Микрокапсулы на основе природных полиэлектролитов для включения биологически активных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат химических наук Герстенбергер, Мария Райнхардовна

• Герстенбергер, Мария Райнхардовна
• кандидат химических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат химических наук Герстенбергер, Мария Райнхардовна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Послойная электростатическая самосборка (LbL ESA)

2. Покрытие коллоидных частиц микронных и субмикронных размеровИ)

3. Контролируемое осаждение на поверхности коллоидных частиц (SCP)

3.1. Получение структур «ядро-оболочка» посредством метода SCP с образованием комплекса полиэлектролит/противоион

3.2. Получение структур «ядро-оболочка» посредством метода SCP с добавлением осадителя

4. Получение полых полиэлектролитных капсул

5. Инкапсулирование макромолекул

5.1. Инкапсулирование при помощи регулирования проницаемости стенки

Регулирование проницаемости изменением значения рН

Регулирование проницаемости изменением полярности среды

5.2. Инкапсулирование предварительно осажденных макромолекул

5.3. Инкапсулирование макромолекул посредством метода SCP с последующим формированием внешней устойчивой оболочки

6. Проницаемость капсульной стенки для низкомолекулярных веществ

7. Физические процессы и химические реакции в ограниченном объеме капсул 30 7.1. Осаждение органических веществ исключительно во внутреннем объеме капсул

Осаждение рН-чувствительных веществ внутри капсул, модифицированных PSS

Одновременное осаждение разных веществ внутри капсул, модифицированных PSS

Осаждение плохо растворимых в воде веществ внутри капсул, модифицированных PSS

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микрокапсулы на основе природных полиэлектролитов для включения биологически активных веществ»

Существует большое разнообразие как синтетических, так и природных полимерных систем для изучения контролируемого высвобождения биологически активных веществ и получения систем направленной доставки лекарств (DDS) [71]. Разработка и изучение новых надмолекулярных образований является одним из направлений интенсивно развивающихся нанотехнологий. К надмолекулярным образованиям относятся, в том числе, такие коллоидные частицы, как микрокапсулы, которые находят применение в различных областях прикладной химии, биохимии и фармакологии.

В 1998 году группой исследователей Института Макса Планка был предложен новый способ получения микрокапсул - послойная (Layer-by-Layer) электростатическая самосборка (Electrostatic Self-Assembly) противоположно заряженных полиэлектролитов на коллоидных частицах микронных и субмикронных размеров [31, 28]. Данная технология позволяет получать микрокапсулы определенной формы и размера, зависящих от используемых матриц-ядер. Оболочка микрокапсул обеспечивает требуемые каталитические или аффинные свойства, стабильность, проницаемость, совместимость и регулирование высвобождения внутреннего материала капсулы.

Микрокапсулы, имеющие размер от нескольких десятков нанометров до микрометра, со стенками нанометровой толщины представляют как научный, так и технологический интерес, поскольку могут использоваться как новый перспективный тип микро- и наноконтейнеров для решения различных задач. В частности, включение белков и нуклеиновых кислот в многослойные пленки может найти применение в биотехнологии, например, в качестве средства доставки внутрь клеток ДНК и белка для получения вакцин и в генной терапии.

Данная технология микрокапсулирования, однако, до настоящего времени отрабатывалась только на микрокапсулах, состоящих из синтетических полиэлектролитов. Получение при помощи послойной сборки микрокапсул на основе природных материалов не было описано и изучено. В связи с этим, представляется актуальной разработка технологии получения микрокапсул методом LbL ESA на основе биополимеров и изучение свойств полученных капсул.

Представленная работа является частью исследований, проводимых в Московской Государственной академии тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова на кафедре биотехнологии по теме «Синтез новых фармакологически активных веществ, изучение их биологических свойств и методов направленного транспорта с целью создания противоопухолевых, противовирусных, антипаркинсонических средств» (регистрационный номер НИР: 1Б-5-866), а также в Государственном научном центре по антибиотикам по теме «Разработка новых лекарственных форм известных биологически активных веществ».

Часть работы выполнялась в Институте Макса Планка коллоидной химии и химии поверхностей (Потсдам, Германия) в отделении «Поверхности», отделе «Полые капсулы» в группе «Полифункциональные микро- и нанокапсулы» под руководством к.ф.-м.н. Сухорукова Г.Б. в рамках программы «Софья Ковалевская», финансируемой фондом Александра Гумбольдта Министерства образования и исследований Германии.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Микрокапсулирование - это процесс заключения различных веществ в микрокапсулы, надмолекулярные образования, представляющие собой емкость диаметром от сотен нанометров до нескольких микрометров.

Заключенное в микрокапсулу вещество защищено от внешних воздействий, что обуславливает перспективность применения микрокапсулирования в медицине. Варьируя в широких пределах материал микрокапсул, толщину стенок и другие характеристики, возможно четкое регулирование скорости высвобождения, места всасывания и фармакокинетики лекарственных веществ, что позволяет снижать их травмирующее влияние на слизистые в случае неинъекционных форм. Помимо этого, значительно снижается острая токсичность ряда веществ, повышается их стабильность, пролонгируется действие. Система позволяет связывать антитела с поверхностью микрокапсулы и за счет этого осуществлять адгезию последней к органу-мишени или клетке. Благодаря субмикронным размерам, микрокапсулы используются, к примеру, в противоопухолевых препаратах для химиоэмболизации цитостатиками [73].

В микрокапсульных препаратах можно совмещать реагирующие или несмешивающиеся друг с другом вещества, маскировать их неприятный запах и вкус. Также микрокапсулированием достигается "превращение" жидкостей в псевдотвердое состояние, т.е. в сыпучую массу, состоящую из микрокапсул с твердой оболочкой, заполненных, например, жидкими лекарственными веществами [74].

В зависимости от морфологических особенностей можно различить полые и сплошные микрокапсулы. В липосомах, состоящих из амфифильных молекул, внутренний объем и внешняя среда гидрофильны, в то время как стенки мембраны липофильны. Надмолекулярные образования, получаемые коацервацией гидрофильных, ионогенных полимеров, в большинстве своем, не имеют очерченного стенками внутреннего объема, активное вещество распределено равномерно по всему объему.

В 1998 году группой исследователей в институте Макса Планка коллоидной химии и химии поверхностей в Германии был предложен новый тип полифункциональных микрокапсул, состоящих из ядра и оболочки, способ получения которых позволяет конструировать как внутренний объем, который может отличаться от внешней среды, так и состав стенок.

Данный обзор посвящен этому новому перспективному нанотехнологическому методу микрокапсул про вами я, основанному на пошаговом формировании оболочки путем адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов на различных матрицах микронных н субмикронных размеров. В нем рассматриваются недавно опубликованные работы по способам получения оболочек на различных коллоидных ядрах, изготовлению и свойствам полых капсул, регулирования проницаемости капсульной стенки и методам включения различных материалов в эти капсулы.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Герстенбергер, Мария Райнхардовна

выводы

В результате проведенной работы:

1. Разработан новый метод получения микрокапсул из альгината, протамин сульфата, декстрана и хитозана на основе послойной адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов.

2. Проведен анализ существующих матриц для получения полых микрокапсул из природных полимеров, и синтезированы новые ядра из карбоната марганца.

3. Изучена проницаемость стенок полученных микрокапсул для низко-и высокомолекулярных соединений и гидрофобных растворителей.

4. Разработаны методы визуализации микрокапсул при помощи рентгеноконтрастных частиц серебра и флуоресцентных полупроводниковых нанокристаллов.

5. Разработаны методы включения в микрокапсулы белков и ДНК, и исследован фагоцитоз таких капсул антигенпредставляющими клетками.

Благодарности

Автор выражает благодарность руководителю группы «Полифункциональные микро- и нанокапсулы» Института Макса Планка коллоидной химии и химии поверхностей (г. Потсдам, Германия) Г.Б. Сухорукову за оформление стажировки, руководство и помощь в освоении метода послойной адсорбции, а также его сотрудникам О. Тюриной, И. Радченко, А. Антипову, Д. Шеною и Р. Георгиевой за неоценимые консультации в проведении экспериментов.

Выражаю благодарность моим научным руководителям проф. Василенко И.А., Сухорукову Г.Б., а также Марквичевой Е.А., Скляренко А.В., Курочкиной В.Б., Вагановой О.А., Дубовским П.В. и С.И., Гапонику Н.П., Моя С. и Радченко И. за помощь в решении научных проблем и подачу новых идей, положенных в основу представленной работы.

Часть экспериментов была проведена при помощи и сотрудничестве Dr. Й. Хартмана (ТЭМ, СЭМ и EDX), к.х.н. Щукина Д. (СЭМ), А. Хайлиг (АСМ, КЛСМ), Феофанова А.В., м.н.с. группы оптической спектроскопии ИБХ РАН Шаронова Г.В. (KJICM), Добровольского Н.А. (рентгенография), Федутика Ю.А. (получение ядер из карбоната марганца) и к.х.н. Свирщевской Е.В. (проточная цитофлуориметрия, иммунная активность), которым я искренне признательна.

Выражаю искреннюю благодарность моей маме и сыну за терпение и понимание, а также к.х.н. Мироновой Е.В. за неоценимые консультации и поддержку в период выполнения работы.

8. Заключение

Суммируя вышесказанное, нельзя не отметить широкие возможности технологии послойной адсорбции полиэлектролитов на коллоидных частицах. Универсальность, простота и эксплуатационная гибкость - привлекательные особенности данной отрасли нанотехнологии. На рисунке 15 показаны возможные перспективные области применения данного способа микрокапсулирования.

Рисунок 15. Схематическое изображение многофункциональности микрокапсул

В сформированные полые оболочки можно ввести люминесцентные полупроводниковые наночастицы для идентификации, визуализации и обнаружения микрокапсул в исследованиях in vitro и in vivo. Инкапсулированные магнитные частицы позволяют воздействовать на микрокапсулы извне, в частности, при помощи магнитного поля возможна доставка таких капсул к определенной клеточной культуре/ткани. Микрокапсулы можно использовать как средство доставки лекарственных веществ или ферментов для ускорения специфических реакций внутри клетки. Внешняя стенка может быть функционализирована рецепторами или антителами для нацеливания на молекулярном уровне.

В качестве исходной матрицы для получения оболочек могут быть использованы органические и неорганические частицы, нанокристаллы лекарственных веществ, биологические клетки, белковые агрегаты, фактически, любые коллоидные частицы, размером от 50 нм до десятковмикрон. Оболочка также может быть составлена из разнообразных материалов.

Существует, по крайней мере, два подхода для формирования оболочек. В случае техники послойной адсорбции, необходимо наличие пары противоположно заряженных полиэлектролитов. Их чередуемая адсорбция приводит к образованию оболочки с определенной толщиной, композицией и, следовательно, такими свойствами, как избирательная проницаемость, контролируемая доставка и высвобождение заключенных БАВ, биодеградация, биосовместимость, стабильность. Другим способом является техника контролируемого осаждения полимеров на поверхности (SCP), с помощью которой возможно за один цикл нанесения получить оболочку толщиной в 20 полиэлектролитных слоев.

Выборочная проницаемость оболочки обуславливает возможное использование капсул в качестве микроконтейнеров для хранения и транспортировки макромолекул. По сравнению с достаточно хорошо изученными за последние 40 лет липосомами, многослойные капсулы из полиэлектролитов имеют более высокую стабильность. Кроме того, технология их получения предоставляет большие возможности для манипулирования внутренним объемом, размером, составом оболочек и т.д.

Различные способы включения макромолекул, приводящие к разной степени загрузки, составу и физико-химическим свойствам включаемых веществ также привлекают интерес со стороны биотехнологов. Так, многообещающим приложением этой технологии может быть изготовление полимерной оболочки на поверхности компактной формы ДНК для моделирования вирусов. Закрепление на поверхности оболочки рецепторов привело бы к возможности направленной доставки.

Кроме того, микрокапсулы, полученные LbL ESA, могут быть использованы в качестве микрореакторов, что является важной областью исследований в ферментативном катализе. Фундаментальные аспекты исследования этих капсул, представляющих уникальную систему для изучения химических и физических явлений в микронном и субмикронном масштабе, определяют направление исследований в прикладной химии и биологии.

На основании анализа литературных данных можно сделать вывод, что микрокапсулы, получаемые на основе описанной технологии, могут быть использованы для решения различных задач, стоящих перед современной биотехнологией. Эксплуатационная гибкость описанного микрокапсулирования стимулирует дальнейшее его исследование и развитие.

В литературе не описано получение микрокапсул из биополимеров, которые могли бы быть биосовместимыми. Применение на всех стадиях получения микрокапсул биосовместимых материалов расширяет возможности использования микрокапсул в медицинской биотехнологии.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Представленный обзор литературных данных свидетельствует о том, что нанотехнология является интенсивно развивающейся отраслью науки с многообещающими перспективами воплощения результатов исследований в практической деятельности.

Возможность создавать различные по составу и форме надмолекулярные структуры описанным способом микрокапсулирования стимулирует дальнейшее его исследование и развитие.

1. Разработка методов получения микрокапсул

Существующие методы микрокапсулирования имеют ряд недостатков, связанных с высокой полидисперсностью и большим размером частиц-носителей, а также неконтролируемой степенью загрузки активным компонентом [78]. В 1998 году был предложен новый метод получения микрокапсул, основанный на поочередной адсорбции противоположно заряженных синтетических полиэлектролитов на коллоидных частицах. В случае разрушения коллоидной матрицы при условиях, в которых полимерная оболочка стабильна, образуется полая капсула определенного размера, формы и с требуемой толщиной стенки, обладающей необходимыми свойствами.

Для решения прикладных биотехнологических задач в настоящей работе было предложено использовать данную технологию для создания микрокапсул из биополимеров с различными способами включения БАВ.

1.1. Подбор полиэлектролитов

Необходимым условием образования капсульной стенки способом послойной адсорбции, как упоминалось в обзоре литературы, является наличие заряда у используемых материалов.

Задачей настоящей работы было получение микрокапсул на основе биополимеров, которые в дальнейшем могут быть использованы в качестве средств доставки БАВ. Понятие биосовместимости включает в себя биотолерантность и биоинертность. Одним из подходов получения «биосовместимых» микрокапсул является использование в качестве исходных компонентов веществ, разрешенных к применению в лекарственных препаратах.

Таким образом, из существующего в природе разнообразия заряженных полимеров, таких как полисахариды, белки, нуклеиновые кислоты и т.п., в настоящей работе были использованы полимеры, лекарственные препараты на основе которых внесены в действующие фармакопеи США, Европы и Российской Федерации и разрешены к применению (см. таблицу 1).

В качестве положительно заряженного полиэлектролита впервые использовался протамин сульфат (Prot) - полипептид, выделяемый из икры лососевых рыб (сальмин). Данный гемостатик, являющийся одновременно слабым антикоагулянтом, используется в хирургии для нейтрализации свертываемости крови за счет образования стабильных комплексов протамин сульфата с гепарином [106, Т1.- стр. 476].

Примерно 67% аминокислотного состава протамина составляет аргинин, который делает его сильно щелочным поликатионным веществом с молекулярным весом приблизительно 5 кДа [101].

Оптимальные толщина слоя и равномерность покрытия были достигнуты при адсорбции протамина из раствора в концентрации 2 мг/мл, содержащего 0,5 М NaCl.

Кроме протамин сульфата в качестве поликатиона также использовался низкомолекулярный хитозан (Chit)- поли-Э-глюкозамин, получаемый из хитина [108, стр.656] путем 75-85%-ного деацетилирования. Этот уникальный биополимер, называемый многими веществом XXI века, активно исследуется в России последние десятилетия [109-112]. Хитозан используется в медицине как БАВ, обладающее гиполипидемическими свойствами [106, Т1.- стр.453-461].

Низкомолекулярный хитозан (вязкость по Брукфильду 1% раствора в 1% уксусной кислоте составляет 20-200 сантипуаз, плотность 0.22) растворим в разбавленных водных растворах кислот (рН < 6.5). Оптимальные толщина слоя и равномерность покрытия были достигнуты при адсорбции низкомолекулярного хитозана из раствора в концентрации 1 мг/мл, содержащего 0,5 М NaCl.

Чем меньше молекулярная масса хитозана, тем выше значение рН его раствора [110]. В экспериментах по включению белка в микрокапсулы использовался в качестве поликатиона олигохитозан (o-Chit) (MW 4437), предоставленный A. Bartkowiak (Институт полимеров Технического университета г. Щецин, Польша), являющийся продуктом химической деструкции коммерческого хитозана [60, 61]. Значение рН 0,2%-ного раствора олигохитозана в воде составляет приблизительно 4. Для того чтобы избежать растворения карбоната марганца, значение рН было доведено до 6 добавлением 2% NaOH.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Герстенбергер, Мария Райнхардовна, 2004 год

1. Her R. К. Multilayers of colloidal particles // J. Colloid Interface Sci. 1966,21 (6), 569-572

2. Lee H., Kepley L. J., Hong H. G., Akhter S., Mallouk Т. E. Adsorption of ordered zirconium phosphonate multilayer films on silicon and gold surfaces // J. Phys. Chem. 1988. - 92(9), 2597-2601

3. Decher G. and Hong J.-D., Build up of ultrathin multilayer films by a self-assembly process: I.Consecutive adsorption of anionic and cationic bipolar amphiphiles // Macromol. Chem., Macromol. Symp. 1991,46,321-327

4. Decher G., Fuzzy nanoassemblies: toward layered polymeric multicomposites // Science 1997,277,1232-1237

5. Decher G., Lehr В., Lowack K., Lvov Y., Schmitt J., New composite films for biosensors: layer-by-layer adsorbed films of polyelectrolytes, proteins or DNA // Biosensors & Bioelectronics 1994,9,677-683

6. Lvov Y. M., Sukhorukov G. В., Protein Architecture: Assembly of Ordered Films by means of Alternated Adsorption of Oppositely Charged Macromolecules // Membr. Cell Biol. 1997,11,277-303

7. Sukhorukov G. В., Montrel M. M., Petrov A. I., Shabarchina L. I., Sukhorukov B. I., Multilayer films containing immobilized nucleic acids. Their structure and possibilities in biosensor applications // Biosensors & Bioelectronics 1996, 11,913922

8. Caruso F., Niikura K., Furlong D. N., Okahata Y., Assembly of alternating polyelectrolyte and protein multilayer films for immunosensing // Langmuir, 1997, 13, 3427-3433

9. Lvov Y., Decher G., Moehwald H. Assembly, structural characterization, and thermal behaviour of layer-by-layer deposited ultrathin films of poly(vynyl sulfate) and poly(allylamine) // Langmuir 1993,9,481-486

10. Kotov N. A. Layer-by-layer self-assembly: The contribution of hydrophobic interactions//Nanostructured Materials 1999, 12, 789-796

11. Cheung J. H., Fou A. F., Rubner M. F. Molecular Self-assembly of conductive polymers // Thin Solid Films 1994,244,985-989

12. Berndt P., Kurihara K., Kunitake T. Adsorption of poly(styrenesulfonate) onto ammonium monolayer on mica a surface force study // Langmuir 1992, 8,24862490

13. Hammond P. Т., Recent explorations in electrostatic multilayer thin film assembly // Current Opinion in Colloid & Interface Science 1999,4,430-442

14. Bertrand P., Jonas A., Laschewsky A., Legras R. Ultrathin polymer coatings by complexation of polyelectrolytes at interfaces: suitable materials, structure and properties // Macromol. Rapid Com. 2000,21,319-348

15. Lvov Y. M., Ariga K., Ichinose I., Kunitake T. Layer-by-layer Architecture of concavalin A by means of electrostatic and Biospecific Interactions // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1995,22,2313-2314

16. Onda M., Lvov Y. M., Ariga K., Kunitake T. Sequential actions of glucose oxidase and peroxidase in molecular films assembled by layer-by-layer adsorption // Biotechnology and Bioengineering 1996,51, 163-166

17. Onda M., Lvov Y., Ariga K., Kunitake T. Sequential reaction and product separation on molecular films of glucoamylase and glucose oxidase assembled on an ultrafilters // J. Fermentation & Bioengineering 1996, 82, 502-506

18. Gao M., Richter В., Kirstein S., Moehwald H. Electroluminescence Studies on Self-assembled Films of PPV and CdSe nanoparticles // J. Phys.Chem. 1998, 102,40964103

19. Wang X. G., Balasubramanian S., Li L., Jiang X. L., Sandman D. J., Rubner M. F., Kumar J., Tripathy S. K. Self-assembled second order nonlinear optical multilayer azo polymer // Macromol. Rapid Com. 1997, 18,451-459

20. Stroeve P., Vasquez V., Coelho M. A. N., Rabolt J. F. Gas transfer in supported films made by molecular self-assembly of ionic polymers // Thin Solid films 1996, 285, 708-712

21. Von Klitzing R., Moehwald, H. Proton concentration profile in Ultrathin polyelectrolyte films // Langmuir 1995, 11,3554-3559

22. Krasemann L., Tieke B. Ultrathin self-assembled polyelectrolyte membranes for pervaporation//J. Memb. Sci. 1998, 150,23-30

23. Pommerening K., Ristau O., Rein H., Dautzenberg H., Loth F. Immobilization of proteins and cell fragments by use of a new method of microencapsulation // Biomed. Biochim. Acta 1983,42, 813-823

24. Pommqrsheim R., Schrezenmeir J., Vogt W. Immobilization of enzymes by multilayer microcapsules//Macromol. Chem. Phys. 1994, 195, 1557-1567

25. Keller S. W., Johnson S. A., Brigham E. S., Yonemoto E. H., Mallouk Т. E. Photoinduced charge separation in multilayer thin films grown by sequential adsorption of polyelectrolytes // J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 12879-12880

26. Chen T. Y., Somasundaran P. Preparation of novel core-shell nanocomposite particles by controlled polymer bridging // J. Am. Chem. Soc. 1998, 81 140-144

27. Somasundaran P., Chen T. Y., Sarkar D. A novel processing scheme for core-shell nano composites using controlled polymer adsorption // Mater. Res. Innovations 1999, 2, 325-327

28. Sukhorukov G. В., Donath E., Lichtenfeld H., Knippel E., Knippel M., Budde A., Moehwald H. Layer-by-layer Self-Assembly of Polyelectrolytes onto Colloidal Particles // Colloids Surfaces A 1998, 137,253-266

29. Sukhorukov G.B., Donath E., Davis S.A., Lichtenfeld H., Caruso F., Popov V.I. and Mohwald H. Step-Wise Polyelectrolyte Assembly on Particle Surfaces A Novel Approach to Colloid Design // Polym. Advan. Technol. 1998, 9, 759-767.

30. Donath E., Sukhorukov G. В., Caruso F., Davis S. A., Moehwald H. Novel hollow polymer shells: fabrication, characterization and potential applications, Angewandte Chemie, International Edition 1998,37,2201-2205.

31. Caruso F. Hollow capsule processing through colloidal templating and self-assembly // Chem. Eur. J., 2000,6,413-419

32. Caruso F., Susha A. S., Giersig M., Moehwald H. Magnetic core-shell particles: Preparation of magnetite multilayers on polymer latex microspheres // Advanced Materials 1999, 11 950-953

33. Sukhorukov G. В., Donath E., Moya S., Susha A. S., Voigt A., Hartmann J., Moehwald. H., Microencapsulation by means of step-wise adsorption of polyelectrolytes // .^Microencapsulation 2000, 17, 177-185

34. Moya S., Donath E., Sukhorukov G. В., Auch M., Baeumler H., Lichtenfeld H., Moehwald H. Lipid coating on polyelectrolyte surface modified colloidal particles and polyelectrolyte capsules // Macromolecules 2000,33,4538-4544

35. Georgieva R., Moya S., Leporatti S., Neu В., Baumler H., Reichle C., Donath E., Moehwald H. Conductance and capacitance of polyelectrolyte and lipid-polyelectrolyte composite capsules as measured by electrorotation // Langmuir 2000, 16,7075-7081

36. Caruso F., Fiedler H., Haage K. Assembly of beta-glucosidase multilayers on spherical colloidal particles and their use as active catalysts // Colloid surface A 2000, 169,287-293

37. Schuler C., Caruso F. Preparation of enzyme multilayers on colloids for biocatalysis // Macromol. Rapid Com. 2000,21, 750-753

38. Donath E., Sukhorukov G. В., Moehwald H. Submicrometric and micrometric polyelectrolyte capsules // Nachrichten aus Chemie Technik und Laboratorium 1999,47,400-405

39. Neu В., Voigt A., Mitloehner R., Leporatti S., Gao C. Y., Donath E., Kiesewetter H., Moehwald H., Meiselman H. J. and Baumler H. Biological cells as templates for hollow microcapsules // Journal of Microencapsulation, 2001 18(3): 385-395.

40. Caruso F., Wenjun Yang W., Dieter Trau D., Renneberg R. Microencapsulation of Uncharged Low Molecular Weight Organic Materials by Polyelectrolyte Multilayer Self-Assembly // Langmuir 2000, 16 (23), 8932-8936

41. Antipov A. A., Sukhorukov G. В., Donath E., Moehwald H. Sustained release properties of polyelectrolyte multilayers capsules // J. Phys. Chem. B, 2001, 19(6), 2444-2448

42. Trubetskoy V. S., Loomis A., Hagstrom J. E., Budker V. G., Wolff J. A., Layer-by-layer deposition of oppositely charged polyelectrolytes on the surface of condensed DNA particles // Nucleic Acids Research 1999, 27,3090-3095

43. Finsinger D., Remy J. S., Erbacher P., Koch C., Plank C. Protective copolymers for nonviral gene vectors: synthesis, vector characterization and application in gene delivery // Gene Therapy 2000, 7, 1183-1192

44. Bobreshova M.E., Sukhorukov G.B., Saburova E.A., Elfimova L.I., Sukhorukov B.I., Sharabchina L.I. Lactate dehydrogenase in interpolyelectrolyte complex. Function and stability // Biophysics 1999,44, 813-820

45. Dudnik V., Sukhorukov G. В., Radtchenko I. L., Moehwald H. Coating of colloidal particles by controlled precipitation of polymers, Macromolecules 2001,34(7), 2329-2334

46. Radtchenko I. L., Sukhorukov G. В., Moehwald H. Incorporation of Macromolecules into Polyelectrolyte micro- and nanocapsules via surface controlled precipitation on colloidal particles // Colloids and Surfaces A, 2002, 202(2-3), 127- 133

47. Radtchenko I.L., Sukhorukov G.B., Gaponik N., Kornowski A., Rogach A.L., and Mohwald H. Core-shell structures formed by the solvent-controlled precipitation of luminescent CdTe nanocrystals on latex spheres // Advanced Materials. 2001. -13,1684-1687

48. Leporatti S., Voigt A., Mitloehner R., Sukhorukov G.B., Donath E. and Moehwald H. Scanning Force Microscopy Investigation of Polyelectrolyte Nano- and Microcapsule Wall Texture // Langmuir 2000,16(9), 4059-4063

49. Moehwald H., Lichtenfeld H., Moya S., Voigt A., Baeumler H., Sukhorukov G. В., Caruso F., Donath E. From Polymeric Films to Nanoreactors // Macromol. Chem. Makromol. Symposia, 1999, 145,75-8153