Металлосодержащие соединения сульфокетокислоты как источник создания нового класса эффективных нейропротекторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, доктор наук Семелева Елена Владимировна

• Семелева Елена Владимировна
• доктор наук
• 2021

Оглавление диссертации доктор наук Семелева Елена Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

1. ВЫЖИВАНИЕ КЛЕТОК ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ КАК МИШЕНЬ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СОВРЕМЕННЫХ

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СТРАТЕГИЙ

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Клеточная гибель при нарушении мозгового кровообращения

1.2 Роль синаптических нарушений в пенумбре в прогрессии ишемического повреждения ГМ

1.3 Сигнализация нейронов в состоянии апоптоза как механизм восстановления анатомо-физиологической целостности ГМ

1.4 Роль апоптотических телец и иных везикул в сигнализации

погибающих нейронов

1.5 Фармакотерапевтические подходы к повышению выживаемости нейронов в зоне пенумбры

1.6 Воспалительный процесс как сдерживающий механизм повреждения ЦНС

1.7 Острое ишемическое повреждение головного мозга как триггер нейродегенерации

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты и препараты сравнения

2.1.1 Структура, прогнозирование токсичности и активности, технология синтеза

2.1.2 Препараты сравнения, дозы, пути и режимы введения

2.2 Реактивы, антитела и химические соединения, используемые в исследовании

2.3 Животные и культуры клеток. Биоэтические принципы проведения экспериментального исследования

2.4 Методы воспроизведения острой ишемической и гипоксической патологии головного мозга

2.5 Методы воспроизведения хронической патологии ЦНС - бокового амиотрофического склероза

2.6 Методы проведения биохимических, морфологических и иммуногистохимических исследований....................................70_Toc56762930

2.7 Методы культуральных исследований. Регистрация кальциевого ответа глутаматных рецепторов и выживаемости клеток ГМ

2.8 Методы исследования фармакокинетики. Разработка аналитической методики определения ЛХТ-300 в крови и биологических средах

2.9 Методы статистической обработки и анализа результатов исследования

3. ПРОГНОЗИРОВАНИЕ НАИБОЛЕЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ СТРУКТУР С НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В РЯДУ СОЕДИНЕНИЙ 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ

3.1 Прогнозирование спектра и механизмов фармакологической активности в ряду производных 2-аминоэтансульфоновой кислоты

3.2 Острая токсичность соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты

4. IN VITRO И IN VIVO СКРИНИНГ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ В РЯДУ СОЕДИНЕНИЙ 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ

4.1 Фармакологическое действие металлосодержащих соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты при острой асфиксии головного мозга лабораторных мышей

4.2 Способность метталосодержащих соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты повышать выживаемость клеток смешанной нейроглиальной культуры гиппокампа мышей

5. ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНАЯ АКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЙ 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЯ МОЗГОВОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

5.1 Церебропротекторное действие соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты на модели преходящего ишемического нарушения мозгового кровообращения у крыс

5.2 Церебропротекторная активность соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты в условиях необратимой окклюзии средней мозговой артерии

6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЙ 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДЕГЕНЕРАТИВНО-ДИСТРОФИЧЕСКОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ

СИСТЕМЫ

7. СИСТЕМНАЯ, ТКАНЕВАЯ КИНЕТИКА И БИОДОСТУПНОСТЬ НАИБОЛЕЕ ПЕРСПЕКТИВНОГО НЕЙРОПРОТЕКТОРА -ПРОИЗВОДНОГО 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ

7.1 Результаты валидации аналитической методики определения ЛХТ-300 в биологических жидкостях

7.1.1 Селективность

7.1.2 Эффект матрицы

7.1.3. Предел обнаружения, нижний предел количественного определения

7.1.4 Калибровочная кривая, линейность

7.1.5 Правильность и прецизионность

7.1.6 Стабильность

7.1.7 Перенос пробы

7.2 Фармакокинетика соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты ЛХТ-300 при внутривенном введении

7.3 Биологическое распределение соединения ЛХТ-300 при однократном внутривенном введении

8. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ МЕХАНИЗМА НЕЙРОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ СОЕДИНЕНИЙ 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ

8.1 Противоотечное действие соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты и их влияние на синтез макроэргов и кислотно-основное состояние в головном мозгу крыс с преходящим нарушением мозгового кровообращения

8.2 Антистрессовое, антирадикальное и противовоспалительное, действие соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты при транзиторном нарушении мозгового кровообращения в эксперименте

8.3 Антиапоптотическое действие соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты

9. ВЛИЯНИЕ СОЕДИНЕНИЙ 2-АМИНОЭТАНСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ГЛУТАМАТЕРГИЧЕСКИХ И ГАМКЕРГИЧЕСКИХ НЕЙРОНОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА

9.1 Исследование ингибиторного влияния магниевой соли 2-аминоэтансульфоновой кислоты на кальциевый ответ активированных КМОА-рецепторов

9.2 Характеристика ингибиторного действия магниевой соли 2-аминоэтансульфоновой кислоты (соединение ЛХТ-317). Расчет эффективных подавляющих концентраций в отношении глутаматерических

рецепторов

9.3 Влияние магниевой соли бис-ацетамино-2-этансульфоноата на выживание популяций ГАМКергических нейронов в зависимости от экспрессии кальций-связывющих белков

9.4 Влияние диметилфенилацетамидной соли бис-ацетамино-2-этансульфоноата на выживание популяций глутаматергических и ГАМКергических нейронов в зависимости от экспрессии кальций-связывющих белков

10. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

10.1 Перспективы дальнейшего развития темы диссертационного исследования

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение

Приложение

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиоксидантная активность

АТФ - аденозинтрифосфорная кислота

БАС - боковой амиотрофический склероз

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГАМК - гамма-аминомасляная кислота

ГМ - головной мозг

ГОТ - глутаматоксалоацетаттрансфераза ГЭБ - гематоэнцефалический барьер ИГХ - иммуногистохимия ИИ - ишемический инсульт ИЛ - интерлейкин

ИНМК - ишемическое нарушение мозгового кровообращения

ИФА - иммуноферментный анализ

КГД - кислородно-глюкозная депривация

НВК - нейроваскулярный комплекс

ОА - оксалоацетат

ОкСМА - окклюзия средней мозговой артерии

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РпСМА - реперфузия средней мозговой артерии

РФК - реактивные формы кислорода

СМА - средняя мозговая артерия

СОД - супероксиддисмутаза

ФНО - фактор некроза опухолей

АМРА - альфа-аминометилизоксазолпропионовая кислота NMDA - N-methyl-D-aspartate OGD - oxygen-glucose deprivation PI - propidium iodide

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность избранной темы

Ишемическое нарушение мозгового кровообращения занимает второе место в ряду основных причин смерти во всем мире и сохраняет свои лидирующие позиции вот уже более пятнадцати лет [1]. В Российской Федерации распространенность заболевания подчиняется общемировым тенденциям [2, 3].

Высокая социальная значимость заболевания обусловлена также тем, что на его долю приходится третье место в структуре причин всех видов нетрудоспособности, что накладывает огромную социально-экономическую нагрузку на современное общество [4]. Несмотря на формирующуюся в последние годы тенденцию к снижению первичной заболеваемости, распространенности и смертности от ишемического инсульта, в абсолютных значениях фиксируется неуклонный рост числа лиц с диагностируемым нарушением мозгового кровообращения, что особенно актуально для развивающихся и бедных государств [5].

Ишемическая атака, развивающаяся как результат окклюзии одной из мозговых артерий, обусловливает до 87% всех случаев диагностируемых нарушения мозгового кровообращения. Последующие необратимое или преходящее прекращение мозгового кровотока с сопровождающим их дефицитом кислорода и нутриентов приводит к формированию области тяжелой гипоперфузии в головному мозгу, более известной как ядро инфаркта, в котором летально поврежденные нейроны гибнут вследствие некроза. Эта область, как правило, окружена варьирующей по размеру пограничной зоной ишемической пенумбры, в которой клетки способны в течение определенного времени сохранять метаболическую активность и, в зависимости от обстоятельств, могут либо выжить, либо погибнуть [6].

Клеточное выживание и клеточная смерть при ишемическом инсульте -процесс сложный и мультифакториальный [7], включающий ряд компонентов,

среди которых следует особо отметить глутаматергическую эксайтотоксичность, перекисное окисление липидов и окислительный стресс, дисфункцию митохондрий и асептическую воспалительную реакцию [8].

В настоящее время единственным эффективным способом борьбы с описываемым патологическим состоянием является локальная реканализация церебральной магистрали и системный тромболизис, которые в совокупности имеют небольшое терапевтическое окно и доступны лишь не более, чем для 20% пациентов [9].

Важным в понимании общего патогенетического смыла потенциальной терапевтической стратегии является то, что площадь необратимого поражения тканей головного мозга прямо пропорциональна длительности ишемического или гипоксического воздействия. Именно это обстоятельство делает восстановление или перераспределение мозгового кровотока в пользу страдающих участков органа, или как альтернатива, увеличение выживаемости клеток в поврежденных областях головного мозга, фундаментальной проблемой [10].

Парадоксально, но сама по себе обязательная составляющая современной терапевтической стратегии при ишемическом нарушении мозгового кровообращения - реперфузия заблокированных мозговых артерий - индуцирует разрушительный по своим последствиям каскад генерации активных форм кислорода, вызывающих иммунологический ответ в виде асептической нейровоспалительной реакции [11].

В течение реакции асептического воспаления реакция мозговых резидентных клеток микроглии сопровождается инфильтрацией поврежденных областей головного мозга и миграцией макрофагов, что, в свою очередь происходит вследствие нарушения целостности гематоэнцефалического барьера и продукции каскада цитокинов и хемокинов [12-15].

В этой связи разработка эффективных фармакотерапевтических подходов к коррекции глубины поражения головного мозга при его локальной

ишемии и реперфузии представляется одной из актуальных проблем как клинической, так и, в не меньшей степени, фундаментальной медицины, имеющей большое научно-практическое и социально-экономическое значение.

Степень разработанности темы исследования

Использование эндогенных веществ, в частности, природных метаболитов, участвующих в обменных - синтетических и энергетических -процессах в качестве лекарственных средств имеет глубокие научные и практические корни. Фундаментальной основой этого направления фармакологии является то, что природные вещества и их производные и соединения обладают естественным сродством к человеческим акцепторам и мишеням - рецепторам, мембранам и их компонентам, ферментам, генам и др. [16].

2-Аминоэтансульфоновая кислота обладает широким спектром фармакологического действия, в который входят и антиишемические, антигипоксические, антиоксидантные свойства [17]. С другой стороны, исследования последних десятилетий определили глутаматергические ионотропные рецепторы нейронов головного мозга как наиболее функциональные эффекторы, посредством которых реализуется ишемическая эксайтотоксичность. Кальциевая ионная пора рецептора служит воротами для внутриклеточного поступления ионов кальция в нейроны, а регуляция активности рецептора обладает двухкомпонентным механизмом, в котором участвуют ионы кальция и 2-аминоэтансульфоновая кислота (таурин) [18]. В этой связи в нашей лаборатории возникла идея конструкции молекул, состоящих из двухвалентного металла и остатка таурина, которые бы могли наряду с подавлением глутаматергической эксайтотоксичности оптимизировать и другие важнейшие элементы, лежащие в основе ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга. Такие молекулы были созданы [19, 20] и в предварительно проведенных исследованиях, в том числе на культурах клеток, показали весьма

обнадеживающие результаты [21-23], позволившие сформулировать концепцию, научному обоснованию которой и посвящена настоящая работа.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Металлосодержащие соединения сульфокетокислоты как источник создания нового класса эффективных нейропротекторов»

Цель работы

Разработка нового перспективного класса церебропротекторов, повышающих выживание клеток центральной нервной системы, на основе металлосодержащих и замещенных соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты, в качестве потенциальных лекарственных средств для лечения ишемических и дегенеративно-дистрофических заболеваний головного мозга.

Задачи, поставленные в работе

1. Осуществить внеэкспериментальный анализ наиболее перспективных с позиции отношений активность - токсичность - структура соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты с различными двухвалентными металлами и неметаллическими заместителями в качестве перспективных нейроцитопротекторов.

2. Разработать методы и провести синтез трех-четырех водорастворимых молекул, обладающих оптимальными прогнозными характеристиками с точки зрения реализации нейропротекторных свойств.

3. Провести острые токсикологические исследования синтезированных соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты в опытах на грызунах - мышах и крысах - при внутривенном и на мышах - при внутрижелудочном путях введения.

4. Осуществить фармакологический скрининг синтезированных молекул на моделях in vivo и in vitro. Отобрать наиболее перспективные для последующего исследования молекулы, определить их эффективные терапевтические дозы и эффективные действующие концентрации.

5. Оценить эффективность соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты на модели необратимой ишемии головного мозга и модели преходящего нарушения мозгового кровообращения с последующей реперфузией при различных режимах введения терапевтических доз исследуемых веществ.

6. Изучить нейропротекторное действие соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты на экспериментальной модели дегенеративно-дистрофической патологии ЦНС - бокового амиотрофического склероза.

7. Исследовать влияние веществ, показавших наибольший терапевтический эффект, на некоторые важнейшие элементы развития ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга: нарушения кислотно-основного и энергетического состояния тканей мозга, формирование отека, асептического воспаления, активность систем окисления липидов и антирадикальный потенциал.

8. Определить роль магниевого и диметилацетамидного соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты в течении процесса программируемой гибели нейронов зоны пенумбры на фоне преходящего нарушения мозгового кровообращения.

9. Разработать аналитическую методику определения концентрации ЛХТ-300 в крови, биологических жидкостях и тканях, изучить системную кинетику, и тканевое распределение соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты при внутривенном введении, его биодоступность при внутримышечном введении.

10. Изучить влияние соединений ЛХТ-300 и ЛХТ-317 на выживаемость клеток смешанной нейроглиальной культуры гиппокампа крыс при экспериментальных ишемияподобных условиях иммуноцитохимическим методом.

11. Установить механизм взаимодействия потенциальных кандидатов в церебропротекторное лекарственное средство с КМОА-рецептором глутаматергических и ГАМКергических нейронов головного мозга в смешанной нейроглиальной культуре в зависимости от условий инкубирования и экспрессии кальций-связывающих белков. Изучить способность и направление влияния соединений на выживаемость клеток астроцитарной глии.

Научная новизна

Впервые разработан новый класс нейропротекторов на основе металлосодержащих и замещенных соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты; в эксперименте вперые научно обоснована концепция фармакологической нейропротекции и повышения выживания нейронов головного мозга с помощью системного использования новых соединений.

При проведении программного внеэкспериментального прогнозирования зависимости активность - токсичность - химическая структура впервые установлено, что линейные и циклические структуры двухвалентных металлов - магния, кальция и цинка - а также диметилфенилацетамида с двумя остатками 2-аминоэтансульфоновой кислоты обладают наибольшим потенциалом для реализации свойств нейропротекторов. Впервые осуществлен направленный синтез указанных молекул на основе реакции замещения К-ацетил-2-аминоэтансульфоновой кислоты при нагревании. Впервые проведенные исследования острой токсичности показали, что при внутривенном введении крысам и мышам все синтезированные соединения по показателю острой токсичности (ЛД100) были отнесены к 4 классу опасности (малоопасные вещества) в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 и к VI классу токсичности (относительно безвредные вещества) в соответствие с модифицированной классификацией Организации экономического содействия и развития (OECD). При внутрижелудочном введении показатели острой токсичности (ЛД50) колебались в широком диапазоне, свидетельствуя о неоднородной всасываемости соединений из ЖКТ.

При проведении фармакологического скрининга впервые установлено, что ЭД50 2-(диэтиламино)-Ы-(2,6-диметилфенил) ацетамида-2-аминоэтансульфоноата (ЛХТ-300) составляет 4,8% от показателя ЛД100, определенного при внутривенном введении мышам, для магния бис-ацетамино-2-этансульфоноата (ЛХТ-317) величина интегрального показателя равна 2,3%, а для цинковой соли цикло-бис-ацетамино-2-этансульфоноата

(ЛХТ-318) - 2,7%. Для тех же соединений в экспериментах в культуре клеток впервые рассчитаны эффективные концентрации, способные сохранять выживаемость клеток на фоне ишемияподобных условий: для ЛХТ-300 - 10-3 М, для ЛХТ-317 и ЛХТ-318 - 10-4 М.

В опытах на моделях необратимой перевязки средней мозговой артерии и преходящего нарушения мозгового кровообращения у крыс внутривенное введение соединений ЛХТ-317 в дозе 25 мг/кг и ЛХТ-300 в дозе 20 мг/кг в профилактическом и терапевтическом режиме, соединения ЛХТ-318 в дозе 29 мг/кг в профилактическом режиме ограничивало площадь зоны некроза в головном мозгу животных, ослабляло проявления неврологического дефицита, стимулировало формирование коллатерального кровообращения.

Впервые показано, что профилактическое внутривенное курсовое введение исследуемых соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты сопровождается повышением выживаемости, снижением степени двигательных нарушений и концентрации глутаминовой кислоты в периферической крови крыс с экспериментальным боковым амиотрофическим склерозом.

Впервые установлено, что при внутривенном введении в терапевтических дозах магниевое и диметилфенилацетамидное соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты сдерживают формирование отека головного мозга и явлений ацидоза, оптимизируют энергетический метаболизм в очаге ишемического поражения крыс с преходящим нарушением мозгового кровообращения. Впервые доказано, что в основе выявленных эффектов лежат способность соединений ЛХТ-317, ЛХТ-300 и, в меньшей степени, ЛХТ-318 ограничивать активность систем перекисного окисления липидов и формирования активных форм кислорода на фоне активации ферментов-антиоксидантов каталазы и супероксиддисмутазы, а также сдерживать индукцию асептического воспаления и эффективно снижать содержание медиатора эксайтотоксичности глутамата в очаге ишемически-реперфузионного поражения.

Соединения ЛХТ-300 и ЛХТ-317 подавляют активацию программируемой гибели нейронов в зоне ишемической пенумбры вследствие снижения экспрессии каспазы-3, тогда как магниевая соль 2-аминоэтансульфоновой кислоты (ЛХТ-317) обладает свойством активации экспрессии Вс1-2, а, следовательно, активным антиапоптотическим действием.

Впервые разработана аналитическая методика определения концентрации ЛХТ-300 в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием внутреннего стандарта и масс-селективным детектированием аналита по катиону. Сравнение фармакокинетических констант ЛХТ-300 у разных видов животных (крысы и кролики) показало, что их различия у крыс и кроликов были незначительными. Дозозависимые параметры были пропорциональны введенной дозе. У кроликов при введении дозы 12,5 мг/кг Стах была равна 839 нг/мл, АиС - 909 нг*ч/мл. У крыс при введении дозы 20 мг/кг значение Стах составило 1122 нг/мл, а АИС - 457 нг^ч/мл. Таким образом, концентрации были пропорциональны введенной дозе. Отношение ткань/плазма по Стах было значительно больше единицы (1,8 - 3,9) для сердца, легких, почек, печени, и головного мозга; для мышечной ткани и кишечника оно находилось в пределах единицы (1,3 для обоих органов). По степени накопления соединения исследованные ткани располагались в следующем порядке (по убыванию значений АИС): Почка > Легкие > Селезенка > Сердце > Печень > Мозг > Мышца > Кишечник. Всего почками выводилось 5,11% от введенной дозы вещества.

Впервые установлено, что магниевая соль 2-аминоэтансульфоновой кислоты обладает зависимым от концентрации и времени высокоселективным обратимым подавляющим действием в отношении кальциевого канала глутаматергических КМОА-рецепторов с рассчитанной эффективной подавляющей концентрацией (величина полумаксимального ингибирования -1С50) 450±20 мкМ. Молекула соединения быстро проникает в ионную пору

канала и по совокупности эффектов может рассматриваться как его аллостерический модулятор.

Соединение ЛХТ-317 повышает выживаемость глутаматергических и парвальбумин-содержащих и не содержащих ГАМКергических нейронов в смешанной нейроглиальной культуре в условиях кислородно-глюкозной депривации. Вещества ЛХТ-317 и ЛХТ-300 в ишемияподобных условиях эффективно подавляют активность NMDA-рецепторов указанных популяций клеток, но не действуют на кальбиндин-экспрессирующие ГАМКергические нейроны. Оба вещества повышают выживаемость клеток астроцитарной глии.

Научно-практическая значимость работы

В работе на экспериментальном уровне вскрыты фундаментальные основания и обоснованы ключевые положения применения нового класса потенциальных лекарственных средств - металлосодержащих и замещенных соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты при ишемическом нарушении мозгового кровообращения и дегенеративно-дистрофических процессах центральной нервной системы, в патогенезе которых ведущая роль принадлежит глутаматергической эксайтотоксичности.

По результатам комплексного применения современных технологий моделирования перспективных молекул, прогнозирования

фармакологической активности веществ, разработана технология химического синтеза циклических и линейных молекул двухвалентных металлов и диметилацетамида с двумя остатками 2-аминоэтансульфоновой кислоты, имеющая большое практическое значение.

Комплексное фармакологическое исследование позволило всесторонне изучить фармакологический спектр магниевого и диметилфенилацетамидного соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты и выявить механизмы реализации нейро- и цитопротекторного действия соединений при ишемических и дегенеративно-дистрофических поражений центральной нервной системы на уровнях in vivo и in vitro.

Разработана аналитическая методика определения соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты на примере соли ЛХТ-300 с изучением основных характеристик системной кинетики и биологического тканевого распределения вещества при его внутривенном введении крысам и кроликам, а также его биодоступности при внутримышечном пути введения.

Методология и методы исследования

Работа выполнена на нелинейных лабораторных крысах и мышах обоего пола, крысах Sprague-Dawley, мышах C57BI6, морских свинках и кроликах породы «Советская шиншилла», полученных из сертифицированных питомников и содержащихся в условиях, соответствующих требованиям принципов Надлежащей лабораторной практики, утвержденных приказом Минздрава России от 01.04.2016 №199н. В исследовании использованы приборы и материалы, отвечающие современным стандартам фармакологических исследований, в том числе уникальные исследовательские установки научных организаций Российской академии наук.

Внеэкспериментальный скрининг биологической активности и токсичности молекул осуществлен в программной среде PASS, синтез молекул проведен в лабораторных условиях, оснащенных валидированным и поверенным оборудованием. Острая токсичность и первичный фармакологический скрининг осуществлен в соответствие с действующими методическими рекомендациями [24]. Использовали следующие экспериментальные модели патологии центральной нервной системы: необратимой окклюзии средней мозговой артерии [25] и интралюминальной -преходящей - окклюзии мозговой артерии с ее реперфузией [26], бокового амиотрофического склероза по [27]. Объем поражения ткани головного мозга оценивали индикаторным методом, степень неврологических нарушений оценивали по шкалам Bederson et al. [28] Huang et al. [29]. Концентрацию глутаминовой кислоты в крови и тканях оценивали флюориметрически [30]. Для изучения локальных энергетических, окислительно-восстановительных

процессов, уровня формирования отека применяли методы определения рН, концентрации АТФ и свободной жидкости.

Механизмы действия соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты исследованы методом индуцированной хемилюминисценции (общая антирадикальная и общая прооксидантная активность тканей), методом определения активности супероксиддисмутазы и каталазы, с помощью количественного иммуноферментного определения тканевого содержания про- (ФНО-альфа и ИЛ-1 бета) и противовоспалительных (ИЛ-10) цитокинов, иммуногистохимического определения экспрессии маркеров апоптоза каспазы-3 и Bcl-2 в зоне ишемической пенумбры.

In vitro фрагмент исследования выполнен на смешанной нейроглиальной культуре гиппокампа новорожденных крыс Sprague-Dawley. Выживаемость различных популяций глутаматергических и ГАМКергических нейронов, клеток астроглии определяли методом иммуноцитохимии. Этим же методом идентифицировали экспрессию кальций-связывающих белков парвальбумина и кальбиндина. Для оценки влияния ЛХТ-317 и ЛХТ-300 на кальциевые сигналы NMDA-рецепторов применяли метод внутриклеточного биоимиджинга нейронов, загруженных флюоресцентным зондом Fura-2.

Связь диссертации с основными научными темами университета

Данный диссертационный проект выполнен при частичной финансовой поддержке гранта «Доклинические исследования лекарственного средства для лечения нарушения мозгового кровообращения», выполняемого ФГБОУ ВО «МГУ им. Н.П. Огарева» по договору №14.N08.11.0183 от 22.11.2017 года «Доклинические исследования лекарственного средства, действующего на NMDA-рецептор (ионотропный глутаматный рецептор) - глутаматный сайт, ионный канал, для лечения острых нарушений мозгового кровообращения», шифр 2017-14-N08-0088 (ФЦП «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу»).

Основные научные результаты диссертационного исследования внедрены в учебную работу кафедры фармакологии и клинической фармакологии с курсом фармацевтической технологии Медицинского института; в работу исследовательского семинара лабораторий Центра перспективных исследований инновационных лекарственных средств ФГБОУ ВО «МГУ им. Н.П. Огарёва»; в научную работу кафедры фармацевтической технологии и фармакологии Института профессионального образования ФГАОУ Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); в научную работу отдела химии, технологии синтетических лекарственных средств и аналитического контроля АО «ВНЦ БАВ».

Положения, выносимые на защиту

1. На основе проведенного внеэкспериментального прогнозирования биологической активности одиннадцати сконструированных металлосодержащих и замещенных соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты и последующего проведения токсикологического и фармакологического скрининга в опытах in vivo на мышах и крысах и in vitro в смешанной нейроглиальной культуре наиболее перспективными веществами для изучения фармакодинамики и фармакокинетики являются магниевая (соединение ЛХТ-317), цинковая (соединение ЛХТ-318) и диметилацетамидная (соединение ЛХТ-300) соли 2-аминоэтансульфоновой кислоты.

2. Магний-, цинксодержащие и диметилацетамид-замещенное соединения сульфокетокислоты при внутривенном введении в эффективной терапевтической дозе, определенной на скрининговом этапе, обладают надежным нейропротекторным эффектом на моделях транзиторного ишемического нарушения мозгового кровообращения, необратимой окклюзии средней мозговой артерии и бокового амиотрофического склероза у крыс, проявляющимся в ограничении размеров зон ишемии и некроза в головном мозгу и очагов запустевания в моторных зонах спинного мозга, ослаблением глубины неврологического дефицита и повышением выживаемости

животных. В порядке убывания нейропротекторной активности соединения располагаются следующим образом: ЛХТ-317 - ЛХТ-300 - ЛХТ-318. Механизмами реализации нейропротекторного действия соединений сульфокетокислоты являются снижение под действием соединением плазменной и тканевой концентрации глутаминовой кислоты, ограничение явлений отека и метаболического ацидоза, оптимизация обмена макроэргов в области повреждения на фоне подавления цитокин-опосредованной воспалительной реакции, интенсивности перекисных процессов, активации антирадикальных ферментов и коллатерального кровообращения. Молекулярной основой нейроцитопротекторного действия веществ ЛХТ-317 и ЛХТ-300 является подавление глутаматной эксайтотоксичности и повышение выживаемости глутаматергических, парвальбумин-содеражщих и неэкспрессирующих парвальбумин ГАМКергических нейронов, а также клеток астроцитарной глии, вследствие зависимого от времени и концентрации обратимого аллостерического ингибирования КМОА-рецепторов клеток ЦНС, а также антиапоптотические свойства молекул.

3. Разработанная аналитическая методика определения ЛХТ-300 в крови и других биологических средах позволила установить сопоставимость фармакокинетических констант у разных видов животных: у кроликов при введении дозы 17 мг/кг Стах равна 839 нг/мл, АиС - 909 нг*ч/мл, у крыс при введении дозы 20 мг/кг значение Стах составило 1122 нг/мл, а АИС - 457 нг^ч/мл. Таким образом, концентрации пропорциональны введенной дозе.По степени накопления вещества исследованные ткани располагались в следующем порядке (по убыванию значений АИС): Почка > Легкие > Селезенка > Сердце > Печень > Мозг > Мышца > Кишечник. Всего почками выводилось 5,11% от введенной дозы соединения. Металлосодержащие и замещенные соединения сульфокетокислоты представляют собой перспективный класс нейропротекторов, обладающих высоким терапевтическим эффектом и уникальным механизмом действия с разработанной технологией химического синтеза и аналитической методикой

определения в биологических средах, а соединения ЛХТ-300 и ЛХТ-317 являются кандидатами в лекарственные средства.

Степень достоверности полученных результатов

Достоверность основных положений и выводов диссертационного исследования подтверждается использованием в работе линейных и нелинейных лабораторных животных обоего пола, полученных из сертифицированных питомников и содержавшихся в соответствие с международными стандартами и требованиями национального регулятора. Результаты экспериментов in vitro получены на клеточных культурах, полученных и культивируемых согласно методическим рекомендациям по культуральным исследованиям.

Достоверность экспериментальных данных подтверждена квалификацией диссертанта и лабораторно-вспомогательного персонала, использованием современного научного оборудования (в том числе уникальных лабораторных установок научных учреждений РАН), расходных материалов и реактивов, приобретенных у официальных представителей фирм-производителей. Достоверность выводов подтверждается также корректно примененными методами вариационной статистики и количественного анализа.

Апробация диссертационной работы

Апробация диссертационной работы проведена на совместном заседании кафедр фармакологии и клинической фармакологии с курсом фармацевтической технологии, амбулаторно-поликлинической терапии, анестезиологии и реаниматологии, педиатрии, нормальной физиологии, госпитальной хирургии, факультетской хирургии, цитологии, гистологии, эмбриологии с курсом медицинской биологии и молекулярной биологии клетки, нормальной и патологической физиологии Медицинского института ФГБОУ ВО «МГУ им. Н.П. Огарева», протокол №8 от 27.08.2020 г.

Результаты представленного исследования докладывались и обсуждались на Российских национальных конгрессах «Человек и

лекарство» (2017-2020), Российских национальных конгрессах кардиологов (2018-2019), конференции с международным участием (Санкт-Петербург, 2019), XXI Международной медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2018), Актуальные вопросы фундаментальной и клинической медицины - конгресс молодых ученых (Екатеринбург, 2018), VI International Congress of Human Anatomy Associations (London, 2019).

Личный вклад автора

Семелева Е.В. сформулировала концепцию и основные направления исследования. Диссертанту принадлежит соавторство методов химического синтеза исследуемых молекул, нашедшее отражение в двух патентах на изобретение РФ. Автор лично провела внеэкспериментальный и фармако-токсикологический скрининг соединений 2-аминоэтансульфоновой кислоты. Научной группой под руководством автора диссертации воспроизведены модели ишемического, реперфузионного и дегенеративно-дистрофического повреждения ЦНС у крыс и выполнен анализ двигательных нарушений, площади поражения головного мозга, объемной скорости перфузии органа животных. При непосредственном участии автора проведены все биохимические, иммуногистохимические, электрофизиологические, иммуноцитохимические, биофизические и культуральные исследования. Автором проведен сбор, обработка и статистический анализ первичных результатов исследования. Семелева Е.В. принимала непосредственное деятельное участие в подготовке всех научных публикаций по теме диссертации.

Публикации по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 22 научные работы, в том числе 16 полнотекстовых научных статей опубликованы в изданиях и журналах из перечня ВАК при Минобрнауки России. Из них 6 статей опубликованы в изданиях, индексируемых международными системами цитирования Scopus и Web of Science. Получено 2 патента на изобретение Российской Федерации.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 326 страницах компьютерного текста, изложена по традиционному плану, построена из 10 глав (обзор литературы, материал и методы исследования, результаты собственных исследований изложены в семи главах, заключение), содержит выводы, практические рекомендации, изложения перспектив дальнейшего развития темы исследования.

Работа иллюстрирована 44 таблицами, 82 рисунками и микрофотографиями, содержит приложения 1 и 2. Библиографический список включает выходные данные 266 источников литературы, из которых 256 -иностранные.

1. ВЫЖИВАНИЕ КЛЕТОК ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ КАК МИШЕНЬ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ СОВРЕМЕННЫХ ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СТРАТЕГИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Нейроны, вследствие эволюционно высокой потребности в энергии, обладают высокой чувствительностью к ограничению в глюкозе, АТФ и кислороду, и являются наиболее подверженными гибели вследствие нарушения кровоснабжения или травматического повреждения нервной ткани [31]. Потеря нейронов может продолжаться в течение часов и даже дней после реперфузии в зависимости от клеточного состава пораженной области [32].

Клеточная гибель нейронов не может рассматриваться как изолированный процесс, напротив, представляет собой всю сложную совокупность общего ответа разных типов клеток. С одной стороны, нейроны взаимодействуют друг с другом путем широких коммуникативных возможностей синаптической трансмиссии. Поэтому, нарушения процессов синаптического взаимодействия и транссинаптической дегенерации проявляются нейрональной дисфункцией и клеточной гибелью нейронов в соответствующих областях головного мозга (ГМ) [33].

С другой стороны, современная наука стоит на пороге понимания интимных механизмов взаимодействия между всеми типами мозговых клеток, в частности, взаимоотношения глиальных клеток, нейронов и клеток кровеносных сосудов в рамках так называемого нейроваскулярного комплекса (НВК, neurovascular unit, NVU). Например, НВК регулирует не только мозговой кровоток в связи с необходимостью обеспечения ГМ и тканей в энергии, но также существенным образом участвует в поддержании функционального состояния гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) [34, 35]. С этих точек зрения, межклеточные взаимоотношения играют безусловно ключевую роль. Концепция нейрональной коммуникации существенно эволюционировала за последние годы. В 1980-е годы Baker с соавт.,

предположили, что помимо синаптических взаимодействий, должны существовать другие способы межнейронной сигнализации, позволяющие объяснить эффекты нейропептидов на процессы возбудимости [36]. Так появились термины нейрогормональные связи и нейромодуляция. Картина сегодня стала более сложной и многогранной в связи с идентификацией внеклеточных везикул, электрических синапсов и туннельных нанотрубок [3740].

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Семелева Елена Владимировна, 2021 год

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. World Health Organization: Top 10 causes of death. - WHO, 2018. https://www.who.int/en/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death

2. Мачинский, П. А. Сравнительная характеристика показателей заболеваемости ишемическим и геморрагическим инсультом в России / П.А. Мачинский и др. // Патологическая анатомия. - 2019. - Т. 50, №2. - С. 112-132.

3. Структура и факторы риска геморрагических инсультов с летальным исходом в Республике Мордовия / Ю.С. Крайнова, Н.А. Плотникова, Л.Я. Лабзина // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. - 2016 - № 3 (39). - С. 98-104.

4. Puig, B. Molecular communication of a dying neuron in stroke / B. Puig, S. Brenna, T. Magnus // Int. J. Mol. Sci. - 2018. - Vol. 19. - ID 2834.

5. Feigin, V.L. Global Burden of Stroke / V.L. Feigin, B. Norrving, G.A. Mensah // Circ. Res. - 2017. - Vol. 120. - P. 439-448.

6. Marchal, G. Prolonged persistence of substantial volumes of potentially viable brain tissue after stroke: A correlative PET-CT study with voxel-based data analysis / G. Marchal, V. Beaudouin, P. Rioux, V. de la Sayette, F. Le Doze, F. Viader, J.M. Derlon, J.C. Baron // Stroke. - 1996. - Vol. 27. - P. 599-606.

7. Dirnagl, U. Pathobiology of ischaemic stroke: An integrated view / U. Dirnagl, C. Iadecola, M.A. Moskowitz // Trends Neurosci. - 1999. - Vol. 22. - P. 391-397.

8. Liu, S. Targeting ischemic penumbra: Part I - From pathophysiology to therapeutic strategy / S. Liu, S.R. Levine, H.R. Winn // J. Exp. Stroke Transl. Med. - 2010. - Vol. 3. - P. 47-55.

9. Chamorro, A. Neuroprotection in acute stroke: Targeting excitotoxicity, oxidative and nitrosative stress, and inflammation / A. Chamorro, U. Dirnagl, X. Urra, A.M. Planas / Lancet Neurol. - 2016. - Vol. 15. - P. 869-881.

10. Saver, J.L. Time Is Brain - Quantified / J.L. Savier // Stroke. - 2006. -Vol. 37. - P. 263-266.

11. Pan, J. Reperfusion injury following cerebral ischemia: Pathophysiology, MR imaging, and potential therapies / J. Pan, A.-A. Konstas, B. Bateman, G.A. Ortolano, J. Pile-Spellman // Neuroradiology. - 2007. - Vol. 49. - P. 93-102.

12. Iadecola, C. The immunology of stroke: From mechanisms to translation / C. Iadecola, J. Anrather // Nat. Med. - 2011. - Vol. 17. - P. 796.

13. Chamorro, A. The immunology of acute stroke / A. Chamorro, A. Meisel, A.M. Planas, X. Urra, D. van de Beek, R. Veltkamp // Nat. Rev. Neurol. - 2012. -Vol. 8. - P. 401.

14. Schwartz, M. Neurological Disease as a Failure of Brain-Immune Crosstalk: The Multiple Faces of Neuroinflammation / M. Schwartz, A. Deczkowska // Trends Immunol. - 2016. - Vol. 37. - P. 668-679.

15. Sochocka, M. Inflammatory Response in the CNS: Friend or Foe? / M. Sochocka, B.S. Diniz, J. Leszek // Mol. Neurobiol. - 2017. - Vol. 54. - P. 80718089.

16. Mayer, A.M.S. Natural pharmacology in 2009-2011: Natural compounds with antibacterial, antidiabetic, antifungal, anti-inflammatory, antiprotozoal, antituberculosis, and antiviral activities; affecting the immune and nervous systems, and other miscellaneous mechanisms of action / A.M.S. Mayer, A.D. Rodriguez, O. Taglialatela-Scafati, N. Fusetani // Nat. Drugs. - 2013. - Vol. 11. - P. 2510-2573.

17. Menzie, S. Neuroprotective mechanisms of taurine against ischemic stroke / S. Menzie, H. Prentice, J.-Y. Wu // Brain Sci. - 2013. - Vol. 3(2). - P. 877907.

18. Chen, M. Differential roles of NMDA receptor subtypes in ischemic neuronal cell death and ischemic tolerance / M. Chen, T.-J. Lu, X.-J. Chen, et al. // Stroke. - 2008. - Vol. 39. - P. 3042-3048.

19. Способ получения производного 2,6-диметилфенилацетамида, обладающего церебропротекторной активностью: пат. №269506 Рос.

Федерация / Е.В. Блинова, Д.С. Блинов, С.Я. Скачилова, Е.В. Семелева, М.М. Гераськина, И.А. Громова; заявитель и патентообладатель - Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва», заявл. №2018118597 от 21.05.2018, опубликовано 04.06.2019. Бюл. № 16.

20. Скачилова С.Я. 2-(диэтиламино)-Ы-(2,6-диметилфенил) ацетамида L-глутаминат, обладающий пролонгированной противоаритмической активностью, фармацевтическая композиция. (Патент на изобретение.)/ Скачилова С.Я., Коротоножкин А.В., Алешина В.А., Гирева Н.Н., Блинова Е.В., Семелева Е.В., Блинов Д.С., Желтухин Н.К., Шилова Е.В./ RU 2697717 С1, 19.08.2019. Заявка № 2018118961 от 23.05.2018

21. Гераськина, М.М. Механизмы церебропротекторного действия циклического магнисодержащего соединения сульфокислоты. - Мария Михайловна Гераськина : дис. ... канд. мед. наук, 14.03.06 - Обнинск, 2019. -126 с.

22. Крайнова, Ю.С. Эффективность цинковой соли таурина при ишемическом поражении головного мозга (экспериментальное in vivo и in vitro) : дис. ... канд. мед. наук : 14.03.06 / Крайнова Юлия Сергеевна. -Саранск, 2020. - 128 с.

23. Громова, И.А. Нейропротекторная активность соединений таурина при реперфузионном повреждении головного мозга в эксперименте : дис. ... канд. мед. наук. : 14.03.06 / Громова Ирина Александровна. - Саранск, 2020. -130 с.

24. Арзамасцев, Е.В. Методические рекомендации по изучению общетоксического действия лекарственных средств / Е.В. Арзамасцев, И.В. Березовская, О.Л. Верстакова, Т.А. Гуськова, А. Д. Дурнев и др. / Руководство по доклиническому изучению лекарственных средств. Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и Ко, 2012. - С. 13-51.

25. Мирзоян, Р.С. Методические рекомендации по доклиническому изучению лекарственных средств для лечения нарушений мозгового кровообращения и мигрени / Р.С. Мирзоян и др. - М.: Гриф и Ко, 2012.

26. Longa, E. Z. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats / Longa E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. // Stroke; a journal of cerebral circulation. 1989. 20(1): 84-91.

27. Tovar-Y-Romo, L.B. Experimental model for the study of neurodegeneration in amyotrophic sclerosis / L.B. Tovar-Y-Romo, L.D. Santa-Cruz, R. Tapia // Mol. Neurodegener. - 2009. - Vol. 20. - ID 31.

28. Bederson, J. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurological examination / J. Bederson, L. Pitts, M. Tsuji et al. // Stroke. - 1986. - Vol. 17. - P. 472-476.

29. Huang, Z. Effects of cerebral ischemia in mice deficient in neuronal nitric oxide synthase / Z. Huang, P.L. Huang, N. Panahian, T. Dalkara, M.C. Fishman, M.A. Moskowitz // Science. - 1994. - Vol. 265. - P. 1883-1885.

30. Graham, L.T. Jr. Fluorometric determination of aspartate, glutamate, and gamma-aminobutyrate in nerve tissue using enzymic methods / Graham L.T. Jr., Aprison M.H. // Anal. Biochem. - 1966. - Vol. 15. - P. 487-497.

31. Choi, D.W. The Role of Glutamate Neurotoxicity in Hypoxic-Ischemic Neuronal Death / D.W. Choi, S.M. Rothman // Annu. Rev. Neurosci. - 1990. - Vol. 13. - P. 171-182.

32. Moskowitz, M.A. The Science of Stroke: Mechanisms in Search of Treatments / M.A. Moskowitz, E.H. Lo, C. Iadecola // Neuron. - 2010. - Vol. 67.

- P. 181-198.

33. Deleglise, B. Dysregulated Neurotransmission induces Trans-synaptic degeneration in reconstructed Neuronal Networks / B. Deleglise, B. Lassus, V. Soubeyre, M. Doulazmi, B. Brugg, P. Vanhoutte, J.-M. Peyrin // Sci. Rep. - 2018.

- Vol. 8. - P. 11596.

34. Iadecola, C. The Neurovascular Unit Coming of Age: A Journey through Neurovascular Coupling in Health and Disease / C. Iadecola // Neuron. - 2017. -Vol. 96. - P. 17-42.

35. Terasaki, Y. Mechanisms of Neurovascular Dysfunction in Acute Ischemic Brain / Y. Terasaki, Y. Liu, K. Hayakawa, L.D. Pham, E.H. Lo, X. Ji, K. Arai // Curr. Med. Chem. - 2014. - Vol. 21. - P. 2035-2042.

36. Barker, J.L.; Smith, T.G. Three Modes of Intercellular Neuronal Communication. In Progress in Brain Research; McConnell, P.S., Boer, G.J., Romijn, H.J., Van De Poll, N.E., Corner, M.A., Eds.; Elsevier: New York, NY, USA, 1980. - Vol. 53. - P. 169-192.

37. Agnati, L.F. Extracellular-vesicle type of volume transmission and tunnelling-nanotube type of wiring transmission add a new dimension to brain neuro-glial networks / L.F. Agnati, K. Fuxe // Philos. Trans. R. Soc. B Biol. Sci. -2014. - Vol. 369. - ID 20130505.

38. Harrison, E. Traumatic brain injury increases levels of miR-21 in extracellular vesicles: Implications for neuroinflammation / E. Harrison, B.G. Lamberty, C.G. Hochfelder, B.M. Meays, B. Morsey, M.L. Kelso, H. Fox, S.V. Yelamanchili // FEBS Open Bio. - 2016. - Vol. 6. - P. 835-846.

39. Rustom, A. Nanotubular Highways for Intercellular Organelle Transport / A. Rustom, R. Saffrich, I. Markovic, P. Walther, H.-H. Gerdes // Science. - 2004. - Vol. 303. - P. 1007-1010.

40. Wang, X. Long-distance electrical coupling via tunneling nanotubes / X. Wang, H.-H. Gerdes // Biochim. Biophys. Acta (BBA) Biomembr. - 2012. - Vol. 1818. - P. 2082-2086.

41. Budnik, V. Extracellular vesicles round off communication in the nervous system / V. Budnik, C. Ruiz-Canada, F. Wendler // Nat. Rev. Neurosci. - 2016. -Vol. 17. - P. 160-172.

42. Wang, Y. The release and trans-synaptic transmission of Tau via exosomes / Y. Wang, V. Balaji, S. Kaniyappan, L. Krüger, S. Irsen, K. Tepper, R.

Chandupatla, W. Maetzler, A. Schneider, E. Mandelkow, et al. // Mol. Neurodegener. - 2017. - Vol. 12. - P. 5.

43. Sardar Sinha, M. Alzheimer's disease pathology propagation by exosomes containing toxic amyloid-beta oligomers / M. Sardar Sinha, A. Ansell-Schultz, L. Civitelli, C. Hildesjö, M. Larsson, L. Lannfelt, M. Ingelsson, M. Hallbeck // Acta Neuropathol. - 2018. - Vol. 136. - P. 41-56.

44. Broughton, B.R.S. Apoptotic Mechanisms after Cerebral Ischemia / B.R.S. Broughton, D.C. Reutens, C.G. Sobey // Stroke. - 2009. - Vol. 40. - e331-e339.

45. Fricker, M.; Tolkovsky, A.M.; Borutaite, V.; Coleman, M.; Brown, G.C. // Neuronal Cell Death. Physiol. Rev. - 2018. - Vol. 98. - P. 813-880.

46. Rossi, D.J. Glutamate release in severe brain ischaemia is mainly by reversed uptake / D.J. Rossi, T. Oshima, D. Attwell // Nature. - 2000. - Vol. 403. -P. 316.

47. Khoshnam, S.E. Pathogenic mechanisms following ischemic stroke / S.E. Khoshnam, W. Winlow, M. Farzaneh, Y. Farbood, H.F. Moghaddam // Neurol. Sci. - 2017. - Vol. 38. - P. 1167-1186.

48. Weerasinghe, P. Oncosis: An important non-apoptotic mode of cell death / P. Weerasinghe, L.M. Buja // Experim. Mol. Pathol. - 2012. - Vol. 93. - P. 302308.

49. Rock, K.L. The inflammatory response to cell death / K.L. Rock, H. Kono // Annu. Rev. Pathol. - 2008. - Vol. 3. - P. 99-126.

50. Schinder, A.F. Mitochondrial Dysfunction Is a Primary Event in Glutamate Neurotoxicity / A.F. Schinder, E.C. Olson, N.C. Spitzer, M. Montal // J. Neurosci. - 1996. - Vol. 16. - P. 6125-6133.

51. Feoktistova, M. Programmed necrosis and necroptosis signalling / M. Feoktistova, M. Leverkus // FEBS J. - 2015. - Vol. 282. - P. 19-31.

52. Vandenabeele, P. Molecular mechanisms of necroptosis: An ordered cellular explosion / P. Vandenabeele, L. Galluzzi, T. Vanden Berghe, G. Kroemer // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. - 2010. - Vol. 11. - P. 700.

53. Liu, Q. Akt and mTOR mediate programmed necrosis in neurons / Q. Liu, J. Qiu, M. Liang, J. Golinski, K. van Leyen, J.E. Z. Jung, You, E.H. Lo, A. Degterev, M.J. Whalen // Cell Death Dis. - 2014. - Vol. 5. - e1084.

54. Vieira, M.; Fernandes, J.; Carreto, L.; Anuncibay-Soto, B.; Santos, M.; Han, J.; Fernandez-Lopez, A.; Duarte, C.B.; Carvalho, A.L.; Santos, A.E. Ischemic insults induce necroptotic cell death in hippocampal neurons through the up-regulation of endogenous RIP3. Neurobiol. Dis. 2014, 68, 26-36.

55. Yang, M. Neuroprotective Effect of ß-Caryophyllene on Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury via Regulation of Necroptotic Neuronal Death and Inflammation: In Vivo and in Vitro / M. Yang, Y. Lv, X. Tian, J. Lou, R. An, Q. Zhang, M. Li, L. Xu, Z. Dong // Front. Neurosci. - 2017. - Vol. 11. - P. 583.

56. Cruz, S.A. Dabrafenib, an inhibitor of RIP3 kinase-dependent necroptosis, reduces ischemic brain injury / S.A. Cruz, Z. Qin, A.F.R. Stewart, H.-H. Chen // Neural Regen. Res. - 2018. - Vol. 13. - P. 252-256.

57. Martens, S. Sorafenib tosylate inhibits directly necrosome complex formation and protects in mouse models of inflammation and tissue injury / S. Martens, M. Jeong, W. Tonnus, F. Feldmann, S. Hofmans, V. Goossens, N. Takahashi, J.H. Bräsen, E.-W. Lee, P. Van der Veken, et al. // Cell Death Dis. -2017. - Vol. 8. - e2904.

58. Gauthier, L.V. Atrophy of spared grey matter tissue predicts poorer motor recovery and rehabilitation response in chronic stroke / L.V. Gauthier, E. Taub, V.W. Mark, A. Barghi, G. Uswatte et al. // Stroke. - 2012. - Vol. 43. - P. 453457.

59. Lo, E.H. A new penumbra: Transitioning from injury into repair after stroke / E.H. Lo // Nat. Med. - 2008. - Vol. 14. - P. 497-500.

60. Ramos-Cabrer, P. Targeting the Ischemic Penumbra / P. Ramos-Cabrer, F. Campos, T. Sobrino, J. Castillo // Stroke. - 2011. - 2. - S7-S11.

287

61. Voll, R.E. Immunosuppressive effects of apoptotic cells / R.E. Voll, M. Herrmann, E.A. Roth, C. Stach, J.R. Kalden, I. Girkontaite // Nature. - 1997. - Vol. 390. - P. 350.

62. Henson, P.M. Dampening inflammation / P.M. Henson // Nat. Immunol.

- 2005. - Vol. 6. - P. 1179.

63. Witasp, E. Bridge over troubled water: Milk fat globule epidermal growth factor 8 promotes human monocyte-derived macrophage clearance of non-blebbing phosphatidylserine-positive target cells / E. Witasp, W. Uthaisang, C. Elenström-Magnusson, R. Hanayama, M. Tanaka, S. Nagata, S. Orrenius, B. Fadeel // Cell Death Differ. - 2007. - Vol. 14. - P. 1063.

64. Hanayama, R. Autoimmune Disease and Impaired Uptake of Apoptotic Cells in MFG-E8-Deficient Mice / R. Hanayama, M. Tanaka, K. Miyasaka, K. Aozasa, M. Koike, Y. Uchiyama, S. Nagata // Science. - 2004. - Vol. 304. - P. 1147-1150.

65. Rami, A. Apoptosis meets autophagy-like cell death in the ischemic penumbra: Two sides of the same coin? / A. Rami, D. Kögel // Autophagy. - 2008.

- Vol. 4. - P. 422-426.

66. Deng, Y.-H. Dynamic changes in neuronal autophagy and apoptosis in the ischemic penumbra following permanent ischemic stroke / Y.-H. Deng, H.-Y. He, L.-Q. Yang, P.-Y. Zhang // Neural Regen. Res. - 2016. - Vol. 11. - P. 1108-1114.

67. Majno, G. Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death / G. Majno, I. Joris // Am. J. Pathol. - 1995. - Vol. 146. - P. 3-15.

68. Rolfe, D.F. Cellular energy utilization and molecular origin of standard metabolic rate in mammals / D.F. Rolfe, G.C. Brown // Physiol. Rev. - 1997. - Vol. 77. - P. 731-758.

69. Attwell, D. An Energy Budget for Signaling in the Grey Matter of the Brain / D. Attwell, S.B. Laughlin // J. Cereb. Blood Flow Metab. - 2001. - Vol. 21.

- P. 1133-1145.

70. Lennie, P. The Cost of Cortical Computation / P. Lennie // Curr. Biol. -

2003. - Vol. 13. - P. 493-497.

71. Harris, J.J. Synaptic Energy Use and Supply / J.J. Harris, R. Jolivet, D. Attwell // Neuron. - 2012. - Vol. 75. - P. 762-777.

72. Magistretti, P.J. A Cellular Perspective on Brain Energy Metabolism and Functional Imaging / P.J. Magistretti, I. Allaman // Neuron. - 2015. - Vol. 86. - P. 883-901.

73. Iglesias, J. Metabolic and Inflammatory Adaptation of Reactive Astrocytes: Role of PPARs / J. Iglesias, L. Morales, G.E. Barreto // Mol. Neurobiol.

- 2017. - Vol. 54. - P. 2518-2538.

74. Hofmeijer, J. Ischemic Cerebral Damage: An Appraisal of Synaptic Failure / J. Hofmeijer, M.J.A. van Putten // Stroke. - 2012. - Vol. 43. - P. 607-615.

75. Larson, J. No oxygen? No problem! Intrinsic brain tolerance to hypoxia in vertebrates / J. Larson, K.L. Drew, L.P. Folkow, S.L. Milton, T.J. Park // J. Exp. Biol. - 2014. - Vol. 217. - P. 1024-1039.

76. Bolay, H. Persistent Defect in Transmitter Release and Synapsin Phosphorylation in Cerebral Cortex After Transient Moderate Ischemic Injury / H. Bolay, Y. Gursoy-Ozdemir, Y. Sara, R. Onur, A. Can, T. Dalkara // Stroke. - 2002.

- Vol. 33. - P. 1369-1375.

77. Ouanonou, A. Changes in the Calcium Dependence of Glutamate Transmission in the Hippocampal CA1 Region after Brief Hypoxia-Hypoglycemia / A. Ouanonou, Y. Zhang, L. Zhang // J. Neurophysiol. - 1999. - Vol. 82. - P. 11471155.

78. Martone, M.E. Modification of Postsynaptic Densities after Transient Cerebral Ischemia: A Quantitative and Three-Dimensional Ultrastructural Study / M.E. Martone, Y.Z. Jones, S.J. Young, M.H. Ellisman, J.A. Zivin, B.-R. Hu // J. Neurosci. - 1999. - Vol. 19. - P. 1988-1997.

79. Somjen, G. Mechanisms of early, reversible hypoxic synaptic failure. In Ions in the Brain: Normal Function, Seizures and Stroke / G. Somjen // Springer: Cham, Switzerland, 2004. - P. 327-337.

80. Fedorovich, S. Reduced Synaptic Vesicle Recycling during Hypoxia in Cultured Cortical Neurons / S. Fedorovich, J. Hofmeijer, M.J.A.M. van Putten, J. le Feber // Front. Cell. Neurosci. - 2017. - Vol. 11. - ID 32.

81. Gutiérrez-Vargas, J.A. Perspective of synaptic protection after postinfarction treatment with statins / J.A. Gutiérrez-Vargas, A. Cespedes-Rubio, G.P. Cardona-Gómez // J. Transl. Med. - 2015. - Vol. 13. - P. 118.

82. Le Feber, J. Progression of Neuronal Damage in an in Vitro Model of the Ischemic Penumbra / J. Le Feber, S. Tzafi Pavlidou, N. Erkamp, M.J.A.M. van Putten, J. Hofmeijer // PLoS ONE. - 2016. - Vol. 11. - e0147231.

83. Jones, E.V. SPARC and GluA1-Containing AMPA Receptors Promote Neuronal Health Following CNS Injury / E.V. Jones, Y. Bernardinelli, J.G. Zarruk, S. Chierzi, K.K. Murai // Front. Cell. Neurosci. - 2018. - Vol. 12. - P. 22.

84. Hartings, J.A. Delayed Secondary Phase of Peri-Infarct Depolarizations after Focal Cerebral Ischemia: Relation to Infarct Growth and Neuroprotection /

J.A. Hartings, M.L. Rolli, X.-C.M. Lu, F.C. Tortella // J. Neurosci. - 2003. -Vol. 23. - P. 11602-11610.

85. Dreier, J.P. The role of spreading depression, spreading depolarization and spreading ischemia in neurological disease / J.P. Drier // Nat. Med. - 2011. - Vol. 17. - P. 439.

86. Dreier, J.P. Spreading depolarization is not an epiphenomenon but the principal mechanism of the cytotoxic edema in various gray matter structures of the brain during stroke / J.P. Dreier, C.L. Lemale, V. Kola, A. Friedman, K. Schoknecht // Neuropharmacology. - 2018. - Vol. 134. - P. 189-207.

87. Kerr, J.F.R. Apoptosis: A Basic Biological Phenomenon with Wideranging Implications in Tissue Kinetics / J.F.R. Kerr, A.H. Wyllie, A.R. Currie // Br. J. Cancer. - 1972. - Vol. 26. - P. 239-257.

88. Elliott, M.R. Clearance of apoptotic cells: Implications in health and disease / M.R. Elliott, K.S. Ravichandran // J. Cell Biol. - 2010. - Vol. 189. - P.

1059-1070.

89. Ginhoux, F. Fate Mapping Analysis Reveals that Adult Microglia Derive from Primitive Macrophages / F. Ginhoux, M. Greter, M. Leboeuf, S. Nandi, P. See, S. Gokhan, M.F. Mehler, S.J. Conway, L.G. Ng, E.R. Stanley, et al. // Science. -2010. - Vol. 330. - P. 841-845.

90. Magnus, T. Astrocytes Are Less Efficient in the Removal of Apoptotic Lymphocytes than Microglia Cells: Implications for the Role of Glial Cells in the Inflamed Central Nervous System / T. Magnus, A. Chan, R.A. Linker, K.V. Toyka, R. Gold // J. Neuropathol. Exp. Neurol. - 2002. - Vol. 61. - P. 760-766.

91. Stolzing, A. Neuronal apoptotic bodies: Phagocytosis and degradation by primary microglial cells / A. Stolzing, T. Grune // FASEB J. - 2004. - Vol. 18. - P. 743-745.

92. Sokolowski, J.D. Fractalkine is a "find-me" signal released by neurons undergoing ethanol-induced apoptosis / J.D. Sokolowski, C.N. Chabanon-Hicks, C.Z. Han, D.S. Heffron, J.W. Mandell // Front. Cell. Neurosci. - 2014. - Vol. 8. -P. 360.

93. Fricker, M. Primary phagocytosis of viable neurons by microglia activated with LPS or Ap is dependent on calreticulin/LRP phagocytic signalling / M.

Fricker, M.J. Oliva-Martin, G.C. Brown // J. Neuroinflamm. - 2012. - Vol. 9. - P. 196.

94. Claude, J. Microglial CD33-Related Siglec-E Inhibits Neurotoxicity by Preventing the Phagocytosis-Associated Oxidative Burst / J. Claude, B. Linnartz-Gerlach, A.P. Kudin, W.S. Kunz, H. Neumann // J. Neurosci. - 2013. - Vol. 33. -P. 18270-18276.

95. Ravichandran, K.S. Beginnings of a good apoptotic meal: The find-me and eat-me signaling pathways / K.S. Ravichandran // Immunity. - 2011. - Vol. 35. - p. 445-455.

96. Brown, G.C. Microglial phagocytosis of live neurons / G.C. Brown, J.J.

Neher // Nat. Rev. Neurosci. - 2014. - Vol. 15. - P. 209.

97. Neher, J.J. Inhibition of Microglial Phagocytosis Is Sufficient to Prevent Inflammatory Neuronal Death / J.J. Neher, U. Neniskyte, J.-W. Zhao, A. Bal-Price, A.M. Tolkovsky, G.C. Brown // J. Immunol. - 2011. - Vol. 186. - P. 4973-4983.

98. Takahashi, K. Clearance of apoptotic neurons without inflammation by microglial triggering receptor expressed on myeloid cells-2 / K. Takahashi, C.D.P.

Rochford, H. Neumann // J. Exp. Med. - 2005. - Vol. 201. - P. 647-657.

99. Brown, G.C. Eaten alive! Cell death by primary phagocytosis: 'phagoptosis' / G.C. Brown, J.J. Neher // Trends Biochem. Sci. - 2012. - Vol. 37. - P. 325-332.

100. Fu, R. Phagocytosis of Microglia in the Central Nervous System Diseases / R. Fu, Q. Shen, P. Xu, J.J. Luo, Y. Tang // Mol. Neurobiol. - 2014. -Vol. 49. - P. 1422-1434.

101. Neher, J.J. Phagocytosis executes delayed neuronal death after focal brain ischemia / J.J. Neher, J.V. Emmrich, M. Fricker, P.K. Mander, C. Thery, G.C. Brown // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2013. - Vol. 110. - E4098.

102. Chung, W.-S. Astrocytes mediate synapse elimination through MEGF10 and MERTK pathways / W.-S. Chung, L.E. Clarke, G.X. Wang, B.K. Stafford, A. Sher, C. Chakraborty, J. Joung, L.C. Foo, A. Thompson, C. Chen, et al. // Nature. -2013. - Vol. 504. - P. 394.

103. Chung, W.-S. Novel allele-dependent role for APOE in controlling the rate of synapse pruning by astrocytes / W.-S. Chung, P.B. Verghese, C. Chakraborty, J. Joung, B.T. Hyman, J.D. Ulrich, D.M. Holtzman, B.A. Barres // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2016. - Vol. 113. - P. 10186-10191.

104. Morizawa, Y.M. Reactive astrocytes function as phagocytes after brain ischemia via ABCA1-mediated pathway / Y.M. Morizawa, Y. Hirayama, N. Ohno, S. Shibata, E. Shigetomi, Y. Sui, J. Nabekura, K. Sato, F. Okajima, H. Takebayashi, et al. // Nat. Commun. - 2017. - Vol. 8. - P. 28.

105. Gomez-Arboledas, A. Phagocytic clearance of presynaptic dystrophies

by reactive astrocytes in Alzheimer's disease / A. Gomez-Arboledas, J.C. Davila, E. Sanchez-Mejias, V. Navarro, C. Nunez-Diaz, R. Sanchez-Varo, M.V. Sanchez-Mico, L. Trujillo-Estrada, J.J. Fernandez-Valenzuela, M. Vizuete, et al. // Glia. -2018 . -Vol. 66. - P. 637-653.

106. Xing, C. Help-Me Signaling: Non-Cell Autonomous Mechanisms of Neuroprotection and Neurorecovery / C. Xing, E.H. Lo // Prog. Neurobiol. - 2017.

- Vol. 152. - P. 181-199.

107. Gulke, E. Danger signals in stroke and their role on microglia activation after ischemia / E. Gulke, M. Gelderblom, T. Magnus // Ther. Adv. Neurol. Disord.

- 2018. - Vol. 11. - ID 1756286418774254.

108. Schilling, M. Predominant phagocytic activity of resident microglia over hematogenous macrophages following transient focal cerebral ischemia: An investigation using green fluorescent protein transgenic bone marrow chimeric mice / M. Schilling, M. Besselmann, M. Müller, J.K. Strecker, E.B. Ringelstein, R. Kiefer // Exp. Neurol. - 2005. - Vol. 196. - P. 290-297.

109. Kronenberg, G. Distinguishing features of microglia- and monocyte-derived macrophages after stroke / G. Kronenberg, R. Uhlemann, N. Richter, F. Klempin, S. Wegner, L. Staerck, S. Wolf, W. Uckert, H. Kettenmann, M. Endres, et al. // Acta Neuropathol. - 2018. - Vol. 135. - P. 551-568.

110. Frühbeis, C. Neurotransmitter-Triggered Transfer of Exosomes Mediates Oligodendrocyte-Neuron Communication / C. Frühbeis, D. Fröhlich, W.P. Kuo, J. Amphornrat, S. Thilemann, A.S. Saab, F. Kirchhoff, W. Möbius, S. Goebbels, K.-A. Nave, et al. // PLOS Biol. - 2013. - Vol. 11. - e1001604.

111. Fröhlich, D. Multifaceted effects of oligodendroglial exosomes on neurons: Impact on neuronal firing rate, signal transduction and gene regulation / D. Fröhlich, W.P. Kuo, C. Frühbeis, J.-J. Sun, C.M. Zehendner, H.J. Luhmann, S. Pinto, J. Toedling, J. Trotter, E.-M. Krämer-Albers // Philos. Trans. R. Soc. B Biol. Sci. -2014. - Vol. 369. - P. 1652.

112. Atkin-Smith, G.K. A novel mechanism of generating extracellular

vesicles during apoptosis via a beads-on-a-string membrane structure / G.K. Atkin-Smith, R. Tixeira, S. Paone, S. Mathivanan, C. Collins, M. Liem, K.J. Goodall, K.S. Ravichandran, M.D. Hulett, I.K.H. Poon // Nat. Commun. - 2015. - Vol. 6. - P. 7439.

113. Elmore, S. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death / S. Elmore // Toxicol. Pathol. - 2007. - Vol. 35. - P. 495-516.

114. Fraser, D.A. C1q enhances microglial clearance of apoptotic neurons and neuronal blebs, and modulates subsequent inflammatory cytokine production / D.A. Fraser, K. Pisalyaput, A.J. Tenner // J. Neurochem. - 2010. - Vol. 112. - P. 733743.

115. Fransen, J.H. Mouse dendritic cells matured by ingestion of apoptotic blebs induce T cells to produce interleukin-17 / J.H. Fransen, L.B. Hilbrands, J. Ruben, M. Stoffels, G.J. Adema, J. van der Vlag, J.H. Berden // Arthritis Rheum. -2009. - Vol. 60. - P. 2304-2313.

116. Caruso, S. Apoptotic Cell-Derived Extracellular Vesicles: More than Just Debris / S. Caruso, I.K.H. Poon // Front. Immunol. - 2018. - Vol. 9. - Article ID 1486.

117. Holmgren, L. Horizontal Transfer of DNA by the Uptake of Apoptotic Bodies / L. Holmgren, A. Szeles, E. Rajnavolgyi, J. Folkman, G. Klein, I. Ernberg, K.I. Falk // Blood. - 1999. - Vol. 93. - P. 3956-3963.

118. Bergsmedh, A. Horizontal transfer of oncogenes by uptake of apoptotic bodies / A. Bergsmedh, A. Szeles, M. Henriksson, A. Bratt, M.J. Folkman, A.-L. Spetz, L. Holmgren // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2001. - Vol. 98. - P. 64076411.

119. Gregory, C.D. Apoptotic Tumor Cell-Derived Extracellular Vesiclesas Important Regulators of the Onco-Regenerative Niche / C.D. Gregory, I. Dransfield // Front. Immunol. - 2018. - Vol. 9. - P. 1111.

120. Lauber, K. Tumor Biology: With a Little Help from My Dying Friends / K. Lauber, M. Herrmann // Curr. Biol. - 2015. - Vol. 25. - R198-R201.

121. Pavlyukov, M.S. Apoptotic Cell-Derived Extracellular Vesicles Promote

294

Malignancy of Glioblastoma via Intercellular Transfer of Splicing Factors / M.S. Pavlyukov, H. Yu, S. Bastola, M. Minata, V.O. Shender, Y. Lee, S. Zhang, J. Wang, S. Komarova, J. Wang, et al. // Cancer Cell. - 2018. - Vol. 34. - P. 119 - Art. ID135.e10.

122. Berda-Haddad, Y. Sterile inflammation of endothelial cell-derived apoptotic bodies is mediated by interleukin-1a / Y. Berda-Haddad, S. Robert, P. Salers, L. Zekraoui, C. Farnarier, C.A. Dinarello, F. Dignat-George, G. Kaplanski // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2011. - Vol. 108. - P. 20684-20689.

123. Maas, S.L.N. Extracellular vesicles: Unique intercellular delivery vehicles / S.L.N. Maas, X.O. Breakefield, A.M. Weaver // Trends Cell Biol. - 2017. - Vol. 27. - P. 172-188.

124. Kowal, J. Biogenesis and secretion of exosomes / J. Kowal, M. Tkach, C. Thery // Curr. Opin. Cell Biol. - 2014. - Vol. 29. - P. 116-125.

125. Colombo, M. Biogenesis, Secretion, and Intercellular Interactions of Exosomes and Other Extracellular Vesicles / M. Colombo, G. Raposo, C. Thery // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. - 2014. - Vol. 30. - P. 255-289.

126. Tkach, M. Why the need and how to approach the functional diversity of extracellular vesicles / M. Tkach, J. Kowal, C. Thery // Philos. Trans. R. Soc. B Biol. Sci. - 2018. - Vol. 373. - ID 20160479.

127. Crescitelli, R. Distinct RNA profiles in subpopulations of extracellular vesicles: Apoptotic bodies, microvesicles and exosomes / R. Crescitelli, C. Lässer, T.G. Szabo, A. Kittel, M. Eldh, I. Dianzani, E.I. Buzas, J. Lötvall // J. Extracell. Vesicles. - 2013. - Vol. 2.

128. Kowal, J. Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes / J. Kowal, G. Arras, M. Colombo, M. Jouve, J.P. Morath, B. Primdal-Bengtson, F. Dingli, D. Loew, M. Tkach, C. Thery et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2016. - Vol. 113. - E968-E977.

129. Willms, E. Cells release subpopulations of exosomes with distinct

molecular and biological properties / E. Willms, H.J. Johansson, I. Mäger, Y. Lee, K.E.M. Blomberg, M. Sadik, A. Alaarg, C.I.E. Smith, J. Lehtiö, S. El Andaloussi, et al. // Sci. Rep. - 2016. - Vol. 6. - ID. 22519.

130. Johnstone, R.M. Exosome formation during maturation of mammalian and avian reticulocytes: Evidence that exosome release is a major route for externalization of obsolete membrane proteins / R.M. Johnstone, A. Mathew, A.B. Mason, K. Teng // J. Cell. Physiol. - 1991. - Vol. 147. - P. 27-36.

131. Harding, C.V. Exosomes: Looking back three decades and into the future / C.V. Harding, J.E. Heuser, P.D. Stahl // J. Cell Biol. - 2013. - Vol. 200. - P. 367371.

132. Witwer, K.W. Updating the MISEV minimal requirements for extracellular vesicle studies: Building bridges to reproducibility / K.W. Witwer, C. Soekmadji, A.F. Hill, M.H. Wauben, E.I. Buzas, D. Di Vizio, J.M. Falcon-Perez, C. Gardiner, F. Hochberg, I.V. Kurochkin, et al. // J. Extracell. Vesicles. - 2017. - Vol. 6. - ID 1396823.

133. Mustapic, M. Plasma Extracellular Vesicles Enriched for Neuronal Origin: A Potential Window into Brain Pathologic Processes / M. Mustapic, E. Eitan, J.K. Werner, S.T. Berkowitz, M.P. Lazaropoulos, J. Tran, E.J. Goetzl, D. Kapogiannis // Front. Neurosci. - 2017. - Vol. 11. - ID 278.

134. Basso, M. Extracellular Vesicles and a Novel Form of Communication in the Brain / M. Basso, V. Bonetto // Front. Neurosci. - 2016. - Vol. 10. - Article ID 127.

135. Yanez-Mo, M. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions / M. Yanez-Mo, P.R.M. Siljander, Z. Andreu, A.B. Zavec, F.E. Borras, E.I. Buzas, K. Buzas, E. Casal, F. Cappello, J. Carvalho, et al. // J. Extracell. Vesicles. - 2015. - ID 4.

136. Krämer-Albers, E.-M. Extracellular vesicles: Interneural shuttles of complex messages / E.-M. Krämer-Albers, A.F. Hill // Curr. Opin. Neurobiol. -2016. - Vol. 39. - P. 101-107.

137. Xin, H. MiR-133b promotes neural plasticity and functional recovery

after treatment of stroke with multipotent mesenchymal stromal cells in rats via transfer of exosome-enriched extracellular particles / H. Xin, Y. Li, Z. Liu, X. Wang, X. Shang, Y. Cui, Z.G. Zhang, M. Chopp // Stem Cells. - 2013. - Vol. 31. - P. 27372746.

138. Zhang, Z.G. Exosomes in stroke pathogenesis and therapy / Z.G. Zhang, M. J. Chopp // Clin. Investig. - 2016. - Vol. 126. - P. 1190-1197.

139. Doeppner, T.R. Extracellular Vesicles Improve Post-Stroke Neuroregeneration and Prevent Postischemic Immunosuppression / T.R. Doeppner, J. Herz, A. Görgens, J. Schlechter, A.-K. Ludwig, S. Radtke, K. de Miroschedji, P.A. Horn, B. Giebel, D.M. Hermann // Stem Cells Transl. Med. - 2015. - Vol. 4. - P. 1131-1143.

140. Doeppner, T.R. Concise Review: Extracellular Vesicles Overcoming Limitations of Cell Therapies in Ischemic Stroke / T.R. Doeppner, M. Bähr, D.M.; Hermann B. Giebel et al.// Stem Cells Transl. Med. - 2017. - Vol. 6. - P. 20442052.

141. Osier, N. Exosomesin Acquired Neurological Disorders: New Insights into Pathophysiology and Treatment / N. Osier, V. Motamedi, K. Edwards, A. Puccio, R. Diaz-Arrastia, K. Kenney, J. Gill // Mol. Neurobiol. - 2018. - Vol. 12. -P. 39.

142. Yang, Y. Inflammation leads to distinct populations of extracellular vesicles from microglia / Y. Yang, A. Boza-Serrano, C.J.R. Dunning, B.H. Clausen, K.L. Lambertsen, T. Deierborg // J. Neuroinflamm. - 2018. - Vol. 15. - Article ID 168.

143. Prada, I. Glia-to-neuron transfer of miRNAs via extracellular vesicles: A new mechanism underlying inflammation-induced synaptic alterations / I. Prada, M. Gabrielli, E. Turola, A. Iorio, G. D'Arrigo, R. Parolisi, M. De Luca, M. Pacifici, M. Bastoni, M. Lombardi, et al. // Acta Neuropathology. - 2018. - Vol. 135. - P. 529550.

144. Ji, Q. Increased Brain-Specific MiR-9 and MiR-124 in the Serum Exosomes of Acute Ischemic Stroke Patients / Q. Ji, Y. Ji, J. Peng, X. Zhou, X.

Chen, H. Zhao, T. Xu, L. Chen, Y. Xu // PLoS ONE. - 2016. - Vol. 11. - Article e0163645.

145. Chen, Y. Increased Circulating Exosomal miRNA-223 Is Associated with Acute Ischemic Stroke / Y. Chen, Y. Song, J. Huang, M. Qu, Y. Zhang, J. Geng, Z. Zhang, J. Liu, G.-Y. Yang // Front. Neurol. - 2017. - Vol. 8. - Article ID 57.

146. Hayakawa, K. Transfer of mitochondria from astrocytes to neurons after stroke / K. Hayakawa, E. Esposito, X. Wang, Y. Terasaki, Y. Liu, C. Xing, X. Ji, E.H. Lo // Nature. - 2016. - Vol. 535. - ID 551.

147. Lachenal, G. Release of exosomes from differentiated neurons and its regulation by synaptic glutamatergic activity / G. Lachenal, K. Pernet-Gallay, M. Chivet, F.J. Hemming, A. Belly, G. Bodon, B. Blot, G. Haase, Y. Goldberg, R. Sadoul // Mol. Cell. Neurosci. - 2011. - Vol. 46. - P. 409-418.

148. Xu, B. Neurons secrete miR-132-containing exosomes to regulate brain vascular integrity / B. Xu, Y. Zhang, X.-F. Du, J. Li, H.-X. Zi, J.-W. Bu, Y. Yan, H. Han, J.-L. Du // Cell Res. - 2017. - Vol. 27. - P. 882-897.

149. Perez-Gonzalez, R. The exosome secretory pathway transports amyloid precursor protein carboxyl-terminal fragments from the cell into the brain extracellular space / R. Perez-Gonzalez, S.A. Gauthier, A. Kumar, E. Levy // J. Biol. Chem. - 2012. - Vol. 287. - P. 43108-43115.

150. Levy, E. Exosomes in the Diseased Brain: First Insights from In vivo Studies / E. Levy // Front. Neurosci. - 2017. - Vol. 11. - P. 142.

151. Vella, L.J. A rigorous method to enrich for exosomes from brain tissue / L.J. Vella, B.J. Scicluna, L. Cheng, E.G. Bawden, C.L. Masters, C.S. Ang, N. Willamson, C. McLean, K.J. Barnham, A.F. Hill // J. Extracell. Vesicles. - 2017. -Vol. 6. - ID 1348885.

152. Ngolab, J. Brain-derived exosomes from dementia with Lewy bodies propagate a-synuclein pathology / J. Ngolab, I. Trinh, E. Rockenstein, M. Mante, J. Florio, M. Trejo, D. Masliah, A. Adame, E. Masliah, R.A. Rissman // Acta Neuropathol. Commun. - 2017. - Vol. 5. - P. 46.

153. Polanco, J.C. Extracellular Vesicles Isolated from the Brains of rTg4510 Mice Seed Tau Protein Aggregation in a Threshold-dependent Manner / J.C. Polanco, B.J. Scicluna, A.F. Hill, J. Götz // J. Biol. Chem. - 2016. - Vol. 291. - P. 12445-12466.

154. Buller, B. MiR-21 protects neurons from ischemic death / B. Buller, X. Liu, X. Wang, R.L. Zhang, L. Zhang, A. Hozeska-Solgot, M. Chopp, Z.G. Zhang, // FEBS J. - 2010. - Vol. 277. - P. 4299-4307.

155. Lai, T.W. Excitotoxicity and stroke: Identifying novel targets for neuroprotection / T.W. Lai, S. Zhang, Y.T. Wang // Prog. Neurobiol. - 2014. - Vol. 115. - P. 157-188.

156. Poon, I.K.H. Apoptotic cell clearance: Basic biology and therapeutic potential / I.K.H. Poon, C.D. Lucas, A.G. Rossi, K.S. Ravichandran // Nat. Rev. Immunol. - 2014. - Vol. 14. - P. 166-180.

157. Hong, K.-S. Statins in Acute Ischemic Stroke: A Systematic Review / K.-S. Hong, J.S. Lee // J. Stroke. - 2015. - Vol. 17. - P. 282-301.

158. Shih-Pin, C. Novel Therapeutic Targets against Spreading Depression / C. Shih-Pin, A. Cenk // Headache J. Head Face Pain. - 2017. - Vol. 57. - P. 13401358.

159. Whalen, A.J. Control of Spreading Depression with Electrical Fields / A.J. Whalen, Y. Xiao, H. Kadji, M.A. Dahlem, B.J. Gluckman, S.J. Schiff // Sci. Rep. - 2018. - Vol. 8. - P. 8769.

160. Xin, H.; Li, Y.; Chopp, M. Exosomes / miRNAs as mediating cell-based therapy of stroke / H. Xin, Y. Li, M. Chopp // Front. Cell. Neurosci. - 2014. - Vol. 8. - P. 377.

161. Otero-Ortega, L. White Matter Repair After Extracellular Vesicles Administration in an Experimental Animal Model of Subcortical Stroke / Otero- L. Ortega, F. Laso-García, M.d.C. Gómez-de Frutos, B. Rodríguez-Frutos, Pascual- J. Guerra, B. Fuentes, E. Díez-Tejedor, M. Gutiérrez-Fernández // Sci. Rep. - 2017. -Vol. 7. - P. 44433.

162. Xin, H. Systemic Administration of Exosomes Released from

Mesenchymal Stromal Cells Promote Functional Recovery and Neurovascular Plasticity After Stroke in Rats / H. Xin, Y. Li, Y. Cui, J.J. Yang, Z.G. Zhang, M. Chopp // J. Cereb. Blood Flow Metab. - 2013. - Vol. 33. - P. 1711-1715.

163. Cunningham, C.J. The therapeutic potential of the mesenchymal stem cell secretome in ischaemic stroke / C.J. Cunningham, E. Redondo-Castro, S.M. Allan // J. Cereb. Blood Flow Metab. - 2018. - Vol. 38. - P. 1276-1292.

164. Kordelas, L. MSC-derived exosomes: A novel tool to treat therapy-refractory graft-versus-host disease / L. Kordelas, V. Rebmann, A.K. Ludwig, S. Radtke, J. Ruesing, T.R. Doeppner, M. Epple, P.A. Horn, D.W. Beelen, B. Giebel // Leukemia. - 2014. - Vol. 28. - P. 970.

165. Lener, T. Applying extracellular vesicles based therapeutics in clinical trials—An ISEV position paper. J. Extracell / T. Lener, M. Gimona, L. Aigner, V. Börger, E. Buzas, G. Camussi, N. Chaput, D. Chatterjee, F.A. Court, H.A. del Portillo, et al. // Vesicles. - 2015. - Vol. 4. - P. 10-3402.

166. Luan, X. Engineering exosomes as refined biological nanoplatforms for drug delivery / X. Luan, K. Sansanaphongpricha, I. Myers, H. Chen, H. Yuan, D. Sun // Acta Pharmacol. Sin. - 2017. - Vol. 38. - P. 754.

167. Yang, J. Exosome Mediated Delivery of miR-124 Promotes Neurogenesis after Ischemia / J. Yang, X. Zhang, X. Chen, L. Wang, G. Yang // Mol. Ther. Nucleic Acids. - 2017. - Vol. 7. - P. 278-287.

168. Kalani, A. Curcumin-Loaded Embryonic Stem Cell Exosomes Restored Neurovascular Unit Following Ischemia-Reperfusion Injury / A. Kalani, P. Chaturvedi, P.K. Kamat, C. Maldonado, P. Bauer, I.G. Joshua, S.C. Tyagi, N. Tyagi // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2016. - Vol. 79. - P. 360-369.

169. Wake, H. Resting microglia directly monitor the functional state of synapses in vivo and determine the fate of ischemic terminals / H. Wake, A.J. Moorhouse, S. Jinno, S. Kohsaka, J. Nabekura // J. Neurosci. - Vol. 29. - P. 39743980.

170. Bessis, A. Microglial control of neuronal death and synaptic properties /

A. Bessis, C. Bechade, D. Bernard, A. Roumier // Glia. - 2007. - Vol. 55. - P. 233238.

171. Sierra, A. Microglia shape adult hippocampal neurogenesis through apoptosis-coupled phagocytosis / A. Sierra, J.M. Encinas, J.J. Deudero, J.H. Chancey, G. Enikolopov, L.S. Overstreet-Wadiche, S.E. Tsirka, M. Maletic-Savatic // Cell Stem Cell. - 2010. - Vol. 7. - P. 483-495.

172. Soulet, D. Bone-marrow-derived microglia: myth or reality? / D. Soulet, S. Rivest // Curr. Opin. Pharmacol. - Vol. 8. - P. 508-518.

173. Frijns, C.J. Inflammatory cell adhesion molecules in ischemic cerebrovascular disease / C.J. Frijns, L.J. Kappelle // Stroke. - 2012. - Vol. 33. - P. 2115-2122.

174. Amantea, D. Post-ischemic brain damage: pathophysiology and role of inflammatory mediators / D. Amantea, G. Nappi, G. Bernardi, G. Bagetta, M.T. Corasaniti // FEBS J. - 2009. - Vol. 276. - P. 13-26.

175. Bailey, S.L. Innate and adaptive immune responses of the central nervous system / S.L. Bailey, P.A. Carpentier, E.J. Mcmahon, W.S. Begolka, S.D. Miller // Crit. Rev. Immunol. - 2006. - Vol. 26. - P. 149-188.

176. Streit, W.J. Microglia and neuroprotection: implications for Alzheimer's disease / W.J. Streit // Brain Res. Brain Res. Rev. - 2015. - Vol. - P. 234-239.

177. Kettenmann, H. Physiology of microglia / H. Kettenmann, U.K. Hanisch, M. Noda, A. Verkhratsky // Physiol. Rev. - 2011. - Vol. 91. - P. 461-553.

178. Neumann, H. Neuronal control of MHC class II inducibility in rat astrocytes and microglia / H. Neumann, J. Boucraut, C. Hahnel, T. Misgeld, H. Wekerle // Eur. J. Neurosci. - 1996. - Vol. 8. - P. 2582-2590.

179. Carson, M.J. The cellular response in neuroinflammation: The role of leukocytes, microglia and astrocytes in neuronal death and survival / M.J. Carson, J.C. Thrash, B. Walter // Clin. Neurosci. Res. - 2006. - Vol. 6. - P. 237-245.

180. Ekdahl, C.T. Brain inflammation and adult neurogenesis: the dual role of microglia / C.T. Ekdahl, Z. Kokaia, O. Lindvall // Neuroscience. - 2009. - Vol. 158. - P. 1021-1029.

181. Schwartz, M. Microglial phenotype: is the commitment reversible? / M. Schwartz, O. Butovsky, W. Brâck, U.K. Hanisch // Trends Neurosci. - 2006. - Vol. 29. - P. 68-74.

182. Graeber, M.B. Microglia: biology and pathology / M.B. Graeber, W.J. Streit // Acta Neuropathol. - 2010. - Vol. 119. - P. 89-105.

183. Dirscherl, K. Luteolin triggers global changes in the microglial transcriptome leading to a unique anti-inflammatory and neuroprotective phenotype / K. Dirscherl, M. Karlstetter, S. Ebert, D. Kraus, J. Hlawatsch, Y. Walczak, C. Moehle, R. Fuchshofer, T. Langmann // J. Neuroinflammation. - 2010. - Vol. 7. -P. 3.

184. Mantovani, A. The chemokine system in diverse forms of macrophage activation and polarization / A. Mantovani, A. Sica, S. Sozzani, P. Allavena, A. Vecchi, M. Locati // Trends Immunol. - 2014. - Vol. 25. - P. 677-686.

185. Sica, A. Tumour-associated macrophages are a distinct M2 polarised population promoting tumour progression: potential targets of anti-cancer therapy / A. Sica, T. Schioppa, A. Mantovani, P. Allavena // Eur. J. Cancer. - 2016. - Vol. 42. - P. 717-727.

186. Rolls, A. Toll- like receptors modulate adult hippocampal neurogenesis / A. Rolls, R. Shechter, A. London, Y. Ziv, A. Ronen, R. Levy, M. Schwartz // Nat. Cell. Biol. - 2017. - Vol. - P. 1081-1088.

187. Miele, V.J. Subdural hematomas in boxing: the spectrum of consequences / V.J. Miele, J.E. Bailes, R.C. Cantu, C.H. Rabb // Neurosurgery Focus. - 2016. - Vol. 21. - E10.

188. Zlokovic, B.V. Neurovascular mechanisms of Alzheimer's neurodegeneration / B.L. Zlovic // Trend Neurosci. - 2005. - Vol. 28. - P. 202-208.

189. Lau, A. Glutamate receptors, neurotoxicity and neurodegeneration / A. Lau, M. Tymianski // Pflugers Arch. - 2010. - Vol. 460. - P. 525-542.

190. Rodriguez, M.J. Pattern of injury with a graded excitotoxic insult and ensuing chronic medial septal damage in the rat brain / M.J. Rodriguez, A. Prats, Y. Malpesa, N. Andres, M. Pugliese, M. Batlle, N. Mahy // J. Neurotrauma. - 2009. -

Vol. 26. - P. 1823-1834.

191. Obrenovitch, T.P. Excitotoxicity in neurological disorders - the glutamate paradox / T.P. Obrenovitch, J. Urenjak, E. Zilkha, T.M. Jay // Int. J. Dev. Neurosci. - 2010. - Vol. 18. - P. 281-287.

192. Поройков, В.В. Компьютерное конструирование лекарств: от поиска новых фармакологических веществ до системной фармакологии / В.В. Поройков // Биомедицинская химияю - 2020. - Т. 66 (1). - С. 30-41.

193. Dembitsky, V.M. Pharmacological profile of natural and synthetic compounds with rigid adamantane-based scaffolds as potential agents for the treatment of neurodegenerative diseases / V.M. Dembitsky, T.A. Gloriozova, V.V. Poroikov // Biochem. Biophys. Res. Communs. - 2020. - Vol. 529. - P. 12251241.

194. Gregory, J.M. Protocol for a systematic review and meta-analysis of experimental models of amyotrophic lateral sclerosis / J.M. Gregory, F.M. Waldron, T. Soane, L. Fulton, D. Leighton, J. Chataway, S. Pal, S. Chandran, M.R. Macleod // Evidence-based Preclinical Medicine. - 2017. - Vol. 2017. - P. 18-21.

195. Kim, R.B. State of the field: an informatics-based systematic review of the SOD1-G93A amyotrophic lateral sclerosistransgenic mouse model / R.B. Kim, C.W. Irvin, K.R. Tilva, C.S. Mitchell // Amyotroph. Lateral Scler. Frontotemporal Degener. - 2015. - Vol. 17. - P. 1-14.

196. Vesterinen, H.M. Meta-analysis of data fromanimal studies: a practical guide / H.M. Vesterinen, E.S. Sena, K.J. Egan, et al. // J. Neurosci. Methods. - 2014. - Vol. 221. - P. 92-102.

197. Белоусова, М.А. Нейропротекторная эффективность коэнзима Q10 на модели фокальной ишемии головного мозга в эксперименте. - Маргарита Алексеевна Белоусова : дисс. ... канд. мед. наук, 14.03.06 - Москва, 2015. - 162 с.

198. Bumetanide protects focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rat / G. Wang, H. Huang, Y. He, L. Ruan, J. Huang // Int. J. Clin. Exp. Pathol. - 2014. -Vol. 7. - P. 1487-1494.

199. Csiba, L. Regional changes in tissue pH and glucose content during cortical spreading depression in rat brain / L. Csiba, W. Paschen, G. Mies // Brain Res. - 1985. - Vol. 336. - P. 167-170

200. A reproducible model of middle cerebral artery occlusion in mice: Hemodynamic, biochemical, and magnetic resonance imaging / R. Hata, G. Mies, C. Wiessner, K. Fritze, D. Hesselbarth, G. Brinker, K.A. Hossmann // J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1998. - Vol. 18. - P. 367-375.

201. Меньшиков, В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник / В.В. Меньшиков. - М.: Медицина, 1987. - 368 с.

202. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц // М.: «Практика», 1999. - 467 с.

203. Березовская, И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения / И.В. Березовская // Хим.-фарм. журнал. - 2003. - Т. 37, №3.

204. Blinova, E. Novel Approach to Inhibit Ca2+ Entry Through NMDA-receptor lon Channel in Mix Hippocampal Cell Culture of Sprague Dawley Rats / E. Blinova, E. Semeleva, J. Krainova et al. // Journal of Anatomy. - 2020. - Vol. 236, supplement 1. - Р1-СМ7.

205. Семелева, Е.В. Эффективность некоторых солей 2-аминоэтансульфоновой кислоты при необратимой окклюзии средней мозговой артерии в эксперименте / Е.В. Семелева, И. А. Громова, Д.С. Блинов, М.М. Гераськина, А.В. Новиков, Е.В. Блинова, Ю.С. Крайнова, Л.В. Ванькова // Медицинский альманах. - 2018. - Т. 56, №5. - С. 211-214.

206. Семелева, Е.В. Соединение диметилфенилацетамида, обладающее антиаритмической и антиишемической активностью, ингибирует кальциевый ответ NMDA-рецептора / Е.В. Семелева, Е.В. Блинова, А.Б. Лебедев, М.М. Гераськина, О.В. Василькина, И. А. Громова, Д.С. Блинов, А.В. Новиков // Вестник аритмологии. - 2018. - №92 - С. 55-58.

207. Туровский, Е.А. Магниевая соль аминоэтансульфоновой кислоты подавляет вход Са2+ через канал NMDA-рецептора in vitro / Е.А. Туровский,

Е.В. Блинова, Е.В. Семелева, В.П. Зинченко, М.Е. Асташев, Д.С. Блинов, С.Я. Скачилова, М.М. Гераськина, А.Б. Лебедев, И.А. Громова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2018. - Т.166, №7. - С. 46-50

208. Семелева, Е.В. Церебропротекторное действие магниевого производного органической кислоты / Е.В. Семелева, И.А. Громова, Е.В. Блинова, М. М. Гераськина, Д. С. Блинов, Л. В. Ванькова, А. В. Новиков, А. Н. Чудайкин // Вестник новых медицинских технологий. - 2018. - Т. 25, № 3 - С. 58-63.

209. Novikov, A.V. On local anesthetic action of some dimethylacetamide compounds / A.V. Novikov, E.V. Blinova, E.V. Semeleva, J.S. Krainova, I.A. Gromova et al. // Research Results in Pharmacology. - 2018. - Vol. 4, No. 4. - P. 1-8.

210. Блинова, Е.В. Влияние соединения ФС-ЛХТ-317 на активность NMDA-рецепторов в смешанной нейроглиальной культуре гиппокампа крысы / Е.В. Блинова, Е.В. Семелева, И. А. Громова, Д.С. Блинов, Е.А. Туровский, М.М. Гераськина, Н.М. Киселева, С.Я. Скачилова, С.С. Дыдыкин // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2019. - Т 82, №4. - С. 2022.

211. Крайнова, Ю.С. Церебропротекторная активность цинковой соли 2-аминоэтансульфоновой кислоты ЛХТ-3-18 в условиях острого кислородного дефецита in vivo и in vitro // Ю. С. Крайнова, Е. В. Блинова, Е. В. Семелева, Д. С. Блинов, А.М. Юрочкина, Е.А. Туровский, Е.Г. Лобанова, Е.А. Дагар, Е.А. Орлов, А.С. Шукуров // Вестник Смоленской государственной медицинской академии. - 2019. - Т.18, №3. - С.10-17.

212. Kurganov, N.A. 2-aminoaethanesulfonic acid compounds possess protective property in reperfusion-induced heart injury / N.A. Kurganov, E.V. Blinova, E.V. Semeleva, I.A. Gromova, D.S. Blinov, A.V. Novikov, Ju.N. Mashkova, O.V. Vasilkina / Research Results in Pharmacology. - 2018. - Vol. 4 (2). - P. 19-26.

213. Блинова, Е.В. Превентивная терапия реперфузионного поражения головного мозга в эксперименте / Е.В. Блинова, Е.В. Семелева, И. А. Громова, М.М. Гераськина, П.Ю. Низин / XXV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство - 2018»: сборник тезисов. - Москва, 2018. - С. 58.

214 Laurer, H.L. Models of traumatic brain injury / H.L. Laurer, P.M. Lenzlinger, T.K. Mcintosh // Eur. J. Trauma. - 2000. - Vol. 26. - P. 95-100.

215 Lloyd-Jones, D. Heart disease and stroke statistics—2010 update: a report from the American Heart Association / D. Lloyd-Jones, R.J. Adams, T.M. Brown // Circulation. - 121. - e46-e215.

216 Zauner, A. Glutamate release and cerebral blood flow after severe human head injury / A. Zauner, R. Bullock, A.J. Kuta, J. Woodward, H.F. Young // Acta Neurochir. - 1996. - Suppl. 67. - P. 40-44

217 Castillo, J. Neuroexcitatory amino acids and their relation to infarct size and neurological deficit in ischemic stroke / J. Castillo, A. Davalos, J. Naveiro, M. Noya // Stroke. - 1996. - Vol. 27. - P. 1060-1065

218 Castillo, J. Progression of ischaemic stroke and excitotoxic aminoacids / J. Castillo, A. Davalos, M. Noya // Lancet. - 1997. - Vol. 349. - P. 79-83.

219 Johnston, M.V. Neurobiology of hypoxic-ischemic injury in the developing brain / M.V. Johnston, W.H. Trescher, A. Ishida, W. Nakajima // Pediatr. Res. - 2001. - Vol. 49. - P. 735-741.

220 Shaw, P.J. CSF and plasma amino acid levels in motor neuron disease: elevation of CSF glutamate in a subset of patients / P.J. Shaw, V. Forrest, P.G. Ince, J.P. Richardson, H.J. Wastell // Neurodegeneration. - 1996. - Vol. 4(2). - P. 209216

221 Spranger, M. Excess glutamate in the cerebrospinal fluid in bacterial meningitis / M. Spranger, S. Krempien, S. Schwab, M. Maiwald, K. Bruno, W. Hacke // J. Neurol. Sci. - 1996. - Vol. 143(1-2). - P. 126-131.

222 Ferrarese, C. Increased glutamate in CSF and plasma of patients with HIV dementia / C. Ferrarese, A. Aliprandi, L. Tremolizzo, L. Stanzani, A. De Micheli, A. Dolara, L. Frattola // Neurology. - 57(4). - P. 671-675.

223 Koura, S.S. Relationship between excitatory amino acid release and outcome after severe human head injury / S.S. Koura, E.M. Doppenberg, A. Marmarou, S. Choi, H.F. Young, R. Bullock // Acta Neurochir. - 1998. - Suppl. 71.

- p. 244-246.

224 Zhang, H. Excitatory amino acids in cerebrospinal fluid of patients with acute head injuries / H. Zhang, X. Zhang, T. Zhang, L. Chen // Clin. Chem. - 2001.

- Vol. 47. - P. 1458-1462.

225 O'Kane, R.L. Na(?)-dependent glutamate transporters (EAAT1, EAAT2, and EAAT3) of the blood-brain barrier. A mechanism for glutamate removal / R.L. O'Kane, I. Martinez-Lopez, M.R. DeJoseph, J.R. Vina, R.A. Hawkins // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274(45). - P. 31891-31895.

226 Teichberg, V.I. Homeostasis of glutamate in brain fluids: an accelerated brain-to-blood efflux of excess glutamate is produced by blood glutamate scavenging and offers protection from neuropathologies / V.I. Teichberg, K. Cohen-Kashi-Malina, I. Cooper, A. Zlotnik // Neuroscience. - 2009. - Vol. 158(1). - P. 301-308.

227 Zlotnik, A. Brain neuroprotection by scavenging blood glutamate / A. Zlotnik, B. Gurevich, S. Tkachov, I. Maoz, Y. Shapira, V.I. Teichberg // Exp. Neurol. - 2006. - Vol. 203(1). - P. 213-220.

228 Zlotnik, A. The contribution of the blood glutamate scavenging activity of pyruvate to its neuroprotective properties in a rat model of closed head injury / A. Zlotnik, B. Gurevich, E. Cherniavsky, S. Tkachov, A. Matuzani-Ruban, A. Leon, Y. Shapira, V.I. Teichberg // Neurochem. Res. - 2008. - Vol. 33. - P. 1044-1050.

229 Zlotnik, A. The neuroprotective effects of oxaloacetate in closed head injury in rats is mediated by its blood glutamate scavenging activity: evidence from the use of maleate / A. Zlotnik, S.E. Gruenbaum, A.A. Artru, I. Rozet, M. Dubilet, S. Tkachov, E. Brotfain, Y. Klin, Y. Shapira, V.I. Teichberg // J. Neurosurg. Anesthesiol. - 2009. - Vol. 21. - P. 235-241.

230 Zlotnik, A. Regulation of blood L-glutamate levels by stress as a possible brain defense mechanism / A. Zlotnik, Y. Klin, R. Kotz, M. Dubilet, M.

Boyko, S. Ohayon, Y. Shapira, V.I. Teichberg // Exp. Neurol. - 2011. - Vol. 224. -P. 465-471.

231 Castellanos, M. High plasma glutamate concentrations are associated with infarct growth in acute ischemic stroke / M. Castellanos, T. Sobrino, S. Pedraza, O. Moldes, J.M. Pumar, Y. Silva, J. Serena, M. Garcia-Gil, J. Castillo, A. Davalos // Neurology. - 2007. - Vol. 71. - P. 1862-1868.

232 Boyko, M. Pyruvate's blood glutamate scavenging activity contributes to the spectrum of its neuroprotective mechanisms in a rat model of stroke / M. Boyko, A. Zlotnik, B.F. Gruenbaum, S.E. Gruenbaum, S. Ohayon, R. Kuts, I. Melamed, A. Regev, Y. Shapira, V.I. Teichberg // Eur. J. Neurosci. - 2011. - Vol. 34. - P. 1432-1441.

233 Campos, F. Blood levels of glutamate oxaloacetate transaminase are more strongly associated with good outcome in acute ischaemic stroke than glutamate pyruvate transaminase levels / F. Campos, M. Rodriguez-Yanez, M. Castellanos, S. Arias, M. Perez-Mato, T. Sobrino, M. Blanco, J. Serena, J. Castillo // Clin. Sci. (Lond). - 2011. - Vol. 121. - P. 11-17.

234 Campos, F. Neuroprotection by glutamate oxaloacetate transaminase in ischemic stroke: an experimental study / F. Campos, T. Sobrino, P. Ramos-Cabrer, B. Argibay, J. Agulla, M. Perez-Mato, R. Rodriguez-Gonzalez, D. Brea, J. Castillo // J. Cereb. Blood Flow. Metab. - 2013. - Vol. 31. - P. 1378-1386.

235 Campos, F. High blood glutamate oxaloacetate transaminase levels are associated with good functional outcome in acute ischemic stroke / F. Campos, T. Sobrino, P. Ramos-Cabrer, M. Castellanos, M. Blanco, M. Rodriguez-Yanez, J. Serena, R. Leira, J. Castillo // J. Cereb. Blood Flow. Metab. - 2013. - Vol. 31. - P. 1387-1393.

236 Gottlieb, M. Blood-mediated scavenging of cerebrospinal fluid glutamate / M. Gottlieb, Y. Wang, V.I. Teichberg // J. Neurochem. - 2003. - Vol. 87. - P. 119-126.

237 Cleveland, D.W. From Charcot to SOD1: Mechanisms of selective motor neuron death in ALS / D.W. Cleveland // Neuron. - 1999. - Vol. 24. - P. 515-

238 Kretschmer, B.D. Riluzole, a glutamate release inhibitor, and motor behavior / B.D. Kretschmer, U. Kratzer, W.J. Schmidt Naunyn Schmiedebergs // Arch. Pharmacol. - 1998. - Vol. 358. - P. 181-190.

239 Miller, R.G. Riluzole for amyotrophic lateral sclerosis (ALS)/motor neuron disease (MND) / R.G. Miller, J.D. Mitchell, D.H. Moore // Cochrane Database Syst. Rev. - 2012. - Vol. 3. - CD001447.

240 Sun, H. Slow and selective death of spinal motor neurons in vivo by intrathecal infusion of kainic acid: implications for AMPA receptor-mediated excitotoxicity in ALS / H. Sun, Y. Kawahara, K. Ito, I. Kanazawa, S. Kwak // J. Neurochem. - 2006. - Vol. 98. - P. 782-791.

241 Chung, W.J. Inhibition of cystine uptake disrupts the growth of primary brain tumors / W.J. Chung, S.A. Lyons, G.M. Nelson, H. Hamza, C.L. Gladson, G.Y. Gillespie, H. Sontheimer // J. Neurosci. - 2005. - Vol. 25. - P. 71017110.

242 de Groot, J.F. Knockdown of GluR1 expression by RNA interference inhibits glioma proliferation / J.F. de Groot, Y. Piao, L. Lu, G.N. Fuller, W.K. Yung // J. Neurooncol. - 2008. - Vol. 88. - P. 121-133.

243 Eyupoglu, I.Y. Malignant glioma-induced neuronal cell death in an organotypic glioma invasion model. Technical note / I.Y. Eyupoglu, E. Hahnen, A. Heckel, F.A. Siebzehnrubl, R. Buslei, R. Fahlbusch, I. Blumcke // J. Neurosurg. -2005. - Vol. 102. - P. 738-744.

244 Lyons, S.A. Autocrine glutamate signaling promotes glioma cell invasion / S.A. Lyons, W.J. Chung, A.K. Weaver, T. Ogunrinu, H. Sontheimer // Cancer. Res. - 2007. - Vol. 67. - P. 9463-9471.

245 Ruban, A. Blood glutamate scavengers prolong the survival of rats and mice with brain-implanted gliomas / A. Ruban, T. Berkutzki, I. Cooper, B. Mohar, V.I. Teichberg // Invest. New Drugs. - 2012. - Vol. 30. - P. 2226-2235.

246 Takano, T. Glutamate release promotes growth of malignant gliomas / T. Takano, J.H. Lin, G. Arcuino, Q. Gao, J. Yang, M. Nedergaard // Nat. Med. -

2001. - Vol. 7. - P. 1010-1015.

247 Guyot, L.L. Real-time measurement of glutamate release from the ischemic penumbra of the rat cerebral cortex using a focal middle cerebral artery occlusion model / L.L. Guyot, F.G. Diaz, M.H. O'Regan, S. McLeod, H. Park, J.W. Phillis // Neurosci. Lett. - 2001. - Vol. 299. - P. 37-40.

248 Perez-Mato, M. Human recombinant glutamate oxaloacetate transaminase 1 (GOT1) supplemented with oxaloacetate induces a protective effect after cerebral ischemia / M. Perez-Mato, P. Ramos-Cabrer, T. Sobrino, M. Blanco, A. Ruban, D. Mirelman, P. Menendez, J. Castillo, F. Campos // Cell Death Dis. -2014. - Vol. 5. - e992.

249 Baker, A.J. Excitatory amino acids in cerebrospinal fluid following traumatic brain injury in humans / A.J. Baker, R.J. Moulton, V.H. MacMillan, P.M. Shedden // J. Neurosurg. - 1993. - Vol. 79. - P. 369-372.

250 Feng JF. Naag peptidase inhibitor reduces cellular damage in a model of TBI with secondary hypoxia / J.F. Feng, G.G. Gurkoff, K.C. Van, M. Song, D.A. Lowe, J. Zhou, B.G. Lyeth // Brain Res. - 2012. - Vol. 1469. - P. 144-152.

251 Richards, D.A. Extracellular glutamine to glutamate ratio may predict outcome in the injured brain: a clinical microdialysis study in children / D.A. Richards, C.M. Tolias, S. Sgouros, N.G. Bowery // Pharmacol. Res. - 2003. - Vol. 48. - P. 101-109.

252 Spreux-Varoquaux, O. Glutamate levels in cerebrospinal fluid in amyotrophic lateral sclerosis: a reappraisal using a new HPLC method with coulometric detection in a large cohort of patients / O. Spreux-Varoquaux, G. Bensimon, L. Lacomblez, F. Salachas, P.F. Pradat, N. Le Forestier, A. Marouan, M. Dib, V. Meininger // J. Neurol. Sci. - 2002. - Vol. 193. - P. 73-78.

253 Andreadou, E. Plasma glutamate and glycine levels in patients with amyotrophic lateral sclerosis / E. Andreadou, E. Kapaki, P. Kokotis, G.P. Paraskevas, N. Katsaros, G. Libitaki, O. Petropoulou, V. Zis, C. Sfagos, D. Vassilopoulos // In Vivo. - 2008. - Vol. 22. -P. 137-141.

254 Rothstein, J.D. Decreased glutamate transport by the brain and spinal

cord in amyotrophic lateral sclerosis / J.D. Rothstein, L.J. Martin, R.W. Kuncl // N. Engl. J. Med. - 1992. - Vol. 326. - P. 1464-1468.

255 Rothstein, J.D. Selective loss of glial glutamate transporter GLT-1 in amyotrophic lateral sclerosis / J.D. Rothstein, M. Van Kammen, A.I. Levey, L.J. Martin, R.W. Kuncl // Ann. Neurol. - 1995. - Vol. 38. - P. 73-84.

256 Heath, P.R. Update on the glutamatergic neurotransmitter system and the role of excitotoxicity in amyotrophic lateral sclerosis / P.R. Heath, P.J. Shaw // Muscle Nerve. - 2002. - Vol. 26. - P. 438-458.

257 Ikonomidou, C. Why did NMDA receptor antagonists fail clinical trials for stroke and traumatic brain injury? / C. Ikonomidou, L. Turski // Lancet Neurol.

- 2002. - Vol. 1. - P. 383-386.

258 Muir, K.W. Glutamate-based therapeutic approaches: clinical trials with NMDA antagonists / K.W. Muir // Curr. Opin. Pharmacol. - 2006. - Vol. 6. -P. 53-60.

259 Paschen, W. Threshold relationship between cerebral blood flow, glucose utilization, and energy metabolites during development of stroke in gerbils / W. Paschen, G. Mies, K.-A. Hossmann // Exp. Neurol. - 1992. - Vol. 117. - P. 325-333.

260 Anti-inflammatory cytokine interleukin-10 increases resistance to brain ischemia through modulation of ischemia-induced intracellular Ca2+ response / Tukhovskaya, E.A., Turovsky, E.A., Turovskaya, M.V., Levin, S.G., Murashev, A.N., Zinchenko, V.P., Godukhin, O.V. // Neuroscience Letters. - 2014. - № 571.

- P. 55-60.

261 Taurine inhibits apoptosis by preventing formation of the Apaf-1/caspase-9 apoptosome / T. Takatani, K. Takahashi, Y. Uozumi, E. Shikata, Y. Yamamoto, T. Ito, T. Matsuda, S.W. Schaffer, Y. Fujio, J. Azuma // Am. J. Physiol. Cell Physiol. - 2004. - Vol. 287. - P. 949-953.

262 Taurine reduces caspase-8 and caspase-9 expression induced by ischemia in the mouse hypothalamic nuclei / A.G. Taranukhin, E.Y. Taranukhina, P. Saransaari, I.M. Djatchkova, M. Pelto-Huikko, S.S. Oja // Amino Acids. - 2008.

- Vol. 34. - P. 169-174.

263 Brain ischemia and reperfusion activates the eukaryotic initiation factor 2-kinase, PERK / R. Kumar, S. Azam, J.M. Sullivan et al. // J. Neurochem. - 2001.

- Vol. 77. - P. 1418-1421.

264 Activation of endoplasmic reticulum stress response during the development of ischemic heart disease / A. Azfer, J. Niu, L.M. Rogers, F.M. Adamski, P.E. Kolattukudy // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2006. - Vol. 291. - P. 1411-1420.

265 Gadd153 sensitizes cells to endoplasmic reticulum stress by down-regulating Bcl2 and perturbing the cellular redox state / K.D. McCullough, J.L. Martindale, L.O. Klotz, T.Y. Aw, N.J. Holbrook // Mol. Cell. Biol. - 2001. - Vol. 21. - P. 1249-1259.

266 Семелева, Е.В. Протекторное действие некоторых солей 2-аминоэтансульфоновой кислоты на экспериментальной модели дегенеративного повреждения спинного мозга / Е.В. Семелева, Е.В. Блинова, А.В. Заборовский, О.В. Василькина, А.С. Шукуров // Вестник «Биомедицина и социология». - 2020. - Т. 5, №3. - С. 41-47.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1

Первичные результаты исследования Таблица А1 - Индивидуальные значения концентраций ЛХТ-300 в плазме крови экспериментальных животных (кроликов) при однократном внутривенном введении в дозе 12,5 мг/кг

№ животного Значение концентрации на временной точке, нг/мл

0 0,083 0,25 0,5 1 1,5 2 4 5 6 16 24

1 ND 1044,9 684,8 589,1 407,2 202,0 84,1 30,2 13,6 10,8 6,42 4,71

2 ND 803,7 607,0 371,7 229,2 151,9 113,8 20,9 13,9 10,1 4,19 3,29

3 ND 788,9 539,4 392,6 275,0 184,2 84,6 20,1 10,9 10,8 4,50 ND

4 ND 676,6 619,2 422,1 231,4 158,0 66,7 24,6 15,1 13,6 5,17 4,45

5 ND 1148,5 616,5 604,3 389,7 200,5 138,3 20,0 10,9 8,1 ND ND

6 ND 875,2 667,9 530,0 276,6 232,8 68,6 26,0 13,6 8,9 5,40 2,40

Mean - 889,6 622,5 485,0 301,5 188,2 92,7 23,6 13,0 10,4 4,3 2,5

SD - 175,7 51,3 102,4 78,0 30,2 28,0 4,0 1,7 1,9 2,2 2,1

С^ % - 19,7 8,2 21,1 25,9 16,1 30,2 17,1 13,4 18,4 52,2 84,4

Примечание: Mean - среднее; SD (standard deviation) - стандартное отклонение; CV (coefficient of variation) - коэффициент вариации; ND (not determined) - концентрация ниже предела количественного определения.

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

0 0,083 ч 0,25 ч 0,50 ч 1,00 ч 1,50 ч

№ C № C № C № C № C № C

1 ND 1432,4 11 1649,9 16 583,4 21 268,4 26 139,2 1432,4

2 ND 5687,3 12 1685,3 17 1173,1 22 308,5 27 119,7 5687,3

3 ND 1557,8 13 831,3 18 1268,4 23 358,0 28 124,3 1557,8

4 ND 3831,6 14 923,0 19 985,1 24 309,0 29 94,9 3831,6

5 ND 4322,8 15 843,9 20 785,9 25 226,2 30 63,3 4322,8

Mean - - 3366,4 - 1186,7 - 959,2 - 294,0 - 108,3 3366,4

SD - - 1839,1 - 440,6 - 279,8 - 49,5 - 29,8 1839,1

С^ % - - 54,6 - 37,1 - 29,2 - 16,8 - 27,5 54,6

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

2,00 ч 3,00 ч 4,00 ч 5,00 ч 6,00 ч

№ C № C № C № C № C

31 166,2 36 13,3 41 27,3 46 20,3 51 ND

32 102,2 37 16,8 42 21,5 47 20,6 52 13,4

33 157,7 38 45,4 43 43,3 48 32,6 53 9,9

34 60,3 39 107,7 44 28,9 49 19,0 54 ND

35 191,2 40 65,6 45 24,6 50 12,8 55 9,2

Mean - 135,5 - 49,8 - 29,1 - 21,1 - 6,5

SD - 53,2 - 38,8 - 8,4 - 7,2 - 6,1

С^ % - 39,2 - 78,0 - 29,0 - 34,1 - 94,5

Примечание: № - № животного; С -variation) - коэффициент вариации;

концентрация; Mean - среднее; SD (standard deviation) - стандартное отклонение; CV (coefficient of ND (not determined) - концентрация ниже предела количественного определения.

Таблица А3 - Индивидуальные значения концентраций ЛХТ-300 в ткани сердца экспериментальных животных (крыс) при однократном внутривенном введении в дозе 20 мг/кг_

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

0 0,083 ч 0,25 ч 0,50 ч 1,00 ч 1,50 ч

№ C № C № C № C № C № C

1 ND 6 1303,3 11 917,9 16 438,3 21 524,9 26 169,2

2 ND 7 2069,4 12 303,9 17 882,8 22 497,6 27 169,0

3 ND 8 1743,7 13 806,0 18 1031,2 23 214,9 28 77,5

4 ND 9 2258,5 14 705,2 19 872,7 24 430,0 29 100,2

5 ND 10 2705,3 15 806,8 20 876,5 25 331,7 30 79,9

Mean - - - 2016,1 - 708,0 - 820,3 - 399,8 - 119,2

SD - - - 528,9 - 238,1 - 223,7 - 127,4 - 46,4

С^ % - - - 26,2 - 33,6 - 27,3 - 31,9 - 39,0

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

2,00 ч 3,00 ч 4,00 ч 5,00 ч 6,00 ч

№ C № C № C № C № C

31 166,2 36 13,3 41 27,3 46 20,3 51 ND

32 102,2 37 16,8 42 21,5 47 20,6 52 13,4

33 157,7 38 45,4 43 43,3 48 32,6 53 9,9

34 60,3 39 107,7 44 28,9 49 19,0 54 ND

35 191,2 40 65,6 45 24,6 50 12,8 55 9,2

Mean - 135,5 - 49,8 - 29,1 - 21,1 - 6,5

SD - 53,2 - 38,8 - 8,4 - 7,2 - 6,1

С^ % - 39,2 - 78,0 - 29,0 - 34,1 - 94,5

Примечание: № - № животного; С - концентрация; Mean - среднее; SD (standard deviation) - стандартное отклонение; CV (coefficient of variation) - коэффициент вариации; ND (not determined) - концентрация ниже предела количественного определения.

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

0 0,083 ч 0,25 ч 0,50 ч 1,00 ч 1,50 ч

№ C № C № C № C № C № C

1 ND 6 2099,7 11 5260,9 16 1136,7 21 820,7 26 237,6

2 ND 7 5403,1 12 3159,7 17 1290,1 22 834,6 27 407,4

3 ND 8 1980,3 13 1763,5 18 2086,3 23 747,8 28 310,8

4 ND 9 8137,4 14 1975,6 19 951,1 24 1431,3 29 253,0

5 ND 10 4416,9 15 1429,5 20 1086,5 25 854,1 30 26,9

Mean - - - 4407,5 - 2717,8 - 1310,1 - 937,7 - 247,1

SD - - - 2555,4 - 1563,9 - 450,5 - 278,8 - 140,0

С^ % - - - 58,0 - 57,5 - 34,4 - 29,7 - 56,6

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

2,00 ч 3,00 ч 4,00 ч 5,00 ч 6,00 ч

№ C № C № C № C № C

31 332,7 36 44,6 41 31,1 46 13,4 51 7,7

32 121,8 37 57,2 42 28,1 47 29,4 52 12,1

33 124,6 38 113,5 43 33,7 48 21,2 53 21,0

34 166,2 39 270,7 44 47,7 49 21,7 54 10,3

35 234,4 40 114,6 45 37,7 50 22,1 55 10,6

Mean - 196,0 - 120,1 - 35,7 - 21,5 - 12,4

SD - 89,0 - 90,0 - 7,6 - 5,6 - 5,1

С^ % - 45,4 - 74,9 - 21,3 - 26,2 - 41,3

Примечание: № - № животного; С -variation) - коэффициент вариации;

концентрация; Mean - среднее; SD (standard deviation) - стандартное отклонение; CV (coefficient of ND (not determined) - концентрация ниже предела количественного определения.

Показатель Значение концентрации на временной точке, нг/мл

0 0,083 ч 0,25 ч 0,50 ч 1,00 ч 1,50 ч

№ C № C № C № C № C № C

1 ND 6 722,1 11 443,2 16 241,1 21 77,1 26 65,3

2 ND 7 7022,5 12 949,8 17 658,7 22 130,8 27 47,1

3 ND 8 5162,9 13 1231,9 18 464,1 23 73,9 28 45,9

4 ND 9 2834,9 14 561,8 19 292,5 24 202,3 29 127,2

5 ND 10 1913,7 15 350,8 20 392,7 25 145,6 30 116,4