Микробиологическая конверсия растительных отходов в гуминовые вещества тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Прутенская, Екатерина Анатольевна

• Прутенская, Екатерина Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Прутенская, Екатерина Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Деструкция лигноцеллюлозного материала;.

1.1.1 Общая характеристика лигноцеллюлозных субстратов.

1.1.1.1 Строение лигнина.

1.1.1.2 Строение целлюлозы.

1.1.2 Методы предобработки растительного сырья.

Г. 1.2.1 Химические методы предобработки.

1.1.2.2 Механическая обработка растительного материала.

1.1.2.3 Ультразвуковое воздействие.

1.1.3 Микробиологическаядеградация растительных материалов.

1.1.3.1 Биодеструкция целлюлозы.

1.1.3.2 Биодеструкция лигнина.

1.2 Основные закономерности гумифицирования растительного материала.

1.2.1 Общая характеристика гуминовых кислот.

1.2;2 Описание механизмов образования гумусовых кислот.

1.2.3 Технологические способы получения гуминовых кислот.

1.3. Анализ литературных данных.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Культуры микроорганизмов и условия их выращивания.

2.2. Методы выделения основных компонентов лигноцеллюлозных субстратов.

2.2.1. Выделение лигнина с 72%-ной серной кислотой в модификации Комарова.

2.2.2. Определение целлюлозы методом Кюршнера;.

2.2.3. Определение гидролизуемых Сахаров в растительном материале.

2.3 Оборудование и методика ультразвуковой обработки.

2.3.1 Устройство и работа ультразвуковой установки.

2.3.2 Методика ультразвуковой подготовки растительного материала.

2.4 Методика прессования микротаблеток.

2.4.1 Методика сборки и наполнения пресс-формы.

2.4.2 Процесс прессования.

2.5 Определение массовых валовых содержаний химических элементов методом рентгенофлуоресцентного анализа.

2.6 Определение массовой концентрации фенолов флуориметрическим методом.

2.6.1 Устранение мешающего влияния продуктов метаболизма.

2.6.2 Измерение массовой концентрации фенолов.

2.7 Определение удельной поверхности и пористости методом низкотемпературной адсорбцией азота.

2.8 Метод оценки биологической эффективности гуминовых веществ.

2.8:1 Характеристика сортов льна.

2.8.2 Характеристика гуминовых кислот.

2.8.2.1*Выделение гуминовых кислот из торфа.

2.8.2.2 Выделение и очистка гуминоподобных веществ из культуральной среды.

2.8.3 Метод определения ростстимулирующей активности гуминовых веществ.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Скрининг микроорганизмов, разрушающих лигноцеллюлозу.

3.1.1 Исследование свойств грибного изолята.

3.1.2 Исследование свойств бактериального изолята.

3.2 Оптимизация условий культивирования.

3.3 Оптимизация основного субстрата для биоконверсии.

1 3.4 ИК-фурье-спектроскопическое исследование лигнинов.

3.5 Исследование влияния ультразвукового воздействия на лигноцеллюлозный материал.

3.5.1 Выбор оптимальных условий проведения ультразвуковой обработки

3.5.1.1 Влияние интенсивности ультразвука.

3.5.1.2 Изучение влияния продолжительности обработки на состав шелухи семечек.

3. 5.2 ИК- Фурье исследование предобработанного ультразвуком субстрата

3.6 Биоконверсия растительного материала.

3.7 Определение удельной поверхности и пористости субстратов методом низкотемпературной адсорбцией азота.

3.8 Выделение и исследование свойств гуминовых кислот.

3.8.1 Спектральный анализ гуминовых веществ.

3.8.1.1 Спектрофотометрическое исследование.

3.8.1.2 ИК-спектроскопическое исследование гуминовых веществ.

3.8.2 Исследование биологической активности гуминовых кислот.

3.9 Разработка технологии получения комплексных препаратов гуминовой природы.

ВЫВОДЫ:.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробиологическая конверсия растительных отходов в гуминовые вещества»

Актуальность проблемы и общая характеристика работы. В настоящее время большое внимание уделяется проблеме биоконверсии и, в частности, биодеградации одного из самых устойчивых к химическому и микробиологическому разложению биополимера - лигнина. Большинство почвенных микроорганизмов способны изменять структуру данного полифенольного соединения. Они синтезируют мультиферментный комплекс лигнолитического действия, который принимает участие в процессе деструкции субстрата.

Разработка экологически чистых биотехнологических процессов обработки, биоконверсии и утилизации лигносодержащих материалов, способствовала интенсификации исследований механизма воздействия микроорганизмов на лигнин и роли их ферментов при его деградации. Результаты этих исследований дали возможность оценить роль микроорганизмов в процесс делигнификации и установить корреляцию* между эффективностью деградации лигнина, биосинтезом гуминовых кислот и особенностями механизма их образования.

Биотехнологические способы получения биопрепаратов содержащих гуминовые кислоты, основанные на жизнедеятельности микроорганизмов, являются наиболее перспективными по сравнению с химическими. Они могут обеспечить экологически безопасные процессы делигнификации и низкую себестоимость полученных продуктов [1,2]. Среди большого количества биопрепаратов, представленных на российском рынке, особый интерес представляют препараты гуминовой природы.

Одним из наиболее важных свойств гуминовых кислот является их физиологическая активность. В последнее время обнаружены антиоксидантные, антимутагенные, адаптогенные свойства гуминовых кислот[3,4]. Ранее неоднократно подчеркивалось разнообразие биологической активности гуминовых кислот разного происхождения (различных по составу, зольности, степени конденсированности) [5].

Известно, что в регуляции интенсивности процессов роста растений определяющую роль играет гормональная система. При этом ростстимули-рующая активность гуминовых кислот обусловлена их способностью активно воздействовать на гормональный статус проростков. Данные, приведенные в литературе [4,6], указывают на стойкое накопление гормонов цитоки-ниновой природы в предобработанных гуминовыми веществами растениях в сравнении с контролем, в то время как существенных изменений в уровне абсцизовой кислоты не было выявлено. При этом важно подчеркнуть, что имеются сведения о повышении содержания цитокининов в обработанных гуминовыми кислотами растениях, а также наличии этих гормонов в самом препарате. Особое место в спектре действия цитокининов занимает их способность повышать стресс-устойчивость растений.

В связи с этим весьма перспективными являются биотехнологические способы получения гуминовых веществ с заданными свойствами путем их биосинтеза микроорганизмами в более короткие сроки. Поэтому исследования гуминовых кислот и их биологической активности представляют собой задачу научной и практической значимости.

В настоящее время изучаются метаболические возможности Bacillus для биодеградации промышленных отходов (фенолов) и пестицидов, а также для производства полисахаридов и меланинов [7-9]. Изучение бацилл, выявление новых продуктов, которые можно получать с их помощью, все больше расширяет область применения этих микроорганизмов. В целом этот род очень перспективен для промышленных целей, так как бациллы - это в основном непатогенные, быстро растущие на недорогих средах микроорганизмы.

Целью настоящей данной работы было выделение и изучение морфо-лого-биохимических свойств штаммов микроорганизмов, способных к биоконверсии лигносодержащих субстратов и синтезу гуминовых кислот.

Для проведения исследований по деструкции лигносодержащих субстратов были поставлены и решались следующие задачи:

- произвести скрининг микроорганизмов и выделить штамм, наиболее полно воздействующий на лигносодержащие субстраты и способный синтезировать гуминовые кислоты;

- изучить деструкцию основных компонентов лигноцеллюлозного субстрата при культивировании изучаемого штамма;

- изучить возможность использования ультразвуковой предобработки субстрата в синтезе гуминовых кислот;

- исследовать ростстимулирующую активность синтезируемых гуминовых кислот в нормальных и стрессовых условиях;

- предложить схему получения гуминовых кислот в условиях in vitro.

Научная новизна.

Проведен скрининг микроорганизмов, осуществляющих биоконверсию лигноцеллюлозных субстратов. Осуществлен сравнительный анализ их основных морфологических, физиолого-биохимических свойств, субстратной специфичности. Выделен наиболее активный штамм, показавший в условиях in vitro способность синтезировать гуминовые вещества. На основании анализа секвенсов вариабельных участков 16 S рДНК установили, что изучаемый штамм микроорганизмов относится к виду Bacillus subtilis, с вероятностью 98%.

Установлено, что гуминовые вещества, синтезируемые микробиологическим путем, обладают такой же биологической активностью как гуминовые кислоты низинного торфа. Изучен процесс биодеструкции лигноцеллю-лозы растительного субстрата. Показано, что гуминовые кислоты образуются через стадию деметоксилирования лигнина.

Впервые проведены исследования по определению ростстимулирую-щей активности гуминовых веществ, синтезированных в условиях in vitro, при действии на семена льна сортов Новоторжский и Ленок. Установлено, что микробиологические гуминовые вещества обладают биологической активностью, как и гуминовые кислоты низинного торфа. Впервые выявлен положительный эффект действия синтезируемых веществ на семена льна, проявляющийся в стимуляции прорастания семян и повышении устойчивости предобработанных семян к холоду.

Проведенные исследования расширили представления об использовании микроорганизмов рода Bacillus (Bacillus subtilis) в биоконверсии лигно-содержащих субстратов и для синтеза гуминовых веществ.

Практическая значимость работы состоит в том, что показана ростсти-мулирующая активность синтезируемых гуминовых веществ в растениеводстве. Вещества увеличивают дружность всходов проростков льна и повышают образование их биомассы на 30%. Это очень важно' в стрессовых условиях: при резком изменении температуры в утреннее и ночное время.

Показано, что применение монокультуры в производстве гуминовых веществ позволяет получать гуминовые препараты с определенными свойствами.

Возможность микробиологического синтеза* гуминовых кислот позволит решить проблему утилизации отходов различных отраслей промышленности: деревообрабатывающей, гидролизной и других.

Использование микроорганизмов-продуцентов гуминовых веществ позволит сократить расходы угля и торфа в качестве сырья в производстве удобрений. Показана эффективность предобработки ультразвуком растительного сырья.

Разработана схема получения гуминовых кислот in vitro.

Разработан курс лекций и практических занятий по дисциплинам «Общая биотехнология» и «Основы биотехнологии» для специальностей 070100 - Биотехнология и 072000 - Стандартизация и сертификация в рамках учебного плана Тверского государственного технического университета.

Апробация работы.

Основные положения диссертации докладывались на следующих конференциях и конгрессах: 15-ый Международный конгресс «Chemical and Process Engineering CHISA 2002» (Прага, 2002), IX региональная областная научно-техническая конференция молодых ученых «Каргинские чтения»

Тверь, 2002), II Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2003), Всероссийская заочная конференция «Катализ и сорбция в биотехнологии, химии, химических технологиях и экологии» (Тверь, 2003), X региональная областная научно-техническая конференция молодых ученых «Каргинские чтения» (Тверь, 2003), Международная научно-практическая конференция «Вавиловские чтения- 2007» (Саратов, 2007).

Публикации.

По результатам опубликовано 8 печатных работ, в том числе, Д статья в изданиях центральной печати рекомендованных ВАК, получено свидетельство на полезную модель. Изобретение может быть использовано в промышленности при решении проблем, связанных с переработкой отходов.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста, состоит из введения, трех глав, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Библиография включает наименований 159, в том числе 27 иностранных источников. Диссертация иллюстрирована 9 таблицами, 38 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Прутенская, Екатерина Анатольевна

Выводы:

1. Проведен системный скрининг микроорганизмов, способных к биоконверсии растительных отходов, содержащих лигноцеллюлозу.

2. Установлено, что некоторые из них осуществляют трансформацию лигноцелшолозы в гуминовые вещества.

3. В результате скрининга выделен активный штамм бактерий, осуществляющий деструкцию растительного субстрата.

4. Изучены морфолого-биохимические свойства выделенного бактериального штамма. На основании анализа 16S РНК этот штамм идентифицирован как Bacillus subtilis и депонирован во Всероссийской коллекции, промышленных микроорганизмов РАН, как Bacillus subtilis PrEA под номером В-10040.

5. Определены оптимальные параметры роста Bacillus subtilis PrEA на субстратах, содержащих лигноцеллюлозу.

6. Разработан способ предобработки растительного сырья, повышающий эффективность синтеза гуминовых кислот в условиях in vitro. Способ основан на ультразвуковой деструкции растительного материала, в результате чего увеличивается его биодоступность. Подобраны оптимальные условия ультразвуковой обработки лигноцеллюлозного материала в водной среде: интенсивность звуковых колебаний 368 Вт/см2, продолжительность - 15минут. При выбранных параметрах деструкция целлюлозы составляет 6,4 % от а.с.в., а лигнина до 12,8% от а.с.в.

7. При проведении ферментации на предобработанном ультразвуком сырье возрастает количество гуминовых веществ с 0,6 до 1,3 г/л.

8. На основании сравнительных анализов с использованием физико-химических методов УФ-, ИК-Фурье спектроскопии показано; что по функциональному составу синтезируемые гуминовые вещества близки к гуминовым кислотам низинного торфа.

9. Выявлено, что гуминовые вещества, синтезированные в условиях in vitro, являются стимуляторами роста семян льна при нормальных условиях (20 ± 2°С) и в стрессовых условиях (4° ±1С), что отражается на увеличении массы и дружности всходов. 10. Разработана и представлена блок-схема получения гуминовых веществ в условиях in vitro микробиологическим путем.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Прутенская, Екатерина Анатольевна, 2008 год

1. В;П. Саловарова, Ю.П. Козлов Эколого-биотехнологичекие основы? конверсии растительных субстратов:-М:РУДН.г200 Г.-331с.

2. Термическая устойчивость торфяных гуминовых кислот /НШ;Чухарева^ Л.В;Шишмина; Г.Маслов; В;ШСтригуцкий // Химия растительного сырья- 2003;-№2:-О..49-54Г

3. Скорбина Е.А. Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланинсодержащих препаратов/ Е.АСкорбина //Диссертация канд.биол. наук.-Ставрополь.г2006.-29с.

4. Харвуд К. Бациллы: Генетика и биотехнология/ К." Харвуд.-М::Мир.- 199Z-531C.

5. Превращения лигнина древесины осины под действием озона / А. Аутлов; Н.А. Мамлеева, Н.Г.Базарнова, А.Н. Пряхин, В.В. Лунин // Химия растительного сырья.- 2004.- №3. -С.87-93.

6. Репникова! Е.А. Исследование структуры лигнинов / Е.А. Репникова, Л.А. Алешина, В: Глазкова^ Д.А. Фофанов // Химия«растительного сырья.- 20041- №1» -С. 5-9:

7. Карманов- A.IT. Лигнин. Структурная организация и самоорганизация / А.П.Карманов // Химия растительного сырья. -1999.-№1.-С.65-74.

8. Сарканен К.В. Лигнины / К.В.Сарканен, К.Х.Людвиг.- М.:Лесная про- мышленность. -1975. -632с.

9. Богомолов Б.Д. Химия древесины и основы химии высокомолекулярных соединений /Б.Д.Богомолов-М.-1973.- 400с.

10. Синицын АЛ. Биоконверсия* лигноцеллюлозных материалов/ А.П. Си- ницын.- М.:Наука.-1995.-105с.

11. Грушников О.П. Достижения и проблемы химии! лигнина/ 0;П. Груш- ников, В.В. Елкин:- М.:Наука.-1973.- 296с.

12. Химическое строение лигнинов, полученных различными способами щелочной делигнификации древесины сосны/ Л. В.Каницкая, И. А.Козлов, В. А.Бабкин, А. Н.Заказов, Э; Н. Дерягина // Химия в интересах устойчивого развития. -1999; - Т. 7. - 49-56.

13. Кузнецов А.Е. Научные основы экобиотехнологии /А.Е.Кузнецов, Н.Б.Градова.-М.:Мир;-2006.-504с.

14. Кадималиев Д.А. Влияние прессования на свойства лигнина древесины сосны, обработанной грибом Panus tigrinus/ Д.А.Кадималиев, В.В.Ревин, В.В.Шутова//Химия растительного сырья.- 2001.- №3.- С П 1-118.

15. Использование реактора с интенсивным массообменном для ферментативного гидролиза целлюлозосодержащих материалов /А.В.Гусаков, А.П.Синицын, О.В.Протас, И.Ю. Давыдкин, В.Ю.Давыдкин // Прикладная биохимия и микробиология.- 1995.-Т.31.- №3.- 361-366.

16. Экологическая биотехнолгия / под ред.К.Ф. Форстер.-Л.: Химия, 1990.- 384с.

17. Катализируемый паровзрывной гидролиз целлолигнинового остатка древесины листвинницы / Н.Н. Титова, В.А.Бабкин, М.М.Чемерис //Химия растительного сырья.- 2002. - №2. - 53-56.

18. Поведение компонентов древесины при ее термокаталитической активации в условиях взрывного автогидролиза / И.В.Кротова, А.А.Ефремов, А.Кузнецова, Б.Н. Кузнецов // Химия растительного сырья.-№1.-1997.-с.24-27.

19. Saddler J.N., Brownell Н.Н., Clermont ЬФ.Р., Levitin N.// Biotechnol. Bioengng., 1982, V.24, 6, p. 1389-1402.

20. Mayaudon J., Simonar P. Etude de la decomposition de la matiere organigue dans le sol, au moyen de carbone radioactive / J.Mayaudon, P.Simonar // V Decomposition de cellulose et de Hgnine.-1959.-M. 11.-№2.

21. Bioconversion of rice straw into feed / S.S. Kahlon, K.Neeraj, K.L.Karla, H.S.Grewal// J.Res. Punjab Ag.Univ.-1990.- №3.- P. 447-456.

22. Madan Patrabansh S. The microbial conversion of different agricultural residues and its biological efficiency //Acta biotechnol:-1995.-№ 1.- P. 131-135.

23. Химия и ультразвук. Пер. с англ. / Под ред. Т. Мейсона. М.:, 1993.-191 с.

24. Hunike R.L. Indastrial applications of high power ultrasound for chemical reactions // Ultrasonics. -1990. - Vol. 28. - P . 291-294.

25. Margulis M.A. Sonochemistry and Cavitation. - Luxemburg: Gordon and Breach Science Publishers. 1995. - 543 с

26. Bremner D. Historical introduction to sonochemistry // Advances in Sono- chemistry. - 1990. -Vol. 1. - P . 1-37.

27. Кузнецов Б.Н. Каталитическая химия растительной биомассы / Б.Н.Кузнецов //Соровский образовательный журнал.- 1996.-№12. -С.47-55.

28. Галочкин А.И. Сульфоалкилированные лигноуглеводные материалы. 1.Сульфометелирование древесины березы / А.И.Галочкин, И.В.Ананьина, Н.В. Ильина // Химия растительного сырья.- 2001.- №1. -С.59-68.

29. Ефремов А.А. Комплексная схема переработки отходов растительного сырья / А.А. Ефремов, Г.Г. Первышина // Химия растительного сырья.-2001.-№4.-С. 123-124.

30. Изучение органосольвентной варки целлюлозы в присутствии различных катализаторов /Б.Н.Кузнецов, А.А.Ефремов, В.Г.Данилов, А.Кузнецова, И.В.Кротова, Г.Г.Первышина// Химия растительного сырья.-1999.- 85-90.

31. Титова О.И. Модифицирование полимеров в стенке растительной клетки смесью трифторуксуснойи азотной кислот. -Барнаул.-2006.

32. Гоготов А.Ф.О катализе процесса щелочного нитробензольного окисления лигнина / А.Ф. Гоготов, Т.И.Маковская, В;А. Бабкин // Приклад, химии. -1996-. Т. 69.-№ 5. -С. 870.

33. Медведева Е. Н. Пероксид водорода - перспективный реагент для создания экологически чистой технологии производства целлюлозы/ Е. Н.Медведева, В. В.Вершаль, В. А. Бабкин // Химия в интересах устойчивого развития. -1996. - Т. 4. - 343-354.

34. Востриковг СВ. Влияние физико-химических методов обработки водно- спиртовых смесей и дубовой древесины на эффективность получения компонентов виски / В.Востриков, И.В.Новикова //Известия* вузов. Пищевая технология.-2002.-№4.-С.26-28.

35. Резников В.М. Превращение лигнина при окислении пероксидом водорода и молекулярным кислородом / В.М. Резников // Химия древесины,-1991.-№2.-С.З-11.

36. Демин В.А. Реакционная способность лигнина, и проблемы его окислительной деструкции пероксирадикалами /В.А.Демин, В.В.Шерешовец, Ю.Б.Монаков // Успехи химии.-1999.-№11.-С. 1029-1050.

37. О механизме окислительного расщепления' углерод-углеродной связи лигнинов в щелочной среде/ В.Е.Тарабанько, И.И.Ильина; Д.В.Петухов, Е.П.Первыпшна// Химия растительного сырья.-1997.-№3.- 8-12.

38. Гравитис Я.А. Теоретические т прикладные аспекты метода взрывного автогидролиза растительной биомассы/ Я.А. Гравитис // Химия древе-сины.-1987.-№5.-С.З-21.

39. Трофимова-Н.Н. Катализируемый паровзрывной гидролиз целлолигни- нового остатка древесины листвиницы/ Н.Н. Трофимова, В.А.Бабкин, М.М. Чемерис// Химия растительного сырья.- 2002.- №2. -С.53-56.

40. Кузнецова А. Разработка новых экологически безопасных процессов получения целлюлозы/ А.Кузнецова, ВХ.Данилов // Вестник КрасГУ. Органическая химия.-2003.-С.2-М.

41. Акопян В.Б. Ультразвук в производстве пищевых продуктов / В.Б. Ако- пян//Пищевая промышленность. 2003. № 4. 68-69.

42. Акопян В.Б., Ершов Ю. А. Основы взаимодействия ультразвука с биологическими объектами / В.Б. Акопян, Ю. А. Ершов. М.: МГТУ им. Н. Э. Баумана. -2005.- 30-36.

43. Элышнер И.Е. Ультразвук. Физикохимическое и биологическое действие / И.Е. Элышнер - М.: Госиздат физ.-мат. литературы, 1963. - 420 с.

44. Rao V.S. Influence of ultrasound on extraction of tannins from deoiled salseed cake / V.S.Rao, K.M. Swamy, L.L. Narayana// ultrasonics.-1984.-V.22.-№l.-P.29-32.

45. Янковский Б.А. О действии ультразвука на древесину/ Б.А.Янковский, Л.А.Пернтина // Химия древесины.-1969.-Вып.З.-С.57-62.

46. Левинсон М.С. О реакциях химического воздействия ультразвука на воду и растворенные в ней вещества //О химическом и биологическом действии ультразвука. Красноярск.-1962.-С.5-74.

47. Белодубровский Р.Б. Влияние ультразвука на образование ароматических мономеров при щелочной деструкции лигносульфонатов/ Р.Б.Белодубровский, И.Ф.Туманов, А.Сапотницкий // Известия вузов. Лесной журнал.-1968.-№5.-С. 135-138.

48. Киприанов А.И. Инициирование химических реакций в жидкофазной среде / А.И.Киприанов //Новые достижения' в> химии и химической технологии растительного сырья: материалы Всероссийского семинара 28-29 марта 2002.- Барнаул.-2002.- 64-67.

49. Влияние ультразвука на лигнин древесины дуба /Г.Ф.Антонова, А.В.Баженов, Т.Н.Вараксина, Н.Т.Коновалов, Н.Н.Коновалова, В.В.Стасова//Химия растительного сырья.- 2006.- №3.-С. 5-16.

50. Першина Л.А. Свойства лигнина, выделенного с помощью ультразвуко- - вых колебаний// Изв. Томского политехнического института.-1969.-Т.69.-С.160-163.

51. Тюрина СБ. Разработка технологии комбинированной стерилизации жидких и пюреообразных пищевых продуктов с использованием тепловой и ультразвуковой энергии. Автореферат на. соискание ученой степени кандидата технических наук. - М.- 2002.- 12-16.

52. Беленькая М.В. Ультразвук в биологии/ М.В.Беленькая, Л.К.Бжеленко, ЛА.Егорова.-М.:Наука.-1964.-182с.

53. Яковчук А.С. Физиологические основы стимулирующего действия ультразвука на семена / А.С.Яковчук, М.Г.Ромашкин, Н.И.Яцун// Ультразвук и его применение для предпосевной обработки семян.- Краснодар.-1969.-С.5-45.

54. Махова Е.Г. Биодеструкция лиственничной одубины грибами TRICHODERMA ASPERELLUM, TRICHODERMA KONINGI / Е.Г. Махова, Т.В. Рязанова, Н.А. Чупрова // Химия растительного сырья.- 2001.- №4.-С. 69-72.

55. Кастельянос О. Оптимизация условий гидролиза целлюлозосодержащих материалов ферментным препаратом PENICILLIUM VERRUCULOSUM / О.Кастельянос, А.П. Синицын, Е.Ю. Власенко // Прикладная биохимия и микробиология.- 1995.-Т.31.-№3, 275-282.

56. Разложение лигноуглеводного субстрата почвенными грибами - продуцентами, лакказы и целлобиозодегидрогеназы /Л.Г.Васильченко, К.Н.Карапетян, Ч.Ячкова, Е.С. Зернова, М.Л.Рабинович // Прикладная биохимия и микробиология.- 2004.- Т.40.- №1.- 51-56.

57. Ахмедова З.Р. Целлюлитические, ксиланолитические и лигнолитические ферменты гриба/ З.Р. Ахмедова// Прикладная биохимия и микробиология.- 2003.- Т.39.- №1.-С.5-23.

58. Коломиец Э.И. Антигрибная и антибактериальная активность актиноми- цетов, разлагающих лигноцеллюлозу /Э.И.Коломиец, Н.А.Здор, Т.В'.Романовская, А.Г.Лобанок, И.А. Босякова //Прикладная биохимия и микробиология.- 1994.-Т.30.- № 4-5. - 644-649.

59. Annele I.Hatakka. Cultivation of wood-rotting fungi on agricultural lignocel- lulosic materials for the production of crude protein / Annele I.Hatakka, Tuula I.Pirhonen//Agricultural wastes.-1985.- №12 .-P. 81-97.

60. Рабинович М.Л. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Кн.1. Древесина и разрушающие ее грибы/ М.Л.Рабинович, А.В.Болобова, В.И.Кондращенко.- М.:Наука.-2001.-264с.

61. Бабицкая В.Г. Грибы-продуценты физиологически активных веществ на лигноцеллюлозе: биология и культивирование: Дис. докт.биол.наук. Минск, Ин-т микробиологии АН БССР,-1991.- 394с.

62. Copper induction of laccase isoenzyme in the lignolytic fungus Pleurotus oastreatus / Palmieri Gianna, Giardina Paola, Bianco Carmen, Fontanella Bianca, Sanna Giovanni// Appl: And Environ. Microbiol.-2000.-Vol.6.-№3.-P.920-924.

63. Разложение природных ароматических структур и ксенобиотиков грибами / М.Л.Рабинович, А.В.Болобова, Л.Г.Васильченко // Прикладная биохимия и микробиология.- 2004.- Т.40.- №1.-С.5-23.

64. Chyi, Y.T., Dague, R.R. Effects of particulates size in anaerobic acidogenesis using cellulose as a sole carbon source. Wat. Env. Fed. Proceedings of the 65th Annual Conference & Exposition. 1992. P. 191-202.

65. Яковлев В.И. Технология микробиологического синтеза / В.И.Яковлев. - Ленинград: Химия.-1987.- 272с.

66. Скрябин Г.К. Использование микроорганизмов в органическом синтезе / Г.К.Скрябин, Л.А.Головлева.- М.: Наука.- 1976.- 336с.

67. Влияние модификации древесины на потребление лигнина и синтез лиг- политических ферментов грибов Panus (Lentinus) tigrinus /Д.А.Кадималиев, В.В.Ревин, Н.А.Атыкян, В.Д.Самуилов // Прикладная биохимия и микробиология.- 2003.- Т.39.- №5.- 555-560.

68. Теппер Е.З. Микроорганизмы рода Nocardia и разложение гумуса / Е.З. Теппер,- М.: Наука.-1976.- 199с.

69. Malarczyk Е. Transformation of ferulic acid' by soil bacteria Nocardia provides various valuable phenolic compounds / E.Malarczyk, J.Rogalski, A.Leonowicz// Actabiotechnol.-1994.-№ 3.-P. 235-241.

70. Conversion of native lignin to a highly phenolic functional polymer and its separation from lignocellulosics / M.Funaoka, M.Matsubara, N.Seki, S.Fukatsu //Biotechnol. and Bioeng.-1995. - 46, N 6. - P. 545-552.

71. Решетникова И.А. Воздействие ферментного препарата пероксидазы гриба Phellinus igniarius на лигноуглвводный комплекс березовой древесины // И.А.Решетникова, В.В. Елкин, И.Г.Газарян// Прикладная биохимия и микробиология.-1995.-Т.31.- №2.-С.204-206.

72. Cullen D. Enzymology and molecular biology of lignin degration / D.Cullen, P.J. Kersten// The Mycota Ш. Biochemistry and Molecular biology.-Berlin., 1996.-Ch.l3.-P.295-304.

73. Degration/solubization of Chinese lignite by Penicillium sp. P6/ H.L.Yuan., J.S. Wsng, W.X.Chen // Прикладная биохимия и микробиология.-2006.-T.42.-№l.-C.59-62.

74. Каретникова Е.А. Утилизация водорастворимых фенольных соединений, образующихся в процессе пиролиза лигнина штаммом Penicillium tardum Н-2 //Прикладная биохимия и микробиология.-2006.-Т.42,- №1.-С.55-58.

75. Использование гриба Panus tigrinus для производства прессованных материалов из отходов хлопчатника / Д.А.Кадималиев, В.В.Ревин, В.В.Шутова, В.Д. Самуилов // Прикладная биохимия и микробиология.-2004.-Т.40.-Ш.-С.57-61!

76. Hernandez-Perez G. Degradation of lignosulfonated compounds by strepto- myces viridosporus: effect of the culture medium and. the nature of the ligno-sulfonate molecule / G.Hernandez-Perez, G.Goma, I.L. Rols// Woter Res.-1999.-Vol.33.-№8,- P.18-37.

77. Кодина Л.А. Биодеградация лигнина/ Л.А. Кодина, Г.В. Александрова // Успехи микробиологии.-1990.-№24.- 156-189.

78. Роль ионов двухвалентного марганца в функционировании лигнолитиче- ских ферментов базидиального гриба Trametes pubescens/ О.В. Никитина, СВ. Шлеев, Е.СГоршина, Т.В.Русинова, А.И.Ярополов //Вестн.Моск.Ун-та. Сер.2.Химия.- 2005.-Т.46.-№4.-С267-273.

79. Желтая лакказа гриба Pleurotus ostreatus Dl: очистка и характеристика/ Н.Н.Позднякова, О.В.Турковская, Е.Н.Юдина, Я.Родакевич-Новак // Прикладная биохимия и микробиология.-2006.-Т.42.-№1.- 63-69.

80. Туев Н.А. Микробиологические процессы гумусообразования/ Н.А. Ту- ев. -М.: Агропромиздат.-1982.-239с.

81. Substrate and.dioxygen binding to the endospore coat laccase from Bacillus subtilis/?. J. Enguita, D. Marcal, L. O. Martins, R. Grenha, A. O. Henriques, P. F. Lindley, M. A. Carrondo//Biological chemistry.-№4.-2008.-P.-3-l8.

82. Горовая А.И.Влияние гумусовых соединений и пестицидов на митотиче- ский цикл корней/ А.И.Горовая' // Клеточный цикл растений.-Киев.-1983.-c.95.

83. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты-почв и общая теория гумификации/ Д.С. Орлов. - М.: Изд-во МГУ.-1990;- 325с.

84. Кононова М.М. Органическое вещество целинных w освоенных почв, /ред. Кононова*М.М.-М.: Наука.- 1972.-278с.

85. Федотов Г.Н. Гумус и коллоидная составляющая почв: факты и гипотезы /Г.Н.Федотов // Экологические системы и приборы.-№5.-2007.-С.5-8.

86. С-ЯМР-спктроскопия гуминовых кислот различного происхождения /Т.Е.Федорова, Д.Ф.Кушнарев, Н.В.Вакушевич, А.Г.Пройдаков, Б.Бямбагар; Г.А.Калабин // Химия почв.-№10.-2003.-с. 1213-1217.

87. Иванов А.А. Влияние механохимической активации на состав и.свойства гуминовых кислот торфов /А.А.Иванов, Н.В.Юдина, О.И.Ломоносовский // Известия Томского политехнического университета.-2006.-Т.309.-№5.-С.73-77.

88. Phase transitions and hydroscopic growth of humic acid1 and mixed humic acid and ammonium sulphate aerosols /C.L.Badger, P.T. Griffiths, I. Geordge, C.F.Braban, J.P.D. Abbatt, R.A.Co*x//Geophysical Research .-Vol.-7.-2005.-P.1669

89. Хаббибулина Ф.М. Видовой состав и структура микромицетов болотно- подзолистых почв / Ф.М. Хаббибулина // Болота и заболоченные леса в свете устойчивого природопользования. Материалы совещания. М.: ГЕОС, 1999. 154-156.-

90. Simonart P. Microorganisms et humus / P. Simonart // Ann. Inst. Pasteur. - 1964.-T. 107.-P.7.

91. Манская СМ., Кодина Л.А. Ароматические структуры лигнина и их роль в образовании гуминовых кислот / М. Манская, Л.А. Кодина //Почвоведение .-1968.- №8. -С. 8-10.

92. Tao Li. Biocatalytic synthesis of vanillin/ Tao Li, John P.N. Rosazza //App. And Environmental Microbiology.- 2000.-Vol. 66.-№2.-P.684-687.

93. Дин Р.Процессы распада в клетке / перевод М.Д.Гроздовой.- М.:Мир.- 1981.-120С.

94. Sack U., Hoffichter М., Fritsche W. Degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by manganese peroxidase of Nematoloma frowardii//FEMS Microbiology Letters. 1997. Vol. 152. P. 227-234

95. Пат. 2042422Российская Федерация^ МПК B01J8/16. Способ получения гуминовых кислот и устройство для его осуществления; /А.И.Шульгин, О.В;Скворцов, А.В.Кудин - № 5007042/05, заявл. 39.10.1991, опубл. 27.08Л997,Бюл.№6.

96. Пат. 2219147 Российская Федерация, МПК C05F11/02 . Способ получения комплексного минерального удобрения/К.Е.Ковалев, ВВ. Папаяна-ки - №20002106546/13, заявл. 1403;2002, опубл. 20.12.2003; Бюл. №7.

98. Пат. 2205166 Российская Федерация, МПК C05F11/02. Способ получения солей гуминовых кислот - №2001134139/04, заявл. 19.12.2001, опубл. 27.05.2003, Бюл. №7.

99. Гречищева Н.Ю. Взаимодействие гумусовых кислот с полиядерными ароматическими углеводородами: химические и токсилогические аспекты/Н.Ю. Гречищева//Автореф. дис... канд.хим. наук.-М.-2000.-29с.

100. Получение азотсодержащих удобрений на основе древесины / Л.А. Пер- шина, МВ.Ефанов, А.В.Забелина, А.Г.Клепиков // Химия растительного сырья.- 2000.- №4. -С.65-71.

101. Тюрина Ж.П. Вторичное растительное сырье и способы улучшения его качеств/ Ж.П.Тюрина, А.В.Альман, А.А.Десятник.- Кишинев: Штинца. -1989.-С. 1-15.

102. Пат. 2144014 Российская Федерация, МПК C05F11/00 . Органомине- ральное удобрение / А.Н.Сутурин, СМ. Бойко, Н.Н. Куликова, А.И.Верхозина, А.В. Кулагин - № 95116497/13, заявл. 22.09.1995, опубл. 10.01.2000, Бюл. №7.

103. Пат. 2198152 Российская Федерация, МПК C05F 3/00 . Способ получения гранулированного органоминерального удобрения / П.И. Гриднев, Т.Н. Колесникова, В.А.Денисов - № 2000115433/13, заявл. 14.06.2000, опубл. 10.02.2003, Бюл. №7.

104. Пат. 2305505 Российская Федерация, Способ переработки березовой коры /Г.В. Сироткин, А.Р.Мифтахов, Ю.А. Кульгашов, Н.Н.Махова, М.В.Толина.- № 2006137030/15, заявл. 19.10.2006, опубл. 10.09.2007, Бюл. №25.- 18с.

105. Мосичев М.С. Общая технология микробиологических производств/ М.С. Мосичев, А.А.Складнев, В.Б.Котов.- М.: Легкая и пищевая промышленность.-1982.- 264с.

106. Characterizationof a family 11 xylanase from Bacillus subtillis B230 used for paper bleaching / A. J. Oakley, T. Heinrich, С A. Thompson, M. C. J. Wilce // Biological Crystallography.- Vol.- 59.- № 4.- 2003.- P. 627-636.

107. Pat. 5,859,236 United States, process for preparation of lignin and microcellu- lose/leinardBurkart/- № 808,654, filed 28.02:1997, date of patent 12.01.1999. -6p.

108. Grethelin^H.E. The effect of pore size distribution on the rate of enzymatic hydrolysis of cellulosic substrates/ H.E.Grethelin //Biotechnology.-Vol3.-1985.-P.T55-160.

109. Карклинь В.Б. Инфракрасная спектроскопия древесины и ее основных компонентов/ В.Б. Карклинь, Эриныш П.П.// Химия древесины.- 1971.-№7.-С. 83-93.

110. Пилипчук Ю.С. Применение молекулярной спектроскопии- в химии1 Ю.С.Пилипчук, Р.З.Пен< А.В.Филькенштейн.-М.:Наука.-1966.-137с.

111. Орлов. Д.С Инфракрасные спектры поглощения гуминовых кислот/ Д.С.Орлов, Щ.Н.Розанова, Г.Матюхина' //Почвоведение.-1962.-№1.-С.17-21.

112. Бойко B.nt Влияние биологически активных.препаратов «Ридрогумат» и «Оксигумат» на иммунитет и обменные процессы животных / В.П. Бойко, Г.В: Наумова, Т.Ф.Овчинникова //Природопользование.- 1998.-Вып.4.- 82.-86.