МикроРНК мочи как маркеры неинвазивной диагностики рака предстательной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Лехнов Евгений Анатольевич

• Лехнов Евгений Анатольевич
• кандидат наук
• 2019

Оглавление диссертации кандидат наук Лехнов Евгений Анатольевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Рак предстательной железы, существующие методы диагностики и их характеристика

1.2. Современные методы диагностики РПЖ в клинической практике

1.3. Молекулярная диагностика РПЖ

1.4. Дополнительные тесты на основе ПСА

1.5. Маркеры мочи

1.5.1. РНК-маркеры в диагностике РПЖ

1.5.2. Определение паттернов метилирования ДНК у больных раком предстательной железы

1.5.3. Детекция онкоспецифических ферментов при РПЖ

1.5.4. Определение онкоспецифических метаболитов в моче

1.6. МикроРНК мочи при раке предстательной железы

1.6.1. Использование осадка клеток мочи в качестве источника диагностических микроРНК

1.6.2. Использование бесклеточного супернатанта мочи в качестве источника диагностических микроРНК

1.6.3. Использование внеклеточных везикул мочи в качестве источника диагностических микроРНК

1.7 Технические затруднения, возникающие при стандартизации анализа внеклеточных микроРНК

1.8 Выделение микроРНК из биологических жидкостей

1.9 Внеклеточные везикулы

1.9.1. Выделение внеклеточных везикул

1.9.2. Методы, применяемые для выделения внеклеточных везикул из мочи

1.9.3. Проблема контаминации выделенных из мочи препаратов внеклеточных везикул

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Реактивы

2.1.2. Оборудование

2.1.3. Клинические характеристики здоровых доноров, больных ДГПЖ и больных РПЖ

2.2. Методы

2.2.1. Забор образцов крови

2.2.2. Обработка образцов крови и мочи

2.2.3. Ультрацентрифугирование

2.2.4. Протокол выделения внеклеточных везикул из мочи

2.2.5. Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ)

2.2.6. Протокол выделения микроРНК из плазмы крови с октановой кислотой

2.2.7. Протокол выделения микроРНК из мочи с октановой кислотой

2.2.8. Кислая экстракция фенол-хлороформом микроРНК из плазмы крови и мочи

2.2.9. Выделение микроРНК из биологических жидкостей с помощью Exiqon miRCURY biofluids kit (Exiqon, Дания)

2.2.10. Протокол выделения микроРНК из внеклеточных везикул мочи с октановой кислотой

2.2.11. Осаждение микроРНК изопропанолом

2.2.12. Анализ нуклеиновых кислот плазмы крови и мочи

2.2.13. Обратная транскрипция и количественная полимеразная цепная реакция

2.2.14. Электрофорез в денатурирующих условиях по Леммли и Вестерн-блот

2.2.15. Профилирование микроРНК во фракциях бесклеточного супернатанта мочи после центрифугирования при 17 тыс. g и внеклеточных везикул мочи с использованием платформы miRCURY LNA miRNA qPCR Panels Urine (Exiqon, Дания)

2.2.16. Статистический анализ профиля экспрессии микроРНК во фракциях бесклеточного супернатанта мочи после центрифугирования при 17 тыс. g и ВВ мочи здоровых доноров, пациентов с ДГПЖ и больных РПЖ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Разработка метода выделения внеклеточных везикул из мочи

3.2. Описание внеклеточных везикул мочи здоровых доноров и больных раком предстательной железы

3.3. Выбор оптимальных условий выделения микроРНК из плазмы крови и мочи здоровых доноров

3.4. Сравнение эффективности выделения микроРНК из биологических жидкостей при помощи протокола с октановой кислотой, фенол-хлороформной экстракции и Exiqon miRCURY biofluids kit (Exiqon, Дания)

3.5. Анализ белкового состава супернатантов плазмы крови после добавления реагентов Gu / OcA и miRCURY biofluids kit методом SDS-PAGE

3.6. Сравнительный анализ профиля экспрессии микроРНК во фракции супернатанта мочи и фракции внеклеточных везикул мочи здоровых доноров, пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и больных раком предстательной железы

3.7. Анализ представленности микроРНК различных фракций мочи больных раком предстательной железы

3.8. Биоинформационный анализ профиля экспрессии микроРНК обеих фракций мочи больных РПЖ при помощи баз данных OncomiRDB и DIANA-TarBase

3.9. Определение диагностически значимых пар микроРНК

3.10. Алгоритм анализа данных для разработки диагностических систем

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений

РПЖ - рак предстательной железы

ДГПЖ - доброкачественная гиперплазия предстательной железы

ПСА - простатспецифический антиген

ВВ - внеклеточные везикулы

ПЖ - предстательная железа

ЗД - здоровые доноры

ПРИ - пальцевое ректальное исследование

ТРУЗИ - трансректальное ультразвуковое исследование

КТ - компьютерная томография

МРТ - магнитно-резонансная томография

ПЭТ - позитронно-эмиссионная томография

мпМРТ - мультипараметрическая магнитно-резонансная томография

МВ - микровезикулы

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ОТ - обратная транскрипция

ТЭМ - трансмиссионная электронная микроскопия Ои - гуанидин изотиоцианат ОсА - октановая кислота

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «МикроРНК мочи как маркеры неинвазивной диагностики рака предстательной железы»

Актуальность

К середине 90-х годов в связи с увеличением средней продолжительности жизни и снижением смертности населения от других конкурирующих причин, рак предстательной железы (РПЖ) во многих странах мира стал выходить в лидеры по встречаемости злокачественных новообразований у мужчин. Так, в России РПЖ в структуре онкологических заболеваний в 2015 г. переместился с 4 на 2 место и составил уже 14% от всех злокачественных новообразований, встречающихся у мужчин [1].

РПЖ, в целом, имеет тенденцию к росту заболеваемости во всем мире и находится на втором месте среди всех онкологических заболеваний у мужчин. В развитых странах (США), согласно American Cancer Society 2017, показатель 5-летней выживаемости больных с локальными формами РПЖ составляет почти 100%, однако при распространенных формах этот показатель снижается до 29% [2].

Причинами поздней диагностики РПЖ являются длительное бессимптомное течение заболевания, несовершенство методов первичной диагностики РПЖ, в том числе асимптомных микроскопических очагов, сложность дифференциальной диагностики очагов РПЖ и очагов доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ), несвоевременное оказание медицинской помощи (в том числе и по причине недостаточного уровня образованности населения или по экономическим причинам), недостаточное техническое оснащение медицинских учреждений, а также несовершенство клинико-инструментальной базы. Эффективность диагностики РПЖ в развитых странах выше, чем в развивающихся, в связи с этим, смертность от РПЖ в развитых странах ниже, чем в развивающихся [3].

Несмотря на то, что на сегодняшний день разработаны различные тесты для диагностики и прогноза РПЖ, широкое их внедрение в клиническую практику ограничено в виду недостаточности их предикторной способности, инвазивности процедуры или вследствие дороговизны теста. Кроме того, такие клинические параметры, как простатспецифический антиген (ПСА), методы визуальной (лучевой) диагностики и гистопатологичсеский индекс Глисона определяют риски РПЖ, но не позволяют оценить прогноз на индивидуальном уровне у конкретного пациента, что в дальнейшем отражается на качестве лечения [4]. Таким образом, в онкоурологии существует острая необходимость в эффективных маркерах РПЖ для решения различных клинических задач, включая эффективную диагностику ранних стадий РПЖ, оптимизацию терапии и

мониторинг процесса. То есть требуются маркеры, которые позволили бы надежно и однозначно детектировать опухолевый процесс на доклинических стадиях (при отсутствии клинических проявлений), достоверно дифференцировать очаги РПЖ от других объемных образований предстательной железы (ПЖ), а также контролировать эффективность процесса лечения.

Так называемая "жидкая биопсия" является новым подходом, основанным на исследовании внеклеточных нуклеиновых кислот, включая ДНК и РНК, в биологических жидкостях человека, таких, как кровь или моча [5]. В крови и других биологических жидкостях обнаружены ассоциированные с опухолями микроРНК, которые являются наиболее представленным классом внеклеточных РНК биологических жидкостей. Эти молекулы отличаются высокой стабильностью во внеклеточных средах, которая обеспечивается их способностью формировать комплексы с белками, липопротеинами или упаковываться во внеклеточные везикулы. Известно, что некодирующие РНК (включая и микроРНК) составляют более половины транскриптома и более 80% циркулирующих РНК [6], что позволяет уверенно детектировать эти молекулы современными методами анализа и делает их удобными диагностическими мишенями. Более того, микроРНК играют важную роль в регуляции процессов метаболизма, эмбрионального развития, пролиферации, дифференцировки, старения, участвуют в иммунном и стрессовом ответах, геномном импринтинге, а также непосредственно участвуют в регуляции основных путей сигнальной трансдукции и могут выступать в качестве драйверов развития онкологического процесса [6]. Известно, что злокачественная трансформация клеток и прогрессия онкологического процесса связаны с изменением профиля экспрессии микроРНК по сравнению с нормальными клетками. Иначе говоря, уровень экспрессии отдельных микроРНК может либо повышаться, либо снижаться. Поэтому анализ и выявление гипо- или гиперэкспрессированных микроРНК является перспективным не только для ранней диагностики РПЖ, а также для дифференциальной диагностики объемных образований предстательной железы и выявлением злокачественных и агрессивных форм [4].

МикроРНК, ассоциированные с разными гистотипами опухолей или стадиями заболевания, могут выступать в роли молекулярных биомаркеров и могут быть использованы для диагностики и прогноза течения заболевания, а также являться потенциальными терапевтическими мишенями [7].

Интерес к циркулирующим микроРНК как потенциальным биомаркерам для целей ранней диагностики заболеваний человека постоянно растёт. По данным базы данных медицинских и биологических публикаций Национального центра биотехнологической

информации США (NCBI) Pub Med наблюдается стойкий рост числа публикаций по теме внеклеточных микроРНК при РПЖ. При этом в последнее время стало очевидно, что поиск одного-двух микроРНК-маркеров РПЖ не позволит решить хотя бы часть диагностических задач в силу гетерогенности заболевания и сопутствующих процессов, и такая задача может быть решена только при помощи использования панели микроРНК -маркеров [8].

Кроме того, решение некоторых методологических проблем, в частности эффективного и производительного выделения микроРНК из комплексов с биополимерами внеклеточных сред, выявление оптимальных источников диагностических микроРНК (упакованных в комплексы с биополимерами или в внеклеточные везикулы) так же ждет своего решения.

В связи с этим поиск микроРНК, связанных с развитием РПЖ, анализ их представленности у больных с разной клинической манифестацией РПЖ представляет большой научный и практический интерес, поскольку не только позволит получить новые данные о развитии процессов канцерогенеза и выявить ключевые регуляторные молекулы этого процесса, но и обнаружить потенциальные маркеры злокачественных новообразований ПЖ, которые могут быть использованы для улучшения диагностики и лечения РПЖ.

Цель исследования

Изучить представленность и концентрации внеклеточных микроРНК в моче здоровых доноров (ЗД), пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) и больных раком предстательной железы (РПЖ) для выявления микроРНК, ассоциированных с развитием рака предстательной железы и разработки диагностических систем.

Задачи исследования

1. Разработать простой и эффективный метод выделения микроРНК из мочи.

2. Разработать простой метод для выделения внеклеточных везикул мочи, пригодный для последующего исследования микроРНК, находящихся в составе внеклеточных везикул мочи.

3. Провести сравнительное исследование профиля экспрессии микроРНК во фракциях внеклеточных везикул и бесклеточного супернатанта мочи здоровых доноров, пациентов с

доброкачественной гиперплазией предстательной железы и больных раком предстательной железы.

4. Провести поиск микроРНК-предикторов рака предстательной железы при помощи биоинформационного анализа данных массового исследования экспрессии микроРНК в исследуемых группах здоровых доноров, пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и больных раком предстательной железы.

5. Предложить вариант алгоритма анализа данных, позволяющий осуществлять рациональный отбор микроРНК-маркеров, оценивать диагностические диапазоны их относительных концентраций и формировать панели маркеров для эффективной диагностики рака предстательной железы.

Научная новизна работы

Разработан и оптимизирован оригинальный протокол выделения микроРНК из мочи и плазмы ЗД - аналог miRCURY™ RNA Isolation Kit фирмы Exiqon A/S, Denmark. Протокол отличается простотой, скоростью исполнения, высокой эффективностью выделения микроРНК из различных биологических жидкостей организма (кровь, моча) и отсутствием опасных реагентов по сравнению с традиционными методами выделения и коммерческим аналогом.

Разработан и оптимизирован протокол выделения ВВ из мочи, не уступающий по эффективности выделения ВВ золотому стандарту - ультрацентрифугированию, но не требующий применения дорогостоящего оборудования и превосходящий его по простоте и скорости выделения.

Во внеклеточных везикулах и бесклеточной фракции мочи исследуемых групп пациентов одновременно оценены концентрации 84 микроРНК.

Предложены и охарактеризованы по нескольким критериям наилучшие комбинации микроРНК обеих фракций мочи, позволяющие отличить группы ЗД, больных ДГПЖ и больных РПЖ между собой, а также определена диагностическая ценность таких пар микроРНК.

Предложен вариант алгоритма анализа данных, позволяющий осуществлять рациональный отбор микроРНК-маркеров, оценивать диагностические диапазоны их относительных концентраций и формировать панели маркеров для эффективной диагностики РПЖ

Теоретическая и практическая значимость

Разработаны высокоэффективные протоколы выделения микроРНК и ВВ из мочи и охарактеризованы микроРНК различных фракций мочи у ЗД, пациентов с ДГПЖ и РПЖ. С помощью биоинформационного анализа обнаружены ассоциированные с развитием РПЖ микроРНК различных фракций мочи, что позволяет расширить знания о молекулярных осноавах развития РПЖ. Предложена диагностическая система, основанная на измерении концентраций 24 микроРНК и позволяющая идентифицировать пациентов с РПЖ, ДГПЖ и ЗД с чувствительностью не менее 90% и специфичностью 100%, которая может быть использована в практической медицине для улучшения диагностики РПЖ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Выявлены пары микроРНК во фракциях супернатанта мочи после центрифугирования при 17 тыс. g и внеклеточных везикул мочи здоровых доноров, пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и больных раком предстательной железы, позволяющие отличить три группы доноров между собой с чувствительностью не менее 90% и специфичностью 100%.

2. Наибольшей диагностической информативностью обладают пары miR-107-miR-26b-5p, miR-375-3p-miR-26b-5p в группе сравнения здоровые-больные раком предстательной железы во фракции супернатанта мочи, а также miR-31-5p- miR-16-5p, miR-31-5p-miR-200Ь, miR-31-5p-miR-30e-3p и miR-31-5p-miR-660-5p в группе здоровые доноры-пациенты с доброкачественной гипреплазией предстатательной железы во фракции внеклеточных везикул мочи.

Публикации и апробация работы

По материалам диссертации опубликовано 6 статей, 2 патента и 14 тезисов. Результаты работы представлены на 9 конференциях.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из глав: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Заключение», «Выводы», «Список литературы».

Работа изложена на 118 страницах машинописного текста (12 шрифт, интервал 1.5), содержит 9 рисунков и 17 таблиц. Библиография включает 171 литературный источник.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Рак предстательной железы, существующие методы диагностики и их

характеристика

Рак предстательной железы - по праву считается глобальной социальной проблемой в виду своей распространенности [9] и социальной значимости во всем мире [10]. Глобально в мире уровень заболеваемости и смертности от РПЖ составил 30.8 и 8,6 на 100 тыс. мужчин соответственно [11]. По выявляемости РПЖ стоит на втором месте и на пятом месте среди причин смерти после рака легкого, желудка, печени и колоректального рака по данным 2012 года [12, 13, 14, 15]. В России заболеваемость РПЖ занимает второе место после рака легкого [16] и составляет 14% от всех злокачественных новообразований, встречающихся у мужчин. Как и во всем мире, выявляемость РПЖ в России неуклонно растет, опережая темпы роста выявляемости таких заболеваний, как рак легкого и рак желудка [17]. Так в структуре заболеваемости мужского населения России злокачественными новообразованиями РПЖ в 2004 г. составлял 6,9 %, а в 2009 г. - 10.7 % [16]. Среди больных раком простаты, выявленных в 2015г. На долю локализованного РПЖ (I-II стадии) пришлось 55.1%, местно-распространенного РПЖ (III стадия) - 27.4%, метастатического РПЖ (IV стадия) - 15.9%. Пятилетняя выживаемость для случаев с местным и региональным течением заболевания близка к 100%, а для РПЖ с отдаленными метастазами - только 34%. Эта статистика и объясняет относительно невысокую смертность от РПЖ, которая составляет 8%. [18].

Согласно мировой статистике показатели заболеваемости и смертности от РПЖ в развитых и развивающиеся странах значительно варьируют во всем мире [19]. В зависимости от региона заболеваемость может отличаться до 25 раз с самыми высокими показателями в развитых регионах (Австралия, Новая Зеландия, Западная и Северная Европа и Северная Америка) и самыми низкими - в Южной и Центральной Азии [11, 12, 15]. Если же сравнивать развитые и развивающиеся страны между собой, то в экономически развитых странах заболеваемость РПЖ выше, а в менее развитых странах отмечается выше смертность [14, 20].

Так, наибольшая заболеваемость и смертность для развитых стран по данным International Agency for Research on Cancer (IARC) характерна для Соединенного Королевства - 111.1 и 22.8 на 100 тысяч человек соответственно. Наибольшая заболеваемость и смертность среди развивающихся стран отмечена в Уганде 48.2 и 38.8 на 100 тыс. соответственно.

Причем показатели заболеваемости в Уганде приближаются к показателям смертности

[14].

Такие вариации в заболеваемости среди развитых и развивающихся стран в значительной мере обусловлены различной степенью охвата скринингом с использованием теста на ПСА [11, 12, 20]. Кроме того, это обусловлено генетическими факторами, диетой, образом жизни, факторами окружающей среды, уровнем здравоохранения страны, а также уровнем образования населения [21].

Стоит отметить, что использование теста на ПСА оказало большее влияние на процент выявляемости РПЖ, чем смертности от этого заболевания [15].

В экономически развитых странах, где более эффективна система выявления РПЖ за счет проведения скрининговых программ ежегодно диагностируется до 70% всех случаев РПЖ в мире (1 млн. мужчин) [16], причем в 80% случаев - это локальные формы на ранних стадиях с низким риском [9, 15, 20] и более хорошим прогнозом. Таким образом, значительно снижается и число смертельных исходов от этого заболевания [22]. Однако одновременно с этим увеличивается и число чрезмерных (излишних) биопсий с последующей гипердиагностикой и повышенными затратами на лечение [12]. В связи с агрессивным скринингом лишь до 10% пациентов умирают от этого заболевания [14]. Для многих азиатских и африканских стран характерна более низкая выявляемость РПЖ, когда чаще диагностируются распространенные формы, требующие более радикального лечения и больших финансовых затрат [11, 14, 20].

Интересно, что частота случайных (асимптомптомных, с объемом опухоли менее 0.5 куб.см.) или аутопсийных случаев РПЖ в разных странах мира примерно одинакова, в отличие от клинически значимых форм РПЖ, статистика которых широко варьирует среди стран мира [23].

Такие экзогенные факторы, как диета, потребление алкоголя, воздействие ультрафиолетового излучения, хроническое воспаление, оказывают влияние на риск прогрессирования РПЖ и способствуют переходу от так называемого латентного (асимптомного) РПЖ к клинически значимым формам. Следует отметить, что наследственные факторы важны для определения риска развития клинического РПЖ, в то время как экзогенные факторы также могут влиять на риск прогрессирования этого заболевания [23].

1.2. Современные методы диагностики РПЖ в клинической практике

На сегодняшний день, современная диагностика РПЖ основывается на определении содержания ПСА в плазме или сыворотке крови, в случае его повышения — выполнении пальцевого ректального исследования (ПРИ) и трансректального ультразвукового исследования предстательной железы (ТРУЗИ). Проведение этих основных диагностических методов показано всем мужчинам после 50 лет в плановом порядке. При подозрении на РПЖ, выполняют пункционную биопсию под контролем ультразвукового исследования [24].

Окончательный диагноз РПЖ ставится на основании гистологического заключения с определением индекса Глисона. Сумма Глисона является важным показателем, который позволяет предсказать прогноз заболевания. Например, пациенты с индексом Глисона 8 -10 имеют плохой прогноз [23].

Такие дополнительные методы обследования, как компьютерная томография (КТ), магнитно-резонансная томография (МРТ) и ее различные варианты, позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), рентгенография и сцинтиграфия костей скелета используют для оценки распространенности онкологического процесса и определения стадии: оценки кровотока в предстательной железе и опухолевом узле, состояния капсулы, парапростатической клетчатки, семенных пузырьков, выявления регионарных и отдаленных метастазов, а также контроля проводимого лечения [24, 25, 26]. ПРИ является простой физикальной процедурой, которая позволяет быстро пальпаторно оценить состояние предстательной железы: ее размеры, форму, четкость границ консистенцию, эластичность, наличие узловых и кистозных образований в органе, подвижность железы по отношению к прямой кишке.

Большинство РПЖ расположены в периферической зоне и могут быть обнаружены с помощью ПРИ, когда объем составляет более 0.2 см. куб. [23]. Несмотря на все преимущества данного метода, ПРИ обладает низкой чувствительностью. Так, например, с помощью ПРИ только в 30% пальпируемых узлов выявляется РПЖ Т1-Т2 стадии [27]. Полученные в результате ПРИ данные непросто интерпретировать и постановка правильного заключения зависит от опыта специалиста. При выполнении ПРИ возможны как ложноположительные заключения при наличии у пациента сопутствующих заболеваний предстательной железы (простатит, доброкачественная гиперплазия предстательной железы), так и недооценка стадии, например, при локализации опухолевых узлов в передней части предстательной железы.

ТРУЗИ сегодня применяется широко и является золотым стандартом диагностики РПЖ. ТРУЗИ отличает высокая информативность, а возможность одновременного выполнения биопсии предстательной железы [18] делает этот метод незаменимым для первичной диагностики РПЖ [17].

Использование соноэластографии, основанной на фиксации изменений обратного рассеивания ультразвукового сигнала в зависимости от плотности ткани, позволило еще больше повысить точность ТРУЗИ при РПЖ. Соноэластография имеет высокую информативность и по эффективности как минимум сопоставима с МРТ c использованием эндоректальной катушки [17].

Несмотря на то, что ТРУЗИ является наиболее распространенным методом визуализации предстательной железы, этот метод не позволяет определить размер опухоли с достаточной точностью [10]. Стоит отметить, что ТРУЗИ как и ПРИ, обладает недостаточной чувствительностью и не способно дифференцировать T2 и T3 стадии с достаточной диагностической точностью. Так, на дооперационном этапе при ТРУЗИ не диагностируется 60% опухолей стадии T3, кроме того, оценка УЗИ-картины также во многом определяется квалификацией специалиста [23].

Тем не менее, сочетание ПРИ и ТРУЗИ позволяет обнаруживать T3a стадию РПЖ более точно, чем любой из этих методов в отдельности [23].

МРТ является одним из перспективных методов первичной диагностики РПЖ, включая диагностику рецидивов [18]. В отличие от КТ, МРТ лучше дифференцирует ткани предстательной железы и окружающих органов и способствует лучшей визуализации структур малого таза и их взаимоотношений [27].

На сегодняшний день для диагностики РПЖ применяются различные варианты МРТ, включая эндоректальную МРТ и мультипараметрическую МРТ (мпМРТ). Информативность МРТ повышается при дополнении общего исследования использованием эндоректальной катушки. По сравнению с наружной МРТ, эндоректальная МРТ значительно повышает качество изображения. Например, результаты эндоректальной МРТ могут повлиять на решение о сохранении или резекции сосудисто-нервного пучка при радикальной простатэктомии [10].

МпМРТ является новым методом в диагностике РПЖ и объединяет анатомические изображения (Т2 и Т1) с функциональной оценкой, включающей диффузионно-взвешенные изображения, динамическое контрастное усиление и, в ряде случаев, протонную магнитно-резонансную спектроскопию in vivo [28].

У мпМРТ высокая чувствительность к очагам РПЖ с индексом Глисона более 7. Результаты многих одноцентровых исследований приводят к выводу, что мпМРТ может

надежно обнаруживать агрессивные формы РПЖ у пациентов с показанием на биопсию предстательной железы с отрицательным (КРУ) и положительным прогностическим значением (РРУ) в диапазоне от 63 до 98% и от 34 до 68% соответственно. Таким образом, некоторые авторы предлагают проведение мпМРТ перед биопсией с целью уменьшения числа биопсий благодаря выявлению клинически незначимых очагов РПЖ [23]. МпМРТ также может быть эффективным методом диагностики локального рецидива РПЖ в ложе удаленной железы после радикальной простатэктомии даже при отрицательных результатах комплексного ТРУЗИ [18].

В диагностике костных метастазов МРТ оказалась более чувствительной и специфичной, чем остеоцинтиграфия, прицельная рентгенография и КТ. Согласно метаанализу МРТ также более чувствительна, чем холин-ПЭТ/КТ, хотя последняя имеет более высокую специфичность [23].

В том случае, если результаты обследования будут влиять на стратегию лечения РПЖ, необходимо уточнение N стадии по классификации ТКМ [10]. Однако чувствительность абдоминальной КТ и МРТ в обнаружении метастазов в регионарные лимфатические узлы составляет менее 40%. Таким образом, визуализация микроскопических очагов РПЖ без измерения размеров и формы лимфатических узлов с помощью данных методов диагностики не представляется возможным. Поэтому в виду низкой чувствительности КТ или МРТ не должны использоваться для нодального стадирования (определении N стадии по ТКМ) у пациентов с низким риском, а золотым стандартом является открытая или лапароскопическая лимфаденэктомия [23]. В целом, несмотря на ряд преимуществ, МРТ не нашло широкого применения в скрининге и стадировании РПЖ в виду дороговизны исследования [10, 17].

Кроме МРТ, для диагностики РПЖ может применяться и позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), которая проводится с помощью С11-или F18-меченых радиофармпрепаратов холина для выявления первичного или рецидивирующего РПЖ. С11-холин служит специфичным маркером для неинвазивной визуализации локусов РПЖ. ПЭТ в последнее время применяется в комбинации с КТ (ПЭТ-КТ). ПЭТ позволяет одновременно оценивать структурные и метаболические изменения в органах и тканях, благодаря чему ПЭТ-КТ стала одним из ведущих методов диагностической визуализации, используемых в клинической онкологии. Важным преимуществом этого метода является возможность одномоментного обследования всего организма, что позволяет диагностировать регионарные и отдаленные метастазы, а также их сочетание [16]. Стоит отметить, что С11-или F18-холин ПЭТ-КТв диагностике нодальных метастазов имеет хорошую специфичность, но относительно низкую чувствительность [10-73%] и, таким

образом, не достигает клинически приемлемой диагностической эффективности [23]. В диагностике костных метастазов при М - стадировании (определении М стадии по TNM) F -фторид натрия (F-NaF) ПЭТ или ПЭТ/КТ показывает сходную специфичность и большую чувствительность по сравнению с остеосцинтиграфией. Кроме того, метод имеет самую высокую чувствительность к обнаружению костных метастазов, по сравнению с другими методами визуализации [23].

ПЭТ имеет те же медико-социальные ограничения, что и МРТ, при этом стоимость как самого исследования, так и необходимого оборудования еще выше [17]. Несмотря на преимущества МРТ, ПЭТ-КТ для диагностики распространенных форм РПЖ и оценки костных метастазов при РПЖ при М-стадировании, наиболее распространенным методом является остеосцинтиграфия с технецием-99 [23, 29]. Сцинтиграфия костей скелета является наиболее точным методом выявления метастазов рака предстательной железы в кости [26] и превосходит рентгенографию скелета. Хотя сцинтиграфия уступает по точности холин ПЭТ/КТ и мпМРТ в диагностике костного поражения РПЖ [23]. Стоит отметить, что на результат диагностики при помощи остеосцинтиграфии в значительной мере влияют значения уровня ПСА, клиническая стадия и индекс Глисона у конкретного пациента [23].

Характерные метастатические изменения в костях скелета также могут быть определены при помощи рентгенографиии, имеющих вид характерных пятнистых, мраморных очагов за счет чередования остеобластических и остеолитических участков [27]. Повышенная активность щелочной фосфатазы в 70% случаев может указывать на наличие метастазов. Одновременная оценка показателей активности щелочной фосфатазы и ПСА повышает клиническую эффективность почти до 98%, а содержание ПСА в сыворотке крови более 100 нг/мл является единственным и важнейшим диагностическим критерием метастазирования с прогностической ценностью 100% [10].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Лехнов Евгений Анатольевич, 2019 год

Список литературы

1. Каприн А. Д. Злокачественные новообразования в России в 2015 году/ Москва. 2017. -250 с.

2. URL:https://www.cancer.org/content/cancer/en/cancer/prostate-cancer/detection-diagnosis-staging/survival-rates.html

3. Alford A.V. The Use of Biomarkers in Prostate Cancer Screening and Treatment / Alford A.V., Brito J.M., Yadav K.K., Yadav S.S., Tewari A.K., Renzulli J. // Reviews in Urology -2017. - Т. 19 - № 4 - С.221-234.

4. Kretschmer A. Biomarkers in prostate cancer - Current clinical utility and future perspectives / Kretschmer A., Tilki D. // Critical Reviews in Oncology/Hematology - 2017. - Т. 120 -С.180-193.

5. Di Meo A. Liquid biopsy: a step forward towards precision medicine in urologic malignancies / Di Meo A., Bartlett J., Cheng Y., Pasic M.D., Yousef G.M. // Molecular Cancer - 2017. - Т. 16 - № 1.

6. Zaporozhchenko I.A. Representation Analysis of miRNA in Urine Microvesicles and CellFree Urine in Prostate Diseases / Zaporozhchenko I.A., Bryzgunova O.E., Lekchnov E.A., Osipov I.D., Zaripov M.M., Yurchenko Y.B., Yarmoschuk S.V., Pashkovskaya O.A., Rykova E.Y., Zheravin A.A., Laktionov P.P. // Biochemistry (Moscow), Supplement Series B: Biomedical Chemistry - 2018. - Т. 12 - № 2 - С.156-163.

7. Fendler A. The translational potential of microRNAs as biofluid markers of urological tumours / Fendler A., Stephan C., Yousef G.M., Kristiansen G., Jung K. // Nature Reviews Urology - 2016. - Т. 13 - № 12 - С.734-752.

8. Balacescu O. Urinary microRNAs for prostate cancer diagnosis, prognosis, and treatment response: are we there yet? / Balacescu O., Petrut B., Tudoran O., Feflea D., Balacescu L., Anghel A., Sirbu I.O., Seclaman E., Marian C. // Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA - 2017. - Т. 8 - № 6 - C.e1438.

9. Endzelins E. Diagnostic, prognostic and predictive value of cell-free miRNAs in prostate cancer: a systematic review / Endzelins E., Melne V., Kalnina Z., Lietuvietis V., Riekstina U., Llorente A., Line A. // Molecular Cancer - 2016. - Т. 15 - № 1.

10. Глыбочко П.В. Практическая урология. Москва. -2012. -352 с.

11. Chen S.-L. Prostate Cancer Mortality-To-Incidence Ratios Are Associated with Cancer Care Disparities in 35 Countries / Chen S.-L., Wang S.-C., Ho C.-J., Kao Y.-L., Hsieh T.-Y., Chen W.-J., Chen C.-J., Wu P.-R., Ko J.-L., Lee H., Sung W.-W. // Scientific Reports - 2017. - Т. 7 -№ 1.

12. Zhang K. Prostate cancer screening in Europe and Asia / Zhang K., Bangma C.H., Roobol M.J. // Asian Journal of Urology - 2017. - Т. 4 - № 2 - С.86-95.

13. Hendriks R.J. Comparative analysis of prostate cancer specific biomarkers PCA3 and ERG in whole urine, urinary sediments and exosomes / Hendriks R.J., Dijkstra S., Jannink S.A., Steffens M.G., Oort I.M. van, Mulders P.F.A., Schalken J.A. // Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM) - 2016. - Т. 54 - № 3.

14. Banerjee S. Worldwide Prostate Cancer Epidemiology: Differences Between Regions, Races, and Awareness Programs / Banerjee S. // International Journal of Clinical and Experimental Medical Sciences - 2016. - Т. 2 - № 1 - С.1.

15. Filippou P. Epidemiology of Prostate and Testicular Cancer / Filippou P., Ferguson J., Nielsen M. // Seminars in Interventional Radiology - 2016. - Т. 33 - № 03 - С.182-185.

16. Aslanidis I.P. 11C-Choline Pet/Ct in the Detection of Prostate Cancer Relapse in Patients After Radical Treatment With Psa Level < 10 Ng/Ml / Aslanidis I.P., Pursanova D.M., Ekaeva I.V., Trifonova T.A., Mukhortova O.V., Kotljarov A.A., Korniletskiy I.D., Shirokorad V.I., Roshchin D A. // KnE Energy - 2018. - Т. 3 - № 2 - С.32.

17. Мухомор А.И. Комплексное трансректальное ультразвуковое исследование с цветовым допплеровским кодированием, допплерографией и соноэластграфией в выявлении рака предстательной железы. / А.И. Мухомор, Г.И. Ахвердиева, Э.Б. Санай и др. // Онкоурология - 2013. - № 2. - С.42-52.

18. Ахвердиева Г.И. Панов В.О. Тюрин ИЕ, Долгушин БИ, Матвеев ВБ, Камолов БШ, и др. Мультипараметрическая магнитно-резонансная томография в диагностике локального рецидива рака предстательной железы после радикальной простатэктомии. / Ахвердиева Г.И., Панов В.О., Тюрин И.Е., Долгушин Б.И., Матвеев В.Б., Камолов Б.Ш., и др. // Онкоурология - 2015. - № 4. - С.72-79.

19. Daniyal M. Epidemiology, Etiology, Diagnosis and Treatment of Prostate Cancer / Daniyal M., Siddiqui Z.A., Akram M., Asif H.M., Sultana S., Khan A. // Asian Pacific Journal of Cancer Prevention - 2014. - Т. 15 - № 22 - С.9575-9578.

20. Khazaei S. Global prostate cancer incidence and mortality rates according to the human development index / Khazaei S., Rezaeian S., Ayubi E., Gholamaliee B., Pishkuhi M.A., Mansori K., Nematollahi S., Sani M., Hanis S.M. // Asian Pacific Journal of Cancer Prevention -2016. - Т. 17 - № 8 - С.3791-3794.

21. Cooperberg M.R. Epidemiology of prostate cancer / Cooperberg M.R., Chan J.M. // World Journal of Urology - 2017. - Т. 35 - № 6 - С.849-849.

22. Wu D. Urinary biomarkers in prostate cancer detection and monitoring progression / Wu D., Ni J., Beretov J., Cozzi P., Willcox M., Wasinger V., Walsh B., Graham P., Li Y. // Critical Reviews in Oncology/Hematology - 2017. - Т. 118 - С.15-26.

23. URL:http://uroweb.org/guideline/prostate-cancer/#5.

24. Глыбочко П.В. Урология /Москва, 2014. -250 с.

25. Чиссов В.И. Онкология/ - Москва, Гэотар-Медиа, 2007. - 544 с.

26. Аль-Шукри С.Х. Урология/ С.Х. Аль-Шукри и В Н. Ткачук, Москва, 2012. - 480 с.

27. Матвеев Б. Клиническая онкоурология /Москва, 2003. -717 с.

28. А.В. Мищенко и др.Система унифицированного подхода к интерпретации магнитно-резонансной томографии предстательной железы согласно руководству PI-RADSv2 // Онкоурология - 2016 Т. 12 - №1 - С.81-89.

29. Демешко П. Д. и др. Роль остеосцинграфии в диагностике метастатического поражения костей скелета у пациентов с биохимическим рецидивом после радикальной простатэктомии по поводу рака предстательной железы // Онкоурология - 2012. - №4 -С.70-77.

30. Martignano F. Urinary RNA-based biomarkers for prostate cancer detection / Martignano F., Rossi L., Maugeri A., Galla V., Conteduca V., De Giorgi U., Casadio V., Schepisi G. // Clinica Chimica Acta - 2017. - Т. 473 - С.96-105.

31. Batra J.S. A Quest to Identify Prostate Cancer Circulating Biomarkers with a Bench-to-Bedside Potential / Batra J.S., Girdhani S., Hlatky L. // Journal of Biomarkers - 2014. - Т. 2014 - С.1 -12.

32. Saini S. PSA and beyond: alternative prostate cancer biomarkers / Saini S. // Cellular Oncology - 2016. - T. 39 - № 2 - C.97-106.

33. Mottet N. EAU-ESTRO-SIOG Guidelines on Prostate Cancer. Part 1: Screening, Diagnosis, and Local Treatment with Curative Intent / Mottet N., Bellmunt J., Bolla M., Briers E., Cumberbatch M.G., De Santis M., Fossati N., Gross T., Henry A.M., Joniau S., Lam T.B., Mason M.D., Matveev V.B., Moldovan P.C., Bergh R.C.N. van den, Van den Broeck T., Poel

H.G. van der, Kwast T.H. van der, Rouviere O., Schoots I.G., Wiegel T., Cornford P. // European Urology - 2017. - T. 71 - № 4 - C.618-629.

34. Filella X. Prostate Cancer Detection and Prognosis: From Prostate Specific Antigen (PSA) to Exosomal Biomarkers / Filella X., Foj L. // International Journal of Molecular Sciences - 2016. -T. 17 - № 11 - C.1784.

35. Ferro M. Biomarkers in localized prostate cancer / Ferro M., Buonerba C., Terracciano D., Lucarelli G., Cosimato V., Bottero D., Deliu V.M., Ditonno P., Perdona S., Autorino R., Coman

I., De Placido S., Di Lorenzo G., De Cobelli O. // Future Oncology - 2016. - T. 12 - № 3 -C.399-411.

36. Hatakeyama S. Recent progress and perspectives on prostate cancer biomarkers / Hatakeyama S., Yoneyama T., Tobisawa Y., Ohyama C. // International Journal of Clinical Oncology - 2017. - T. 22 - № 2 - C.214-221.

37. Rigau M. The Present and Future of Prostate Cancer Urine Biomarkers / Rigau M., Olivan M., Garcia M., Sequeiros T., Montes M., Colas E., Llaurado M., Planas J., Torres I. de, Morote J., Cooper C., Reventos J., Clark J., Doll A. // International Journal of Molecular Sciences -2013. - T. 14 - № 6 - C.12620-12649.

38. Trock B.J. Circulating biomarkers for discriminating indolent from aggressive disease in prostate cancer active surveillance: / Trock B.J. // Current Opinion in Urology - 2014. - T. 24 -№ 3 - C.293-302.

39. Zhang W. A novel urinary long non-coding RNA transcript improves diagnostic accuracy in patients undergoing prostate biopsy: Novel Urinary LncRNA for Detection of Prostate Cancer / Zhang W., Ren S.-C., Shi X.-L., Liu Y., Zhu Y.-S., Jing T.-L., Wang F.-B., Chen R., Xu C.-L., Wang H.-Q., Wang H.-F., Wang Y., Liu B., Li Y.-M., Fang Z.-Y., Guo F., Lu X., Shen D., Gao X., Hou J.-G., Sun Y.-H. // The Prostate - 2015. - T. 75 - № 6 - C.653-661.

40. Tosoian J.J. Urinary Biomarkers for Prostate Cancer / Tosoian J.J., Ross A.E., Sokoll L.J., Partin A.W., Pavlovich C.P. // Urologie Clinics of North America - 2016. - T. 43 - № 1 - C.17-38.

41. Hessels D. Urinary biomarkers for prostate cancer: a review / Hessels D., Schalken J.A. // Asian Journal of Andrology - 2013. - T. 15 - № 3 - C.333-339.

42. Locke J.A. Next generation biomarkers in prostate cancer / Locke J.A., Black P.C. // Frontiers in Bioscience (Landmark Edition) - 2016. - T. 21 - C.328-342.

43. Massillo C. Implications of microRNA dysregulation in the development of prostate cancer / Massillo C., Dalton G.N., Farre P.L., De Luca P., De Siervi A. // Reproduction - 2017. - T. 154 - № 4 - C.R81-R97.

44. Kanwal R. MicroRNAs in prostate cancer: Functional role as biomarkers / Kanwal R., Plaga A.R., Liu X., Shukla G.C., Gupta S. // Cancer Letters - 2017. - T. 407 - C.9-20.

45. Vanacore D. Micrornas in prostate cancer: an overview / Vanacore D., Boccellino M., Rossetti S., Cavaliere C., D'Aniello C., Di Franco R., Romano F.J., Montanari M., La Mantia E., Piscitelli R. // Oncotarget - 2017. - T. 8 - № 30 - C.50240.

46. Zhou H. Collection, storage, preservation, and normalization of human urinary exosomes for biomarker discovery / Zhou H., Yuen P.S.T., Pisitkun T., Gonzales P.A., Yasuda H., Dear J.W., Gross P., Knepper M.A., Star R.A. // Kidney International - 2006. - T. 69 - № 8 - C.1471-1476.

47. Stephan C. Prostate-specific antigen and other serum and urine markers in prostate cancer / Stephan C., Ralla B., Jung K. // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Reviews on Cancer -2014. - T. 1846 - № 1 - C.99-112.

48. Bryant R.J. Changes in circulating microRNA levels associated with prostate cancer / Bryant R.J., Pawlowski T., Catto J.W.F., Marsden G., Vessella R.L., Rhees B., Kuslich C., Visakorpi T., Hamdy F.C. // British Journal of Cancer - 2012. - T. 106 - № 4 - C.768-774.

49. Egidi M.G. Stability Assessment of Candidate Reference Genes in Urine Sediment of Prostate Cancer Patients for miRNA Applications / Egidi M.G., Cochetti G., Guelfi G., Zampini D., Diverio S., Poli G., Mearini E. // Disease Markers - 2015. - T. 2015 - C.1-6.

50. Casanova-Salas I. Identification of miR-187 and miR-182 as Biomarkers of Early Diagnosis and Prognosis in Patients with Prostate Cancer Treated with Radical Prostatectomy / Casanova-Salas I., Rubio-Briones J., Calatrava A., Mancarella C., Masiá E., Casanova J., Fernández-Serra A., Rubio L., Ramírez-Backhaus M., Armiñán A., Domínguez-Escrig J., Martínez F., García-Casado Z., Scotlandi K., Vicent M.J., López-Guerrero J.A. // The Journal of Urology - 2014. -T. 192 - № 1 - C.252-259.

51. Salido-Guadarrama A.I. Urinary microRNA-based signature improves accuracy of detection of clinically relevant prostate cancer within the prostate-specific antigen grey zone / Salido-Guadarrama A.I., Morales-Montor J.G., Rangel-EscareñO C., Langley E., Peralta-Zaragoza O., Colin J.L.C., Rodriguez-Dorantes M. // Molecular Medicine Reports - 2016. - T. 13 - № 6 -C.4549-4560.

52. Stuopelyte K. The utility of urine-circulating miRNAs for detection of prostate cancer / Stuopelyte K., Daniunaite K., Bakavicius A., Lazutka J.R., Jankevicius F., Jarmalaite S. // British Journal of Cancer - 2016. - T. 115 - № 6 - C.707-715.

53. Srivastava A. MicroRNA Profiling in Prostate Cancer - The Diagnostic Potential of Urinary miR-205 and miR-214 / Srivastava A., Goldberger H., Dimtchev A., Ramalinga M., Chijioke J., Marian C., Oermann E.K., Uhm S., Kim J.S., Chen L.N., Li X., Berry D.L., Kallakury B.V.S., Chauhan S.C., Collins S.P., Suy S., Kumar D. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 10 - C.e76994.

54. Korzeniewski N. Identification of cell-free microRNAs in the urine of patients with prostate cancer / Korzeniewski N., Tosev G., Pahernik S., Hadaschik B., Hohenfellner M., Duensing S. // Urologic Oncology: Seminars and Original Investigations - 2015. - T. 33 - № 1 - C.16.e17-16.e22.

55. Sapre N. Curated MicroRNAs in Urine and Blood Fail to Validate as Predictive Biomarkers for High-Risk Prostate Cancer / Sapre N., Hong M.K.H., Macintyre G., Lewis H., Kowalczyk A., Costello A.J., Corcoran N.M., Hovens C M. // PLoS ONE - 2014. - T. 9 - № 4 - C.e91729.

56. Haj-Ahmad T.A. Potential Urinary miRNA Biomarker Candidates for the Accurate Detection of Prostate Cancer among Benign Prostatic Hyperplasia Patients / Haj-Ahmad T.A., Abdalla M.A., Haj-Ahmad Y. // Journal of Cancer - 2014. - T. 5 - № 3 - C.182-191.

57. Bryzgunova O.E. Comparative Study of Extracellular Vesicles from the Urine of Healthy Individuals and Prostate Cancer Patients / Bryzgunova O.E., Zaripov M.M., Skvortsova T.E., Lekchnov E.A., Grigor'eva A.E., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Ryabchikova E.I., Yurchenko Y.B., Voitsitskiy V.E., Laktionov P.P. // PLOS ONE - 2016. - T. 11 - № 6 -

C.e0157566.

58. Koppers-Lalic D. Non-invasive prostate cancer detection by measuring miRNA variants (isomiRs) in urine extracellular vesicles / Koppers-Lalic D., Hackenberg M., Menezes R. de, Misovic B., Wachalska M., Geldof A., Zini N., Reijke T. de, Wurdinger T., Vis A., Moorselaar J. van, Pegtel M., Bijnsdorp I. // Oncotarget - 2016. - T. 7 - № 16.

59. Foj L. Exosomal and Non-Exosomal Urinary miRNAs in Prostate Cancer Detection and Prognosis: Urinary miRNAs in Prostate Cancer / Foj L., Ferrer F., Serra M., Arévalo A., Gavagnach M., Giménez N., Filella X. // The Prostate - 2017. - T. 77 - № 6 - C.573-583.

60. Rodríguez M. Identification of non-invasive miRNAs biomarkers for prostate cancer by deep sequencing analysis of urinary exosomes / Rodríguez M., Bajo-Santos C., Hessvik N.P., Lorenz S., Fromm B., Berge V., Sandvig K., Line A., Llórente A. // Molecular Cancer - 2017. - T. 16 -№ 1.

61. Hanson E.K. Identification of forensically relevant body fluids using a panel of differentially expressed microRNAs / Hanson E.K., Lubenow H., Ballantyne J. // Analytical Biochemistry -2009. - T. 387 - № 2 - C.303-314.

62. Arroyo J.D. Argonaute2 complexes carry a population of circulating microRNAs independent of vesicles in human plasma / Arroyo J.D., Chevillet J.R., Kroh E.M., Ruf I.K., Pritchard C.C., Gibson D.F., Mitchell P.S., Bennett C.F., Pogosova-Agadjanyan E.L., Stirewalt

D.L., Tait J.F., Tewari M. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2011. - T. 108 - № 12 - C.5003-5008.

63. Vickers K.C. MicroRNAs are transported in plasma and delivered to recipient cells by high-density lipoproteins / Vickers K.C., Palmisano B.T., Shoucri B.M., Shamburek R.D., Remaley A T. // Nature Cell Biology - 2011. - T. 13 - № 4 - C.423-433.

64. Raposo G. Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends / Raposo G., Stoorvogel W. // The Journal of Cell Biology - 2013. - T. 200 - № 4 - C.373-383.

65. Eldh M. Importance of RNA isolation methods for analysis of exosomal RNA: Evaluation of different methods / Eldh M., Lötvall J., Malmhäll C., Ekström K. // Molecular Immunology -2012. - T. 50 - № 4 - C.278-286.

66. Vlassov V.V. Circulating microRNAs in lung cancer: Prospects for diagnosis, prognosis, and prediction of antitumor treatment efficacy / Vlassov V.V., Rykova E.Y., Ponomaryova A.A., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Cherdyntseva N.V., Laktionov P.P. // Molecular Biology -2015. - T. 49 - № 1 - C.48-57.

67. Moret I. Assessing an Improved Protocol for Plasma microRNA Extraction / Moret I., Sánchez-Izquierdo D., Iborra M., Tortosa L., Navarro-Puche A., Nos P., Cervera J., Beltrán B. // PLoS ONE - 2013. - T. 8 - № 12 - C.e82753.

68. Kim Y.-K. Short Structured RNAs with Low GC Content Are Selectively Lost during Extraction from a Small Number of Cells / Kim Y.-K., Yeo J., Kim B., Ha M., Kim V.N. // Molecular Cell - 2012. - T. 46 - № 6 - C.893-895.

69. McAlexander M.A. Comparison of Methods for miRNA Extraction from Plasma and Quantitative Recovery of RNA from Cerebrospinal Fluid / McAlexander M.A., Phillips M.J., Witwer K.W. // Frontiers in Genetics - 2013. - T. 4.

70. Cheng L. Characterization and deep sequencing analysis of exosomal and non-exosomal miRNA in human urine / Cheng L., Sun X., Scicluna B.J., Coleman B.M., Hill A.F. // Kidney International - 2014. - T. 86 - № 2 - C.433-444..

71. Zaporozhchenko I.A. A phenol-free method for isolation of microRNA from biological fluids / Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Skvortsova T.E., Bryzgunova O.E., Bondar A.A., Loseva E.M., Vlassov V.V., Laktionov P.P. // Analytical Biochemistry - 2015. - T. 479 - C.43-47.

72. Lekchnov E.A. Protocol for miRNA isolation from biofluids / Lekchnov E.A., Zaporozhchenko I.A., Morozkin E.S., Bryzgunova O.E., Vlassov V.V., Laktionov P.P. // Analytical Biochemistry - 2016. - T. 499 - C.78-84.

73. Camussi G. Exosome/microvesicle-mediated epigenetic reprogramming of cells / Camussi G., Deregibus M.-C., Bruno S., Grange C., Fonsato V., Tetta C. // American Journal of Cancer Research - 2011. - T. 1 - № 1 - C.98-110.

74. Abels E.R. Introduction to Extracellular Vesicles: Biogenesis, RNA Cargo Selection, Content, Release, and Uptake / Abels E.R., Breakefield X.O. // Cellular and Molecular Neurobiology - 2016. - T. 36 - № 3 - C.301-312.

75. Iraci N. Focus on Extracellular Vesicles: Physiological Role and Signalling Properties of Extracellular Membrane Vesicles / Iraci N., Leonardi T., Gessler F., Vega B., Pluchino S. // International Journal of Molecular Sciences - 2016. - T. 17 - № 2 - C.171.

76. Tamkovich S.N. Exosomes: Generation, structure, transport, biological activity, and diagnostic application / Tamkovich S.N., Tutanov O.S., Laktionov P.P. // Biochemistry (Moscow) Supplement Series A: Membrane and Cell Biology - 2016. - T. 10 - № 3 - C.163-173.

77. Borges F.T. TGF- 1-Containing Exosomes from Injured Epithelial Cells Activate Fibroblasts to Initiate Tissue Regenerative Responses and Fibrosis / Borges F.T., Melo S.A., Ozdemir B.C., Kato N., Revuelta I., Miller C.A., Gattone V.H., LeBleu V.S., Kalluri R. // Journal of the American Society of Nephrology - 2013. - T. 24 - № 3 - C.385-392.

78. Gonda D.D. Neuro-oncologic Applications of Exosomes, Microvesicles, and Other Nano-Sized Extracellular Particles: / Gonda D.D., Akers J.C., Kim R., Kalkanis S.N., Hochberg F.H., Chen C.C., Carter B.S. // Neurosurgery - 2013. - T. 72 - № 4 - C.501-510.

79. Zmigrodzka M. The biology of extracellular vesicles with focus on platelet microparticles and their role in cancer development and progression / Zmigrodzka M., Guzera M., Miskiewicz A., Jagielski D., Winnicka A. // Tumor Biology - 2016. - T. 37 - № 11 - C.14391-14401.

80. Ciardiello C. Focus on Extracellular Vesicles: New Frontiers of Cell-to-Cell Communication in Cancer / Ciardiello C., Cavallini L., Spinelli C., Yang J., Reis-Sobreiro M., Candia P. de, Minciacchi V., Di Vizio D. // International Journal of Molecular Sciences - 2016. - T. 17 - № 2 - C.175.

81. Thery C. Membrane vesicles as conveyors of immune responses / Thery C., Ostrowski M., Segura E. // Nature Reviews Immunology - 2009. - T. 9 - № 8 - C.581-593.

82. Frydrychowicz M. Exosomes - Structure, Biogenesis and Biological Role in Non-Small-Cell Lung Cancer / Frydrychowicz M., Kolecka-Bednarczyk A., Madejczyk M., Yasar S., Dworacki G. // Scandinavian Journal of Immunology - 2015. - T. 81 - № 1 - C.2-10.

83. Mathivanan S. Exosomes: Extracellular organelles important in intercellular communication / Mathivanan S., Ji H., Simpson R.J. // Journal of Proteomics - 2010. - T. 73 - № 10 - C.1907-1920.

84. Al-Nedawi K. Microvesicles: Messengers and mediators of tumor progression / Al-Nedawi K., Meehan B., Rak J. // Cell Cycle - 2009. - T. 8 - № 13 - C.2014-2018.

85. Akers J.C. Biogenesis of extracellular vesicles (EV): exosomes, microvesicles, retrovirus-like vesicles, and apoptotic bodies / Akers J.C., Gonda D., Kim R., Carter B.S., Chen C.C. // Journal of Neuro-Oncology - 2013. - T. 113 - № 1 - C.1-11.

86. Willms E. Cells release subpopulations of exosomes with distinct molecular and biological properties / Willms E., Johansson H.J., Mager I., Lee Y., Blomberg K.E.M., Sadik M., Alaarg A., Smith C.I.E., Lehtio J., EL Andaloussi S., Wood M.J.A., Vader P. // Scientific Reports -2016. - T. 6 - № 1.

87. Ha D. Exosomes as therapeutic drug carriers and delivery vehicles across biological membranes: current perspectives and future challenges / Ha D., Yang N., Nadithe V. // Acta Pharmaceutica Sinica B - 2016. - T. 6 - № 4 - C.287-296.

88. Colombo M. Biogenesis, Secretion, and Intercellular Interactions of Exosomes and Other Extracellular Vesicles / Colombo M., Raposo G., Thery C. // Annual Review of Cell and Developmental Biology - 2014. - T. 30 - № 1 - C.255-289.

89. Yokoi A. Towards the realization of clinical extracellular vesicle diagnostics: challenges and opportunities / Yokoi A., Yoshioka Y., Ochiya T. // Expert Review of Molecular Diagnostics -2015. - T. 15 - № 12 - C.1555-1566.

90. Boukouris S. Exosomes in bodily fluids are a highly stable resource of disease biomarkers / Boukouris S., Mathivanan S. // PROTEOMICS - Clinical Applications - 2015. - T. 9 - № 3-4 -C.358-367.

91. Ihara T. The process of ultrastructural changes from nuclei to apoptotic body / Ihara T., Yamamoto T., Sugamata M., Okumura H., Ueno Y. // Virchows Archiv: An International Journal of Pathology - 1998. - T. 433 - № 5 - C.443-447.

92. Hristov M. Apoptotic bodies from endothelial cells enhance the number and initiate the differentiation of human endothelial progenitor cells in vitro / Hristov M. // Blood - 2004. - T. 104 - № 9 - C.2761-2766.

93. Yânez-Mô M. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions / Yânez-Mô M., Siljander P.R.-M., Andreu Z., De Wever O. // Journal of Extracellular Vesicles

- 2015. - T. 4 - № 1 - C.27066.

94. Kaur A. Role of Exosomes in Pathology / Kaur A., Leishangthem G.D., Bhat P, Mahajan V., Dev Singh N., Banga H.S. // Journal of Environmental Pathology, Toxicology and Oncology. -2014. - T. 1 - C.7-11.

95. Marleau A.M. Exosome removal as a therapeutic adjuvant in cancer / Marleau A.M., Chen C.-S., Joyce J.A., Tullis R.H. // Journal of Translational Medicine - 2012. - T. 10 - № 1.

96. Tominaga N. Micromanaging of tumor metastasis by extracellular vesicles / Tominaga N., Katsuda T., Ochiya T. // Seminars in Cell & Developmental Biology - 2015. - T. 40 - C.52-59.

97. Junker K. Extracellular Vesicles and Their Role in Urologic Malignancies / Junker K., Heinzelmann J., Beckham C., Ochiya T., Jenster G. // European Urology - 2016. - T. 70 - № 2 -C.323-331.

98. Escudier B. Vaccination of metastatic melanoma patients with autologous dendritic cell (DC) derived-exosomes: results of thefirst phase I clinical trial / Escudier B., Dorval T., Chaput N., André F., Caby M.-P., Novault S., Flament C., Leboulaire C., Borg C., Amigorena S., Boccaccio C., Bonnerot C., Dhellin O., Movassagh M., Piperno S., Robert C., Serra V., Valente N., Le Pecq J.-B., Spatz A., Lantz O., Tursz T., Angevin E., Zitvogel L. // Journal of Translational Medicine

- 2005. - T. 3 - № 1 - C.10.

99. Viaud S. Dendritic Cell-Derived Exosomes Promote Natural Killer Cell Activation and Proliferation: A Role for NKG2D Ligands and IL-15Ra / Viaud S., Terme M., Flament C., Taieb J., André F., Novault S., Escudier B., Robert C., Caillat-Zucman S., Tursz T., Zitvogel L., Chaput N. // PLoS ONE - 2009. - T. 4 - № 3 - C.e4942.

100. Pitt J.M. Dendritic Cell-Derived Exosomes as Immunotherapies in the Fight against Cancer / Pitt J.M., Charrier M., Viaud S., Andre F., Besse B., Chaput N., Zitvogel L. // The Journal of Immunology - 2014. - T. 193 - № 3 - C.1006-1011.

101. Lo Cicero A. Extracellular vesicles shuffling intercellular messages: for good or for bad / Lo Cicero A., Stahl P.D., Raposo G. // Current Opinion in Cell Biology - 2015. - T. 35 - C.69-77.

102. Tauro B.J. Comparison of ultracentrifugation, density gradient separation, and immunoaffinity capture methods for isolating human colon cancer cell line LIM1863-derived exosomes / Tauro B.J., Greening D.W., Mathias R.A., Ji H., Mathivanan S., Scott A.M., Simpson R.J. // Methods - 2012. - T. 56 - № 2 - C.293-304.

103. Salih M. Urinary extracellular vesicles and the kidney: biomarkers and beyond / Salih M., Zietse R., Hoorn E.J. // American Journal of Physiology-Renal Physiology - 2014. - T. 306 - № 11 - C.F1251-F1259.

104. Taylor D.D. Methods of isolating extracellular vesicles impact down-stream analyses of their cargoes / Taylor D.D., Shah S. // Methods - 2015. - T. 87 - C.3-10.

105. Colombet J. Virioplankton 'pegylation': Use of PEG (polyethylene glycol) to concentrate and purify viruses in pelagic ecosystems / Colombet J., Robin A., Lavie L., Bettarel Y., Cauchie H.M., Sime-Ngando T. // Journal of Microbiological Methods - 2007. - T. 71 - № 3 - C.212-219.

106. Gamez-Valero A. Size-Exclusion Chromatography-based isolation minimally alters Extracellular Vesicles' characteristics compared to precipitating agents / Gamez-Valero A., Monguio-Tortajada M., Carreras-Planella L., Franquesa M., Beyer K., Borras F.E. // Scientific Reports - 2016. - T. 6 - № 1.

107. Deregibus M.C. Charge-based precipitation of extracellular vesicles / Deregibus M.C., Figliolini F., D'antico S., Manzini P.M., Pasquino C., De Lena M., Tetta C., Brizzi M.F., Camussi G. // International Journal of Molecular Medicine - 2016. - T. 38 - № 5 - C.1359-1366.

108. Brownlee Z. A novel "salting-out" procedure for the isolation of tumor-derived exosomes / Brownlee Z., Lynn K.D., Thorpe P.E., Schroit A.J. // Journal of Immunological Methods - 2014. - T.407 - C.120-126.

109. Kreimer S. Mass-Spectrometry-Based Molecular Characterization of Extracellular Vesicles: Lipidomics and Proteomics / Kreimer S., Belov A.M., Ghiran I., Murthy S.K., Frank D.A., Ivanov A.R. // Journal of Proteome Research - 2015. - T. 14 - № 6 - C.2367-2384.

110. Kanwar S.S. Microfluidic device (ExoChip) for on-chip isolation, quantification and characterization of circulating exosomes / Kanwar S.S., Dunlay C.J., Simeone D.M., Nagrath S. // Lab Chip - 2014. - T. 14 - № 11 - C.1891-1900.

111. Santana S.M. Microfluidic isolation of cancer-cell-derived microvesicles from hetergeneous extracellular shed vesicle populations / Santana S.M., Antonyak M.A., Cerione R.A., Kirby B.J. // Biomedical Microdevices - 2014. - T. 16 - № 6 - C.869-877.

112. Konoshenko M.Y. Isolation of Extracellular Vesicles: General Methodologies and Latest Trends / Konoshenko M.Y., Lekchnov E.A., Vlassov A.V., Laktionov P.P. // BioMed Research International - 2018. - T. 2018 - C.1-27.

113. Yamamoto K.R. Rapid bacteriophage sedimentation in the presence of polyethylene glycol and its application to large-scale virus purification / Yamamoto K.R., Alberts B.M., Benzinger R., Lawhorne L., Treiber G. // Virology - 1970. - T. 40 - № 3 - C.734-744.

114. Lobb R.J. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma / Lobb R.J., Becker M., Wen Wen S., Wong C.S.F., Wiegmans A.P., Leimgruber A., Möller A. // Journal of Extracellular Vesicles - 2015. - T. 4 - № 1 - C.27031.

115. Van Deun J. The impact of disparate isolation methods for extracellular vesicles on downstream RNA profiling / Van Deun J., Mestdagh P., Sormunen R., Cocquyt V., Vermaelen K., Vandesompele J., Bracke M., De Wever O., Hendrix A. // Journal of Extracellular Vesicles -2014. - T. 3 - № 1 - C.24858.

116. Cheruvanky A. Rapid isolation of urinary exosomal biomarkers using a nanomembrane ultrafiltration concentrator / Cheruvanky A., Zhou H., Pisitkun T., Kopp J.B., Knepper M.A., Yuen P.S.T., Star R.A. // American Journal of Physiology-Renal Physiology - 2007. - T. 292 -№ 5 - C.F1657-F1661.

117. Rood I.M. Comparison of three methods for isolation of urinary microvesicles to identify biomarkers of nephrotic syndrome / Rood I.M., Deegens J.K.J., Merchant M.L., Tamboer W.P.M., Wilkey D.W., Wetzels J.F.M., Klein J.B. // Kidney International - 2010. - T. 78 - № 8 - C.810-816.

118. Gonzales P. Urinary exosomes: is there a future? / Gonzales P., Pisitkun T., Knepper M.A. // Nephrology Dialysis Transplantation - 2008. - T. 23 - № 6 - C.1799-1801.

119. Merchant M.L. Microfiltration isolation of human urinary exosomes for characterization by MS / Merchant M.L., Powell D.W., Wilkey D.W., Cummins T.D., Deegens J.K., Rood I.M., McAfee K.J., Fleischer C., Klein E., Klein J.B. // PROTEOMICS - CLINICAL APPLICATIONS - 2010. - T. 4 - № 1 - C.84-96.

120. Cvjetkovic A. The influence of rotor type and centrifugation time on the yield and purity of extracellular vesicles / Cvjetkovic A., Lotvall J., Lasser C. // Journal of Extracellular Vesicles -2014. - T. 3 - № 1 - C.23111.

121. Musante L. Recovery of urinary nanovesicles from ultracentrifugation supernatants / Musante L., Saraswat M., Ravida A., Byrne B., Holthofer H. // Nephrology Dialysis Transplantation - 2013. - T. 28 - № 6 - C.1425-1433.

122. Tataruch-Weinert D. Urinary extracellular vesicles for RNA extraction: optimization of a protocol devoid of prokaryote contamination / Tataruch-Weinert D., Musante L., Kretz O., Holthofer H. // Journal of Extracellular Vesicles - 2016. - T. 5 - № 1 - C.30281.

123. Sharon N. History of lectins: from hemagglutinins to biological recognition molecules / Sharon N., Lis H. // Glycobiology - 2004. - T. 14 - № 11 - C.53R-62R.

124. Echevarria J. Microarray-Based Identification of Lectins for the Purification of Human Urinary Extracellular Vesicles Directly from Urine Samples / Echevarria J., Royo F., Pazos R., Salazar L., Falcon-Perez J.M., Reichardt N.-C. // ChemBioChem - 2014. - T. 15 - № 11 -C.1621-1626.

125. Kosanovic M. Isolation of urinary extracellular vesicles from Tamm- Horsfall protein-depleted urine and their application in the development of a lectin-exosome-binding assay / Kosanovic M., Jankovic M. // BioTechniques - 2014. - T. 57 - № 3.

126. Iorember F.M. Uromodulin: old friend with new roles in health and disease / Iorember F.M., Vehaskari V.M. // Pediatric Nephrology - 2014. - T. 29 - № 7 - C.1151-1158.

127. Youhanna S. Determination of uromodulin in human urine: influence of storage and processing / Youhanna S., Weber J., Beaujean V., Glaudemans B., Sobek J., Devuyst O. // Nephrology Dialysis Transplantation - 2014. - T. 29 - № 1 - C.136-145.

128. Serafini-Cessi F. Tamm-Horsfall glycoprotein: biology and clinical relevance / Serafini-Cessi F., Malagolini N., Cavallone D. // American Journal of Kidney Diseases: The Official Journal of the National Kidney Foundation - 2003. - T. 42 - № 4 - C.658-676.

129. Kobayashi K. Conditions for Solubilization of Tamm-Horsfall Protein/Uromodulin in Human Urine and Establishment of a Sensitive and Accurate Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Method / Kobayashi K., Fukuoka S. // Archives of Biochemistry and Biophysics - 2001. - T. 388 - № 1 - C.113-120.

130. Akiyama A. Urothelial cytoprotective activity of Tamm-Horsfall protein isolated from the urine of healthy subjects and patients with interstitial cystitis / Akiyama A., Stein P.C., Houshiar A., Parsons C.L. // International Journal of Urology: Official Journal of the Japanese Urological Association - 2000. - T. 7 - № 5 - C.176-183.

131. Argade S. An evaluation of Tamm-Horsfall protein glycans in kidney stone formers using novel techniques / Argade S., Chen T., Shaw T., Berecz Z., Shi W., Choudhury B., Lowell Parsons C., Sur R.L. // Urolithiasis - 2015. - T. 43 - № 4 - C.303-312.

132. Fernández-Llama P. Tamm-Horsfall protein and urinary exosome isolation / Fernández-Llama P., Khositseth S., Gonzales P.A., Star R.A., Pisitkun T., Knepper M.A. // Kidney International - 2010. - T. 77 - № 8 - C.736-742.

133. Musante L. Biochemical and Physical Characterisation of Urinary Nanovesicles following CHAPS Treatment / Musante L., Saraswat M., Duriez E., Byrne B., Ravidá A., Domon B., Holthofer H. // PLoS ONE - 2012. - T. 7 - № 7 - C.e37279.

134. Musante L. A Simplified Method to Recover Urinary Vesicles for Clinical Applications, and Sample Banking / Musante L., Tataruch D., Gu D., Benito-Martin A., Calzaferri G., Aherne S., Holthofer H. // Scientific Reports - 2015. - T. 4 - № 1.

135. Bokhove M. A structured interdomain linker directs self-polymerization of human uromodulin / Bokhove M., Nishimura K., Brunati M., Han L., Sanctis D. de, Rampoldi L., Jovine L. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2016. - T. 113 - № 6 - C.1552-1557.

136. Raj D.A.A. A multiplex quantitative proteomics strategy for protein biomarker studies in urinary exosomes / Raj D.A.A., Fiume I., Capasso G., Pocsfalvi G. // Kidney International -2012. - T. 81 - № 12 - C.1263-1272.

137. Gamez-Valero A. Urinary Extracellular Vesicles as Source of Biomarkers in Kidney Diseases / Gamez-Valero A., Lozano-Ramos S.I., Bancu I., Lauzurica-Valdemoros R., BorrÁ s F.E. // Frontiers in Immunology - 2015. - T. 6.

138. Pisitkun T. Identification and proteomic profiling of exosomes in human urine / Pisitkun T., Shen R.-F., Knepper M.A. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2004. - T. 101 - № 36 - C.13368-13373.

139. Hogan M.C. Subfractionation, characterization, and in-depth proteomic analysis of glomerular membrane vesicles in human urine / Hogan M.C., Johnson K.L., Zenka R.M., Cristine Charlesworth M., Madden B.J., Mahoney D.W., Oberg A.L., Huang B.Q., Leontovich A.A., Nesbitt L.L., Bakeberg J.L., McCormick D.J., Robert Bergen H., Ward C.J. // Kidney International - 2014. - T. 85 - № 5 - C.1225-1237.

140. Wachalska M. Protein Complexes in Urine Interfere with Extracellular Vesicle Biomarker Studies / Wachalska M., Koppers-Lalic D., Eijndhoven M. van, Pegtel M., Geldof A.A., Lipinska A.D., Moorselaar R.J. van, Bijnsdorp I.V. // Journal of Circulating Biomarkers - 2016. - T. 5 - C.4.

141. Channavajjhala S.K. Optimizing the purification and analysis of miRNAs from urinary exosomes / Channavajjhala S.K., Rossato M., Morandini F., Castagna A., Pizzolo F., Bazzoni F., Olivieri O. // Clinical Chemistry and Laboratory Medicine - 2014. - T. 52 - № 3.

142. Chen C.Y. Purification of Exosome-Like Vesicles from Urine Elsevier / Chen C.Y., Hogan M.C., Ward C.J. // Methods in Enzymology - 2013. - C.225-241.

143. Puhka M. KeepEX, a simple dilution protocol for improving extracellular vesicle yields from urine / Puhka M., Nordberg M.-E., Valkonen S., Rannikko A., Kallioniemi O., Siljander P., Hallstrom T.M. af // European Journal of Pharmaceutical Sciences - 2017. - T. 98 - C.30-39.

144. Shen C. Antileukaemia Immunity: Effect of Exosomes against NB4 Acute Promyelocytic Leukaemia Cells / Shen C., Hao S., Zhao C., Zhu J., Wang C. // Journal of International Medical Research - 2011. - T. 39 - № 3 - C.740-747.

145. Alvarez-Erviti L. Lysosomal dysfunction increases exosome-mediated alpha-synuclein release and transmission / Alvarez-Erviti L., Seow Y., Schapira A.H., Gardiner C., Sargent I.L., Wood M.J.A., Cooper J.M. // Neurobiology of Disease - 2011. - T. 42 - № 3 - C.360-367.

146. Chen C. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR / Chen C. // Nucleic Acids Research - 2005. - T. 33 - № 20 - C.e179-e179.

147. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / Laemmli U.K. // Nature - 1970. - T. 227 - № 5259 - C.680-685.

148. Towbin H. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. 1979 / Towbin H., Staehelin T., Gordon J. // Biotechnology (Reading, Mass.) - 1992. - T. 24 - C.145-149.

149. Boeri M. MicroRNA signatures in tissues and plasma predict development and prognosis of computed tomography detected lung cancer / Boeri M., Verri C., Conte D., Roz L., Modena P., Facchinetti F., Calabro E., Croce C.M., Pastorino U., Sozzi G. // Proceedings of the National Academy of Sciences - 2011. - T. 108 - № 9 - C.3713-3718.

150. Landoni E. Proposal of supervised data analysis strategy of plasma miRNAs from hybridisation array data with an application to assess hemolysis-related deregulation / Landoni E., Miceli R., Callari M., Tiberio P., Appierto V., Angeloni V., Mariani L., Daidone M.G. // BMC Bioinformatics - 2015. - T. 16 - № 1.

151. Efron B.An Introduction to the Bootstrap / B. Efron, R. J. Tibshirani - Boston, MA: Springer US, 1993.

152. Chanutin A. The precipitation of plasma proteins by short-chain fatty acids / Chanutin A., Curnish R.R. // Archives of Biochemistry and Biophysics - 1960. - T. 89 - C.218-220.

153. Steinbuch M. The isolation of IgG from mammalian sera with the aid of caprylic acid / Steinbuch M., Audran R. // Archives of Biochemistry and Biophysics - 1969. - T. 134 - № 2 -C.279-284.

154. Habeeb A.F. Preparation of human immunoglobulin by caprylic acid precipitation / Habeeb A.F., Francis R.D. // Preparative Biochemistry - 1984. - T. 14 - № 1 - C.1-17.

155. Chomczynski P. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on / Chomczynski P., Sacchi N. // Nature Protocols - 2006. - T. 1 - № 2 - C.581-585.

156. McKinney M.M. A simple, non-chromatographic procedure to purify immunoglobulins from serum and ascites fluid / McKinney M.M., Parkinson A. // Journal of Immunological Methods - 1987. - T. 96 - № 2 - C.271-278.

157. Bull H.B. Binding of fatty acids by proteins / Bull H.B., Breese K. // Archives of Biochemistry and Biophysics - 1967. - T. 120 - № 2 - C.303-308.

158. Zakrzewski K. Human serum albumin. Tyrosyl residues and strongly binding sites / Zakrzewski K., Goch H. // Biochemistry - 1968. - T. 7 - № 5 - C.1835-1842.

159. Kirschner M.B. Haemolysis during Sample Preparation Alters microRNA Content of Plasma / Kirschner M.B., Kao S.C., Edelman J.J., Armstrong N.J., Vallely M.P., Zandwijk N. van, Reid G. // PLoS ONE - 2011. - T. 6 - № 9 - C.e24145.

160. Blondal T. Assessing sample and miRNA profile quality in serum and plasma or other biofluids / Blondal T., Jensby Nielsen S., Baker A., Andreasen D., Mouritzen P., Wrang Teilum M., Dahlsveen I.K. // Methods - 2013. - T. 59 - № 1 - C.S1-S6.

161. Occhipinti G. The choice of endogenous controls in exosomal microRNA assessments from biofluids / Occhipinti G., Giulietti M., Principato G., Piva F. // Tumor Biology - 2016. - T. 37 -№ 9 - C.11657-11665.

162. Bostwick D.G. The association of benign prostatic hyperplasia and cancer of the prostate / Bostwick D.G., Cooner W.H., Denis L., Jones G.W., Scardino P.T., Murphy G.P. // Cancer -1992. - T. 70 - № S1 - C.291-301.

163. Karube K. Study of latent carcinoma of the prostate in the Japanese based on necropsy material / Karube K. // The Tohoku journal of experimental medicine - 1961. - T. 74 - № 3 -C.265-285.285.

164. Guess H.A. Benign prostatic hyperplasia and prostate cancer / Guess H.A. // Epidemiologic reviews - 2001. - T. 23 - № 1 - C.152-158.

165. Miah S. BPH and prostate cancer risk / Miah S., Catto J. // Indian Journal of Urology -2014. - T. 30 - № 2 - C.214.

166. De Nunzio C. The Controversial Relationship Between Benign Prostatic Hyperplasia and Prostate Cancer: The Role of Inflammation / De Nunzio C., Kramer G., Marberger M., Montironi R., Nelson W., Schröder F., Sciarra A., Tubaro A. // European Urology - 2011. - T. 60 - № 1 - C.106-117.

167. Bryzgunova O.E. MicroRNA-guided gene expression in prostate cancer: Literature and database overview / Bryzgunova O.E., Konoshenko M.Y., Laktionov P.P. // The Journal of Gene Medicine - 2018. - T. 20 - № 5 - C.e3016.

168. Takayama K. Significance of microRNAs in Androgen Signaling and Prostate Cancer Progression / Takayama K., Misawa A., Inoue S. // Cancers - 2017. - T. 9 - № 12 - C.102.

169. Cozar J.M. Genetic markers a landscape in prostate cancer / Cozar J.M., Robles-Fernandez I., Martinez-Gonzalez L.J., Pascual-Geler M., Rodriguez-Martinez A., Serrano M.J., Lorente J.A., Alvarez-Cubero M.J. // Mutation Research/Reviews in Mutation Research - 2018. - T. 775 - C.1-10.

170. Miyahira A.K. The 24th Annual Prostate Cancer Foundation scientific retreat report / Miyahira A.K., Soule H.R. // The Prostate - 2018. - T. 78 - № 12 - C.867-878.

171. Eeles R. Men with a susceptibility to prostate cancer and the role of genetic based screening / Eeles R., Raghallaigh H.N. // Translational Andrology and Urology - 2018. - T. 7 - № 1 -C.61-69.