Моделирование свойств CD133#2+#1 гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Ипатов, Сергей Евгеньевич

• Ипатов, Сергей Евгеньевич
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Ипатов, Сергей Евгеньевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Получение векторов

2.2. Подготовка плазмидных ДНК

2.3. Подготовка и трансфекция клеток 293Т

2.4. Получение CD133+mieTOK

2.5. Трансфекция полученных вирусов в CD 133+ клетки

2.6. Оценка эффективности включения векторов

2.7. Определение уровня спонтанного апоптоза CD 133+ клеток

2.8. Определение колониеобразующей активности CD133+ клеток

2.9. Оценка способности CD133+CD34" и CD133~CD34+ клеток пуповинной 39 крови человека обеспечивать донорский гемопоэз у NOD/SCID мышей

2.10. Статистическая обработка

ГЛАВА 3. СОЗДАНИЕ ВЕКТОРНОЙ СИСТЕМЫ НА БАЗЕ ВИЧ

ГЛАВА 4. МОДЕЛИРОВАНИЕ СВОЙСТВ CD133+ ГЕМОПОЭТИ-ЧЕСКИХ

СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Моделирование свойств CD133#2+#1 гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови человека»

Гемопоэтические стволовые клетки в последние годы являются предметом детального изучения, поскольку используются для трансплантации при множестве гематологических, онкологических и иммунологических заболеваний (Афанасьев Б.В. 1994; Румянцев А.Г. 1996; Птушкин В.В. 1997; Barth Е. 2000; Thomas E.D., 2000). Традиционно маркером стволовых гемопоэтических клеток считается CD34, однако, в последние несколько лет описан маркер CD133, которые многие авторы считают более ранним маркером стволовых клеток, а С0133+клетки - обладающими большим гемопоэтическим потенциалом (Cotta SV et al., 2002; Marino MP et al., 2002).

Стволовые гемопоэтические клетки для трансплантации получают из трех источников: костный мозг, периферическая кровь и пуповинная кровь. В последнее время возрастает количество трансплантаций стволовых клеток из пуповинной крови (Rubinstein Р., 1999; Gluckman Е., 2004). По мнению многих авторов, популяция стволовых клеток пуповинной крови представлена большим количеством менее дифференцированных клеток, которые обладают большим гемопоэтическим потенциалом. Изучение возможности моделирования влияния различных генетических агентов и прочих внешних факторов на биологические свойства стволовых клеток представляется актуальной задачей, так как в таком случае можно получить возможность влиять на степень и направленность их дифференцировки (Medcalf D, 1989; Ogawa М, 1993; Varnum-Finney В. et al, 1998).

Трудности изучения биологических свойств стволовых клеток связаны в первую очередь с тем, что они в большей своей массе находятся в не клеточного цикла, а в таком состоянии недоступны для большинства вирусных векторов (Sutton R.E., 2002).

Таким образом, появилась задача создания нового поколения векторов, способных проникать в неделящиеся клетки. Выходом из этого положения стала генерация новой конструкции на базе вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1). Было замечено, что вирус обладает способностью инфицировать практически все типы клеток, в том числе и находящиеся в покое (Miller A.D., 1992; Sutton R.E., 2002).

С момента появления генных векторов «третьей» генерации на базе вируса иммунодефицита человека первого типа, появилась практическая возможность исследовать работу отдельных генов в клетках всех известных типов.(Hawley R. et al., 1987; Dull Т. et al., 1998; Sutton R.E., 2002, Marino M. et al., 2002; Follenzi A. 2002).

Это важное обстоятельство позволило с успехом применять их в исследованиях биологии клеток всех тканей организма человека (Hawley R. et al., 1987; Finer M. ct al., 1994; Hatenrichter D. et al., 1994; Naldini L. et al., 1997; Kafri T. et al., 1997; Zufferey R. et al., 1998).

В качестве модели изучения влияния на пролиферативную активность стволовых клеток, применение генов из семейства Notch: Notch 1 и Notch 2 оправдано, так как по данным многих авторов, они являются одними из ключевых генов, принимающих участие в процессах поддержания постоянного самообновления клеточной популяции и являющихся мощными антидифференцировочными факторами (Weinmaster G. et al., 1992;Artavanis-Tsakonas S . et al., 1 995; Lindsell C.E. et al., 1 995; Lewis J., 1 996; Varnum-Finney B. et al., 1998; L. Wu., 2000; Nita Singh et al., 2000., Freddy Radtke et al., Satoru Kojika et al., 2001; 2004; Alfonso Baldi et al., 2004).

Перспектива создания эффективного механизма для переноса генов в неделящиеся клетки, а также создание и отработка моделей для изучения влияния различных факторов на биологические свойства гемопоэтических стволовых клеток с целью модификации их дальнейшей пролиферации и дифференцировки представляется актуальной задачей.

Цель и задачи исследования

Цель работы:

Изучить возможность моделирования изменения биологических свойств CD133+icneTOK пуповинной крови человека с помощью трансфекции генов Notch 1 и Notch 2 на модели колониеобразования in vitro и трансплантации NOD/SCID мышам. Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:

1. Создать векторные системы, способные обеспечить эффективный перенос и корректную работу встраиваемого генетического материала в неделящиеся клетки.

2. Изучить влияние генов Notch 1 и Notch 2 на колониеобразующую активность СБ133+клеток пуповинной крови человека.

3. Оценить характер и степень воздействия генов Notch 1 и Notch 2 на способность СБ133+клеток пуповинной крови к спонтанному апоптозу.

4. Изучить возможность гемопоэтической дифференцировки С0133+клеток пуповинной крови человека у NOD/SCID (Non Obese Diabetic/ Severe Combined Immunodeficiency) мышей.

Научная новизна

Впервые изучено влияние генов Notch 1 и Notch 2 на колониеобразующую активность СБ133+клеток пуповинной крови человека. Показана способность генов Notch 1 и Notch 2 угнетать колониеобразующую активность С0133+клеток и увеличивать уровень спонтанного апоптоза, при этом ген Notch 2 эффективнее гена Notch 1.

Впервые показана возможность эффективной трансфекции генов в неделящиеся клетки при помощи модифицированного вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1).

Впервые на модели NOD/SCID мышей показана возможность изучения гемопоэтической дифференцировки С0133+клеток пуповинной крови человека.

Научно-практическое значение

Модифицированная авторами векторная система, созданная на базе ВИЧ-1, способная обеспечить эффективный перенос исследуемого генетического материала в неделящиеся клетки, а также показанное эффективное влияние генов Notch 1 и Notch 2 на колониеобразующую активность и уровень спонтанного апоптоза С0133+клеток могут быть использованы при моделировании биологических свойств стволовых клеток человека. Отработана модель для изучения приживления и дифференцировки различных популяций гемопоэтических стволовых клеток человека на основе трансплантации предварительно облученным NOD/SCID мышам.

Апробация работы

Результаты работы были доложены на научном конгрессе Science Workshop, Галвестон, Техас, в апреле 2004 г., на Национальном конгрессе GAGT Cell & Gene Therapy, The Woodlands, Хьюстон, Техас, в марте 2003., на междепартаментном съезде Медицинского Колледжа Бэйлор, The Warwick Hotel, Хьюстон, Техас, в феврале 2004., собраниях лабораторий департамента Молекулярной вирологии и микробиологии, Медицинского Колледжа Бэйлор, Хьюстон, Техас 2002-2004 гг.

Диссертация апробирована на совместной научно-практической конференции клинических и лабораторных отделов ФГУ НИИ детской гематологии Росздрава.

Работа выполнена в ФГУ НИИ детской гематологии Росздрава (директор ГУ НИИ ДГ- член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор А.Г.Румянцев), на базе лаборатории моделирования и создания векторных систем ВИЧ-1, (зав. Dr. Richard Е. Sutton, MD., PhD.), департамента молекулярной вирологии и микробиологии (зав. Dr. Janet S. Butel, PhD.), Медицинского колледжа Бэйлор (президент Dr. Ralph D. Feigin, MD.), Хьюстон, Техас, США.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Ипатов, Сергей Евгеньевич

выводы

1. Создана эффективная векторная система доставки генетического материала в неделящиеся клетки на базе модифицированного вируса иммунодефицита человека 1 типа с использованием в качестве промежуточной ступени вектора pBluescript SK(+/-). Эффективность трансфекции СБ133+клеток составила 32%, что значительно превышает уровень альтернативных векторных систем, составляющий 2 - 5%.

2. Активированные формы генов Notch 1 и Notch 2 вызывают угнетение колониеобразущей активности СБ133+клеток пуповинной крови человека.

3. Активированные формы генов Notch 1 и Notch 2 вызывают статистически значимое повышение уровня спонтанного апоптоза СБ133+клеток пуповинной крови человека, причем Notch 2 приблизительно в два раза активнее, чем Notch 1. Клетки инфицированные геном Notch 1 имели уровень спонтанного апоптоза 15.78 ± 3,27 % , а Notch 2 - 29.31 ± 5,64 % р < 0,05. В контрольной популяции этот показатель не превышал 2 % (р < 0,01)

4. При сравнении различных популяций стволовых клеток крови в способности восстанавливать донорский гемопоэз у мышей NOD/SCH), выявилась тенденция преобладания CD1334" клеток над CD 133~CD34+ (2,23 ± 0,26 % и 0,68 ± 0,14 % соответственно, р < 0,001). В случае трансплантации негативного контроля - CD133"CD34" клетки, человеческие С045+клетки не обнаруживаются.

5. Показана возможность использования модели сублетально облученных NOD/SCID мышей для изучения функции гемопоэтических стволовых клеток человека.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Модифицированная авторами векторная система, созданная на базе ВИЧ-1, способная обеспечить эффективный перенос исследуемого генетического материала в неделящиеся клетки, а также показанное эффективное влияние генов Notch 1 и Notch 2 на колониеобразующую активность и уровень спонтанного апоптоза С0133+клеток рекомендуется использовать при моделировании биологических свойств стволовых клеток человека.

2. Для изучения приживления и дифференцировки различных популяций гемопоэтических стволовых клеток человека рекомендуется использовать описанную модель на основе трансплантации ГСК предварительно облученным NOD/SCID мышам.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Ипатов, Сергей Евгеньевич, 2006 год

1. Вайсман Н.Я., Захаров И.Л., Корочкин Л.И. Ген Notch и судьба плодовой мушки Drosophila melanogaster // Успехи соврем, биологии. 2002. Т. 122, № 1. С. 95-108.

2. Гилберт С. Биология развития. М.: Мир, 1995. Т. 3. 352 с.

3. Губенко И.С. Локус Delta в Notch сигнальной системе: организация и плейотропная функция // Цитология и генетика. 2001. Т. 35, № 4. С. 59-80.

4. Корочкин Л.И. Введение в генетику развития. М.: Наука, 1999. 253 с

5. Шемарова И.В. Роль фосфорилирования по тирозину в регуляции пролиферации и клеточной дифференцировки у низших эукариот // Цитология. 2003. Т. 45, № 2. С. 196-215.

6. Шпаков А.О., Деркач К.В., Перцева М.Н. Гормональные сигнальные системы низших эукариот // Цитология. Т. 45 № 3. 223-234.

7. Antonia Follenzi and Luigi Naldini Generation of HIV-1 derived lentiviral vectors . 2002 Academic press, стр 454-456.

8. Arias A.M. New alleles of Notch draw a blueprint for multifunctionality // Trends in Genet. 2002. V. 18. P. 168-170.

9. Artavanis-Tsakonas S, Matsuno K, Fortini M. E., 1995 Notch signaling. Science, vol.268, стр. 255-268.

10. Artavanis-Tsakonas S., Matsuno K., Fortiny M.E. Notch signalling II Science. 1995. V. 268. P. 225-232.

11. Axelrod J.D., Matsuno К., Artavanis-Tsakonas S., Perrimon N. Interection between Wingless and Notch signaling pathways mediated by Dishevelled // Science. 1996. V. 271. P. 1826-1831.

12. Baer PC, et al. Transdifferentiation of distal but not proximal tubular epithelial cells from human kidney in culture. Journal of Experimental Nephrology 1999; 7: стр.306-313

13. Baonza A., Freeman M. Notch signalling and the initiation of neural development in the Drosophila eye // Development. 2001. V. 128. P. 3889-3898.

14. Barolo S., Stone Т., Bang A.G., Posakony J.W. Default repression and Notch signaling: Hairless acts as an adaptor to recruit the corepressors Groucho and dCtBP to Suppressor of Hairless // Genes Dev. 2002. V. 15. P. 1964-1976.

15. Benedetta Bussolati, Stefania Bruno, Cristina Grange, Stefano Buttiglieri, Maria Chiara Deregibus, Dario Cantino and Giovanni Camussi. Isolation of Renal Progenitor Cells from Adult Human Kidney, American Journal of Pathology. 2005; 166, стр. 545-555.

16. Bernard Duvic, Jules A. Hoffmann, Marie Meister and Julien Royet N otch S ignaling Controls Lineage Specification during Drosophila Larval Hematopoiesis. Current Biology, Volume 12, Issue 22, 2002.стр. 1923-1927

17. Cadigan K.M., Nusse R. Wnt signaling: a common theme in animal development // Genes Dev. 1997. V. 11. P. 3286-3305.

18. Cagan R.L., Ready D.F. Notch is required for successive cell decisions in the developing Drosophila retina // Genes Dev. 1989. V. 3. P. 1099-1112.

19. Chen, B. F., C. L. Hsieh, D. S. Chen, and L. H. Hwang. 1992. Improved gene expression by a U3-based retroviral vector. Biochem. Biophys. Res. 184:330-337.

20. Cullen, В. R., P. Т. Lomedico, and G. Ju. 1484. Transcriptional interference in avian retroviruses—implications for the promoter insertion model of leukaemogenesis. Nature 307:241-245.

21. DeZazzo, J. D., J. E. Kilpatrick, and M. J. Imperiale. 1991. Involvement of long terminal repeat U3 sequences overlapping the transcription control region in human immunodeficiency virus type 1 mRNA 3' end formation. Mol. Cell. Biol. 11:1624-1630.

22. Diederich R.J., Matsuno K., Hing H., Artavanis-Tsakonas S. Cytosolic interection between deltex and Notch ankyrin repeats implicates deltex in the signalling pathway // Development. 1994. V. 120. P. 473-481.

23. Doherty D., Feger G., Younger-Shepherd S-, Jan L.Y., Jan Y.N. Delta is a ventral to dorsal signal complementary to Serrate, another Notch ligand, in Drosophila wing formation // Genes Dev. 1996. V. 10. P. 421-434.

24. Dougherty,J. P., and H. M. Temin. 1987. A promoter-less retroviral vector indicates that there are sequences in U3 required for 3' RNA processing. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:1197-1201.

25. Dull, Т., R. ZuJerey, M. Kelly, R. J. Mandel, M. Nguyen, D. Trono, and L. Naldini. 1998. A third-generation lentivirus vector with a conditional packaging system. J. Virol. 72:8463-8471.

26. Finer, M. H., T.J. Dull, L. Quin, D. Farson, and M. R. Roberts. 1994. Kat: a high efficiency retroviral transduction system for primary human T lymphocytes. Blood 83:43-50.

27. Flamant, F., D. Aubert, C. Legrand, F. L. Cosset, and J. Samarut. 1993. Importance of 3' non-coding sequences for efficient retrovirus-mediated gene transfer in avian cells revealed by self-inactivating vectors. J. Gen. Virol. 74:39-46.

28. Fleming R.J., Scottgale T.N., Diederich R.G., Artavanis-Tsakonas S. The gene Serrate encodes a putative EGF-like transmembrane protein essential for proper ectodermal development in Drosophila melanogaster//Genes Dev. 1990. V. 4. P. 2188-2201.

29. Fortiny M.E., Artavanis-Tsakonas S. The Supressor of Hairless protein participate in Notch receptor signaling // Cell. 1994. V. 79. P. 273-282.

30. Giacca, M., M. 1. Gutierrez, S. Menzo, F. D'Adda Di Fagagna, and A. Falaschi. 1992. Human binding site for transcription factor USF/MLTF mimics the negative regulatory element of human immunodeficiency virus type 1. Virology 186:133-147.

31. Gupta S, et al. A role for extrarenal cells in the regeneration following acute renal failure. Kidney Int 2002; 6: стр.1285-1290

32. Hasseijizan RP., Aster JC., et al. 1996: Modulated expression of Notch 1 during thymocyte development. Blood 88:970.

33. Hatenrichter, D. G., X. Wu, S. D. Rettinger, S. C. Kennedy, M. W. Flye, and K. P. Ponder. 1994. Quantitative evaluation of liver-specitic promoters from retroviral vectors after in vivo transduction of hepatocytes. Blood 84:3394-3404.

34. Hawley, R. G., L. Covarrubias, T. Hawley, and B. Mintz. 1987. Handicapped retroviral vectors efficiently transduce foreign genes into hematopoietic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:2406-2410.

35. Hwang, J. J., L. Li, and W. F. Anderson. 1997. A conditional self-inactivating retrovirus vector that uses a tetracycline-responsive expression system. J. Virol. 71:7128-7131.

36. Ingham P.W. Hedgehog signaling: a tale of two lipids // Science. 2001. V. 294. P. 18791881.

37. Ingham P.W., McMahon A.P. Hedgehog signaling in animal development: paradigms and principles // Genes Dev. 2001. V. 15. P. 3059-3087.

38. Jennings В., Preiss A., Delidakis C., Bray S. The Notch signalling pathway is required for Enhancer of split bHLH protein expression during neurogenesis in the Drosophila embryo // Development. 1994. V. 120. P. 3537-3548.

39. Jonhston L.,A., Gallant P. Control of growth and organ size in Drosophila // BioEssays. 2002. V. 24. P. 54-64.

40. Ju B.G., Jeong S., Bae E., Hyun S., Carroll S.B., Yim J., Kim J. Fringe forms a complex with Notch // Nature. 2000. V. 405. P. 191-195.

41. Kafri, Т., U. В lomer, D. A. P eterson, F. H. Gage, and 1. M. Verma. 1 997. S ustained expression of genes delivered directly into liver and muscle by lenti viral vectors. Nat. Genet. 17:314-317.

42. Kheradmand F., Werb Z. Shedding light on sheddases: role in growth and development // BioEssays. 2002. V. 24. P. 8-12.

43. Kidd S., Baylies M.K., Gasic G.P., Young M.W. Structure and distribution of the Notch protein in development Drosophila // Genes Dev. 1989. V. 3. P. 1113-1129.

44. Kidd S., Lockett T.D., Young M.W. The Notch locus of Drosophila melanogaster // Cell. 1983. V. 34. P. 421-433.

45. Klein Т., Seugnet L., Haenlin M., Arias A.M. Two different activities of Suppressor of Hairless during wing development in Drosophila // Development. 2000. V. 127. P. 3553-3566.

46. Rnust E., Tietze К., Campos-Ortega J.A. Molecular analysis of the neurogenic locus Enhancer of split of Drosophila melanogaster // EMBO J. 1987. V. 6. P. 4113-4123.

47. L. Wu, J. Aster and J. D. Griffin Notch receptor signal transduction Experimental Hematology, Volume 28, Issue 7, Supplement 1, 2000. стр.92

48. Lawrence N., Klein Т., Brennan K., Arias A.M. Structural requirements for Notch signalling with Delta and Serrate during the development and patterning of the wing disc of Drosophila// Development. 2000. V. 127. P. 3185-3195.

49. Lewis J, 1996: Neurogenic genes and vertebrate neurogenesis. J.Current opinion in neurobiology 6:3.

50. Lieber Т., Kidd S., Young M.W. Kuzbanian-mediated cleavage of Drosophila Notch // Genes Dev. 2002. V. 16. P. 209-211.

51. Lindsell CE., Shawber CJ et al., 1995, Jagged: A mammalian ligand that activates Notch 1, Cell 80:909.

52. Lindsley D.L., Zimm G.G. The genome of Drosophila melanogaster. New York: Academic Press, 1992.

53. Luo H., Dearolf C.R. The JAK/STAT pathway and Drosophila development // BioEssays. 2001. V. 23. P. 1138-1147.

54. Lyman В., Yedvobnik B. Drosophila Notch recepter activity supresses Hairless functon during adult external sensory organ development // Genetics. 1995. V. 141. P. 1491— 1505.

55. Massague J., Chen Y. Controlling TGF-signaling // Genes Dev. 2000. V. 14. P. 627-644.

56. Matsuno K., Ito M., Hori K., Miyashita F., Suzuki S., Kishi N., Artavanis-Tsakonas S., Okano H. Involvement of proline-rich motif and RING-H2 finger of Deltex in the regulation of Notch signaling // Development. 2002. V. 129. P. 1049-1059.

57. Medcalf D., 1989 The molesular control of cell division, differentiation, commitment and maturation in hematopoietic cells. Nature 399:27.

58. Metcalf D.,1993 Hematopoietic regulators: redundancy or subtility? Blood 82:3515.

59. Michael P. Marino, Milson J. Luce, Jakob Reiser S mall- to large-scale production оf lentivirus vectors. Methods in Molecular Biology, vol.229: Lentivirus Gene Engineering Protocols. Edited by M. Federico, Humana Press Inc., Totowa, NJ 2002 стр.43-50.

60. Michael, N. L., L. D'Arcy, P. K. Ehrenberg, and R. K. Redfield. 1994. Naturally occuring genotypes of human immunodeficiency virus type 1 long terminal repeat display a wide range of basal and Tat-induced activities. J. Virol. 68:3163-3174.

61. Nabel, G. J., S. A. Rice, D. M. Knipe, and D. Baltimore. 1988. Alternative mechanisms for activation of human immunodeficiency virus enhancer in T cells. Science 239:12991302.

62. Naldini, L., U. Blomer, F. H. Gage, D. Trono, and 1. M. Verma. 1996. Efficient transfer, integration and sustained long-term expression of the transgene in adult rat brains injected with a lentiviral vector. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:11382-11388.

63. Naldini, L., U. Blomer, P. Gallay, D. Ory, R. Mulligan, F. H. Gage, I. M. Verma, and D. Trono. 1996. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. Science 272:263-267.

64. Nita Singh, Robert A. Phillips, Norman N. Iscove and Sean E. Egan Expression of notch receptors, notch ligands, and fringe genes in hematopoiesis Experimental Hematology, Volume 28, Issue 5, 2000. стр.527-534

65. Ogawa M., 1993 Differentiation and proliferation of hematopoietic stem cells. Blood 81:2844.

66. Olson, P., H. M. Temin, and R. Dornburg. 1992. Unusually high frequency of reconstitution of long terminal repeats in U3-minus retrovirus vectors by DNA recombination or gene conversion. J. Virol. 66:1336-1343.

67. Olson, P., S. Nelson, and R. Dornburg. 1994. Improved self-inactivating retroviral vector derived from spleen necrosis virus. J.Virol. 68:7060-7066.

68. Proudfoot, N. J. 1986. Transcriptional interference and termination between duplicated alpha-globin gene constructs suggests a novel mechanism for gene regulation. Nature 322:562-565.

69. Qi H., Rand M.D., Wu X., Sestan N., Wang W., Rakic P., Xu Т., Artavanis-Tsakonas S. Processing of the Notch ligand Delta by the metalloprotease Kuzbanian // Science. 1999. V. 283. P. 91-94.

70. Rauskolb C. The establishment of segmentation in the Drosophila leg // Development. 2001. V. 128. P. 4511^521.

71. Ray W.J., Yao M., Nowotny P., Mummdagger J., ZhangDagger W., WuDagger J.Y., Kopandagger R., Goate A.M. Evidence for a physical interaction between Presenilin and Notch // Proc. Natl Acad. Sci. 1999. V. 96. P. 3263-3268.

72. Rebay I., Fehon R., Artavanis-Tsakonas S. Specific truncations of Drosophila Notch define dominant activated and dominant negative forms of the receptor // Cell. 1993. V. 74. P. 319-329.

73. Richard E. Sutton Production of Lentiviral Vector Supernatants and Trasduction of Cellular Targets. Methods in Molecular Biology, vol.229: Lentivirus Gene Engineering Protocols. Edited by M. Federico, Humana Press Inc., Totowa, NJ стр.147-158. 2002

74. Richard E. Sutton, Henry Т. M. Wu, Richard Rigg, Ernst Bohnlein, and Patrick O. Brown Human Immunodeficiency Virus Type 1 Vectors Efficiently Transduce Human Hematopoietic Stem Cells. Journal of Virology, Vol.72, No.7, стр. 5781-5788, 1998

75. Robert E. Donahue and Irvin S.Y. Chen Hematopoietic Stem and Progenitor Cells. Methods i n M olecular b iology,vol.229: Lentivirus G ene Engineering P rotocols. E dited by M.Federico, Humana press Inc., Totowa, NJ 2003 стр. 117-127.

76. Rooke J., Pan D., Xu Т., Rubin G.M. Kuz a conserved metalloprotease-disintegrinprotein with two roles in Drosophila neurogenesis // Science. 1996. V. 273. P. 12271231.

77. Ruohola H., Bremer K.A., Baker D., Swedlow J.R., Jan L.Y., Jan Y.N. Role of neurogenic genes in establishment of follicle cell fate and oocyte polarity during oogenesis in Drosophila// Cell. 1991. V. 66. P. 433-449.

78. Satoru Kojika and James D. Griffin Notch receptors and hematopoiesis Experimental Hematology, Volume 29, Issue 9, 2001.стр. 1041-1052

79. Romain Zufferey, Thomas Dull, Ronald J. Mandel, Anatoly Bukovsky et al. Self-Inactivating lentivirus vector for safe and efficient in vivo gene delivery Journal of virology, Dec. 1998, Vol. 72, № 12, стр. 9873-9880.

80. Selim Kuci, Johannes T. Wessels, Hans-Jorg Buhring, Karin Schilbach et al. Identification of a novel class of CD 133+CD 34- peripheral blood cells with SCID-repopulating capacity. Journal Macs and more vol.7. 1/2003 стр.6-8.

81. Shepard S.B., Broverman S.A., Muskavitch M.A.T. A tripartite interection among of allele of Notch, Delta and Enhancer of split during imaginal development of Drosophila melanogaster// Genetics. 1989. V. 122. P. 429-438.

82. Siewekc, M. H., H. Tekotte, V. Jarosch, and T. Graf. 1998. Cooperative interaction of Ets-1 with USF-1 required for HIV-1 enhancer activity in T cells. EMBO J. 17:17281739.

83. Soriano, P., G. Friedricli, and P. Lawinger. 1991. Promoter interactions in retrovirus vectors introduced into fibroblasts and embryonic stem cells. J. Virol. 65:2314-2319.

84. Sotillos S., Roch F., Campuzano S. The metalloprotease-desintegrin Kusbanian perticipates in Notch activation during growth and partenning of Drosophila imaginal discs // Development. 1997. V. 124. P. 4769-4779.

85. Spector, D. J. 1983. The pattern of integration of viral DNA sequences in the adenovirus 5-transformed human cell line 293. Virology 130:533-538.

86. Speicher S.A., Thomas U., Knust U.H., Knust E. The Serrate locus of Drosophila and its role in morphogenesis of the wing imaginal discs: control of cell proliferation // Development. 1994. V. 120. P. 535-544.

87. Struhl G., Adachi A. Nuclear access and action of Notch in vivo // Cell. 1998. V. 93. P. 649-660.

88. Struhl G., Greenwald I. Presenilin mediated transmembrane cleavage is required for Notch signal transduction in Drosophila // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2001. V. 98. P. 229-234.

89. Summers JY, et al. AC133+ G-0 cells from cord blood show a high incidence of long-term culture-initiating cells and a capacity for more than 100 million-fold amplification of colony-forming cells in vitro. Stem Cells 2004; 22: стр.704-715

90. Sutherland, D.R., Keating, A. et al. Sensetive detection and enumeration of CD133+ 34+ cells in peripheral and cord blood by flow cytometry. Exp. Gematol. 1994 стр.10031010.

91. Takahito Ito, et al. Application of bone marrow-derived stem cells in experimental nephrology. Journal of Experimental Nephrology, 2001; 9 стр. 444-450

92. L. Naldini, T. Kafri, D. Trono, I. M. Verma, and F. H. Gage. 1997. Highly efficient and sustained gene transfer in adult neurons with a lentivirus vector. J. Virol. Vol.71: стр.6641-6649.

93. Valsamakis, A., N. Schck, and J. C. Alwine. 1992. Elements upstream of the AAUAAA within the human immunodeficiency virus polyadenylation signal are required for efficient polyadenylation in vitro. Mol. Cell. Biol. 12:3699-3705.

94. Varnum-Finney В, Pulton M.E., Yu M.,et al., 1998: The Notch ligand, Jagged 1, influences the development of primitive hematopoietic precursors cells, Blood 91:4084

95. Wu, X., .J. Holschen, S. C. Kennedy, and K. P. Ponder. 1996. Retroviral vector sequences may interact with some internal promoters and influence expression. Hum. GeneTher. 7:159-171.

96. Yee, . K., .1. C. Moores, D. J. Jolly, , J. A. Wolff, J. G. Respress, and T. Friedmann. 1987. Gene expression from transcriptionally disabled retroviral vectors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:5197-5201.

97. Yu, S. F., T. von Ruden, P. W. Kantoff, C. Graber, M. Sciberg, U. Ruther, W. F. Anderson, and E. Gilboa. 1986. Self-inactivating retroviral vectors designed for transfer of whole genes into mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:3194-3198.

98. Zufferey, R., D. Nagy, R. J. Mandel, L. Naldini, and D. Trono. 1997. Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo. Nat. Biolcchnol. 15:871-875