Микроэкология кишечника человека, коррекция микрофлоры при дисбиотических состояниях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор медицинских наук Ефимов, Борис Алексеевич

• Ефимов, Борис Алексеевич
• доктор медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Ефимов, Борис Алексеевич

ВВЕДЕНИЕ.4

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 17

Введение.

1.1. Нормальная микрофлора кишечника человека.

1.2. Нарушения нормальной микрофлоры кишечника.

1.3. Методы коррекции нарушений микрофлоры кишечника.

1.4. Дисбиотические изменения микрофлоры кишечника при острой лучевой болезни и их коррекция при помощи антибактериальной терапии и препаратами пробиотиками.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.80

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 120

ГЛАВА 3. ЗАКОНОМЕРНОСТИ СТАНОВЛЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА У ЛЮДЕЙ 120

3.1. Качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у здоровых детей в различные периоды раннего возраста.

3.2 Качественный состав молочнокислой флоры кишечника у здоровых детей раннего возраста.

3.3. Качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у детей и взрослых людей из групп риска по развитию дисбактериоза кишечника.

3.4. Сравнительная оценка влияния пищевых продуктов с пробиотической и пребиотической активностью на кишечную микрофлору здоровых детей раннего возраста.

ГЛАВА 4. ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ПРОБИОТИКОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ 157

4.1. Влияние комплексного бактерийного препарата «Примадофилюс» на качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у детей раннего возраста из групп риска по развитию дисбактериоза кишечника.

4.2. Регуляция микрофлоры кишечника у недоношенных детей с помощью донорского грудного молока, обогащенного бифидобактериями.

ГЛАВА 5. ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ПРОБИОТИКОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ДИСБАКТЕРИОЗОВ КИШЕЧНИКА У ВЗРОСЛЫХ ЛЮДЕЙ 180-196 5.1. Изучение состава микрофлоры кишечника у людей, имеющих в процессе производственной деятельности контакт с антибактериальными препаратами различного спектра действия.

5.2. Влияние кисломолочного бифидумбактерина на нормализацию микрофлоры кишечника у рабочих и служащих фармацевтического предприятия, контактирующих с антибактериальными препаратами.

5.3. Терапевтическое использование препарата из антибиотико-резистентных бифидобактерий у людей подвергшихся высокой дозе облучения у-квантами.

5.4. Оценка эффективности применения аутоштаммов лактобактерий у людей облученных в результате чернобыльской трагедии для коррекции микрофлоры кишечника.

ГЛАВА 6. КОРРЕКЦИЯ ДИСБАКТЕРИОЗОВ КИШЕЧНИКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 197

6.1. Изучение некоторых биологических свойств у штаммов бактерий родов Lactobacillus и Bifidobacterium кишечного происхождения, с целью создания на их основе лекарственных препаратов с пробиотической активностью.

6.2. Эффект антибиотиков и биотерапевтических препаратов приготовленных из штаммов лактобактерий и бифидобактерий кишечного происхождения в комбинации с общей гнотобиологической изоляцией на выживаемость облученных мышей.

6.3. Эффект совместного применения ломефлоксацина и Lactobacillus acidophilus 5/4 на выживаемость, микрофлору кишечника и печеночную транслокацию микроорганизмов у облученных мышей, находящихся в условиях общей гнотобиологической изоляции и в конвенциональных условиях.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микроэкология кишечника человека, коррекция микрофлоры при дисбиотических состояниях»

АКТУАЛЬНОСТЬ

Обитание человека в конвенциональных условиях сопряжено с постоянной контаминацией организма посторонними, часто патогенными, микроорганизмами. Это привело к формированию у него ряда мощных защитных систем, необходимых как для поддержания эффективного контроля за эндогенными популяциями условно-паразитических форм жизни, так и для предотвращения негативных последствий экзогенной микробной контаминации. Одна из главных функций в ряду тонких механизмов противоинфекционной защиты принадлежит нормальной микрофлоре тела человека, формирование которой начинается сразу после рождения. С другой стороны, одной антагонистической функцией роль нормальной микрофлоры не исчерпывается. Представленная множеством видов бактерий, заселяющих открытые для взаимодействия с внешней средой части тела, микрофлора выполняет также и другие физиологические функции, например, метаболические и иммуномодуляторные, становясь, таким образом, неотъемлемой частью организма-хозяина. Нарушение целостности качественного и количественного состава аутохтонной микрофлоры, в норме находящейся в позитивных симбиотических отношениях с макроорганизмом, приводит к опасным последствиям для здоровья человека в целом и прямо влияет на качество и продолжительность его жизни.

Таким образом, важность и многообразие функций, которые присущи микрофлоре тела человека с одной стороны, и возможные негативные последствия для здоровья человека в случае нарушений ее целостности с другой стороны определяют актуальность изучения этой проблемы.

Наиболее богатой, в качественном и количественном отношениях, является микро-флора кишечника человека, огромная значимость которой для поддержания здоровья хозяина на оптимальном уровне была установлена в результате многолетних исследо-ваний, проведенных рядом отечественных и зарубежных микробиологов /I. Metchnikoff, 1908; В.В. Поспелова, 1979; Б.В. Пинегин и соавт., 1984; Н.М. Грачева и соавт., 1986; В.М. Бондаренко, 1998, 1999; В.Г. Лиходед, 1999; Б.А. Шендеров, 1998, 2001; D.J. Hentges, 1983; G.W. Elmer et al., 1999; F. Backhed et al., 2005/.

Параметры микрофлоры кишечника находятся под постоянным контролем разнообразных не иммунологических и иммунологических механизмов, присущих человеку и поступательно развивающихся у него с течением времени в различные периоды физиологической адаптации. Причем, состав микрофлоры кишечника, вероятно, должен косвенно отражать особенности физиологического состояния как защитных, так и других систем организма хозяина в различные периоды его жизни. С другой стороны, состав микрофлоры кишечника во многом зависит от бактериальной контаминации окружающей среды, в которой находится человек. Однако, несмотря на достигнутые успехи в области изучения нормальной микрофлоры кишечника человека, до настоящего времени мы не имеем достаточных знаний о последовательности событий, сопровождающих формирование микрофлоры кишечника во времени, от момента рождения и по мере взросления человека.

Качественные и количественные характеристики формирующейся или уже сформировавшейся нормальной микрофлоры кишечника могут меняться в результате применения антибиотиков и некоторых других групп лекарственных препаратов, стрессорных воздействий, соматических и инфекционных заболеваний органов желудочно-кишечного тракта /А.А. Воробьев и соавт., 1995; В.М. Бондаренко и соавт., 1998; Н.М. Грачева и соавт., 1999/.

Наибольшей опасностью являются нарушения процессов формирования микрофлоры кишечника у детей раннего возраста. Часто такие нарушения происходят в результате применения антибактериальных препаратов широкого спектра действия, назначаемых с целью предупреждения возникновения и генерализации инфекционного процесса. Эти обстоятельства требуют поиска эффективных и физиологичных методов для коррекции микрофлоры кишечника у таких детей. Эффектом от применения таких методов могло бы быть предотвращение формирования эндогенных очагов инфекции.

У взрослых людей динамическое равновесие между членами микробиоценоза кишечника может быть смещено или нарушено как под влиянием факторов окружающей среды, например радиационных и химических воздействий, приема лекарственных средств, прежде всего антимикробных препаратов, а также при патологических процессах в макроорганизме, например, заболеваниях органов желудочно-кишечного тракта, при иммунодефицитных состояниях и онкологических заболеваниях.

Часто неблагоприятные факторы, способные приводить к нарушениям микрофлоры кишечника, могут влиять на человека во время выполнения им своей профессиональной деятельности, как например, в том случае когда речь идет о контакте с антибактериальными веществами не во время их применения с терапевтической целью, а во время их производства на соответствующих биотехнологических предприятиях. Кроме того, в этой же связи необходимо отметить все большее расширение сферы применения ядерной энергии и радиоактивных веществ, а также связанный с этим высокий уровень риска возникновения несчастных случаев с такими веществами, или неблагоприятных последствий от их воздействия в случае их терапевтического применения. Это, в свою очередь, ведет к тому, что лучевая патология становится одной из актуальных проблем современного здравоохранения (Н.Н. Клемпарская, 1966; G.I. Reevs, 1999). В случае тотального или локального абдоминального облучения организма ионизирующей радиацией может развиваться нарушение нормальной микрофлоры кишечника с возникновением в этой экологической нише эндогенного очага инфекции (Р.В. Петров, 1962; Н.Н. Клемпарская, 1966; В.Н. Мальцев, 1979; В.М. Шубик, 1977; I. Brook, 1986, 1994). На фоне сниженной иммунной реактивности организма происходит транслокация условно-патогенных микроорганизмов из желудочно-кишечного тракта во внутренние органы, следствием которой является развитие сепсиса и гибель организма. (В.М. Коршунов, 1981; Б.В. Пинегин, 1984,1. Brook, 1994).

Участие микробного фактора в гибели организма после лучевого поражения объясняет высокую эффективность применения антибиотиков при лечении лучевой болезни (В.М. Коршунов, 1980; I. Brook, 1991, 1994).

Пероральное применение живых или инактивированных культур лактобактерий и бифидобактерий в эксперименте у животных, облученных среднелетальными дозами, повышает выживаемость, а также нормализует состав микрофлоры кишечника (В.М. Коршунов, 1980; Б.В.Пинегин, 1984; V.M. Korschunov, 1996, Поспелова В.В., 1998). Однако, недостаточная эффективность существующих бактерийных препаратов и схем их применения продолжает оставаться одной из важных проблем терапии постлучевых дисбактериозов кишечника (Т. Mitsuoka, 1989; G. Reid, 1999; Т. Klaenhammer, 2000).

ЦЕЛЬ НАСТОЯЩЕГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Путем комплексного изучения качественных и количественных показателей аэробной и анаэробной микрофлоры кишечника у детей и взрослых определить закономерности микробной колонизации в различные возрастные периоды, а также разработать новые способы коррекции нарушений микрофлоры кишечника и провести клинико-лабораторную оценку их эффективности.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить и провести анализ качественных и количественных характеристик микрофлоры кишечника у людей разных возрастных групп;

2. Сравнить эффективность влияния ряда продуктов для детского питания, обладающих пробиотической или пребиотической активностью, на микрофлору кишечника у детей раннего возраста;

3. Оценить эффективность применения комплексного бактерийного препарата «Примадофилюс» для коррекции нарушений состава микрофлоры кишечника у детей раннего возраста;

4. Изучить влияние донорского молока, обогащенного штаммом бифидобактерий В. bifidum 791 на микрофлору кишечника недоношенных детей, наблюдающихся в отделениях реанимации и интенсивной терапии;

5. Изучить качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у сотрудников предприятия, занятых в производстве различных антибактериальных препаратов и эффективность использования для коррекции микрофлоры кишечника у этого контингента кисломолочного бифидумбактерина, вырабатываемого на основе штамма бифидобактерий В. bifidum 791;

6. Изучить эффективность применения различных бактерийных препаратов с пробнотической активностью для лечения постлучевых дисбактериозов в клинике;

7. В эксперименте оценить влияние совместного введения живых культур бактерий (лактобактерий и бифидобактерий) и различных антибиотиков на выживаемость, среднюю продолжительность жизни, микрофлору толстой кишки и на транслокацию микроорганизмов в печень у облученных мышей, содержащихся в конвенциональных условиях и в условиях общей гнотобиологической изоляции;

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Установлено, что у здоровых детей на первом году жизни происходят значительные изменения в кишечной микрофлоре. Это проявляется в обнаружении у них больших значений в популяционных уровнях, и в частоте обнаружения не только таких аутохтонных групп бактерий, как бифидобактерии, энтерококки, непатогенные эшерихии, но и бактерий, которые принято относить к условно-патогенным аллохтонным группам. Такими группами бактерий являются лецитиназопозитивные клостридии, цитрат ассимилирующие энтеробактерии и эшерихии с низкой биохимической активностью, а также со способностью к продукции гемолизинов. Кроме того, к этой группе относятся коагулазопозитивные стафилококки. В последующем, по мере взросления происходит частичная или полная элиминация этих условно-патогенных бактерий. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что микрофлора кишечника прямо отражает особенности физиологического состояния как защитных, так и других систем организма хозяина в различные возрастные периоды его жизни, а также характер питания и уровень микробной обсемененности окружающей среды.

Показана терапевтическая эффективность комплексного препарата «Примадофилюс», включающего несколько штаммов бифидобактерий и лактобактерий, относящихся к разным видам, на микрофлору кишечника у детей раннего возраста с нарушением микрофлоры кишечника, которое вызвано применением различных антимикробных препаратов.

Продемонстрирована эффективность донорского грудного молока, обогащенного бифидобактериями штамма В. bifidum 791, у недоношенных детей, получающих интенсивную антибиотикотерапию для нормализации микрофлоры кишечника.

В результате проведения количественной и качественной оценки состояния микрофлоры кишечника у работников фармацевтического предприятия, контактирующих с антибиотиками (в процессе их производства), выявлена высокая частота лиц с дисбиотическими изменениями кишечника. Для коррекции таких нарушений показана эффективность использования кисломолочного бифидумбактерина, вырабатываемого путем сбраживания молока штаммом бифидобактерий В. bifidum 791.

Показана эффективность использования тотально деконтаминированных (ТД) животных, содержащихся в условиях общей гнотобиологической изоляцией (ОГБИ), для определения антагонистической активности в отношении условно-патогенных бактерий и колонизирующей активности у штаммов лактобактерий и бифидобактерий. Установлено, что антагонистическая активность штаммов бифидобактерий в условиях in vitro и in vivo может различаться.

Установлено, что данные о рестрикционном профиле хромосомной ДНК и плазмидном профиле штаммов лактобактерий и бифидобактерий, экзогенно вводимых в кишечник лабораторных животных, могут быть эффективно использованы для идентификации этих штаммов при оценке их колонизирующей активности, изучаемой in vivo.

Выявлено, что штаммы Lactobacillus acidophilus 5/4 и Bifidobacterium longum 44, отличающиеся высокой колонизирующей способностью и антагонистической активностью по отношению к ряду условно-патогенных бактерий, увеличивали параметры выживаемости облученных мышей, содержавшихся в условиях ОГБИ. Также было установлено, что применение штамма Lactobacillus acidophilus 5/4 снижало избыточное размножение интестинальных грам-негативных аэробных и анаэробных палочковидных бактерий, поддерживало нормальный популяционный уровень лактобацилл, и снижало транслокацию строгоанаэробных бактерий в печень облученных животных.

Установлено, что интрагастралыюе введение ломефлоксацина приводило к повышению выживаемости и средней продолжительности жизни у облученных мышей, содержавшихся в условиях ОГБИ.

Впервые показано, что применение ломефлоксацина отдельно или в сочетании с Lactobacillus acidophilus 5/4 приводило к резкому уменьшению количества и частоты транслокаций кишечных грамнегативных аэробных и факультативно-анаэробных палочек в печень у облученных мышей.

Результатом проделанной работы стало получение ряда патентов на изобретения: на способ отбора штаммов бактерий для приготовления препаратов эубиотиков №1674562 (1989 г.); на штаммы бактерий Bifidobacterium longum Z4, В. breve Р2 и В. adolescentis 2Ф1 для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих микрофлору при нарушениях микробиоценоза влагалища №№ 2151606, 2148639, 2148640 (2000 г.); на штаммы бактерий Bifidobacterium longum 58В, Lactobacillus acidophilus 27L, L.rhamnosus 12L, В. infantis 37В для приготовления биологически активных добавок, регулирующих микрофлору кишечника у детей раннего возраста №№ 2210592, 2218394, 2215027, 2213140 (2003 г.); на способ лечения бактериального вагиноза № 2217155 (2003 г.). ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Полученные сведения о возрастных особенностях качественного и количественного состава микрофлоры кишечника у человека могут быть использованы в различных областях здравоохранения для правильной оценки микробиологического статуса здоровых людей или пациентов с различной патологией, для последующего правильного выбора, в случае необходимости, должного объема терапевтических мероприятий, направленных на купирование нарушений кишечной микрофлоры. Результаты указывают на необходимость учета состояния микрофлоры кишечника у детей для контроля бактериальной контаминации окружающей среды и оценки состояния их иммунного статуса.

Изучение степени влияния ряда, широко использующихся в настоящее время для кормления детей раннего возраста, пробиотических или пребиотических продуктов на параметры кишечной микрофлоры выявило, что их введение в пищевой рацион здоровых детей часто не приводит к выраженной коррекции состава кишечных микроорганизмов. Это проявляется в сохранении у детей большой частоты обнаружения в совокупности с высоким количественным уровнем аллохтонных групп бактерий даже на фоне оптимальных показателей, характеризующих состояние молочнокислой облигатной флоры. Отсутствие такого эффекта, указывает на первостепенную роль поступательного развития у ребенка иммунологической компетентности, по отношению к колонизирующим его микроорганизмам, что в совокупности с антагонистическими межмикробными взаимодействиями, ведет к селективному вытеснению из кишечника условно-паразитических форм жизни на более поздних этапах его физиологической адаптации.

Показано, что в последнее десятилетие на фоне применения в отделениях интенсивной терапии для новорожденных комбинаций ряда антибактериальных препаратов широкого спектра действия у детей возникают серьезные нарушения процессов первичной колонизации, характеризующиеся выраженным снижением популяций молочнокислых бактерий и селекцией полирезистентных госпитальных штаммов энтерококков, занимающих доминирующее положение в этой экологической нише. Применение лиофилизированного грудного молока, обогащенного штаммом бифидобактерий В. bifidum 791, для кормления недоношенных новорожденных, находящихся в условиях реанимационного отделения со 2-3 суток жизни позволяет эффективно формировать у них нормальную микрофлору кишечника и осуществлять коррекцию дисбиотических нарушений, возникающих на фоне антибиотикотерапии.

Полученные результаты убедительно свидетельствуют о глубоких и стойких нарушениях в составе нормальной микрофлоры кишечника у лиц, работающих в контакте с антибиотиками, что является показанием для постоянного контроля за микробным статусом кишечника у этой категории трудящихся. С целью проведения своевременной профилактики и лечения дисбиотических состояний кишечника у работников фармацевтических предприятий, занятых в производстве антибактериальных препаратов, было предложено использовать кисломолочный бифидумбактерин, готовящийся путем сквашивания молока бифидобактериями штамма В. bifidum 791.

Предложены и обоснованы эффективные способы коррекции дисбиотических нарушений микрофлоры кишечника у больных острой лучевой болезнью, подразумевающие использование аутоштаммов лактобактерий и бактерийного препарата пробиотика приготовленного на основе штамма бифидобактерий В. longum D4a200, отличающегося природной резистентностью к ряду антибиотиков группы аминогликозидов и ампициллину.

Предложены новые методы отбора перспективных штаммов бифидобактерий и лактобактерий для создания на их основе биотерапевтических препаратов, отличающиеся использованием гнотобиологической технологии применяемой для изучения антагонистической активности и способности бактерий к приживлению в кишечнике.

Экспериментально, на модели лабораторных животных, показана эффективность применения пробиотиков в комплексе с антибиотиками фторхинолонами и общей гнотобиологической изоляцией для нормализации микрофлоры кишечника, предупреждения развития экзогенных и эндогенных инфекционных состояний, а также увеличения параметров выживаемости при острой лучевой болезни.

Внедрение результатов в практику. По материалам диссертации были изданы учебные пособия "Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника", М., МЗ РФ, 1999 г., и «Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах» М., МЗ РФ, 1999 г., утвержденных Департаментом научно-исследовательских и образовательных медицинских учреждений МЗ РФ и рекомендованных в качестве учебных пособий для врачей-интернов, ординаторов и слушателей системы последипломного и дополнительного профессионального образования, а также в качестве дополнительного учебного материала для студентов медицинских вузов.

Основные положения диссертации, отражающие научную новизну и практическую значимость полученных результатов используются в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической микробиологии с курсом микробиологии МБФ РГМУ, кафедре неонатологии ФУВ, акушерства и гинекологии лечебного факультета РГМУ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения работы были доложены на заседаниях секции гнотобиологии и секции медицинской микробиологии и химиотерапии Московского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.И. Мечникова в 2000, 2001, 2003 гг., на практической конференции «Тимаковские чтения», проводимой секцией гнотобиологии 24.12.2002 г. в РГМУ, а также на научной конференции кафедры фундаментальной и клинической микробиологии с курсом микробиологии МБФ РГМУ 29 июня 2004 года.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. На протяжении первых лет жизни в популяциях аэробных и анаэробных микроорганизмов микрофлоры кишечника у здоровых детей наблюдаются выраженные качественные и количественные изменения. В ранние периоды физиологической адаптации для микрофлоры кишечника у детей характерны высокие популяционные уровни и частота выделения не только таких аутохтонных групп бактерий, как бифидобактерии, энтерококки, непатогенные эшерихии, но и бактерий, которые принято относить к условно-патогенным аллохтонным группам. Такими группами бактерий являются лецитиназопозитивные клостридии, цитратассимилирующие энтеробактерии и эшерихии с низкой биохимической активностью, а также со способностью к продукции гемолизинов, кроме того к этой группе относятся коагулазопозитивные стафилококки. В последующем, с ростом организма происходит частичная или полная элиминация бактерии этой последней группы.

2. Лиофилизированное грудное молоко обогащенное бифидобактериями при его использовании для энтерального питания новорожденных из групп высокого риска способствует развитию и поддержанию оптимального уровня бифидофлоры в кишечнике, нормализует микроэкологию и в целом благоприятно влияет на клинические показатели у детей.

3. Различные молочные продукты заменители грудного молока и пищевые продукты с пробиотической и пребиотической активностью обладают существенными различиями в действии на качественный и количественный состав кишечных микроорганизмов. При назначении таких продуктов в терапевтических целях эффект от их применения должен систематически контролироваться микробиологическими методами исследований.

4. Изучение колонизирующей способности и антагонистической активности по отношению к условно-патогенным бактериям у бифидобактерий и лактобактерий in vivo с использованием гнотобиологических технологий, а также применение таких молекулярно-генетических методов как изучение плазмидного и рестрикционного профиля у бактерий коменсалов с целью их маркирования позволяет увеличить эффективность поиска перспективных штаммов для создания на их основе новых препаратов пробиотиков для профилактики и лечения дисбиотических состояний в различных экологических нишах организма человека.

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 52 печатных работ, в том числе 9 патентов и авторских свидетельств на изобретения, 1 методические рекомендации и 2 учебных пособия.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Работа изложена на русском языке, на 338 страницах машинописного текста, состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Библиография включает 420 наименований работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 49 таблицами, 22 рисунками, 4 фотографиями.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Ефимов, Борис Алексеевич

286 ВЫВОДЫ

1.Кишечная микрофлора детей первого года жизни в настоящее время характеризуется высоким содержанием коагулазопозитивных стафилококков, условно патогенных энтеробактерий и лецитиназопозитивных клостридий. В дальнейшем, по мере взросления происходит элиминация этих бактерий из кишечника. Доминирующими представителями родов Bifidobacterium и Lactobacillus в составе микрофлоры толстой кишки у детей от 8 месяцев до 1,5 лет являются: Bifidobacterium longum, B.bifidum, Lactobacillus acidophilus и L.rhamnosus.

2.Введение в пищевой рацион здоровых детей первого года жизни продуктов, с пробиотическими или пребиотическими свойствами, не во всех случаях приводит к выраженному корригирующему эффекту состава кишечных микроорганизмов, что свидетельствует о роли иммунного «взросления» организма хозяина, которое в совокупности с антагонистическими межмикробными взаимодействиями ведет к селективному вытеснению из кишечника условно-паразитических форм жизни на более поздних этапах физиологической адаптации ребенка.

3.Сравнительное исследование влияния кисломолочных продуктов (кефира детского и ряженки) и продуктов для детского питания, в том числе использующихся в качестве заменителей грудного материнского молока с пробиотической (бифидок, смесь «ВИННИ» с овсяной и рисовой мукой и с бифидобактериями, «последующая формула» NAN 6-12) и пребиотической активностью («Семпер бифидус», кукурузная каша с инулином «Клинска», «Молоко с лактулозой») на микрофлору толстой кишки у детей раннего возраста выявило значительные различия в их влиянии на состав кишечной микрофлоры. Использование для кормления детей раннего возраста продуктов бифидок, ряженка или «Семпер бифидус» приводит к статистически достоверному увеличению бифидобактерий.

4.Пастеризация грудного молока методом Холдера с последующим обогащением его живым штаммом бифидобактерий В. bifidum 791, замораживанием и лиофильным высушиванием, при строгом выполнении условий бактериологического контроля на всех технологических этапах, позволяет получить лиофилизированное грудное молоко, сохраняющее высокий уровень slgA и обладающее выраженной пробиотической активностью.

5. Использование лиофилизированного грудного молока, обогащенного живыми бифидобактериями, в комплексе мероприятий по лечению и выхаживанию недоношенных детей, находящихся в условиях реанимации с первых суток жизни, позволяет компенсировать дефицит системы местной защиты кишечника и снизить риск его патологической микробной колонизации, вызванных применением антибактериальных препаратов.

6.Ежедневный контакт с антибиотиками в процессе их производства у сотрудников фармацевтического предприятия приводит к возникновению дисбиотических нарушений микрофлоры кишечника. Качественные и количественные изменения в составе кишечной микрофлоры зависят от длительности контакта с антибиотиками и их спектра. Применение кисломолочного бифидумбактерина, вырабатываемого путем сквашивания молока штаммом бифидобактерий B.bifidwn 791, способствует быстрому и эффективному восстановлению нормальной микрофлоры кишечника у лиц с дисбактериозами кишечника, обусловленными контактом с антибиотиками в процессе их производства.

7. Использование аутоштаммов лактобактерий или применение бактерийного препарата, приготовленного на основе штамма бифидобактерий В. longum D4a200, отличающегося природной резистентностью к ряду антибиотиков группы аминогликозидов и ампициллину, является эффективным способом коррекции дисбиотических нарушений микрофлоры кишечника у больных острой лучевой болезнью.

8.Показана перспективность использования штаммов бактерий L. acidophilus 5/4 и В. longum 44, обладающих выраженной способностью колонизировать эпителий кишечника в совокупности с широким спектром антагонистической активности, при терапии экспериментальной острой лучевой болезни, в комплексе с фторхпнолонами и общей гнотобиологической изоляцией, а сам метод как эффективный для купирования негативных последствий данного патологического состояния.

9.Анализ плазмидного профиля и рестрикционной карты хромосомной ДНК штаммов лактобактерий и бифидобактерий, имеет важное значение для их генетической паспортизации и может быть эффективно использован при оценке колонизирующей способности и возможной транслоцирующей активности этих бактерий при введении в организм хозяина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В течении жизни параметры кишечной микрофлоры человека претерпевают постоянные изменения, обусловленные как меняющимися условиями среды, так и теми физиологическими изменениями, которые в норме происходят в организме хозяина в разные возрастные периоды. Наибольшей динамикой отличается микрофлора кишечника у детей на протяжении первых лет жизни. Так, кишечная микрофлора детей, особенно проживающих в крупных городах, может отличаться частым обнаружением высоких концентраций аллохтонных групп бактерий, уровень которых может значительно превышать показатели нормы принятые в настоящее время. Причем, такие показатели определяются на фоне оптимальных параметров, характеризующих облигатную молочнокислую флору и не сопровождаются выраженной клинической симптоматикой характерной для дисбиотических состояний. С одной стороны, возможно, что данные отличия, характерные для интестинальной микрофлоры детей, проживающих в крупных промышленно развитых городах, связаны с высоким уровнем урбанизации, а также миграции населения, регистрируемой в настоящее время. С другой стороны, эти отличия могут быть отражением физиологических особенностей адаптивных защитных систем детского организма, которые продолжают развиваться у ребенка, в том числе и под влиянием той антигенной нагрузки, которая его окружает. Подтверждением этой точки зрения может также являться то обстоятельство, что кормление здоровых детей раннего возраста, имеющих удовлетворительные параметры молочнокислой интестинальной флоры, пробиотическими или пребиотическими продуктами часто не приводит к выраженному снижению, как частоты определения, так и количественного уровня условно-патогенных микроорганизмов. Отсутствие такого эффекта, указывает на первостепенную роль поступательного развития у ребенка иммунологической компетентности, по отношению к колонизирующим его микроорганизмам, что в совокупности с антагонистическими межмикробными взаимодействиями, ведет к селективному вытеснению из кишечника условно-паразитических форм жизни на более поздних этапах его физиологической адаптации.

Вместе с тем, эти особенности, характеризующие динамику формирования кишечной микрофлоры у детей, могут создать определенные трудности для врача при составлении им заключения о состоянии здоровья ребенка. Некорректно проведенное бактериологическое обследование или неправильная интерпретация собранных анамнестических данных и результатов бактериологического анализа могут привести к ошибочным назначениям, например нерациональной антибиотикотерапии. Таким образом, учитывая то значение, которое представляет для здоровья человека состояние его собственной микрофлоры, а также те трудности, с которыми может столкнуться клиницист при работе с пациентом, необходимо обратить особое внимание на разбор этих вопросов в учреждениях системы профессионального образования при подготовке медицинских кадров.

2. К настоящему времени накоплено большое количество информации доказывающей, что видовой состав бифидофлоры у детей раннего возраста подвержен изменениям. Кроме того, известно, что различные виды бифидобактерий обладают некоторыми, выражено отличающими их, биологическими свойствами, которые могут быть полезны для хозяина. Таким образом, учитывая важность этой группы бактерий для здоровья человека и, особенно детей, для полноценной характеристики состояния интестинальной микрофлоры, кроме определения общего количества бактерий этого рода, необходимо внедрение в повседневную практику и определение видового баланса бифидобактерий.

В связи с этим, также необходимо обратить внимание на то, что по сравнению с все еще широко использующимся в нашей стране методом выявления бифидобактерий, при котором исследуемый материал засевают в полужидкую питательную среду в пробирки, более предпочтительным является чашечный метод с инкубацией чашек с посевами в анаэробных условиях (например, микроанаэростатах). Высев на поверхность плотной питательной среды позволяет бактериологу более точно осуществить изучение морфологии выросших колоний, выполнить их подсчет, отсеять для получения чистой культуры материал из выбранных колоний. Дальнейшая видовая дифференциация бифидобактерий быстро и прецизионно может быть осуществлена при помощи ПЦР с видоспецифическими бифидобактериальными праймерами.

3. В последнее десятилетие, на фоне применения в отделениях интенсивной терапии новорожденных комбинаций ряда антибактериальных препаратов широкого спектра действия, у детей возникают серьезные нарушения процессов первичной интестинальной колонизации. Для коррекции дисбиотических нарушений у таких детей может быть использовано лиофилизированное грудное молоко, обогащенное штаммом бифидобактерий В. bifidum 791. Использование данного продукта для кормления недоношенных новорожденных, находящихся в условиях реанимационного отделения с первых суток жизни, позволяет эффективно формировать у них нормальную микрофлору кишечника и осуществлять коррекцию дисбиотических нарушений, возникающих на фоне антибиотикотерапии.

4. С целью проведения своевременной профилактики и лечения дисбиотических состояний кишечника у работников фармацевтических предприятий, занятых в производстве антибактериальных препаратов, может быть использован кисломолочный бифидумбактерин, готовящийся путем сквашивания стерильного молока закваской из монокультуры бифидобактерий штамма В. bifidum 791.

5. Для определения антагонистической активности штаммов бифидобактерий и лактобактерий по отношению к условно-патогенным бактериям, а также для изучения их способности к приживлению в кишечнике в условиях in vivo, с успехом могут быть использованы тотально деконтаминированные лабораторные животные, содержащиеся в условиях гнотобиологической изоляции.

6. Анализ плазмидного профиля и рестрикционной карты хромосомной ДНК, как уже использующихся в промышленности, так и вновь выделенных штаммов лактобактерий и бифидобактерий, может быть применен для паспортизации этих штаммов. Кроме того, эти методы могут быть использованы для маркирования штаммов бактерий вводимых в организм хозяина с целью оценки их колонизирующей способности и возможной транслоцирующей активности.

7. Для предупреждения развития экзогенных и эндогенных инфекционных осложнений при острой лучевой болезни эффективно сочетанное применение препаратов пробиотиков, приготовленных на основе лактобактерий и бифидобактерий, с антибиотиками фторхинолонами (ломефлоксацин). Применение антибиотиков данной группы, обладающих селективным антимикробным действием, что выражается в их низкой активности в отношении представителей облигатно-анаэробного ростка собственной флоры кишечника, предупреждает развитие постантибиотикового дисбактериоза.