Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Попыхова, Эра Борисовна

• Попыхова, Эра Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Попыхова, Эра Борисовна

Список сокращений и условных обозначений.

Введение.

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Спектр фармакологического действия метронидазола.

1.2 Эритроциты - объект для исследования протекторного действия лекарственных препаратов.

1.3 Липосомы как простейшая модель эритроцитов.

1,4Ультрадисперсные алмазы как модель молекулярных и надмолекулярных структур.

1.5 Водный матрикс в живых системах.

1.5.1 Молекулярное строение воды.

1.5.2 Жидкая вода и массоперенос.

1.5.3 Фазовые переходы в водной среде.

1. 6 Воздействие электромагнитных излучений на живые организмы и поиск протекторов.

1.6.1 Электромагнитные излучения в современном обществе.

1.6.2 Механизм взаимодействия электромагнитных излучений крайне высоких частот с биологическими объектами.

1.6.3 Влияние резонансных частот крайне высокого диапазона на состояние сетки водородных связей воды.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Приборы и материалы.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Методика выделения метронидазола и приготовления его растворов.

2.2.2 Методика определения влияния метронидазола на гемолити-чес кую устойчивость эритроцитов к действию додецилсульфата натрия.

2.2.3 Выделение лецитина.

2.2.4 Методика приготовления липосом и определения их устойчивости к воздействию додецилсульфата натрия.

2.2.5 Методика молекулярного моделирования влияния метронидазола на водное микроокружение.

2.2.6 Методика определения влияния метронидазола на состояние примембранной воды липосом.

2.2.7 Методика измерения молекулярного рассеяния света водными растворами метронидазола.

2.2.8 Методика определения вязкости гидрозоля наночастиц УДА.

2.2.9 Методика синтеза не модифицированных резольных смол.

2.2.10 Методика определения коэффициента диффузии флуоресцина натрия в водной фазе.

2.2.11 Методика определения влияния метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов находящихся под воздействием ЭМИКВЧ.

2.2.12 Методика подсчета эритроцитов с помощью камеры Горяева.

2.2.13 Методика оценки токсичности метронидазола на культуру Paramecium caudatum.

2.2.14 Статистическая обработка результатов экспериментов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 3. Влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов в присутствии додецилсульфата натрия.

Глава 4. Влияние метронидазола на скорость разрушения липосом додецилсульфатом натрия.

Глава 5. Оценка влияния метронидазола на водное микроокружение с помощью молекулярного моделирования.

Глава 6. Флуоресцентная оценка подвижности приповерхностной воды липосом в присутствии метронидазола.

Глава 7. Оценка флуктуаций плотности воды в присутствии метронидазола.

Глава 8. Влияние метронидазола на свободную воду мембран и их моделей.

Глава 9. Вискозиметрическое измерение величины гидратной оболочки моделей белков и мембран (наночастиц УДА) в присутствии метронидазола.

Глава 10. Влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов находящихся под воздействием ЭМИ КВЧ

Глава 11. Влияние метронидазола на двигательную активность

Paramecium caudatum.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Моделирование цитопротекторного действия 1-(2`-гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазола и его влияние на связанную воду мембран и белков»

Актуальность темы. Биохимики и биоорганики проявляют повышенный интерес к молекулярным механизмам действия биорегуляторов, в частности - к лекарственным соединениям. Так, синтетический химиотерапевтический препарат широкого спектра действия 1-(2'гидроксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол (метронидазол, МЗ) давно привлекает внимание исследователей. Дело в том, что кроме "основного" - противомикробного действия МЗ оказывает протекторный эффект на эукариотические клетки при воздействии на них ксенобиотиков.

Поскольку, в современном мире резко возросло влияние физических (П. Я. Григорьев, 1997; С.Н. Бобраков, А.Г. Каташев, 2001; А.Г. Шеин, Р.Н. Никулин, 2003) и химических факторов на живые организмы, является актуальным поиск клеточных протекторов. В последнее время особое внимание уделяется исследованию "новых" возможностей "старых лекарств" (И.С. Северина, 2005). Если механизм антибактериального действия МЗ хорошо изучен, то механизм его протекторного действия не исследован.

Давно известно влияние на структуру сетки водородных связей воды некоторых низкомолекулярных соединений (Дж. Поллак, 2001). Некоторые из них оказывают на воду структуроразрушающее действие (мочевина, многие неорганические анионы и т.д.), другие — структуростабилизирующее (метанол, этанол, диоксан и др.) (Б.В. Дерягин, Н.В. Чураев, 1971; В.Я. Антонченко, 1983). Известно, что некоторые лекарственные соединения могут структурировать приповерхностную воду (А.Д. Кунцевич с соавт., 1998). Не вызывает сомнений тот факт, что эти вещества могут влиять не только на объёмную воду, но и на гидратные оболочки клеток и биополимеров и, ка^ следствие, на конформацию и реакционную способность последних.

Есть основания полагать, что протекторный эффект МЗ обусловлен стабилизирующим воздействием вещества на структуру сетки водородных связей воды в примембранной области или у поверхности биомакромолекул. Результатом этого является прекращение доступа вещества к мембране, интегральному ферменту или рецептору. Вероятно, с этим связано протекторное действие препарата на клетки теплокровных. Представляет определенный интерес использование возможности МЗ структурировать примембранную воду не только для защиты клеток от воздействия химических и физических факторов (П.Е. Кузнецов с соавт., 2005), но и для регуляции биохимических процессов.

Важно детально понять, каким образом реализуется протекторный эффект МЗ, поскольку это открывает путь к конструированию новых клеточных протекторов и веществ, способных регулировать биохимические реакции. Поэтому, изучение протекторного действия данного соединения обусловливает актуальность темы настоящей работы.

Цель и задачи исследования. Цель настоящего исследования заключалась в изучении механизма протекторного действия метронидазола на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия и электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона. Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить протекторное действие метронидазола на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия.

2. Экспериментально и с помощью молекулярного моделирования изучить влияние метронидазола на состояние сетки водородных связей свободной и приповерхностной воды клеточных и модельных мембран.

3. Исследовать влияние метронидазола на гемолитическую устойчивость эритроцитов, находящихся под воздействием электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона, изучить изолированное влияние метронидазола на эритроциты и Paramecium caudatum.

Научная новизна работы. Установлена способность МЗ в определенных концентрациях снижать коэффициент диффузии в примембранной водной среде. Выдвинуто и обосновано предположение, что этим обусловлен протекторный эффект МЗ.

Экспериментально и методами молекулярного моделирования установлено выполнение необходимых условий фазового ^-перехода в объемной водной среде и вблизи поверхности клеточных и модельных систем в присутствии МЗ. Показано, что Х-переход является вероятной причиной образования мощной гидратной оболочки клеток и их моделей.

Экспериментально установлено протекторное действие МЗ на эритроциты, подверженные действию резонансных частот электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона (ЭМИ КВЧ).

Научно-практическая значимость. Установленное протекторное действие МЗ на клеточные и модельные мембраны за счет стабилизации их гидратного окружения может составить основу для поиска клеточных протекторов нового поколения и создания низкомолекулярных веществ, влияющих на протекание определенных биохимических процессов.

В связи с тем, что МЗ является лекарственным препаратом широкого спектра действия и применяется при целом ряде инфекционных заболеваний, а также обнаруженная у него способность оказывать цитопротекторный эффект, делает исследование протекторного действия МЗ на молекулярном уровне интересным для врачей-клиницистов.

По материалам диссертационной работы написаны "Методические рекомендации к практикуму по молекулярной биологии - фолдинг белка и изучение влияния на него веществ, снижающих диффузионную подвижность воды" для проведения практических занятий со студентами, специализирующимися в области биохимии и молекулярной биологии, рекомендованные учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом биологического факультета СГУ (выписка из протокола №104 от 10 октября 2005 г.).

Результаты диссертационной работы использованы при подготовке курсовых и дипломных работ студентами биологического факультета Саратовского государственного университета.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены и обсуждались на первой и второй Российских школах-конференциях "Молекулярное моделирование в химии, биологии и медицине"(Саратов, 2002, 2004), на Международных конференциях "Saratov Fall Meeting" (Саратов, 2003,

2004), "The Human Proteome Organisation 2nd Annual & International Union Biochemistry and Molecular Biology XIX World Congress" (Canada, Montreal, 2002), 42nd Congress of the European Societies of Toxicology (Poland, Cracow,

2005), на 7-ой, 9-ой и 10-ой Пущинской школах-конференциях молодых ученых "Биология - наука XXI века" (Пущино, 2003,2005), на итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием "Молодежь и медицинская наука в XXI веке" (Киров, 2005), на VI Международном конгрессе молодых ученых и специалистов "Науки о человеке"(Томск, 2005), на студенческой научной конференции биологического факультета СГУ "Студенческие исследования в биологии" (Саратов, 2003, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 работ в зарубежных и отечественных изданиях.

Работа выполнена на кафедре биохимии и биофизики биологического факультета Саратовского государственного университета в соответствии с плановой тематикой НИР "Воздействие антропогенных факторов на природные экосистемы", номер гос. регистрации 01.200.201974. Научный руководитель д.х.н, профессор Кузнецов П.Е.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Метронидазол проявляет свойства протектора клеточных и модельных мембран при воздействии на них детергента додецилсульфата натрия и под влиянием резонансных частот ЭМИ КВЧ.

2. В присутствии метронидазола выполняются необходимые условия фазового ^-перехода в водной фазе.

3. Метронидазол увеличивает гидратную оболочку и снижает коэффициент диффузии приповерхностной воды клеточных и модельных мембран.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, описывающей материалы и методы исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, содержащего 156 источников, в том числе 29 зарубежных. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, содержит 27 рисунков и 4 таблицы.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Попыхова, Эра Борисовна

104 ВЫВОДЫ

1. Показана способность метронидазола снижать коэффициент диффузии приповерхностной воды клеток и их моделей. Этот эффект вносит значительный вклад в формирование протекторного действия на клетки и их модели, находящиеся под воздействием детергента додецилсульфата натрия и электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона.

2. Установлено, что метронидазол в концентрационном интервале 5x10"1 -5x10'14 % повышает гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс, а также устойчивость липосом из яичного лецитина к детергенту додецилсульфату натрия. Механизм повышения гемолитической устойчивости связан с увеличением упорядоченности примембранной водной фазы, что вызывает снижение скорости диффузии лизирующего агента к мембране.

3. Экспериментально показано увеличение гидродинамического радиуса гидратной оболочки наночастиц алмаза, рассматриваемых как модель поверхности белков и биомембран.

4. С помощью флуоресцентного зондирования установлена способность метронидазола снижать коэффициент диффузии водной среды вблизи модельных мембран (липосом). Результаты молекулярного моделирования свидетельствуют о способности метронидазола образовывать кластеры воды, отличающиеся от характерных для чистой воды.

5. Показано, что метронидазол в концентрациях SxlO^xKT'Vo повышает гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс к действию резонансных частот электромагнитного излучения крайне высокочастотного диапазона, разрушающему водородные связи гидратной оболочки клеток. Данный протекторный эффект метронидазола в низких концентрациях объясняется его способностью стабилизировать структуру сетки водородных связей приповерхностной воды клеток. Установлено, что изолированное действие метронидазола в концентрациях 5х10"6% и выше вызывает снижение гемолитической устойчивости эритроцитов и подвижности простейших P. caudatum. В более низких концентрациях подобный эффект не отмечался.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Отрицательное влияние на организм различных химикатов, ЭМИ антропогенного происхождения и других опасных факторов неуклонно увеличивается. Очевидными последствиями такого воздействия на организм человека являются снижение статуса иммунной системы, увеличение риска возникновения патологических состояний. На клеточном уровне эти отрицательные воздействия вызывают повреждение клеточной мембраны и органелл, оказывают повреждающее действие на различные структурно-метаболические комплексы, к числу которых относятся ферменты и ДНК. Нарушения в их функционировании приводят к существенным метаболическим сдвигам, мутациям и, в итоге, к гибели клеток. Опасность воздействия этих факторов природной среды стимулирует развитие исследований направленных на выявление механизмов действия опасных факторов на живой организм и защиты от их влияния.

В связи с вышесказанным на сегодняшний день является актуальной разработка и изучение механизмов защиты организма на клеточном уровне. В современной научной литературе имеется множество работ, посвященных исследованию защиты организма от повреждающего действия окислительного стресса, соединений различной химической природы и т.д. Особую актуальность представляет изучение механизма действия химических соединений, обладающих протекторными свойствами на клеточном уровне. Клеточные протекторы рассматриваются как средства, увеличивающие резистентность организма к воздействию опасных факторов. Одним из возможных цитопротекторов является МЗ.

Проведенные нами эксперименты по изучению цитопротекторного действия МЗ позволили предположить, что его протекторный эффект обусловлен влиянием на приповерхностную воду. Так, методами молекулярного моделирования влияния МЗ на водное микроокружение было показано появление кластеров с нехарактерным для чистой воды размером, а именно, МЗ вызывал появление кластеров с числом молекул более четырех и/или увеличение числа молекул в кластерах с малым числом молекул воды.

Экспериментальные данные по изучению влияния МЗ на гемолитическую устойчивость эритроцитов крови белых крыс к ДСН свидетельствуют о значительном замедлении процесса гемолиза в присутствии определенных концентраций МЗ. При этом увеличение независимой от времени константы скорости гемолиза к напрямую связано с уменьшением концентрации МЗ в опытных образцах.

Данные наших экспериментов показали, что МЗ также снижает скорость разрушения ДСН липосом из яичного лецитина. Через 1 час инкубации липосом значимые отличия оптической плотности суспензии от контроля (р<0,05) наблюдались в интервале концентраций МЗ 5х10^-5х10-14%. Поскольку мембраны липосом лишены каких-либо рецепторов, а концентрация МЗ достаточно низка, то можно полагать, что протекторное действие МЗ является неспецифичным, и, вероятнее всего, связано с его влиянием на диффузионную подвижность примембранной воды.

Исследование влияния МЗ на состояние сетки водородных связей приповерхностной воды липосом с помощью флуоресцентного зонда ДМХ, интенсивность флуоресценции которого связана с подвижностью окружающих протонодонорных молекул, показало, что интенсивность флуоресценции зонда в присутствии МЗ превышает интенсивность при его отсутствии. Это свидетельствует о снижении диффузионной подвижности воды при введении МЗ в примембранную область.

Исследование светорассеяния водными растворами МЗ свидетельствует о способности последнего в концентрациях 5x10^-5x10'10 % (р<0,05) значительно его увеличивать. Данные концентрации МЗ достаточно низки, поэтому увеличение светорассеяния не может быть связано с флуктуациями концентрации. Объяснить увеличение светорассеяния можно флуктуациями плотности воды. Подобного рода флуктуации возникают вблизи критической точки фазового Я-перехода (М.Ф. Вукс, JI.B. Шурупова, 1976).

Поскольку мы предположили, что МЗ в определенных концентрациях вызывает фазовый X -переход, то было необходимо исследовать его влияние на диффузионные характеристики раствора какого-либо вещества. Обращение в ноль коэффициента диффузии ФН служило подтверждением нашей гипотезы. Обнаруженное значительное снижение коэффициента диффузии подтвердило гипотезу о способности МЗ вызывать фазовый ^-переход типа порядок-беспорядок в структуре сетки водородных связей окружающей воды в концентрационном интервале 0,5% и 5xl0~5-5xl0'7%.

В экспериментах по вискозиметрическому измерению размера гидратной оболочки наночастиц УДА было получено значимое увеличение удельной вязкости в присутствии МЗ от таковой при его отсутствии. Была рассчитана зависимость толщины гидратной оболочки УДА от концентрации МЗ в гидрозоле. Показано ее увеличение практически в том же концентрационном интервале МЗ в котором, в предыдущем эксперименте наблюдалось значимое обращение в ноль коэффициента диффузии ФН.

Определение гемолитической устойчивости эритроцитов белых крыс в присутствии МЗ под действием ЭМИ КВЧ показало способность МЗ значительно снижать скорость гемолиза эритроцитов при воздействии на них как резонансных частот ЭМИ КВЧ, так и частот расположенных рядом с резонансными. Экспериментальные данные по определению гемолитической устойчивости эритроцитов при действии ЭМИ показывают, что воздействие резонансных частот ЭМИ КВЧ вызывает значительное снижение числа эритроцитов по отношению к контрольной пробе. При этом, предварительное введение в пробу МЗ значительно снижает скорость гемолиза. Анализ данных о упо влиянию МЗ в концентрациях от 5x10- % до от 5x10 % на эритроциты не подверженные действию ЭМИ КВЧ свидетельствует об его способности снижать гемолитическую устойчивость эритроцитов и отсутствие влияния МЗ на гемолиз в более низких концентрациях.

Исследование используемых нами в экспериментах концентраций МЗ на токсичность по отношению к биологическим объектам показало способность последнего в концентрациях от 5x10"^% и, вероятно, выше изменять подвижность одноклеточных простейших P. caudatum, что свидетельствует о токсичности МЗ. В более низких концентрациях 5х10"9% и, вероятно, ниже МЗ не оказывает заметного влияния на подвижность парамеций, а следовательно и не оказывает на них токсического влияния.

Для защиты организма на клеточном уровне от воздействия ксенобиотиков и резонансных частот ЭМИ КВЧ использование МЗ, как клеточного протектора может быть весьма перспективным. Выявленное протекторное действие МЗ может быть использовано для конструирования клеточных протекторов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Попыхова, Эра Борисовна, 2007 год

1. Аксенов С.И. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов / С.И. Аксенов. М.: Наука, 1990.- 170 с.

2. Акуличев В.А. Периодические фазовые превращения в жидкости / В.А. Акуличев, В.Н. Алексеев, В.А. Буланов. М.: Наука, 1986. - 279 с.

3. Альберте Б. Молекулярная биология клетки / Б. Альберте, Д. Брей, Дж. Льюис. М.: Мир, 1994. -517с.

4. Антонов В.Ф. Липидные мембраны при фазовых превращениях / В.Ф. Антонов, Е.Ю. Смирнова, Е.В. Шевченко. М.: Наука, 1992. - 125 с.

5. Антонченко В.Я. Микроскопическая теория воды в порах мембран / В.Я. Антонченко. Киев : Наукова думка, 1983. - 160 с.

6. Антонченко В.Я. Основы физики воды / В.Я. Антонченко, А.С. Давыдов, В.В. Ильин. Киев: Наукова думка, 1991.- 640 с.

7. Арифов С.С.Сравнительное изучение степени интоксикации у больных острым гнойным средним отитом / С.С. Арифов // Вестник оторингологии. -1998.-№3.- С. 23-24.

8. Бакаева Е.Н. Обоснование использования одноклеточных в биотестировании./ Е.Н. Бакаева // Инфузории в биотестировании : тез. докл. междунар. заоч. науч.-практ. конф, СПб., 1998. -С.26-27.

9. Балаян Л.О. Лечение больных с прогрессирующей мышечной дистрофией / Л.О. Балаян, Г.Н. Дунаевская, В.Ф. Ситников // Журнал невропатологии и психиатрии. 1975. - №9. - С.1317-1319.

10. Ю.Барсуков Л.И. Липосомы / Л.И. Барсуков // Соросовский образовательныйжурнал. 1998. - №10.- С.2-9. П.Березов Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. - М. :

11. Медицина, 1998. 680 с. 12.Бернал Д.Д. Роль воды в кристаллических веществах / Д.Д. Бернал // Успехи химии. - 1956.- Т.25, №5. - С.641-643.

12. Бецкий О.В. О механизмах взаимодействия миллиметровых волн низкой интенсивности с биологическими объектами / О.В. Бецкий // Известия ВУЗов. Радиофизика. 1994. - Т.37, №1. с. 30-41.

13. Бецкий О.В. Разработка основ миллиметровой терапии / О.В. Бецкий, Н.Д. Девятков // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №8. - С. 53-62.

14. Бецкий О.В. Лечение электромагнитными полями. Часть2 / О.В. Бецкий, Н.Д. Девятков, Н.Н. Лебедева // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №10. - С.3-13.

15. Бецкий О.В. Лечение электромагнитными полями. ЧастьЗ / О.В. Бецкий, Н.Д. Девятков, Н.Н. Лебедева // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. -№12. -С.11-19.

16. Бецкий О.В. Необычные свойства воды в слабых электромагнитных полях / О.В. Бецкий, Н.Н. Лебедева, Т.Н. Котровская // Биомедицинская радиоэлектроника. 2003. - №1. - С. 37-44.

17. Бецкий О.В. Биологические эффекты миллиметровых излучений низкой интенсивности / О.В. Бецкий, А.В. Плутвинский // Известия ВУЗов. Сер. Радиоэлектроника. Электронные приборы СВЧ. 1986. - Т.29, №10. - С.З-10.

18. Бобраков С.Н. Электромагнитная составляющая современной урбанизированной среды / С.Н. Бобраков, А.Г. Карташев // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001.- Т.41, №6.- С. 706-711.

19. Богачева Н.В. Компьютерный метод оценки средней скорости движения инфузории-туфельки по пересечению луча света / Н.В. Богачева, А.И. Деев // Биофизика. 2002. - Т. 47, №1. - С. 94-99.

20. Большая медицинская энциклопедия. Т. 28. / под ред. Б.В. Петровского М. : Советская энциклопедия. - 3-е изд. -1986. - 543 с.

21. Большой Энциклопедический Словарь "Химия" / под ред. Л.И. Кунянц М. : Большая Российская энциклопедия. - 2-е изд. (репринт.). - 1998. - 790 с.

22. Буркерт У. Молекулярная механика / У. Буркет, Н. Эллинджер. М. : Мир, 1986.-364 с.

23. Вайсбергер А. Физические методы органической химии / А. Вайсбергер. -М.: Иностранная литература, 1952. Т. 2. - 500 с.

24. Васильева Е.М. Биохимические особенности эритроцита. Влияние патологии / Е.М. Васильева // Биомедицинская химия. 2005. - Т. 51, №2. -С. 118-126.

25. Везикуляция эритроцитов при их хранении и связь ее с другими процессами в клетке / Е.А. Черницкий и др. // Биофизика. 1994. - Т. 39, № 2. - С. 357-361.

26. Взаимодействие водородосодержащих сред с магнитными полями / В.И. Петросян и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №2. - С. 1017.

27. Взаимодействие физических и биологических объектов с электромагнитным излучением КВЧ- диапазона / В.И. Петросян и др. // Радиотехника и электроника. 1995. -№ 1.- С.127-134.

28. Включение рифампицина в многослойные и однослойные везикулы (липосомы) разного фосфолипидного состава / А.С. Минина и др. // Биофизика. 2004,- Т.49, №4.- С. 674-679.

29. Владимиров Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов М.: Наука, 1980. - 270 с.

30. Влияние микроволн нетепловой интенсивности на число аберрантных гепатоцитов у крыс / Е.Н. Антипенко, И.В. Ковешникова, О.И. Тимченко // Радиобиология. -1984. Т.24, №3. - С. 403-405.

31. Влияние этанола на гемолитическую устойчивость эритроцитов / О.В. Тюлина и др. // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 2.- С. 218-224.

32. Вода, парадоксы и величие малых величин / В.И. Петросян и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. 2000. - №2. - С. 4-9.

33. Воздействие электромагнитных полей миллиметрового диапазона на структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран / С.А. Баджинян и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. - Т. 42, №5.-С. 551-555.

34. Вукс М.Ф. Добавочные максимумы светорассеяния у растворов третичного бутилового спирта в воде и тяжелой воде / М.Ф. Вукс, JI.B. Шурупова // Вестник Ленинградского университета. 1971. - Т. 40, № 6. - С. 146-147.

35. Вукс М.Ф. Рассеяние света и фазовые переходы в водных растворах простых спиртов / М.Ф. Вукс, JI.B. Шурупова // Оптика и спектроскопия. -1976. -Т.40, № 1. С. 154-159.

36. Габуда С.П. Связанная вода. Факты и гипотезы / С.П. Габуда. Новосибирск : Изд-во СО Наука, 1982. - 160 с.

37. Генерация оксида азота при гидролитических превращениях химиотерапевтического препарата "Нитазол" / В.И. Левина и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2002. -№4.-С. 6-10.

38. Геннис Р. Биомембраны: молекулярная структура и функции / Р. Геннис. -М.: Мир, 1997,- 510 с.

39. Гигиенические аспекты и биологическое действие модулированных электромагнитных полей диапазона радиочастот / Р.И. Ципигина и др.. -М.: НИИ гигиены труда им. Ф.Ф. Эрисмана, 1990.- 60 с.

40. Голант М.Б. Резонансное действие когерентных электромагнитных излучений миллиметрового диапазона волн на живые организмы / М.Б. Голант // Биофизика. 1989. - Т. 34, № 6. - С. 1004-1015.

41. Горизонтов П.Д. Система крови как основа резистентности и адаптации организма / П.Д. Горизонтов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1981.- №2.- С. 323-325.

42. Грегориадис Г. Липосомы в биологических системах / Г. Грегориадис. М. : Медицина, 1983.-384с.

43. Григорьев Н.Б. Генерация оксида азота при химическом восстановлении антибактериальных препаратов нитрофуранового ряда / Н.Б. Григорьев, Г.В. Чечекин, А.П. Арзамасцев // Химия гетероциклических соединений. -1999,- Т.385, №7,- С. 902-906.

44. Григорьев П.Я. Медикаментозная терапия и профилактика обострений и осложнений язвенной болезни / П.Я. Григорьев // Русский медицинский журнал. 1997.- Т.5, №22. - С.30-35.

45. Григорьев Ю.Г. Человек в электромагнитном поле (существующая ситуация, ожидаемые биоэффекты и оценка опасности) / Ю.Г. Григорьев // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. - Т. 37, № 4. - С. 690-702.

46. Гулевский А.К. Влияние низкотемпературного воздействия на проницаемость мембран эритроцитов, реконструированных в средах разного ионного состава / А.К. Гулевский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1981.- Т. 91, № 5. - С. 551-552.

47. Дворкин В.М. Получение липосом методом обращенных фаз без ультразвуковой обработки / В.М. Дворкин // Биохимия. 1985.-Т.50, №5.-С.866-869.

48. Девятков Н.Д. Миллиметровые волны и их роль в процессах жизнедеятельности / Н.Д. Девятков, М.Б. Голант, О.В. Бецкий ; под ред. Н.Д. Девяткова. М.: Радио и связь, 1991. - 168 с.

49. Де Гроот С.П. Термодинамика необратимых процессов / С.П. Де Гроот. -М.: Техн-теор. лит, 1956. 280 с.

50. Дерягин Б.В. Новые свойства жидкостей. Сверхплотная вода / Б.В. Дерягин,

51. Н.В. Чураев. М.: Наука, 1971. - 176с.

52. Дерягин Б.В. Поверхностные силы / Б.В. Дерягин, Н.В. Чураев, В.М. Муллер. -М.: Наука, 1985 399 с.

53. Зацепина Н.Г. Физические свойства и структура воды / Н.Г. Зацепина. М. : Изд-во МГУ, 1987. - 170 с.

54. Зубова К.В. Кластерная структура жидких спиртов, воды, //-гексана / К.В. Зубова, А.В. Зубов, В.А. Зубов // Журнал прикладной спектроскопии. -2005,- Т. 72, №3. -С.305-312.

55. Ивенс И. Механика и термодинамика биологических мембран / И. Ивенс, Р. Скейтлак. М.: Мир, 1982. - 257 с.

56. Изменение свойств липидного бислоя под действием гипохлорита натрия / В.В. Черный и др. // Биологические мембраны. — 1992. Т. 9, №1. - С. 6065.

57. Исследование NO-донорной активности антимикробного препарата тинидазол / В.И. Левина // Химико-фармацевтический журнал. 2004. - Т.38, №1,-С. 15-18.

58. Кесслер Ю.М. Сольвофобные эффекты / Ю.М. Кесслер, А.Л. Зайцев. Л. : Химия, 1989.-312 с.

59. Киров М.В. Конформационная концепция протонной упорядоченности водных систем / М.В. Киров // Журнал структурной химии. 2001. - Т. 42, №5.-С. 958-965.

60. Кноп А. Фенольные смолы и материалы на их основе / А. Кноп, В. Шейб. -М. . Наука, 1983.-230 с.

61. Ковешникова И.В. Генетические эффекты микроволн в биологических системах различных уровней организации / И.В. Ковешникова, Е.Н. Антипенко // Успехи современной биологии. 1988.- Т. 105, № 3. - С. 363373.

62. Ковешникова И.В. Об участии тиреоидных гормонов в модификации мутагенного эффекта микроволн / И.В. Ковешникова, Е.Н. Антипенко // Радиобиология. 1991. - Т. 31, №1. - С. 147-149.

63. Козлов М.М. Мембранный скелет эритроцита. Теоретическая модель / М.М. Козлов, B.C. Маркин // Биологические мембраны. 1986. - Т. 3, №4. - С. 110-121.

64. Конопля Е.Ф. Воздействие электромагнитных излучений миллиметрового диапазона на геном соматических клеток / Е.Ф. Конопля, Л.Н. Николаевич, В.И. Шалатонин // Радиационная биология. Радиоэкология. 2004. - Т. 44, №4.-С. 432-437.

65. Крепе Е. М. Липиды клеточных мембран: эволюция липидов мозга. Адаптационная функция липидов / Е. М. Крепе. Л.: Наука, 1981. - 339 с.

66. Кузякова JI.M. Конструирование трансдермальных препаратов с заданными свойствами / Л.М. Кузякова // Веста. Моск. ун-та. Сер. 2, Химия. 2005. - Т. 46, №1.- С.74-79.

67. Кузнецов П.Е. Влияние некоторых опиатов на стабильность искусственных бислойных липидных мембран / П.Е. Кузнецов, А.Д. Кунцевич, Ю.А. Горбунов // Доклады АН. 1998. - Т. 358, № 1. - С. 125-126.

68. Кунцевич А.Д. Параметр подобия молекулярного электростатического потенциала / А.Д. Кунцевич, П.Е. Кузнецов, Ю.А. Горбунов // IX Всесоюз. конф. по химической информатике : тез. докл. Черноголовка, 1992. - Т.1. -С.5.

69. Кунцевич А.Д. Роль приповерхностной воды в проявлении биологического действия опиатов / А.Д. Кунцевич, П.Е. Кузнецов, Г.В. Назаров // Доклады АН. 1998. - Т. 363, № 4. - С. 552-553.

70. Кучеренко Н.Е. Липиды / Н.Е. Кучеренко, А.Н. Васильев ; под ред. Н.Е. Кучеренко. Киев : Выща школа, 1985. - 247 с.

71. Ландау Л.Д. Теоретическая физика : в 10-ти т. / Л.Д. Ландау, Е.М. Лившиц ; под ред. Л. П. Питаевского. М. : Наука, 1976. - Т. 5 : Статистическая физика. - 613 с.

72. Ленинджер А. Основы биохимии : в 3-х т. / А. Ленинджер ; перевод с англ.1. V»

73. В. В. Борисова ; под ред. В. А. Энгельгардта, Я. М. Варшавского. М. : Мир, 1985.-Т. 1.- 353 с.

74. Лобышев В.И. Компьютерный модульный дизайн параметрических структур воды / В.И. Лобышев, А.Б. Соловей, Н.А. Бульенков // Биофизика. 2003.- Т.48, №6. - С. 1011-1012.

75. Лоуренс Д.Р. Клиническая фармакология : в 2-х т. / Д.Р. Лоуренс, П.Н. Бенитт ; перевод с англ. А.Я. Ивлевой ; под ред. В.И. Метелицы. М. : Медицина, 1991.-Т. 2. - 704 с.

76. Лященко А.К. Комплиментарная организация структуры воды / А.К. Лященко, B.C. Дуняшев // Журнал структурной химии. 2003. - Т. 44, №5. -С. 906-915.

77. Маленков Г.Г. Геометрический аспект явления стабилизации структуры воды молекулами неэлектролитов / Г.Г. Маленков // Журнал структурной химии. 1966. - №7. - С. 331-336.

78. Маленков Г.Г. Физическая химия : современные проблемы / Г.Г. Маленков. -М.: Химия, 1984.-300 с.

79. Малый практикум по физиологии человека и животных / А.С. Батуев И.П. Никитина. СПб.: Изд-во С-Петербургского ун-та, 2001.- 341 с.

80. Марголис Л.Б. Липосомы и их взаимодействия с клетками / Л.Б. Марголис, Л.Д. Бергельсон. М.: Наука, 1986. - 240 с.

81. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. М. : Новая волна, 2005.-1025 с.

82. Метронидазол протектор живых клеток при воздействии КВЧ излучения / П.Е. Кузнецов и др. // Ежегодник Российского Национального Комитета по защите от неионизирующих излучений : сб. тр. -М., 2005. - С.15-18.

83. Миргород Ю.А. Структура разбавленных растворов додецилсульфата натрия /Ю.А. Миргород //Журнал структурной химии. 1991,- Т.32, №6. -С. 93-96.

84. Морохов И.Д. Физические явления в ультрадисперсных средах / И.Д. Морохов, Л.И. Трусов. М.: Энергоатомиздат, 1984.- 324 с.

85. Некоторые вопросы методики и результаты экспериментального исследования воздействий СВЧ на микроорганизмы и животных / Э.Б. Базанова и др. // Успехи физических наук. 1973. - Т. 110, №3. - С. 455456.

86. Неспецифическое действие морфина на мембраны эритроцитов / П.Е. Кузнецов и др. // Биофизика. 2004. - Т. 49, № 4. - С. 680-684.

87. Ольшанская А.Я. Эритроциты в тканевом и имунном гомеостазе / А.Я. Ольшанская, В.А. Одинокова, Н.Н. Квитко // Современная медицина. -1984,-№11. -С. 43-48.

88. Особая роль системы "миллиметровые волны водная среда" в природе / Н.И. Синицин и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. - 1998. - №1. -С.5-23.

89. Падейская Е.Н. Антимикробные препараты в ряду производных сульфаниламида, диаминопиримидина, 5-нитроимидазола, ди-N-оксихиноксалина / Е.Н. Падейская // Русский медицинский журнал. 1997. - Т.5, № 21,- С.20-30.

90. ПНД ФТ 14.1:2:3:4.2-98. Методика определения токсичности проб отходов экспресс-методом с помощью прибора «Биотестер». 1998. - Юс.; ФР. 1.39.2001.00283.

91. Поверхностные пленки воды в дисперсных структурах./ под ред. Е.Д. Щукина. М.: Изд-во МГУ, 1988. - 278 с.

92. Поддержание структуры водного матрикса важнейший механизм гомеостатической регуляции в живых системах / Г.Е. Бриль и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. - 2000. - №2. - С. 18-23.

93. Поллак Дж. Клетки, гели и двигатели жизни : новый унифицирующий взгляд на клеточные функции / Дж. Поллак. М.: Новая волна, 2001. - 300 с.

94. Посте Д. Взаимодействие липидных везикул (липосом) с клетками в культуре и их использование как переносчиков лекарств и макромолекул / Д. Посте. М.: Медицина, 1983.- 107 с.

95. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон и др. М.: Наука, 1981.-243 с.

96. Результаты воздействия облучения электромагнитными волнами миллиметрового диапазона на некоторые биологические объекты / Н.Д. Девятков и др. // Успехи физических наук. 1973. - Т. 110, № 3. - С. 456.

97. Рид Р. Свойства газов и жидкостей / Р. Рид, Дж. Праусниц, Т. Шервуд ; под ред. Б.И. Соколова. Л.: Химия. Ленингр. отд-ние, 1982. - 592 с.

98. Сакович Г.В. Агрегация алмазов полученных из взрывчатых веществ / Г.В. Сакович, В.Д. Губаревич, Ф.З. Бадаев // Доклады АН СССР. 1990. - Т. 310, №2.-С. 402-406.

99. Самойлов О.Я. Структура водных растворов / О .Я. Самойлов. М.: Изд-во АН СССР, 1957.- 182 с.

100. Северина И.С. NO: новый взгляд на механизм действия старых лекарств / И.С. Северина // Биомедицинская химия. 2005.- Т.51, №1. - С. 19-29.

101. Селезнев В.П. Гидратация липидов: факты в пользу дальних влияний на структуру водной фазы / В.П. Селезнев, В.П. Мартаков // Биофизика. -1981. -Т.26, №2. С. 254-256.

102. Сенькович О.А. О размерах пор, возникающих в эритроцитах под воздействием детергентов / О.А. Сенькович, Е.А. Черницкий // Биологические мембраны. 1997. - Т.14, №5. - С. 549-556.

103. Сергеев П.В. Биохимическая фармакология / П.В. Сергеев. М.: Высшая школа, 1982.-342 с.

104. Состояние воды в различных физико-химических условиях / под ред. М.Ф. Вукса, О.Ф. Безрукова. Л.: Изд-во ЛГУ, 1986. - 216 с.

105. Степанов А.Е. Физиологически активные липиды / А.Е. Степанов, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец. М.: Наука, 1991.-136 с.

106. Схема экспресс-методов интегральной оценки биологической активности индивидуальных веществ и комплексных препаратов на биологических объектах / А.Н. Кудрин и др. // Российский химический журнал. 1997.-Т.41,№5.-С. 114-119.

107. Уотерсон Дж. Г. Роль воды в функции клетки / Дж. Г. Уотерсон // Биофизика. 1991.- Т.36, №1. - С. 5-30.

108. Фабелинский И.Л. Молекулярное рассеяние света / И.Л. Фабелинский. -М.: Наука, 1965. -511с.

109. Физиология человека : в 2-х т. / под ред. В.М. Покровского, Г.Ф. Коротько. -М.: Медицина, 2001. Т. 1. - 442 с.

110. Физиология человека : в 4-х т. / под ред. Р. Шмидта, Г. Тевса. М. : Мир, 1986. Т.З : Кровь. Кровообращение. Дыхание. - 673 с.

111. Фрайфельдер Д. Физическая биохимия: применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии / Д. Фрайфельдер. М. : Мир, 1980.-582C.

112. Химические системы для индикации действия магнитного поля на воду / П.Е. Кузнецов и др. // Биомедицинская радиоэлектроника. 2003.- №1. -С. 45-48.

113. Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам / Р. Чанг ; перевод с англ. М.Г. Гольдфельда ; под ред. Ю.Ш. Мошковского. -М.: Мир.-1980.-646 с.

114. Чекман И.С. Справочник по клинической фармакологии / И.С. Чекман, А.П. Пелещук, О.А. Пятак. Киев : Здоров'я, 1986. - 220 с.

115. Черницкий Е.А. Структура и функции эритроцитарных мембран / Е.А. Черницкий, А.В. Воробей. Минск: Наука и техника, 1981.-215 с.

116. Черницкий Е.А. Параметры гемолиза додецилсульфатом натрия как индикатор структурного состояния мембран эритроцитов / Е.А. Черницкий,

117. О.А. Сенькович, Е.И. Слобожанина // Биофизика. 1999. - Т. 44, № 1.-С.66-69.

118. Черномордик А.Б. Справочник по применению антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов / А.Б. Черномордик. Киев : Наукова думка, 1988.-318 с.

119. Чиганова Г.А. Исследование поверхностных свойств ультрадисперсных алмазов / Г.А. Чиганова // Коллоидный журнал. 1994. - Т. 56, № 2. - С. 266268.

120. Чиганова Г.А. Влияние гидратации частиц на агрегативную устойчивость гидрозолей ультрадисперсных алмазов / Г.А. Чиганова // Коллоидный журнал. 1997.- Т. 59, № 1. - С. 93-95.

121. Чиганова Г.А. Агрегирование частиц в гидрозолях ультрадисперсных алмазов / Г.А. Чиганова // Коллоидный журнал. 2000.- Т. 62, № 2. - С. 272277.

122. Широкова К.И. Применение метронидазола в лечении больных язвенной болезнью / К.И. Широкова, К.М. Филлимонов, А.В. Полякова // Клиническая медицина. -1981. №2. - С.48-50.

123. Эйзенберг Д. Структура и свойства воды / Д. Эйзенберг, В. Кауцман. JI. : Гидрометиздат, 1975. - 280 с.

124. Эткинс П. Физическая химия : в 2-х т. / П. Эткинс. М. : Мир, 1980. -Т.1. -570 с.

125. Ядерная (!Н) магнитная релаксационная спектроскопия гидрозолей ультрадисперсных алмазов / A.M. Апаркин и др. // Коллоидный журнал. -2003. Т. 65, №6. - С.725-728.

126. Яновская JI.A. Синтез винилогов халкона / JI.A. Яновская, Б. А. Умирзаков, И.П. Яковлев // Известия АН СССР. Сер. Химия. 1971. - № 11.-С. 24-27.

127. Banghem A. D. Negative staining of phospholipids and their structured modification by surface agents as observed in electron microscope / A. D. Banghem, R.W. Home // Mol. Biol.- 1964. V. 8,- P. 660-668.

128. Banghem A. D. Diffusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipid / A. D. Banghem, M.M. Standish, J.S. Watkins // Mol. Biol.-1965.- V.13.-P. 238-252.

129. Chaplin M.F. Water, its importance to life / M.F. Chaplin // Biochem. Mol. Biol. Educ. 2001. - V.29, № 2.- P. 54-59.

130. Chaplin M.F. A proposal for structuring of water / M.F. Chaplin // Biophis. Chem. 2000.- V. 83, №3. - P. 211-221.

131. Clinical pharmacokinetics of metronidazole and other nitroimidazole antiinfectives / A. H. Lau et al. // Clin. Pharmacokinet. 1992. - № 23,- P. 328-334.

132. Computer simulation of structure and mobility of water hydrogen bonds net in aqueous solutions of some chemical compounds / P. E. Kuznetsov et al. // SPIE Proceedings. 2005. - V. 5773. - P. 188-194.

133. Dardelhon M. Determination of a thermal equivalent of millimeter microwaves in living cells / M. Dardelhon, D. Averbeck, A. Berteaud // Microwave power. -1979. №14. - P. 307-312.

134. Finney J. L. Water and aqueous solution / J. L. Finney. Bristol: Adam Higler, 1986.-349 p.

135. Generation of mltilamellar and unilamellar phospholipid vesicles / M. J. Hope et al. // Chem. phys. lipids. 1986. - V. 40. - P. 89-107.

136. Gregoriades G. Liposomes as drug carriers: resent trends and progress / G. Gregoriades. N. Y.: J. Wiley and sons, - 1988. - 385 p.

137. Griindler W. Sharp resonance in yeast growth prove nont-hermal sensitivity in microwaves / W. Griindler, F. Keilmann // Phys. Rev. Letters.- 1983. V. 51, № 13.- P. 307-312.

138. Influence of ant {-Helicobacter triple-therapy with metronidazole, omeprazole and clarithromycin on intestinal microflora / A. Buhling et al. // Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 2001. - V. 15, № 9. - P. 1445-1452.

139. Inhibition of monoamine oxidase by metronidazole / O. Befani et al. // Inflam. Res. -2001. V. 50, №2. - P.136-137.

140. Kalinichev A.G. Hydrogen Bonding in Supercritical Water. Computer simulation / A.G. Kalinichev, J. D. Buss // Phys.Chem.-1997. V.101.- P.9720-9727.

141. Kalinichev A.G. Thermodynamics and structure of molecular clusters in supercritical water / A.G. Kalinichev, S.V. Churakov // Fluid Phase Equilibra. -2001.-V. 183-184.-P. 271-278.

142. Lasic D. D. Liposomes: from physics to applications / D. D. Lasic. -Amsterdam : Elsevier, 1993.- 180 p.

143. Ling A.M. The aqueous cytoplasm / A.M. Ling. N.Y.: Dakker, 1989. -230 P

144. Mechanism of free radical-induced hemolysis of human erithrosytes: hemolysis by water-soluble radical initiator / Y. Sato et al. // Biochemistry.-1995.- V. 34, №28.-P. 8940-8949.

145. Optical properties of aqueous morphine solutions / P.E. Kuznetsov et al. // SPIE Proceedings. 2003.- V. 5068.- P. 396-404.

146. Pekiner В. Oxidation of human red blood cells by a free radical initiator and effects of radical scavengers / B. Pekiner, J.F. Pennock // Biochem. Mol. Biol. Int.- 1994.-V. 33.- P. 1159-1167.

147. Radhakrishnan T.P. Conformational concept of proton ordering in aqueous systems / T.P. Radhakrishnan, В. C. Herndon // Phys. Chem. 1991. - V. 95, № 7.- P.10609-10617.

148. Ralph E.D. Clinical pharmacokinetics of metronidazole / E.D. Ralph // Clin. Pharmacokinet. 1983. - № 18.- P 43-62.

149. Sozoka F. Comparative properties and methods of preparation of lipid vesicles (liposomes) / F. Sozoka, D. Papahadjopoulos // Annu. rev. biophys. bioeng. -1980.- V.9.- P.467-508.

150. Stenhoff B. Slowing down of the kinetics of liquid/liquid phase separation along the binodal curve of a binary liquid mixture with a miscibility gap approaching critical point / B. Stenhoff, D. Woermann // Chem. Phis. 1995. - V.103, №20.- P.8985-8992.

151. Taylor M.G. Thermal analysis of phase transition behavior in liposomes / M.G. Taylor, R.M. Morris // Thermochemica acta.- 1995.- V. 248.- P. 289 -301.

152. The vascular and glandular organoprotective properties of metronidazole in the rodent stomach / J.K.S. Ко et al. // Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 1997. - V. 11, № 4. -P. 811-819.