Модификация методики хемилюминесцентного анализа для оценки эффекта специфической гипосенсибилизации на экспериментальной модели тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Митерева, Дарья Евгеньевна

• Митерева, Дарья Евгеньевна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Митерева, Дарья Евгеньевна

Список основных сокращений

1 ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Специфическая иммунотерапия аллергических заболеваний и ^ ^ объективная оценка её эффекта

2.2. Хемилюминесцентный метод

2.2.1. Биохимические процессы, приводящие к ХЛ клеток

2.2.2. Активаторы ХЛ

2.2.3. Стимуляторы ХЛ фагоцитирующих клеток

2.2.4. ХЛ отдельных фракций клеток 26 2.3 .Участие фагоцитов в патогенезе аллергических реакций 27 2.4.Используемые варианты методик ХЛ анализа

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1.Материалы

3.1.1. Материалы и реагенты

3.1.2. Характеристика лабораторных животных

3.2.Методы

3.2.1. Схемы сенсибилизации экспериментальных животных

3.2.2. ХЛ метод исследования функциональной активности ^ гранулоцитов цельной крови

3.2.3. Определение белка в растворах

3.2.4. Морфофункциональное исследование популяции тучных ^ клеток у морских свинок

3.2.5. Определение фагоцитарной активности и фагоцитарного ^ индекса лейкоцитов морских свинок

3.2.6. Определение антител к БСНС 1дО класса

3.2.7. Подсчет количества форменных элементов

3.2.8. Статистическая обработка результатов

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Моделирование процесса сенсибилизации и ^ гипосенсибилизации

4.2.Модификация ХЛ анализа для исследования образцов цельной ^ крови морских свинок

4.2.1. Модификация ХЛ анализа для исследования образцов ^ цельной крови у интактных морских свинок

4.2.2. Изучение влияния количества лейкоцитов на показатели 65 ХЛ образцов цельной крови у разных морских свинок

4.2.3. Выбор оптимальной дозы аллергена для исследования ХЛ образцов крови сенсибилизированных морских свинок

4.2.4. Оценка влияния предварительной сорбции аэросила с аллергеном на показатели ХЛ у сенсибилизированных морских свинок

4.3.Оценка эффекта гипосенсибилизации у морских свинок

4.3.1. Оценка функциональной активности фагоцитов цельной ^ крови морских свинок методом ХЛ анализа

4.3.2. Оценка влияния гипосенсибилизации на ^ морфофункциональные характеристики ТК морских свинок

4.3.3. Оценка эффекта гипосенсибилизации у морских свинок £ ^ методом ИФА

4.3.4. Оценка влияния гипосенсибилизации на фагоцитарную ^ активность лейкоцитов у морских свинок

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Модификация методики хемилюминесцентного анализа для оценки эффекта специфической гипосенсибилизации на экспериментальной модели»

На сегодняшний день специфическая иммунотерапия (СИТ) является наиболее эффективным методом лечения аллергических заболеваний. В отличие от фармакотерапии СИТ действует на все патогенетически значимые звенья аллергического процесса, обеспечивая более длительную клиническую ремиссию заболевания.

СИТ проводится путем введения в организм больного малых доз аллергена, к которому установлена повышенная чувствительность, и концентрацию которого постепенно увеличивают в процессе лечения [24].

В настоящее время применяют различные схемы проведения СИТ, адекватность выбора которых оценивают преимущественно по наличию отрицательной динамики клинической картины аллергического заболевания. В качестве объективного критерия оценки эффекта СИТ в современной аллергологической практике используется ряд иммунологических тестов in vitro: ИФА; RAST; методы, основанные на исследовании ферментативной активности клеток - определение активности хлорацетат-АБ-О-эстеразы, миелопероксидазы (по Сато), щелочной фосфатазы (по Шубичу); реакция гистаминочувствительности нейтрофилов; реакция бактериального фагоцитоза; НСТ-тест и др. Однако многие из них не получили широкого применения в клинической практике, так как либо не дают четкой корреляции с клиникой, либо достаточно трудоемки. Кроме того, ряд тестов, как например, реакция дегрануляции тучных клеток, базофилов используется только в экспериментальной аллергологии в связи со сложностью их применения в условиях широкой клинической практики. Очевидно, что необходим поиск более информативных, и в тоже время простых и доступных диагностических тестов, использование которых сделает возможным не только адекватную оценку эффективности проведения СИТ, но и осуществлять своевременную коррекцию СИТ, и тем самым, снизить риск развития осложнений и повысить ее эффективность.

В этой связи, на наш взгляд, интерес представляет хемидюминесцентный (ХЛ) метод, который позволяет определять изменения функциональной активности клеток, в частности, гранулоцитов, в процессе их взаимодействия с различными агентами, в том числе и аллергенами [17].

Суть метода заключается в том, что под действием стимулирующего агента фагоцитирующая клетка - полиморфно-ядерный лейкоцит (ПМЛ) -переходит в состояние активации. При этом в ней происходит резкое усиление метаболических процессов, в частности, окисление глюкозы и последующий запуск всего гексозомонофосфатного цикла превращения углеводов. В результате генерируются активные формы кислорода (АФК), при взаимодействии которых выделяются кванты света -хемилюминесценция (ХЛ), причем интенсивность ХЛ коррелирует со способностью клетки вырабатывать АФК [22].

Как известно, максимальной светимостью среди всех фагоцитирующих клеток, способных при активации генерировать АФК, обладают полиморфно-ядерные нейтрофилы (ПЯН), и именно эти клетки вносят основной вклад в хемилюминесценцию клеток крови [10].

При аллергической реакции активация ПЯН происходит под воздействием комплекса медиаторов и биологически активных веществ [24], высвобождающихся из клеток-мишеней в ответ на действие специфического аллергена. Кроме того, согласно современным данным, существует возможность активации ПЯН и через ^-зависимый механизм, поскольку на этих клетках у человека была выявлена экспрессия высокоаффинного рецептора для 1{*Е (БсеЫ) [122]. Таким образом, хемилюминесценция ПЯН наиболее полно, отражает весь сложный каскад иммунных взаимодействий, развивающихся в процессе аллергической реакции. По изменению свечения ПЯН после воздействия того или иного аллергена можно судить как о наличии соответствующей сенсибилизации, так и об её уменьшении в процессе СИТ.

В ряде работ есть данные об использовании XJI метода в иммунологической и аллергологической практике. Так, с помощью XJI некоторые исследователи определяли наличие и степень сенсибилизации организма к тому или иному аллергену [17,71]. Однако разные авторы значительно расходятся в методологии проведения XJI анализа [4,5,17,19,33,44], применяя различный компонентный состав исследуемой пробы, в частности разные образцы (цельная кровь, лейкомасса), стимуляторы (зимозан, латекс, продигиозан, BaS04 и др.) и усилители XJI (люминол, люцигенин). Достаточно противоречивы данные по продолжительности регистрации XJI и ряду других параметров, что возможно связано с использованием различных приборов, каждый из которых обладал своей чувствительностью. При этом не во всех работах приводятся данные о калибровке прибора с помощью стандартного эталонного источника. Регистрируемые результаты XJI одни исследователи выражают в виде графиков, другие - в виде аналоговых значений, которые невозможно сравнить между собой.

В связи с этим целью исследования явилась адаптация метода XJI анализа гранулоцитов цельной крови для оценки in vitro эффекта специфической гипосенсибилизации экспериментальных животных.

Для достижения цели исследования были поставлены следующие ЗАДАЧИ:

1. Выбрать экспериментальную модель воспроизведения процессов сенсибилизации и гипосенсибилизации.

2. Отработать параметры метода детекции XJI гранулоцитов цельной крови экспериментальных животных.

3. Провести сравнительное динамическое исследование показателей ХЛ гранулоцитов цельной крови у интактных, сенсибилизированных и гипосенсибилизированных животных.

4. Оценить эффект гипосенсибилизации белком нормальной сыворотки свиньи (БСНС) экспериментальных животных по уровню специфических 1^0 антител и морфометрическим показателям тучных клеток.

5. Оценить диагностическую значимость разработанной методики детекции ХЛ в сравнении с методом фагоцитарной активности лейкоцитов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

В результате проведенных исследований получены следующие новые данные:

1. Разработана модификация методики детекции хемилюминесценции гранулоцитов цельной крови с введением дополнительного стимулятора ХЛ аэросила.

2. Показано, что предварительная инкубация аллергена с аэросилом повышает хемилюминесценцию гранулоцитов цельной крови сенсибилизированных морских свинок.

3. Установлено, что процесс гипосенсибилизации морских свинок сопровождается динамическим снижением ХЛ гранулоцитов в ответ на аллерген.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Модифицированный метод детекции ХЛ гранулоцитов цельной крови может быть использован для оценки динамики специфической гипосенсибилизации у экспериментальных животных (морские свинки) при создании и определении эффективности новых аллергенных препаратов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Разработанная схема проведения хемилюминесцентного анализа с использованием дополнительного стимулятора хемилюминесценции гранулоцитов аэросила, позволяет получать достоверные и воспроизводимые результаты, и может быть использована для оценки функциональной активности гранулоцитов под влиянием аллергена в эксперименте на морских свинках.

2. Изменение хемилюминесценции гранулоцитов цельной крови сенсибилизированных морских свинок в процессе гипосенсибилизации отражает снижение реактивности организма в ответ на воздействие специфического аллергена, что подтверждается уменьшением индекса дегрануляции ТК у гипосенсибилизированных морских свинок, а также нарастанием уровня специфических З^в антител в сыворотке этих животных.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Митерева, Дарья Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. Однократное внутрибрюшинное введение морским свинкам белка нормальной свиной сыворотки в дозе 7 мг вызывает стойкую сенсибилизацию в течение трех месяцев (в отличие от других экспериментальных животных) и позволяет воспроизвести у них классическую схему парентерального метода гипосенсибилизации.

2. Разработана модификация метода хемилюминесцентного анализа гранулоцитов цельной крови, заключающаяся в использовании аэросила в качестве дополнительного стимулятора хемилюминесценции.

3. Хемилюминесценция гранулоцитов сенсибилизированных морских свинок под влиянием аллергена в дозах от 10"4 до 10"6 мг увеличивается в два и более раза, в сравнении с интактными животными (р < 0,05).

4. Введение в течение двух месяцев морским свинкам возрастающих доз белка свиной сыворотки при проведении специфической гипосенсибилизации приводит к значимому (в два и более раза) снижению показателей хемилюминесценции гранулоцитов к концу первого месяца и соответствует таковым у интактных животных.

5. Специфическая гипосенсибилизация морских свинок, проводимая по классической схеме возрастающими дозами белка свиной сыворотки в течение двух месяцев, сопровождается увеличением уровня специфических антител, который сопоставим с таковым у гипериммунных животных.

6. Индекс дегрануляции тучных клеток в коже и слизистых оболочках воздухопроводящих путей у гипосенсибилизированных морских свинок (1,70±0,04) достоверно ниже, чем у сенсибилизированных (2,75±0,08; р<0,05), но выше, чем у интактных животных (1,53±0,04; р<0,05).

7. Фагоцитарная активность лейкоцитов не изменяется в процессе проведения гипосенсибилизации и не отличается от таковой у сенсибилизированных и интактных морских свинок.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Одним из наиболее перспективных направлений лечения аллергических заболеваний является специфическая иммунотерапия (СИТ). СИТ обладает таким терапевтическим эффектом, который распространяется на все этапы аллергического ответа и который отсутствует у известных фармакологических препаратов, в том числе и имеющих полифункциональную активность. Действие СИТ охватывает собственно иммунологическую фазу и приводит к переключению иммунного ответа с Th2-THna на Thl-тип, тормозит как раннюю, так и позднюю фазы немедленной (IgE-опосредованной) аллергической реакции, угнетает клеточную картину аллергического воспаления и неспецифическую тканевую гиперреактивность, обеспечивая длительную ремиссию заболевания [24,59].

В настоящее время используют различные схемы и способы введения лечебных аллергенов в организм. Но в то же время эффект СИТ в современной аллергологической практике оценивают преимущественно по наличию отрицательной динамики клинической картины аллергического заболевания. Несмотря на существование большого числа аллергологических тестов, таких как прямой и непрямой тесты дегрануляции тучных клеток, базофилов (ТДТК, НТДТК, ПБТ, НБТ Шелли), лейкопенический, тесты по определению уровня биологически активных веществ (гистамин, серотонин) и другие, ни один из них не позволяет достоверно in vitro оценить эффект СИТ. Следует отметить, что многие из тестов (ТДТК, НТДТК, ПБТ и др.) могут проводиться только на базе научно-исследовательских центров, ввиду сложности их применения в широкой клинической практике. Таким образом, возникает необходимость поиска новых информативных, но в то же время простых и доступных методов, позволяющих отслеживать динамику изменений, происходящих в организме при проведении СИТ, и своевременно вносить коррективы в лечение.

Кроме того, за время использования СИТ были разработаны различные ее модификации, связанные как со способами введения лечебных аллергенов, так и с использованием новых, в том числе и рекомбинантных форм этих препаратов [26,73,25]. Необходимым этапом внедрения последних является глубокое доклиническое изучение на адекватной экспериментальной модели.

В этой связи, на наш взгляд, интерес представляет хемилюминесцентный (ХЛ) метод, который позволяет определять изменения функциональной активности клеток в процессе их взаимодействия с различными агентами, в том числе и аллергенами [17]. Суть метода заключается в том, что под действием стимулирующего агента, [22,48] фагоцитирующая клетка - полиморфо-ядерный лейкоцит (ПЯЛ), переходит в состояние активации. Т.е., происходит резкое усиление в ней метаболических процессов, в частности окисление глюкозы и последующий запуск всего гексозомонофосфатного цикла превращения углеводов, в результате чего генерируются активные формы кислорода (АФК), взаимодействие которых сопровождается хемилюминесценцией. При этом интенсивность ХЛ коррелирует со способностью клетки вырабатывать АФК.

Таким образом, ХЛ метод позволяет объективно оценивать и изучать ранние стадии метаболических изменений, развивающихся в гранулоцитах при их активации, и количественно оценивать их активность. В ряде работ есть данные об использовании ХЛ метода в иммунологической и аллергологической практике. Так, с помощью ХЛ некоторые исследователи определяли наличие и степень сенсибилизации организма к тому или иному аллергену [17,71], что позволяет предположить возможность использования ХЛ метода для изучения и оценки течения аллергического процесса на фоне проведения специфической гипосенсибилизации.

Вместе с тем приводимые разными авторами данные значительно расходятся как в методологии проведения ХЛ анализа, так и в представлении получаемых результатов, что затрудняет их оценку.

В связи с вышеизложенным, целью нашего исследования явилась адаптация метода ХЛ для исследования функциональной активности гранулоцитов цельной крови у сенсибилизированных и гипосенсибилизированных животных.

Для воспроизведения процессов сенсибилизации мы использовали мышей, крыс и морских свинок. У последних мы получили самую высокую летальность (90%) на введение разрешающей дозы причинного аллергена, в отличие от мышей и крыс, у которых наряду с гибелью (80 % и 73 %) наблюдали тяжелое (20 % и 33 %) и легкое течение (6,6 % и 20%) аллергической реакции на введение разрешающей дозы аллергена. Кроме того, у морских свинок не происходит значительного спонтанного снижения степени сенсибилизации через три месяца после сенсибилизирующей инъекции. Так, анафилактический индекс у свинок через 15 недель после сенсибилизации составил 3,6, а у мышей и крыс анафилактический индекс к этому времени составил 1,4 и 1,2 соответственно. К тому же, у свинок возможен забор большего объема крови, чем у мышей и крыс за счет их большей массы. Таким образом, для отработки методики ХЛ и изучения процессов сенсибилизации и гипосенсибилизации морские свинки оказались оптимальной моделью.

При анализе вариантов ХЛ метода, описанных в литературе [70,33,50], мы остановили свой выбор на методике, предложенной Пирязевым А.П. [55], по ряду причин. Во-первых, в данной методике предполагается использование цельной крови, что упрощает метод, а также позволяет избегать потери клеток крови, возникающей при выделении отдельных фракций лейкоцитов и искажения результатов исследования вследствие неспецифического воздействия на клетки сред выделения [15]. Кроме того, исследование дельной крови отражает активацию нейтрофилов в условиях их кооперированного взаимодействия с другими клетками крови и выделяемыми ими медиаторами под действием специфического аллергена [2]. Во-вторых, автор предлагает использовать для стимуляции фагоцитов цельной крови сульфат бария. Суспензия трудно-растворимой соли сульфата бария (ВаЭ04) отличается большим постоянством физико-химических свойств в сравнении с другими известными по литературе стимуляторами (опсонизированный зимозан, опсонизированный латекс, бактерии, изолированные оболочки дрожжевых клеток и другие) [55]. Его преимущество заключается в том, что лейкоциты с частицами ВаБС^ быстро оседают на дно кюветы, приближаясь к фотокатоду фотоумножителя, что приводит к резкому снижению экранирующего эффекта эритроцитов, вызванного их способностью поглощать кванты света. Учитывая вышеизложенное мы использовали эту методику в качестве прототипа.

При проведении исследований по схеме прототипа значения показателей ХЛ цельной крови интактных морских свинок находились в пределах фоновых значений, что, по-видимому, связано с различиями в конструкции используемых приборов. Увеличение объёма исследуемого образца крови, количества усилителя ХЛ (люминола), концентрации стимулятора (ВаЗС^) не привело к значимым отличиям от фоновых показателей. Возможным объяснением этого является неодинаковый размер частиц ВаЭ04, и за счет высокой скорости их осаждения, вероятно, не все клетки в исследуемом образце цельной крови успевают фагоцитировать эти частицы и активироваться. Однако, Ва804 снижает экранирующий эффект эритроцитов [15] при исследовании цельной крови как раз за счет своей высокой скорости осаждения, поэтому мы не отказались от него, но сочли необходимым использовать дополнительный стимулятор аэросил, представляющий собой гидрофильный высокодисперсный порошок двуокиси кремния, с однородными частицами размером 20 мкм.

В литературе имеются данные о применении производных кремния в качестве стимулятора «дыхательного взрыва» лейкоцитов. В частности, использовали пылевые частицы, приготовленные путем растирания и фракционирования кусков скального материала цеолита (алюмосиликата сложного состава) клиноптиолита [9]. Была зарегистрирована ХЛ крови, стимулированная пылевыми частицами кремнезема, которые в своем составе, в основном содержат двуокись кремния (БЮг) [36]. Полагают, что частицы кремния связываются с клетками посредством образования множественных водородных связей, вызывая активацию ферментных систем лейкоцита с последующим дыхательным взрывом. Важно использование для индукции ХЛ оптимальной концентрации частиц, так как лишь при ней практически все фагоциты контактируют с частицами одновременно, что обусловливает явление синхронного фагоцитоза и стабильность этого показателя [81].

В этой связи при отработке оптимальных условий реакции мы апробировали два варианта взаимодействия фагоцитирующих клеток с частицами стимуляторов. В одном варианте мы добавляли в кювету ХЛ одновременно оба стимулятора и образец крови, а в другом предварительно инкубировали образец крови с аэросилом и средой Хенкса бесцветного в лунке иммунологического планшета при 37°С, а затем добавляли проинкубированную смесь в кювету ХЛ с сульфатом бария. При этом во втором варианте было получено резкое (в 12 раз) увеличение регистрируемых показателей ХЛ, а в первом варианте достоверных отличий от значений фоновых показателей не было. Таким образом, мы пришли к заключению, что оптимальные условия для активации гранулоцитов и, соответственно, усиления ХЛ, создаются в среде с однородными, а не с гетерогенными частицами-стимулами.

При дальнейшей отработке параметров реакции наименьшая концентрация аэросила, позволяющая получать достоверные отличия от фоновых значений оказалась 0,5 М/мл.

Значения ХЛ гранулоцитов цельной крови зависели также от времени предварительной инкубации крови с аэросилом и максимальными они оказались при инкубации в течение 25 мин.

Динамика индуцированного стимуляторами свечения характеризовалась подъёмом в течение 10 мин, фазой плато в течение 15 мин и постепенным снижением интенсивности свечения. Выбор времени регистрации ХЛ основывали на учете показателей до фазы снижения свечения, которое составило 25мин.

Большинство авторов используют процедуру стандартизации исследуемого образца по количеству лейкоцитов, [28,33,44,82]. Мы установили, что интенсивность свечения не зависела от количества лейкоцитов в исследуемом образце. Об этом свидетельствовал характер распределения показателей ХЛ образцов крови с разным числом лейкоцитов. По-видимому, интенсивность ХЛ определяется в большей степени их функциональным состоянием, что соотносится с данными, полученными другими авторами [19,56]. В связи с этим, мы не стандартизовали пробу по числу лейкоцитов, что упрощает метод.

В литературе [17,71] описан эффект угнетения ХЛ под действием высоких доз специфического аллергена и обратный - усиление ХЛ при малых дозах. Причем было установлено, что сам аллерген не является стимулятором, т.е. не активирует клетки с последующей вспышкой ХЛ, но препятствует её развитию при больших дозах аллергена и способствует увеличению амплитуды вспышки при малых дозах. Мы также показали, что аллерген оказывает как угнетающий, так и усиливающий эффект на ХЛ гранулоцитов цельной крови сенсибилизированных морских свинок. Причем в нашем исследовании усиливающий эффект был обнаружен в диапазоне доз 10"3 - 10"6 мг. В том же диапазоне доз у интактных животных изменения ХЛ гранулоцитов цельной крови не происходило. Это, по-видимому, свидетельствует о специфическом влиянии аллергена на клетки сенсибилизированного животного.

При этом мы установили, что предварительная инкубация аэросила с аллергеном, в течение 6 и 24 часов оказывала более выраженное усиливающее влияние на регистрируемые показатели ХЛ.

Таким образом, мы отработали схему проведения ХЛ анализа для оценки специфической активации гранулоцитов цельной крови под влиянием аллергена, в которой подобраны оптимальные соотношения компонентов реакционной среды, определены временные параметры инкубации образца цельной крови со специфическим аллергеном и продолжительность регистрации ХЛ.

Результаты использования модифицированного метода хемилюминесценции цельной крови для оценки сенсибилизации и гипосенсибилизации на морских свинках показали, что динамика изменения ХЛ гранулоцитов цельной крови морских свинок в процессе гипосенсибилизации в течение двух месяцев принципиально отличается от динамики изменения ХЛ сенсибилизированных животных и характеризуется резким снижением показателей ХЛ в течение первого месяца терапии, причем достоверные различия по сравнению с исходными наблюдали уже через две недели от начала терапии. В течение второго месяца изменение показателей ХЛ характеризовалось более постепенным снижением, в отличие от сенсибилизированных морских свинок, у которых значительного изменения показателей ХЛ в конце исследования по сравнению с исходными не было. Таким образом, уменьшение ХЛ гранулоцитов цельной крови у гипосенсибилизированных морских свинок произошло под влиянием терапии, поскольку в группе сравнения (у сенсибилизированных морских свинок) этого же эффекта не наблюдали. В этой связи можно заключить, что снижение ХЛ клеток в ответ на воздействие специфического аллергена отражает снижение степени сенсибилизации организма.

Эффект гипосенеибилизации был подтвержден данными морфометрического анализа популяции тучных клеток (ТК) при исследовании гистологических срезов органов, полученных от животных всех трех групп после эвтаназии. При этом установили, что воздействие специфического аллергена у сенсибилизированных морских свинок вызывает генерализованную и в равной мере выраженную дегрануляцию популяции тучных клеток как в стенке воздухопроводящих путей, так и в коже. Показатели индекса дегрануляции ТК как в коже, так и воздухопроводящих путях в группе животных со специфической гипосенсибилизацией были ниже, чем у сенсибилизированных морских свинок, однако по сравнению с интактными оставались более высокими. При этом абсолютное количество тучных клеток в коже, бронхах и трахее в исследуемых группах не различалось. Таким образом, определено влияние гипосенсибилизации на морфофункциональные характеристики ТК сенсибилизированных морских свинок. Уже на ранней стадии лечения - сразу после проведения первичного курса аппликации специфического аллергена отмечалось изменение индекса дегрануляции, тогда как количественные изменения ТК в наших экспериментах на этой стадии еще не наступали.

Результаты этих экспериментов, свидетельствующих о том, что число ТК в коже, бронхах и трахее морских свинок при гипосенсибилизации остается на уровне сенсибилизированных животных, соотносятся с данными, полученными другими авторами [151], согласно которым через месяц после начала иммунотерапии достоверного изменения числа ТК в соскобах слизистой оболочки носовых раковин больных аллергическим ринитом не было обнаружено. В этой же работе показано, что иммунотерапия аллергенами в течение последующих трех и шести месяцев сопровождается достоверным снижением числа ТК и уменьшением симптомов аллергического ринита.

Кроме того, эффект гипосенсибилизации оценили по уровню специфических антител к белку свиной сыворотки в сыворотках от сенсибилизированных и гипосенсибилизированных морских свинок в конце девятой недели эксперимента. Показали, что гипосенсибилизация сопровождается существенным (в 2,5 раза) увеличением уровня специфических антител к аллергену по сравнению с сенсибилизированными морскими свинками. Причем у гипосенсибилизированных свинок уровень специфических 1^0 антител был сопоставим с таковым у гипериммунных морских свинок. Полученные в этом исследовании результаты, согласуются с данными литературы [24,59], согласно которым, одним из вероятных механизмов СИТ является образование «блокирующих антител», принадлежащих к классу 1^0 антител. Большое число сведений, полученных путем определения «блокирующей» активности сыворотки крови больных, прошедших повторные курсы СИТ, подтверждают предположение о том, что продукция ^О-блокирующих антител является важной составляющей противоаллергического действия СИТ. [73,26].

Для изучения влияния сенсибилизации и гипосенсибилизации на фагоцитарную способность лейкоцитов у морских свинок в динамике, использовали метод определения бактериального (культуры <5. еМегШсИя штамм 921) фагоцитоза. Однако фагоцитарные индексы лейкоцитов в течение всего периода наблюдения достоверно не различались у животных всех трех групп морских свинок, то есть для оценки эффекта гипосенсибилизации у морских свинок данный метод оказался не информативным. В то же время данные литературы свидетельствуют о том, у людей, страдающих аллергическими заболеваниями, происходит изменение фагоцитарной активности нейтрофилов [170]. Так, показатели фагоцитоза у детей с атопической бронхиальной астмой были ниже, чем у здоровых, причем адгезивные свойства нейтрофилов четко коррелировали с тяжестью и продолжительностью бронхоспастического синдрома [97].

Таким образом, разработанная схема проведения ХЛ анализа с применением дополнительного стимулятора ХЛ гранулоцитов аэросила может быть использована для оценки функциональной активности гранулоцитов под влиянием аллергена в эксперименте на морских свинках.

Изменение ХЛ гранулоцитов цельной крови сенсибилизированных морских свинок в процессе гипосенсибилизации отражает снижение реактивности клеток в ответ на воздействие специфического аллергена, что подтверждается уменьшением индекса дегрануляции ТК у гипосенсибилизированных морских свинок, а также нарастанием уровня специфических антител в сыворотке этих животных.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Митерева, Дарья Евгеньевна, 2004 год

1. Агафонов В.Е. Разработка иммуноферментных тест-систем для количественного определения IgG-, ^С4-антител и их выявление при аллергической патологии человека. Дисс. к.м.н., М. 1996, с.77-87.

2. Адаменко Г.П. Кооперативное взаимодействие поли- и мононуклеарных фагоцитов крови человека: влияние совместного культивирования на их хемилюминесценцию и секрецию миелопероксидазы. Иммунология 1993, 5, с.26-29.

3. Адо A.A. Общая аллергология. Москва, Медицина, 1978, с. 286.

4. Бакуев М.М. , Саидов М.З. и др. Особенности секреции миелопероксидазы и хемилюминесцентного ответа нейтрофилов человека при контакте со стимуляторами различной природы. Иммунология 1991,1, с. 15-16.

5. Барсуков A.A., Филатов A.B. Хемилюминесцентный анализ фагоцитоза макрофагов. Иммунология 1983,2, с 63-66.

6. Бахов И.И.,Александрова Л.З.,Титов В.Н. Нейтрофилы и их роль в регуляции метаболизма тканей. Успехи соврем.биол. -1987. Т. 104, 2. - с.281-296.

7. Беклемишев Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция. Медицина, 1986, с.256.

8. Величковская Е.Б. Естественный иммунитет при аллергическом воспалении. Автореферат дисс. на соиск. уч. степ, д.м.н., М., 1980.

9. Величковский В.И., Владимиров Ю.А. и др. Исследование взаимодействия макрофагов с пылевыми частицами хемилюминесцентным методом. В кн.: 1 Всесоюзн. биофиз. съезд. М., АН СССР, 1982, т.З, с.161.

10. Владимиров Ю.А. Активированная ХЛ и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследованиях. Зап. Соросовск. обр. ж. 2001, 7,1, с. 16-23.

11. Владимиров Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции. Зап. Соросовск. обр. ж. 2001, 6,1

12. Владимиров Ю.А. Свободнорадикадьное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран Биофизика. 1987, Т.32, 5,с.830-844.

13. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. Москва, Паука, 1972, с. 45.

14. Владимиров Ю.А., Крайнина М.В., Клебанов Г.И., Рибаров С.Р., Бочев П.Г., Бенов Л.Ц. Влияние окисленных фосфолипидов липосомалъных мембран на активность полиморфно-ядерных лейкоцитов крови.- Биологические мебраны, 1988, т.5,11, с. 1192-1198.

15. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Основы хемилюминесцентного диагноза. В кн.: Биофизические методы диагностики. М.: Тр. 2-го Мед. ин-та, с. 23-28,

16. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных. М.: ВИНИТИ, 1989, с. 176.

17. Вознесенский Н.К., Манеркина Н.С. Хемилюминесценция нейтрофилов в аллергодиагностике. Клиническая лабораторная диагностика 1999, 8, с. 18-20.

18. Гаврилов O.K., Козинец Г.И., Черняк Н.Б. Клекти костного мозга и периферической крови. М.: Медицина, 1985,286с.

19. Галеева К.Р.Диагностика, лечение и прогноз бронхитов у детей раннего возраста на основе ХЛ нейтрофилов крови. Дисс. к.м.н., с. 6574.

20. Говорова Н.Ю., Пызлова С.Н.,Шаронов Б.П.,Янковский О.Ю. Особенности хемилюминесценции люминола, возбуждаемой при каталитическом действии миелопероксидазы. Биохимия. 1987. Т. 52, 10, С.1670-1676.

21. Гончарук О.Н. Функциональные особенности нейтрофилов периферической крови здоровых детей и больных бронхиальной астмой: Автореф.канд.дисс. Красноярск, 1975, с. 25.

22. Гриневич Ю.А., Барабай В.А. Хемилюминесцентный метод в иммунологии. ЖМЭИ 1986,1, с. 91-97.

23. Гурвич А.Г. Митогенетическое излучение. М., Госмедиздат, 1934.

24. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль. М, 1998, с. 124-129.

25. Гущин И.С. Преимущества СИТ и возможные пути её совершенствования. Аллергология. С-Петербург, 1998, 3, 3-7.

26. Гущин И.С. Специфическая иммунотерапия как перспективный метод противоаллергического лечения. Иммунология, 1997, 2, с. 4-8.

27. Гущин И.С., Зебрев А.И., Свиридов В.В., Богуш H.A. и др. Экспериментальная модель для разработки и оценки способов контроля немедленной аллергии. Патологическая физиология и экспериментальная терапия, 1986,4, с. 18-23.

28. Дорохина H.A., Савченко A.A., Чесноков А.Б. Использование специфических антигенных препаратов в качестве индукторов дыхательного взрыва лейкоцитов крови при XJI анализе. Клин. лаб. диагн., 2001,1, с. 39-43.

29. Земсков В.М., Барсуков A.A. Изучение функционального состояния фагоцитов человека (кислородный метаболизм и подвижность клеток). В кн. Экологическая иммунология, М. ВНИРО 1995, с 159.

30. Ишимова JI.M. Тучные клетки как аппарат аллергической реактивности. Проблемы реактивности в патологии. Вып.1, М., 1968, с. 101.

31. Казаманов В.А., Шаров B.C. Применение физических активаторов на основе редкоземельных ионов в хемилюминесцентноманализе плазмы крови. Препринт № 11/450/М: ИРЭ АН СССР, 1986, с. 20.

32. Каральник Б.В., Царевский Ю.П., Шамардин В.А. Эритроцитарные диагностикумы. Алма-Ата, Наука, 1981,с 152.

33. Караулов A.B. Исследование фагоцитарной активности лейкомассы крови методом хемилюминесценции. Иммунология 1986, 6, с.75-76.

34. Клебанов Г.И. Туркменова Э.М. .прейнина Ь;.В.и др. Гетерогенность рецепторного аппарата полиморфноядерных лейкоцитов крови. Биол.мембраны. 1987, 4, 10, с. 1084-1089.

35. Коркина Л.Г., Суслова Т.Б. и др. Механизм цитотоксического действия цеолита клиноптиолита. Фармакол. токсикол. 1984, 5, с. 6367.

36. Коростовцев Д. С., Макарова И.В. Специфическая гипосенсибилизация при атопических заболеваниях в детском возрасте. Мет. реком. С-Петербург, 1995, 36 с.

37. Крымкина Т.Н., Ганковская Л.В., Соколова Е.В., Петров Р.В. Оценка спонтанной миграции лейкоцитов in vitro при продукции фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов крови у человека. Москва, 1983, с. 14.

38. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа. М. Медицина, 1986. с 224.

39. Лабинская A.C. Микробиология с техникой микробиологических методов исследования. М. Медицина 1968, с. 162-163.

40. Ленхофф Г. Иммуноферментный анализ. Пер. с анг. Москва, Мир, 1988.

41. Линднер Д.П., Поберий И.А., Розкин М.Я. и др. Морфометрический анализ популяции тучных клеток. Архив патологии. М.1980, 6, с.60-64

42. Лобашевский А.Л., Давыдова Н.В. Методические подходы к изучению хемилюминесценции клеток. Клин. лаб. диагн., 1992, 11-12, с.54-58.

43. Лопухин Ю.М., Владимиров Ю.А., Молоденков М.Н., Клебанов Г.И. и др. Регистрация хемилюминесценции составных частей сыворотки крови в присутствии двухвалентного железа. Бюлл. Эксп. Биол., 1983, т. 95, № 2, с.61-63.

44. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н., Владимиров Ю.А., Сергиенко В.И., Клебанов Г.И., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция липопротеидов сыворотки крови в присутствии двухвалентного железа. В кн.: 1Всесоюзн. биоф. съезд. М.: АН СССР, 1982, т.З, с.159.

45. Маянский А.Н. Галиуллин А.Н. Реактивность нейтрофила. Казань,1984, с 160.

46. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л. Реактивная ХЛ в системе фагоцитоза. ЖМЭИ, 1987,7, с. 109-114.

47. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань. «Магариф», 1993, с. 15,101.

48. Москаленко Е.П., Тюкавкина С.Ю. Использование ХЛ для оценки физиологического состояния макрофагов, активированных коклюшными препаратами. ЖМЭИ, 1999, 6, с. 54-56.

49. Невмятуллин А. JI., Воробьева О.Н., Маянский А.Н. Нейтрофилстимулирующая активность стафилококков по данным реактивной хемилюминесциенции. Журн. Микробиол. 1985,7,с. 67-70.

50. Нестерова И.В. и др. Диагностика изменений в микробоцидной системе нетрофилов при аллергических заболеваниях. Мет. реком. Краснодар, 1989, с. 46.

51. Нестерова И.В., Сидельникова Л.В. дисфункции нейтрофилов при аллергической патологии у детей. Педиатрия, 1986,19, с. 12-15.

52. Парцалис Е.М., Ревякина В.А. Состояние местного иммунитета пищеварительного тракта у детей с пищевой аллергией. Педиатрия, 1983,12, с. 19-22.

53. Пирязев А.П. Методика регистрации люминолзависимой хемилюминесценции цельной крови стимулированной кристаллами сульфата бария.// Вопросы хемилюминесценции. 1991, Т 2 №2, с. 2022.

54. Пирязев А.П. Хемилюминесценция фагоцитов цельной крови, стимулированная кристаллами сульфата бария. Дисс. кмн, М. 1996, с 93, 100.

55. Пол У. Иммунология в 3-х томах. М., Мир, с. 1987-1988.

56. Порядин Г.В. Аллергия и иммунопатология. М., ВУНМЦ МЗ РФ, 1999, с. 96-105.

57. Предтеченский В.Е. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. Издание 6 под редакцией Е.А. Кост и Л.Г. Смирновой 1964, с.

58. Присяжнюк В.JI. Сравнительная характеристика функциональной активности нейтрофилов (методом хемилюминесцентного анализа) больных поллинозом в ремиссии и обострении. Дисс. к.м.н, М. 1993, с. 40-51.

59. Пыцкий В. И., Адрианова Н.В. ,Артомасова А. В. Аллергические заболевания. М. Медицина, 1991, с. 368.

60. Радунская С.Ф. Тест непрямой дегрануляции тучных клеток для оценки специфической активности неспецифических аллергенов. Дисс. кмн 1982, с. 54-59.

61. Раппопорт Д.Х., Гончарук З.Н. Функциональные свойства нейтрофилов крови у детей больных бронхиальной астмой. Педиатрия. 1974, 7, С.48-52.

62. Рудык Б.И. Изменение активности пероксидазы лейкоцитов у больных бронхиальной астмой. Врачебн. Дело, 1975. 8, с.65-67.

63. Скепьян H.A. Аллергические болезни. Минск «Беларусь» 2000, с. 40.

64. Соодаева С.К. Активация НАДФН-оксидазы фагоцитов пылевыми частицами. Бюл. экспер. биол.1996 с. 65-66.

65. Фархутдинов P.P., Кантюков С.А., Ахмадеев Р.И. Хемилюминесценция мочи, индуцированная ионами двухвалентного железа. Лаб. дело, 1986, 5, с. 263-267.

66. Фархутдинов P.P., Кантюков С.А., Ахмадеев Р.И., Загидуллин И.М. Способ диагностики почечной патологии. А. с. №1310727, СССР от 15.01.1987.

67. Фархутдинова Л.В., Фархутдинов P.P. Люминолзависимая ХЛ цельной крови у часто болеющих детей. Клин. лаб. диагн., 2000, 2, с13-16.

68. Филатов О.Ю. Анализ изменений хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови при аллергии немедленного типа. Дисс. к.м.н., М 1992.

69. Фрадкин В.А. Аллергодиагностика in vitro. Москва, Медицина, 1985, с.143.

70. Хаитов P.M., Балаболкин И.И., Рылеева И.В., Червинская Т.А., Бабахин A.A. Иммунотерапия при бронхиальной астме. Иммунология, 1993, 6, с. 4-7.

71. Хаитов Р.Х., Гущин И.С., Пинегин Б.В., Зебрев А.И. Экспериментальное изучение иммунотропной активности фармокологических препаратов. Ведомости фармакологического комитета, 1999,1 с 35-36.

72. Черняк Б.А., Воржева Е.О., Сукманская Е.О. Реактивность бронхов и её изменение у больных пыльцевой бронхиальной астмой в процессе СИТ. Астма, 2000, т.1, с. 69-76.

73. Шабалин В.И., Серова Л.Д. Клиническая иммуногематология. Л., 1988

74. Шаров B.C., Владимиров Ю.А. Активация хемилюминесценции липосом при перекисном окислении липидов ионами тербия (III). Биофизика, 1984, т.29,3, с.394-397.

75. Шаров B.C., Суслова Т.Б., Деев А.Н., Владимиров Ю.А. Активация хемилюминесценции при перекисном окислении липидов комплексом европий-тетрациклин. Биофизика, 1980, т.25, 5, с.923-924.

76. Шерстнев М.П. Аденилатциклазная система регуляции хемилюминесцентного ответа фагоцитов. Вопросы хемилюминесценции 1990 т.1,1, с.1-7.

77. Ярилин A.A. Основы иммунологии. М. Медицина. 1999, с. 118120.

78. Яркова Л.Н., Васин Ю.А., Дубровская Е.С., Земсков В.М.Анализ хемилюминесценции при синхронном фагоцитозе макрофагов. Иммунология 1986, 3, с. 31-34.

79. Яшин М.М. Хемилюминесцентный метод в диагностике небактериальной аллергии и ускоренная гипосенсибилизирующая терапия больных атопическим дерматитом. Дисс. кмн, М. 1997.

80. Allen R.C. Free radical production by reticuloendothelial cells. In: The reticuloendothelial system. A comprehensive treatise. Biochemistry and metabolism. Eds A.J. Sbarra, R.A. Strauss. N.Y.- London: Plenum Press,1980, v.2, 309-339.

81. Allen R.C. Chemiluminescence from eukaryotic and procanotic cells: Reducing potential and oxygen requizements photochem. Photobiol. 1979, v.30,157-163.

82. Allen R.C. Lucigenin chemiluminescence: a new aproach to the study of polymorphonuclear leukocyte redox activity. In: Bioluminescence and chemiluminescence. Eds M.A.Deluca, W.D.McElroy: N.Y.: Acad. Press,1981, 63-73.

83. Allen R.C. Phagocytic leukocyte oxygenation activities and chemiluminescence: a kinetic approach to analysis. Methods Enzymol., 1986, v. 133,449-493.

84. Alien R.C Stjernholm R.L.,Steele R.H.Evedence for the generation of an electronic state in human polymorphonuclearleukocytes and its participation in bacterial activity. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1972, v.47. 4. p.679-684.

85. Anticevich S.Z, Hughes JM, Black JL, et al. Induction of hyperresponsiveness in human airway tissue by neutrophils: mechanism of action. Clin Exp Allergy 1996; 26, p. 549-56.

86. Babior B.M. Oxidants from phagocytes: agents of defence and distinction. Blood, 1984, v. 64, 8, p. 959-966.

87. Babior B.M., Oxigen-dependent microbical killing by phagocytes New. Engl. 3. Med. 1978, v. 298. p. 659-666.

88. Babior G.L. The respiratory burst of phagocytes. J. Clin. Invest., 1984, v.73, 599-604.

89. Barata, L., S. Ying, M. Humbert, J. Barkans, Q. Meng, S. R. Durham, and A. B. Kay. Allergen-induced recruitment of FceRIl eosinophils in human atopic skin. Eur. J. Immunol., 1997, 27, p. 1236-1241.

90. Beswick P.H, Kay A.B. The effects of an ECF-A and formyil methyonyl chemotactic peptides on oxidative metabolism of human eosinophils and neutrophils Clin.Exp.Immunol. 1981.v.43, 2, p.399-404.

91. Bielefeldt Ohmann H, Babiuk LA.In vitro generation of hydrogen peroxide and of superoxide anion by bovine polymorphonuclear neutrophilic granulocytes, blood monocytes, and alveolar macrophages. Inflammation 1984 Sep; 8(3) p. 251-75.

92. Bird J., Giroud J.P. The reactivity of neutrophils at the site of an acute inflammatory reaction as measured by chemiluminescence. Agents Actions, 1984, v.15, 3-4, p. 349-355.

93. Bosetti M, Hench L, Cannas M Interaction of bioactive glasses with peritoneal macrophages and monocytes in vitro.J Biomed Mater Res, 2002 Apr 60, p. 79-85.

94. Boshetto P., Mapp C.E., Picotti G. Neutrophil and asthma. Eur. Resp. J. 1989, 6 (Suppl.), 456-459.

95. Bruce I.N, McNally JA, Rea IM, Bell AL. Agerelated changes in non-receptor dependent generation of reactive oxygen species from phagocytes of healthy adults. Mech Ageing Dev 1997 Mar; 94(1-3) p. 13544.

96. Burd P.R., Rogers H.W., Gordon J.R.S., Martin A. Interleukin-3 dependent and independent mast cells stimulated with IgE and antigen express multiple cytokines. J. Exp. Med. 1989, 170, p. 245-457.

97. Campbell A.K., Hallet M.B., Measurement of intracellular calcium ions and oxygen radical in polymorphonuclear leucocyte erythrocyte hubnds J.Physiol.(1), 1983, V.338.N4, 537-542.

98. Cassatella, M. A. The production of cytokines by polymorphonuclear neutrophils. Immunol. Today, 1995, 16:21.

99. Chusid M.W. Shea M.L.,Sartt L.D. Determination of post-transfussion granulocyte kinetics by chemiluminescence in chronic granulomatous disease J .Lab Clin .Med. 1980, v.95, P.168-173.

100. Dahlgren C, Karlsson A Ionomycin-induced neutrophil NADPH oxidase activity is selectively inhibited by the serine protease inhibitor diisopropyl fluorophosphate. Antioxid Redox Signal, 2002, Feb 4, p. 17-25.

101. Dale, D. C., Liles, W. C., Lewellyn, C, and Price, T. H. Effects of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) on neutrophil kinetics and function in normal human volunteers. Am. J. Hematol., 1998, 57, p. 7-15.

102. De Ban V.A.,Vychich P.Mo,Orsini A.O.et al.Neutrophil stimulation by lipid A and lipopolysaccharides from Salmonella minnesota ASAIO Trans. 1986, 32,1. p. 597-600.

103. De Boer M. Metabolic comparasion between basophils and other leucocytes from human blood. O.Immunol. 1986, V.136, N9, P.3447-3454.

104. De Sole P., Lippa S., Littarru G.P. Resting and stimu lated chemiluminescence of human whole blood. J.Clin.Lab.Ant., 1983, v.3, N6,391-400.

105. Descamps-Latscha B, Nguyen AT, Golub RM, Feuillet-Fieux MN. Chemiluminescence in microamounts of whole blood for investigation of the human phagocyte oxidative metabolism function. Ann Immunol (Paris) 1982 May-Jun; 133C(3) p. 349-64.

106. Drabikova K, Nosal R, Jancinova V, Ciz M, Lojek A.Reactive oxygen metabolite production is inhibited by histamine and HI-antagonist dithiaden in human PMN leukocytes. Free Radic Res 2002 Sep; 36(9) p. 975-80.

107. Driver A. G., Kukuly C.A., Metzger W.J., Mustafa S.J. Bronchial challenge with adenosine causes the release of serum neutrophil chemotactic factor in asthma. Am. Rev. Resp. Dis. 1991, 143, p. 1002-1007.

108. Fabbri L.M., Boschetto P., Zocca E. et al Bronchoalveolar neutrophilia during late asthmatic reactions induced by toluene diisocyanate. Am. Rev. Resp. Dis.1987,136, 36-42.

109. Fach E, Waldman WJ, Williams M, Long J, Meister RK, Dutta PK Analysis of the biological and chemical reactivity of zeolite-based aluminosilicate fibers and particulates. Environ Health Perspect 2002, Nov; 110(11), p. 1087-96.

110. Faden H. Luminol-dependent whole blood chemiluminescence. Eds K Van Dyke, V. Gastranova. Boca Raton: CRC Press, 1987, v.2, p. 183-191.

111. Faden H., Macieiewski N. Whole blood luminol-dependent chemiluminescence.- J.Reticuloendothel. Soc., 1981, v. 30,1, p. 219-226.

112. Falck P., Von Baehr R. Effect of cyclooxygenase and lipoxygenase inhibitors on the chemiluminescence response of human neutrophils. Allerg. Immunol., 1987, v.33, N1,45-52.

113. Fukuda K, Yasuba H, Satake N, Kino T, Oshima S, Chihara J. Luminol-dependent chemiluminescence of peripheral neutrophils in asthmatic patients Nihon Kyobu Shikkan Gakkai Zasshi 1989 Feb; 27(2), p. 200-5.

114. Giner Munoz M. Exhaled nitric oxide.Allergol Immunopathol (Madr) 2000 May-Jun; 28(3), p. 124-35.

115. Ginsburg I, Misgav R, Gibbs DF, Varani J, Kohen R.Chemiluminescence in activated human neutrophils: role of buffers and scavengers. Inflammation 1993 Jun; 17(3), p. 227-43.

116. Ginsburg I.,Borinski R.,Pabst M. Superoxide generation by human blood leukocytes under the effect of cytolitic agents Int.3.Tissue React. -1985, v.7,2, p.143-147.

117. Goldstein I.M., Cerquera M. Lind S, Kaplan H.B. Evidence that the superoxide generation system of human leukocytes is associated with the cell surface. J.Clin.Invest.,1977, v.59,1,249-254.

118. Gounni A. S, Lamkhioued B, Koussih L, Chisei Ra, Qutayba H. Human neutrophils express the high-affinity receptor for immunoglobulin E (FcsRI): role in asthma. The FASEB Journal, V.15 April 2001, 940-948

119. Gyllenhammar H. Lucigenin chemiluminescence in the assessment of neutrophil superoxide production. Immunol. Methods, 1987, v. 97, 2, p. 209213.

120. Hallet M.B., Edwards S.W., Barrow S.C., Campbell A.K. Dependence of polymorphonuclear leucocytes luminol-dependent chemiluminescence on oxygen. In: Analytical Applications of Biolununescence and Chemiluminescence. Acad. Press, 1984, 347-350.

121. Hill H.R., Hogan N., Bale J. Evaluation of nonspecific (alternaive pathway) opsonic activity by neutrophil CRL. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol, 1987, v. 53, 490-497.

122. Ivanova IP, Tananko EM, Shirinskii VS Changes in functional activity of blood neutrophils in pollenosis patients: effects of specific immunotherapy. Ter Arkh 1999; 71(4), p. 57-60.

123. Jennifer McGrath, David A Okrongly, John F Bunnan, Peter J Barnes, Trevor T Hansel Automated quantitation of circulating neutrophil and eosinophil activation in asthmatic patients. Thorax 2000; 55, p. 471-477.

124. Knyszynski A., Fischer H. Circadium fluctuations in the activity of phagocytic cells in blood, spleen, and peritoneal cavity of mice as measured by zymozan-induced chemiluminescenceJ. Immunol., 1981, v. 127, 12, p. 25082513.

125. Kopprasch S, Kohl M, Graessler J. Different effects of exogenous horseradish peroxidase on luminol-amplified chemiluminescence induced by soluble and particulate stimuli in human neutrophils. J Biolumin Chemilumin 1998, Sep-Oct; 13(5), p. 267-71.

126. Kunkel G. Diagnostic method in allergy. BGA Schriften. 1986, 4, p.163-166

127. Lamblin C, Gösset P, Tillie-Leblond I, et al. Bronchial neu-trophilia in patients with noninfectious status asthmaticus. Am J Respir Crit Care Med 1998; 157, p. 394-402.

128. Lau C, Lu J, Yamaguchi T, Kai M. Controlled kinetics of non-enzymatic chemiluminescence reactions for simple imaging of DNA and protein. Anal Bioanal Chem 2002 Nov; 374(6), p. 1064-8.

129. Lee T.D., Shanahan F., Miller H.R. et al. J. Immunol., 1985, vol. 55, 4, p. 721-728.

130. Lee T.H., Nagy L., Nagakura T., Walport M.J., Kay A.B. Identification and partial characterization of an exercise induced neutrophil chemotactic factor in bronchial asthma. J. Clin. Invest. 1982, 69, p. 889-899.

131. Lowry O.H., Rosenbrough N.H., Farr A.L., Randull A.J. J. Biol. Chem. 1951, v. 193, p. 265-275.

132. Manev V, Maneva A, Sirakov L.Effect of lactoferrin on the phagocytic activity of polymorphonuclear leucocytes isolated from blood of patients with autoimmune diseases and Staphylococcus aureus allergy. Adv Exp Med Biol 1998; 443, p. 321-30.

133. Maurer, D., C. Ebner, B. Reininger, E. Fiebiger, D. Kraft, J. P. Kinet, and G. Stingl. The high affinity IgE receptor (FceRI) mediates IgE-dependent allergen presentation. J. Immunol. 1995, 154, p. 6285-6290.

134. Mehta S., Bashford C.A., Knox P., Pasternak C.A. Chenxiluminescence in neutrophils and Lettre cells induced by myxoviruses. Biochem J., 1985, v.227,1, p. 99-104.

135. Metzger W.J., Richerson H.B., Worden K., Monick M., Hunninghake G. W. Bronchoalveolar lavage of allergic asthmatic pacients following allergen bronchoprovocation. Chest 1986, 89, p.477-483.

136. Monteseirin J, Bonilla I, Camacho MJ, Conde J, Sobrino F.IgE-dependent release of myeloperoxidase by neutrophils from allergic patients. Clin Exp Allergy 2001 Jun; 31(6) p. 889-92.

137. Monteseirin J, Camacho MJ, Montano R, Llamas E, Conde M, Carballo M, Guardia P, Conde J, Sobrino F.Enhancement of Antigen-specific functional responses by neutrophils from allergic patients. J Exp Med 1996 Jun 1; 183(6) p. 2571-9.

138. Nakagawa T., Miyamoto T. The role of IgG4 as bloking antibodies in asthmatics and in beekeepers. Int. Archs. Allergy appl. Immun. 1985, v. 77, p. 204

139. Nelson R.D., Mills E.L., Simmons R.L., Quie P.G. Chemiluminescence response of phagocytosing human monocytes. -Infect.Immun., 1976, v. 14,1, p. 129-134.

140. Nielson C.P. p-Adrenergic modulation of the polymorphonuclear leukocyte respiratory burst is dependent upon the mechanism of cell activation. J. Immunol., 1987, v.139, 7, p. 2392-2397.

141. Nordman S, Nyberg P, Linko L., Mjolbolsta Hospital, Finland. Increased PMA-induced chemiluminescence from whole blood of patients with bronchial hyperreactivity. Eur Respir J 1994 Aug; 7(8) p. 1425-30.

142. Nydegger U.E. Kazatchkine M.D.Modulation by complement of immune complex processing in health and disease in man. Hered Acquir.Complem.Defmic.Armn. Man.,Basel., 1986, p.361.

143. Otsuka H., Mezawa A., Ohnishi M. et al. Changes in nasal metahromathic cells during allergen immunotherapy. Clin. Exp. Allergy, 1991, vol. 21, p. 115-119.

144. Parij N, Nagy AM, Fondu P, Neve J. Effects of non-steroidal antiinflammatory drugs on the luminol and lucigenin amplified chemiluminescence of human neutrophils. Eur J Pharmacol 1998 Jul 10; 352(2-3), p. 299-305.

145. Park H, Jung K, Kang K, Nahm D, Cho S, Kim Y.Enhanced basophil histamine release and neutrophil chemotactic activity predispose grain dust-induced airway obstruction. Clin Exp Allergy 1999 Apr; 29(4), p. 543-49.

146. Pauksens K, Sjolin J, Venge P. Chemiluminescence of polymorphonuclear leukocytes and whole blood during acute bacterial infection. Scand J Infect Dis 1989; 21(3), p. 277-84.

147. Palmbald 0., Gyllenhammar H.JLingren 3.A.,Malmsten C.L. Effects of leukofrienes and f-Met-Len-Phe on oxidative metaboldism of neutrophils and eosinophils J.Immunol. 1984. v.132, 6, p. 3041-3046.

148. Piryazeva N., Piryazev A.P., Sherstnev M.P., Muravsov Y.V. Whole blood and sinovial fluid chemiluminescence in rheumatoid arthritis. In: 17h

149. Symposium of the European Society of Osteoarthrology. Budapest, 1983, p. 61.

150. Plaut M., Pierce J.H.C., Watson J., Hanley-Hyde J. Mast cell lines produce lymphokines in response to cross-linkage of Fc epsilon RI or to calcium ionophores. Nature (London), 1989, 339,p. 64-67.

151. Rajakulasingam, Till, Ying, et al.: Increased Expression of High Affinity IgE (FceRI) Receptor-a Chain mRNA and Protein-bearing Eosinophils in Human Allergen-induced Atopic Asthma. Am J Respir Crit Care Med, 1998, V. 158. p. 233-240.

152. Reischl I.G., Corvaia N., Effenberger F. et al. Function and regulation of Fc epsilon RI expression on monocytes from atopic donors. Clin. Exp. Allergy. 1996, v. 26, p. 630-641; 616-617.

153. Roos D. The metabolic response to phagocytosis. In: Handbook of inflammation. Ed.G.Weissmann. Elsenes-North Holland. 1980, v.2, 337386.

154. Roswell D.F., White E.H. The chemiluminescence of luminol related hydrazides. Methods in enzymology, 1978, v.57,p. 409-423.

155. Sato M.,Makamura T.,Koyama 3. Two distinct Fc Rs on guinea pig polymorphonuclear leukocytes differ fron each other in their eliciting activities for 0~ generation. Mol.Immunol. 1988. v.25.N2. p. 205-211.

156. Shirouzu K. Inhibition of Fc gamma R- and CR-mediated human neutrophil chemiluminescent responses by anti-allergic and anti-histaminergic drugs. Kurume Med J 1995; 42(2), p. 55-66.

157. Smith H.R., Wescott J.Y., Bethel R.A. Inflammatory cells and eicosanoid mediators in subjects with late asthmatic responses and increase in airway responsiveness. J. Allergy Clin. Immunol. 1992, 89,1076-1084.

158. Soussi Gounni, A., Lamkhioued, B., Ochiai, K., Tanaka, Y.,Delaporte, E., Capron, A., and Capron, M. High affinity IgE receptor on eosinophils is involved in defence against parasites. Nature (London), 1994, 367, 183-187.

159. Stanworth D. R. Immunochemical aspects of IgG4 Clin.Rev. Allergy, 1983, v. 1,1, p. 183-193.

160. Sur S, Crotty TB, Kephart GM, et al. Sudden-onset fatal asthma. A distinct entity with few eosinophils and relatively more neutrophils in the airway submucosa? Am Rev Respir Dis 1993; 148, p. 713-19.

161. Sutton B.J., Gould H.J. The human IgE network. Nature (London) 1993, 366,p. 421-428.

162. Szczepanowska A. Zachowanie sie wskaznika fagocytozy i wskaznika leukergii u dzieci chorych na astme oskrezeloma. J. Pediat. Pol. 1987,62, 5, p. 289-295.

163. Takeshige K., Minakami S. Early events and stimulants triggering oxidative metabolism in neutrophils. In: Cellular chenuluminescence. Boca Ration: CRC Press, 1987, v. 1,113-129.

164. Takumi K, Garssen J, Havelaar A.A quantitative model for neutrophil response and delayed-type hypersensitivity reaction in rats orally inoculated with various doses of Salmonella Enteritidis. Int Immunol 2002 Feb; 14(2), p. 111-9.

165. Teramoto S, Shu CY, Ouchi Y, Fukuchi Y. Increased spontaneous production and generation of superoxide anion by blood neutrophils in patients with asthma. J Asthma 1996; 33(3), p. 149-55.

166. Tomkinson, Cieslewicz, Duez, et al Temporal Association between AirwayHyperresponsiveness and Airway Eosinophilia in Ovalbumin-Sensitized Mice Am J. Respir. Crit. Care Med. v. 163, p 721-730,2001.

167. Tunon De Lara J.M., Redington A.E., Bradding P. et al. Dendritic cells in normal and asthmatic airways: expression of the alpha subunit of the high affinity immunoglobulin E receptor (Fc epsilon Rl-alpha). Clin. Exp. Allergy. 1996, v. 26, p.648-655.

168. Vargas L, Patino PJ, Montoya F, Vanegas AC, Echavarria A, Garcia de Olarte D. A study of granulocyte respiratory burst in patients with allergic bronchial asthma. Inflammation 1998 Feb; 22(1), p. 45-54.

169. Venge P., Henriksen J., Dahl R., Hakansson L. Exercise induced asthma and the generations of neutrophil chemotactic activity. J. Allergy Clin. Immunol 1990, 85,498-504.

170. Virchov J.C., Walker J.R.C., Ha&er D., Kortsik C. T cells and cytokines in bronchoalveolar lavage fluid after segmental allergen provocation in atopic asthma. Am. J. Resp. Crit. Care Med. 1995, 151, 960965.

171. Wenzel SE, Szefler SJ, Leung CK, et al. Bronchoscopic evaluation of severe asthma: persistent inflammation associated with high dose glucocorticoids. Am J Respir Crit Care Med 1997; 156, p. 737-43.

172. Westman J.A. Influence of pH and temperature on the lurmnol-dependent chemiluminescence of human polymorphonuclear leukocytes.-Scand. J.Clin.Lab. Invest, 1986,v. 46, 5, p. 427-434.

173. Wettero J, Bengtsson T, Tengvall P Clq-independent activation of neutrophils by immunoglobulin M-coated surfaces.J Biomed Mater Res 2001 Dec 57, p. 550-8.

174. Wide L. In vitro diagnosis of atopic diseases. Clinical Immunology and allergology. Amsterdam, 1981, p. 339-348.

175. William O. Weigle, Charles G. Cochrane. Anaphylactogenic properties of soluble antigen-antibody complecxes in the guinea pig and rabbit. J. Immun. 1960, v. 85, 5, p. 469-477.

176. Woschnagg C, Rak S, Venge P. Blood eosinophils from asymptomatic allergies have a reduced capacity to produce oxygen-free radicals. Allergy 1998 Dec; 53(12), p. 1162-71.

177. Woschnagg C, Rak S, Venge P.Oxygen radical production by blood eosinophils is reduced during birch pollen season in allergic patients. Clin Exp Allergy 1996 Sep; 26(9), p. 1064-72.

178. Yamaoka, K. A., M. Arock, F. Issaly, N. Dugas, L. LeGoff, J. P. Kolb. Granulocyte macrophage colony stimulating factor induces FcRII/CD23 expression on normal human polymophonuclear neutrophils. Int. Immunol. 1996, 4, p. 479.

179. Zak- Nejmark T at all. Histamine receptors expression on lymphocytes and neutrophils in glucocorticosteroid sensitive and resistant astma patients. Pol. Arch Med Wewn 2002 Jun; 107 (6), p. 547-53.

180. Zeller JM, Sullivan BL.C-reactive protein selectively enhances the intracellular generation of reactive oxygen products by IgG-stimulated monocytes and neutrophils. J Leukoc Biol 1992 Oct; 52(4), p. 449-55

181. Список работ, опубликованных по теме диссертации

182. Модификация метода хемшпоминесцентного анализа для оценки активности фагоцитов цельной крови в эксперименте. Клиническая лабораторная диагностика. 2004, №3, с. 47-50 /Митерева Д.Е., Агафонов В.Е./

183. Использование аэросила как носителя специфического аллергена в хемилюминесцентном анализе. ЖМЭИ, №5, с. 67-70 /Митерева Д.Е., Агафонов В.Е./