Миграция нетрофических компонентов по пищевой цепи пчелы медоносной Apis Mellifera Mellifera L. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.05, кандидат биологических наук Туктарова, Юлия Варисовна

• Туктарова, Юлия Варисовна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Туктарова, Юлия Варисовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Трофические цепи, значение веществ, транспортируемых по пищевым цепям

пчелы медоносной

1.2.1 Характеристика состояния окружающей природной среды в Республике Башкортостан

1.2.2 Тяжелые металлы, характеристика, источники распространения

1.2.3 Накопление тяжелых металлов в почве

1.2.4 Влияние тяжелых металлов на живые организмы

1.2.5 Влияние тяжелых металлов на пчел и продукты пчеловодства

1.3.1 Характеристика фитогормонов, их роль в природе

1.3.1.1 Ауксины

1.3.1.2 Абсцизовая кислота

1.3.1.3 Цитокинины

1.3.2 Применение фитогормонов в пчеловодстве 24 1.4.1 .Аскосфероз пчел, пути распространения болезни 30 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Методика отбора проб почв

2.2 Методика отбора проб растений для определения тяжелых металлов

2.3 Методика отбора проб пчел 37 2.4. Методика отбора проб нектара, меда, прополиса, пыльцы

2.5 Методика приготовления препаратов из пыльцы, меда и перги для определения ботанического происхождения меда

2.6 Методика определения загрязнений атмосферы выхлопными газами автотранспорта

2.7 Методика электрофореза пчел методом изоферментного анализа 41 2.8Методика проведения твердофазного иммуноферментного анализа содержания гормонов в нектаре, пыльце и мёде 42 2.8.1 Определение содержания гормонов растений в нектаре

2.8.2 Определение содержания гормонов растений в меде

2.8.3 Определение содержания гормонов растений в пыльце

2.7.4 Определение содержания гормонов растений в нектаре

2.8.5 Твердофазный иммуноферментный анализ (ТФИФА)

2.9 Методика определения солей тяжелых металлов в продуктах пчеловодства

45

2.10 Методика отбора проб растений для изучения микобиоты и методика изучения микобиоты

2.11 Методика оценки степени зараженности пчел спорами гриба Ascosphaera apis

2.12 Методика исследования проб меда на наличие спор гриба Ascosphaera apis

2.13 Методика определения колоний гриба Ascosphaera apis 49 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Механизмы миграции ТМ и анализ их содержания в трофической цепи «почва-растение-пчела-мед» в зависимости от интенсивности автомобильного движения

3.2 Генетическая дифференциация пчел, находящихся в различных условиях автотранспортного загрязнения

3.3 Изучение механизмов транспорта фитогормонов в мед и анализ уровня их содержания в различных сортах меда

3.4 Миграция спор Ascosphaera apis на территории продуктивного лета пчёл 79 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Миграция нетрофических компонентов по пищевой цепи пчелы медоносной Apis Mellifera Mellifera L.»

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время уделяется большое внимание изучению миграции биогенных и токсических веществ в окружающей среде и наличию их в продуктах питания, в том числе, и в продуктах пчеловодства. Загрязнение окружающей среды антропогенными поллютантами является одной из острейших проблем экологии. Особенно опасны тяжёлые металлы (ТМ), проявляющие высокую токсичность в следовых количествах - ртуть, свинец, кадмий и др. В литературе описаны результаты многочисленных исследований динамики продвижения, в первую очередь, тяжелых металлов по трофической цепи «почва — растения — пчелы — продукты пчеловодства — человек» (Ларионов, 1997; Кадиров и др., 1999; Еськов и др. 2001; Лебедев, Мурашова, 2003; Мурашова, 2004; Ишкильдин, 2004; Пашаян, 2006; Русакова и др., 2006; Ишемгулова, 2006; Колбина, 2009; Осинцева и др. 2009; Коркина, 2009; Еськова, 2012 и др.; Celli, Maccagnani, 2003; Achundume, Nwafor, 2010).

Тяжёлые металлы поступают в почву с атмосферными осадками, с выбросами и стоками промышленных предприятий, выхлопными газами автомобильного транспорта, пестицидами и удобрениями. Эти вещества, входящие в состав выбросов промышленных предприятий и автомобильного транспорта, попадают в гнездо пчёл при сборе ими нектара, пыльцы, прополиса и оказывают токсическое воздействие на организм медоносной пчелы. Использование пчел в качестве биоиндикатора загрязнения окружающей среды, а также анализ трофической цепи «почва - медоносное растение - пчела - продукты пчеловодства» позволяют оценить качество и безопасность производимых продуктов пчеловодства.

Помимо этого, в данной цепи питания пчелы медоносной могут транспортироваться вещества, играющие сигнальную роль. К их числу относят фитогормоны. Основным источником поступления фитогормонов в мед часто считается пыльца, поступающая вместе с нектаром (Поправко , 1982; Херольд , Лейбольд, 2006). Имеются данные о положительном влиянии экзогенных синтетических фитогормонов на жизнеспособность пчел, яйценоскость, весеннее развитие пчелиных семей, силу семей, улучшение физиологического состояния зимующих пчел, их медовую продуктивность и зимостойкость (Тимашева, 2004; Антимиров, 2004; Бойценюк, 2006, Губайдуллин, Маннапов, 2008; Шевхужев, Нагаев, 2009). Однако отсутствуют данные как о содержании фитогормонов, поступающих с медом, так и методика определения фитогормонов в продуктах пчеловодства. Кроме того, существуют разнообразные сорта меда, имеющие различное количество и соотношение фитогормонов. Следовательно, при использовании синтетических гормональных препаратов для более правильной подборки дозы необходимо оценивать уровень содержания фитогормонов в меде.

Как известно, в данной трофической цепи происходит также транспорт различной микробиоты (Осинцева, 2010). Большое внимание в литературе уделяется изучению особенностей распространения микозов (Мукминов, 2006). Считается, что споры гриба в улей заносят пчелы с пыльцой и нектаром, также переносчиками могут быть пчелы-воровки, трутни, паразиты, проникающие в улей. Однако нам не удалось встретить работ, в которых было бы описано движение спор гриба Ascosphaera apis в системе «больная пчелиная семья -растение - пыльцевая обножка - здоровая семья - мёд». Есть немногочисленные работы, в которых изучалась микофлора пыльцы (Чекрыга, 2006; Осинцева, Чекрыга, 2008; Осинцева, 2009). Известно, что важную роль в возникновении и распространении аскосфероза играют, в первую очередь, нарушения равновесия нормальной микрофлоры в пчелиной семье и другие факторы, снижающие естественную резистентность организма личинок (Смирнов и др., 1999). Вследствие широкого распространения болезнь приносит значительный

экономический ущерб пчеловодству, снижая продуктивность и ослабляя пчелиные семьи, так как поражает их расплод.

Все сказанное определило цель данной работы, которая состояла в выявлении путей и механизмов миграции тяжелых металлов, фитогормонов и микобиоты, а также в оценке способности изучаемых компонентов накапливаться в различных звеньях пищевой цепи пчелы медоносной. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности миграции ТМ (свинец, кадмий, железо, цинк, медь, ртуть) по цепи «почва - растение - пчелы - продукты пчеловодства» в зависимости от интенсивности движения автомобилей на автомагистралях.

2.Выявить особенности биоаккумуляции ТМ в различных звеньях трофической цепи и выявление генетической дифференциации пчел, находящихся в различных условиях автомобильного загрязнения.

3.Разработать метод определения уровня содержания фитогормонов в нектаре, меде, пыльцевой обножке, перге.

4.Установить механизм транспорта фитогормонов по цепи «растение -пчела - мед» и изучить гормональный баланс различных сортов меда.

5.Изучить маршруты движения спор гриба Ascosphaera apis в системе «больная пчелиная семья - растение - пыльцевая обножка - здоровая семья -мёд».

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Аккумуляции ТМ в теле пчел в трофической цепи «почва - растение -пчела - мед» зависит от интенсивности движения автомобилей и способствует снижению поступления ТМ в мед.

2. Нектар является основным источником происхождения фитогормонов в

меде.

3. Споры гриба Ascosphaera apis обнаружены во всех компонентах экосистемы пчелы медоносной.

Научная новизна. Установлено, что в зависимости от интенсивности автомобильного загрязнения придорожных биотопов возрастает количество ТМ,

достигающих продуктов пчеловодства. Прослежена миграционная активность ТМ в пищевой цепи пчелы медоносной (по убывающей: цинк, медь, свинец, кадмий, железо). Обнаружена способность пчел аккумулировать цинк, кадмий, и медь, за счет чего снижается их количество в меде. Эффекта кумуляции свинца и железа в теле пчел не установлено. Разработана методика определения фитогормонов в продуктах пчеловодства. Впервые экспериментально установлено, что основным источником поступления гормонов в мёд является нектар. При изучении путей движения спор гриба Ascosphaera apis в системе «больная пчелиная семья -растение - пыльцевая обножка - здоровая семья - мёд» установлено наличие спор гриба во всей исследованной цепи, за исключением её последнего звена - мёда.

Практическая значимость и реализация результатов исследования. Полученные в данной работе результаты расширяют знания о путях и механизмах миграции тяжелых металлов, фитогормонов и микобиоты в трофической цепи питания медоносных пчел. Разработанный метод определения уровня содержания фитогормонов в лабораторных условиях может быть использован для оценки достоверности происхождения мёда, а также должен применяться при использовании синтетических фитогормонов в качестве стимуляторов развития пчелиных семей. Прослежены пути распространения спор гриба Ascosphaera apis от больной пчелиной семьи к здоровой семье, что важно при проведении ветеринарных мероприятий по профилактике аскосфероза. По результатам исследований разработаны методические рекомендации «Использование изоферментных генетических маркеров для оценки состояния бурзянской популяции среднерусской породы медоносной пчелы», «Твердофазный иммуноферментный анализ содержания фитогормонов в нектаре, пыльце и меде» (Утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 3/2 от 8 июня 2010 г.). Материалы диссертационной работы используются на кафедрах разведения животных и пчеловодства в ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ, биохимии и биотехнологии ФГБОУ ВПО Башкирского государственного университета, биологии и биологического образования ФГБОУ ВПО «БГПУ им. М. Акмуллы» при проведении лекционных и лабораторно-практических занятий.

Апробация работы. Основные положения работы были представлены на Всероссийской научно-практической конференции в рамках XX юбилейной специализированной выставки «АГРОКОМПЛЕКС-2010» 2-4 марта 2010 г (Уфа, 2010); Российской агропромышленной выставке «Золотая осень - 2011» (диплом, золотая медаль, Москва, 2011); научно-практической конференции в рамках экологического форума и специализированной выставки «Уралэкология. Промышленная безопасность - 2011» (Уфа, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение устойчивого развития АПК» 13-15 декабря 2011 г. (Уфа, 2011); Международной научной конференции аспирантов и молодых ученых «Развитие АПК в свете инновационных идей молодых ученых» (Санкт-Петербург, 2012); Российской агропромышленной выставке «Золотая осень - 2012» (диплом, серебряная медаль, Москва, 2012); первой Международной научно-практической заочной конференции «Современные проблемы и перспективы сохранения медоносных пчел и некоторые аспекты развития и внедрения школьного пчеловодства» (Уфа, 2013); 17-ой Международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2013).

Связь работы с плановыми исследованиями и научными программами. Исследования проводились в рамках планов НИР кафедры разведения животных и пчеловодства ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ «Биотехнологические особенности комплексного использования башкирской породы медоносных пчел на фоне инфекционных и инвазионных заболеваний» гос.рег. №01201059478 и «Выявление в Республике Башкортостан природных зон с оптимальными условиями для производства высококачественных экологически чистых продуктов пчеловодства» № гос.рег.№ 0120.0404877.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ. Разработанный метод «Твердофазный иммуноферментный анализ содержания фитогормонов в нектаре, пыльце и меде» включен в состав монографии, изданной

совместно с коллективом авторов «Методология фундаментальных исследований популяций Apis Mellifera L. 1758»

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 188 наименований, в том числе 42 на иностранных языках. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, включая приложение, содержит 36 рисунков и 8 таблиц.

Благодарности. Выражаю признательность д.б.н., с.н.с. Фархутдинову Рашиту Габдулхаевичу за большое внимание и постоянные консультации, оказанные при выполнении настоящей работы.

Выражаю благодарность за ценные консультации всем сотрудникам кафедры разведения животных и пчеловодства Башкирского ГАУ и лаборатории физиологии растений Института биологии УНЦ РАН. Особую признательность выражаю д.б.н.. Кудояровой Г.Р. и д.х.н. Егуткину H.JI. за ценные советы при разработке метода экстракции и определения фитогормонов в продуктах пчеловодства. Выражаю благодарность проф. P.A. Миндибаеву за помощь в отборе почв на анализы, в их оценке и идентификации.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Трофические цепи, значение веществ, транспортируемых по пищевым цепям пчелы медоносной

Главная функция биосферы заключается в обеспечении круговорота химических элементов, который выражается в циркуляции веществ между атмосферой, почвой, гидросферой и живыми организмами (Чернова, Былова, 1988).

Взаимодействия организмов - компонентов биоценоза или агроценоза -складываются путем топических, трофических и других видов взаимодействий (Буслаев, 2007). Трофическая цепь (пищевая цепь, цепь питания) - это взаимоотношения между организмами, через которые в экосистеме происходит трансформация вещества и энергии (Гиляров и др., 1986).

В пищевой цепи происходит транзит веществ, имеющих определенную ценность для потребителя (макро-, микроэлементы, витамины, гормоны и т.д.) и трофических элементов (белки, углеводы и липиды).

При посещении растений пчелами {Apis mellifera mellifera L.) между цветами и пчелой устанавливаются связи уже после первого пищевого подкрепления (Лопатина, 1971, Буслаев, 2007). Взаимосвязи насекомых-опылителей и энтомофильных растений относятся к консортивным (Тихменев, 1976) и являются предметом исследований многих ученых (Нужнова, 2001, Глазунова, Длусский, 2007, Буслаев , 2007, Comba et al., 1999).

Источниками поступления трофических компонентов для пчелы медоносной {Apis mellifera mellifera L.) из растения являются нектар (углеводный

корм) и пыльца (белковый корм) (Буслаев, 2007). Пчелы перерабатывают нектар в мед, а пыльцу в пергу, создавая запасы концентрированных кормов на неблагоприятный зимний период. Нектар и мед обеспечивают пчел углеводами; пыльца и перга - белками, жирами, витаминами и минеральными веществами (Панфилов,2007).

Регуляторные вещества, содержащиеся в пыльце и являющиеся белковым компонентом корма, оказывают положительное влияние на биоморфологические показатели пчел, рождающихся в семье (Рапиев, 2010).

Кроме того, по пищевой цепи пчелы медоносной передаются также и другие вещества. В их числе могут быть тяжелые металлы, микобиота, гормоны растений и другие.

Наиболее изученным нетрофическим элементов в цепи питания пчелы медоносной являются тяжелые металлы. В работах многих ученых изучалась миграция тяжелых металлов по трофической цепи «почва — растения — пчелы — продукты пчеловодства — человек» (Ларионов, 1997; Кадиров и др., 1999; Еськов и др. 2001; Лебедев, Мурашова, 2003; Мурашова, 2004; Ишкильдин, 2004; Пашаян, 2006; Русакова и др., 2006; Ишемгулова, 2006; Колбина, 2009; Осинцева и др. 2009; Коркина, 2009; Еськова, 2012 и др.; Celli, Maccagnani, 2003; Achundume, Nwafor, 2010)

При этом, в литературе отсутствуют данные о миграции по цепи питания пчелы медоносной гормонов растений и микобиоты.

1.2.1 Характеристика состояния окружающей природной среды в Республике Башкортостан

В условиях бурного развития промышленности, энергетики и транспортных коммуникаций, интенсивной разработки полезных ископаемых, активной химизации сельского хозяйства происходит резкий рост уровня загрязнения природной среды и, в первую очередь, почв и растений (Прохорова, Матвеев, 1996).

Республика Башкортостан - один из самых развитых в промышленном отношении регионов России, что напрямую влияет на состояние окружающей среды. Среди регионов страны по объему выбросов загрязняющих веществ в атмосферу от стационарных источников Республика Башкортостан занимает 12 место, в Приволжском федеральном округе - второе место, второе место по Приволжскому федеральному округу по количеству образующихся отходов производства и потребления. В расчете на 1 кв.км. выбросов республика занимает четвертое место в округе. (Состояние окружающей природной среды и здоровье населения Республики Башкортостан: аналитическая записка, 2012).

Главными источниками загрязнения атмосферы являются предприятия обрабатывающих видов производств (около 50 % всех выбросов в атмосферу), предприятия транспорта (более 20 %), предприятия по производству и распределению электроэнергии, газа и воды (более 10 %), по добыче полезных ископаемых (около 10%).

Крупнейшим загрязнителем воздушного бассейна Республики Башкортостан также является автотранспорт, численность которого растет из года в год. Это в совокупности с низким уровнем экологической безопасности конструкций автомобилей, низким качеством осуществления технического обслуживания и ремонта техники приводит к усилению негативного влияния автотранспорта на окружающую среду (Состояние окружающей природной среды и здоровье населения Республики Башкортостан: аналитическая записка, 2012). Выхлопные газы имеют в своем составе около 200 наименований вредных веществ и соединений: оксиды углерода, оксиды азота, различные углеводороды, в том числе канцерогенные: бенз(а)пирен, сернистые газы, соединения свинца, хром, бром, сажа, тяжелые металлы .

По данным Министерства природопользования и экологии Республики Башкортостан, в воздушный бассейн республики ежегодно выбрасывается в результате эксплуатации автомобильного транспорта около 700 тыс.тонн загрязняющих веществ, что составляет более 60 % всех выбросов в атмосферу. В

связи с этим, представляет интерес изучение влияния интенсивности движения автотранспорта.

Вещества, загрязняющие атмосферу, могут быть твердыми, жидкими и газообразными и оказывать негативное воздействие на окружающую среду непосредственно, либо после химических превращений в атмосфере, а также совместно с другими веществами (Состояние окружающей природной среды и здоровье населения Республики Башкортостан: аналитическая записка, 2012).

1.2.2.Тяжелые металлы, характеристика, источники распространения

Во всем мире уделяется большое внимание защите внешней среды обитания и внутренней среды человека от возрастающего действия химических веществ (в частности ТМ и растворимых форм их токсических соединений) антропогенного и природного характера.

Среди многочисленных загрязнителей наиболее токсичными, после пестицидов, считаются тяжелые металлы. Именно поэтому исследования многих ученых в последние десятилетия направлены на изучение влияния тяжелых металлов на растения и животных (Черненькова, 1986, 2002).

Из большого числа веществ, загрязняющих атмосферу, тяжелые металлы считаются самыми опасными (Алексеев, 1987; Лебедева, Фрумин, 2010,). Их миграция и перераспределение в компонентах экосистем зависят как от целого комплекса природных факторов, так и от интенсивности и характера техногенеза (Прохорова, Матвеев, 1996).

Термин «тяжелые металлы» был заимствован из технической литературы, относящей к этой группе химические элементы, обладающие свойствами металлов и металлоилов с плотностью более 5 г/см 3. Так же к тяжелым металлам относят химические элементы с атомной массой более 40 у.е. или более 50 у.е. В исследованиях биологов, экологов, биогеохимиков чаще всего рассматриваются Сг, Со, Си, гп, Мо, Сс1, Е^, РЬ (Алексеев, 1987; Алексеенко, 1990; Ильин, 1991; Протасова, Щербакова, Копаева, 1992; Прохорова, Матвеев, 1996).

Роль тяжелых металлов двойственна: с одной стороны, они необходимы для нормального протекания физиологических процессов, являясь катализаторами многих реакций; с другой стороны, металлы токсичны при повышенных концентрациях. Наибольшую опасность для человека и живой природы представляют подвижные формы металлов, поскольку они характеризуются высокой биологической активностью.

К возможным источникам загрязнения биосферы тяжелыми металлами относят предприятия черной и цветной металлургии (аэрозольные выбросы, загрязняющие атмосферу, промышленные стоки, загрязняющие поверхностные воды), машиностроения (гальванические ванны меднения, никелирования, хромирования, кадмирования), заводы по переработке аккумуляторных батарей, автомобильный транспорт (Будников, 1998). Неоднократно отмечалось, что промышленная деятельность человека по масштабу перемещения химических элементов соизмерима с факторами геологического и геохимического порядка (Чарнавина, 1970).

Кроме антропогенных источников загрязнения среды обитания тяжелыми металлами существуют и другие, естественные, например вулканические извержения. Все эти источники загрязнения вызывают в биосфере или ее составляющих (воздухе, воде, почвах, живых организмах) увеличение содержания металлов-загрязнителей по сравнению с естественным, так называемым, фоновым уровнем (Будников, 1998).

Негативные последствия загрязнения окружающей среды тяжёлыми металлами представляют реальную угрозу для биосферы. Из-за недооценки этого фактора агроландшафтные системы Центральной России подвержены значительному загрязнению тяжёлыми металлами. Наиболее существенное повышение их содержания в почве отмечается вокруг локальных загрязнителей: промышленных отвалов, автомагистралей, а также на землях длительного интенсивного сельскохозяйственного использования (Кузнецов, 2009).

Установившиеся соотношения в экосистеме нарушаются за счет промышленных отходов, что ведет к резкому увеличению концентрации тяжелых

металлов в окружающей среде. Происходит аккумуляция металлов в почве и создание геохимических аномалий с последующим их распределением и усвоением растительными и животными микробиологическими организмами, а некоторая часть выносится поверхностными и грунтовыми водами (Калиев А. Ж., 2002). Ионы тяжелых металлов способны специфически адсорбироваться почвами с образованием относительно прочных связей с некоторыми поверхностными функциональными группами (Лебедева, Фрумин, 2010).

Наиболее распространенными из ТМ являются кадмий, свинец, медь, которые включаясь в биогеохимические круговороты, загрязняют почву, и в конечном итоге по пищевым цепям через растения попадают в организм животных и человека, аккумулируются в органах и тканях, вызывая различные патологии (Авцын, 1991).

1.2.3 Накопление тяжелых металлов в почве

Почвы являются одним из первых звеньев в биогеохимической пищевой цепи и начальным этапом миграции ТМ в системе: почва-растение-животное-продукт питания-человек (Спринчак, 2004). Основная масса ТМ от низких источников (автотранспорта) попадает в почву в результате сухого осаждения. Кроме того, они могут подниматься в виде очень мелких аэрозолей и пыли турбулентными потоками воздуха в более высокие слои тропосферы и попадать в стратосферу, переноситься на большие расстояния (Добровольский, 1983; Федорова, 2003,).

Накапливая в поверхностных слоях тяжелые металлы, почва, с одной стороны, препятствует загрязнению грунтовых вод, с другой - является постоянным источником поступления поллютантов в атмосферу и растения (Кабата - Пендиас, Пендиас,1989; Шунелько, Федорова, 2002 ). Тяжелые металлы накапливаются в верхних гумусовых горизонтах почвы и медленно удаляются при выщелачивании, потреблении растениями, эрозии. Гумус и щелочная почва

способствуют поглощению тяжелых металлов (Бингам и др, 1993; Везенцев, 2008).

Образование комплексных соединений металлов с органическим веществом почвы способствует выведению излишних масс металлов из миграционных циклов на длительное время. Прочность фиксации разных металлов в органическом веществе почв неодинакова (Лебедева, Фрумин, 2010). Загрязненная ТМ почва является малопригодной или вовсе непригодной для обитания большинства живых организмов. Даже если почва не становится безжизненной, то формирующиеся на ней биоценозы отличаются малым объемом биомассы, низкой скоростью биологических процессов, узким видовым составом (биоразнообразием), слабой устойчивостью и т.д. (Колесников, 2001).

Загрязнение тяжелыми металлами почв придорожных пространств вызывает угнетение и гибель древесной и травянистой растительности. В результате значительное количество токсичных поллютантов поднимается на большие расстояния, проникает в питьевые водозаборы с поверхностным и внутрипочвенным стоками (Шунелько, Федорова, 2002).

1.2.4 Влияние тяжелых металлов на живые организмы

Одной из наиболее важных характеристик тяжелых металлов с точки зрения их влияния на живые организмы является их токсичность, то есть способность оказывать вредное воздействие на микроорганизмы, растения, животных, человека (Шунелько, Федорова, 2002).3агрязнение окружающей среды тяжелыми металлами оказывает выраженные мутагенное и канцерогенное действие, вызывая отравления (нередко с летальным исходом) и нарушения самых разных физиологических функций организма (Пашаян, 2006, Русакова, Мартынова, 1999; Репникова, Кирьянов, 1999).

Исследованиями Кузнецова М.Н. доказано, что адаптивные реакции сельскохозяйственных полевых культур на загрязнение тяжёлыми металлами имеют существенные различия. По степени снижения устойчивости к этому виду

загрязнения они располагаются в следующем порядке: крупяные, зерновые, зернобобовые, сахарная свекла. Действие тяжёлых металлов у них проявляется через изменение активности ферментных систем, интенсификацию процессов липидопероксидации биомембран на фоне нарушения баланса фитогормона, аномалии в развитии корневой системы проростков.

Многие ТМ ингибируют активность ферментов, образуют комплексные органические соединения, способные проникать через клеточные мембраны, дают соединения с сульфатами, фосфатами, хелатообразные комплексы с обычными метаболитами, препятствуя обмену веществ, усиливают деградацию метаболитов, например, АТФ (Шунелько, Федорова, 2002).

Тяжелые металлы, в частности, свинец и кадмий, в экспериментах на животных оказывают тератогенный, эмбриотропный и мутагенный эффекты. Кроме того, взаимодействуя между собой, тяжелые металлы оказывают на организм синергический тератогенный эффект. Вместе с тем, попадая в природную среду антропогенным путем, ТМ могут непредсказуемо изменять свои биологические свойства под влиянием разнообразных физико-химических факторов (Ярусова, Зорина, 2005). Многие представители данной группы веществ, такие как свинец, медь, цинк, кадмий, даже в очень малых количествах, способны вызывать иммунологические, онкологические и другие виды заболеваний. В результате исследований, проводимых учеными разных стран, доказано, что около 70% тяжелых металлов поступает с продуктами питания в организм человека (Воскресенская , 2009).

Для ТМ не существует механизмов природного самоочищения: в ходе миграции они меняют лишь уровень содержания или формы нахождения. Включаясь во все типы миграций и биологический круговорот, они неизбежно приводят к загрязнению важнейших жизнеобеспечивающих природных сред (питьевой воды, воздуха) и пищевых продуктов (Спринчак, 2004).

1.2.5 Влияние тяжелых металлов на пчел и продукты пчеловодства

Еще в 30-х годах XX в. была доказана теснейшая взаимосвязь между пчелами и содержанием металлов в окружающей среде (Крейн, 1984), хотя большинство тяжелых металлов при определенных концентрациях необходимы для жизнедеятельности живых организмов. Однако из-за значительного содержания в почве они в избыточном количестве накапливаются в растениях, от которых по трофической цепи передаются пчелам и далее через продукты пчеловодства людям, что грозит последним отравлением и другими серьезными заболеваниями (Лебедев, Мурашова, 2003).

Исследования по накоплению тяжелых металлов в биологических ресурсах, в частности, в продуктах пчеловодства и медоносных ресурсах, были начаты в последние десятилетия XX века (Кадиров, 1999, Мишин, 1999, Макаров и др., 1995, Туктаров, 2001, Ефименко, 2012 и др.)

Работами НИИ пчеловодства доказано, что чистота продуктов пчеловодства зависит от времени сбора, видового состава растений и места расположения пасеки (Русакова, Мартынова, 1999; Репникова, Кирьянов, 1999, Пашаян, 2006).

Одной из форм биомониторинга в настоящее время является апииндикация - использование пчел и продуктов пчеловодства для контроля за степенью загрязнения территории. Медоносные пчелы - биоиндикаторы состояния экосистем и вместе с продуктами своей жизнедеятельности являются уникальными объектами исследований, с которыми возможны четкие и фиксированные эксперименты, не наносящие ущерба популяции, и с помощью которых можно получить комплекс экологических характеристик окружающей среды (Наумкин, 2012)

Согласно исследованиям Лебедева В. И., Мурашовой Е. А. (2003), пчелы, пыльца, перга и прополис могут служить объективными индикаторами экологической чистоты окружающей среды и содержания тяжелых металлов.

Пчелы полностью отвечают критериям биоиндикаторов и вместе с продуктами своей жизнедеятельности являются уникальными объектами исследований, с помощью которых можно получить широкий комплекс экологических характеристик состояния окружающей среды (Ковальчук, 2012).

Продукты пчеловодства аккумулируют тяжелые металлы в разной степени. Л.А.Бурмистрова и другие (2008) считают, что больше всего их накапливается в перге, нектаре и прополисе и в меньшей степени подвержены загрязнению продукты, продуцируемые самими пчелами (воск, маточное молочко, пчелиный яд) (Кодесь, Бычкова, 2010).

Физиологическая особенность организма пчел извлекать нежелательные элементы из кормовых субстратов, запасаемых в гнезде, ведет к накоплению в нем остаточных количеств пестицидов, тяжелых металлов и пр. (Осинцева , 2004).

Пчелы, собирая нектар и пыльцу с растений, содержащих токсические или вредные вещества, не только подвергаются смертельному риску, но и становятся опасным источником загрязнения производимых ими продуктов. По результатам анализа исследований Ковальчука И. И. установлено, что в перге, полученной с опытных пасек, по сравнению с пергой контрольной пасеки достоверно низкое содержание Ъп, Си, Сг, №, РЬ, исключение составили Бе и Сё.

В силу ряда причин мед не может служить модельным образцом для мониторинга экосистем. Это связано с тем, что, во-первых, при переработке нектара в мед пчелы способны аккумулировать в себе большинство несвойственных нектару элементов, что доказано экспериментально. Во-вторых, большая часть тяжелых металлов, пестицидов и других средств химизации накапливается в растительных тканях и с нектаром не выделяется (Осинцева, 2004).

Основное количество тяжелых металлов накапливается в теле пчел за счет интенсивного потребления ими в течение двух недель пыльцы и перги, загрязненность которых в сотни раз выше, чем нектара и меда, а также во время переработки нектара в мед при отцеживании пыльцы и поступлении ее в среднюю кишку (Лебедев, Мурашова, 2003).

Только для меда и обножки установлены предельно допустимые нормы содержания тяжелых металлов, радионуклидов и пестицидов. Эти продукты подлежат обязательному контролю при стандартных процедурах сертификации (Осинцева, 2004) .

Исследования Л.Г.Кодесь, Н.В.Бычковой показали, что содержание тяжелых металлов в соцветиях растений медоносов в несколько раз ниже, чем в почве, на которой они произрастают, а в телах пчел несколько меньше, чем в растениях. Наибольшее количество тяжелых металлов накапливается в продуктах, не проходящих через организм пчел (прополис и пыльца), и меньше их в продуктах, переработанных пчелами (мед и воск), причем накопление токсических элементов в воске происходит во время его использования семьей в процессе своей жизнедеятельности (Кодесь, Бычкова, 2010).

Загрязняющие вещества в продуктах пчеловодства, главным образом, накапливаются в воске и меде. Пчелы, собирая нектар и пыльцу с загрязненных растений, не только сами подвергаются смертельному риску, но и становятся опасным источником загрязнения производимых ими продуктов (Пашаян, 2006).

Таким образом, как показал анализ литературы, очевидно влияние ТМ на жизнедеятельность пчел и накопление ТМ в различных звеньях пищевой цепи пчелы медоносной. Однако, факт влияния автомобильного загрязнения на жизнедеятельность пчелиных семей в зависимости от интенсивности движения автомобилей в литературе практически не обсуждается.

1.3.1 Характеристика фитогормонов, их роль в природе

Фитогормонами называют низкомолекулярные органические вещества, синтезируемые в растении и в низких концентрациях влияющие на различные процессы их жизнедеятельности (Полевой, 1989). К гормонам растений относят ауксины, абсцизовую кислоту, цитокинины, гибберелины, этилен, полиамины, брассинолиды, жасмонаты, салицилловую кислоту и недавно идентифицированные стриголактоны (Frebort et al., 2011). Фитогормоны и их предшественники обнаружены в ксилемном и флоэмном соке (Jackson, 1993; Kamboj et al., 1998) и показано изменение их концентрации при внешних воздействиях (Dodd, 2005; Davies et al., 2005). В литературе широко обсуждается роль гормонов в качестве сигналов, которые передаются из органа в орган растений (Фархутдинов, 2005; Kudoyarova et al., 2007; Vysotskaya, 2010). В основе этой концепции лежит способность гормонов влиять на многие процессы, обеспечивающие приспособление растений к условиям обитания.

1.3.1.1 Ауксины

Наиболее часто встречающийся в природе ауксин - индолил-3-уксусная кислота (ИУК) (Woodward, Bartel, 2005). Название «ауксин» означает

«увеличиваться», «расти».

В растениях синтезируется из триптофана через промежуточное образование (3-индолил)пировиноградной кислоты, Р"(3-

индолил)этиламина [или (З-(З-индолил)этанола] и (3-индолил)ацетальдегида, окисляющегося до ИУК. Синтезировать этот ауксин способны также многие бактерии и грибы. В растениях содержание ИУК варьирует от 1 до 1000 мг на 1 кг сырой массы (Полевой, 1982).

Ауксин синтезируется в основном в активно растущих клетках верхушки растения. Содержание ауксинов меняется в процессе онтогенеза растительного

организма. Обычно в листьях максимум содержания ауксинов наступает в фазу бутонизации или цветения. Распускающиеся почки, прорастающие семена содержат большое количество ауксина. Разрушение ауксинов катализируют оксидазы (Gazaryan et al., 1996). Ауксины используются для стимуляции плодообразования, регулируют цветение, рост и созревание плодов. У огурца при обработке ауксином возрастает число женских цветков, увеличивается урожай плодов и семян. Рост цветоноса розеточных растений зависит от транспорта ауксина из цветка или соцветия. Ауксин пыльцы необходим для роста пыльцевой трубки. Семена являются источником ауксина в развивающихся плодах. При удалении их плод не растет, однако после обработки ауксином его рост возобновляется. Изменяя содержание ауксина в плодах, можно управлять их созреванием (Полевой, 1989).

1.3.1.2 Абсцизовая кислота

Интерес к АБК был вызван участием этого гормона в стрессовых реакциях растений (Tan et al., 1994). Само его открытие в подсыхающих изолированных листьях было связано со стрессом (Wright, Hiron, 1969). Интересно, что название этот гормон получил по ошибке в результате не подтвердившегося предположения о том, что АБК вызывает опадение листьев (abscission -сбрасывание). У растений описаны сигнальные пути, связанные с абсцизовой кислотой при ответе на стресс и патогены (Seo М, Koshiba Т, 2002; Zhu, 2002). Обнаружены и секвенированы гены, продукты которых принимают участие в биосинтезе абсцизовой кислоты (Milborrow BY 2001; Nambara Е, Marion-Poll А.

подтверждена, что послужило основой для появления популярной концепции о роли АБК, продуцируемой в корнях в передаче сигналов из корней в побеги

2005).

Долгое время исследователи были уверены в

СООН том, что АБК синтезируется только в листьях растений ^ (МПЬогго\у е1 а1., 1998). Тем не менее, способность _ корней синтезировать АБК была экспериментально

(Zhang, Davies, 1989). Есть мнение, что АБК может поступать в корни из побега по флоэме, а затем уже, в результате рециркуляции этого гормона по ксилеме, он может выполнить свою функцию корневого сигнала (Jeschke et al., 1997).

Абсцизовая кислота, накапливаясь в семенах созревающих плодов, в кожуре покоящихся клубней, в осенних почках растений, способна подавлять ростовые процессы - прорастание семян и клубней, распускание почек, образование корней, рост стебля (Веселов и др., 2007).

1.3.1.3 Цитокинины

Хотя цитокиновую активность проявляют ряд производных мочевины (Ricci, Bertoletti, 2009), природные цитокинины являются метаболитами азотистых оснований, у которых в шестом положении пуринового кольца присоединен радикал (Мок, Мок, 2001). Основные азотистые основания - это изопентениладенин, зеатин (см. формулу) и дигидрозеатин.

НО. Цитокинины получили свое название благодаря

К процессам, в регуляции которых участвуют цитокинины, относятся деление и растяжение клеток, дифференцировка пластид, биосинтез пигментов, индукция морфогенеза стебля, апикальное доминирование, приток метаболитов (аттрагирующий эффект), формирование побегов в культуре каллусов; с помощью цитокининов корни растений регулируют функциональную активность надземных органов растений, в особенности, листьев (Кулаева, 1973; Романов, 2009; Мок and Мок, 2001). Цитокинины могут способствовать замедлению

NH

своей способности индуцировать деление клеток (цитокинез) (Skoog and Armstrong, 1970). Однако их роль в жизнедеятельности растения цитокинезом не ограничивается. Цитокинины обладают широким спектром действия и проявляют свою функцию на всех

// этапах онтогенеза растений, начиная от образования ' зигогь, и до гибели организма (Кулаева, 1973).

процессов старения. Так, обработка срезанных стареющих листьев Arabidopsis thaliana цитокинином приводила к замедлению потери хлорофилла (Кулаева, 1962; Данилова и др., 2012).

Такое многообразие функций цитокининов обусловлено их способностью влиять на активность сотен генов (Kiba et al., 2005). За последнее время цитокининовый сигналинг досконально изучен (D'Agostino, Kieber, 1999; Brenner et al., 2005; Hutchison et al., 2006). Действие цитокининов, как и других сигнальных молекул, проявляется в очень низких концентрациях (1-50 пмоль/г сырой массы) (Galuszka et al., 2008). Они могут функционировать и как паракринные сигналы, т.е. в месте своего синтеза (Faiss et al., 1997), и как эндокринные, влияя на активность каких-либо процессов в других, далеко расположенных от места синтеза органах («long-distant signals») (Кулаева, 1961; Kuroha et al., 2002; Kudoyarova et al., 2007). Ко второму примеру действия цитокининов относится их способность, транспортируясь по ксилеме, сигнализировать побегу о доступности элементов минерального питания (Кулаева, 1961; Sakakibara, 2006; Werner, Schmiilling, 2009). Долгое время считалось, что корни, а именно их апикальные меристемы, являются единственным источником цитокининов (Sakakibara et al., 2003).

Цитокинины также влияют на закладку и развитие генеративных органов. При обработке этими гормонами ускоряется зацветание многих растений, причем в этих процессах цитокинины действуют совместно с гиббереллинами. Важную роль играют цитокинины и в формировании пола у цветка. Они способствуют закладке женских цветков у огурца, шпината, кукурузы, конопли (Веселов и др., 2007).

1.3.2 Применение фитогормонов в пчеловодстве

Растения, как известно, поставщики физиологически активных веществ, в частности, фитогормонов, содержащихся в нектаре и пыльце. Применение в пчеловодстве их синтетических аналогов показало положительные результаты:

отмечалось увеличение продолжительности жизни пчел, возрастали яйценоскость маток, медосборная деятельность и т.д. (Бойценюк и др. 2006; Губайдуллин, Маннапов, 2008). В последние годы особое внимание уделяется препаратам, ускоряющим развитие пчелиных семей и существенно влияющих на их продуктивность. Многие из них создаются на основе биологически активных веществ, выделяемых из растительных источников. Особый интерес ученых привлекают гормоны растений, которые в большом количестве содержатся в пыльце и нектаре. Применение их синтетических аналогов обосновано также тем, что некоторые фитогормоны имеют схожее химическое строение с гормонами насекомых ауксины - с серотонином, абсцизовая кислота - с ювенальным гормоном, брассиностероиды - с экдизоном (Муромцев, 1993; Бойценюк и др 2007). Фитоэкдистероиды, т.е. фитогормоны, имеющие схожее строение с экдистероидами насекомых, также регулируют их онтогенез. С их помощью можно управлять численностью и развитием насекомых.

Проведение исследований по изучению действия синтетических аналогов фитогормонов на пчелиные семьи в активный период их жизнедеятельности открывает возможности более эффективного использования пчелиных семей.

В связи с этим, нам представляется целесообразным дать анализ работ по использованию гормонов в пчеловодстве.

Впервые поставил ряд опытов по изучению влияния подкормки пчел гетероауксином на рост и развитие медоносной пчелы Севастьянов В.Д. (1952). В своих исследованиях он установил, что применение гетероауксина приводило к увеличению яйценоскости пчелиных маток, силы пчелиной семьи, веса однодневных пчел и повышению медопродуктивности. Эти наблюдения подтвердили в своих работах Тетюшев В.М. (1953), Подоба Е.П. (1955), Седлячек (БесПасек Ъ., 1956); В.Т.Какпаков (1990); Г.С. Шангараева (1998).

Имеются данные о применении фитоэкдистероидов в пчеловодстве. Фитоэкдистероиды идентичны ключевому гормону линьки членистоногих. Они рассматриваются в качестве перспективных онторегуляторов для поддержания жизнеспособности и повышения продуктивности медоносной пчелы. Один из

представителей этого класса гормонов - экдистерон применялся в пчеловодстве для усиления лета пчел (Тимофеев, 1995).

Проведение целенаправленных исследований по изучению действия фитогормонов в жизни пчелиных особей является актуальной проблемой сельского хозяйства. Принимая во внимание исключительно низкие нормы расхода фитогормонов, их распространение в растениях, а, следовательно, и привычное потребление с пищей животными. Немаловажное значение может иметь также сравнительно низкая потребность в действующем веществе, обусловленная низкими нормами расхода, и связанные с этим малые объемы производства, транспортных перевозок и т.п., что дополнительно позволит снизить экологическую нагрузку на окружающую среду.

Интересны в этом отношении эксперименты, проделанные C.B. Антимировым (2004), в которых проверялась возможность восполнения недополучаемых пчелами в весенний период растительных гормонов с помощью их подкормки сахарным сиропом, содержащей фитогормоны эпибрассинолид и цитокинин.Яйценоскость маток в подопытных семьях была значительно выше на 19 и 35% (соответственно цитокинины и эпибрассинолид) выше, чем в контроле. Повышение яйценоскости маток привело к закономерному через месяц увеличению силы семей при подкормке цитокинином — на 95%, эпибрассинолидом — на 62,1%. А в сентябре семьи, получавшие подкормки с гормонами, имели силу: эпибрассинолид — 6,5 улочки, цитокинин — 6,5 улочки, контрольные — 5,9 улочки.

По данным Н.И.Кривцова и В.И.Лебедева (1993) в сильных семьях на обильном медосборе работает в поле до 66% пчел от их общего количества в семье, а в слабых лишь —15-20%. В исследованиях C.B. Антимирова отмечается заметная разница в летной активности пчел подопытных и контрольной групп. Так, из семей, получавших цитокинин, вылетали в среднем 180 пчел, эпибрассинолид — 148 пчел, а в контроле — 66 пчел за три минуты (Антимиров, 2004). Летная активность пчел может рассматриваться в качестве косвенного показателя медовой продуктивности.

Для проверки влияния фитогормонов на развитие пчелиных особей C.B. Антимировым определялась масса однодневных пчел, рождающихся в пчелиных семьях в летний период. В семьях контрольной группы этот показатель составил в среднем 99 мг, получавших эпибрассинолид — 106 мг, цитокинин — 104 мг. По утверждению Г.Ф.Таранова (1986), чем больше масса пчелы, тем лучше ее развитие, тем с большей нагрузкой нектара она возвращается в улей, что, безусловно, повышает медосбор пчелиных семей.

Следовательно, применение фитогормонов в составе весенних стимулирующих подкормок приводит к ускорению темпов развития семей и способствует их лучшей подготовке к медосбору. Принимая во внимание низкую токсичность и исключительно низкие нормы расхода фитогормонов, их распространение в растениях, а следовательно, и привычное потребление с пищей высшими животными, можно допустить, что в случае организации производства этих препаратов в промышленном масштабе и использования в качестве стимуляторов в пчеловодстве они окажутся экологически безопасными для человека (Тимашева, Бойценюк, 2003; Антимиров 2004).

Под влиянием эпибрассинолида наблюдалось увеличение медовой продуктивности, которая превышала контроль на 48-50%, в варианте с эпибрассинолидом в среднем - 23,4 кг, а в контроле -15,8 кг меда на семью (Бойценюк и др., 2007).

По данным O.A. Тимашевой (2004) при применении экзогенных гормонов средняя продолжительность жизни пчел в садках составила: контроль — 4,1 сут; гиббереллин — 6,6; гетероауксин — 6,0; цитокинин — 8,1; эпибрассинолид — 6,8 суток. Причем, наиболее оптимальными по влиянию на продолжительность жизни цитокинины в дозе 50 мг/л, эпибрассинолид — 0,2 мг/л сахарного сиропа. Гормон насекомых экдизон, химический аналог эпибрассинолида, в наиболее высоких концентрациях обнаруживается у яйцекладущих особей, то есть отвечает за их репродуктивную функцию (Тимашева, 2004).

В совместной работе О. А. Тимашевой и JI. И. Бойценюка (2003) изучалось влияние добавок фитогормонов эпибрассинолида и цитокинина в составе

подкормок карпатских пчёл сахарным сиропом на качество их зимовки. В опытных семьях происходил менее интенсивный осенний отход пчёл, что связано с продолжительностью жизни. Пчёлы, отобранные в садки из контрольных семей, прожили в среднем 23 дня, тогда как в опытных группах в среднем по 33 дня. Продолжительность жизни зимующих пчёл во многом зависит от активности потребления ими в период подготовки к зиме пыльцы, способствующей увеличению запасов азота, жира и гликогена в организме пчёл. Данные опытных групп по степени развития жирового тела пчёл превосходили контроль, а лучшие результаты показал фитогормон эпибрассинолид: у пчёл, получавших его, к весне жировое тело было в 1,5 раза лучше развито, чем в контрольной группе. У пчел контроля в конце зимы количество непереваренных остатков в кишечнике составляло около 27 мг, тогда как в опытных группах - в среднем по 20 мг. По мере накопления экскрементов в задней кишке возрастает активность фермента каталазы, отвечающей за ликвидацию вредных последствий, которые могут возникнуть при сильном наполнении толстой кишки (Жеребкин, 1979; Сафаргалин, Юмагужин, 2012). Активность каталазы заднего отдела кишечника была выше у семей, получавших цитокинин, чем в контроле на 83 %, у семей, подкормленных эпибрассинолидом, на 28 %. По результатам весенней ревизии авторами было установлено, что потребление корма в контрольных семьях уступало показателям опытных групп, как на улочку пчёл, так и на семью в целом. В контрольной группе семьи в среднем израсходовали 8,7 кг корма, на улочку приходилось по 1,4 кг. В группе семей, получавших в качестве добавки цитокинин, наблюдался минимальный расход кормов: на семью - 6,9 кг, на улочку - 1,1 кг. Кроме того, в опытных семьях отход пчёл в течение зимы был ниже. В обеих опытных группах он составлял в среднем 1,0 улочка пчёл на семью против 1,5 улочек в контрольной группе. Результаты зимовки соответствующим образом отразились на весеннем развитии пчелиных семей. Темпы роста опытных семей были значительно выше, чем в контроле. Так, пчёлы контрольной группы вырастили за 36 дней весеннего развития в среднем 8,9 тыс. рабочих особей;

пчёлы, получавшие осенью в качестве подкормки цитокинин, - 10,2; эпибрассинолид - 13,9 тыс. особей (цит. по Тимашева и Бойценюк, 2003).

Авторами также было показано, что эпибрассинолид способствует в большей степени накоплению питательных веществ в организме пчёл зимнего поколения, в результате чего они больше выращивают расплода в весенний период, а цитокинин в составе осенних подкормок пчёл позволял более экономно расходовать запасы кормов в течение зимы (там же).

Однако анализ литературы показал на отсутствие исследований, связанных с изучением роли фитогормонов, поступающих вместе с кормом, на жизнедеятельность пчелиных семей. Одна из причин данного упущения связана с отсутствием методики определения фитогормонов в продуктах пчеловодства.

1.4.1 Аскосфероз пчел, пути распространения болезни

Медоносная пчела, как и любой живой организм, подвержена различным заболеваниям, которые наносят серьезный ущерб пчеловодству, что проявляется в снижении летной активности и продуктивности пчелосемей (Мукминов, 2006). К числу наиболее опасных инфекционных заболеваний пчел, причины возникновения которых напрямую связаны с несоблюдением норм содержания, неполноценным кормлением, недостаточной эффективностью ветеринарно-санитарных мероприятий, относятся микозы (аскосфероз, аспергиллез и др.) (Шишко, 2006). Эпизоотическое состояние по микозам как за рубежом, так и в нашей стране остается напряженным, особенно широкое распространение получил аскосфероз пчел, или известковый расплод (Першин, 1971; Кокорев, 2005;).

В течение последних 20 лет аскосфероз широко распространился по пасекам ряда стран. В начале двадцатого столетия заболевание известно было только в Европе, впоследствии зарегистрировано в США, Канаде, Кубе, Японии, Новой Зеландии и других странах. Согласно данным литературы, с 1968 года аскосфероз считается наиболее распространенным заболеванием пчел на территории Европы (яоибзу, 1962). В России резкое обострение положения с аскосферозом наступило в 80-90-е годы (Мачнев, Яременко, 2000). В России среди патологий медоносных пчел в современных условиях по широте распространения аскосфероз занимает основное место (Соловьева, 1997).

В последние годы гибель пчел и снижение продуктивности в результате инфекционных заболеваний продолжают возрастать, что связано с высокой концентрацией семей пчел, массовыми передвижениями (кочевки) пасек, обменом племенной продукцией как внутри одной страны, так и в международном масштабе (Батуев,1977). Также одной из причин массового распространения аскосфероза в стране является нарушение правил реализации воска от больных семей (Соловьева, 2001).

Аскосфероз наносит значительный экономический ущерб, число особей в пчелиных семьях снижается в среднем на 23%, а их способность к медосбору - на 49%, продуктивность пчелиных семей снижается, по разным оценкам, на 50-60% (Алексеенко, Ревенок, Чепурко, 1991; Блинов, 2002,). На пасеках Башкирии аскосфероз впервые был официально зарегистрирован в 1985-87 годах (Юмагужин, 2011). Степень поражения пчел в Башкирии аскосферозом составляет в среднем 14 % от общего количества пчелосемей (Мукминов, 2006).

Аскосфероз - (перицистомикоз, известковый расплод, меловый расплод) инфекционное микотическое заболевание семей пчел, сопровождающееся гибелью пчелиных и трутневых личинок с последующим мумифицированием. Относится к классу Plectomycetes (сумчатые), отряду Ascosphaerales, семейству Ascosphaerariaceae, роду Ascosphaera (Eriksson, Hawksworth, 1984; Мукминов, 2006).

Имеется два варианта гриба Ascosphaera apis, которые между собой не способны скрещиваться. Диаметр споровых цист Ascosphaera apis var. apis - 3299 мкм, Ascosphaera apis var. major - 88,4-168,5 . У Ascosphaera apis var. apis споры эллипсоидные или почковидные одноклеточные с вязкой поверхностью, размер которых составляет 1,0-2,0x2,0-3,5 (в среднем 1,4x2,7) мкм. Ascosphaera apis var. major имеет споры плоско-выпуклой, субалантоидной или цилиндрической формы, размером 1,0-1,5x3-4 (в среднем 1,3x3,4) мкм. Грибы растут при 25-28 °С на средах с добавлением глюкозы. Оптимальный рост Ase.apis происходит при 10-20% глюкозы, a Asc.major- при 20-30%.

Ascosphaera apis имеет септированный разнополый мицелий. Мужской мицелий (антеридий) желто-бурого цвета, тонкий, медленно растущий. Женский (оогоний) - бесцветный. Размножение происходит путем слияния ядер мужского и женского мицелиев, за которым следует процесс кариогамии, а затем многократное деление слившихся (копуляционных) ядер, в результате чего образуются многочисленные споры, склеивающиеся в шары и заключенные в шаровидную полость - цисту (циста со споровыми шарами и спорами внутри носит название «плодовое тело») (Гробов, Лихотин, 1989).

Гриб аскосфера патогенен для 3-4-дневных личинок. Чаще заболевает трутневый расплод, расположенный на окраинах гнезда. Взрослые пчелы не болеют, но являются переносчиками заболевания. Заражение происходит при' кормлении личинок мёдом и пыльцой, начиная с четвертого дня их развития. Нередки случаи заражения через внешние покровы, когда на теле личинки образуется мицелий, который проникает через кутикулу вглубь личинки, разрушая ее тело (Roussi, 1962; Мукминов, 2006,). Споры гриба прорастают, выделяя токсины в средней кишке личинки, и она погибает, покрываясь белым налетом плесени (Полтев, Нешатаева, 1984). Признаки аскосфероза, как правило, проявляются в весенне-летний период, достигая максимального развития в июне-августе (Heath, 1985; Петрович, 1989).

Из практических наблюдений и литературных данных (Смирнов, Григорян, 1985; Соловьева, Годяцкий, 1986, 1990; Керимбаев, Мерщиев 1988; Клочко и др.1994;Сычев, 1995; Жуков, 1995 и др.) следует, что аскосферозу способствует высокая влажность в гнездах, связанная с неблагоприятной погодой: антибиотикотерапия, используемая для профилактики и лечения других болезней пчел; нарушение норм санитарии и гигиены содержания и эксплуатации пчелиных семей; частые без особой необходимости осмотры семей; белковое голодание; подкормка пыльцой; заготовленной в неблагополучных по аскосферозу местах; поражение варроатозом (Соловьева, 1997).

Развитие и особенности протекания болезни в пчелиных семьях варьируют и зависят от многих факторов, таких как общий инфекционный фон, степень резистентности колонии, генетический потенциал матки, природные и климатические условия и др. (Мукминов, 2006; Spivak, Downey, 1998).

Обычно заболевают слабые семьи после длительных похолоданий при повышенной влажности воздуха (Смирнов, Григорян, 1985). В патогенезе аскосфероза, помимо возбудителя, важные роли играют сила семей, возраст матки, полноценные корма, соблюдение зоогигиенических норм в расширении и утеплении гнезда (Соловьева, 2000).

Пчелы заражаются спорами гриба через поверхность тела или с кормом. В первом случае на теле личинки из спор образуется мицелий и проникает через кутикулу. Во втором случае мицелий разрушает перитрофическую мембрану, эпителиальные клетки кишечника, лизируя ядра и цитоплазму. В дальнейшем отмечается поражение эноцитов и жирового тела. В организме личинки резко увеличивается количество эноцитов. В ядрах жировых клеток отмечается некробиоз с последующим их разрушением. Наблюдается гипертрофия мальпигиевых сосудов. В дальнейшем мицелий гриба поражает все ткани личинки (Гробов, Лихотин, 1989).

Очень часто пчеловоды принимают за погибших личинок кусочки старой заплесневевшей перги, которую пчелы стараются извлечь из сотов (Полтев, Нешатаева, 1984). При подозрении на аскосфероз в ветеринарную лабораторию направляют кусочки сотов размером 10*15 см с больными и погибшими личинками и куколками (Соловьева, 1997).

Гриб Ascosphaera apis устойчив во внешней среде (Соловьева, 1997) и к воздействию различных дезинфектантов, поэтому многие из существующих лечебно-профилактических средств при аскосферозе недостаточно эффективны (Блинов, 2002).

Несмотря на значительное число экспериментальных работ, посвященных разработке способов профилактики и борьбы с аскосферозом, до сих пор не существует ни одной общепринятой стратегии. Акцент делается на соблюдение общих санитарно-ветеринарных норм содержания пасеки для предотвращения распространения и развития этого заболевания (Смирнов, 2000; Мачнев, Яременко, 2000).

Считается, что споры гриба в улей заносят пчелы с пыльцой и нектаром, также переносчиками могут быть пчелы-воровки, трутни, паразиты, проникающие в улей. Однако нам не удалось встретить работ, в которых была бы описана миграция спор гриба Ascosphaera apis в системе «больная пчелиная семья - растение - пыльцевая обножка - здоровая семья - мёд». Есть немногочисленные

работы, в которых изучалась микофлора пыльцы (Чекрыга, 2006, Осинцева, Чекрыга, 2008).

Существует собственная микобиота цветка, зависящая от факторов внешней и внутренней среды цветка. Рабочие пчелы добавляют к собранной пыльце нектар других растений и секрет гипофарингеальных желез и формируют пыльцевую обножку, обогащая микобиоту пыльцы собственной микрофлорой и дополнительным пищевым субстратом. При переносе пчелами комочков пыльцевой обножки на задних конечностях в гнездо происходит ее дополнительное загрязнение микрофлорой атмосферного воздуха. Таким образом, можно предполагать наличие множественности детерминирующих факторов и их тесную сопряженность при формировании сообществ микобионтов пыльцевой обножки.

Исходя из анализа литературных данных стало очевидно, что транспорт спор Ascosphaera apis по цепям «больная пчелиная семья - растение - пыльцевая обножка - здоровая пчелиная семья-мед» не изучался ранее.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальную часть исследований проводили на протяжении 20092013 гг. на кафедре биологии, пчеловодства и охотоведения ФГБОУ ВПО Башкирский государственный аграрный университет (ныне - кафедра разведения животных и пчеловодства), в лаборатории физиологии растений Института биологии Уфимского научного центра РАН, в лаборатории биоразнообразия научно-образовательного центра ФГБОУ ВПО Башкирский государственный аграрный университет, а также на пасеках Республики Башкортостан.

2.1 Методика отбора проб почв

Отбор проб почвы для анализов проводился в соответствии с требованиями к отбору почв при общих и локальных загрязнениях, изложенными в МУ 2.1.7.730-99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест», в ГОСТ 17.4.3.01-83 (СТ СЭВ 3847-82) «Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 17.4.4.02-84 «Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа».

При изучении загрязнения почв транспортными магистралями пробные площадки закладывали на придорожных полосах с учетом рельефа местности, растительного покрова, метео- и гидрологических условий. Пробы почвы отбирали с узких полос длиной 200 - 500 м на расстоянии 0 - 10, 10 - 50, 50 - 100 м от полотна дороги. Одна смешанная проба составляется из 20 - 25 точечных, отобранных с глубины 0-10 см. Точечные пробы почвы, предназначенные для

определения тяжелых металлов, отбирают инструментом, не содержащим металлы (ГОСТ 17.4.4.02-84 «Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа»).

Забор проб почвы на тяжелые металлы производился на трех кочевых пасеках, располагающихся на полях с посевами гречихи, примерно через 20 дней после прибытия их на медосбор. Автомагистраль М5 «Урал» Москва - Уфа -Челябинск (проба № 1 Благоварский район РБ) является чрезвычайно нагруженной дорогой 1-й категории. Определенная нами интенсивность движения на данном участке составила 12700 ± 2500 автомобилей в сутки. При этом в составе транспортного потока около 40% составляют большегрузные автомобили. Пасека располагалась примерно в 400 м от автомагистрали. Другая пасека располагалась в 300 м от автотрассы республиканского значения Стерлитамак - Киргиз-Мияки в Стерлибашевском районе Республики Башкортостан (проба № 2), которая относится к дорогам 3-й категории. Интенсивность движения составляла 2200 ± 440 автомобилей в сутки.

В качестве контроля нами была выбрана пасека, располагающаяся также в Стерлибашевском районе РБ, но находящаяся на расстоянии 8 км от автомагистрали районного значения Стерлибашево - Федоровка (проба 3). Данная дорога относится к 4 категории с интенсивностью движения 450 ± 60 автомобилей в сутки, однако учитывая, что радиус продуктивного лёта пчёл составляет 2-3 км, воздействие автомобильного загрязнения можно считать незначительным.

При выборе мест для исследований использовалась почвенная карта «Башкирская АССР» масштаб 1:500000. Впоследствии оценка почв сопоставлялась с данными хозяйств, на территории которых располагались кочевые пасеки.

2.2 Методика отбора проб растений для определения тяжелых металлов

У растений гречихи посевной (Ра^оругит еьсиЫыит МоепИ) для исследований брали надземную и корневую часть. Отбор проб растительного материала на корню производился внутри прямоугольника поля, располагающегося в промежутке между автомагистралью и кочевой пасекой (отбор проб по двум смежным сторонам). На двух смежных сторонах поля намечали 3-4 точки так, чтобы они охватывали всю длину стороны. Затем на расстоянии 5-10-15 метров от края поля брали пробы. Общее количество отобранного материала должно соответствовать величине исходного образца -20-30 растений. Корни тщательно промывали проточной водой. Растения сушились в затененном месте до постоянного веса. Величина средней пробы -0,25 кг («Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» № N 2051-79 от 21.08.1979)

2.3 Методика отбора проб пчел

Для анализа содержания тяжелых металлов от 5-10 пчелосемей отбирали примерно по 100 пчел от каждой, которых помещали в садки и потом замораживали при температуре - 18 °С. Средний вес навески - 50 - 100 г.

При отборе образцов пчел для электрофоретического анализа соблюден принцип равной представленности пчел из разных семей (объемы сравниваемых выборок - по 30 рабочих пчел или, учитывая их диплоидность, по 60 аллелей). Для анализа были использованы две выборки пчел, первоначально имеющих общее происхождение из учебной пасеки БГАУ, куда в течение 5-7 лет не завозились пчелиные семьи из других мест. Первая группа (РР) находилась в относительно экологически благополучном месте (удаление от автотрассы 5 км), на территории учебной пасеки БГАУ в Уфимском районе, расположенной в

лесном массиве. Другая выборка рабочих пчел (РИ) представлена семьями, обитающими в условиях промышленного загрязнения (на крыше входа во второй корпус, ФГБОУ ВПО БГАУ, в 50 м от улицы имени 8 марта с оживленным движением легкового и грузового автотранспорта).

2.4 Методика отбора проб нектара, меда, прополиса, пыльцы

Отбор проб для анализа ТМ проводили в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб для определения микроколичеств пестицидов в сельскохозяйственной продукции, продуктах питания и объектах окружающей среды» (№ 2051 - 79, утв. Минздравом 21.08.79).

Нектар для анализа фитогормонов собирали капиллярным методом или использовали для данной работы пчел. Для этой цели отбирали сильную пчелиную семью, размещали её в непосредственной близости от изучаемого медоноса за несколько дней до сбора нектара. Формировали гнездо пчелиной семьи следующим образом: накануне сбора нектара с помощью рамок, заполненных медом, максимально укомплектовывали гнездо, за исключением места для одной рамки, которая не содержит меда (т.н. сушь). Рано утром устанавливали данную рамку для сбора нектара пчелами и вечером после захода солнца отбирали данную рамку. С помощью микропипетки собирали нектар из сотов и замораживали при температуре - 18 °С и ниже. Для проведения анализов необходимо не менее 1-2 мл нектара, который размораживали непосредственно перед ТФИФА.

Пробы мёда брали непосредственно из магазинных рамок. Мёд отбирали стеклянной палочкой или чайной ложкой из разных мест сота. На пасеке отбор проб меда проводили из 5-7 ульев, пробы включали разные сорта меда, которые отличались по ряду признаков: цвету, вкусу, вязкости и чистоте. В каждой пробе было не менее 100 г меда, который помещали в чистую стеклянную посуду. Мед в пробе тщательно перемешивали и снаружи посуды наклеивали этикетку.

Отбор проб прополиса проводили следующими способами: отбором прополиса с ульевых рамок; с помощью разборных потолочин; путем обработки запрополисованных холстинок и деревянных или полиэтиленовых рамок-решеток. Прополис для проведения исследований упаковывали в количестве 1020 г. Для проведения анализов прополис хранили в темном месте, в полиэтиленовых мешочках.

Сбор пыльцы проводили с помощью пыльцеуловителей, отбирали среднею пробу по общепринятым методикам. Перга извлекалась из сот, замораживалась, отмывалась от меда и воска, затем сушилась. Для проведения анализов необходимо не менее 3 г пыльцы или перги.

2.5 Методика приготовления препаратов из пыльцы, меда и перги для определения ботанического происхояедения меда

Для приготовления препаратов из меда использовалась методика А. Маурицио и Ж. Луво (А.Маипсю е1 I. Ьоиуеах, 1965). 10 г меда заливали 20 мл холодной дистиллированной воды и ставили в водяную баню с температурой до +45 °С до полного растворения меда. Затем раствор центрифугировали в центрифуге ОЛМЦ (Россия) в течение 15 мин со скоростью 2400 об/мин. После этого жидкость сливали, а осадок переносили на предметное стекло. После незначительного подсыхания капли пыльцу фиксировали 96%-ным спиртом, окрашенным фуксином.

Гербарный препарат получали следующим образом. Пыльник помещали на предметное стекло, нанося на него 2-3 капли 96%-ного спирта, после чего добавляли 2-3 капли дистиллированной воды и подогревали стекло до полного исчезновения влаги. Затем препаровальной иглой разрушили оболочку пыльника, а пыльцевые зерна фиксировали на 2-3 капли 96%-ным спирта, слабо окрашенного фуксином. Через 3-4 дня готовили препарат.

Пергу, извлеченную из 15 ячеек с разных участков сота, помещали в чашку Петри, заливали дистиллированной водой и выдерживали в течение 3 ч. до её полного размягчения.

После размягчения пергу осторожно перемешали стеклянной палочкой. Через 20-30 мин., убедившись в том, что пыльцевые зерна отделены друг от друга, жидкость сливали, а из осадка делали мазок на обезжиренном предметном стекле.

Процентное соотношение видового состава пыльцы в препаратах из перги и меда определяли под микроскопом Миктрон (Россия), подсчитывая не менее 200 пыльцевых зерен и одновременно определяя их видовую принадлежность (Бурмистров, Никитина, 1990, Ишемгулов, 2012).

Анализ проводился с выполнением требований ГОСТ Р 52940-2008 «Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен».

2.6 Методика определения загрязнений атмосферы выхлопными газами автотранспорта х

Оценка загрязнений атмосферы выхлопными газами автотранспорта производилась согласно «Методике определения выбросов автотранспорта для проведения сводных расчетов загрязнения атмосферы городов» (Москва, 1999).

Выброс I -го загрязняющего вещества (г/с) движущимся автотранспортным потоком на автомагистрали (или ее участке) с фиксированной протяженностью (км) определяется по формуле:

А збооГ ' 4" (1)

^ (г/км) - пробеговый выброс ьго вредного вещества автомобилями к-й группы для городских условий эксплуатации, определяемый по таблице; к - количество групп автомобилей;

вк (1/час) - фактическая наибольшая интенсивность движения, т.е. количество автомобилей каждой из групп, проходящих через фиксированное сечение выбранного участка автомагистрали в единицу времени в обоих направлениях по всем полосам движения;

к

- поправочный коэффициент, учитывающий среднюю скорость

движения транспортного потока ( (км/час) на выбранной автомагистрали (или ее участке), определяемый по таблице);

1/3600-коэффициент пересчета "час" в "сек";

Ь (км) - протяженность автомагистрали (или ее участка), из которого исключена протяженность очереди автомобйлей перед запрещающим сигналом светофора и длина соответствующей зоны перекрестка (для перекрестков, на которых проводились дополнительные обследования).

Для определения характеристик автотранспортных потоков на выбранном участке дорожной сети (ул. 8 Марта, г. Уфа) проводился учет проходящих автотранспортных средств в обоих направлениях с подразделением автотранспортных средств по группам. Подсчет проходящих на данном участке транспортных средств проводился в течение 20 мин каждого часа.

2.7 Методика электрофореза пчел методом изоферментного анализа

Для выявления изоферментов в гелях после электрофореза использовали гистохимические методы (МапсЬепко, 1994). Исследовали изоферменты малатдегидрогеназы (МБН, 1.1.1.37) - одного из немногих полиморфных ферментов пчелы медоносной (Талипов и др., 2007). Название и номер фермента даны в соответствии с рекомендациями номенклатурного комитета Международного союза биохимиков (Корочкин, 1977), локус и аллели обозначались согласно системе (РгакаБЬ е1 а1., 1969).

Экстракцию ферментов одной особи проводили в 200-400 мкл экстрагирующего буфера (0.1 М трис-HCl, pH 8.0), содержащем 17 % сахарозы. Для этого использован гомогенат целой особи в 200-400 мкл буфера в фарфоровых ступках. После экстракции ферментов гомогенат центрифугировали в течение 15 минут при 15 тыс. об/мин при t = 0° С на микроцентрифуге для удаления разрушенных тканей. Разделение изоферментов проводили методом полиакриламидного гель-электрофореза (Ornstein, 1964; Davis, 1964).

Гистохимическое выявление активности MDH в гелях осуществляли по методике (Корочкин, 1977). Генетический контроль малатдегидрогеназы изучали при помощи анализа фенотипов изоферментов. Отклонения от ожидаемого соотношения 1:1 оценивались по стандартному критерию у2. При анализе уровня изменчивости локуса, контролирующего биосинтез малатдегидрогеназы, нами использовались стандартные методы и показатели, наиболее часто и успешно применяемые в популяционной экологии и генетике: частота аллелей и генотипов, ожидаемая (Не) и наблюдаемая гетерозиготность (Но), индекс фиксации Райта F (коэффициент инбридинга), число генотипов (в том числе встречающиеся с частотой не менее 1 %), число аллелей на локус А (в том числе с введением критериев полиморфности). Эти параметры, а также показатель уровня межвыборочной дифференциации Fst вычисляли с использованием компьютерной программы BIOS YS-1 (Swofford, Seiander, 1981).

2.8 Методика проведения твердофазного иммуноферментного анализа содержания гормонов в нектаре, пыльце и мёде

Твердофазный иммуноферментный анализ (ТФИФА) используется в физиологии растений для проведения экспресс определения фитогормонов в растительном материале. Нами он был адаптирован для продуктов пчеловодства (Фархутдинов и др, 2010).

2.8.1 Определение содержания гормонов растений в нектаре

Цитокинины, содержащиеся в аликвоте нектара, концентрировали на картридже С-18. Картридж С-18 уравновешивали дистиллированной водой. Водный остаток, предварительно осветленный центрифугированием, наносили на колонку, которую затем промывали 20 мл дистиллированной воды. Цитокинины элюировали 70 % спиртом, упаривали досуха и, растворив в минимальном количестве 80 % спирта, наносили на силуфоловую пластину для тонкослойной хроматографии (ТСХ), которую проводили в системе растворителей бутанол: аммиак: вода (6:1:2). После детекции в УФ свете положения метчиков зеатина, дигидрозеатина, изопентениладенина и их рибозидов, которые добавляли к половине экстракта, содержимое зон элюировали 0,1 М фосфатно-солевым буфером (рН 7,4). После удаления силикагеля путем центрифугирования в надосадочной жидкости определяли содержание цитокининов с помощью иммуноанализа.

Экстракцию АБК и ИУК из аликвоты нектара проводили по модифицированной схеме с уменьшением объема (УеБе1оу е1 а1., 1992). Водный остаток подкисляли до рН 2-3 1н раствором соляной кислоты, затем экстрагировали диэтиловым эфиром (дважды) в соотношении 1:5 (органическая фаза/водная фаза). Из объединенной органической фазы АБК и ИУК реэкстрагировали 1 % раствором гидрокарбоната натрия, взятым в соотношении 1:3 (водная фаза/органическая фаза). Органическую фазу отделяли и отбрасывали, а из водной (после подкисления до рН 2-3) вновь дважды извлекали гормоны диэтиловым эфиром и метилировали их диазометаном (Кислин и др., 1983). Диазометан получали из нитрозометилмочевины (Беккер и др., 1979). Для этого в колбу помещали 40 %-ный раствор КОН и эфир в соотношении 1:3 и при постоянном помешивании на магнитной мешалке небольшими порциями прибавляли 3-5 г нитрозометилмочевины. Через 10 минут сливали раствор диазометана в эфире, который при комнатной температуре добавляли к образцам до сохранения устойчивого слабого пожелтения. После завершения реакции

образцы упаривали досуха и непосредственно перед проведением иммуноферментного анализа растворяли в 100 мкл 80 %-ного этанола.

2.8.2 Определение содержания гормонов растений в меде

Особенностью определения фитогормонов в меде является то, что мед первоначально разводили теплой дистиллированной водой (не более 30 °С) в соотношении 1:10. Затем для определения ИУК и АБК брали аликвоту для эфирной экстракции, которую проводили по вышеописанной схеме.

Для определения цитокининов в меде проводили бутанольную экстракцию. В мед, разведенный теплой водой в соотношении 1:10, добавляли бутанол в соотношении 1:3, органическую фазу отделяли, а из водной вновь дважды извлекали гормоны. Объединенную органическую фазу упаривали досуха и непосредственно перед проведением иммуноферментного анализа растворяли в 100 мкл 80 %-ного этанола.

2.8.3 Определение содержания гормонов растений в пыльце

Для определения содержания гормонов в пыльце материал гомогенизировали и экстрагировали 80%-ным этанолом. Спиртовой экстракт отделяли центрифугированием и упаривали до водного остатка. Остальные действия такие же, как и пп 2.8.1.

2.8.4 Определение содержания гормонов растений в нектаре

Для определения содержания гормонов в нектаре необходимо первоначально произвести определение содержания Сахаров в нектаре по методике химического анализа Р.Бертрана и др. Затем нектар разбавляли до концентрации 5-8 % Сахаров. Остальные действия такие же, как и пп 2.8.1.

2.8.5 Твердофазный иммуноферментный анализ (ТФИФА)

Иммуноферментный анализ проводили в лунках полистиролового планшета (Linbro, Castar). На первом этапе конъюгат гормона с белком сорбировали на твердой фазе (полистирол). Для этого предварительно разбавленный конъюгат в 0,05 М карбонатном буфере разливали по 200 мкл в каждую лунку и выдерживали в течение 1,5 часов при 37° С. После 3-кратной промывки физиологическим раствором, содержащим 0,05 % поверхностно активного вещества Tween-20 (ФТ) рН 6,8-7,0.(этот же раствор использовали на всех последующих стадиях промывки), в лунки вносили антисыворотку к гормону (по 100 мкл на лунку), разведенную физиологическим раствором, содержащим 0,5 % бычьего сывороточного альбумина и 0,05 % твина 20 (ФТО), вместе с раствором стандарта гормона или растительным экстрактом. Инкубировали при 37°С в течение 1 часа, затем промывали лунки раствором ФТ. Для определения количества сыворотки, прореагировавшей с сорбированными в лунках белковыми конъюгатами гормонов, использовали препарат антикроличьих бараньих антител, меченых пероксидазой. Этот препарат, разведенный в ФТО, разливали в лунки по 200 мкл и инкубировали 1 час при 37° С, после окончания инкубации промывали ФТ. Количество иммуносорбированных антител определяли по цветной реакции субстрата (0,4 мг/мл ортофенилендиамина в 0,06 М фосфатном буфере рН 5,0, содержащем 0,006 % перекиси водорода). Субстрат разливали в лунки по 200 мкл в каждую лунку планшета. Цветная реакция развивалась в течение 15-30 мин, затем ее останавливали 4н серной кислотой (по 50 мкл в лунку). Оптическую плотность измеряли на фотометре Titertek-Uniskan (Швеция) при длине волны 492 нм.

2.9 Методика определения солей тяжелых металлов в продуктах пчеловодства

При изучении пищевого сырья и пищевых продуктов пользовались атомно-адсорбционным методом определения свинца, кадмия, цинка, железа, меди,

хрома, никеля, утвержденным заместителем Главного государственного санитарного врача РФ Монисовым А. А. № 01-19\47 -11 от 25 декабря 1992 г., согласно ГОСТ 30178-96 «Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов». Полученные результаты сравнивали с требованиями СанПин 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» и СанПин 42-123-4089-86 «Предельно допустимые концентрации тяжелых металлов и мышьяка в продовольственном сырье и пищевых продуктах».

Определение тяжелых металлов в продуктах пчеловодства, в основном, проводится приборными методами, для определения которых необходимо специальное высокоточное оборудование, а приготовление различных растворов необходимо как подготовительная часть. Одним из методов аналитической химии, который быстро развивается и широко применяется в лабораториях самого различного профиля, является атомно-адсорбционный анализ. По мнению Прайса Б. (1976)^ атомно-адсорбционная спектрометрия (ААС) по многим признакам является почти идеальным методом. Её характеризуют высокие селективность, воспроизводительность, низкие пределы обнаружения, возможность автоматизации и определения нескольких элементов в одном растворе, экономичность и вариантность в выборе анализируемых образцов и интервала определяемых концентраций. ААС особенно подходит для определения следующих элементов: 1л К, ЯЬ, Сб, Си, ААи, Ве, М^, Са, вг, Ва, Хп, Сё, Н& А1, ва, Т1, 81, РЬ, Аб, В'\, Те, Сг, Бе, Со, №, РсЦХавезов И., Цалев Д., 1983).

Метод основан на минерализации образца в муфельной печи, переведении элементов в солянокислый раствор с последующей атомизацией растворов золы в пламени ацетилен - воздух и определении элемента по величине адсорбции света, испускаемого селективными лампами с полым катодом. Чувствительность определения тяжелых металлов в растворах составляет 0.1% (Туктаров В.Р., 2001)

Испытуемый материал в количестве 2 г помещали в стеклянный стакан вместимостью 100 мл. Стакан накрывали часовым стеклом для предотвращения потерь элемента, кипячения кислоты, затем добавляли 10 мл азотной кислоты и выдерживали при комнатной температуре не менее 30 мин. Затем ставили на электроплитку, медленно нагревали до растворения пробы и кипятили до тех пор, пока не снизится выделение бурых паров окислов азота. Стакан снимали с плитки и охлаждали до комнатной температуры. Приливали 10 мл азотной кислоты и 5 мл концентрированной хлорной кислоты и кипятили до появления тяжелых белых паров хлорной кислоты. В случае потемнения пробы стакан снимали с плитки, охлаждали и по каплям добавляли азотную кислоту. Остаток хлорной кислоты выпаривали до образования влажных солей. Минеральный осадок растворяли в 10 мл раствора азотной кислоты при нагревании.

Содержание элементов в пробах определяли при помощи атомно-адсорбционной спектрометрии на анализаторе ААС-30.

Способ сухой минерализации осуществляли по ГОСТ 26929-86 «Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения токсических элементов». Метод основан на полном разложении органических веществ путем сжигания пробы сырья или продукта в электропечи при контролируемом температурном режиме и предназначен для всех видов сырья и продуктов, кроме продуктов с содержанием жира 60% и более (Туктаров В.Р., 2001).

Подготовку калибровочных растворов, настройку приборов и построение калибровочных графиков атомно-адсорбционной спектроскопии осуществляли в соответствии с инструкциями и паспортами, прилагаемыми к приборам (Хавезов, Цалев, 1983).

2.10 Методика отбора проб растений для изучения микобиоты и методика изучения микобиоты

В качестве растительного объекта был выбран одуванчик лекарственный {Taraxacum officinalis L.), обильно произрастающий на территории продуктивного лёта пчёл. Выбор данного нектаро-пыльценосного растения связан с рядом причин. Время цветения одуванчика совпадает с активацией аскосфероза и появлением его клинических признаков. Пчелы активно посещают данное растение в связи с его хорошей нектаропродуктивностью, кроме того, растение со второй половины мая является лидером пыльцепродуктивности во многих фитоценозах, обеспечивая активно развивающиеся пчелосемьи пыльцой. Важно, что при сборе пыльцы и формировании обножки пчела устойчиво посещает, как правило, растения одного вида (Таранов, 1986).

При изучении микобиоты собирали распустившиеся цветки (10 шт.) в

3 3

стерильные колбы объемом 100 см , заливали их 20 см стерильного физиологического раствора, аккуратно встряхивали колбу в течение 2-3 минут, полученные смывы переносили в центрифужные пробирки, центрифугировали при 2000 оборотах/мин - 15 минут, надосадки сливали, а осадки использовали для посева на питательные среды по общепринятым методикам.

Пыльцевая обножка из пыльцевых зерен одуванчика имеет ярко-оранжевый цвет, угловатая и крупная (Фархутдинов и др., 2010). Это позволяет производить отбор пыльцевой обножки по цвету, после её сбора с помощью пыльцесборника у здоровых семей. Обножка отбиралась по цвету, для подтверждения выборочно проводился пыльцевой анализ с помощью микроскопа и сравнивали наблюдаемое изображение со стандартом пыльцы одуванчика.

Пыльцевая обножка (около 10 г), взятая из пыльцесборника, измельчалась в фарфоровой ступке, затем переносилась в стерильную стеклянную колбу. После добавления 90 мл стерильной дистиллированной воды, колба помещалась на мешалку до получения однородной дисперсной среды. 1 мл взвеси распределялся

по поверхности питательной среды и посевы помещались для культивирования в термостат.

2.11 Методика оценки степени зараженности пчел спорами гриба Ascosphaera apis

Пчелиные семьи с клиническими признаками аскосфероза выявляли в период проведения весенней (начало мая) ревизии пасеки, насчитывающей 250 пчелиных семей.

Оценку степени зараженности рабочих пчёл больных семей спорами гриба проводили отлавливая фуражирующих пчел у летков по 10 шт. в стерильные пробирки. Для обездвиживания их помещали в морозильную камеру холодильника на 20-30 минут, затем заливали 5 мл стерильного физиологического раствора, делали смывы, центрифугировали как указано выше и полученные осадки высевали на питательные среды.

2.12 Методика исследования проб меда на наличие спор гриба Ascosphaera apis

Выделение спор гриба A.apis из меда проводили согласно «Методическим рекомендациям по изучению и разработке способов профилактики и борьбы с аскосферозом пчел».

Анализировались образцы незапечатанного мёда. Первый вариант брался из семей, у которой были явные клинические признаки аскосфероза, а второй был отобран у пчелосемей, у которых отсутствовали симптомы аскосфероза.

2.13. Методика определения колоний гриба Ascosphaera apis

Для проведения микроскопических исследований и выделения чистой культуры гриба в стерильные пробирки были отобраны по 10-15

мумифицированных личинок. В лабораторных условиях личинок помещали в стерильные ступки, заливали стерильным физиологическим раствором и тщательно растирали до получения гомогената.

Каплю гомогената наносили на чистое, обезжиренное предметное стекло, накрывали покровным стеклом и просматривали в световом микроскопе при увеличении х 400. При наличии в поле зрения характерных для A.apis шаров, заполненных спорами, делали посев гомогената на картофельно-декстрозный агар с дрожжевым экстрактом (4%). Инкубировали в термостате в течение 5-10 дней при 25 °С (Жуков, 1995). Идентификацию выросших колоний гриба проводили по общепринятым методикам.

Таксономическую принадлежность определяли по совокупности общепринятых морфологических показателей с использованием соответствующих руководств (Смирнов, Григорян, 1985; Жуков, 1995). Известно, что по встречаемости в микобиоте пыльцевой обножки доминирует род Aspergillus, а к случайным относится род Ascosphaera (Осинцева, Чекрыга, 2008). Так как в нашей работе мы проводили экспресс-тестирование по определению количества зараженных микозами объектов в изучаемой нами системе, мы допускаем возможность ошибки в определении количества зараженных объектов только родом Ascosphaera или комбинированно родами Aspergillus + Ascosphaera. Более того, как показывают данные литературы и наши наблюдения, оба возбудителя часто действуют сочетанно.

/

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Механизмы миграции ТМ и анализ их содержания в трофической цепи «почва-растение-пчела-мед» в зависимости от интенсивности автомобильного движения

Пищевая цепь питания характеризуется взаимоотношениями между организмами, через которые в экосистеме происходит трансформация вещества и энергии. В этой цепи происходит транзит веществ, имеющих определенную ценность для потребителя (макро-, микроэлементы, витамины, гормоны и т.д.), трофических элементов (белки, углеводы и липиды), но передаются также и вещества, оказывающие негативное воздействие на организм консумента, в их числе - тяжелые металлы (ТМ).

В ряде регионов России техногенное воздействие на агропромышленное производство достигло таких масштабов, что производимые продукты питания из-за загрязнения их промышленными отходами являются источниками передачи токсикантов в пищевой цепи. Выделяемые в результате антропогенной деятельности ТМ накапливаются в почве, затем поглощаются растениями, от которых по трофической цепи передаются пчелам и далее через продукты пчеловодства людям, что грозит отравлением и другими серьезными заболеваниями.

Целью данного этапа исследований стало изучение путей передачи ТМ внутри пищевой цепи: «почва-растение-пчела-мёд» в зависимости от интенсивности автомобильного движения. Полученные данные интересны с точки зрения способности растений и особенно пчел к биоаккумуляции ТМ,

поступающих из почвы. На основе полученных сведений можно решать вопросы рационального разведения и содержания медоносных пчел и экологического контроля качества продуктов пчеловодства, сельскохозяйственных угодий и кормов (Кадиров и др,. 1999; Смирнов и др, 2005).

Медоносные пчелы являются уникальными биоиндикаторами загрязнения местности, с помощью которых можно получить широкий комплекс экологических характеристик состояния окружающей среды (Туктаров, 2001; Колбина, 2009; Осинцева и др. 2009).

Нами в данной серии экспериментов было изучено движение ТМ по маршруту «почвенный раствор (источник ТМ) - корень растения - цветок (нектар, отчасти пыльца) - пчела (аккумуляция в теле в процессе переработки нектара) - мёд, прополис». В качестве допущения в наших исследованиях, мы предполагаем отсутствие возможности проникновения ТМ в составе аэрозоля через листья сельскохозяйственных растений (фолиарное поглощение), произрастающих в придорожных агроценозах.

Из литературы известно, что пыльца и прополис также являются поставщиками ТМ в пчелиную семью (Колбина, 2009; Осинцева и др. 2009), однако ТМ в данные продукты пчеловодства могут попасть, минуя исследуемую трофическую цепь.

ТМ чаще всего накапливаются вблизи источника загрязнения, в том числе -в почве у автомагистралей. В связи с этим, часто пчелиные семьи используются как удобный инструмент для проведения апимониторинга местности для выявления источника загрязнения (Коркина, 2009).

Автомагистрали, в зависимости от интенсивности движения автотранспорта, оказывают различное неблагоприятное воздействие на придорожные экологические системы - биотопы, активно загрязняя их ТМ, попадающими туда через выхлопные газы, которые образуются при работе двигателей внутреннего сгорания. Как показывают в том числе и наши наблюдения, часто кочевые пасеки располагаются вблизи автомагистралей. Таким расположением владельцы пасек обеспечивают себе хорошие подъездные пути

для временного содержания пчелиных семей. Пчелы, собирающие нектар растений, вступают в прямую трофическую связь с растениями придорожных биотопов.

Забор проб на ТМ (почва, растения, пчелы и мёд) производился на трех кочевых пасеках, располагающихся на гречишных полях, примерно через 20 дней после прибытия на медосбор.

Пасека (проба № 1) располагалась примерно в 400 м от автомагистрали М5 «Урал» Москва - Уфа - Челябинск (Благоварский район РБ), которая является дорогой 1-й категории с определенной интенсивностью движения в 12700 ± 2500 автомобилей в сутки. Проба № 2 - пасека в 300 м от автотрассы 3-й категории Стерлитамак - Киргиз-Мияки в Стерлибашевском районе РБ с интенсивностью движения - 2200 ± 440 автомобилей в сутки. Контроль (проба 3) пасека располагалась в 8 км от автомагистрали Стерлибашево - Федоровка (4 категории, с интенсивностью движения 450 ± 60 автомобилей в сутки). Содержание ТМ (свинец, кадмий, железо, цинк, медь, ртуть) в пробах определяли при помощи атомно-адсорбционной спектрометрии на анализаторе ААС-30 (Таблица 1).

При оценке проб на содержание ртути во всех пробах не было обнаружено достоверных значений в исследуемых материалах, поэтому эти данные не обсуждаются в работе.

Почвы в районе пробы 1 относятся к типичным, среднемощным, среднегумусным, тяжелосуглинистым черноземам, в районе проб 2 и 3 - это выщелоченные, среднемощные, среднегумусные, тяжелосуглинистые черноземы. По мнению профессора Миндибаева Р.А., с участием которого были определены исследуемые типы почв, структурные различия в почвах в изучаемых пробах не существенно повлияют на естественную миграция ТМ в почвенном растворе и доступность ТМ для растений.

Как видно из полученных нами данных, наибольшее содержание тяжелых металлов наблюдалось в пробах почвы, оно в несколько раз было больше, чем в последующих изучаемых элементах трофической цепи (Таблица 1) Предположение, что в связи с запрещением использования этилированного

бензина потерялась актуальность изучения транспорта свинца, как показали наши исследования, оказалось ошибочным. Вероятно, это связано с тем, что в почве накопилось достаточно большое количество данного элемента.

Таблица 1 Содержание тяжелых металлов в исследуемых образцах, мг/кг

Образцы РЬ, М±т са, М±т Ге, М±т Zn, М±т Си, М±т

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Туктарова, Юлия Варисовна

ВЫВОДЫ

1. При исследовании миграции ТМ по трофической цепи установлен высокий уровень содержания свинца (1,3 мг/кг) и кадмия (0,05 мг/кг), превышающий ПДК СанПин - 2.3.2.1078-01, в мёде, полученном вблизи автомагистрали с высокой интенсивностью движения (трасса М5 «Урал»).

2. Последовательная оценка содержания ТМ в трофической цепи показала, что организм пчелы является биоаккумулятором для большинства изучаемых поллюантов (индекс аккумуляции в . пробе 1, кадмий (4,25), цинк (8,06), медь (2,41). Эффект кумуляции свинца и железа в теле пчел не наблюдался. Учитывая относительно недолгую жизнь пчел летом (30-40 дней), можно предположить, что аккумуляция токсических веществ в их теле является способом сохранения здоровья пчелиной семьи в условиях антропогенного загрязнения.

3. Использование твердофазного иммуноферментного метода для определения фитогормонов в продуктах пчеловодства позволяет определять вещества фитогормональной природы (ИУК, АБК и цитокинины) в мёде, нектаре, пыльце и перге.

4. Источником поступления ауксинов и цитокининов в мед в основном является нектар, а уровень содержания АБК в меде формируется из двух частей, одна за счет АБК, поступающей из нектара, а другая, вероятно, выделяется самими пчелами.

5. При изучении путей движения спор гриба Ascosphaera apis было установлено, что наибольшая обсемененность спорами гриба наблюдается у взрослых пчел из семей с выраженными признаками аскосфероза 78±3 %, 37 % исследованных взрослых пчёл из семей, не имеющих признаки болезни, несли на себе споры гриба, число обсеменённых цветков одуванчика составило около 10 %, также примерно у 10 % проб пыльцевой обножки установлено наличие спор А. apis, и только в пробах меда отсутствовали признаки контаминации спорами гриба.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Даже кратковременное пребывание пчелиных семей на территориях, загрязненных тяжелыми металлами, приводит к накоплению ТМ в теле пчел и продуктах пчеловодства. В связи с этим, является недопустимым размещение пасек ближе 3 км (радиус продуктивного лёта пчел) от оживленных автомагистралей.

Определение уровня содержания фитогормонов в меде необходимо проводить согласно методическим рекомендациям «Твердофазный иммуноферментный анализ содержания фитогормонов в нектаре, пыльце и меде» (Утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 3/2 от 8 июня 2010 г.).

Знание уровня содержания фитогормонов позволяет более рентабельно использовать гормональные препараты, рекомендуемые для повышения продуктивности пчелиных семей, а также оценивать стимулирующие свойства продуктов пчеловодства.

Полученные результаты могут быть использованы при составлении научной и информационной литературы, в учебном процессе, а также в зооветеринарной практике.

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АБК - абсцизовая кислота ИА - индекс аккумуляции ИУК - индолилуксусная кислота КПВ - коэффициент перехода веществ РБ - Республика Башкортостан ТМ - тяжелые металлы

ТФИФА - твердофазный иммуноферментный анализ A.apis - Ascosphaera apis

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что пчела, собирая нектар растений, вступает в прямую трофическую связь с растением, получая у него часть углеводистых и других компонентов, выделяемых вместе с нектаром. Платой за доступ к единственному источнику питания является обязательство исполнения форических связей, которые проявляются в том, что один вид участвует в переносе семян, спор, пыльцы растений (зоохория).

Как было отмечено в обзоре литературы, в трофических связях, как правило, рассматриваются её трофические компоненты (белки, жиры, углеводы), что верно с точки зрения названия самой цепи. Однако, как показали и наши исследования, необходимо анализировать и миграцию веществ, которые оказываются вовлеченными в общий трофический транспорт. «Попутчики» могут нести потенциальную опасность для общего организма пчелиной семьи как, например, кадмий и свинец, или быть вероятными биогенными веществами как цинк, железо и медь. Организм пчелы оказался эволюционно способным к аккумуляции токсических веществ, тем самым очищая запасаемый на зиму корм, что является показателем адаптационной способности пчелы медоносной. Наши попытки установить различия в генетической дифференциации привели к установлению замечательного факта. Пчелы из семей, находящихся в течение трех лет в условиях повышенного антропогенного загрязнения, имели по данным изоферментного анализа сравнительно более высокое генетическое разнообразие. Как известно, чем оно выше, тем больше шансов для выживания организмов в условиях постоянно меняющейся среды. По Б. Небелу выживание вида обеспечивается его генетическим разнообразием и слабым воздействием внешних условий.

Установить истинную роль фитогормонов в физиологии пчелиного организма пока доподлинно никому не удавалось. Нашими исследованиями было показано, что данные вещества присутствуют в нектаре, меде, пыльцевой обножке и перге. Для части гормонов удалось показать его транспорт с нектаром. В случае же с АБК возникло предположение, что вещества, близкие по химической природе с данным гормоном, могут добавлять сами пчелы. Какова роль данных веществ, как отмечалось ранее, пока неизвестно. Логичным выглядит предположение, что фитогормоны, как и в растениях, выполняют сигнальную роль в регуляции жизнедеятельности пчелиной семьи. Вероятно, растения исходя из мониторинга экологических факторов передают информацию в нектар и, следовательно, в мед о стратегии развития пчелиной семьи на следующий год, а поступающий вместе с нектаром набор гормонов играет тактическую роль в году нынешнем.

Знание особенностей миграции спор гриба Ascosphaera apis, имеющего довольно узкую специализацию, позволяет оценивать специфику его распространения и проводить профилактические мероприятия, направленные на снижение данного регуляторного действия естественной экосистемы пчелы медоносной.

Инфекционные заболевания (к их числу относится и аскосфероз) являются одними из сильных регуляторов численности насекомых. Данная болезнь довольно редко отмечается в естественных экосистемах, однако в искусственно созданных (пасеки) в последние годы отмечается достаточно сильное распространение этого микоза. Одна из причин распространения аскосфероза -это бездумная деятельность самого пчеловода (бесконтрольное применение антибиотиков и акарицидных препаратов, вызывающих дисбактериоз, нарушение обмена веществ в организме и ослабление естественной резистентности пчел, использование цветочной пыльцы или перги, полученных на пораженных аскосферозом пасеках). Следовательно, с одной стороны, верные ветеринарные и зоотехнические мероприятия, а также знание особенностей природы миграции спор гриба позволяют ограничить распространение гриба в агроценозах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Туктарова, Юлия Варисовна, 2013 год

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Алексеев, Ю.В. Тяжелые металлы в почвах и растениях [Текст] / Ю. В. Алексеев. - Л.: Агропромиздат, 1987. - 142 с.

2. Алексеенко, В. А. Геохимия ландшафта и окружающая среда [Текст] / В .А. Алексеенко. - М.: Наука, 1990. - 142 с.

3. Алексеенко, Ф.М. Справочник по болезням и вредителям пчел [Текст] / Ф.М. Алексеенко, В.А. Ревенок, М. А. Чепурко. - К.: Урожай, 1991.- С.68-73

4. Антимиров, C.B. Фитогормоны при подготовке пчел к медосбору [Текст]/ С. В. Антимиров // Пчеловодство. - 2004. -№ 3. - С. 18-19.

5. Батуев, Ю.М. Вирозы пчел [Текст] / Ю.М. Батуев // Ветеринария. -1977. -№ 9. - С. 25-26.

6. Башмаков, Д.И. Аккумуляция тяжелых металлов некоторыми высшими растениями в разных условиях местообитания [Текст]/ Д.И. Башмаков, A.C. Лукаткин // Агрохимия. - 2002. - №9. - С. 66-71.

7. Беккер, Г. Органикум: практикум по органической химии [Текст] / Г. Беккер, В. Беккер - М: Мир, 1979 - 250 с.

8. Белицкий, Г.А. Химический канцерогенез [Текст] / Г.А.Белицкий // Проблемы клинической медицины. - 2006. - №1. - С. 10-15.

9. Билаш, Г.Д. и др. Малая энциклопедия пчеловодства [Текст] / Г.Д. Билаш и др. - М.: Советская энциклопедия, 1991. - С. 45-50.

10. Бингам, Ф.Т. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов [Текст]/ Ф.Т.Бингам, М. Коста, Э. Эйхенбергер. - М.:Мир, 1993. - 368 с.

11. Бингам, Ф.Т. Токсичность металла в сельскохозяйственных культурах. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов [Текст] / Ф.Т.Бингам, Ф.Д. Перьа, У.М. Джерелл. - М.: Мир, 1993.-С. 101-130.

12. Блинов, H.B. Изыскание новых экологически безопасных средств борьбы с аскосферозом пчел: автореферат дис. ... канд. вет. наук: 16.00.06. /Блинов Николай Валерьевич.- М., 2002. - 24 с.

13. Бойценюк, Л.И. Применение эпибрассинолида в пчеловодстве [Текст]: сборник научных трудов « Полифункциональность действия брассиностероидов» / Л.И. Бойценюк, С. В. Антимиров, А. Г. Маннапов. - М.: ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА имени К.А.Тимирязева, 2007. - С. 322-327.

14. Бойценюк, Л.И. Роль фитогормонов в жизнедеятельности и продуктивности пчелиных семей карпатской породы: дис. ... доктора с.х. наук : 06.02.04/ Бойценюк Леонид Иосифович.-М., 2006.- 42 с.

15. Бойценюк, Л.И. Фитогормоны в жизни растений и пчел [Текст]/ Л.И. Бойценюк, C.B. Антимиров, O.A. Тимашева, O.A. Верещака // Пчеловодство. -2006. -№10.-С. 16-17.

16. Будников, Г.К. Тяжелые металлы в экологическом мониторинге водных систем [Текст]/ Г.К. Будников. - М: Наука. 1998. - 270 с.

17. Бурмистров, А.Н. Медоносные растения и их пыльца [Текст]: справочник /А.Н. Бурмистров, В.А. Никитина - М.: Росагропромиздат, 1990. - 192 с. : ил.

18. Бурмистрова, Л.А. и др. Особенности накопления токсичных элементов отдельными продуктами пчеловодства [Текст] / Л.А.Бурмистрова, Т.М.Русакова, А.С.Лизунова, Л.В.Репникова. Современные технологии производства и переработки меда // Материалы Межд. науч.-практ. конф. по пчеловодству - Новосибирск, 2008. -С. 13-19.

19. Буслаев, Л.Б. Экологические аспекты взаимоотношений медоносной пчелы (Apis mellifera L.) и энтомофильных растений (на примере Helianthus annuus L.) в условиях Западного Предкавказья : дис. ... канд. биол. наук : 03.00.16 / Буслаев Лев Борисович - Краснодар, 2007.- 146 с.

20. Везенцев, А.И. Сорбционная очистка почв от тяжелых металлов [Текст]/А.И.Везенцев, М.А.Трубицын, Л.Ф.Голдовская-Перистая, Н.А.Воловичева // Научные ведомости Белгородского государственного университета. - 2008.- Т.З №6. -С.172-175.

21. Веселов, Д.С. Гормоны растений: регуляция концентрации, связь с ростом и водным обменом [Текст]/ Д.С. Веселов, С.Ю. Веселов, Л.Б. Высоцкая, Г.Р. Кудоярова, Р.Г. Фархутдинов. - М.: Наука, 2007. - 158 с.

22. Гармаш, Г.А. Содержание свинца и кадмия в различных частях картофеля и овощей, выращенных на загрязненной этими металлами почве /Г.А.Гармаш // Химические элементы в системе почва растение. - Новосибирск, 1982.-С.105-110.

23. Гиляров, М.С. Биологический энциклопедический словарь [Текст] / М.С.Гиляров. - М.: Сов. Энциклопедия. 1986. - 831 е., ил., 29

24. Глазунова, К.П. Связь между строением цветков и составом опылителей у некоторых ворсянковых ^рэасасеае) и сложноцветных (Аз1егасеае) с внешне сходными соцветиями-антодиями [Текст] / К. П. Глазунова, Г. М. Длусский // Журнал общей биологии. -2007. - Т. 68, №5.- С.361-378.

25. ГОСТ 17.4.3.01-83 (СТ СЭВ 3847-82) «Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб»: утвержден Постановлением Государственного Комитета СССР по стандартам от 21.12.1983 №6393//СПС «Консультант Плюс».

26. ГОСТ 17.4.4.02-84 «Охрана природы. Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализ»: утвержден Постановлением Государственного Комитета СССР по стандартам от 19.12.1984 №4731//СПС «Консультант Плюс».

27. ГОСТ 26929-86 «Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения токсических элементов»: принят Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1994 года, утвержден Постановлением Государственного комитета РФ по стандартизации, метрологии и сертификации 21.02.1995 №78, введен в действие с

01.01.1996 // СПС «Консультант Плюс».

28. ГОСТ 30178-96 «Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов»: утвержден Постановлением Государственного комитета РФ по стандартизации, метрологии и сертификации от

26.03.1997 №112// СПС «Консультант Плюс».

29. ГОСТ Р 52940-2008 «Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен»: утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17.07.2008 №142-СТ// СПС «Консультант Плюс».

30. Гробов, О.Ф. Болезни и вредители пчел [Текст] / О.Ф.Гробов, А.К.Лихотин. - Изд-во Мир, 2003. - Изд. 2-е, перераб., доп. - 288 с.

31. Губайдуллин, Н.М. Стимулирующие подкормки, аэроионизация и продолжительность жизни пчел [Текст]/ Н.М. Губайдуллин, А.Г. Маннапов // Пчеловодство. - 2008. - №10. - С. 12.

32. Дементьев, Е.П. Аэронизация микроклимат зимовки - качество зимовки [Текст]/ Е.П. Дементьев, А.Г. Маннапов// Пчеловодство. - 1994. - №4. -С.8-10.

33. Дементьев, Е.П. Современные проблемы зоогигиены и пути их решения [Текст] / Е.П. Дементьев, В.Г.Тюрин / Современные проблемы зоогигиены и ветеринарной санитарии: сб.научн.трудов: 30 лет каф.зоогигиены, эпизоотологии и основ ветеринарной санитарии /Башкирский ГАУ. - Уфа,2000. - С.24-28.

34. Добровольский, В.В. География микроэлементов. Глобальное рассеивание [Текст]/ В.В. Добровольский. - М.: Мысль, 1983. - 269 с.

35. Еськов, Е.К. Аккумуляция тяжелых металлов в теле пчел [Текст] / Е.К.Еськов, Г.С.Ярошевич, М.Д.Еськова, Г.А.Кострова, Г.М.Ракипова //Пчеловодство. -2008. - №2. - С.14-16.

36. Еськов, Е.К. Содержание тяжелых металлов в почве, пчелах и их продуктах [Текст] / Е.К.Еськов и др.// Пчеловодство. - 2001. - № 4.- С. 14-15.

37. Еськов, Е.К. Техногенные загрязнения природной среды и пчелы [Текст] /Е.К. Еськов //Пчеловодство. - 2006. - №7. - С. 10-13.

38. Ефименко,А.А. Апимониторинг биоресурсов пчеловодства Краснодарского края и оценка их состояния на загрязненность антропогенными поллютантами: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.02.14 / Ефименко Александр Александрович. - М. 2012. -23 с.

39. Жеребкин, М. В. Зимовка пчел [Текст] / М. В. Жеребкин. - М.: Россельхозиздат, 1979. - 151 с.

40. Жуков, A.A. Биологические свойства гриба Ascosphaera apis и меры борьбы с аскосферозом пчёл: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 16.00.06 / Жуков Аслан Ахиедович. - М., 1995, - 20 с.

41. Иванов, Д. Н. Спектральный анализ почв [Текст] / Д.Н.Иванов.. -М.:Колос, 1974.-350 с.

42. Ильин, В.Б. Микроэлементы и тяжелые металлы в почвах и растениях Новосибирской области [Текст] / В.Б.Ильин, А.И.Сысо. - СО РАН,2001 - 231 с.

43. Ильин, В.Б. Тяжелые металлы системе почва - растение [Текст] / В. Б. Ильин. - Новосибирск: Наука, 1991. - 151 с.

44. Исследование токсических элементов в продуктах пчеловодства [Текст] / Т.М. Русакова и др. // Пчеловодство. - 2006. -№ 9. - С. 10-13.

45. Ишемгулов, A.M. Качество пыльцы Башкортостана [Текст]/ А.М.Ишемгулов, Н.З.Ишемгулова // Пчеловодство. - 2006. - №2. - С.58-59.

46. Ишемгулов, A.M. Пыльценосные растения Башкортостана [Текст]/

A.М.Ишемгулов. - Уфа:Информреклама, 2012. - 336 с.:ил.

47. Ишкильдин, А.Т. Технологическое обоснование производства экологически чистых продуктов пчеловодства: автореферат дис. ... канд. с-х. наук: 06.02.04 / Ишкильдин Азамат Талгатович. - Уфа, 2004. - 24 с.

48. Кабата-Пендиас А. Микроэлементы в почвах и растениях [Текст]/ А. Кабата-Пендиас, X. Пендиас. - М.: Мир, 1989. - 439 с.

49. Кадиров, P.A. Экологические проблемы производства продукции пчеловодства Башкортостана и охрана окружающей среды [Текст] / Р.А Кадиров,

B.Р.Туктаров, М.Ю.Кроль // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. - т. 107. -1999. -С.91-94.

50. Картографические данные [Электронный ресурс] www.maps.google.com - 10.03.2013.

51. Кашина, Г.В. Эколого-токсикологические основы системы защиты медоносных пчел от болезней и вредителей:автореф.дис.... д.б.н. 03.00.16 /Кашина Галина Васильевна. - Красноярск, 2009. - 36 с.

63. Красиков, С. И. Поллютанты и их воздействие на здоровье человека [Текст]: материалы Всероссийской научной школы для молодежи «Приборное и научно-методическое обеспечения исследований и разработок в области биомедицинских и ветеринарных технологий жизнеобеспечения и защиты человека и животных» : / науч. ред. С. И. Красиков, Е. Н. Лебедева, Е. Г. Ревкова, О. А. Свиридов. - Оренбург : ОГИМ, 2010.- 184 с.

64. Кривцов, Н.И. Получение и использование продуктов пчеловодства [Текст] / Н.И. Кривцов, В.И. Лебедев. - М.: Нива России, 1993. - 285 с.

65. Кузнецов, М.Н. Экологические последствия загрязнения тяжелыми металлами фитоценозов Центральной России: автореферат дис. ... доктора с-х.наук: 03.00.16/ Кузнецов Михаил Николаевич. - Орел, 2009.- 21 с.

66. Кулаева О.Н. К вопросу о влиянии корневой системы на обмен веществ листа [Текст]/ Тезисы докладов конференции «Корневое питание в обмене веществ и продуктивность растений». - М.:Изд-во АН СССР,1961. - С.89.

67. Кулаева, О.Н. Цитокинины, их структура и функция [Текст] / О. Н. Кулаева. - М.: Наука, 1973 - 263 с.

68. Ларионов, Г. А. Миграция меди, кадмия, свинца в системе: почва -растение - животное: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 16.00.06 / Геннадий Анатольевич Ларионов. - М., 1997. - 23 с

69. Лебедев, В.И. Экологическая чистота продуктов пчеловодства [Текст] / В .И. Лебедев, Е.А. Мурашова // Пчеловодство. - 2003. - № 4. - С.42-44.

70. Лебедева, О.Ю. Распределение форм тяжелых металлов в почвах Костромской области [Текст]/ О.Ю. Лебедева, Г.Т.Фрумин // Общество. Среда. Развитие. - 2010. - №3. - С.239-242.

71. Ломаев, Г.В. Концепция экологического апимониторинга [Текст] / Г.В Ломаев, Н.В.Бондарева // Пчеловодство. - 2007. - № 3. - С.10-12.

72. Лопатина, П.Г. Сигнальная деятельность в семье медоносной пчелы (Apis melliferaL.) [Текст] / П.Г.Лопатина. - Л., 1971. -154 с.

73. Люттге, У. Передвижение веществ в растениях [Текст] /У. Люттге, Н. Хигимботам. - М.:Наука, 1984. - 408 с.

74. Макаров, Ю.И. Пчелы и их продукты в экологическом мониторинге [Текст]/Ю.И.Макаров, A.B. Авчинников, Е.Г. Жук, Т.Л. Черятникова, В.А. Онуфриев, И.Н. Мишин // Пчеловодство. - 1995. - №1. -С. 14-15.

75. Маннапов, А.Г. Каталазная активность ректальных желез и качество зимовки пчел и иных семей при искусственной аэронизации [Текст] / А. Г. Маннапов, Е. П. Дементьев, Э.А.Ситдикова / Гигиена, ветсанитария и экология животноводства: материалы Всерос.научно-произв.конференции. - РАСХН (и др.).-г.Чебоксары, 1994. - С.272-273.

76. Мачнев, А.Н. Эпизоотическая обстановка на пасеках России на рубеже тысячелетий [Текст] / А.Н Мачнев, H.A. Яременко // Пчеловодство. - 2000. - №1. -С.5.

77. Машенков, О.Н. Превращения щавелевой кислоты при нагревании [Текст] / О.Н.Машенков // Пчеловодство. -2000. - №7. - С.35.

78. Методика определения выбросов автотранспорта для проведения сводных расчетов загрязнения атмосферы городов (утверждена приказом Госкомэкологии России № 66 от 16 февраля 1999 г.) // СПС «Консультант Плюс».

79. Методические рекомендации по изучению и разработке способов профилактики и борьбы с аскосферозом пчел, по приготовлению препаратов пчел и других насекомых для микроскопии / А.М. Смирнов, С.Н.Луганский, А.Г.Григорян, И.Б.Павлова и др. - М. : 1987. - 24 с.

80. Методические указания 2.1.7.730-99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест» утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 7 февраля 1999 г. // СПС «Консультант Плюс».

81. Методические указания N 2051-79 «Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (утв. Минздравом СССР 21.08.1979 N 2051-79) // СПС «Консультант Плюс».

82. Методические указания по определению тяжелых металлов в почвах сельхозугодий и продукции растениеводства (утверждены Министерством сельского хозяйства РФ 10.03. 1992) // СПС «Консультант Плюс».

83. Методические указания по санитарно-микробиологическому исследованию почвы N 2293-81 (утверждены Министерством здравоохранения СССР 19.02.81) // СПС «Консультант Плюс».

84. Мишин, И.Н. Влияние экологических условий места расположения пасеки на накопление резервных и загрязняющих веществ в теле пчел [Текст]/ Актуальные проблемы ветеринарной науки /И.Н.Мишин, Макаров Ю.И. - М., 1999. -С.69-71.

85. Мукминов, M.JI. Интегрированная система профилактики борьбы с основными микозами пчел : автореф. дис. ... докт. биол. наук: 16.00.06/ Мукминов Малик Нилович. - М., 2006. - 36 с.

86. Муромцев, Г.С. Регуляторы роста растений [Текст] / Г.С.Муромцев // Аграрная наука. - 1993. - №3. - С. 21-24.

87. Наумкин, В.П. Биомониторинг медоносных растений и продуктов пчеловодства [Текст] / В.П.Наумкин // Пчеловодство. -2012. - № 3.- С.6-7.

88. Нолленфорд, А.Ф. Микроэлементы в комплексе минерального питания растений [Текст] / А.Ф. Нолленфорд, В.В.Упитис, Д.С. Покомне. - Рига: Знание, 1975. - С.190-216.

89. Нужнова, O.K. Экологический анализ взаимоотношений насекомых-опылителей с растениями в условиях широтного градиента: на примере брюквенницы Pieris Napi L.: автореф. дис. ... канд.биол.наук: 03.02.08, 03.02.01/ Нужнова Ольга Камильевна. - Мурманск, 2011.

90. Осинцева, JI. А. Грибы пыльцевой обножки медоносных пчел [Текст] / JI.A. Осинцева, Г.П. Чекрыга // Микология и фитопатология. - 2008. - т. 42, №5. - С. 464 - 469.

91. Осинцева, J1. А. Накопление тяжелых металлов в продуктах пчеловодства [Текст]/ Л.А. Осинцева, К.Я. Мотовилов, В.И. Коркина // Сельскохозяйственная биология.- 2010. - № 2. - С.88-90.

92. Осинцева, Л.А. Качество продуктов пчел на юге Западной Сибири [Текст] / Л.А. Осинцева, В.И. Коркина, М.В. Волкова // Пчеловодство. - 2009. - № 7. -С. 50-51.

93. Осинцева, JI.А. Пчелиная обножка - индикатор состояния окружающей среды [Текст] / Л.А.Осинцева // Пчеловодство. - 2004. - №3. - С. 15-17.

94. Панфилов, И.А. Технология и линия приготовления тестообразных подкормок повышенной влажности для пчел: автореф. дис. ... канд.техн.наук: 05.20.01 / Иван Андреевич Панфилов. - Рязань, 2007. - 22 с.

95. Пашаян, С. А. Свойства миграции тяжелых металлов [Текст]/ С.А.Пашаян //Пчеловодство.- 2006.- № 9. - С. 12-13.

96. Першин, Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии [Текст] / Г. Н. Першин. - М.: Медицина, 1971.- З18.с.

97. Петров, И.П. Почвознание и агрохимия [Текст] / И.П.Петров, Д.Л.Цалев. - М.:Колос - 1978. - т. 13 - С.34.

98. Петрович, C.B. Микозы животных [Текст]/С.В.Петрович. - М.: Росагропромиздат, 1989. - 135 с.

99. Подоба, Е.Г. Влияние подкормок на жизнедеятельность пчелиной семьи [Текст]/ Е.Г.Подоба // Пчеловодство. - 1955. - №4. - С. 17.

100. Полевой, В. В. Физиология растений [Текст]: учеб. для биол. спец. вузов / В. В. Полевой. - М.: Высш. шк., 1989.- 464 с.

101. Полтев, В.И. Болезни и вредители пчел (с основами микробиологии) [Текст]/ В. И. Полтев, Е. В. Нешатаева. - М.: Колос, 1984. - 176 с.

102. Поправко, С.А. Защитные вещества медоносных пчел [Текст] / М.: Колос, 1982.- 159 с.

103. Протасова, H.A. Редкие и рассеянные элементы в почвах Центрального Черноземья [Текст] / Н. А. Протасова, А. П. Щербакова, М.Т. Копаева. - Воронеж: ВГУ, 1992. - 168 с.

104. Прохорова, Н.В. Тяжелые металлы в почвах и растениях в условиях техногенеза [Текст]/ Н.В.Прохорова, Н.В. Матвеев // Вестник Самарского госуниверситета. - 1996. - №2. - С. 125.

105. Рапиев, P.A. Оптимизация биологических показателей медоносных пчел, используемых в защищенном грунте: автореф. дис. ... канд.биол.наук: 03.02. 14 / Рапиев Ришат Абулкарамович. - Москва, 2010.

106. Романов, Г.А. Как цитокинины действуют на клетку [Текст]/ Г.А. Романов //Физиология растений. - 2009. - Т.56, №2. - С.295-319.

107. Русакова, Т.М Окружающая среда и продукты пчел [Текст] /Т.М. Русакова, В.М. Мартынова// Пчеловодство. - 1994. - №1. - С. 14-17.

108. СанПин 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов»: утверждено 06.11.2001 (в ред. Дополнения №й, утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 20.08.2002 N 27) //СПС «Консультант Плюс».

109. СанПиН 42-123-4089-86 «Предельно допустимые концентрации тяжелых металлов и мышьяка в продовольственном сырье и пищевых продуктах»: утверждено 31.03.1986 г.№4089-86//СПС «Консультант Плюс».

110. Сафаргалин, А.Б. Влияние каталазной активности ректальных желез на зимостойкость пчел [Текст]/ А. Б. Сафаргалин, Ф. Г. Юмагужин / Научные исследования в современном мире: проблемы, перспективы, вызовы. Материалы второй международной молодежной научной конференции молодых ученых России и Германии в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно -педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы, Часть I. - Уфа, 2012.-С.231-234.

111. Севастьянов, В.Д. Влияние ростовых веществ на размножение и развитие пчел [Текст] / В.Д.Севастьянов // Пчеловодство. -1952. - № 3. - С. 28.

112. Смирнов, A.M. Диагностика аскосфероза [Текст] / A.M. Смирнов, А.Г. Григорян //Пчеловодство. -1985. - № 7.- С 16 - 17.

113. Смирнов, A.M. Новые подходы к лечению аскосфероза пчел [Текст] / A.M. Смирнов, Г.И. Игнатьева, А.Б. Сохликов // Пчеловодство. - 1999. - №3. - С.20-22.

114. Смирнов, A.M. Требования Европейской комиссии к продуктам пчеловодства [Текст] / A.M. Смирнов, Р.Т. Клочко, О.Ф. Гробов // Ветеринария. -2005. - № 3. - С.3-7.

115. Соловьева, JI. Ф. Факторы, влияющие на сопротивляемость семей аскосферозу [Электронный ресурс]: (возможности актуализации) /Л.Ф. Соловьева

//Пчеловодство. - 2000. №1- Режим доступа: http://www.beekeeping.orc.ru/Arhiv/ а2000/п100 20.htm. - 18.04.2013.

116. Соловьева, Л.Ф. Источники возбудителя аскосфероза [Электронный ресурс]: (возможности актуализации) / Л. Ф. Соловьева // Пчеловодство. - 2001. - № 8. - Режим доступа http://www.beekeeping.orc.ru/Arhiv/a2001/n801 21.htm -17.04.2013.

117. Соловьева, Л.Ф. Лечение пчел [Текст]: рекомендации / Л. Ф. Сольвьева, С.Я.Годяцкий. - Рыбное, 1990.

118. Соловьева, Л.Ф. Профилактика и лечение аскосфероза пчел [Текст]/ Л.Ф.Соловьева. - НИИ пчеловодства. Министерство сельского хозяйства РФ Рыбное, 1997.-39 с.

119. Состояние окружающей природной среды и здоровье населения Республики Башкортостан: аналитическая записка [Текст] - Уфа: Башкортостанстат, -2012. -23 с.

120. Спринчак, Д.В. Детоксикация тяжелых металлов (свинца и кадмия) в системе "почва - растение - животное": автореферат дис. ... канд.биол.наук: 03.00.16 / Спринчак Дмитрий Викторович. - Новосибирск, 2004. - 25 с.

121. Сычев, М.М. Грибковые болезни пчел: профилактика и меры борьбы [Текст] / М. М. Сычев // Пчеловодство. -1995. - №3. -С.19-22.

122. Талипов, А.Н. Морфологическая и генетическая изменчивость пчелы медоносной (Apis mellifera mtllifera L.) в Башкирском Зауралье [Текст] / А. Н. Талипов, Ю. А. Янбаев, Ф. Г. Юмагужин. - Уфа: РИО БашГУ, 2007. - 107 с.

123. Таранов, Г.Ф. Корма и кормление пчел [Текст] / Г.Ф. Таранов. - М.: Россельхозиздат, 1986. -160 с.

124. Тетюшев, В.Е. О подкормке пчел дрожжами с гетероауксином [Текст]/ В. Е. Тетюшев // Пчеловодство.- 1953. - №4. - С. 57.

125. Тимашева, O.A. Подбор фитогормонов и доз [Текст] /O.A. Тимашева // Пчеловодство. - 2004. - № з. - С.12-14.

126. Тимашева, O.A. Фитогормоны и зимовка пчел [Текст] / О. А. Тимашева, Л. И. Бойценюк // Пчеловодство.- 2003. - № 6.- С.15-16 .

127. Тихменев, Е. А. Антэкология растений острова Врангеля [Текст] / Е. А. Тихменев // Ботанический журнал. - 1976. - Т. 61. №2. - С. 164-176.

128. Туктаров, В.Р. Ветеринарные препараты в пчеловодстве [Текст]¡учебное пособие / В.Р.Туктаров. -Уфа, издательство Галиуллин Д.А, 2011. - 136 с.

129. Туктаров, В.Р. Влияние антропогенных поллютантов (свинца, кадмия, железа, цинка, меди, ртути) на медоносных пчел в экологически кризисных районах Башкортостана и разработка средств и способов их лечения: автореф.дис. .. .доктора биол.наук: 16.00.06 / Туктаров Варис Рафкатович. - М., 2001. - 48 с.

130. Туктаров, В.Р. Вопросы экологии и загрязнения продуктов пчеловодства [Текст]: Апитерапия сегодня с биологической аптекой пчел в XXI век: материалы II Международной научно-практической конференции по апитерапии / В. Р. Туктаров. - Уфа. - 2000. - С. 427-428.

131. Фархутдинов, Р.Г. Температурный фактор в гормональной регуляции водного обмена растений: автореф.дис. ... д.б.н.: 03.00.12 /Фархутдинов Рашит Габдулхаевич. - Уфа, 2005. - 48 с.

132. Фархутдинов, Р.Г. Медоносные ресурсы [Текст]: практикум / Р.Г. Фархутдинов, В. Р. Туктаров, A.M. Ишемгулов - Уфа, БГАУ, 2010.- 100 с.

133. Фархутдинов, Р.Г. Твердофазный иммуноферментный анализ содержания фитогормонов в нектаре, пыльце и меде [Текст] / Фархутдинов Р.Г., Кудоярова Г.Р., Туктарова Ю.В., Веселов С.Ю. // Вестник БГАУ. - 2010. - №4 (16). -С.9-14.

134. Федорова, А.И. Загрязнение поверхностных горизонтов почв г. Воронежа тяжелыми металлами [Текст]/ А.И.Федорова, Е.В.Шунелько// Вестник Воронежского университета. Серия География и Геоэкология. - 2003. - № 1. - С. 74 -82.

135. Хавезов, И. Атомно-адсорбицонный анализ [Текст]/ И. Хавезов, Д. Цалев - Л.: Химия, 1983 - 86 С.

136. Херольд, Э. Лекарство из улья: мед, пыльца [Текст] / Э. Херольд, Г. Лейбольд, пер. с нем М. Беляева.- М.: ACT: Астрель, 2006.- 238 с.

137. Чекрыга, Г.П. Факторы формирования микобиоты пыльцевой обножки медоносных пчел: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.16 / Чекрыга Галина Петровна. - Красноярск, 2006. - 20 с.

138. Чернавина, И.А. Физиология и биохимия микроэлементов [Текст]/ И. А. Чернавина. - М.: Высшая школа, 1970. - 310 с.

139. Черненькова, Т.В. Всхожесть семян и рост сеянцев сосны и ели на почвах разной загрязненности тяжелыми металлами в лабораторных условиях [Текст]/ Т. В. Черненькова, И. И. Сизов. // Изв. АН СССР. Сер.Биол.- 1986 - №4. - С. 601-607.

140. Черненькова, Т.В. Реакция лесной растительности на промышленное загрязнение [Текст] / Т.В. Черненькова, под редакцией A.C. Исаева. - М.: Наука. -2002.- 190 с.

141. Чернова, Н.М., Экология [Текст] / Н.М.Чернова, A.M. Былова. - М., 1988, с.230-234.

142. Шевхужев, А.Ф. Совершенствование технологии производства пчелиных маток [Текст]/ А.Ф.Шевхужев, A.M. Нагаев //Пчеловодство. - 2009. - №2 -С.16-17.

143. Шишко, A.A. Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел: автореф. дис. ... канд. биол.наук: 03.00.07, 16.00.04 / Шишко Алексей Альфредович. - Казань, 2006.

144. Шунелько, Е.В. Экологическая оценка городских почв и выявление уровня токсичности тяжелых металлов методом биотестирования [Текст]/ Е.В.Шунелько, А.И.Федорова // Вестник Воронежского университета. Серия География и Геоэкология. - 2002. -№ 1. - С .93-104.

145. Юмагужин, Ф.Г. Об использовании морфологических признаков для решения проблемы сохранения бурзянской бортевой пчелы [Текст] / Ф.Г.Юмагужин, А.Н. Талипов, Ю.А. Янбаев, А.Б. Сафаргалин // Вестник ОГУ. -2009.- №6,- с. 464-465.

146. Янбаев, Ю.А. Генетические аспекты сохранения биологического разнообразия [Текст] / Ю.А. Янбаев, М.Н. Косарев, P.M. Бахтиярова и др. - Уфа: БГУ, 2000,- 108 с.

147. Brenner, W. G, Romanov G. A, Kollmer I., Burkle L., Schmulling T. Immediate-early and delayed cytokinin response genes of Arabidopsis thaliana identified by genome-wide expression profiling reveal novel cytokinin-sensitive processes and suggest cytokinin action through transcriptional cascades [Text] // The Plant Journal. -2005.-V. 44.-P.314-333

148. Comba, L., Corbet S. A., Hunt L. et al. Flowers, nectar and insect visits;

evaluating British plant species for pollinator-friendly Gardens [Text] // Annals of Botany. 1999. Vol. 83, № 4. P. 369-383.

149. D'Agostino, I. B, Kieber J. J. Phosphorelay signal transduction: the emerging family of plant response regulators [Text] // Trends in Biochemical Sciences. - 1999. - V. 24. - P .452—456.

150. Davies, W. J., Kudoyarova G., Hartung W. Long-distance ABA signaling and its relation to other signaling pathways in the detection of soil drying and the mediation of the plant's response to drought [Text] // J. Plant Growth Regul. - 2005. - V. 24. - P.285-295.

151. Davis, B.J. Disc electrophoresis.Methods and application to human serum proteins [Text] / B.J. Davis // Ann. New York Acad. Sci. - 1964. - V. 121. - P. 404-427.

1 152. Dobzanski, Z. Metals and macro- and microelements contect of honey bee gained from areas contaminated by industrial plants [Text] /Z. Dobzanski, A. Roman, H. Gorecka, R. Rolacz/ZBromatologia — I Chemia — Toksykologiczna. 1986. № 2. - P.27.

153. Dodd, I. C. Root-to-shoot signalling: assessing the roles of 'up' in the up and down world of long-distance signalling in planta [Text] // Plant and Soil. - 2005. - V. 274. - P.251-270.Faiss et al., 1997

154. Eriksson, O. Outline of the Asconomycetes. Sustema Asconomycetum [Text] / O. Eriksson, D.Hawksworth. -1984. - P. 79.

155. Faiss M., ZalubiTova' J., Strnad M., Schmulling T. Conditional transgenic expression of the ipt gene indicates a function for cytokinins in paracrine signaling in whole tobacco plants [Text] // Plant J. - 1997. - V. 12. - P.401^15.

156. Frebort I., Kowalska M., Hluska T., Frebortovä J., Galuszka P. Evolution of cytokinin biosynthesis and degradation [Text] // Journal of Experimental Botany. — 2011.— V. 62.-P.2431-2452.

157. Galuszka P., Spichal L., Kopecny D., Tarkowski P., Frebortovä J., Sebela M., Frebort I. Metabolism of plant hormones cytokinins and their function in signaling, cell differentiation and plant development // In: Studies in natural products chemistry / Eds. Atta-ur-Rahman, Amsterdam: Elsevier - 2008 - V.34 - P. 203-264Gazaryan et al., 1996

158. Gregorius, H.-R. The attribution of phenotypic variation to genetic or environmental variation in ecological studies [Text]/ H.-R. Gregorius // Genetic Effects of Air Pollutants in Forest Tree Populations / F. Scholz, H.-R. Gregorius, D. Rudin (Eds.). -Springer-Verlag Berlin Heidelberg. 1989. - P. 3-15.

159. Heath, L. Occurrence and distribution of chalkbrood disease of honeybees [Text] //Bee World. 1985. 66: 9-15.

160. Hutchison, C. E., Li J., Argueso C., Gonzalez M., Lee E., Lewis M. W., Maxwell B. B., Perdue T. D., Schaller G. E., Alonso J. M., Ecker J. R., Kieber J. J. The Arabidopsis histidine phosphotransfer proteins are redundant positive regulators of cytokinin signaling [Text] // Plant Cell. - 2006. - V. 18. - P.3073-3087.

161. Jackson, M. Are plant hormones involved in root to shoot communication [Text] //Adv. Bot. Res. - 1993.-V. 19. - P. 103-187.

162. Jeschke, W. D, Peuke A., Pate J. S, Härtung W. Synthesis, transport and catabolism of abscisic acid in a single leaf and whole plant of castor bean {Ricinus communis L.) under moderate salinity and phosphate deficiency [Text] // J. Exp. Bot. -1997.-V. 48. - P.1737-1747.

163. Kamboj J. S, Blake P. S, Baker D. A. Cytokinins in the vascular saps of Ricinus communis [Text] // Plant Growth Regul. - 1998. - V. 25. - P.123-126.

164. Kiba, T., Naitou T., Koizumi N., Yamashino T., Sakakibara H., Mizuno T. Combinatorial microarray analysis revealing Arabidopsis genes implicated in cytokinin responses through His-to-Asp phosphorelay circuitry [Text] // Plant and Cell Physiology. -2005.-V. 46. - P.339-355.

165. Kudoyarova, G. R, Vysotskaya L. B, Cherkozyanova A., Dodd I. C. Effect of partial rootzone drying on the concentration of zeatintype cytokinins in tomato {Solanum

lycopersicum L.) xylem sap and leaves [Text] // J. of Exp. Bot. - 2007. - V. 58. - P.161-168.

166. Kuroha , T., Kato H., Asami T., Yoshida S., Kamada H., Satoh S. A tranz-zeatin riboside in root xylem sap negatively regulates adventitious root formation on cucumber hypocotyls [Text] // Journal of Experimental Botany. - 2002. - V. 53. -P.2193-2200.

167. Milborrow, B., Lee H-S. Endogenous biosynthetic precursors of (+) - abscisic acid. VI. Carotinoids and ABA are formed by the non - mevalonate triose - pyruvat pathway in chloroplasts // Aust. J. of Plant Physiol. - 1998. - V. 25. - P.507-512.

168. Milborrow, BV «The pathway of biosynthesis of abscisic acid in vascular plants: a review of the present state of knowledge of ABA biosynthesis». J Exp Bot. 52: 1145-1164. D01:10.1093/jexbot/52.359.1145. PMID 11432933. - 2001.

169. Mok, D. W., Mok M. C. Cytokinin metabolism and action[Text] //Annu Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. - 2001. - V. 52. - P.89-118.Parry et al., 1992

170. Nambara, E, Marion-Poll A. (2005). «Abscisic acid biosynthesis and catabolism». [Text] Annu Rev Plant Biol. 56: 165-185. DOI: 10.1146/annurev.arplant.56.032604.144046. PMID 15862093.-2005.

171. Ornstein, L. Disc-electrophoresis. I. Background and theory [Text] / L. Ornstein//Ann. New York Acad. Sei. - 1964. -V. 121. - P. 321-349.

172. Ricci, A., Bertoletti C. Urea derivatives on the move: cytokinin-like activity and adventitious rooting enhancement depend on chemical structure // Plant Biology. -2009. -V.ll.- P.262-272.Sakakibara et al., 2003

173. Roussy, L. Nouvelle contribution a P'etude du Pericystis apis Agent pathogene d"une mycose mortelle pour les larvas d"Apis melifera (L.) [Text] // La Gazette Apicola 1962. - t 63, № 662 Mai. - P.101-105.

174. Sakakibara, H. Cytokinins: activity, biosynthesis, and translocation [Text] // Annual Review of Plant Biology. - 2006. - V. 57. - P.431—449.Skoog and Armstrong, 1970

175. Sakakibara, H. Nirtate specific and cytokinin-mediated nitrogen signaling pathways in plants [Text] // J. Plant Research. - 2003. - V. 116. - P.253-257.

176. Sedlacek, Z. Vysledek podnecovani vcel hrteroauxinen [Text] / Z.Sedlacek. Vcelarstvi.- 1956

177. Seo M, Koshiba T «Complex regulation of ABA biosynthesis in plants». Trends Plant Sei. 7: 41^8. DOI:10.1016/S1360-1385(01)02187-2. PMID 11804826.-2002.

178. Skoog, F., Armstrong D. J. Cytokinins [Text] //Ann. Rev. Plant Physiol. -1970. -V. 21. - P.359-84

179. Spivak, M. Field Assays for Hygienic Behavior in Honey Bees (Apidae: Hymenoptera) [Text]/ M. Spivak, D. Downey // J. Econ. Entomol. 1998. - V.91.-№1. -p.402-406.

180. Swofford, D.L., Seiander R.B. BIOSYS-1: a FORTRAN program for the comprehensive analysis of electrophoresis data in population genetics and systematics [Text] //J. Heredity. -1981. - V.72. - P.281-283.

181. Tan, B. C., Schwartz S. H., Zeevaart J. A. D., Mc Carty R. D. Genetic control of abscisic acid biosynthesis in maize [Text] // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1994. - V. 94. - P. 12235-12240.Vysotskaya et al., 2010

182. Veselov, S.U., Modified Solvent Partitioning Scheme Providing Increased Specificity and Rapidity of Immunoassay for IAA [Text] / S.U. Veselov [et all.] // Physiol. Plantarum. - 1992. - Vol. 86. - P. 93-96.

183. Vysotskaya, L. B., Veselov S. Yu., Kudoyarova G. R. Effect on shoot water relations, and cytokinin and abscisic acid levels of inducing expression of a gene coding for isopentenyltransferase in roots of transgenic tobacco plants [Text] // J. Exp. Bot. - 2010. -V. 61. -P.3709-3717.

184. Werner, T., Schmtilling T. Cytokinin action in plant development [Text] // Curr. Opin. Plant Biol. - 2009. - V. 12. - P.527-538.

185. Woodward, A.W., Bartel B. The Arabidopsis peroxisomal targeting signal type 2 receptor PEX7 is necessary for peroxisome function and dependent on PEX5 [Text] / A.W. Woodward, B. Bartel - .Molecular Biology of the Cell 16. - 2005.- P. 573-583.

186. Wright, S.T.C., Hiron R.W.P. (+)Abscisic acid, the growth inhibitor induced in detached wheat leaves by a period of wilting [Text] // Nature. - 1969. - V. 224. - P.719-720.

187. Zhang, J.Abscisic acid produced in dehydrating roots may enable the plant to measure the water status of the soil. Plant Cell Environ. [Text] / J. Zhang, W.J. Davies . -1989. P. 73-81.

188. Zhu, JK. Salt and drought stress signal transduction in plants. [Text] / Annu Rev Plant Biol. 53: 247-273. - 2002. DOIrlO.l 146/annurev.arplant.53.091401.143329. PMID 12221975.