Методические особенности анализа микроядер в клетках человека и животных при скрининге и мониторинге кластогенных факторов в окружающей среде тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат медицинских наук Юркин, Александр Юрьевич

• Юркин, Александр Юрьевич
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Юркин, Александр Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ

Глава I Обзор литературы

1.1. Исторические предпосылки в становлении 11 микроядерного анализа

1.2. Методические и методологические 2 6 особенности микроядерного анализа

1.3. Сравнительная оценка микроядерного теста 42 с другими методами цитогенетического анализа

1.4. Использование микроядерного теста при 62 оценке последствий загрязнения условий окружающей среды

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Методические особенности исследования

2.2. Микроядерный тест

2.3. Математико-статистические особенности 75 метода учета клеток с микроядрами

Глава 3 Результаты собственных наблюдений

3.1. Методические подходы к изучению 7 8 микроядер эритроцитов периферической крови у интактных мышей

3.1.1. Результаты микроядерного анализа 7 8 эритроцитов крови, полученных из различных кроветворных органов и крови интактных белых беспородных мышей

3.1.2. Результаты микроядерного анализа 82 полихроматофильных эритроцитов в различных участках стандартного мазка периферической крови белых беспородных мышей

3.1.3. Результаты микроядерного анализа 85 нормохромных эритроцитов белых беспородных мышей в мазках периферической крови при использований различных видов фиксации

3.1.4. Результаты микроядерного анализа 88 нормохромных эритроцитов белых беспородных мышей в мазках периферической крови при использовании различных видов окраски

3.1.5. Результаты микроядерного анализа 90 нормохромных эритроцитов белых беспородных мышей в мазках периферической крови мышей различных линий

3.1.6. Результаты микроядерного анализа 92 нормохромных эритроцитов белых беспородных мышей в мазках периферической крови интактных белых беспородных мышей обоего пола

3.1.7. Результаты микроядерного анализа 93 нормохромных эритроцитов белых беспородных мышей в мазках периферической крови интактных белых беспородных мышей различного возраста

3.1.8. Результаты микроядерного анализа 95 клеток различных органов и тканей интактных белых беспородных мышей

3.2. Изучение микроядер эритроцитов крови у 96 различных видов животных и человека

3.3. Микроядерный анализ и уровень тяжелых 99 металлов в тканях моллюсков Bithynia inflata, обитающих в бассейне р. Томи

3.4. Результаты микроядерного анализа 105 эритроцитов голубей, отловленных в различных городах Сибири, Центральной Азии и Казахстана

3.5. Результаты микроядерного анализа 111 эритроцитов голубей, отловленных на территории Томской области и в городе Томске

3.6. Результаты микроядерного анализа ]15 эритроцитов периферической крови у жителей различных населенных пунктов Томской области

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Методические особенности анализа микроядер в клетках человека и животных при скрининге и мониторинге кластогенных факторов в окружающей среде»

Актуальность проблемы. В настоящее время стало очевидным, что биосфера все более и более загрязняется самыми разнообразными соединениями, с которыми в своем историческом развитии человек не сталкивался. Тревогу вызывает то, что многие из них могут привести к нарушениям генетических структур клеток организма. Уровень рождаемости детей с генетическими аномалиями достиг 10% и есть тенденция к дальнейшему увеличению этого показателя, кроме того, поражение генетических структур соматических клеток может отразиться на здоровье человека и это не только перерождение клеток организма из нормальных в раковые, но и возникновение в связи с мутацией дисфункциональных изменений клеток и тканей. По-видимому, практически любая патология так или иначе затрагивает ядерный аппарат клеток организма. В этой связи в первоочередную задачу исследователей входит поиск и разработка методов, с помощью которых возможно достаточно четко и быстро определить кластогенность и канцерогенность как вновь синтезируемых соединений, так и веществ, широко применяемых в быту, промышленности, сельском хозяйстве и медицине с тем, чтобы обезопасить человека от возможного контакта с источниками мутаций.

По данным М. Фонтакеса и Ю. В. Пашина (1984), с 1970 по 1973 г. ежегодно публиковалось немногим более 1,5 тыс. работ, имеющих отношение к изучению мутагенного потенциала химических соединений, из них с использованием бактерий— 21,6%; грибков, дрожжей—12,6%; растений—5,8%; насекомых—

11,8%; амфибий—5,8%; клеток млекопитающих и человека— 19,4%; лабораторных животных — 22,8%. Вслед за публикациями известных работ Б. Эймса (1973—1975) по использованию в генетическом скрининге сальмонелл, число работ по тестированию химических соединений на мутагенную активность возросло до 3,2—3,3 тыс. в год, причем это произошло за счет абсолютного увеличения числа работ с применением бактериальных систем. Несмотря на ряд «ухищрений» с использованием микросомальных фракций печени, все же следует подчеркнуть, что бактериальные тест-системы и любые другие внеорганизменные тесты не могут в полной мере смоделировать все чрезвычайно сложные процессы биотрансформации, происходящие с потенциальными мутагенами в организме высокоорганизованных теплокровных особей, в том числе и человека.

Разработку микроядерного теста обычно связывают с именем Schmid, хотя он был предложен почти одновременно в 197 0—1973 гг. несколькими группами исследователей [Schroeder, 1970; Boiler and Schmid, 1970; Muller et al., 1972; Hess et al., 1972; Nichols et al., 1973; Heddle, 1973; Schmid, 1973; Miller, 1973] . Метод быстро получил распространение, и по данным Hayashi et al. (1995), уже к 1990 г. имелось не менее 800 работ по микроядерному тесту. К 1998— 2000 гг. количество исследований, выполненных с использованием микроядерного теста, уже исчисляется порядка 5—7 тыс. и продолжает увеличиваться черезвычайно быстрыми темпами. Появилось несколько обзоров, посвященных результатам микроядерного анализа [Jenssen and Ramel, 1980; Almassy et al., 1987; Фраш

В.Н. и Ванчугова Н. Н., 1987; Ильинских Н. Н. и др., 1988]. В США в рамках токсикологической программы агентства по охране окружающей среды создана рабочая группа из наиболее видных специалистов по микроядерному анализу, которая подготовила соответствующие методические рекомендации [Heddle et al., 1993; Sex difference . 1996; Mc Gregor et al., 2000]. В настоящее время микроядерный тест включен как обязательный при токсикологических исследованиях в странах Европейского экономического сообщества и Японии [Loprieno and Alder, 1990]. Широко используют микроядерный тест и в других странах. Особенно это наглядно видно при анализе работ, представленных на 18-й и 19-й конференциях Европейского общества по изучению мутагенов внешней среды (EEMS. 18 Annual Meeting, Bulgaria, Varna, 1988 and 19 Annual Meeting of EEMS on Environmental Mutagenes-Carcinogenes, Greece, Rhodes, 1989), а также на 5-й международной конференции по мутагенам (USA, Cleveland, 2000).

Тем не менее до ci^x пор среди ученых использующих в своих исследованиях микроядерный тест нет единого мнения по разным сторонам применимости микроядерного теста, поскольку результаты исследований проведенных в разных лабораториях мира зачастую не совпадают. В связи с этим в 1998 году был создан международный комитет HUMN-project, в задачи которого вошло стандартизовать методические подходы к использованию микроядерного теста при изучении мутагенов окружающей среды. Кафедра биологии СГМУ вошла как соисполнитель этого проекта. В настоящем исследовании представлены данные по методическим подходам в использовании микроядерного теста и применимость этих подходов в скрининге и мониторинге генотоксического загрязнения некоторых территорий Сибири.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы изучить различные методические подходы применимости микроядерного теста в скриниге и мониторинге генотоксикантов, загрязняющих условия окружающей среды.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1) оценить различные методы фиксации, окраски и методические приемы микроскопического анализа микроядер в стандартных мазках крови

2) установить уровень клеток с микроядрами у мышей различных генетических линий, в тканях различных органов и у различных видов животных

3) изучить уровень'клеток с микроядрами в клетках животных, обитающих в водоемах - у моллюсков Bithynia inflata и в населенных пунктах - у сизых голубей Columba livia

4) оценить уровень эритроцитов периферической крови с микрсядрами у людей, проживающих в некоторых населенных пунктах, расположенных в зоне влияния Сибирского химического комбината (СХК)

Научная новизна работы. Впервые на основе лабораторных исследований представлены данные свидетельствующие о том, что результаты микроядерного тестирования зависят от методических приемов приготовления препарата для анализа. Представлены данные свидетельствующие о том, что при микроядерном анализе необходимо учитывать возраст, пол особи, а также вид и генетическую линию животного. Возможно проводить с использованием микроядерного теста массовый скрининг и мониторинг как среди животных, так и среди людей, что позволяет оценить наличие в окружающей среде генотоксикантов различной природы.

Теоретическая и практическая значимость. Методические приемы рекомендуемые по результатам настоящего исследования дают возможность проводить с научно обоснованных позиций оценку генотоксичности тех или иных соединений в условиях лаборатории или же проводить скрининг и мониторинг загрязнения территорий кластогенными факторами. Внедрение результатов в практику. Настоящая работа была оценена международным комитетом HUMN-project и методические приемы были рекомендованы к использованию при скрининге и мониторинге кластогенов окружающей среды. Результаты работы используются при чтении лекции и на кафедре биологии Сибирского медицинского университета, а также курсе патофизиологии Сургутского университета. Основные положения выносимые на защиту.

1) Результаты микроядерного теста могут существенно различаться в зависимости от применяемых методов фиксации, окраски и методических приемов микроскопического анализа стандартного мазка крови

2) Спонтанный уровень клеток с микроядрами не одинаков у мышей различных линий, а также у разных видов животных и в различных тканях и органах одного и того же организма

3) У одного и того же организма число клеток с микроядрами различно в полихроматофильных и нсрмохромных эритроцитах крови и в ядросодержащих клетках организма (гепатоцитах, энтероцитах, сперматогониях)

4) В различных популяциях животных и человека уровень клеток с микроядрами может существенно различаться, что связано с наличием в окружающей среде генотоксикантов различной природы Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на международных форумах : International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe: Critical Issues for Improving Health (Smolenice, Slovak Republic, 1997); First Russian SETAC Symposium. Society of Environmental Toxicology and Chemistry "Risk Assessment for Environmental Contamination" (Sankt Petersburg, Russia, 1998); Международной научной конференции "Радиационная безопасность и социально-экологические проблемы Казахстана" (Алматы-Караганда, Казахстан, 1998); 2-ой международной научно-практической конференции "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере" (Тюмень, 1997); Первой Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф. К.Н.Виноградовым сибирской двуустки у человека (Томск, 2001 г.); на всероссийских форумах: Второй всероссийской конференции "Проблемы региональной экологии" в г. Новосибирске (2000 г); 3-ей Российской биогеохимической школе в г. Горно-Алтайске (2000 г.); Всероссийской конференции "Проблемы защиты населения и территорий от черезвычайных ситуаций"

Красноярск, 1997); на региональных форумах: Первой межрегиональной научно-практической конференции "Здоровье человека XXI век" (Томск, 2000); Материалах конференции молодых ученых и специалистов "Региональные проблемы экологии и природопользования" (г. Томск, 1999 г.).

Публикации. Содержание работы изложено в 14 печатной работе, из которых 2 статьи опубликованы в зарубежной печати.

Структура работы. Материал диссертации, состоящей из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения и выводов, изложен на 187 страницах машинописного текста, включая 14 таблиц и 10 рисунков. Список цитированной литературы состоит из 169 наименований отечественных и зарубежных авторов. t

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Юркин, Александр Юрьевич

Выводы

1) Результаты микроядерного анализа могут существенно различаться в зависимости от применяемых методов фиксации, окраски и методических приемов микроскопического анализа стандартного мазка крови

2) Спонтанный уровень клеток с микроядрами не одинаков у мьшей различных линий, возраста, а также у разных видов животных и в различных тканях и органах одного и того же организма.

3) При микроядерном анализе в качестве объекта для скрининга и мониторинга состояния окружающей среды в населенных пунктах возможно использовать сизых голубей (Columba livia)

4) Обследование популяции сизых голубей в 15 населенных пунктах Центральной' Азии, Казахстана и Сибири позволило установить, что число эритроцитов с микроядрами достоверно повышено у птиц, обитающих в крупных населенных пунктах, что коррелировало с пораженностью голубей орнитозом

5) Микпоядерный анализ эритроцитов периферической крови у сизых голубей и людей, проведенный в населенных пунктах Томской области свидетельствует о достоверном повышении этого показателя как у людей, так и птиц в пос. Самусь и Наумовка, расположенных в зоне непосредственного влияния СХК.

6) Пятнадцатилетний цитогенетический мониторинг водных моллюсков Bithynia inflata, обитающих в р.Томь свидетельствует о существенном сокращении в настоящее время числа этих организмов в устьях р. Ромашка и р. Томи, что сопровождалось у биТиний повышением числа эпителиальных клеток жабр с микроядрами, а также накоплением в раковинах некоторых тяжелых металлов и увеличением пораженности моллюсков личинками Opistorchis felineus. 1

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Юркин, Александр Юрьевич, 2003 год

1. Воробьев А.И., Лорие Ю.И. Руководство по гематологии. М.: Медицина, 1985. Т.1. 367 с.

2. Воронов А. П. О морфологических изменениях крови в кроветворных органах под влиянием бензола и его производных // Тр. X съезда терапевтов СССР. М., 1929. С.12-20.

3. Выскубенко И.Ф. Применение микроядерного теста для выявления органоспецифичности потенциальных канцерогенов // Всесоюз. симпоз. «Объем и методы генотоксической оценки и побочных эффектов биологически активных веществ». Л., 19В9. С. 25.

4. Гаврилов O.K., Козинец Г.И., Черняк И.Б. Клетки костного мозга и периферической крови. М.: Медицина, 1985. 281 с. Гольдберг Д.И. Базофильная субстанция эритроцитов. Томск: Изд-во ТГУ, 1948. 270 с.

5. Гольдберг Д. И. Метод обогащения препаратов базофильно-зернистыми эритроцитами // Бюл. экспер. биол. и мед. 1937, № 1. С. 102-104.

6. Гольдберг Д. И. О так называемой зернистой дегенерации гемоглобина, обнаруживаемой при суправитальной окраске // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1938, № 1. С. 125-127. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. Томск: Изд-во ТГУ, 1980. 267с.

7. Гончарова Р. И. Мутагенная активность диметилтерефталатапри использовании микроядерного теста на мышах // XIV ежегодная конференция Европейского общества по мутагенам внешней среды. М., 1984. С.199.

8. Джикидзе Э.К., Косиченко Л.П., Куксова М.И. Морфологические и цитогенетические изменения в костном мозге обезьян в отдаленные сроки после хронического облучения в малых дозах // Радиобиология. 1990. Т. 20. Вып. 2. С. 281-285.

9. Журков B.C., Реснер П., Басторнова А., Фельдт Е.Г. Анализ частоты нормохромных эритроцитов с микроядрами в периферической крови мышей как метод выявления мутагенов // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1986, №8. С. 222- 224.

10. Журков B.C., Фельдт Е.Г. Метод учета полихроматофильных эритроцитов с микроядрами в костном мозге млекопитающих / / Статистическая обработка данных тестирования на мутагенность: Методические указания. Вильнюс, 1989. С.29.31.

11. Ильинских Н.Н. Биологические факторы мутагенеза у человека // Генетика человека и патология. Томск, 1989. С. 68.

12. Ильинских Н.Н. Физиологические факторы мутагенеза в связи с изменением иммунореактивности организма // III школа-семинар по генетике и селекции животных. II научные чтения памяти академика Д. К. Беляева. Новосибирск, 1989. С. 47.

13. Ильинских Н.Н., Ильинских И.Н. Применимость микроядерного анализа для тестирования уровня анеуплоидных клеток ик.1.vкостном мозге мышей, подверженных воздействию различными мутагенными факторами // Генетика. 1988. Т. 24, № 1. с. 163-165.

14. Ильинских Н.Н., Ильинских И.Н., Некрасов В.Н.

15. Использование микроядерного теста в скрининге имониторинге мутагенов // Цитология и генетика. 2001. Т. 22, № 1. С. 67-72.

16. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология. М.: Медицина, 1970. 999с.

17. Козаченко В.И., Соболева Л. С. Возможности метода учета микроядер в эритроцитах печени эмбрионов мьши // Взаимодействие между преобразованиями окружающей среды и адаптивной, демографической и генетической структурой народонаселения. М., 1984. С. 109.

18. Хева С.Н., Щедрина Л.В., Степанов Р.п. К механизму образования микроядер в ФГА-стимулированных лимфоцитах периферической крови человека // Цитология. 1996. Т 28. С. 227-231.

19. Лаврова B.C. о структуре эритроцитов в свете гемолитических методов окраски: Дис. . канд. мед. наук. Томск. 1948. 218 с.

20. Новицкий В.В., Климова М.Ю., Запускалова О.Б. Отдаленные последствия повреждающего действия цитостатических препаратов на кроветворение и лимфоидную ткань // Бюл. Том. науч. центра АМН СССР. Томск 1989, вып.1. С.54-64.

21. Новицкий В.В., Переверзева Э.Р., Пономарев В.И., Сыркин А. Б Экспериментально-клинические аспекты некоторых токсических эффектов противоопухолевых препаратов М.:Изд. ВНИИМИ. Сер. Онкология Вып.2. 1997. 69с.

22. Титенко Н.В., Евсиков В.И. Микроядра и цитогенетические нарушения в эмбрионах мышей до имплантации // Цитология и генетика. 1987. Т. 11, №1. С. 17-21.

23. Фельдт Е.Г., Журков B.C. Изучение мутагенного действия бензола и толуола в соматических и половых клетках млекопитающих // XIV ежегод. конф. Европейского общества по мутагенам внешней среды. М. 1994. С. 164.

24. Фрейфельд Е.О. Гематология. М.; л.: Изд-во Биомедгиз, 1934. 332с.

25. Худолей В.В., Белицкий Г. А. Ретроспективная оценка генотоксичности канцерогенных для человека химических соединений // Всесоюзн. симпоз. «Объем и методы генотоксической 'оценки и побочных эффектов биологически активных веществ» JI. 1998. С. 101-102.

26. Хэм А., Кормак Д. Гистология. Т. 2. М: Мир, 1983. 254 с.

27. Эбрингер Л., Горакова К., Блашко М., Лагитова Н., Халупа И. Определение генотоксичности 5-нитрофури-лакриловой кислоты // Цитология и генетика. 1996. Т. 20. № 5. С. 377-378.

28. Экспериментальные данные о мутагенном действии толуола, изопрапаиола и сернистого газа / В.И. Аристов, Ю.В. Редькин, 3.3.Брускин, Г.А.Оглезнев // Гигиена труда и проф. заболевания. 1991. № 7. С. 33-36.

29. Albanese R., Middlfton B.J. The assessment of micronucleated polychromatic erythrocytes in rat bone marrow. Technical and stalistical considerations // Mutat Res. 1987. Vol. 182, N 6. P. 323-332.

30. Amer S.M., Fahmy M.A. Cytogenetic effects of pesticides // Mutat. Res. 1-993. Vol. 117, N 3. P. 329-335.

31. Anderson van A., Ma Te-Hsiu. Micronuclei induced by the internal beta-irradiation from incorporated from phosphorous-32 in Tradescantia pollen mother cells //

32. Environ. Mutagen. 1991. Vol. 3, N 3. P. 398-401.

33. Arnold K. Zur Morphologie und Biologie der roten Blutkorperchen // Virchows. Arch. F. Pathol. Anat. 18 96. Bd. 145. S. 138-145.

34. Ashby J., Mohammed R. Slide preparation and sampling as a major source of variability in the mouse micronucleus assay // Mutat. Res. Environ. Mutagenes and Related Subj. 1996. Vol. 164, N 4. P. 217-235.

35. Ashby J., Mohammed R., Calander R.D. N-chloropiperidine and calcium Hypochloride: Possible example examples of toxicity-dependent clastogenicity in vitro // Mutat. Res. Genet. Toxicol. Test. 1997. Vol. 189, N 1. P. 59-68.

36. Ashby J., Braithwaite I. A rat liver micronucleus assay employing 4 AAF as mitogen // Environ. Mutagenes 1987. Vol. 9, N 8. P. 7-18.

37. Askanazy D. Ober die Kornung der roten Blutkorperchen bei aiamischen Zustanden. Zeitschrift fur klinische Medizin. Berlin. 1907. N. 64. S. 1-2.

38. Association of enviranment fal factors ith micronucleated erythrocyte frequency in splenectiomized naman subjects / D. Smitll, J.T. Mac Gregor, K. Hooper et al // Environ and Mol. Mutagenes. 1998. Vol. 11, N 11. P. 97-100.

39. Awogi Т., Fukazama H., Tao K. Induction of Micronuclei in rat fetuses by hydroxyurea // Mutat. Res. Environ. Mutagenes. and Related Subj. 2000. Vol. 182, N 6. P. 357361.

40. Basic-Zaniovic Т., Matijaseyic Z., Alacevic M. The relative size of micronuclei as an indicator of themechanism of micronuclei induction by cycloheximide // Prehzamb. tecnol. i biotehnol. rev. 1987. Vol, 25, N 3. P. 69-72.

41. Beije B. Induction of unschduled DNA Synthesis in liverand micronucleus in bone marrow of rats exposed in vivoto the benzidine-derived azo dye, Direct Black 38 //

42. Mutat. Res. Genet. Toxicol. Test. 1997. Vol. 187, N 4. P. 227-234.

43. Benzene induces micronuclei in eieculating erythrocytesof chronically treted raice / R. Barele, F. Giorgell, L.

44. Migliore et al. // Mutatl Res. 1995. Vol. 14, N 3. P. 193-196.

45. Bianchini F., Caderni Q., Dolara P., Tanganelli E. Nuclear aberrations and mirconuclei induction in the digestive iron salts // J. Appl. Toxicol. 1988. Vol. 8, N 3. P. 179-183.

46. Bradford J.C., Brown G.L., Drobeck H.P. In vivo and in

47. Vitro genetic and reproductive safety assessment of Win 48,098: a non-opioid analgesic // Cell Biol, and Toxicol. 1997. Vol. 3, N 1. P. 85-88.

48. Buul P.P.w. van, Goudrwaard J.H. Bleomycin-induced structural chromosomal aberrations in spermatogonia and bone-marrow cells of mice // Mutat. Res. 1990. Vol. 69, N 2. P. 319-321.

49. Crowley c., Curtis H. The development of somatic mutations in mice with age // P roc. Nat. Acad. Sci. USA. 1963. Vol. 49. P. 626-628.

50. Danford N., F J.M. The effects of 4CMB, 4HMB and B1 in the micronuleus test // Mutat. Res. 1992. Vol 100, N 1. P. 353-356.

51. Das R.K., Kar R.N. Cenitoxic effects of three benzodiazepine tranquilizers in mouse bone marrow asrevealed by the micronucleus test // Cariologia. 1986. Vol. 39, N 2. P. 193-198.

52. Das R.K., Nanda N.K. Induction of micronuclei in peripheral erythrocytes of fish Heteropneustes fassilis by mitomycin С and paper mill effluent // Mutat. Res. Mutat. Res Lett. 1986 Vol. 175, N 2.P. 67-69.

53. De Marco A., Paglialunga S:, Rizzoni M., Testa A.1.duction of micronuclei in Vicia faba root tips treatedwith heavy metals (cadmium and chromium) in the presenceof NTA // Mutat. Res. Genet. Toxicol. Test 1998. Vol. 206, N 3. P. 311-315.

54. Ehrlich P. Ober schwere anamische Zustande // Kongr. f. mu. Med. 1892. N1. S. 11-18.

55. Ehrlich P., La Sarus G. Normale und pathologist Histologie des Blutes. Die Anaemien. Abt. 1, Teil 2. Berlin. 1909. 286 s.

56. Fenech M., Jarvis L.R., Morley A.A. Preliminary studieson scoring micronuclei by computerised image analysis //

57. Mutat. Res. Environ. Mulagenes. and Related. Subi. 1988. Vol. 203, N 1. P. 33-38.

58. Frankowiak S., Labidi В., Hernandez-Verdun D., Bouteilie M. Preservation of chromosome integrity during micronucleation induced by colochicine in PtKl cells // Chromosoma. 1986. Vol. 94, N 6. P. 468-474.

59. Fumero S., Mellano D., Peano S. Micronucleus induction in rat fetal blood by DNA directly injected into the fetus // Mutat. Res. 1995. Vol. 147, N 5. P. 295-298.

60. Fumero S., Mellano D., Peano S., Pirovano R. Micronucleus induction in rat fetal blood by DNA directly injected into the Fetus // XIV Annual Melting of the European Environmental Mutagen Society. Moscow. 1994. P. 92.

61. Gaisbock F. Beitrag zur Hamalologie der Kalichlori-Vergifimig // Med. Klin. 1912. N 47. S. 43-48.

62. Garriott M., Piper C., Soelter S. A combined in vitrojassay for chro?nosome aberrations and micronuclei // Environ, and Mol. Mutagenes. 1988. Vol.11, N 11. P. 3739.

63. Garriott M., Piper C, Kokkino A. A simplified protocol for the mouse bone marrow micronucleus assay //J. Appl. Toxicol. 1988. Vol. 8, N 2. P. 141-144.

64. Garriott M., Piper C., Kokkino A. Evaluation of a simplified protocol for the mouse bone marrow micronucleus assay // Environ. Mutagenes. 1987. Vol. 9, N8. P. 38-42.

65. Grafe R, Patzelt 0. Einfuhrung in die Marnatologie. Dresden-Leipzig. 1965. 267 s.

66. Guidelines for the conduct of micronucleus assays in mammalian bone marrow erythrocytes/J. T. Mac Gregor, J. A. Hcddle. M. Hite et al. // Mutat. Res. Genet. Toxicol. Test. 1997 Vol. 189. N 2. P. 103-112.

67. Hart J.W , Engberg-Pedersen H. Statistics of the mouse bonemarrow micronucleus test counting, distribution and evaluation of results // Mutat. Res. 1983. Vol. Ill, N. 2. P. 195-198. '

68. Hartley-Asp B. Cytogenetic effects of ВС and 4CMB in the mouse evaluated by the micronucleus test // Mutat. Res. 1992. Vol. 100 N 1. P. 373-376.

69. Hayashi M., Sofuni Т., Ishidate M.J.A. A statisticalprocedure for rodent micronucleus tests // Mutat. Res. Environ. Mutagenes. and Related Subj. 1998. Vol. 203, N 5. P. 372-380.

70. Heddle J.A., Carrano A.V. The DNA content of micronucleiarise from acentric chromosome fragments // Mutat. Res. 1977. Vol. 44. P. 63-70.

71. Henry M., Lupo S., Szabo K.T. Sex difference in sensitivity to the cytogenetic effects of ethyl methanesulfonate in mice demon stration by the micronucleus test // Mutat. Res. 1990. Vol. 69, N 2. P. 385-388.

72. Hogstedt В., Kalsson A. The sire of micronuclei in humanrlymphocytes varies acceding to inducing agent used // Mutat. Res.1985. Vol. 156, N 3. P. 229-232.

73. Hooffman R.N., Raatde W.K. Induction of nuclear anomalies (micronuclei) in the peripheral blood erythrocytes of the eastern mudminnow Umbra pygmaea hy ethyl methanosulphonate // Mutat. Res. 1992. Vol. 104, N 1. P. 147-153.

74. Hose J.E., Puffer H.W. Cytogenetic and cytologic anomal ies induced in purple sea urchin embryos by paternal exposure to benzopyrene // Mar. Biol. Lett. 1993. Vol. 4, N 2. P. 87-95.

75. Ilyinskikh I.N., Ilyinskikh N.N. Chromosome aberrations in lympnoid tissues of Different origin and immune responsivenes of Macaca rhesus monkeys infected with poliovirus type 1 // Acta virologica. 1983. Vol. 27. P. 393-399.

76. In vivo sister chromatid exchange and micronucleus induction studies with 1,3-butadien in B6C3F1 mice and Spraque Dawley rats / M.J. Cunningham, W.W. Choy, A.G. Theall et al. // Mutagenesis. 1996. Vol. 1, N 6. P. 449452.

77. Jain A.K., Tezuka H. Effect of age on microriucleus frequency induced by mitomycin С in ddY male mice // Curr. Sci. 1987. Vol. 56, N 17. P. 824-825.

78. Johansen P.В., Jensen S.E., Rasmussen S.D. Pharmacokinetic of doxorubicin and its metabolite doxorubicinol in rablits with induced acid and alkaline urine // Cancer. Chemother, and Pharmacol. 1994. Vol. 13, N 1. P. 5-8.

79. Kikuchi Y., Fort F., Makamura M., Nakajima Y. Micronucleus induction in mouse fetal liver by 5-FU, Carmofur and Tegafur // Mutat. Res. Environ. Mutageries. and Related Subj. 1997. Vol. 182, N 6. P. 363-370.

80. King M.T., Goeke E., Eckhardt. K. Study of artificial flavouring substances for mutagenicity in the Salmonella microsome, Base and micronucleus test // Food and Chem. Toxicol. 1993. Vol. 21, N 6. P. 707-719.

81. Kliesch U., Adler I.D. Micronucleus test in bone marrowof mice treated with 1-nitropropane, 2-nitropropane and cisplatin // Mutat, Res. Mutat. Res Lett. 1997. Vol. 192, N 3. P. 181-184.

82. Krauier P.W., Anderson S.L., Harrison F.L. Radiation-induced micronuclei in peripheral erythrocytes of Rana catesbeiana: An aquatic animal model for in vivo genotoxicity studies // Environ, and Mol. Mutagenes. 1987. Vol. 10. N 3. P. 285-296.

83. Labidi В., Frackowiak S., Hernandez-Verdum D. Identification and sorting of micronuelei containing individual chromosome // Exp. Cell Res. 1997. Vol. 173, N 2. P. 617-627.

84. Lebowitz H.D., Swell J.L. Revelopment of a subacute peripheral blood micronucleus assay in male and female ICR mice // Environ. Mutagens. 1987. Vol. 9, N 8. P. 5762.

85. Luke C.A., Tice R.R., Drew R.T. The effect of exposure regimen and duration on benzene-induced bone marrow damage in mice I Sex comparison in DBA/2 mice // Mutat. Res. Environ, Mutagenes. and Related Subj. 1988. Vol. 203, N 4. P. 251-271.

86. Miller B.E., Miller F.R., Неррев G.H. Interaction betweentumor subpopulations affecting their sensitivity to the antineoplastic agents cyclophosphamide and methotrexate // Cancer Res. 1991. Vol. 41. P. 4378-4381.

87. Miller B.E., Miller F.R., Lei Т., Неррев G.H. Growth intoraction in vivo between tumor subpopulations derived from a single mouse mamary tumors // Cancer Res. 1990. Vol. 40. P. 3977- 3981.

88. Miller K., Schende D.J., Wank R. Cell-growth kinetics and karyotipe analysis of human memory lymphocytes responding to alloantigen and mitogen // Immunobiology, 1973. Vol. 159. P 269- 282,

89. Mirkova E., Ashby J. Relative distribution of nature erithrocytes, polichromatic erithrocytes and micronucleated on mouse bone-marrow smeans: control observations // Mutat. Res Environ. Mutagenes and Related Subj. 1997. Vol. 182, N 4. P. 203-209.

90. Mirkova E., Zaikov C.Y. Non-genotoxicity of aiavchlor detected by the mouse bone marrow and peripheral erythrocyte micronueleus assay // Mutat. Res. 1997. Vol. 181, N 2. P. 316-322.

91. Misra R.N., Misra B. Genetic toxicological testing of some dyes by the micronucleus test // Mutat. Res. 1986. Vol. 170, N 1. P. 75-78.

92. Morris R.S. Howels nuclears particle in experimentia Anemia // Johns Hopk. Hosp. Bullet. 1907. Vol. 18. P. 1228.

93. Muller W.U., Steffer C. Distribution of micronuclei among v 1 single cells of preimplatations mouse embryos after X1. Ж, &irradiation in vitro // Mutat. Res. 1994. Vol. 125, N 1. P. 65-72.

94. Naegeli C. Blutkrankheiten und Blutdiagnostik. Berlin. 1931. 263 s.

95. Negrea 0., Imreh St. Estimarea intilisarea mitotice radioin-duse prin utilisarea aberat, lilor cromozomale si a micronuclei lor in celule Hela // Clujul med. 1990. Vol. 53, N 4. P. 312-315.

96. Ninomiya R., Koizumi N., Inoue Y., Tsukamoto T. Effects of age and sex on incidence of micronuclei in BDF, mice // Mutat. Res. Environ. Mutagenes. and Related Subj. 1987. Vol. 182, N 6. P. 327-333.

97. Nito S., Kondc5 Y., Ono Т., Ariyuki F. In vitro micronucleus method with erythropoietin-differetiated erythrocytes // Mulat Res. Mutat. Res. Lett. 1996. Vol. 175, N 4. P. 243-247.

98. Odagiri Y., Adachi S., Takemoto K. Detection of cytogenetic effect of inhaled aerosols by the micronucleus test // Mutat. Res. 1995. Vol. 147, N 5. P. 270.

99. Okudaira H., Suzuki Т., Choda A. Double-strained DNA binding capacity in the nude mouse // Proc 2nd. Int. Workshop. Nude Mice. Stuttgart-New York. 1987. P. 139

100. Oleson F.B., Getman S.M. Mouse micronucleus assay: comparison of bone marrow and peripheral blood assays // Environ, and Mol. Mutagenes. 1988. Vol. 11, N 11. P. 79145

101. Pappenheim A. Vitalfarbung der Erythrozyten // Fol. Ham. 1907. Bd. 4. S. 1-20.

102. Pasantes J., Gonzalez A., Mendez J. Analisis comparitivo de la frecuencia de aberraciones cromosomicas у valores del lest de micronucleus // Genet, iber. 1987. Vol. 39, N 1. P. 77-84.

103. Pascoe S., Gatehouse D. The use of a simple haematoxylin and eosin straining procedure to demonstrate micronuclei within rodent bone marrow // Mutat. Res Environ. Mutagenes. and Related Subj. 1996. Vol. Ii4, N 4. P. 237243.

104. Pentiah P.R., Reddy P.P., Reddy O.S. Induction of micronuclei in bone marrow cells of mice treated with phenylbutazone // Indian J. Exp. Biol. 1990. Vol. 18, N 8. P. 869-873.

105. Pincu M., Callisen H., Norman A. DNA content of micronuclei in human lymphocytes // Int. J. Radiat. Biol. 1985. Vol. 47, N' 4. P. 423-432.

106. Procedure for isolating micronuclei from rat kangaroo cultured cells containing individualized chromosomes / B. Labidi, M. Gregare, D. Hernander-Verdum, D.M. Monteille // Eur. J Cell Biol. 1985. Vol. 1, N 1. P. 165-170.

107. Racine R.R., Matter В.E. The micronucleus test as an indicator of mutagenie exposure // Single. Cell Mutat. Monit. Syst.: Methodpl. and Appl. New York; London. 1994. P. 217-231.

108. Richardson J.C., Proudlock R.J., Richolds M. The evaluation of ( the mutagenie potential of 4chlormethylbiphenyl (4CMB) using the micronucleus test // Mutat. Res. 1992', Vol. 100, N 1. P. 375-381.

109. Rithidech K., Au W.W., Ramanujam V.M., Whorton E.B. Persistence of micronuclei in peripheral blood normochromatic erythrocyies of subchronically benzene-treated male mice // Environ, and Mol. Mutagenes. 1998. Vol. 12, N 3. P. 319-329.

110. Rizzoni M., Tanzarella C., Gustavino В., Guarino A. Indirect mitotic nondisjunction through chromosome loss and micronuclei formation // Atti. Assoc. genet, ital. 1995. Vol. 31. P. 169-170.

111. Rizzoni M., Vitagliano E., Vitantonio L. Studi sulla variabilita della risposta del test dei micronuclei in apici radicali of Vicia faba espositi a 10 EA 150 R di raggi X // Atti. Assoc. genet, ital. 1981. Vol. 27, N 1. P. 335-340.

112. Sato S., Kitajima H., Konishi S., Tokizawa H. Mouse strain difference in the induction of micronuclei by polycyclic aromatic hydrocarbons // Mutat. Res. Mutat. Res Lett. 1987. Vol. 192, N 3. P. 185-189.

113. Sato S., Nishi Y., Inui N. Mouse strain difference in the induction of micronucleus // Mutat. Res. Environ Mutagenes. and Related Subj. 1987. Vol. 182, N 6. P. 375376.

114. Savage J.R.K. A comment on the quantitative relationship between micronuclei and chromosomal aberrations // Mutat. Res. Mutat. Res. Lett. 1998. Vol. 207, N . P. 33-36.I

115. Schlegel R., Mac Gregor J.T. A rapid screen for• л •n,cumulative chromosomal damage in mice // Mutat. Res.1983. Vol 113, N 6. P. 481-487.

116. Schlegel R., Mac Gregor J.T. The persistence of micronuclei in peripheral blood erythrocytes: detection of chronic chromosome breakage in mice // Mutat. Res. 1992. Vol. 104, N 6. P. 367- 371.

117. Schmid W. The micronucleus test // Mutat. Res. 1973. Vol. 31, N 1. P. 9-16.

118. Schmuck G., Lieb G., Wild D., Schiffmann D. Characterization of an in vitro micronucleus assay with Syrian hamster embryo fibroblasts // Mutat. Res. Environ Mutagenes and Related Subj. 1998. Vol. 203, N 6. P. 397404 .

119. Sex difference in the micronucleus test. The collaborative study group for the micronucleus lest // Mutat. Res. Genetics Toxicol. Test. 1986. Vol. 172, N 2. P. 151-163.

120. Shimizu M., Yano E. Mutagenicity of instant cofee and its interaction with dimethylnitrosaminc in the micronucleus test // Mutat. Res. Genet. Toxicol. Test. 1987. Vol. 189. N 3. P. 307-311.

121. Suzuki Y., Atai H., Hetakeyaina Y. Effect of fasting on micronuclei frequency during intragastric drug administration in mice // Mutat. Res. Environ. Mutagenes. and Related Subj. 1988. Vol. 203, N 5. P. 393-397.

122. Sorsa M. Monitoring of sister chromatid exchange and micronuclei as biological endpoints // IARC Sci. Publ.1984, N 59. P. 339-343.

123. Tezuka H., Tamai К., Murakami К., Kada Т. The effects of age on the frequency of spontaneous and mutagen-induced micronuclei in mouse bone marrow // Annu. Rept. Nat. Inst. Genet. Jap. 1996. N 36. P. 62-63.

124. Toppari J., J., Harkonen P., Eerola E., Parvinen M, Genotoxic studies in male germ cells: induction of meiolic micronuclei in vitro // Raporttisar. Joensuun yliopisto. Mat. luonnonlieteellis. tiedekunnan. 1996. N 8. P. 50-55.

125. Turoczi L.J., Mikulis L., Dougherty C. A genotoxic analysis of dithiothretol using the Salmonella microsomal mutagenicity assay and the mouse micronucleus test // Cell Biol, and Toxicol. 1997. Vol. 3, N 1. P. 92-96.

126. Wehr C.M., Henika P.K., MacGregor J.T. Application of the peripheral blood erythrocyte micronucleus assay to defecti on of chromosomal damage from repeated exposures to genotoxins // Environ. Mutagenes. 1987. Vol. 9, N 8. P. 112-115.

127. Weidenreich F. Form urid Bau der roten Blutkorperchen // Arch, microsk. Anat. 1903. Bd. 61. S. 94-98.

128. Weidenreich F. Die roten Blutkorperchen. Ergebnisse der Anatomic und Entwicklungsgesch. Berlin. Bd. 13. 1903. 162 s.

129. Weidenreich F. Einige Bemerkungen uber die roten Blutkorperchen // Anat. Anz. 1905. N 27. S. 32-38.

130. Wild D., Harnasch D., King M.T. Genotoxicity study of CS in Salmonella, Drosophila and mice // Arch. Toxicol. 1993. Vol. 54, N 2. P. 167-170.f 183

131. Yamamoto K.J., Kikuchi Y.A. Studies on micronuclei time response and on the effects of multiple treatments of mutagens on induction of micronuclei // Mutat. Res. 1991. Vol. 90, N 2. P. 163- 166.

132. Yamamoto K.J., Kikuchi Y.A. A comparison of diametrs of micronuclei induced by clastogen and by spindle poisons // Mutat, Res. 1990. Vol. 71. N l.P. 127-132.