002. 305 е.

18. Семочкин С.В., Лория С.С., Курова Е.С., Трипутень Н.З., Туркина А.Г.,

19. Румянцев А.Г. Анализ качества жизни больных хроническим миелолейкозом в фазе акселерации на фоне терапии Гливеком // Современная онкология. 2002. - Т4.- №2. - С.67- 70.

20. Туркина А.Г. Ингибитор сигнальных путей STI571 (Signal Transductor1.hibitor)- новое направление в лечении хронического миелолейкоза // Современная онкология. 2001. - ТЗ.- №2. - С.46- 48.

21. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А. и др. Эффективность терапии

22. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А. и др. Эффективность терапиииматиниба мезилатом (Гливеком) в хронической фазе хронического миелолейкоза // Терапевтический Архив 2003. — Т. 75. - № 8. - С. 6267.

23. Туркина А.Г., Челышева Е.Ю. Цитогенетический и молекулярный ответ —ранние маркеры эффективности терапии Гливеком больных Ph+ хроническим миелолейкозом // Фарматека. 2004. - №18 (95). - С. 4853.

24. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А., Круглов С.С., Челышева

25. Туркина А.Г., Хорошко Н.Д., Дружкова Г.А., Курова Е.С., Захарова Е.С.,

26. Хорошко Н.Д., Туркина А.Г. Хронический миелолейкоз; успехисовременного лечения и перспективы // Гематология и трансфузиология. 2001. - Т46. - №4. - С. 3-8.

27. Челышева Е.Ю., Туркина А.Г., Мисюрин А.В., Захарова А.В. Раннеевыявление цитогенетического рецидива при динамическом исследовании уровня BCR-ABL транскрипта у больного хроническим миелолейкозом // Гематология и трансфузиология. — 2007.-№2.- С.50-51.

28. Челышева Е.Ю., Туркина А.Г., Мисюрин А.В., Аксенова Е.В., Домрачева

29. Е.В., Захарова Е.С., Хорошко Н.Д. Мониторинг минимальной остаточной болезни у больных хроническим миелолейкозом: клиническое значение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени // Терапевтический Архив 2007. - № 4. - С. 49-53.

30. Челышева Е.Ю. Клиническое значение мониторинга минимальнойостаточной болезни при хроническом миелолейкозе: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М.; 2007.

31. Al-Ali Н.К., Heinrich М.С., Lange Т. et al. High incidence of BCR-ABL kinasedomain mutations and absence of mutations of the PDGFR and KIT activation loops in CML patients with secondary resistance to imatinib // Hematol J. 2004. - N5. - P55-60.

32. Anand M., Khorashad J., Marin D., et al. Varying response to escalating thedose of imatinib in patients with CML who "acquire" a BCR-ABLM244V mutant allele //Blood. 2006. - vol. 108. -N8. -P.2881-2882.

33. Azam M., Latek R.R., Daley G.Q. Mechanisms of autoinhibition and STI571/imatinib resistance revealed by mutagenesis of BCR-ABL // Cell. 2003. -N112.-P. 831-843.

34. Baccarani M., Saglio G., Goldman J., Hochhaus A., et al. Evolving concepts inthe management of chronic myeloid leukemia: recommendations from an expert panel on behalf of the European LeukemiaNet // Blood. — 2006. — vol. 108. -N6. -P.1809-1820.

35. Bolufer P., Sanz G.F., Barragan E. et al. Rapid quantitative detection of BCR

36. ABL transcripts in chronic myeloid leukemia patients by real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction using fluorescently labeled probes // Haematologica. 2000. - vol. 85. - N12. - P. 1248-1254.

37. Branford S., Rudzki Z., Hughes T. Monitoring chronic myeloid leukemia therapyby real-time quantitative PCR in blood is a reliable alternative to bone marrow cytogenetics // Br J Haematol. 1999. - N107. - P.587-599.

38. Branford S., Rudzki Z., Parkinson I. et al. Real-time quantitative PCR analysiscan be used as a primary screen to identify patients with CML treated with imatinib who have BCR-ABL kinase domain mutations // Blood. 2004. -Vol. 104. - N9. - P.2926-2932.

39. Branford S., Hughes T. Detection of BCR-ABL Mutations and Resistance

40. To Imatinib Mesylate // Myeloid Leukemia: Methods and Protocols. — 2006.-vol. 125.-P. 93-106.

41. Branford S. Chronic Myeloid Leukemia: Molecular Monitoring in Clinical

42. Practice // Hematology. 2007. - P.376 -383.

43. Bueno-da-Silva AE, Brumatti G, Russo FO, Green DR, Amarante-Mendes GP.

44. Bcr-Abl-mediated resistance to apoptosis is independent of constant tyrosine-kinase activity // Cell Death Differ. 2003. - N10. - P.592-598.

45. Campbell L.J., Patsouris C., Rayeroux K.C. et al. BCR-ABL amplification inchronic myelocytic leukemia blast crisis following imatinib mesylate administration // Cancer Genet Cytogenet. 2002. - N139. - P. 30-33.

46. Chu S, Holtz M, Gupta M, Bhatia R. BCR/ABL kinase inhibition by imatinibmesylate enhances MAP kinase activity in chronic myelogenous leukemia CD34+ cells // Blood. 2003. - N103. - P.3167-3174.

47. Corbin A.S., Buchdunger E., Pascal F., Druker B.J. Analysis of the structuralbasis of specificity of inhibition of the Abl kinase by STI571 // J Biol Chem. 2002. - Vol. 277. - N35. - P. 32214-32219.

48. Corbin A.S., La Rose P., Stoffregen E.P. et al. Several BCR-ABL kinase domainmutants associated with imatinib mesylate resistance remain sensitive to imatinib // Blood. 2003. - Vol.101. - N11. - P.4611-4614.

49. Cortes J., E. Jabbour E., Kantarjian H., et al. Dynamics of BCR-ABL kinasedomain mutations in chronic myeloid leukemia after sequential treatmentwith multiple tyrosine kinase inhibitors // Blood. 2007. - vol. 110. - N12. -P.4005-4011.

50. Cowan-Jacob SW, Guez V, Fendrich G, et al. Imatinib (STI571) resistance inchronic myelogenous leukemia: molecular basis of the underlying mechanisms and potential strategies for treatment // Mini Rev Med Chem. -2004. N4. - P.285-299.

51. Crossman L, Druker B, Deininger M. hOCT 1 and resistance to imatinib //

52. Blood. -2005. N106. - P. 1133-1134.

53. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acidguanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal Biochem. — 1987. — V.162, №1. P. 156-159.

54. Dai H., Marbach P., Lemaire M. et al. Distribution of STI-571 to the brain inlimited by P-glycoprotein-mediated efflux // J Pharmacol Exp Ther. — 2003. -N304. -P.1085-1092.

55. Deininger M.W., Goldman J.M., Melo J.V. The molecular biology of chronicmyeloid leukemia // Blood. -2000. N96. - P. 3343-3356.

56. Deininger M., Buchdunger E., Druker B. The development of imatinib as atherapeutic agent for chronic myeloid leukemia // Blood. 2005. - Vol. 105. - N 7. - P.2640-2653.

57. Doggrell S.A. BMS-354825: a novel drug with potential for the treatment ofimatinib- resistant chronic myeloid leukemia // Expert Opin Investig Drugs. -2005.-N14(1).-P.89-91.

58. Druker B.J., Talpaz M., Resta D.J. et al. Efficacy and safety of a specificinhibition of the BCR-ABL tyrosine kinase in chronic myeloid leukemia // N. Engl. J. Med. 2001. - N344. - P. 1031 -103 7.

59. Druker B.J., O'Brien S.G., Cortes J., Radich J. Chronic myelogenous leukemia //

60. Hematology. 2002. - P. 111-135.

61. Faderl S., Talpaz M., Estrov Z. et al. The biology of chronic myeloid leukemia //

62. N. Engl. J. Med. 1999. -N341. - P.164-172.

63. Gambacorti-Passerini C., Le Coutre P., Mologni L. et al. Inhibition of the ABLkinase activity blocks the proliferation of BCR-ABL+ leukemic cells and induces apoptosis //Blood Cells Mol. Dis. 1997. -N23. -P.380-384.

64. Gambacorti-Passerini C., Barni R., le Coutre P. et al. Role of alphal acidglycoprotein in the vivo resistance of human BCR-ABL(+)leukemic cells to the abl inhibitor STI571 // J. Natl. Cancer Inst.(Bethesda). 2000. - N92. -P. 1641-1650.

65. Gambacorti-Passerini C., Rossi F., Verga M. et al. Differences between in vivoand vitro sensitivity to imatinib of BCR/ABL(+) cells obtained from lieukemic patients // Blood Cells Mol. Dis. 2002. - N28. - P. 361-375.

66. Gambacorti-Passerini C., Zucchetti M., Russo D. et al. al acid glycoproteinbinds to imatinib(STI571) and substantially alters its pharmacokinetics in chronic myeloid leukemia patients // Clinical Cancer Research. 2003. -vol.9.-P.625-632.

67. Gambacorti-Passerini C., Gunby R.H., Piazza R. et al. Molecular mechanisms ofresistance to imatinib in Philadelphia chromosome positive leukemias // Lancet Oncol. 2003. - N4. - P.75-85.

68. Goldman J.M. Chronic myeloid leukemia-still a few questions // Exp Hematol.2004. -N32.-P.2-10.

69. Goldman J.M. Monitoring minimal residual desease in BCR-ABL-positivechronic myeloid leukemia in the imatinib era // Curr. Opin. Hemat. 2004. - N12. -P.33-39.

70. Goldman J., Gordon M. Why do chronic myelogenous leukemia stem cellssurvive allogeneic stem cell transplantation or imatinib: does it really matter? // Leuk Lymphoma. 2006. - N47(1). - P. 1-7.

71. Goldman J. M. How I treat chronic myeloid leukemia in the imatinib era //

72. Blood. 2007. - vol. 110. - N8. - P. 2828-2837.

73. Gorre M.E., Mohammed M., Ellwood K. et al. Clinical resistance to STI571cancer therapy caused by BCR-ABL gene mutation or amplification // Science. 2001. Vol.293. - P.876-880.

74. Gorre M.E., Sawyers C.L. Molecular mechanisms of resistance to STI571 inchronic myeloid leukemia // Curr. Opin. Hemat. 2002. - N9. - P.303-307.

75. Graham S.M., Jorgensen H.G., Allan E. et al. Primitive, quiescent, Philadelphiapositive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro // Blood. 2002. -N99. - P. 319-325.

76. Hochhaus A, Lin F, Reiter A at al. Quantification of residual disease in chronicmyelogenous leukemia patients on interferon-alpha therapy by competitive polymerase chain reaction // Blood. 1996. - N87. - P.l549-1555.

77. Hochhaus A., Kreil S., Corbin A.S. et al. Molecular and chromosomalmechanisms of resistance to imatinib (STI571) therapy // Leukemia. 2002. - N16. -P.2190-2196.

78. Hofmann W.K., Jones L.S.,Lemp N.A. et al. Ph(+) acute lymphoblastic leukemiaresistant to the tyrosine kinase imatinibor STI571 has a unique BCR-ABL gene mutation // Blood. 2002. - N99. - P. 1860-1862.

79. Holyoake Т., Allan E.K., Grand F., et al. Combination therapies includingimatinib do not eradicate quiescent chronic myeloid leukaemia stem cells in vitro abstract. // Blood. 2003. - N102. - P.71a.

80. Hughes TP, Morgan GJ, Martiat P et al. Detection of residual leukemia afterbone marrow transplantation: role of PCR in predicting relapse // Blood. -1991.-N77.-P. 874-878.

81. Hughes Т., Branford S. Molecular monitoring of chronic myeloid leukemia //

82. Semin Hematol. 2003. - N40. - P.62-68.

83. Hughes Т., Kaeda J., Branford S. et al. Frequency of major molecular response toimatinib or interferon alfa plus cytarabine in newly diagnosed chronic myeloid leukemia // N Engl J Med. 2003. - N349. - P. 1423—1432.

84. Hughes Т., Branford S. Molecular monitoring of BCR-ABL as a guide to clinicalmanagement in chronic myeloid leukemia // Blood. 2006. - N20. — P.29-41.

85. Jabbour E., Kantarjian H., Jones D., et al. Frequency and clinical significance of

86. BCR-ABL mutations in patients with chronic myeloid leukemia treated with imatinib mesylate // Leukemia. 2006. - N20. - P. 1767-1773.

87. Kabarowski J.H., Witte O.N. Consequences of BCR-ABL expression within thehematopoietic stem cell in chronic myeloid leukemia // Stem Cells. — 2000. -N18. -P. 399-408.

88. Kaeda S.A., Chase A., Goldman J.M. Cytogenetic and molecular monitoring ofresidual desease in chronic myeloid leukemia // Acta Hematol. 2002. -N107. — P.64-75.

89. Kantarjian H.M., Sawyers С., Hochhaus A. et al. Hematologic and cytogeneticresponses to imatinib mesylate in chronic myelogenous leukemia // N. Engl. J. Med. 2002. - N346. - P.645-652.

90. Kantarjian H.M., Tarpaz M. et al. Quantitative polymerase chain reactionmonitoring of BCR-ABL during therapy with imatinib mesylate (STI571:gleevec) in chronic phase chronic myelogenous leukemia // Clin Cancer Res.-2003. N9.-P. 160- 166.

91. Kantarjian H., O'Brien S., Cortes J. et al. Imatinib mesylate therapy improvessurvival in patients with newly diagnosed Philadelphia chromosome positive chronic myelogenous leukemia in the chronic phase // Cancer. -2003. N98. - P.2636-2642.

92. Kantarjian H., Talpaz M., Giles F., O'Brien S., Cortes J. New Insights into the

93. Pathophysiology of Chronic Myeloid Leukemia and Imatinib Resistance // Ann Intern Med. 2006. - N 145. - P. 913-923.

94. Kreil S., Muller C., Lahaye T. et al. Molecular and chromosomal mechanisms ofresistance in CML patients after STI571 (Glivec) therapy. American Society of Hematology, 43rd Annual Meeting, Orlando, Florida // Blood. -2001.-N98.-P. 435.

95. Kawasaki ES, Clark SS, Coyne NY et al. Diagnosis of chronic myelogenous andacute lymphocytic leukemias by detection of leukemia specific mRNA sequences amplified in vitro // Proc Nat Acad Sci USA. 1988. - N85. - P. 5698-5702.

96. Lange T, Niederwieser DW, Deininger MW. Residual disease in chronic myeloidleukemia after induction of molecular remission // N Engl J Med. — 2003. -N349. -P.1483-1484.

97. Lahaye T, Riehm B, Berger U at al. 4.5 year follow up of response and resistancein 300 patients with BCR-ABL positive leukemias treated with imatinib in a single center//Cancer.-2005. -N103.-P.1659-1669.

98. Lowenberg B. N. Minimal residual disease in chronic myeloid leukemia // Engl.

99. J. Med. 2003. - N349. -P.1399-1401.

100. Le Coutre P., Mologni L., Cleris L. et al. In vivo eradication of human BCR

101. ABL positive leukemia cells with an ABL kinase inhibitor // J. Natl. Cancer Inst. (Bethesda). — 1999. —N91. -P.163-168.

102. Le Coutre P., Tassi E., Varella-Garcia M. et al. Induction of resistance to the

103. Abelson inhibitor STI571 in human leukemic cells through gene amplification //Blood. -2000. -N95. P. 1758-1766.

104. Li S, Hu Y, Swerdlow S et al. Targeting BCRABL kinase activity-independentsignaling pathways and leukemia stem cells is essential for curative therapy of Philadelphia chromosome positive (Ph+) leukemia Abstract. // Blood. -2005.-N 106.-P.592

105. Lugo T.G., Pendergast A.M., Muller A.J. et al. Tyrosine kinase activity andtransformation potency of BCR-ABL oncogen products // Science. — 1990. -N247.-P. 1079- 1082.

106. McLean L.A., Gathmann I., Capdeville R. et al. Pharmacogenomic Analysis ofcytogenetic response in chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib // Clinical Cancer Research. 2004. - vol.10. - P.155-165.

107. Mahon F.X., Deininger M.W., Schultheis B. et al. Selection and characterizationof BCR-ABL positive cell lines with differential sensitivity to the tyrosine kinase imatinibor STI571: diverse mechanisms of resistance // Blood. -2000.-N96.-P. 1070-1079.

108. Mahon F.X., Belloc F., Lagarde V., et al. MDR1 gene overexpression confersresistance to imatinib mesylate in leukemia cell line models // Blood. -2003.-N101.-P. 2368-2373.

109. Marin D., Marktel S. et al. Survival of patients with chronic phase chronicmyeloid leukemia after failed response to interferon-alfa // Lancet. 2003. -N362. - P.617-619.

110. Mauro M. J. Defining and Managing Imatinib Resistance // Hematology.2006.-P.346 -352.

111. Mayer B.J., Baltimore D. Mutagenic analysis of the roles of SH2 and SH3domains in regulation of the Abl tyrosinkinase // Mol. Cell. Biol. — 1994. — Vol.14.-P.2883.

112. Melo J. V., Hughes T. P. and Apperley J. F. Chronic Myeloid Leukemia //

113. Hematology. 2003. - P.346 -352.

114. Mensink E, van de Locht A. Quantitation of minimal residual disease in

115. Philadelphia chromosome positive chronic myeloid leukemia patients using real-time quantitative RT PCR // Br J Haematol. 1998. - N102. - P.768-774.

116. Merx K., Muller M.C. et al. Early reduction of BCR-ABL mRNA transcriptlevels predicts cytogenetic response in chronic phase CML patients treated with imatinib after failure of ilure of interferon alfa // Leukemia. — 2002. -N16. P.1579-1583.

117. Morgan GJ, Hughes T, Janssen JWG et al. Polymerase chain reaction fordetection of residual leukaemia // Lancet. 1989. - N1. - P. 928-929.

118. Mukai M., Che X.F., Furukawa T. et al. Reversal of the resistance to STI571 inhuman chronic myelogenous leukemia K562 cells // Cancer Sci. 2003. — N8.-P. 411-424.

119. Mutter M.C., Gattermann N., Lahaye T. et al. Dynamics of BCR-ABL mRNAexpression in first-line therapy of chronic myelogenous leukemia patientswith imatinib or interferon alfa/ara-C.// Leukemia. 2003. - N17. - P.2392-2400.

120. Nagar B, Hantschel O, Young MA, et al. Structural basis for the autoinhibitionof c-Abl tyrosine kinase // Cell. 2003. - N112. - P.859-871.

121. Nardi V., Azam M., Daley G.Q. Mechanisms and implications of imatinibresistance mutations in BCR-ABL // Curr Opin Hematol. 2004. - N11. -P.35-43.

122. Ohmine K., Nagai Т., Tarumoto T. et al. Analysis of gene expression profilesin an imatinib-resistant cell line, KCL22/SR // Steem Cells. 2003. - N21. -P.315- 321.

123. O'Hare Т., Eide C. A. and Deininger M. Bcr-Abl kinase domain mutations,drug resistance, and the road to a cure for chronic myeloid leukemia // Blood. -2007. vol. 110. - N7. - P. 2242-2249.

124. Preudhomme C., Revillion F., Merlat A. et al. Detection of BCR-ABLtranscripts in chronic myeloid leukemia (CML) using a 'real time' quantitative RT-PCR assay // Leukemia. 1999. - N13. - P. 957-964.

125. Ray A., Cowan-Jacob S ., Manley P. et al. Identification of BCR-ABL pointmutations conferring resistance to the Abl kinase inhibitor AMN107 (nilotinib) by a random mutagenesis study // Blood. 2007. - Vol. 109. -N11. -P.5011-5015.

126. Ricci C., Scappini В., Divoky V. et al. Mutation in the ATP-binding pocket ofthe BCR/ABL-positive cell line // Cancer Res. 2002. - N62. - P. 59955998.

127. Roche-Lestienne С, Lai JL, Darre S, Facon T, Preudhomme C. A mutationconferring resistance to imatinib at the time of diagnosis of chronic myelogenous leukemia // N Engl J Med. 2003. - N348. - P.2265-2266.

128. Roumiantsev S, Shah SP, Gorre ME, Nicoll J et al. Clinical resistance to thekinase inhibitor STI-571 in chronic myeloid leukemia by mutation of Tyr-253 in the Abl kinase domain P-loop // Proc Nat Acad Sci USA. 2002. -N99. — P. 10700-10705.

129. Rowley J.D. A new consistent chromosomal abnormality in chronicmyelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa banding.//Nature. 1973.- Vol.243. -P.290.

130. Ruibao R. Mechanisms of BCR-ABL in the pathogenesis of chronicmyelogenous leukemia // Cancer. 2005. - Vol.5. - P.172-183.

131. Sawyers C.L., Hochhaus A., Feldman E. et al. Imatinib induces hematologicand cytogenetic responses in patients with chronic myelogenous leukemia in myeloid blast crisis: results of a Phase II study // BLOOD. 2002. -N99.-P. 3530-3539.

132. Schindler T, Bornmann W, Pellicena P, et al. Structural mechanism for STI571 inhibition of abelson tyrosine kinase // Science. 2000. - N 289. — P. 1938-1942.

133. Schiffer C. BCR-ABL tyrosine kinase inhibitors for chronic myelogenousleukemia // N Engl J Med. 2007. - Vol. 357. - N3. - P. 258-265.

134. Shah N.P., Nicoll J.N., Nagar B. et al. Multiple kinase domain mutations conferpolyclonal resistance to the tyrosine kinase inhibitor imatinib (STI571) in chronic phase and blast crisis chronic myeloid leukemia // Cancer Cell. -2002.-N2.-P.l 17-125.

135. Shah N.P., Sawyers C.L. Mechanisms of resistance to STI571 in Philadelphiachromosome associated leukemias // Oncogene. — 2003. — Vol. 22. — P. 7389—7395.

136. Shah N.P., Tran С., Lee F.Y. et al. Overriding imatinib resistance with a novel

137. ABL kinase inhibitor// Science. -2004. -N305. P. 399-401.

138. Shah N. P. Loss of Response to Imatinib: Mechanisms and Management //

139. Hematology. 2005. - P.246 -252.

140. Shah N. P. Medical Management of CML // Hematology. 2007. - P.371 -375.

141. Shet A.S., Jahagirdar B.N., Verfaillie C.M. Chronic myelogenous leukemia:mechanisms underlying disease progression // Leukemia. 2002. - Vol.16. -P. 1402.

142. Skaggs В., Gorre M., Ryvkin A. et al. Phosphorylation of the ATP-bindingloop directs oncogenicity of drug-resistant BCR-ABL mutants // PNAS. -2006.-vol. 103. N51. -P.19466-19471.

143. Sorel N., Bonnet M.L., Guillier M. et al. Evidens of Abl- kinase domainmutations in highly purified primitive stem cell populations of patients with chronic myelogenous leukemia // Biochem Biophys Res Commun. 2004. -N323.-P. 728-730.

144. Talpaz M., Silver R.T., Druker В J. et al. Imatinib induces durable hematologicand cytogenetic responses in patients with accelerated phase chronic myeloid leukemia: results of a Phase 2 study // BLOOD. 2002. - N99. -P. 1928-1937.

145. Tokarski J., Newitt J., Chang C. et al. The structure of Dasatinib (BMS-354825)bound to activated ABL kinase domain elucidates its inhibitory activity against imatinib-resistant ABL mutants // Cancer Research. — 2006. N 66. -P.5790-5797.

146. Verfaillie C.M. Biology of chronic myelogenous leukemia // Haematol. Oncol.

147. Clin. N. Am. 1998. - Vol.12. - N1. - P. 1-29.

148. Von Bubnoff N., Schneller F., Peschel C., Duyster J. BCR-ABL genemutations in relation to clinical resistance of Philadelphia chromosome positive leukemia to STI571: a prospective study // Lancet. 2002. - N359. -P.487- 491.

149. Wang L., Pearson K. et al. The early molecular response to imatinib predictscytogenetic and clinical outcome in chronic myeloid leukemia // Br J Haematol. 2003. - N120. - P.990-999.

150. Weisberg E.G., Griffin J.D. Mechanism of resistance to the ABL tyrosinekinase inhibitor STI571 in BCR-ABL-transformed hematopoietic cell lines // Blood. 2000. - N95. - P. 3498-3505.

151. Weisberg E.G., Griffin J.D. Resistance to imatinib (Glivec): update on clinicalmechanisms // Drug Resist. Updat. 2003. - N6. - P.231-238.

152. Weisberg E.G., Manley P.W., Breitenstein W. et al. Characterization of

153. AMN107, a selective inhibitor of native and mutant BCR-ABL // Cancer Cell.-2005.- N7(4).- P.399-410.

154. White D, Saunders V, Lyons AB, et al. In vitro sensitivity to imatinib-inducedinhibition of ABL kinase activity is predictive of molecular response in patients with de novo CML // Blood. 2005. - N106. - P.2520-2526.

155. Willis S., Lange Т., Demehri S. et al. High-sensitivity detection of BCR-ABL kinase domain mutations in imatinib-naive patients: correlation with clonal cytogenetic evolution but not response to therapy // Blood. 2005. - Vol. 106. -N6.-P.2128-2137.