Молекулярная эволюция и сероэпидемиология энтеровируса 71-го типа на территории Российской Федерации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Ахмадишина, Людмила Васильевна

• Ахмадишина, Людмила Васильевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Ахмадишина, Людмила Васильевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика энтеровирусов

1.1.1. Классификация энтеровирусов

1.1.2. Структура и физико-химические свойства вириона энтеровирусов

1.1.3. Структура и реализация генома энтеровирусов и энтеровируса 71 типа

1.1.4. Жизненный цикл энтеровирусов

1.2. Клинические особенности энтеровирусной инфекции

1.3. Клинические особенности ЭВ71 инфекции

1.4. Сероэпидемиология и молекулярная эпидемиология ЭВ71 в мире

1.5. Современные методы детекции и идентификации ЭВ

1.6. Предпосылки для данного исследования

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Использованные штаммы ЭВ71 для реакции нейтрализации

2.2. Использованные клеточные линии для реакции нейтрализации

2.3. Сыворотки людей для реакции нейтрализации

2.4. Референс-сыворотки для реакции нейтрализации

2.5. Условия проведения реакции нейтрализации и определение титра нейтрализующих антител к ЭВ71

2.6. Источники информации о среднем доходе, о численности представителей различных этнических групп и о плотности населения в регионе

2.7. Определение статистической значимости разницы уровней серопозитивности

2.8. Штаммы ЭВ71, выделенные в России и странах СНГ и взятые для исследования филогенетических взаимоотношений

2.9. Определение нуклеотидной последовательности части фрагмента генома энтеровирусов, кодирующего белок УР1

2.10. Определение нуклеотидной последовательности полного фрагмента генома ЭВ71, кодирующего белок УР1

2.11. Электрофорез ПЦР продуктов

2.12. Определение нуклеотидной последовательности

2.13. Анализ полученных нуклеотидных последовательностей

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Результаты молекулярно-биологического исследования штаммов ЭВ71, изолированных на территории Российской Федерации и стран СНГ

2. Изучение состояния популяционного иммунитета к ЭВ71 у здорового населения Российской Федерации

2.1.1. Выбор генотипа ЭВ71 для выполнения серологических исследований

2.1.2. Изучение уровня антител к ЭВ71 (субгенотип С2 штамм 13689) у здоровых детей от 1 до 5 лет на территории Российской Федерации (в шести регионах РФ)

3. Изучение сероэпидемиологии ЭВ71 у детей в г. Хабаровск и Комсомольск-на-Амуре

4. Вспышка энтеровируса 71 типа в Ростове-на-Дону

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений

CAV - коксаки А вирус CBV - коксаки Б вирус Е-эховирус

IRES - internal ribosomal entry site, внутренний сайт посадки рибосомы

PV - вирус полиомиелита

RD - линия клеток рабдомиосаркомы человека

ак - аминокислота

АТР - Азиатско-Тихоокеанский регион ГА - герпангина нт - нуклеотид

НТО - нетранслируемая область

ОВП - синдром острого вялого паралича

ОТ - реакция обратной транскрипции

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РН - реакция нейтрализации инфекционности

РНК - рибонуклеиновая кислота

кДНК — комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота ЭВ71 -энтеровирус 71 типа ЭВИ - энтеровирусная инфекция ЯПЗ - ящуроподобное заболевание

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярная эволюция и сероэпидемиология энтеровируса 71-го типа на территории Российской Федерации»

Введение

Энтеровирус 71 типа (ЭВ71) является наиболее патогенным неполиомиелитным энтеровирусом человека. Энтеровирус 71 типа способен вызывать эпидемии ящуроподобного заболевания (ЯПЗ) сопровождающегося тяжелыми неврологическими осложнениями с летальным исходом. Наибольший риск тяжелого течения нейроинфекции отмечен у детей до 5 лет.

Основными эндемичными странами по заболеваемости ЭВ71-инфекцией являются страны Азиатско-Тихоокеанского региона (АТР). За последние 15 лет вызванные ЭВ71, эпидемии ЯПЗ, протекавшего с поражением ЦНС, регистрировали в Малайзии, Тайване, в Сингапуре, Таиланде, Японии и во Вьетнаме. В Китае на протяжении 2007-2011 годов ежегодно регистрировали от 200 тысяч до нескольких миллионов больных ЯПЗ. Во время вспышек у части пациентов с ЯПЗ (от 100 до 900 случаев ежегодно) наблюдали развитие неврологических осложнений, таких как энцефаломиелит, спинальный полиомиелит, серозный менингит, приводивших к смерти. Основной причиной эпидемий ЯПЗ, сопровождавшегося поражением ЦНС и смертью пациентов в последние годы был ЭВ71 субгенотипа С4, который условно рассматривают как «азиатский» субгенотип. В странах АТР для надзора за ЭВ71 были выстроены эффективные санитарно-эпидемиологические службы, идет разработка лекарственных препаратов и вакцин.

В Европе в 1970-е годы произошли две вспышки ЭВ71 нейроинфекции, в 1975 году в Болгарии и в 1978 году в Венгрии. Во время вспышек были зарегистрированы десятки случаев смерти среди детей. За последние 35 лет на территории европейских стран было выявлено только 2 случая ЭВ71-нейроинфекции с летальным исходом и спорадические случаи инфекции, которые заканчивались выздоровлением. В основном, в Европе наблюдали бессимптомную циркуляцию вируса, определяемую по наличию антител у здорового населения и по выделению ЭВ71 из

5

материалов от людей. В Европе наблюдение за распространением ЭВ71 проводится в рамках общей программы по надзору за циркуляцией энтеровирусов. В соответствии с этой программой установлено, что в Европе циркулируют, так называемые «европейские» субгенотипы ЭВ71 -С1 и С2.

В России информация о циркуляции и эпидемиологии ЭВ71 отсутствует. Наблюдение за циркуляцией всех известных серотипов ЭВ в РФ происходит в рамках программы по надзору за искоренением полиомиелита и в рамках программы по надзору за неполиомиелитными энтеровирусами. Таким образом, непосредственного надзора за ЭВ71 в России не ведется. Учитывая эпидемиологическую ситуацию в отношении ЭВ71-заболеваемости в Китае, была очевидна необходимость проведения исследований по изучению циркуляции и сероэпидемиологии ЭВ71 на территории РФ, особенно на территории Хабаровского края, пограничного с Китаем.

Цель работы: изучение циркуляции и сероэпидемиологии энтеровируса 71 типа на территории Российской Федерации.

Задачи:

1. Изучить российские изоляты ЭВ71 и создать коллекцию штаммов ЭВ71 для их дальнейшего изучения.

2. Изучить филогенетические взаимоотношения российских и зарубежных изолятов ЭВ71 на основе анализа нуклеотидной последовательности генома, кодирующего белок УР1:

2.1.определить нуклеотидную последовательность генома, кодирующего белок УР1, российских изолятов ЭВ71;

2.2.генотипировать российские штаммы ЭВ71;

2.3.проанализировать филогенетические взаимоотношения российских изолятов ЭВ71 в сопоставлении с последовательностями ЭВ71 из других стран, зарегистрированными в базе данных СепВапк.

3. Подобрать субгенотип ЭВ71 для реакции нейтрализации с целью изучения популяционного иммунитета среди здоровых детей до 5 лет.

4. Изучить сероэпидемиологию ЭВ71 в Российской Федерации путем исследования уровня нейтрализующих антител к ЭВ71 в сыворотках крови здоровых детей в возрасте 1-5 лет в шести регионах (Московская область, Ростовская область, Свердловская область, республика Тыва, Якутия, Хабаровский край).

Научная новизна

1. Было показано, что в 2000-2010 годах в России преобладали субгенотипы С1 и С2 ЭВ71, филогенетически наиболее близкие к европейским вариантам вируса, а с 2011 доминировал субгенотип С4, филогенетически близкий к вирусам из Китая.

2. Впервые выделен российский ЭВ71 штамм №13689 от случая острого вялого паралича в Москве, определена его полногеномная последовательность и создан рабочий банк вируса.

3. Впервые показано, что ЭВ71 широко циркулировал на территории Российской Федерации среди детей дошкольного возраста, однако первая вспышка ЭВ71 инфекции была зарегистрирована только в 2013 году в Ростове-на-Дону.

Научно-практическая значимость работы

1. Впервые получены российские изоляты ЭВ71, определена их нуклеотидная последовательность полного фрагмента генома, кодирующего белок УР1. Создана коллекция российских штаммов ЭВ71

7

для использования в качестве референсных штаммов при разработке диагностических систем.

2. Определен уровень популяционного иммунитета среди населения в шести регионах Российской Федерации (Московская область, Ростовская область, Свердловская область, республике Тыва, Якутия, Хабаровская область).

3. Проведено молекулярно-эпидемиологическое изучение первой в России вспышки ЭВ71, возникшей в 2013 году в Ростовской области, и показано, что причиной вспышки были представители ЭВ71 субгенотипа С4.

Глава 1. Обзор литературы

1.1.Общая характеристика энтеровирусов

1.1.1. Классификация энтеровирусов

Род Enterovirus относится к семейству Picornaviridae. Название рода было обусловлено преимущественной репликацией вируса в пищеварительном тракте. По современной классификации, определенной Международным комитетом по таксономии вирусов, энтеровирусы (ЭВ) человека подразделяют на 4 вида: Human enterovirus А, В, С, D (Табл.1). К одному виду относят типы энтеровирусов, различающиеся менее, чем на 30% нуклеотидной последовательности в неструктурной области генома и рекомбинирующие между собой. Каждый из видов ЭВ подразделяется на типы исходя из серологических свойств и разницы нуклеотидной и аминокислотной последовательности области генома VP1 [87].

Таблица 1. Классификация энтеровирусов человека [95].

Tnn/CepoTnn

Human enterovirus A HEV-A Coxsackievirus A 2-8, 10, 12, 14, 16

Human enterovirus 71, 76, 89-92, 114

Human enterovirus B HEV-B Coxsackievirus A 9

Coxsackievirus B 1-6

Echovirus 1-7, 9, 11-21, 24-27, 29-33

Human enterovirus 69, 73-75, 77-88, 93, 97, 98, 100, 101, 106, 107

Human enterovirus C HEV-C Coxsackievirus A 1, 11,13,17,19-22,24

Human enterovirus 95, 96, 99,102,104,105, 109, 113, 116

Poliovirus 1-3

Human enterovirus D HEV-D Human enterovirus 68, 70, 94, 111

Энтеровирус 71 типа - один из серотипов вида НЕУ-А. ЭВ71 подразделяется на 13 субгенотипов (А, В0-В5, С1-С5, Б) исходя из различия нуклеотидной последовательности в области генома УР1 [7; 62; 79]. Сходство генома энтеровирусов одного серотипа в области УР1 составляет не менее 75% нуклеотидной последовательности [87]. Вирусы в пределах одного субгенотипа ЭВ71 имеют сходство 92% нуклеотидной последовательности, а вирусы разных генотипов схожи на 78-83% нуклеотидной последовательности [62]. Между разными генотипами ЭВ71 существует выраженный антигенный перекрест [23; 77].

1.1.2. Структура и физико-химические свойства вириона энтеровирусов

Вирион энтеровирусов представляет собой икосаэдр диаметром около 30 нм. Капсид ЭВ состоит из 60 протомеров, каждый из которых содержит по одной копии четырех белков: УР1, УР2, УРЗ, и УР4 (Рис. 1). Симметрия вириона (Т) псевдо 3, это означает что один протомер образован тремя разными белками, но морфологически эти белки похожи, поэтому Т = псевдо 3. Белок УР4 полностью скрыт внутри капсида и не участвует в антигенных взаимодействиях. Антитела образуются ко всем поверхностным белкам к УРЗ, УР2 и немного больше к УР1. На поверхности вириона можно выделить пятиугольное возвышение звездчатой формы, образованное пятью белками УР1, окруженное, каньоном, который является сайтом связывания с клеточным рецептором [92].

К- 200Й Svviii Institute o< Bic

Рисунок 1. Структура вириона энтеровируса (Swiss institute of bioinformatics, 2008).

Энтеровирусы отличаются от всех остальных вирусов семейства Picornaviridae рядом физических свойств, таких как плавучая плотность в хлориде цезия и стабильность в слабых кислотах. Вирионы кислотоустойчивы и сохраняют инфекционность при рН ниже 3,0. Эта способность необходима при прохождении через желудок к месту репликации вируса в кишечнике. Биофизические особенности и цитолитический цикл жизни вируса влияют на многие аспекты патологии ЭВ, пути передачи и эпидемиологические особенности. Инфекционный вирус относительно чувствителен к дезинфектантам, широко распространенным в лаборатории, таким как 70% этанол, изопропанол, соединениям четвертичного аммония. Вирус нечувствителен к растворителям, таким как эфир и хлороформ, из-за отсутствия липидной оболочки, стабилен в присутствии многих детергентов при комнатной температуре. Формальдегид, глютаральдегид, сильные кислоты, гипохлорит натрия инактивируют энтеровирусы. Концентрация, рН и время контакта влияют на степень инактивации этими компонентами [92].

Энтеровирусы относительно термостабильны, но меньше, чем вирус гепатита А. Большинство ЭВ легко инактивируется при 42°С, катионы сульфата магния могут повышать стабильность вириона, так что он

остается практически неизменным при 50°С. Чувствительность к

и

небольшому подъему температуры дает возможность использовать пастеризацию для инактивации ЭВ [14].

1.1.3. Структура и реализация генома энтеровирусов и энтеровируса 71 типа

Геном энтеровирусов (Рис. 2) представлен одноцепочечной полиаденилированной моноцистронной РНК позитивной полярности длиной около 7,4 тысяч нт [92]. С 5"НТО генома энтеровируса ковалентно связан белок VPg (virion protein, genome linked). Также в состав 5'НТО входит структура, необходимая для инициации трансляции, внутренний сайт посадки рибосомы - IRES (internal ribosome entry site).

После области IRES идет одна открытая рамка считывания. В состав З'НТО входит поли(А) хвост длиной до 200 нт [92]. Перечисленные свойства и признаки генома характерные для большинства энтеровирусов.

После проникновения в клетку вирусный геном способен к трансляции полипротеина, который разрезается собственными протеазами 2А и ЗС на три белковых предшественника. Область генома Р1 кодирует структурные белки VP1, VP2, VP3 и VP4. Область генома Р2 кодирует белки 2А, 2В, 2С. Белок 2А обладает протеазной активностью, а также необходим для инициации синтеза «-» цепи РНК. Белок 2В вовлечен в синтез вирусной РНК на ранних этапах, он выполняет функции виропорина, образуя поры для прохождения вируса через клеточную мембрану. Белок 2С высококонсервативен и выполняет функции хеликазы во время синтеза РНК, необходим для раскручивания двухцепочечных структур при репликации РНК.

Область генома РЗ включает в себя последовательность, кодирующую четыре белка: ЗА, ЗВ, ЗС и 3D. О функциях белка ЗА известно немного: экспериментально доказано, что внесение мутаций в гиброфобный конец белка приводит к образованию вируса с дефектом репликации. Участок генома ЗВ кодирует белок VPg, который играет роль праймера для

репликации РНК. Белок ЗС обладает протеазной активностью и разрезает полипептид между областями генома Р2 и РЗ. Белок ЗО является РНК-зависимой-РНК-полимеразой.

Некоторые предшественники белков имеют собственные функции. Так, белок 2ВС участвует в вирусной репликации, а ЗСЭ имеет протеазную активность. Функции ЗСО изучены не до конца, одной из них является способность заякоревать VPg белок в мембране для праймирования во время синтеза РНК [92].

IRES

1

PI

Р2

Pi

5'

VP4 VP2 VP3 -►ч-><— VPl j 2A 126 j 2C |зА VPg Р3ГСО -► RdRp

Potyprotein

1ABCD 2ABC шшшиш^шшя 3ABCD

1АВС ID 2A 2BC ЗАВ 3CD

VPO 1С 2B 2C Изв ЗС 3D

1А [18 !

Alternative cleavage ЗС Г 3D

Рисунок 2. Структура генома энтеровирусов. [44]. Схема разрезания полипептида на 11 белков. Белок VPg, прикрепленный к 5vHTO, область внутренней посадки рибосомы (IRES), полипептид, полиаденилированная З^НТО РНК.

1.1.4. Жизненный цикл энтеровирусов

Жизненный цикл вирусов начинается с присоединения к рецептору инфицируемой клетки. После связывания с рецептором на клеточной поверхности происходит серия структурных изменений в вирусном капсиде и формируются поры на клеточной мембране, через которые вирусная РНК проникает в цитоплазму клетки (этап 1 на рис.3). Затем происходит раздевание вируса (этап 2 на рис.3). Репликация ЭВ происходит в цитоплазме клетки.

Геном энтеровируса позитивной полярности и функционирует как

13

матричная РНК, после проникновения в клетку с него начинается трансляция полипептида, который разрезается автокаталитически протеазами 2А и ЗС на 3 предшественника (этап 3 и 4 на рис.3). Впоследствии, предшественники расщепляются на 4 структурных и 7 неструктурных белков. Четыре структурных поверхностных белка формируют провирион (этап 8 на рис.3). Остальные 7 белков участвуют, в том числе, в копировании РНК (этап 4 рис.3). Плюс-цепь РНК ЭВ также служит матрицей для синтеза отрицательных цепей (этап 5 рис.3), с которых снова синтезируются новые «+» цепи (этап 6 рис.3). С части дочерних плюс-цепей транскрибируются полипептиды (этап 7 рис.3), а часть «+» цепей идет в морфогенез вириона (этап 8 рис.3). Инфекционные вирусные частицы формируются после упаковки дочерней вирусной РНК в вирусный капсид в цитоплазме инфицированной клетки. Так образуется вирусная частица, которая после лизиса клетки способна заражать новые клетки (этап 9 рис.3).

Рисунок 3. Схема репликации энтеровирусов [92].

Энтеровирусы используют около 10 различных рецепторов для связывания с мембраной клетки. Для ЭВ71 описано два рецептора, но точно не доказано какой именно использует вирус. Рецептор PSGL-1 (Р-selectin glycoprotein ligand-1) - белок, экспрессируемый на поверхности лейкоцитов, который играет важную роль во время ранних стадий воспаления. N-конец белка PSGL-1 - участок связывания с ЭВ71. На изолятах ЭВ71 из разных стран была выявлена штаммоспецифичность этого рецептора. Некоторые из изолятов не использовали рецептор PSGL-1 для проникновения в клетку [35].

Кроме того, ЭВ71 использует рецептор S CRAB-2 - это трансмембранный белок как с С- так и с N-терминальными цитоплазматическими хвостами, который локализуется в основном в

лизосомах и эндосомах. Белок SCRAB-2 участвует в трансмембранном переносе и реорганизации эндосомально-лизосомального компартмента. Описано связывание вируса с рецептором вне зависимости от штамма и типа ЭВ71. Кроме того, показано связывание CAV 16 с этим рецептором, что дает возможность предполагать использование SCRAB-2 и другими энтеровирусами [51].

1.2. Клинические особенности энтеровирусной инфекции.

Клинические проявления энтеровирусной инфекции отличаются чрезвычайным разнообразием. Энтеровирус одного и того же серотипа может вызывать разные клинические проявления, от легких лихорадочных форм до тяжелых паралитических заболеваний с высокой летальностью. В то же время, энтеровирусы разных серотипов могут вызывать сходные клинические синдромы. Энтеровирусная инфекция чаще всего протекает бессимптомно.

Несмотря на многообразие клинических форм течения заболевания, можно выделить синдромы и клинические формы, наиболее характерные для определенных видов и серотипов ЭВ.

Вирус полиомиелита преимущественно поражает нервную систему, и основными симптомами проявления инфекции являются параличи и конечностей различной степени тяжести, серозный менингит.

Инфекция представителями Коксаки вирусов типа А обычно протекает с появлением серозного менингита, герпангины, экзантемы, острого геморрагического конъюнктивита. Вирусы Коксаки типа Б также могут вызывать сыпь и серозный менингит, но еще и миокардиты и перикардит.

Большинство вирусов ECHO вызывают острое респираторное заболевание, серозный менингит.

Отдельно можно выделить энтеровирусы типа 70 и 71 в связи с их способностью вызывать эпидемии, а также в связи со способностью

приводить к летальным исходам (ЭВ 71). Энтеровирус 70 типа в 1970-80е годы вызвал двухволновую пандемию острого геморрагического конъюнктивита, который приводил к полному выздоровлению, но иногда течение осложнялось острым радикуломиелитом [91].

1.3. Клинические особенности ЭВ71 инфекции

Клиника — острый период. Клинические проявления заболеваний, вызываемых ЭВ71, наиболее полно представлены в работах [64; 68; 69; 73; 74; 75], посвященных изучению эпидемий ЭВ71 инфекции в Малайзии (1997 г.) и на Тайване (1998 г.).

Болезнь могла протекать в виде двух последовательно развивавшихся стадий.

Первая стадия - продромальный период и ящуроподобное заболевание (hand, foot and mouth disease, ЯПЗ) длилась около 3-5 дней. Симптомы: острое начало, повышение температуры до 38-39°С, головная боль, тошнота, рвота, боли в животе, жидкий стул, кашель, катаральные явления. На 1-2 день болезни наблюдали появление пятнисто-папулезной или везикулярной сыпи на руках, ногах, ягодицах, вокруг рта и в полости рта. Высыпания сохранялись в течение 24-48 часов, иногда до 8 дней, и затем бесследно исчезали. В части случаев (15%) отмечали поражения по типу герпангины. В целом, ЯПЗ имело сравнительно легкое течение и заканчивалось выздоровлением через 3-7 дней.

Вторая стадия - неврологические осложнения. Эта стадия чаще наблюдается у детей раннего возраста (6 месяцев — 3 года). Доля случаев с тяжелыми поражениями центральной нервной системы (ЦНС) была различной при разных вспышках ЭВ71 инфекции [73; 74; 75]. Доля тяжелых случаев инфекции была ниже в странах с развитой системой санэпиднадзора, скорее всего, из-за более полного выявления и учета легких случаев болезни.

Первые симптомы со стороны ЦНС появлялись обычно на 2-5 день после начала болезни. Поражение ЦНС могло возникать как при еще сохраняющихся высыпаниях на кожных покровах, так и после их исчезновения. Важно отметить, что в Юго-Восточной Азии все случаи неврологических поражений протекали на фоне ящуроподобных проявлений. Во время вспышки в Болгарии в 1975 г. дети с поражением ЦНС не имели ящуроподобных симптомов. По результатам клинических наблюдений [73; 75] неврологические осложнения при ЭВ71 инфекции могли включать в себя три основных синдрома:

— Серозный менингит. Симптомы: головная боль, рвота, повышение температуры, ригидность затылочных мышц, сонливость. В спинномозговой жидкости - плеоцитоз, отсутствие бактериальной флоры. Исход — чаще всего выздоровление без неврологических последствий.

— Острый вялый паралич (полиомиелитоподобное заболевание). Клиническая картина неотличима от спинальной формы полиомиелита. Симптомы: острое развитие мышечной слабости, парезы и параличи мышц, преимущественно мышц нижних и верхних конечностей. Исход -выздоровление; нередки случаи с сохранением остаточных явлений в виде длительного, иногда пожизненного нарушения двигательной активности.

— Стволовой энцефалит (ромбэнцефалит).

Для больных с поражением ЦНС была необходима срочная госпитализация. Все дети с III степенью тяжести стволового энцефалита нуждались в искусственной вентиляции легких и сердечно-легочной поддержке [73; 74; 75].

Согласно другой, более поздней системе классификации ЭВ71

инфекция включает 4е стадии: - (1) ЯПЗ; - (2) энцефалит (слабость

конечностей, летаргия, головная боль, рвота, закатывание глаз вверх,

судороги); - (3) дисфункция вегетативной нервной системы (нейрогенное

переполнение мочевого пузыря, паралич кишечника, кишечная

непроходимость, бессонница, профузное потение, гипергликемия,

18

лейкоцитоз, тахикардия); - (4) острый нейрогенный отек легких (тахипноэ, гипоксия, шок, кома, смерть). При остром отеке легких заболевание очень быстро прогрессировало. Происходило внезапное развитие тахикардии, тахипноэ, цианоза. Из 11, бывших под наблюдением детей, 9 умерли в течение 12 часов интубации и 2 ребенка умерли в течение последующих 17 дней - 3 месяцев [69].

Лечение.

В 2000-2002 гг. на Тайване была разработана и внедрена программа лечения ЭВ71 пациентов в зависимости от стадии заболевания. Эффективность схемы лечения была оценена на двух группах ЭВ71 пациентов с симптомами поражения ЦНС и сердечно-легочной недостаточности. В первой группе детей, не получавших постадийного лечения, умерло 17 (94%) из 18 пациентов, один выжил, но остался инвалидом. Во второй группе детей, получавших постадийное лечение, умерло 15 (41%) пациентов и 5 полностью выздоровели; у 16 (43%) детей жизнь удалось спасти, но у них сохранились тяжелые неврологические осложнения (дисфагия, гиповентиляция, слабость конечностей). Используемая терапия снизила частоту случаев смерти от сердечной недостаточности, вызванной ЭВ71, но у двух третей пациентов остались неврологические осложнения [65].

Ранняя госпитализация и раннее начало симптоматического лечения имеют ключевое значение для снижения риска тяжелых исходов при ЭВ71 нейроинфекции.

Во время вспышек ЯПЗ в Малайзии в 2000-2006 гт. своевременная госпитализация и раннее внутривенное введение иммуноглобулина позволила почти в 100 раз уменьшить процент летальности и процент тяжелых осложнений. Из 215 детей, получивших иммуноглобулин, у 204 (95%) наблюдали выздоровление. Из 9 детей, не получавших лечение иммуноглобулином, выжил только 1(11%) ребенок [36].

Специфических препаратов для лечения заболеваний, вызываемых ЭВ71, нет. В отдельных случаях для локализации очагов вспышек ЭВ71 успешно использовали живую оральную полиовирусную вакцину (ОПВ) [94].

В 1975 г. в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им М.П. Чумакова РАМН была разработана экспериментальная инактивированная вакцина против ЭВ71. В 1976 г. вакцина была применена для иммунизации детей в Болгарии. Было показан хороший иммунологический эффект по уровню антител [94]. На Тайване, Сингапуре и Японии ведутся исследования по разработке аттенуированных и генно-инженерных вакцин против ЭВ71 [60; 71; 82; 102].

Клиника - отдаленные последствия. У части детей, перенесших ЭВ71 нейроинфекцию, длительно сохранялись моторные, респираторные и психоэмоциональные нарушения [66; 76; 86].

Особого внимания заслуживают сообщения о длительном неблагоприятном воздействии ЭВ71 нейроинфекции на психоэмоциональное состояние детей.

Через 3-7 лет после перенесенной нейроинфекции разной степени тяжести у 17 из 86 детей были выявлены психоэмоциональные расстройства (снижение внимательности, гиперактивность, импульсивность, эмоциональные нарушения и снижение показателя 1(3) [72]. Психоневрологическое состояние особенно отчетливо страдает у пациентов, переживших сердечно-легочную недостаточность в сочетании с поражением ЦНС [66]. При долговременном наблюдении у 21 из 28 детей, имевших в анамнезе сердечно-легочную недостаточность с вовлечением ЦНС, отмечено снижение познавательной способности и показателя 1С). При этом отставание в умственном развитии имело место только у 1 из 20 пациентов, перенесших только тяжелое заболевание ЦНС без сердечно-легочной недостаточности. Механизмы длительных неврологических и психических воздействий ЭВ71 нейроинфекции на

состояние когнитивных способностей и психики детей недостаточно

понятны.

1.4.Сероэпидемиология и молекулярная эпидемиология ЭВ71 в мире

Эпидемиология ЭВ71 подробно изучена в эндемичных странах АТР, в меньшей степени - в Европе и США. В европейских и азиатских странах эпидемиологическая обстановка по ЭВ71 инфекции имеет принципиальные различия в количестве вовлеченных лиц, в основных симптомах течения заболевания, в исходе заболевания, вызванного ЭВ71, и в доминирующих субгенотипах вируса.

Л

Нидерланды

Англия

VB2

I В2 I

jCi

Австрия

о.< Болгария ш Венгрия

|В1

|В1

Норвегия

ГСП

Финляндия

Греция

США

I В2 I

C1 | С2 |

Австралия

н^н

си

CL

О X

го ш ьс о о

X

о

ае о

со <

Китай

Тайвань

□ В2

Вьетнам

Малайзия

Сингапур

Япония

Корея Индия Африка

1960

О-о-^

-о-

dW

1970

1980

1990

2000

2010 2011

Рисунок 4. Циркуляция субгенотипов ЭВ71 в мире. Треугольниками отмечены единичные случаи выделения ЭВ71. Рисунок взят из статьи [30] и доработан. Указаны источники, использованные для доработки рисунка [7; 79].

Вспышки ЭВ71 инфекции по странам.

Тайвань.

На территории Тайваня случаи инфекции ЭВ71 регистрировались начиная с 1980-х годов, и до 1998 года доминирующим был субгенотип В1 [16]. Во время эпидемии 1998 года регистрировалось 2 волны ЭВИ, охватившие более 129 тыс. человек. По некоторым данным, количество зарегистрированных случаев являлось менее 10% от всех заболевших [74]. Основными симптомами ЭВ71 инфекции были ЯПЗ. Из 129 тысяч, 405 человек были госпитализированы с тяжелыми осложнениями, из них 78 человек погибло. Среди погибших у 65 детей был обнаружен отек легких и легочные кровоизлияния, впервые описанные во время течения ЭВ71 инфекции. Среди госпитализированных было 80% детей до 5 лет, среди погибших 91%, смертность была значительно выше среди детей до 1 года [74]. Доминирующим субгенотипом, вызвавшим первую эпидемию ЭВ71, был субгенотип С2 и циркулировавший одновременно с ним генотипом В4 [16]. После первой и самой масштабной вспышки 1998 года в 1999 году произошла смена превалировавшего генотипа С на В4 [16]. В 2000 году была зарегистрирована эпидемия ЭВ71 на Тайване, вызванная генотипом В, было зарегистрировано 80677 человек с ЯПЗ, погиб 41 человек [99]. В другом источнике описано 25 и 26 случаев смерти в 2000 и в 2001 году, соответственно, вызванных субгенотипом В4. Основными клиническими синдромами ЭВ71 инфекции, вызвавшими летальный исход в 2000-2001 гг., были бульбарный и стволовой энцефалит и отек легких [81]. Циркуляция субгенотипа В4 продолжилась на территории Тайваня до 2003 года. На границе 2003 и 2004 годов произошла полная смена доминирующего субгенотипа ЭВ71 на С4 [16; 81]. В 2004-2005 годах также превалировал субгенотип С4 на Тайване [23]. Начиная с 2006 года, вспышки ЭВ71 инфекции на Тайване не регистрировались, но циркулировали новые для данной территории субгенотипы С5 и В5. Уже в 2007-2008 годах регистрировался новый подъем заболеваемости ЭВ71 [16].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ахмадишина, Людмила Васильевна, 2013 год

Список литературы

1. AbuBakar S., Sam I.C., Yusof J., Lim M.K., Misbah S., MatRahim N., Hooi P.S. Enterovirus 71 outbreak, Brunei // Emerg Infect Dis. 2009. T. 15. № 1. — C. 79-82.

2. Alexander J.P., Jr., Baden L., Pallansch M.A., Anderson L.J. Enterovirus 71 infections and neurologic disease—United States, 1977-1991 // J Infect Dis. 1994. T. 169. № 4. — C. 905-8.

3. Ang L.W., Phoon M.C., Wu Y., Cutter J., James L., Chow V.T. The changing seroepidemiology of enterovirus 71 infection among children and adolescents in Singapore // BMC Infect Dis. 2011. Т. 11. — C. 270.

4. Antona D., Leveque N., Chomel J.J., Dubrou S., Levy-Bruhl D., Lina B. Surveillance of enteroviruses in France, 2000-2004 // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2007. T. 26. № 6. — C. 403-12.

5. Badran S.A., Midgley S., Andersen P., Bottiger B. Clinical and virological features of enterovirus 71 infections in Denmark, 2005 to 2008 // Scand J Infect Dis. 2011. T. 43. № 8. — C. 642-8.

6. Bessaud M., Autret A., Jegouic S., Balanant J., Joffret M.L., Delpeyroux F. Development of a Taqman RT-PCR assay for the detection and quantification of negatively stranded RNA of human enteroviruses: evidence for false-priming and improvement by tagged RT-PCR // J Virol Methods. 2008. T. 153. № 2. — C. 182-9.

7. Bessaud M., Pillet S., Ibrahim W., Joffret M.L., Pozzetto В., Delpeyroux F., Gouandjika-Vasilache I. Molecular characterization of human enteroviruses in the Central African Republic: uncovering wide diversity and identification of a new human enterovirus A71 genogroup // J Clin Microbiol. 2012. T. 50. № 5. — C. 1650-8.

8. Chatproedprai S., Theanboonlers A., Korkong S., Thongmee C., Wananukul S., Poovorawan Y. Clinical and molecular characterization of

hand-foot-and-mouth disease in Thailand, 2008-2009 // Jpn J Infect Dis. 2010. T. 63. № 4. — C. 229-33.

9. Diedrich S., Weinbrecht A., Schreier E. Seroprevalence and molecular epidemiology of enterovirus 71 in Germany // Arch Virol. 2009. T. 154. №7. —C. 1139-42.

10. Druyts-Voets E. Epidemiological features of entero non-poliovirus isolations in Belgium 1980-94 // Epidemiol Infect. 1997. T. 119. № 1. — C. 71-7.

11. Gilbert G.L., Dickson K.E., Waters M.J., Kennett M.L., Land S.A., Sneddon M. Outbreak of enterovirus 71 infection in Victoria, Australia, with a high incidence of neurologic involvement // Pediatr Infect Dis J. 1988. T. 7. № 7. — C. 484-8.

12. Hagiwara A., Tagaya I., Yoneyama T. Epidemic of hand, foot and mouth disease associated with enterovirus 71 infection // Intervirology. 1978. T. 9. № 1. —C. 60-3.

13. Herrero L.J., Lee C.S., Hurrelbrink R.J., Chua B.H., Chua K.B., McMinn P.C. Molecular epidemiology of enterovirus 71 in peninsular Malaysia, 1997-2000 // Arch Virol. 2003. T. 148. № 7. — C. 1369-85.

14. Hilfenhaus J., Nowak T. Inactivation of hepatitis A virus by pasteurization and elimination of picornaviruses during manufacture of factor VIII concentrate // Vox Sang. 1994. T. 67 Suppl 1. — C. 62-6.

15. Huang S.W., Kiang D., Smith D.J., Wang J.R. Evolution of re-emergent virus and its impact on enterovirus 71 epidemics // Exp Biol Med (Maywood). 2011. T. 236. № 8. — C. 899-908.

16. Huang Y.P., Lin T.L., Kuo C.Y., Lin M.W., Yao C.Y., Liao H.W., Hsu L.C., Yang C.F., Yang J.Y., Chen P.J., Wu H.S. The circulation of subgenogroups B5 and C5 of enterovirus 71 in Taiwan from 2006 to 2007 // Virus Res. 2008. T. 137. № 2. — C. 206-12.

17. Huemer H.P., Ortner B., Huang C.W., Schmid D., Mutz I., Wewalka G., Yang J.Y., Allerberger F. Isolating Asian enterovirus 71 subgenogroup

81

C4 in two Austrian clinical samples from 2004 // Euro Surveill. 2008. T. 13. №28.

18. Jun T.Y., Pae C.U., Chae J.H., Bahk W.M., Kim K.S. Polymorphism of CTLA-4 gene for major depression in the Korean population // Psychiatry Clin Neurosci. 2001. T. 55. № 5. — C. 533-7.

19. Kapusinszky B., Szomor K.N., Farkas A., Takacs M., Berencsi G. Detection of non-polio enteroviruses in Hungary 2000-2008 and molecular epidemiology of enterovirus 71, coxsackievirus A16, and echovirus 30 // Virus Genes. 2010. T. 40. № 2. — C. 163-73.

20. Kehle J., Roth B., Metzger C., Pfitzner A., Enders G. Molecular characterization of an Enterovirus 71 causing neurological disease in Germany // J Neurovirol. 2003. T. 9. № 1. — C. 126-8.

21. Kennett M.L., Birch C.J., Lewis F.A., Yung A.P., Locarnini S.A., Gust I.D. Enterovirus type 71 infection in Melbourne // Bull World Health Organ. 1974. T. 51. № 6. — C. 609-15.

22. Khanh T.H., Sabanathan S., Thanh T.T., Thoa le P.K., Thuong T.C., Hang V.T., Farrar J., Hien T.T., Chau N., van Doom H.R. Enterovirus 71-associated Hand, Foot, and Mouth Disease, Southern Vietnam, 2011 // Emerg Infect Dis. 2012. T. 18. № 12.

23. Kung S.H., Wang S.F., Huang C.W., Hsu C.C., Liu H.F., Yang J.Y. Genetic and antigenic analyses of enterovirus 71 isolates in Taiwan during 1998-2005 // Clin Microbiol Infect. 2007. T. 13. № 8. — C. 782-7.

24. Li L., He Y., Yang H., Zhu J., Xu X., Dong J., Zhu Y., Jin Q. Genetic characteristics of human enterovirus 71 and coxsackievirus A16 circulating from 1999 to 2004 in Shenzhen, People's Republic of China // J Clin Microbiol. 2005. T. 43. № 8. — C. 3835-9.

25. Li W., Yi L., Su J., Lu J., Zeng H., Guan D., Ma C., Zhang W., Xiao H., Li H., Zhang Y., Lin J., Ke C. Seroepidemiology of human enterovirus71 and coxsackievirusA16 among children in Guangdong province, China // BMC Infect Dis. 2013. T. 13. — C. 322.

26. Ma E., Lam T., Chan K.C., Wong C., Chuang S.K. Changing epidemiology of hand, foot, and mouth disease in Hong Kong, 2001-2009 // Jpn J Infect Dis. 2010. T. 63. № 6. — C. 422-6.

27. McMinn P., Lindsay K., Perera D., Chan H.M., Chan K.P., Cardosa M J. Phylogenetic analysis of enterovirus 71 strains isolated during linked epidemics in Malaysia, Singapore, and Western Australia // J Virol. 2001. T. 75. № 16. —C. 7732-8.

28. McMinn P., Stratov I., Nagarajan L., Davis S. Neurological manifestations of enterovirus 71 infection in children during an outbreak of hand, foot, and mouth disease in Western Australia // Clin Infect Dis. 2001. T. 32. № 2. — C. 236-42.

29. McMinn P.C. An overview of the evolution of enterovirus 71 and its clinical and public health significance // FEMS Microbiol Rev. 2002. T. 26. № 1. —C. 91-107.

30. McMinn P.C. Recent advances in the molecular epidemiology and control of human enterovirus 71 infection // Curr Opin Virol. 2012. T. 2. № 2. — C. 199-205.

31. Merovitz L., Demers A.M., Newby D., McDonald J. Enterovirus 71 infections at a Canadian center // Pediatr Infect Dis J. 2000. T. 19. № 8. — C. 755-7.

32. Mirand A., Henquell C., Archimbaud C., Ughetto S., Antona D., Bailly J.L., Peigue-Lafeuille H. Outbreak of hand, foot and mouth disease/herpangina associated with coxsackievirus A6 and A10 infections in 2010, France: a large city wide, prospective observational study // Clin Microbiol Infect. 2012. T. 18. № 5. — C. El 10-8.

33. Mizuta K., Abiko C., Murata T., Matsuzaki Y., Itagaki T., Sanjoh K., Sakamoto M., Hongo S., Murayama S., Hayasaka K. Frequent importation of enterovirus 71 from surrounding countries into the local community of Yamagata, Japan, between 1998 and 2003 // J Clin Microbiol. 2005. T. 43. № 12. — C. 6171-5.

34. Munemura T., Saikusa M., Kawakami C., Shimizu H., Oseto M., Hagiwara A., Kimura H., Miyamura T. Genetic diversity of enterovirus 71 isolated from cases of hand, foot and mouth disease in Yokohama City between 1982 and 2000 // Arch Virol. 2003. T. 148. № 2. — C. 253-63.

35. Nishimura Y., Shimojima M., Tano Y., Miyamura T., Wakita T., Shimizu H. Human P-selectin glycoprotein ligand-1 is a functional receptor for enterovirus 71 // Nat Med. 2009. T. 15. № 7. — C. 794-7.

36. Ooi M.H., Wong S.C., Lewthwaite P., Cardosa M.J., Solomon T. Clinical features, diagnosis, and management of enterovirus 71 // Lancet Neurol. 2010. T. 9. № 11. — C. 1097-105.

37. Perez-Velez C.M., Anderson M.S., Robinson C.C., McFarland E.J., Nix W.A., Pallansch M.A., Oberste M.S., Glode M.P. Outbreak of neurologic enterovirus type 71 disease: a diagnostic challenge // Clin Infect Dis. 2007. T. 45. № 8. — C. 950-7.

38. Puenpa J., Theamboonlers A., Korkong S., Linsuwanon P., Thongmee C., Chatproedprai S., Poovorawan Y. Molecular characterization- and complete genome analysis of human enterovirus 71 and coxsackievirus A16 from children with hand, foot and mouth disease in Thailand during 2008-2011 // Arch Virol. 2011. T. 156. № 11. — C. 2007-13.

39. Rabenau H.F., Richter M., Doerr H.W. Hand, foot and mouth disease: seroprevalence of Coxsackie A16 and Enterovirus 71 in Germany // Med Microbiol Immunol. 2009. T. 199. № 1. — C. 45-51.

40. Sanders S.A., Herrero L.J., McPhie K., Chow S.S., Craig M.E., Dwyer D.E., Rawlinson W., McMinn P.C. Molecular epidemiology of enterovirus 71 over two decades in an Australian urban community // Arch Virol. 2006. T. 151. № 5. —C. 1003-13.

41. Schuffenecker I., Mirand A., Antona D., Henquell C., Chomel J.J., Archimbaud C., Billaud G., Peigue-Lafeuille H., Lina B., Bailly J.L. Epidemiology of human enterovirus 71 infections in France, 2000-2009 // J Clin Virol. 2010. T. 50. № 1. — C. 50-6.

42. Shimizu H., Utama A., Onnimala N., Li C., Li-Bi Z., Yu-Jie M., Pongsuwanna Y., Miyamura T. Molecular epidemiology of enterovirus 71 infection in the Western Pacific Region // Pediatr Int. 2004. T. 46. № 2. — C. 231-5.

43. Singh S., Chow V.T., Chan K.P., Ling A.E., Poh C.L. RT-PCR, nucleotide, amino acid and phylogenetic analyses of enterovirus type 71 strains from Asia // J Virol Methods. 2000. T. 88. № 2. — C. 193-204.

44. Solomon T., Lewthwaite P., Perera D., Cardosa M.J., McMinn P., Ooi M.H. Virology, epidemiology, pathogenesis, and control of enterovirus 71 // Lancet Infect Dis. 2010. T. 10. № 11. — C. 778-90.

45. Tagaya I., Takayama R., Hagiwara A. A large-scale epidemic of hand, foot and mouth disease associated with enterovirus 71 infection in Japan in 1978 // Jpn J Med Sci Biol. 1981. T. 34. № 3. — C. 191-6.

46. Tan C.Y., Gonfrier G., Ninove L., Zandotti C., Dubot-Peres A., de Lamballerie X., Charrel R.N. Screening and detection of human enterovirus 71 infection by a real-time RT-PCR assay in Marseille, France, 2009-2011 // Clin Microbiol Infect. 2012. T. 18. № 4. — C. E77-80.

47. Tran C.B., Nguyen H.T., Phan H.T., Tran N.V., Wills B., Farrar J., Santangelo J.D., Simmons C.P. The seroprevalence and seroincidence of enterovirus71 infection in infants and children in Ho Chi Minh City, Viet Nam // PLoS One. 2011. T. 6. № 7. — C. e21116.

48. Tu P.V., Thao N.T., Perera D., Huu T.K., Tien N.T., Thuong T.C., How O.M., Cardosa M.J., McMinn P.C. Epidemiologic and virologic investigation of hand, foot, and mouth disease, southern Vietnam, 2005 // Emerg Infect Dis. 2007. T. 13. № 11. —C. 1733-41.

49. van der Sanden S., van Eek J., Martin D.P., van der Avoort H., Vennema H., Koopmans M. Detection of recombination breakpoints in the genomes of human enterovirus 71 strains isolated in the Netherlands in epidemic

and non-epidemic years, 1963-2010 // Infect Genet Evol. 2011. T. 11. № 5. —C. 886-94.

50. Wu T.N., Tsai S.F., Li S.F., Lee T.F., Huang T.M., Wang M.L., Hsu K.H., Shen C.Y. Sentinel surveillance for enterovirus 71, Taiwan, 1998 // Emerg Infect Dis. 1999. T. 5. № 3. — C. 458-60.

51. Yamayoshi S., Yamashita Y., Li J., Hanagata N., Minowa T., Takemura T., Koike S. Scavenger receptor B2 is a cellular receptor for enterovirus 71 // Nat Med. 2009. T. 15. № 7. — C. 798-801.

52. Yang C., Deng C., Wan J., Zhu L., Leng Q. Neutralizing antibody response in the patients with hand, foot and mouth disease to enterovirus 71 and its clinical implications // Virol J. 2011. T. 8. — C. 306.

53. Yang F., Jin Q., He Y., Li L., Hou Y. The complete genome of Enterovirus 71 China strain // Sci China C Life Sci. 2001. T. 44. № 2. — C. 178-83.

54. Yang F., Ren L., Xiong Z., Li J., Xiao Y., Zhao R., He Y., Bu G., Zhou S., Wang J., Qi J. Enterovirus 71 outbreak in the People's Republic of China in 2008 // J Clin Microbiol. 2009. T. 47. № 7. — C. 2351-2.

55. Zeng M., El Khatib N.F., Tu S., Ren P., Xu S., Zhu Q., Mo X., Pu D., Wang X., Altmeyer R. Seroepidemiology of Enterovirus 71 infection prior to the 2011 season in children in Shanghai // J Clin Virol. 2012. T. 53. № 4. — C. 285-9.

56. Zhang Y., Zhu Z., Yang W., Ren J., Tan X., Wang Y., Mao N., Xu S., Zhu S., Cui A., Yan D., Li Q., Dong X., Zhang J., Zhao Y., Wan J., Feng Z., Sun J., Wang S., Li D., Xu W. An emerging recombinant human enterovirus 71 responsible for the 2008 outbreak of hand foot and mouth disease in Fuyang city of China // Virol J. 2010. T. 7. — C. 94.

57. Zhu Z., Zhu S., Guo X., Wang J., Wang D., Yan D., Tan X., Tang L., Zhu H., Yang Z., Jiang X., Ji Y., Zhang Y., Xu W. Retrospective seroepidemiology indicated that human enterovirus 71 and coxsackievirus

A16 circulated wildly in central and southern China before large-scale outbreaks from 2008 // Virol J. 2010. T. 7. — C. 300.

58. Li J.M., Zhang Y., Gao L., Liu H., Li L., Lu L.K., Yang D.J. [Seroepidemiology investigation of neutralizing antibody against enterovirus 71 among healthy people in Tianjin] // Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 2011. T. 32. № 6. — C. 568-70.

59. Ang L.W., Koh B.K., Chan K.P., Chua L.T., James L., Goh K.T. Epidemiology and control of hand, foot and mouth disease in Singapore, 2001-2007 // Ann Acad Med Singapore. 2009. T. 38. № 2. — C. 106-12.

60. Arita M., Nagata N., Iwata N., Ami Y., Suzaki Y., Mizuta K., Iwasaki T., Sata T., Wakita T., Shimizu H. An attenuated strain of enterovirus 71 belonging to genotype a showed a broad spectrum of antigenicity with attenuated neurovirulence in cynomolgus monkeys // J Virol. 2007. T. 81. № 17. —C. 9386-95.

61. Bible J.M., Iturriza-Gomara M., Megson B., Brown D., Pantelidis P., Earl P., Bendig J., Tong C.Y. Molecular epidemiology of human enterovirus 71 in the United Kingdom from 1998 to 2006 // J Clin Microbiol. 2008. T. 46. № 10. —C. 3192-200.

62. Brown B.A., Oberste S., Alexander J.P., Kennett M.L., Pallansch M.A. Molecular epidemiology and evolution of enterovirus 71 strains isolated from 1970 to 1998. // Journal of Virology. 1999. T. 73. — C. 9969-9975.

63. Cardosa M.J., Perera D., Brown B.A., Cheon D., Chan H.M., Chan K.P., Cho H., McMinn P. Molecular epidemiology of human enterovirus 71 strains and recent outbreaks in the Asia-Pacific region: comparative analysis of the VP1 and VP4 genes. // Emerging Infectious Diseases. 2003. T. 9. № 4. — C. 461-468.

64. Chan L.G., Parashar U.D., Lye M.S., Ong F.G., Zaki S.R., Alexander J.P., Ho K.K., Han L.L., Pallansch M.A., Suleiman A.B., Jegathesan M., Anderson L.J. Deaths of children during an outbreak of hand, foot, and mouth disease in Sarawak, malaysia: clinical and pathological

characteristics of the disease. For the outbreak study group. // Clin Infect Dis. 2000. T. 31. № 3. — C. 678-83.

65. Chang L.Y., Hsia S.H., Wu C.T., Huang Y.C., Lin K.L., Fang T.Y., Lin T.Y. Outcome of enterovirus 71 infections with or without stage-based management: 1998 to 2002. // Pediatr Infect Dis J. 2004. T. 23. № 4. — C. 327-332.

66. Chang L.Y., Huang L.M., Gau S.S., Wu Y.Y., Hsia S.H., Fan T.Y., Lin K.L., Huang Y.C., Lu C.Y., Lin T.Y. Neurodevelopment and cognition in children after enterovirus 71 infection // N Engl J Med. 2007. T. 356. № 12. —C. 1226-34.

67. Chang L.Y., King C.C., Hsu K.H., Ning H.C., Tsao K.C., Li C.C., Huang Y.C., Shih S.R., Chiou S.T., Chen P.Y., Chang H.J., Lin T.Y. Risk factors of enterovirus 71 infection and associated hand, foot, and mouth disease/herpangina in children during an epidemic in Taiwan // Pediatrics. 2002. T. 109. № 6. —C. e88.

68. Chang L.Y., Lin T.Y., Hsu K.H., Huang Y.C., Lin K.L., Hsueh C., Shih S.R., Ning H.C., Hwang M.S., Wang H.S., Lee C.Y. Clinical features and risk factors of pulmonary oedema after enterovirus-71 -related hand, foot, and mouth disease // Lancet. 1999. T. 354. № 9191. — C. 1682-6.

69. Chang L.Y., Lin T.Y., Huang Y.C., Tsao K.C., Shih S.R., Kuo M.L., Ning H.C., Chung P.W., Kang C.M. Comparison of enterovirus 71 and coxsackie-virus A16 clinical illnesses during the Taiwan enterovirus epidemic, 1998 // Pediatr Infect Dis J. 1999. T. 18. № 12. — C. 1092-6.

70. Chumakov M., Voroshilova M., Shindarov L., Lavrova I., Gracheva L., Koroleva G., Vasilenko S., Brodvarova I., Nikolova M., Gyurova S., Gacheva M., Mitov G., Ninov N., Tsylka E., Robinson I., Frolova M., Bashkirtsev V., Martiyanova L., Rodin V. Enterovirus 71 isolated from cases of epidemic poliomyelitis-like disease in Bulgaria // Arch Virol. 1979. T. 60. № 3-4. — C. 329-40.

71. Foo D.G., Alonso S., Chow V.T., Poh C.L. Passive protection against lethal enterovirus 71 infection in newborn mice by neutralizing antibodies elicited by a synthetic peptide // Microbes Infect. 2007. T. 9. № 11. — C. 1299-306.

72. Gau S.S., Chang L.Y., Huang L.M., Fan T.Y., Wu Y.Y., Lin T.Y. Attention-deficit/hyperactivity-related symptoms among children with enterovirus 71 infection of the central nervous system // Pediatrics. 2008. T. 122. № 2. —C. e452-8.

73. Ho M. Enterovirus 71: the virus, its infections and outbreaks // J Microbiol Immunol Infect. 2000. T. 33. № 4. — C. 205-16.

74. Ho M., Chen E.R., Hsu K.H., Twu S.J., Chen K.T., Tsai S.F., Wang J.R., Shih S.R. An epidemic of enterovirus 71 infection in Taiwan. Taiwan Enterovirus Epidemic Working Group. //N Engl J Med. 1999. T. 341. № 13. —C. 929-935.

75. Huang C.C., Liu C.C., Chang Y.C., Chen C.Y., Wang S.T., Yeh T.F. Neurologic complications in children with enterovirus 71 infection. // New England Journal of Medicine. 1999. T. 341. — C. 936-942.

76. Huang M.C., Wang S.M., Hsu Y.W., Lin H.C., Chi C.Y., Liu C.C. Long-term cognitive and motor deficits after enterovirus 71 brainstem encephalitis in children // Pediatrics. 2006. T. 118. № 6. — C. el785-8.

77. Huang S.W., Hsu Y.W., Smith D.J., Kiang D., Tsai H.P., Lin K.H., Wang S.M., Liu C.C., Su I.J., Wang J.R. Reemergence of enterovirus 71 in 2008 in taiwan: dynamics of genetic and antigenic evolution from 1998 to 2008 // J Clin Microbiol. 2009. T. 47. № 11. _ c. 3653-62.

78. Ishimaru Y., Nakano S., Yamaoka K., S. T. Outbreaks of hand, foot, and mouth disease by enterovirus 71. High incidence of complication disorders of central nervous system. // Arch Dis Child. 1980. T. 55. № 8. — C. 583-588.

79. J.M. Deshpande, S.S. Nadkarni, Francis P.P. Enterovirus 71 isolated from a case of acute flaccid paralysis in India represents a new genotype // Current science. 2003. T. 84. — C. 1350-1353.

80. Khetsuriani N., Lamonte-Fowlkes A., Oberste S., Pallansch M.A. Enterovirus surveillance-United States, 1970-2005 // MMWR Surveill Summ. 2006. T. 55. № 8. — C. 1-20.

81. Lin K.H., Hwang K.P., Ke G.M, Wang C.F., Ke L.Y., Hsu Y.T., Tung Y.C., Chu P.Y., Chen B.H., Chen H.L., Kao C.L., Wang J.R., Eng H.L., Wang S.Y., Hsu L.C., Chen H.Y. Evolution of EV71 genogroup in Taiwan from 1998 to 2005: an emerging of subgenogroup C4 of EV71 // J Med Virol. 2006. T. 78. № 2. — C. 254-62.

82. Lin Y.C., Wu C.N., Shih S.R., Ho M.S. Characterization of a Vero cell-adapted virulent strain of enterovirus 71 suitable for use as a vaccine candidate // Vaccine. 2002. T. 20. № 19-20. — C. 2485-93.

83. Nagy G., Takatsy S., Kukan E., Mihaly I., Domok I. Virological diagnosis of enterovirus type 71 infections: experiences gained during an epidemic of acute CNS diseases in Hungary in 1978 // Arch Virol. 1982. T. 71. № 3. —C. 217-27.

84. Nasri D., Bouslama L., Omar S., Saoudin H., Bourlet T., Aouni M., Pozzetto B., Pillet S. Typing of human enterovirus by partial sequencing of VP2 // J Clin Microbiol. 2007. T. 45. № 8. — C. 2370-9.

85. Nix W.A., Oberste M.S., Pallansch M.A. Sensitive, seminested PCR amplification of VP1 sequences for direct identification of all enterovirus serotypes from original clinical specimens // J Clin Microbiol. 2006. T. 44. № 8. — C. 2698-704.

86. Nolan M.A., Craig M.E., Lahra M.M., Rawlinson W.D., Prager P.C., Williams G.D., Bye A.M., Andrews P.I. Survival after pulmonary edema due to enterovirus 71 encephalitis // Neurology. 2003. T. 60. № 10. — C. 1651-6.

87. Oberste M.S., Mäher K., Kilpatrick D.R., Flemister M.R., Brown B.A., Pallansch M.A. Typing of human enteroviruses by partial sequencing of VP1. // J Clin Microbiol. 1999. T. 37. —C. 1288-1293.

88. Oberste M.S., Mäher K., Williams A.J., Dybdahl-Sissoko N., Brown B.A., Gookin M.S., Penaranda S., Mishrik N., Uddin M., Pallansch M.A. Species-specific RT-PCR amplification of human enteroviruses: a tool for rapid species identification of uncharacterized enteroviruses. // Journal of General Virology. 2006. T. 87. — C. 119-128.

89. Ooi E.E., Phoon M.C., Ishak B., Chan S.H. Seroepidemiology of human enterovirus 71, Singapore // Emerg Infect Dis. 2002. T. 8. № 9. — C. 995-7.

90. Ortner B., Huang C.W., Schmid D., Mutz I., Wewalka G., Allerberger F., Yang J.Y., Huemer H.P. Epidemiology of enterovirus types causing neurological disease in Austria 1999-2007: detection of clusters of echovirus 30 and enterovirus 71 and analysis of prevalent genotypes // J Med Virol. 2009. T. 81. № 2. — C. 317-24.

91. Pallansch M.A., Roos R.P. Enteroviruses: Polioviruses, Coxsackieviruses, Echoviruses, and Newer Enteroviruses // Fields Virology, Fourth Edition T. 1. Knipe D.M., Howley P.M. — Philadelphia : Lippincott-Raven, 2001. —C. 724-743.

92. Racaniello V.R. Enterovirus // Field's virology, fifth edition David Knipe, P.M. H. 5th edition, 2007.

93. Schmidt N.J., Lennette E.H., Ho H.H. An apparently new enterovirus isolated from patients with disease of the central nervous system. // J Infect Dis. 1974. T. 129. № 3. _ c. 304-309.

94. Shindarov L., Drozdov S., Grachev V., Umansky K., Nikolaevsky G., Levy S., Alpatova G., Zhuravel T., Butenko S., Bashkirtsev V. A study on anti-enterovirus 71 vaccine. — Bulgaria, Varna, 1978. — 385-388.

95. Stanway G. F.B., P. Christian, T. Hovi, T.Hyyhia, A.M.Q. King, N.J. Knowles, S.M. Lemon, P.D. Minor, M.A. Pallansch, A.C. Palmenberg, T.

91

Skern, in Family Picornaviridae, ed. by C.M. Fauquet, M.A. Mayo, J. Maniloff, U. Desselberg, L.A. Ball. Virus taxonomy, 8th Report of ICTV. Virus Taxonomy // ICTV. 2005. T. 8th report.

96. Tamura K., Dudley J., Nei M., Kumar S. MEGA4: Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) software version 4.0 // Mol Biol Evol. 2007. T. 24. № g. — C. 1596-9.

97. Tan E.L., Chow V.T., Kumarasinghe G., Lin R.T., Mackay I.M., Sloots T.P., Poh C.L. Specific detection of enterovirus 71 directly from clinical specimens using real-time RT-PCR hybridization probe assay // Mol Cell Probes. 2006. T. 20. № 2. — C. 135-40.

98. Tan E.L., Tak Kwong Chow V., Quak S.H., Yeo W.C., Poh C.L. Development of multiplex real-time hybridization probe reverse transcriptase polymerase chain reaction for specific detection and differentiation of Enterovirus 71 and Coxsackievirus A16 // Diagn Microbiol Infect Dis. 2008. T. 61. № 3. — C. 294-301.

99. Wang J.R., Tuan Y.C., Tsai H.P., Yan J.J., Liu C.C., Su I.J. Change of major genotype of enterovirus 71 in outbreaks of hand-foot-and-mouth disease in Taiwan between 1998 and 2000 // J Clin Microbiol. 2002. T. 40. № 1. —C. 10-5.

100. Welch J., Maclaran K., Jordan T., Simmonds P. Frequency, viral loads, and serotype identification of enterovirus infections in Scottish blood donors // Transfusion. 2003. T. 43. № 8. — C. 1060-6.

101. Witso E., Palacios G., Ronningen K.S., Cinek O., Janowitz D., Rewers M., Grinde B., Lipkin W.I. Asymptomatic circulation of HEV71 in Norway // Virus Res. 2007. T. 123. № 1. — C. 19-29.

102. Wu C.N., Lin Y.C., Fann C., Liao N.S., Shih S.R., Ho M.S. Protection against lethal enterovirus 71 infection in newborn mice by passive immunization with subunit VP1 vaccines and inactivated virus // Vaccine. 2001. T. 20. № 5-6. _ c. 895-904.

103. Wu Y., Yeo A., Phoon M.C., Tan E.L., Poh C.L., Quak S.H., Chow V.T. The largest outbreak of hand; foot and mouth disease in Singapore in 2008: the role of enterovirus 71 and coxsackievirus A strains // Int J Infect Dis. 2010. T. 14. № 12. —C.el076-81.

104. Yu H., Chen W., Chang H., Tang R., Zhao J., Gan L., Liu B., Chen J., Wang M. Genetic analysis of the VP1 region of enterovirus 71 reveals the emergence of genotype A in central China in 2008 // Virus Genes. 2010. T. 41. № 1. —C. 1-4.

105. Zhang Y., Tan X.J., Wang H.Y., Yan D.M., Zhu S.L., Wang D.Y., Ji F., Wang X.J., Gao Y.J., Chen L., An H.Q., Li D.X., Wang S.W., Xu A.Q., Wang Z.J., Xu W.B. An outbreak of hand, foot, and mouth disease associated with subgenotype C4 of human enterovirus 71 in Shandong, China // J Clin Virol. 2009. T. 44. № 4. — C. 262-7.