Микробиологический и молекулярно-генетический мониторинг возбудителя дифтерийной инфекции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Комбарова, Светлана Юрьевна

• Комбарова, Светлана Юрьевна
• доктор биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор биологических наук Комбарова, Светлана Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава I. Биология возбудителя дифтерии.

1.1. Микробиологическая характеристика возбудителя дифтерии и принципы лабораторной диагностики.

1.2. Дифтерийный токсин - основной фактор патогенности возбудителя дифтерии.

1.2.1. Структура и функции дифтерийного токсина.

1.2.2. Генетика токсиногенеза С. ИрЫкепае.

1.2.3. Регуляция экспрессии гена дифтерийного токсина.

Глава II. Основы микробиологического мониторинга возбудителей инфекционных заболеваний.

2.1. Фенотипические методы наблюдения за С. сИрЫкепае.

2.2. Молекулярно-генетические методы мониторинга возбудителя дифтерии и других инфекционных заболеваний.

2.2.1. Маркеры, используемые при разработке методов молекулярной диагностики и типирования.

2.2.2. Полимеразная цепная реакция как инструмент исследования генов микроорганизмов.

2.2.3. Секвенирование ДНК.

2.2.4. Рестрикционный анализ хромосомной ДНК и блот-гибридизация нуклеиновых кислот.

2.2.5. Мультилокусный энзимный электрофорез (энзимтипирование).

2.2.6. Методы типирования, основанные на технологии полимеразной цепной реакции.

СОБСТВЕННЫ ЕИССЛЕДОВАНИ Я.

Глава III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Штаммы бактерий.

3.2. Идентификация культур С. diphtheriae.

3.3. Наблюдения по распространению С. diphtheriae на территории России

3.4. Реакция непрямой гемагглютинации.

3.5. Полимеразная цепная реакция.

3.6. ПЦР с универсальными праймерами.

3.7. Риботипирование.

3.8. Мультилокусный энзимный электрофорез.

3.9. Секвенирование генов tox и cfcti?.

3.10. Фаговая конверсия.

3.11. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава IV. Особенности циркуляции возбудителя дифтерии на территории России.

4.1. Риботипы С. diphtheriae, зарегистрированные в России.

4.2. Полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами как ускоренный метод наблюдения за генетической структурой популяции С. diphtheriae.

4.3. Структура популяции возбудителя дифтерии в различные периоды эпидемического процесса дифтерийной инфекции.

4.3.1. Периодичность эпидемического процесса дифтерийной инфекции.

4.3.2. Распространение биоваров токсигенных С. diphtheriae.

4.3.3. Генетическая структура штаммов возбудителя дифтерии, выделенных в различные периоды эпидемического процесса дифтерийной инфекции.

4.3.4. Клональный состав популяции С. diphtheriae.

Глава V. Патогенные свойства штаммов С. diphtheriae.

5.1. Уровень токсинообразования штаммов возбудителя дифтерии, распространенных в различные периоды эпидемического процесса дифтерийной инфекции.

5.2. Изучение нуклеотидной последовательности генов tox и dtxR.

5.2.1. Структура гена tox.

5.2.2. Структура гена dtxR.

Глава VI. Генетическая структура нетоксигенных С. diphtheriae.

6.1. Распространение токсигенных и нетоксигенных С. diphtheriae на территории России.

6.2. Риботипы нетоксигенных С. diphtheriae, зарегистрированные в России

6.3. Эксперимент по лизогенной конверсии нетоксигенных С. diphtheriae в токсигенные in vitro.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробиологический и молекулярно-генетический мониторинг возбудителя дифтерийной инфекции»

Актуальность проблемы

Внедрение в 50-60-е годы XX века в практику здравоохранения России массовой иммунизации детей дифтерийным анатоксином привело к значительному снижению заболеваемости дифтерией. Однако периодичность в развитии эпидемического процесса, характерная для этой инфекции, сохранилась. Как и в допрививочный период, основные причины подъемов остаются неизменными: накопление неиммунных, отсутствие антиколонизационной резистентности к инфицированию возбудителем дифтерии, ухудшение социальных условий жизни людей [28, 45, 48, 50, 52, 57, 77].

В 90-е годы распространение дифтерийной инфекции в России приобрело характер эпидемии с пиком в 1994 г., когда показатель заболеваемости на 100 тыс. населения (ПЗ) составил 26,9. Благодаря массовой кампании по иммунизации детей и взрослых, контролированию состояния антитоксического иммунитета населения, качества клинической и лабораторной диагностики, а также совершенствованию методов лечения дифтерии произошло снижение уровня заболеваемости этой инфекции. К 2003-2004 г.г. ПЗ снизились до 0,48-0,35 соответственно, к 2005-2006 г.г. - до 0,35-0,12 соответственно. Вместе с тем, среди непривитых, по-прежнему, регистрируются тяжелые формы заболевания и летальные исходы, что указывает на скрытое протекание эпидемического процесса, проявляющегося, главным образом, в виде носительства токсигенных Corynebacterium diphtheriae и легких форм заболевания у привитых [48, 50, 49, 51, 52, 53, 54, 77].

Существенной причиной поддержания эпидемического процесса дифтерии является продолжающаяся циркуляция возбудителя даже при высоком уровне антитоксического иммунитета у людей. Сохранению возбудителя дифтерии в природе способствуют следующие факторы: 1) антитоксический поствакцинальный противодифтерийный иммунитет не препятствует носительству возбудителя дифтерии [26, 67, 71, 84, 85]; 2) массовая вакцинопрофилактика не привела к ослаблению вирулентных свойств возбудителя [6, 22, 39, 63, 64, 75]; 3) высокая гетерогенность вида С. сИрЫЬепае по биологическим свойствам (биохимическим, токсигенным, антигенным, генетическим) приводит к формированию популяции со сложной структурой, что облегчает адаптацию возбудителя к постоянно меняющимся условиям существования [6, 33, 39,46, 68, 75].

Таким образом, на современном этапе отсутствуют предпосылки к ликвидации дифтерийной инфекции, включая эрадикацию ее возбудителя как биологического вида [27]. Поэтому в системе эпидемиологического надзора за дифтерийной инфекцией отдельным положением выделено наблюдение за циркулирующими штаммами С. сИрЫкепае [44, 70].

Микробиологический мониторинг С. сИрЫИепае должен строится на соответствующей методической основе с учетом особенностей биологии данного микроорганизма. В 90-е годы в Федеральной референс лаборатории по диагностике дифтерийной инфекции при МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского (ФРЛДДИ) разработана комплексная система лабораторной диагностики и наблюдения за возбудителем дифтерийной инфекции, основу которой составляли классические микробиологические, а также иммуно-химические (реакция непрямой гемагглютинации, иммуноферментный анализ, иммуноэлектрофорез) и молекулярно-генетические методики (ДНК-ДНК гибридизация нуклеиновых кислот, полимеразная цепная реакция по выявлению гена дифтерийного токсина). Применение такого комплексного подхода позволило установить, что биологические свойства возбудителя дифтерии могут влиять на развитие эпидемического и тяжесть инфекционного процесса [6, 36, 39,40, 56, 57].

В 1993 г. комиссия Европейского регионального бюро ВОЗ, высоко оценив систему эпиднадзора за дифтерией, разработанную в России, подтвердила необходимость контроля за дифтерией в других странах мира и создала Международную лабораторную рабочую группу ВОЗ по дифтерии. Приоритетным направлением работы группы является унификация методов лабораторной диагностики и наблюдения за циркулирующими штаммами С. diphtheriae, изучение их генетической структуры [118].

Развитие и усовершенствование молекулярно-биологических технологий расширило возможности исследователей по изучению возбудителей инфекционных заболеваний. Представлялось актуальным дополнить существующую систему микробиологического мониторинга возбудителя дифтерии в России современными методами изучения генетической структуры, позволяющими наблюдать за формированием популяции С. diphtheriae в динамике эпидемического процесса, выявлять их возможную эволюционную изменчивость, оценивать и прогнозировать тяжесть эпидемического и инфекционного процессов при дифтерии.

Цель исследования: Научное обоснование системы комплексного микробиологического и молекулярно-генетического мониторинга возбудителя дифтерийной инфекции и установление особенностей его распространения в условиях высокой и низкой интенсивности эпидемического процесса.

Задачи:

1. Провести молекулярно-генетическое типирование (риботипирование, энзимтипирование) токсигенных и нетоксигенных штаммов С. diphtheriae, выделенных в России в различные периоды эпидемического процесса дифтерийной инфекции.

2. Разработать ускоренный метод типирования С. diphtheriae, основанный на технологии полимеразной цепной реакции.

3. Изучить с помощью метода секвенирования структуру генов tox и dtxR, ответственных за синтез дифтерийного токсина - основного фактора патогенности возбудителя дифтерии.

4. Провести наблюдение за распространением токсигенных и нетоксигенных штаммов С. diphtheriae основных биоваров на территории России.

5. Сформировать базу данных по риботипам С. diphtheriae, выделенных в России.

Научная новизна

Получены новые сведения по фенотипической и генотипической характеристике С. diphtheriae, свидетельствующие о клональном распространении штаммов возбудителя дифтерии в период последней эпидемии в 90-е годы XX века. Формирование эпидемической клональной группы штаммов, установленное в динамике наблюдения, началось за несколько лет до повышения показателей заболеваемости дифтерией, что явилось предвестником осложнения эпидемиологической ситуации. В период эпидемического подъема эти штаммы доминировали в популяции и были распространены на всей территории России. Доминирующие штаммы характеризовались высоким уровнем токсинообразования, относились к биовару gravis, энзимтипам комплекса 8, риботипам 'Sankt-Peterburg/Rossija', отличались по структуре гена дифтерийного токсина (tox) и регуляторного гена dtxR от недоминирующих штаммов; все штаммы доминирующей клональной группы имели мутационные изменения в регуляторном гене dtxR в положении 440 (замена нуклеотида С на Т), что, вероятно, привело к повышению уровня токсинообразования. При снижении показателей заболеваемости популяция возбудителя дифтерии длительное время сохраняет гомогенную структуру, что обусловлено широким распространением доминирующих штаммов. В условиях низкой интенсивности эпидемического процесса (80-е годы XX века) популяция возбудителя дифтерии гетерогенна по штаммовому составу (биоварам, риботипам, энзимтипам).

Впервые выявлена мутация в гене tox в положении 1252 (замена нуклеотида G на С), приводящая к изменению домена R фрагмента В дифтерийного токсина, ответственного за первичное взаимодействие токсина с рецепторами чувствительной эукариотической клетки. Полученные данные опровергают сложившееся представление о невозможности генетических изменений гена дифтерийного токсина, приводящих к изменению структуры дифтерийного токсина - основного фактора патогенности возбудителя дифтерии.

Получены новые данные, свидетельствующие об участии нетоксигенных штаммов в формировании популяции возбудителя дифтерии: выявлена взаимосвязь процессов циркуляции токсигенных и нетоксигенных штаммов С. diphtheriae, филогенетическая связь между ними, обусловленная общностью генов рРНК и регуляторного гена dtxR, показана способность нетоксигенных штаммов, выделенных в современный период, приобретать ген дифтерийного токсина.

Теоретическая значимость

Установленные особенности формирования популяции возбудителя дифтерии, внутривидовое разнообразие С. diphtheriae по признаку токсигенности, биоварам, риботипам, энзимтипам и аллельным вариантам по генам tox и dtxR, ответственным за токсинообразование, являются теоретическим обоснованием невозможности полного искоренения (эрадикации) возбудителя дифтерии вследствие его высокой жизнеспособности.

Новые сведения об изменчивости генов tox и dtxR, контролирующих структуру и функцию дифтерийного токсина, указывающие в ряде случаев на несоответствия структуры этих генов у циркулирующих штаммов и вакцинного штамма Park Williams 8, в дальнейшем, при накоплении подобных фактов, помогут объяснить причину заболевания правильно привитых лиц и теоретически обосновать новые подходы к совершенствованию вакцинопрофилактики при дифтерии.

Практическая значимость

С помощью усовершенствованной системы мониторинга возбудителя дифтерии, включающей комплекс микробиологических, биохимических и молекулярно-генетических методов исследования уточнены механизмы формирования популяции возбудителя дифтерии в различные периоды эпидемического процесса дифтерийной инфекции. Полученные результаты позволяют повысить эффективность микробиологического мониторинга при составлении более точных прогнозов развития эпидемического процесса.

Учитывая, что нетоксигенные С. diphtheriae могут оказывать влияние на формирование популяции возбудителя дифтерии, целесообразно проводить наблюдение за нетоксигенными штаммами в специализированных центрах и научно-исследовательских институтах, изучающих проблему дифтерии. Установление механизма блокирования продукции дифтерийного токсина у нетоксигенных токснесущих штаммов риботипа 'Moskva' позволило разработать метод дифференциации нетоксигенных токснесущих штаммов С. diphtheriae от «истинно» токсигенных штаммов (защищено патентом № 2209831).

Пополнена уникальная, единственная в мире коллекция штаммов С. diphtheriae, выделенных в России, которая включена в единую информационную систему «Генетические и биологические (зоологические и ботанические) коллекции Российской Федерации http://www.sevin.ru/collections/index.html). Включение коллекции в единый реестр расширяет возможности ученых России и всего мира по исследованию возбудителя дифтерии с целью создания новых препаратов и биотехнологий, направленных на совершенствование лабораторной диагностики и средств иммунопрофилактики дифтерии.

Созданная база данных по риботипам С. diphtheriae позволяет проводить сравнительные исследования генетической структуры штаммов С. diphtheriae с целью регистрации новых, ранее не циркулировавших штаммов, и наблюдать за их распространением. Штаммы риботипов С. diphtheriae, выделенных в России, включены в коллекцию Федеральной референс лаборатории по диагностике дифтерийной инфекции МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. Штаммы риботипов 'Sankt-Peterburg', 'Rossija', 'Vladimir', 'Kaliningrad' и 'Moskva', впервые зарегистрированные в России, представлены в Международную базу данных риботипов С. diphtheriae в Институте Пастера (Париж).

Результаты проведенных исследований послужили основой или были учтены при составлении ниже перечисленных документов:

1. Дифтерия. Руководство по лабораторной диагностике дифтерии (перевод на русский язык руководства ВОЗ). Санкт-Петербург, 1995. Мазурова И.К., Чайка H.A., Мельников В.Г., Михайлович В.М., Комбарова С. 10.

2. Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции. Руководство. - М.: Информационно - издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1995. -76 стр. Мазурова И.К., Мельников В.Г., Комбарова С.Ю.

3. Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции. Методические указания. МУ 4.2.698-98, Минздрав РФ, 1998. - 47 стр. Мазурова И.К., Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю.

5. Способ дифференциации Corynebacterium diphtheriae, содержащих функционально активный ген дифтерийного токсина от Corynebacterium diphtheriae, содержащих функционально неактивный ген дифтерийного токсина. Патент на изобретение № 2209831. Приоритет от 28.12.2001. Мельников В.Г., Мазурова И.К., Комбарова С.Ю.

6. Характеристика штаммов Corynebacterium diphtheriae, циркулирующих в России в период 1984-1998 г.г. (микробиологический мониторинг в системе эпиднадзора за дифтерийной инфекцией). Пособие для врачей. Минздрав РФ, 3 декабря 1999 г., протокол № 4. Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю.

7. Ускоренный метод лабораторной диагностики дифтерийной инфекции. Методические рекомендации Минздрав РФ, 26 апреля 2001 г., № 2001/56. Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Мельников В.Г., Борисова О.Ю.

8. Комплексная система наблюдения за циркулирующими штаммами Corynebacterium diphtheriae. Пособие для врачей. Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Мельников В.Г., Зотина Р.К., Кривопалова Н.С., Мазурова И.К. Роспотребнадзор, 2 декабря 2004 г., протокол № 5.

Апробация работы

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на 5-ти Российских и 14-ти международных конференциях: съездах Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 1997; 2002); Российских научно-практических конференциях «Инфекционные болезни на рубеже XXI века» (Москва, 2000), «Генодиагностика инфекционных заболеваний (Москва, 2004), «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 2006); на международных конференциях «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» (Санкт-Петербург, 1995; 1998; 2003); на 95ov съезде американского общества по микробиологии (95th General Meeting of American Society for microbiology -Вашингтон, 1995); на 10м конгрессе европейских микробиологов (1 FEMS Congress of European Microbiologists - Любляна, 2003); на Международных совещаниях Международной лабораторной рабочей группы ВОЗ по дифтерии и проекта по контролю за дифтерией в странах Европейского Союза (International meetings of the European laboratory working group on diphtheria, ELWGD and Diphtheria surveillance network, DIPNET - Лондон, 1994;

Хельсинки, 1995; Париж, 1996; Бухарест, 1997; Халхидики, 1998; Брюссель, 2000 г., Вена, 2002; Копенгаген, 2004; Вольягмени, 2006).

Публикации

Основное содержание работы отражено в 53 научных публикациях: в статьях - 16, в том числе в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК России - 8: (5 в отечественных, 3 - в иностранных журналах), в материалах всероссийских и международных конференций - 30, в патенте на изобретение -1, в инструктивно-методических документах - 6.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на русском языке, состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Библиография включает 258 наименований работ отечественных и зарубежных авторов. Общий объем диссертации составляет 225 страниц машинописного текста. Текст иллюстрирован 33 таблицами и 28 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Комбарова, Светлана Юрьевна

В ы В ОД ы

1. Разработана система микробиологического и молекулярно-генетического мониторинга возбудителя дифтерии, которая предусматривает применение как классических микробиологических и иммунохимических методов исследования (идентификация С. diphtheriae с определением токсигенных свойств и биовара), так и молекулярно-генетических методов изучения особенностей генома С. diphtheriae и отдельных генов, ответственных за синтез основного фактора патогенности возбудителя дифтерии -дифтерийного токсина (риботипирование, энзимтипирование, полимеразная цепная реакция, секвенирование ДНК). Высокая информативность и дифференцирующая способность данных методов позволила наблюдать за структурой популяции С. diphtheriae в динамике эпидемического процесса.

2. Проведено типирование С. diphtheriae, выделенных в различных регионах России. С помощью энзимтипирования, основанного на выявлении метаболических энзимов, структура которых четко коррелирует с генотипом штамма и риботипирования, выявляющего особенности генов рРНК, зарегистрировано 89 энзимтипов и 31 риботип (23 риботипа среди токсигенных штаммов и 20 риботипов среди нетоксигенных штаммов). Выявлены риботипы высокого удельного веса по количеству входящих в их состав штаммов - 'Sankt-Peterburg/Rossija' (72,3 %) среди штаммов биовара gravis и 'Otchakov' среди штаммов биовара mitis (15,1 %).

3. Разработан метод генотипирования С. diphtheriae - полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами для ускоренной идентификации штаммов риботипов высокого удельного веса 'Sankt-Peterburg/Rossija'.

4. Показано, что популяция возбудителя дифтерии гетерогенна по фенотипическим и генотипическим характеристикам - биоварам, токсигенным свойствам, риботипам, энзимтипам, структуре генов tox и dtxR, ответственных за токсинообразование, что определяет ее адаптацию к меняющимся условиям существования и способствует сохранению вида.

5. Установлено, что в период, предшествующий высокому уровню заболеваемости дифтерией, происходит перестройка гетерогенной популяции, при этом постепенно увеличивается удельный вес определенного биовара и риботипа. В 40-70 годы XX века преимущественное распространение имели штаммы биовара gravis риботипа 'Lyon' (84,6 %), в 80-е годы спорадической заболеваемости на фоне преобладания биовара mitis (до 83,1 %) популяция была гетерогенна по риботипам (всего 8 риботипов), однако по удельному весу выделялись риботипы 'Otchakov' (29,4 %) и 'Sankt-Peterburg/Rossija' (23,5 %); в 90-е годы преобладали штаммы высокого уровня токсинообразования биовара gravis риботипов 'Sankt-Peterburg/Rossija' (до 96,1 %).

6. Установлена принадлежность большинства штаммов риботипов 'Sankt-Peterburg/Rossija' (95,1 %) к клональной группе энзимтипов комплекса 8. Показано, что штаммы данной группы характеризовались аллельными вариантами III, IV по гену tox и аллельными вариантами 1, 2, 3, 4 по гену dtxR. Отличительной особенностью структуры гена dtxR штаммов эпидемической группы явилось наличие мутации в положении 440 (замена нуклеотйда С на Т), соответствующей замене аланина на валин в положении 147 аминокислотной последовательности регуляторного белка DtxR (A147V), что, вероятно, привело к повышенному уровню продукции дифтерийного токсина штаммами эпидемической клональной группы.

7. Показано, что доминирование штаммов риботипов 'Sankt-Peterburg/Rossija' продолжилось и при снижении интенсивности эпидемического процесса вследствие их повсеместного распространения на территории России. Вместе с тем, начиная с 1997 г., в популяции отмечаются изменения, связанные с увеличением количества других риботипов (10 риботипов) и их удельного веса (до 27,9 %). Некоторые риботипы ('Londinium', 'Vrancea', 'Schwarzenberg', 'Pakistan', 'Ras-el-Ma') впервые зарегистрированы только во время снижения уровня заболеваемости дифтерией.

8. Впервые выявлена генетическая изменчивость гена tox, приводящая к изменениям на аминокислотном уровне. У двух штаммов риботипа 'Otchakov' зарегистрирована мутация в положении 1252 (замена нуклеотида G на С), что соответствует замене глицина на аргинин в положении 393 аминокислотной последовательности дифтерийного токсина (G393R). Данная мутация локализована в области гена tox, кодирующей домен R фрагмента В дифтерийного токсина, ответственном за первичное взаимодействие дифтерийного токсина с чувствительной эукариотической клеткой.

9. Получены новые данные, расширяющие представления о виде С. diphtheriae - наряду с токсигенными и нетоксигенными штаммами в 16,8 % случаев встречаются штаммы, несущие неэкспрессирующийся, «молчащий» ген дифтерийного токсина. Данные штаммы принадлежали к биовару mitis, их генетическая структура гетерогенна (11 риботипов). Характер распространения токсигенных и нетоксигенных штаммов С. diphtheriae, соответствующий динамике заболеваемости дифтерией, общность генетической структуры токсигенных, нетоксигенных и нетоксигенных токснесущих штаммов (генов рРНК, гена dtxR), способность современных нетоксигенных штаммов приобретать ген tox посредством фаговой конверсии указывают на участие последних в формировании популяции возбудителя дифтерии.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Комбарова, Светлана Юрьевна, 2007 год

1. Адаме М. Бактериофаги. М.: ИЛ, 1961. - 527 с.

2. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Академкнига, 2003.-431 с.

3. Анисимов А.П. Факторы Yersinia pestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы в экосистемах природных очагов. Сообщение 1. // Мол. ген. микробиол. вирусол. 2002. - № 3. С. 3-23.

4. Барашкова Л.Н. Разработка способов получения эритроцитарных диагностикумов из чистых антител для специфической индикации микробных антигенов и токсинов: Автореф. дис. канд. биол. наук. -Ленинград, 1986.

5. Бондаренко В.М. Острова патогенности бактерий. // Журн. Микробиол. -2001.-№4.-С. 67-74.

6. Борисова О.Ю. Патогенные и молекулярно-генетические свойства штаммов С. diphtheriae, циркулирующих на территории России в течение 1994-1998 г.г.: Автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 1999.

7. Бочкова В.А. Антибактериальный иммунитет при дифтерийной инфекции: Автореф. дис. докт. мед. наук. Москва, 1978.

8. Высоцкий В.В., Шмелева Е.А., Мазурова И.К. Сравнительное электронно-микроскопическое изучение 8 представителей рода Corynebacterium, выращенных на твердой питательной среде в стационарной фазе развития. // Журн. Микробиол. 1976. - № 10. - 121126.

9. Высоцкий В.В., Шмелева Е.А., Мазурова И.К. К вопросу об экстрацеллюлярном материале некоторых представителей рода Corynebacterium (электронно-микроскопический аспект). // Журн. Микробиол. 1977. - № 8. - С. 90.

10. Ю.Гаврилова H.A. Особенности роста, биосинтеза дифтерийного токсина и клеточных белков при культивировании Corynebacterium diphtheriae в условиях дефицита железа: Автореф. дис. канд. биол. наук. М.,2000.

11. П.Гараев М.М., Казеннова Е.В., Бобков А.Ф., Казаков Б.Г., Ковган A.A., Бобкова М.Р., Жданов В.М. Рестрикционный анализ ДНК токсигенных коринефагов BF, ф 984, ф 9 и С. II Вопросы вирусологи. 1987. - № 5. -С. 554-560.

12. Гараев М.М., Бобкова М.Р., Бобков А.Ф., Лукашевич Н.В. Клонирование и экспрессия гена дифтерийного токсина и его отдельных субъединиц в бактериях Е. coli. //Генетика. 1990. - Т. 26. - № 6. - 990-999.

13. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. - 459 с.

14. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение./ Перевод с англ. под ред. Янковского H.K. М.: Мир, 2002. -590 с.

15. Далин М.В., Фиш Н.Г. Белковые токсины микробов. М.: Медицина, 1980.-224 с.

16. Инфекционные заболевания в России. Статистический справочник. М.: Государственный комитет санитарно-эпидемиологического надзора

17. России; Российский республиканский информационно-аналитический центр, 1992. 40 с.

18. Ковган A.A., Бобков А.Ф., Карамов Э.В., Гараев М.М., Маныкин А.И., Жданов В.М. Биология и некоторые физико-химические свойства фагов Corynebacterium diphtheriae ß (Freeman), cp 9, cp 984. // Вопросы вирусологии. 1986. - № 5. - С. 577-584.

19. Костюкова H.H., Блинова H.H. Изучение вирулентности свежевыделенных культур Corynebacterium diphtheriae на куриных эмбрионах. //Журн. Микробиол. 1967. - № 8. - С. 37-42.

20. Костюкова H.H., Фаворова JI.A. Патогенные свойства дифтерийных бактерий, выделенных в течение эпидемического процесса. // Журн. Микробиол. 1968. - № 5. - С. 69-75.

21. Костюкова H.H. Дифтерийное бактерионосительство (бактериологические и иммунологические исследования): Автореф. дис. докт. мед. наук. -М., 1971.

22. Костюкова H.H., Переверзев H.A. Адгезия С. diphtheriae. // Журн. Микробиол.- 1985.-№ 11.-С. 30-33.

23. Костюкова H.H., Карась С.Р. Адгезивная активность дифтерийных штаммов в зависимости от вызываемого ими инфекционного процесса. // Журн. Микробиол. -1991. -№11. С. 24-27.

24. Костюкова H.H. Микробиологические факторы, определяющие иосительство при воздушно-капельных инфекциях. // Журн. Микробиол. 1997.-№4.-С. 10-15.

25. Костюкова H.H. Уроки дифтерии. // Журн. Микробиол. 1999. - № 2. -С. 92-96.

26. Корженкова М.П., Платонова Т.В., Черкасова В.В., Малышев H.A., Кудряшова О.В., Берко А.И., Арсеньев В.А. Особенности клиники дифтерии в условиях циркуляции возбудителя дифтерии высокой степени токсигенности. Пособие для врачей. М., 2002. - 31 с.

27. Корженкова М.П. Клиника дифтерии в период высокой и низкой заболеваемости. // Бюллетень «Вакцинация». 2006. - № 14(3). - С. 4-6.

28. Крылова М.Д. Вирусы коринебактерий дифтерии в генетическом маркировании и таксономии: Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 1973.

29. Крылова М.Д. Дифтерийная инфекция (биологические, генетические и эпидемиологические аспекты). М.: Медицина, 1976.

30. Мазурова И.К. Разработка и применение реакции пассивной гемагглютинации для обнаружения дифтерийных противомикробных антител у больных дифтерией: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1971.

31. Мазурова И.К., Бочкова В.А., Филллиппова JT.M. Гуморальные показатели антимикробного иммунитета при дифтерии. // Журн. Микробиол. 1971. - № 4. - С. 86-89.

32. Мазурова И.К., Потемкина Е.Е., Свиридов В.В., Зайцев Е.М. Детекция токсина и оценка степени токсинообразования с помощью иммуно-ферментного анализа. // Журн. Микробиол. 1989. - № 6. - С. 66-71.

33. Мазурова И.К. Комплексная система лабораторной диагностики и наблюдения за возбудителем дифтерии: Автореф. дис. докт. мед. наук. -М, 1993.

34. Мазурова И.К., Мельников В.Г., Комбарова С.Ю. Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции. Руководство. М.: Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора России, 1995.-76 с.

35. Мазурова И.К., Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Жилина Н.Я. Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции. Методические указания. МУ 4.2.698-98. М.: Интэрсэн, 1998. - 47 с.

36. Максимова Н.М., Маркина С.С., Костюкова H.H. Дифтерия. В кн. Покровский В.В., Онищенко Г.Г., Черкасский В.Л. Эволюция инфекционных болезней в России в XX веке. М.: Медицина, 2003. - С. 214-236.

37. Маркина С.С. Метод фаготипирования токсигенных коринебактерий дифтерии типа gravis и его применение в эпидемиологии дифтерийной инфекции: Автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 1971.

38. Маркина С.С., Тымчаковская И.М., Максимова Н.М., Сухорукова Н.Л. Эпидемический процесс дифтерийной инфекции в РСФСР в условиях внедрения эпидемиологического надзора. // Журн. Микробиол. 1989. -№ 5.- С. 38-40.

39. Маркина С.С., Максимова Н.М., Богатырева Э.Я. Заболеваемость дифтерией в России в 1992 г. // Здоровье населения и среда обитания. Ежемесячный информационный бюллетень. 1993. - № 1. - С. 3-8.

40. Маркина С.С., Максимова Н.М., Котова Е.А., Жилина Н.Я. Заболеваемость дифтерией в России в 1993-1995 г.г. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - № 4. - 8-10.

41. Маркина С.С., Максимова Н.М. Характеристика эпидемического процесса дифтерии в начале нового тысячелетия. // Матер. VIII Всерос. съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Москва, 2002. -Т.1.-С.81.

42. Маркина С.С., Максимова Н.М., Лазикова Г.Ф. Заболеваемость дифтерией в настоящее время. // Журн. Микробиол. 2005. - № 1.-31-37.

43. Маркина С.С., Максимова Н.М., Черкасова В.В., Кошкина Н.И. Эпидемиологическая ситуация по дифтерии в настоящее время. // Бюллетень «Вакцинация». 2006 - № 1 (43). - С. 7-11.

44. Мельников В.Г., Комбарова С.Ю., Борисова О.Ю., Воложанцев Н.В.,

45. Веревкин В.В., Волковой К.И.,| Мазурова И.К Характеристика нетоксигенных штаммов СогупеЬас1егшт сИрЫЪепае, несущих ген дифтерийного токсина // Журн. микробиол. 2004. - № 1. - С. 3-7.

46. Михайлович В.М., Заикин В.Л., Мазурова И.К. Использование метода ДНК-ДНК гибридизации для изучения штаммов СогупеЬаШпит сИрЫкепае. // Мол. ген. микробиол. вирусол. 194. - № 6. - С. 27-29.

47. Михайлович В.М. Разработка и адаптация молекулярно-биологических технологий для диагностики дифтерийной инфекции и изучения штаммов СогупеЬаМепит сИрЫкег1ае: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М, 1995.

48. Нарвская О.В., Мокроусов И.В. Применение полимеразной цепной реакции для диагностики дифтерии и изучения возбудителя. Пособие для врачей. Санкт-Петербург, 1995.

49. Мокроусов И.В., Нарвская О.В., Ценева Г.Я., Михайлов Н.В., Попель И.Р. Генетическое типирование штаммов Corynebacterium diphtheriae, с помощью полимеразной цепной реакции с универсальными праймерами. // Журн. Микробиол. 1996. - № 5. - С. 73-75.

50. Наумов JT.C. Зависимость активности дыхания от токсигенных и лизогенных свойств коринебактерий дифтерии: Дис. канд. мед. наук. -М, 1967.

51. Нисевич Н.И. Течение дифтерии в связи с типом дифтерии. // Педиатрия. 1947.-№3,-С. 44-51.

52. Определитель бактерий Берджи. ТII. М.: Мир., 1997. - 368 с.

53. Платонова Т.В. Клинико-иммунологические особенности дифтерии в период спорадической заболеваемости: Автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 1991.

54. Современная микробиология. Прокариоты: в 2-х томах. Т. 1. / Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. / Пер. с англ. под ред. А.И. Нетрусова, Т.С. Ильиной. М.: Мир., 2005. - 496 с.

55. Суслова B.C. Серологический типаж дифтерийных бактерий, выделенных на территории Советского Союза. // Журн. Микробиол. -1964-№9.-С. 13-16.

56. Сухорукова Н.Л. Эпидемиологическая оценка дифтерийной инфекции в условиях высокого уровня противодифтерийного иммунитета: Автореф. дис. докт. мед. наук. -М., 1978.

57. Тренин С.А. Гетерогенность дифтерийных коринебактерий. // Журн. Микробиол. 1986. - № 6. - С. 92-97.

58. Трофимова О.Д. Метод корицинотипирования и корициногенотипирования и его использование в эпидемиологическом анализе: Автореф. дис. канд. мед наук. М., 1986.

59. Фаворова Л.А., Сухорукова Н.Л., Иванова Л.М. Об эпидемиологическом надзоре. // Журн. Микробиол. 1981. - № 8. - 8-13.

60. Фаворова Л.А., Астафьева Н.В., Корженкова М.П., Черкасова В.В., Шмелева Е.А. Дифтерия. -М.: Медицина, 1988.-208 с.

61. Хрущева В.А., Меклер С.С. Микробиологическая характеристика возбудителя дифтерии в послевоенные годы. // В кн. Дифтерия. -Казань, 1964. С.45-48.

62. Черкасова В.В. Возбудитель дифтерии и его свойства. // В кн. Фаворова Л.А., Астафьева Н.В., Корженкова М.П., Черкасова В.В., Шмелева Е.А. Дифтерия. М.: Медицина, 1988. - С. 6 - 29.

63. Черкасский Б. Л. Руководство по общей эпидемиологии. М.: Медицина, 2001.-560 с.

64. Чистякова Г.Г., Филатов H.H., Корженкова М.П., Солодовников Ю.П., Лыткина И.Н., Максимова Н.М., Маркина С.С. Крупная эпидемия дифтерии в Москве в последние годы: закономерности развития. // Журн. Микробиол. -2001. № 1.-С. 18-21.

65. Чистякова Г.Г., Борисова О.Ю., Лыткина И.Н., Мазурова И.К., Комбарова С.Ю., Петрова М.С. Мельникова Ф.М., Скачкова В.Г. Особенности эпидемического процесса коклюшной инфекции в Москве. // Журн. Микробиол. -2005. № 5 - С. 18-21.

66. Шагинян И.А. Генетические маркеры в эпидемиологии бактериальных инфекций. // Журн. Микробиол. 1997. - № 4. - С. 54-59.

67. Шагинян И.А. Роль и место молекулярно-генетических методов в эпидемиологическом анализе внутрибольничных инфекций. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000. -Т.2. - №3. - 82-95.

68. Шагинян И.А. Идентификация и типирование патогенных бактерий: современные подходы. // Вестник РАМН. 2000. - № 1. - С. 22-28.

69. Шмелева Е.А. Биологическая функция клеточной стенки Corynebacterium diphtheriae и научно-производственная разработка иммуномодулирующего препарата: Автореф. дис. докт. биол. наук. М., 1991.

70. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Корженкова М.П. Некоторые показатели иммунитета при дифтерийной инфекции. // Эпидемиологи и вакцинопрофилактика. 2002.- № 3-4. - С. 31-35.

71. Шмелева Е.А., Макарова С.И., Батурина И.Г., Корженкова М.П., Чистякова Г.Г., Ксенофонтова М.К., Филатов Н.Н. Специфические антитела и их роль в формировании противодифтерийного иммунитета. // Журн. Микробиол. 2005. - № 1. - С. 38-43.

72. Эмироглоу Н. Заболеваемость дифтерией в Европейском регионе ВОЗ. Рекомендации ВОЗ по лечению и профилактике дифтерии. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. -Т. 3. - № 3. - С. 247-249.

73. ЕЦелкунов С.Н. Генетическая инженерия. Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2004. - 496 с.

74. Якубович Н.В., Земляная Н.Ю., Ермакова Л.М., Новикова И.С., Крылова М.Д., Янковский Н.К., Дебабов В.Г. Клонирование в Escherihia coli мутантного гена, кодирующего дифтерийный токсин. // Мол. ген. микробиол. вирусол. 1985. - № 1. - С. 17-22.

75. Ahtman M. Global epidemiology of meningococcal disease. In Meningococcal disease. Cartright F., ed. Chishester, England: John Wiley and® Sons, Ltd. 1995-P. 159-175.

76. Bodley J.W., Dunlop P.C. Diphthamid elongation factor 2: ADP ribosylation, purification and properties. I I Methods Enzymol. 1984. - Vol.106. - P. 378387.

77. Boyd J., Oza M.M., Murphy J.R. Molecular cloning and DNA sequence analysis of a tox iron-dependent regulatory element (dtxR) from C.diphtheriae. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87. - № 15. - P. 5968-5972.

78. Boyd J., Kimberly C.H., Murphy J.R. DNA sequence and characterization of DtxR alleles from C. diphtheriae PW 8 (-), 1030 (-) and C7hm 723 (-). // J. Bacteriol. 1992. - Vol. 174. - № 7. - P. 1268-1272.

79. Buck G.A, Cross R.E., Wong T.P., Loeta J., Groman N. DNA relationship among some tox-bearing corynebzcteriophages. // Infect. Immun.- 1985. Vol. 49. - № 3. - P. 679-684.

80. Cabiaux V., Mindell J., Collier R.J. Membrane translocation and channel-forming activities of diphtheria toxin are blocked by replacing isoleucine 364 with lysine. // Infect. Immune. 1993. - Vol. 61. - № 5. - P. 2200-2202.

81. Carniel E. The Yersinia high-pathogenicity island: an iron-uptake Iisland. //Microbes Infect. -2001. Vol. 3.-№ 7. - P. 561-569.

82. Cianciotto N.P., Groman N.B. Characterization of bacteriophages from tox-containing non-toxigenic isolates of Corynebacterium diphtheriae. II Microb. Pathog. 1997. - Vol. 22. - № 6. - P. 343-351.

83. Claridge III J.E. Impact of 16S tRNA gene sequence analysis for identification of bacteria on clinical microbiology and infectious diseases. // Clin. Microbiol. Rev. 2004 - Vol. 4. - № 4. - P. 840-862.

84. Collier R.J., Kandej J. Structure and activity of diphtheria toxin. I. Thiol-dependent dissociation of a fraction of toxin into enzymically active and inactive fragments. // J. Biol. Chem. 1971. - Vol. 246. - № 5. - P. 14961453.

85. Collier R.J. Diphtheria toxin: mode of action and structure. // Bacteriol. Rev. 1975. - Vol. 39. - № 1. - P. 54-85.

86. Coyle M.B., Groman N.B., Russell J.Q., Harnishch J.R., Rabin M., Holmes R. The molecular epidemiology of three biotypes of Corynebacterium diphtheriae in the Seatle outbreak, 1972-1982. // J. Infect. Dis. 1989. - Vol. 159.-№4.-670-679.

87. Cryz S.J., Russel L.M., Holmes R.A. Regulation of toxinogenesis in Corynebacterium diphtheriae: mutations in bacterial genome that alter the effect of iron on toxin productions. // J. Bacteriol. 1983. - Vol. 154. - № 1. -P. 245-252.

88. Damian M., Grimont F., Narvskaya O., Staut M., Surdeanu M., Cojocaru R., Mokrousov I., Diadonescu A., Andronescu C., Melnik L., Grimont P.A.D., Study of Corynebacterium diphtheriae strains isolated in

89. Romania, northwest Russia and republic of Moldova. // Res. Microbiol. -2002. Vol. 153 - №. 2. - P. 99-96.

90. Damian M., Ucein C.R., Luca B., Florea M., Diadonescu A. Molecularcomparison of non-toxigenic, toxigenic and converted Corynebacteriumth diphtheriae strains with respect to the Ins. Sites. // Abstr. 8 International

91. Meeting of the European Working Group on Diphtheria, Denmark,

92. Copenhagen, 16-18 June. 2004. - P. 40.

93. Dang Hong V., Le Thi L., Nguyen Ai T., Bach Thi On., Duong Hong O., Le Van B., Le Kum H., Le Van H., Dinh Dug K. // http//www.ncbi.hlm.nih.gov. 2003. - GeneBank AJ 596101.

94. Efstratiou A., Roure C., Members of the European Laboratory Working Group on Diphtheria. The European laboratory working group on diphtheria: a global microbiological network. // J. Infect. Dis. 2000. - Vol. 181. -Suppl. l.-P. 146-151.

95. Feil E. Population structure and ultra-species divergence of bacterial pathogens. // Ferns. Microbiol. Lett. 2003. - Vol. 222. - Suppl. 1. - P. 7.

96. Forbes K.J., Bruce K.D., Jordens J.Z., Ball A., Peninfiision T.H. Rapid method for DNA fingerprinting. // J. Gen. Microbiol. 1991. - Vol. 137. - № 9.-P. 2051-2058.

97. Funke G., von Geaeventiz A., Claridge III J.E., Bernard K.A. Clinical microbiology coryneform bacteria. // Clin. Microbial. Rev. 1997. - Vol. 10. - № l.-P. 125-129.

98. Funke G., Altwegg M., Frommelt L., vonGravenitz A. Emergence of related nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae biotypes mitis strains in Western Europe. // Emerging Infect. Dis. 1999. -Vol. 5. - № 3. - P. 983989.

99. Galazka A.M., Robertson S.E., Oblapenko G.P. Resurgence of Diphtheria. // Eur. J. Epidemiol. 1995. - Vol. 11. - P. 95-105.

100. Gandon S., MacRinnon M., Nee S., Read F. Imperfect vaccines and the evolution of the pathogen virulence. // Nature. 2001. - Vol. 414 (6865). -751-756.

101. Gandon S., MacRinnon M., Read A. Imperfect vaccination: some epidemiological and evolutionary consequences. // Proc. Biol. Sei. 2003. -Vol. 7. - № 270 (1520). - 1129-1136.

102. Gill D.M., Dinius L.L. Observations on the structure of diphtheria toxin. // J. Biol. Chem. 1971. - Vol. 246. - №. 5. - P.1485-1491.

103. Gill D.M., Pappenheimer A.M.J. Structure-activity relationships in diphtheria toxin. // J. Biol. Chem. 1971. - Vol. 246. - № 5. - 1492-1495.

104. Gill D.M., Uchida R.A., Singer R.A. Expression of the diphtheria toxin genes carried by integrated and non-integrated phage beta. // Virology. -1972. Vol.50. - № 3. - P. 664-668.

105. Glushkevich T.G., Nekrasova L.S., Zherebko N.N. The etiology ofAdiphtheria in the Ukraina. // Abstr. 6 International Meeting of the European Working Group on Diphtheria, 21-24 June, Brüssel, Belgium. 2000. - P. 37.

106. Gulber J., Huber-Schneiner C., Altwegg C. An outbreak of nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae infection among swiss drug users. // Clin. Infect. Dis. 1998. - Vol. 27. - № 5. - P. 1295-1298.

107. Graves L.M. Swaminathan B. Universal DNA isolation procedure. In diagnostic molecular molecular microbiology. Principles and applications. Prsing D.H., Smith T.F., Tennover F.C. White T.J., eds. Washington, ASM Press, 1993.-P. 573-583.

108. Greenfild L., Bjorn M.J., Horn G. Nucleotide sequence of the structure gene for diphtheria toxin carried by toxigenic corynebacteriophage beta. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983 - Vol. 80. - № 22. - P. 6853-6857.

109. Grimont F., Grimont P.A.D. Ribosomal acid gene restriction patterns as potential taxonomic tools. // Ann. Inst. Pasteur/Microbiol. 1986. - Vol. 137B.-P. 165-175.

110. Grimont F., Grimont P.A.D. Determination of RNA gene restriction patterns. // In Methods in molecular biology. Vol. 146.: Diagnostic bacteriology protocols. Howard J. and Whitcombe D.M., eds. Totowa NJ, Humana Press Inc., 1988.-P. 181-189.

111. Grimont P.A.D. Taxotron 2000 users manual. France, Paris: Institute Pasteur, 2000.- 197 pages.

112. Grimont P.A.D., Grimont F., Colin M., Ruckly C., Martin-Delautre S.iL

113. The Corynebacterium diphtheriae ribotype database project. // Abstr. 6 International Meeting of the European Working Group on Diphtheria, Brussel, Belgium, 21-24 June. 2000. - P. 55.

114. Grimont P.A.D., Grimont F., Efstratiou A., Zoysa A., Mazurova I., Ruckly C., Lejy-Collin M., Martin-Delautre S., Regnault B. International nomenclature for Corynebacterium diphtheriae ribotypes. // Res. Microbiol. -2004.-Vol. 155. -№3. -P. 162-166.

115. Groman N.B. The relation of bacteriophage to the change of Corynebacterium diphtheriae from avirulence to virulence. I I Science. 1953. -Vol. 117.-P. 297-299.

116. Groman N.B., Cianciotto N., Bjorn M., Rabin M. Detection and expression of DNA homologous to the toxin nontoxigenic isolates of

117. Corynebacterium diphtheriae. II Infect. Immun. 1983. - Vol. 42. - № 1. - P. 48-56.

118. Groman N. Conversion by corynephages and its role in the natural history of diphtheria. // J. Hyg. 1984. - Vol. 93. - № 3. - P. 405-412.

119. Groman N.B., Cianciotto N. A beta related corynebacteriophages which lack a tox allele that can acquire it by recombination with converting phage // Infect. Immun. 1985. - Vol. 49. - № 1. - P. 32-35.

120. Hacker J., Bllum-Ochers G., Muhldorfer I., Ischape H. Pathogenecity islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbial evolution. // Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 23. - № 23. - P. 1089-1097.

121. Hantke K. Iron and metal regulation in bactera. // Curr. Opin. Microbiol. 2001. - Vol. 4. - № 2. - P. 172-177.

122. Hentschel U., Hacker J. Pathogenicity islands: the tip of the iceberg. // Microbes and Infect. 2001. - Vol. 3. - P. 545-548.

123. Holmes R., Barksdale W. Comparative studies with tox and tox' corynebacteriophages. // J. Virol. 1970. - Vol. 5. - № 6. - P. 783-794.

124. Holmes R. Genetic aspects of toxinogenesis in bacteria. // In Microbiology. Schlessinger D., ed. Washington, ASM, 1975. P. 296-301.

125. Isenberg H.D. Clinical microbiology procedures handbook. -Washington, ASM Press, 2004.

126. Jacobs D. SAS/GRAPH software and numerical taxonomy. In Proceeding of the 15th annual Users Group International Conference. Carry, NC, SAS Institute. 1990.-P. 1413-1418.

127. Jansen R.J., vanEnbden J.D.A., Gpastia W., Schonls L.M. Identification of genes that are associated with DNA repeats in procaryots. // Mol. Microbiol. -2002. Vol. 43. - P. 1565-1575.

128. Joon K.O., Senzel L., Collier R.J., Finkelstein A. Translocation of the catalitic domain of diphtheria toxin across planar phospholipids billayers by its own T domain. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 84678470.

129. Kaper J.B., Hakcer J. Pathogenicity island and other mobile virulence elements. Washington, ASM, 1993.

130. Kourova N., Caro V., Weber C. Comparisson of the Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis isolates circulating in Sankt-Peterburgbetween 1998-2000 with Russian vaccine strains. // J. Clin. Microbiol. Vol. 41. - № 8. - P. 3709 - 3711.

131. Kunkle C.A., Schmitt M.P. Analysis of a DtxR-regulated iron transport and siderophorebiosynthesis gene cluster in Corynebacterium diphtheriae. II J. Bacteriol. 2005. - Vol. 187. - № 2. - P. 422-433.

132. Lai S., Efstratiou A. report on the Sixth international meeting on the European Working Group on Diphtheria, Brussels, Belgium. // Eurosurveilance, Mouthly. 2002. - Vol. 7. - № 1. - P. 7-12.

133. Lanzerein M., Falnes P.O., Sand O., Olsens S. Structure-Function relationship of the ion chanel formed by diphtheria toxin in Vero cell membranes. // J. Membr. Biol. 1997. - Vol. 156. - № 2. - P. 141-148.

134. Lefrensne G., Latrille E.F., Irlinger F., Grimont P.A.D. Repeatability and reproducibility of ribotyping and its computer interpretation. // Res. Microbiol.-2004.-Vol. 155.-№3.-P. 154-161.

135. Leong D., Murphy J.R. Characterization of the diphtheria tox transcript in Corynebacterium diphtheriae and Escherihia coli. II J. Bacteriooool. -1985. Vol. 163. - № 3. - P. 1114-1119.

136. Love J.F., Murphy J.R. Design and development of a novel genetic probe for the analysis of repressor-operator interactions. // J. Microbiol. Methods 2002. - Vol. 51. № 1. - P. 63-72.

137. Mazurova I.K., Melnikov V.G., Kombarova S.Yu., Borisova O.Yu. and others. Project INTAS 2001-2289 "Study of the role of nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae in the epidemiology of diphtheria. 2004.

138. Matsuda M.L., Barksdale L. Phage-directed synthesis of diphtherial toxin gene in non-toxigenic Corynebacterium diphtheriae. //Nature. 1966. -Vol.210 (5039).-P. 911-913.

139. Matsuda M.L., Barksdale L. System for the investigation of the bacteriophage-directed synthesis of diphtherial toxin. // J. Bacteriol. 1967. -Vol. 93.-P. 722-730.

140. Mattos-Guaraldi A.L., Formiga A.L., Camell T.C., Pereira G.A., Yirata R., Halperin M. Corynebacterium diphtheriae threats in cancer patients. // Rev. Argent. Microbiol. 2001. - Vol. 33. - № 2. - P. 96-100.

141. Mokrousov I., Narvskaya O., Limeshenko E., Vyazovaya A. Efficient discrimination within Corynebacterium diphtheriae clonal group by a noval macroarray-based method // J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol. 43. - № 4. - P. 662-668.

142. Mothershed E.A., Cassiday P.K., Pielson K., Mayer L.W., Popovic T. Development of a real-time PCR assay for rapid detection of the diphtheria toxin gene. // J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol. 40. - № 12. - P. 4713-4719.

143. Mullis K., Fallona F., Schart S., Saiki R., Horn G., Erich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction. // Gold Spring Harbor Symp. Quant. Brol. 1986. - Vol. 51 (Pt. 1). - P. 263273.

144. Murphy J.R., Pappenheimer A.M., Borms S.T. Synthesis of a tox-gene products in Escherichia coli extracts. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1974. -Vol. 71.-№ l.-P. 11-15.

145. Murphy J.R., Skiver Y., McBride G. Isolation and partial characterization of a corynebacteriophage p, tox operator constitutive-like mutant lysogen of Corynebacterium diphtheriae. II J. Virol. 1976. - Vol. 18. -№ l.-P. 235-244.

146. Nakao H., Mazurova I.K., Glushkevich T., Popovic T. Analysis of heterogeneity Corynebacterium diphtheriae toxin gene, tox, and its regulatoryelement, dtxR, by direct sequencing. // Res. Microbiol. 1997. - Vol. 148. -№ 1.-P. 45-54.

147. Nakao H., Popovic T. Development of a direct PCR assay for detection of the diphtheria toxin gene. // J. Clin. Microbiol. Vol. 35 № 7. - P. 16511655.

148. Neiladss J.B. Microbial envelope proteins related to iron. // Annu.Rev. Microbiol. 1982. - Vol. 36. - P285-309.

149. Neiladss J.B. Siderophores: structure and functions of microbial iron transport compounds. // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270. - № 45. - P. 26723-26726.

150. Van Ness B.G., Howard J.B., Bodley J.W. ADP-ribosylation of elongation factor 2 by diphtheria toxin. NMR spectra and proposed structure of ribosyl-diphthamide and its hydrolysis products. // J. Biol. Chem. 1980. -Vol. 225. - № 22. - P. 10710-10716.

151. Oh K.J., Scnzel L., Collier R.J., Finkerlshtein A. Translocation of the catalytic domain of diphtheria toxin gene across planar phospholipids bilayers by its own T domain. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - № 15.-P. 8467-8470.

152. Olive D.M., Bean P. Principles and application of methods for DNA-based typing of microbial organisms. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol. 37. -№6.-P. 1661-1669.

153. Oppenheimer N.J., Bodley J.W. Diphtheria toxin. Site and configuration of ADP-ribosylation of diphthamid in elongation factor 2. // J. Biol. Chem. 1981. - Vol. 256. - № 16. - P. 8579-8581.

154. Pallen M.J., Haj A.J., Puckey L.H., Efstratiou A. Polymerase chain reaction for screening clinical isolates of corynebacteria for the production of diphtheria toxin. // J. Clin. Pathology. 1994. - Vol. 47. - № 4. - P. 353-356.

155. Pappenheimer A.M., Uchida T., Harper A.A. An immunological study of the diphtheria toxin molecula. // Immunochemistry. 1972. - Vol. 9. - P. 891-906.

156. Pappenheimer A.M. Diphtheria toxin. // Annu. Rev. Biochem. 1977. -Vol. 46.-P. 69-94.

157. Pappenheimer A.M. The story of a toxic protein, 1888-1992. // Protein Sci. 1993. - Vol. 2. - №2. - P. 292-298.

158. Pappenheimer A.M., Murphy J. The study of the molecular epidemiology of diphtheria. // Lancet. 1983. - Vol. 2 (8356). - P. 923-926.

159. Peel M.M., Palmer G.G., Stacpoole A.M., Kerr T.G. Human lymphadenitis due to Corynebacterium pseudotuberculosis: report of ten cases from Australia and review. // Clin. Infect. Dis. 1997. - Vol. 24. - № 2. -P. 185-191.

160. Pohl E., Quix A., Must L.M., Holmes R.K., Hoi W.G. Comparisson of high resolution structures of the diphtheria toxin repressor in complex withcobalt and zinc at the cation-anion binding site. // Protein Sci. 1997. - Vol. 6.-№ 5.-P. 1114-1118.

161. Popovic T., Dopp C.A., Olsvik O., Kiehlbauch J.A. Ribotyping in molecular epidemiology. In Diagnostic molecular microbiology. Persing D.H., Smith T.F., Tenover F.C., White F.J. (eds). ASM, Washington, 1993. -P. 573-583.

162. Popovic T., Kim Ch., Ries J., Reeves M., Nakao H., Golaz A. Use of molecular subtyping to document long-term persistence of Corynebacterium diphtheriae in South Dakota. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol. 37. - № 4. -P. 1092-1099.

163. Popovic T., Mazurova I.K., Efstratiou A., Vuopio-Varkila J., Reeves M., Zoysa A., Glushkevich T., Grimont P. Molecular epidemiology of diphtheria. // J. Infect. Dis. 2000. - Vol. 181. - Suppl. 1. - P. S168-S177.

164. Quian Y., Lee J.H., Holmes R.K. Identification of DtxR-regulated operon that is essential for siderophore-depended iron uptake in Corynebacterium diphtheriae. II J. Bacteriol. 2002. - Vol. 184. - № 17. -4846-4856.

165. Rappuoli R., Michel J.L., Murphy J. Restriction endonuclease map of corynebacteriophage coctox+ isolated from the Park-Williams 8 strain of Corynebacterium diphtheriae. II J. Virology. 1983. - Vol. 45. - № 2. - 524530.

166. Rappuoli R., Ratti G. Physical map of the chromosomal region of Corynebacterium diphtheriae containing corynephage attachment sites attBl and attB2. // J. Bacteriol. 1984. - Vol. 158. -№ 1. - P. 325-330.

167. Rappuoli R., Perugini M., Enevold F. Molecular epidemiology of the 1984-1986 outbreak of diphtheria in Sweden. // N. Engl. J. Med. 1988. -Vol. 318. -№ l.-P. 12-14.

168. Rappuoli R., Gross R. Ait sites, tox gene and insertion elements as tools for the diagnosis and molecular epidemiology of Corynebacterium diphtheriae. II In Gene probes for Bacteria. Macaria A. (ed). San Diego, CA, Academic Press, 1990.- P.205-231.

169. Ratti G., Rappuoli R., Giannini G. The complete nucleotide sequence of the gene coding for diphtheria toxin in the corynebacteriophage omega (tox +) genome. //Nucleic Acids Res. 1983. - Vol. 11. - № 19. - P. 6589-6595.

170. Reacher M., Ramsay M., White J., Zoysa A., Efstratiou A., Mann G., MacKay A., Georg R. Non-toxigenic Corynebacterium diphtheriae an emerging pathogen in England and Wales? // Emerg. Infect. Dis. 2000. -Vol. 6.-№6.-P. 640-645.

171. Regnault B., Grimont F., Grimont PAD. Universal ribotyping method using a chemically labeled oligonucleotide prope mixture. // Res. Microbiol. -1997.-Vol. 148. -№ 8. P. 649-659.

172. Russel L.M., Holmes R.K. Initial characterization of the ferric iron transport system of Corynebacterium diphtheriae. // J. Bacteriol. 1983. -Vol. 155. -№3. -P. 1439-1442.

173. Russel L.M., Holmes R.K. Highly toxigenic but avirulent ParkWilliams 8 strain Corynebacterium diphtheriae does not produce siderophore. // Infect. Immun. 1985. - Vol. 47. - № 2. - P. 575-578.

174. Sanger F., Nicklen S., Coulsoen A.R. DNA sequencing and chain terminating inhibitors. // Proc. Natl. acad. Sci. USA. 1977. - Vol. 74. - № 12.-P. 5463-5467.

175. Saragea A., Maximescu P. Nouveal types phagoques dans le shema de lysotyple de C. diphtheriae. // Archives Romaines de patholgie Experimentale et de microbial. 1969. - Vol. 28. - P. 1053-1058.

176. Savelkoul P.H.M, Aarts H.J.M., Haas J., Dykshoorn L., Duim B., Otsen M., Rademarker W., Schoults L., Lentstra J.A. Amplified-fragment length polymorphism analysis: the state of art. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol. 37.-№ 10.-P. 1661-1669.

177. Seardic D., Corbel M.J. Testing for neutralizing potential of serum antibodies to tetanus and diphtheria toxin. // Lancet. 1992. - Vol. 340 (8821).-P. 337-338.

178. Selander R.K., Caugant D.A., Ochman H., Musser J.M., Gilmour M.N., Whittman T.S. Methods of multilocus enzyme electrophoresis for bacterial population genetic and systematic. // Applied and Environmental Microbiol. -1986-Vol. 55.-№ 5.-873-883.

179. Schiller Y., Groman N., Coyle M. Plasmid in Corynebacterium diphtheriae and diphtheroids mediating erytromicin resistance. // Antimicrob. Agents. Chemother. 1980. - Vol. 18. -№ 5. - P. 814-821.

180. Skogen V., Cherkasova V.V., Maksimova N.M., Marston Ch., Sjursen H., Reeves M., Olsvik 0., Popovic T. Molecular characterization of Corynebacterium diphtheriae isolates, Russia, 1957-1987. // Emerg. Inf. Dis.- 2002. Vol. 8. - № 5. - P. 125-128.

181. Spiering M.N., Ringe D., Murphy J.R., Marietta M.A. Metal stoichionary and functional studies of the diphtheria toxin repressor. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - Vol. 100. - № 7. - P. 3809-3813.

182. Swaminathan D., Matar G. Molecular typing methods. // In Diagnostic molecular microbial. Principles and application. Persing D.H., Smith T.F., Tenover F.C., White TJ. (eds). Washington, ASM, 1993, P. 26-50.

183. Swierczynski A., Ton-That H., Type III pilus of corynebacteria: pilus length is determined by the level of its major pilin subunit. // J. Bacteriol. -2006.-Vol. 188.-№ 17.-P. 6318-6325.

184. Tao X., Murphy J.R. Determination of the minimal essential nucleotide sequence for diphtheria tox repressor binding by in vitro affinity selection. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91. - № 20. - P. 9646-9650.

185. Todar K. Diphtheria. University of Wisconsin-Madison., 2002. (http//www.textbookofbacteriology.net).

186. Ton-That H., Schneewind O. Assambly of pili on the surface of Corynebacterium diphtheriae. II Mol. Microbiol. 2003. - Vol. 50. - № 4. -1429-1438.

187. Ton-That H., Marrafini L., Schneewind O. Sortases and pilin elements involved in pilus assembly of Corynebacterium diphtheriae. II Mol. Microbiol. 2004. - Vol. 53. - № 1. - P. 251-261.

188. Tyler K.D., Wang G., Tyler S.D., Jonson W.M. Factors affecting reliability and reproducibility of amplification-based DNA fingerprinting of representative bacterial pathogens. // J. Clin. Microbiol. 1997. - Vol. 35. -№2.-P. 339-346.

189. Uchida T., Kannei C., Yoneda M. Mutations in corynephage P that affect the yield of diphtheria toxin. // Virology. 1977. - Vol. 77. - № 2. - P. 876-879.

190. Versalovic J., Lipski J.R. Molecular detection and genotyping of pathogens: more accurate and rapid answers. // Trends Microbiol. 2002. -Vol. 10. - Suppl. 10.-P. 15-21.

191. Wang Z., Schmitt M.P., Holmes R.K. Characterization of mutations that inactivate the diphhthera toxin repressor gene (dtxR). II Infecti. Immun. -1994.-Vol. 62.-№5.-P. 1600-1608.

192. Welkos S., Holmes R.K. Regulation of toxinogenesis in Corynebacterium diphtheriae. I. Mutations in bacteriophage P that alter the effect of iron on toxin production. // J. Virology. 1981. - Vol. 37. - № 3. -P. 936-945.

193. Welsh J., McClelland M.F. Fingerprintig genomes using PCR with arbitrary primers. // Nucleic Acids Res. 1990. - Vol. 18. - № 24. - P. 72137218.

194. Weiss M.S., Dlanke S.R., Collier R.J., Eisenberg D. Structure of the isolated catalytic domain of diphtheria toxin. // Biochemistry. 1995. - Vol. 34.-№3. - P. 773-781.

195. Williams J.G.K., Hubelic A.R., LiVar K.J., Rafalski J.A., Tunsey S.V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers.//Nucleic Acids Res. 1990.-Vol. 18.-P. 6531-6535.

196. World Health Organization. Diphtheria epidemic in Europe: emergency response report on WHO meeting, St.-Petersburg, Russia, 5-7 July, 1993. Regional office for Europe and Foundation Marsel Merieux, 1994.

197. Yanagawa R., Honda E. Presence of pili in spesies of human and animal parasites and pathogens of the genes Corynebacterium. II Infect. Immun. 1976. - Vol. 13. - № 4. - P. 1293-1295.

198. Zaidi N., Konstantinou JL, Zervos M.D. The role of molecular biology and nucleic acid technology in the study of human infection and epidemiology. // Archives of Pathology and Laboratory Medicine. 2003. -Vol. 127.-№9.-P. 1098-1105.

199. Zasada A.A., Zaleska M., Podlasin R.B., Seferyska I. The first case of septicemia due to nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae in Poland: case report. // Ann. Clin. Microbiol. Antimicrob. 2005. - Vol. 4. - P. 8.

200. Zhang H.J., Zhang S.H., Zhang H. // http://www. ncbi.nlm.nih.gov/ GeneBank accession number AY 820132.

201. Zoysa A., Efstratiou A., Georg R.C., Vuopio-Varkila J., Jakhola M., Rikushin Y. Diphtheria and travel (letter). // Lancet. 1993. - Vol. 342 (8868).-P. 446.

202. Zoysa A., Efstratiou A., Hawkey P.H. Molecular characterization of diphtheria toxin repressor (dtxR) genes present in nontoxigenic

203. Corynebacterium diphtheriae strains isolated in the United Kingdom. // J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol. 43. - № 1. - P. 223-228.2261. Благодарности