Механизмы гибели клеток при действии оливомицина и его производных. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Самусенко, Алексей Владимирович

• Самусенко, Алексей Владимирович
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Самусенко, Алексей Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.:.

Глава 5. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Механизмы гибели клеток при действии оливомицина и его производных.»

Актуальность проблемы.

Антибиотики-производные ауреоловой кислоты - оливомицин, хромомицин A3 и митрамицин - открыты как высоко активные соединения, вызывающие гибель бактерий. Правомерно предположить, что соединения этого химического класса окажутся активными для клеток эукариот, в частности, для опухолевых клеток человека. Это свойство данной группы антибиотиков может найти применение в терапии злокачественных опухолей. Особую важность представляет оливомицин — соединение, структура которого впервые описана отечественными исследователями [11]. Первоначальные клинические испытания показали, что монохимиотерапия с применением оливомицина приводит к значительному уменьшению объема солидных опухолей — неходжкинских лимфом н саркомы матки. Побочное действие препарата - общерезорбтивная токсичность — обусловливает необходимость поиска структурных аналогов этого перспективного вещества с меньшей токсичностью и выяснения молекулярных механизмов гибели клеток при действии этого класса противоопухолевых соединений.

Выявлена внутриклеточная мишень оливомицина - двухцепочечная ДНК, с малой бороздкой которой оливомицин связывается в виде димера в присутствии Mg2+, преимущественно в GC-богатые участки [1]. Этот факт позволяет рассматривать оливомицин как агент, повреждающий структуру дуплекса. Ожидаемыми последствиями такого повреждения следует считать нарушение матричных процессов - транскрипции генов, синтеза ДНК. Исследования механизмов гибели опухолевых клеток при действии ингибиторов генной транскрипции — одна из актуальных тем в современной медицинской химии, молекулярной биологии и онкологии [20].

Молекулярные механизмы клеточной гибели при действии производных ауреоловой кислоты не изучены. Многообразие путей инициации и реализации гибели позволяет предполагать, что конкретный механизм будет определяться особенностями экспериментальной системы — тканевой принадлежностью клеток, экспрессией факторов лекарственной устойчивости. Клетки могут погибать по механизму апоптоза, сопровождающемуся активацией каскадов каспаз, митохондриальными событиями и фрагментацией геномной ДНК. Последнее означало бы, что гибель реализуется до необратимых этапов. Это существенно, т.к. в опухолевых клетках могут быть блокированы те или иные пути гибели - в результате отбора в течение прогрессии опухоли и лечебных воздействий. Не исключены и неапоптотические пути реализации гибели, в частности, программированный некроз.

Установление механизмов гибели опухолевых клеток при действии оливомицина необходимо для направленного поиска производных этого соединения, обладающих приемлемыми противоопухолевыми свойствами и меньшей общерезорбтивной токсичностью. Требуется создание моделей гибели клеток при действии оливомицина и сравнение механизмов смерти в ответ на оливомицин и его производные. Таким образом, при содружестве онкологов-экспериментаторов и химиков может быть достигнут прогресс в решении актуальной проблемы — установления механизмов гибели опухолевых клеток и выбора новых соединений для предклинических исследований.

Цель исследования:

Целью работы является получение новых знаний о молекулярных механизмах гибели опухолевых клеток человека при действии оливомицина и его новых производных.

Задачи исследования:

I. Изучить цитотоксичность оливомицина для культивируемых клеток опухолей человека, в том числе сублиний с молекулярными детерминантами лекарственной устойчивости.

II. Установить влияние оливомицина на матричные процессы в бесклеточной системе и в культуре клеток: синтез ДНК и генную транскрипцию.

III. Выявить роль "ядрышкового стресса" в цитотоксичности оливомицина.

IV. Исследовать новые производные оливомицина, выбрать менее токсичные и установить механизм снижения цитотоксичности для оптимизации препаратов этого химического класса, пригодных для предклинических испытаний.

Положения, выносимые на защиту.

1. Оливомицин - высокоактивное противоопухолевое соединение. В субмикромолярных концентрациях оливомицин вызывает апоптоз опухолевых клеток благодаря связыванию с двухцепочечной ДНК и нарушению транскрипции и репликации ДНК.

2. Введение заместителя в боковую цепь оливомицина снижает связывание с ДНК и уменьшению цитотоксичности, что важно для создания клинических препаратов на основе ауреоловой кислоты.

Новизна исследования

Новым являются систематические исследования молекулярных механизмов гибели клеток при действии оливомицина и его производных.

Впервые исследована токсичность новых соединений для культивируемых линий опухолей молочной железы, толстой кишки, меланомы, лейкоза - клеток дикого типа и их изогенных сублиний, устойчивых к ряду лекарств, в частности, к препаратам, транспортируемым Р-гликопротеином и в клетках с генетической инактивацией р53.

Впервые определены типы клеточной гибели, вызываемой оливомицином. Установлено, что это соединение вызывает апоптоз в низких концентрациях (в наномолярном диапазоне) в течение 24 часов воздействия. Апоптоз сопровождается межнуклеосомной деградацией ДНК.

При исследовании механизма регуляции матричного синтеза оливомицином впервые установлен эффект оливомицина на транскрипционный аппарат: транскрипцию, опосредованную РНК-полимеразами I, II и III. Впервые проведен детальный анализ нарушений экспрессии генов в ответ на действие оливомицина методом микрочип-анализа. Показано, что соединение ингибирует транскрипцию, опосредованную РНК-полимеразами I и II, но не РНК-полимеразой III.

Впервые выявлена роль нарушений структуры ядрышка - сегрегации его компонентов - как фактора индукции клеточной гибели при действии оливомицина.

Новыми являются данные об активации оливомицином р53-зависимой транскрипции — промотор-репортерной конструкции с р53-зависимой регуляторной областью и генар21, экспрессия которого опосредована р53.

Впервые показано в бесклеточных системах - синтез ДНК на матрице РНК и синтез второй цепи ДНК (в полимеразной цепной реакции) в присутствии возрастающих концентраций препарата, что оливомицин непосредственно ингибирует синтез ДНК. Оливомицин вызывает торможение синтеза ДНК в первые часы воздействия. В более высоких концентрациях наблюдается гибель клеток без нарушения S-фазы.

Впервые получена и изучена серия новых производных оливомицина с модификациями отдельных химических групп в молекуле. Новые производные проявляли меньшую цитотоксичность, чем исходный оливомицин. При этом цитотоксичность новых производных оставалась достаточно высокой (в микромолярном диапазоне концентраций). Установлено, что снижение цитотоксичности нового производного обусловлено более низкой константой связывания лиганда с двухцепочечной ДНК.

Научно-практическая значимость исследования

Изучение механизмов цитотоксического действия оливомицина и его новых производных позволит определить критерии для структурной оптимизации химических соединений и в перспективе создать эффективные препараты для лечения онкологических заболеваний на основе высокоактивного класса ДНК-связывающих производных ауреоловой кислоты.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Самусенко, Алексей Владимирович

Выводы

1. Оливомицин - высокоактивный противоопухолевый антибиотик: гибель культивируемых клеток опухолей человека наступает при действии субмикромолярных концентраций соединения. Оливомицин одинаково токсичен для клеток дикого типа и сублиний, устойчивых к действию дексаметазона и цисплатина. Оливомицин не преодолевает множественную лекарственную устойчивость, опосредованную Р-гликопротеином, тогда как делеция р53 не защищает клетки от токсичности оливомицина.

2. Молекулярный механизм гибели клеток при действии оливомицина - апоптоз, сопровождающийся межнуклеосомной деградацией ДНК.

3.Апоптоз при действии оливомицина вызывается образованием высокоаффинных комплексов соединения с двухцепочечной ДНК, трансактивацией р53-зависимых генов, ингибированием синтеза ДНК и нарушениями транскрипции, опосредованной РНК-полимеразами I и II.

4. Антитранскрипционное действие оливомицина выражается в индукции сегрегации ядрышка и подавлении экспрессии десятков генов.

5. Новые производные оливомицина являются менее аффинными ДНК-лигандами, менее токсичны и значительно слабее ингибируют матричные синтезы в бесклеточной системе и в культуре клеток. Достаточна высокая цитотоксичность новых производных - в микромолярных концентрациях - позволяет утверждать, что модификации химической структуры оливомицина позволят оптимизировать соединения и получить производные, обладающие противоопухолевой активностью при меньшей общерезорбтивной токсичности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Самусенко, Алексей Владимирович, 2009 год

1. Брикенштейн В.Х., Патина JI.P., Баренбойм Г.М. Стереохимия и кинетика взаимодействие с ДНК противоопухолевого антибоотика оливомицина. // Молекулярная биология. 1984. - Том. 186 - С. 1606-1616.

2. Гаузе Г.Ф. Противоопухолевые антибиотики. // Медицина. — 1971. С. 4070.

3. Гаузе Г.Ф., Дудник Ю.В. Противоопухолевые антибиотики. // Медицина. -1987.-С. 13-14.

4. Кучкарев Р.Н Опыт клинического изучения новых противоопухолевых антибиотиков хризомалина и оливомицина. Автореферат дисс. канд. М. 1966.

5. Харкевич Д.А. Фармакология // ГЭОТАР-Мед. 2006. - С. 643-665.

6. Akao Y., Yamada Н., Nakagawa Y. Arsenic-induced apoptosis in malignant cells in vitro. // Leuk Lymphoma. 2000. - Vol. 37. - P. 53-63.

7. Arima Y., Nitta M., Kuninaka S. Transcriptional blockade induces p53-dependent apoptosis associated with translocation of p53 to mitochondria. // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. - 280(19). - P. 19166-19176.

8. Arur S., Uche U.E., Rezaul K. Annexin I is an endogenous ligand that mediates apoptotic cell engulfment. // Dev. Cell. 2003. - Vol. 4. - P. 587-598.

9. Ashkenazi A., Dixit V.M. Death receptors: signaling and modulation. // J. Hepatol. 2003. - Vol. 39. -P. 883-885.

10. Bakkenist C.J., Kastan M.B., Initiating cellular stress responses. // Cell. -2004.-Vol. 9.-P. 9-17.

11. Berlin Y.U., Kiseleva O.A., Kolosov M.N. Aureolic acid group of anti-tumour antibiotics. //Nature.- 1968.- Vol. 13.-P. 193-194.

12. Borner С., Olivier R., Martinou I. Dissection of functional domains in Bcl-2 alpha by site-directed mutagenesis. // Biochem. Cell Biol. 1994. -Vol. 72(11-12). - P. 463-469.

13. Bortner C.D., Oldenburg N.B., Cidlowski J.A. The role of DNA fragmentation in apoptosis. // Trends Cell Biol. 1995. - Vol. 5. - P. 21-26.

14. Bortner CD, Oldenburg NB, Cidlowski JA. The role of DNA fragmentation in apoptosis. // Trends Cell Biol. 1995. - Vol. 5 - P. 21-26.

15. Brown J., Attardi L.D. The role of apoplosis in cancer and treatment response. //Nat. Rev. Cancer. 2005. - Vol. 5. - P. 231-237.

16. Сапера E.T., Scassa M.E., Ceruti J.M. INK4 proteins, a family of mammalian CDK inhibitors with novel biological functions. // IUBMB Life. 2007. - Jul. 59. - P. 419-426.

17. Cliby W.A., Lewis K.A., Lilly K.K. et al. S phase and G2 arrests induced by topoisomerase I poisons are dependent on ATR kinase function. // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277(2). - P. 1599-1606.

18. Crompton M., Viiji S., Doyle V. The mitochondrial permeability transition pore. // Biochem. Soc. Symp. 1999. - Vol. 66. - P. 167-179.

19. Denecker G., Vercammen D., Declercq W., Apoptotic and necrotic cell death induced by death domain receptors. // Cell. Mol. Life Sci. 2001. - Vol. 58(3) - P. 356370.

20. Derheimer F.A., Chang C.W., Ljungman M. Transcription inhibition: a potential strategy for cancer therapeutics. // Eur. J. Cancer. — 2005. Vol. 41(16). — P. 2569-2576.

21. Desagher S., Martinou J.C. Mitochondria as the central control point of apoptosis. // Trends Cell Biol. 2000. - Vol. 10(9). - P. 369-377.

22. Diez-Roux G., Lang R.A. Macrophages induce apoptosis in normal cells in vivo. // Development. 1997. - Vol.124. - P. 3633-3638.

23. Eastham J.A. In vivo gene therapy with p53 or p21 adenovirus for prostate cancer.//Cancer Res. 1995.-Vol. 55.-P. 5151-5155.

24. Enari M., Sakahira H., Yokoyama H. A caspase-activated DNase that degrades DNA during apoptosis, and its inhibitor ICAD. // Nature. 1998. - Vol. 391(6662).-P. 43-50.

25. Fadok V.A., Chimini G. The phagocytosis of apoptotic cells. // Semin. Immunol. 2001. - Vol. 13. - P. 365-372.

26. Falck J., Mailand N., Syljuasen R.G. et al. The ATM-Chk2-Cdc25A checkpoint pathway guards against radioresistant DNA synthesis. // Nature. 2001. -Vol. 410(6830). - P. 842-847.

27. Ferraro-Peyret C., Quemeneur L., Flacher M. Caspase-independent phosphatidylserine exposure during apoptosis of primary T lymphocytes. // J Immunol. -2002.-Vol. 169(9).- P. 4805-4810.

28. Festjens N., van Gurp M., van Loo G. Bcl-2 family members as sentinels of cellular integrity and role of mitochondrial intermembrane space proteins in apoptotic cell death. // Acta Haematol. 2004. - Vol. 111. - P. 7-27.

29. Fesus L., Madi A., Balajthy Z. Transglutaminase induction by various cell death and apoptosis pathways. // Experientia. 1996. - Vol. 31. - P. 942-949.

30. Flatten K., Dai N.T., Vroman B.T. et al. The role of checkpoint kinase 1 in sensitivity to topoisomerase I poisons. // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280(14). - P. 14349-14355.

31. Foo S.Y., Nolan G.P. NF-kappaB to the rescue: RELs, apoptosis and cellular transformation. // Trends Genet. 1999. - Vol. 15(6). - P. 229-235.

32. Freebern W.J., Smith J.L., Chaudhry S.S. Novel cell-specific and dominant negative anti-apoptotic roles of p73 in transformed leukemia cells. // J. Biol. Chem. -2003. Vol. 24. - P. 2249-2255.

33. Frizelle, S.P. Re-expression of pl6INK4a in mesothelioma cells results in cell cycle arrest, cell death, tumor suppression and tumor regression. // Oncogene. 1998. -Vol. 16.-P. 3087-3095.

34. Fukuoka, K. pl6INK4 expression is associated with increased sensitivity of human non-small cell lung cancer cells to DNA topoisomerase I inhibitors. // Jpn. J. Cancer Res. 1997.-Vol. 88.-P. 1009-1016.

35. Furnari В., Blasina A., Boddy M.N. et al. Cdc25 inhibited in vivo and in vitro by checkpoint kinases Cdsl and Chkl. // Mol. Biol. Cell. 1999. - Vol.10. - P. 833-845.

36. Gardai S.J., McPhillips K.A., Frasch S.C. Cell-surface calreticulin initiates clearance of viable or apoptotic cells through trans-activation of LRP on the phagocyte. // Cell. 2005. - Vol. 21. - P. 321-334.

37. Gupta M., Fan S.J., Zhan Q.M. et al. Inactivation of p53 increases the cytotoxicity of camptothecin in human colon HCT116 and breast MCF-7 cancer cells. // Clin. Cancer Res. 1997. - Vol. 3. - P. 1653-1660.

38. Harbour J.W., Luo, R.X., DeiSanti A. et al. Cdk phosphorylation triggers sequential intramolecular interactions that progressively block Rb functions as cells move through Gl. // Cell. 1999. - Vol.98. - P. 859-869.

39. Hershko Т., Ginsberg D. Up-regulation of Bcl-2 homology 3 (BH3)-only proteins by E2F1 mediates apoptosis. // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279(10). P. 86278634.

40. Hill M.M., Adrain C., Martin S.J. Portrait of a killer: the mitochondrial apoptosome emerges from the shadows. // Mol. Interv. 2003. -Vol. 3(1) - P. 19-26.

41. Hirota Т., Kunitoku N., Sasayama T. et al. Aurora-A and an interacting activator, the LIM protein Ajuba, are required for mitotic commitment in human cells. // Cell. 2003. - Vol. 114. - P. 585-598.

42. Hitoshi Y., Lorens J., Kitada S.I. Toso, a cell surface, specific regulator of Fas-induced apoptosis in T cells. // Immunity. 1998. - Vol. 8(4). - P. 461-71.

43. Hockenbery D.M., Oltvai Z.N., Yin X.M. Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis. // Cell. 1993. - Vol. 75(2). - P. 241-251.

44. Hoeppner D.J., Hengartner M.O., Schnabel R. Engulfment genes cooperate with ced-3 to promote cell death in Caenorhabditis elegans. // Nature. 2001. - Vol. 12. -P. 133-135.

45. Hofmann K., Bucher P., Kajava A.V. et al. A model ofCdc25 phosphatase catalytic domain and Cdk-interaction surface based on the presence of a rhodanese homology domain. // J. Mol. Biol. 1998. - Vol. 282. - P. 195-208.

46. Igney F.H., Krammer PH. Death and anti-death: tumour resistance to apoptosis. // Nat. Rev. Cancer. 2002. - Vol. 2(4). - P. 277-288.

47. Igney FH, Krammer PH. Death and anti-death: tumour resistance to apoptosis. // Nat. Rev. Cancer. 2002. - Vol. 2. - P. 277-288.

48. Innocente SA, Abrahamson JL, Cogswell JP et al., p53 regulates a G2 checkpoint through cyclin В17/ Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 2147-2152.

49. Jacks, T. Tumor suppressor gene mutations in mice. // Ann. Rev. Genet. — 1996.-Vol. 30.-P. 603-636.

50. Jacotot E., Costantini P., Decaudin D., et al. Mitochondrion as a novel target of anticancer chemotherapy. // J. Natl. Cancer Inst. 2000. - Vol. 13. - P.1042-1053.

51. Jacotot E., Costantini P., Laboureau E. Mitochondrial membrane permeabilization during the apoptotic process. // Ann. N Y Acad. Sci. 1999. - Vol. 887. -P. 18-30.

52. Jiang H., Chou H.S., Zhu, L. Requirement of cyclinE-cdk2 inhibition inp 16INK4a-mediated growth suppression. // Mol. Cell. Biol. 1998. - Vol. 18. - P. 52845290.

53. Jimenez В., Volpert O.V., Crawford S.E. Signals leading to apoptosis-dependent inhibition of neovascularization by thrombospondin-1. // Nat. Med. 2000. -Vol. 6-P. 41-48.

54. Jin X., Nguyen D., Zhang W. Cell cycle arrest and inhibition of tumor cell proliferation the pl6INK4 gene mediated by an adenovirus vector. // Cancer Res. 1995. -Vol. 55.-P. 3250-3253.

55. JozaN., Susin S.A., Daugas E. Essential role of the mitochondrial apoptosis-inducing factor in programmed cell death. // Nature. 2001. - Vol. 29. - P. 549-554.

56. Kang B.H., Ко E., Kwon O.K. The structure of procaspase 6 is similar to that of active mature caspase 6. // Biochem. J. 2002. - Vol. 15. - P. 629-634.

57. Katayose, Y. Promoting apoptosis: a novel activity associated with the cyclin-dependent kinase inhibitor p27. // Cancer Res. 1997. - Vol. 57. - P. 5441-5445.

58. Kaufmann S.H., Earnshaw W.C. Induction of apoptosis by cancer chemotherapy. // Exp. Cell. Res. 2000. - Vol. 256. - P. 42-49.

59. Kischkel F.C., Hellbardt S., Behrmann I. Cytotoxicity-dependent APO-1 (Fas/CD95)-associated proteins form a death-inducing signaling complex (DISC) with the receptor. // EMBO J. 1995. - Vol. 15. - P. 5579-5588.

60. Kluck R.M., Bossy-Wetzel E., Green D.R. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis. // Science. 1997. - Vol. 275(5303). P. - 1132-1136.

61. Korsmeyer S.J., Wei M.C., Saito M. Pro-apoptotic cascade activates BID, which oligomerizes ВАК or BAX into pores that result in the release of cytochrome c. // Cell Death Differ. 2000. - Vol. 7(12). P. 1166-1173.

62. Koumenis C., Giaccia A. Transformed cells require continuous activity of RNA polymerase II to resist oncogene-induced apoplosis. // Moll. Cell. Biol. -1997.- Vol. -17(12).-P. 7306-7316.

63. Krajewski S., Krajewska M., Turner B.C. Prognostic significance of apoptosis regulators in breast cancer. // Endocr. Relat. Cancer. 1999. - Vol. 6(1). - P. 29-40.

64. Lammer C., Wagerer S., Saffrich. et al. The cdc25B phosphatase is essential for the G2/M phase transition in human cells. // J. Cell Sci. 1998. - Voll. 11. -P. 24452453.

65. Lang R.A., Bishop J.M. Macrophages are required for cell death and tissue remodeling in the developing mouse eye. // Cell. 1993. - Vol. 13. - P. 453-462.

66. Liu F., Stanton J., Wu, Z. et al. The human Mytl kinase preferentially phosphorylates Cdc2 on threonine 14 and localizes to the endoplasmic reticulum and Golgi complex. // Mol. Cell Biol. 1997. - Vol. 17. - P. 571-583.

67. Liu Q., Guntuku S., Cui S. et al. Chkl is an essential kinase that is regulated by Atr and required for the G(2)/M DNA damage checkpoint. // Genes Dev. 2000. -Vol. 14.-P. 1448-1459.

68. Ljungman M. Lane DP Opinion: transcription guarding the genome by sensing DNA damage. // Nat. Rev. Cancer. - 2004. - Vol. 4(9). - P. 727-737.

69. Ljungman M., Zhang Fl-', Chen H., e' al Inhibition of RXA polymerase 11 as a trigger for the p53 response. // Oncogene. 1999. - Vol. 18(3). - P. 583 - 592.

70. Locksley R.M., Killeen N., Lenardo M.J. The TNF and TNF receptor superfamilies: integrating mammalian biology. // Cell. 2001. - Vol. 23. - P. 487-501.

71. Locksley R.M., Reiner S.L., Hatam F., et al. Helper T cells without CD4: control of leishmaniasis in CD4-deficient mice. // Science. 1993. - Vol. 10. - P. 14481451.

72. Majno G., Joris I. Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death. // Am. J. Pathol. 1995. - Vol. 146. - P. 3-15.

73. Martinvalet D., Zhu P., Lieberman J. Granzyme A induces caspase-independent mitochondrial damage, a required first step for apoptosis. // Immunity. -2005. Vol. 22. - P. 355-370.

74. Marumoto Т., Hirota Т., Morisaki T. et al. Roles of aurora-A kinase in mitotic entry and G2 checkpoint in mammalian cells. // Genes Cells. — 2002. Vol. 7. - P. 11731182.

75. Melino G., Bernassola F., Ranalli M. p73 Induces apoptosis via PUMA transactivation and Bax mitochondrial translocation. // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279(9).-P. 8076-8083.

76. Mellon I., Spivak G., Hanawalt P.C. Selective removal of transcription-blocking DNA damage from the transcribed strand of the mammalian DHFR gene. // Cell. 1997.-Vol. 51.-P. 241-249.

77. Metzstein M.M., Stanfield G.M., Horvitz H.R. Genetics of programmed cell death in C. elegans: past, present and future. // Trends Genet. 1998. - Vol. 14(10). - P. 410-416.

78. Mueller P.R., Coleman T.R., Dunphy W.G. Mytl: a membrane-associated inhibitory kinase that phosphorylates Cdc2 on both threonine-14 and tyrosine- 15. // Science. 1995. - Vol.270. - P. 86-90.

79. Newmeyer D.D., Bossy-Wetzel E., Kluck R.M. Bcl-xL does not inhibit the function of Apaf-1. // Cell Death Differ. 2000. - Vol. 7(4). - P. 402-407.

80. Nicotera P., Leist M., Ferrando-May E. Apoptosis and necrosis: different execution of the same death. // Biochem. Soc. Symp. 1999. - Vol. 66. - P. 69-73.

81. Nigg, E.A. Mitotic kinases as regulators of cell division and its checkpoints. // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2001. - Vol. 2. - P. 21-32.

82. Nunez G., Benedict M.A., Hu Y. Caspases: the proteases of the apoptotic pathway. // Oncogene. 1998. - Vol. 24. - P. 3237-3245.

83. O'Connell, M.J., Raleigh, J.M., Verkade, H.M. et al. Chk 1 is a weeJ kinase in the G2 DNA damage checkpoint inhibiting cdc2 by Y15 phosphorylation. // EMBO J. 1997. - Vol. 16. - P. 545-554.

84. Ohki R., Murasawa H., Nemoto J. Noxa, a ВНЗ-only member of the Bcl-2 family and candidate mediator of p53-induced apoptosis. // Science. 2000. - Vol. 12. -P. 1053-1058.

85. Passalaris T.M., Benanti, J.A., Galloway D.A. et al. The G(2) checkpoint is maintained by redundant pathways. // Mol. Cell Biol. 1999. - Vol. 19. - P. 5872-5881.

86. Puduvalli V.K., Saito Y., Xu R. Fenretinide activates caspases and induces apoptosis in gliomas. // Clin. Cancer Res. 1999. - Vol. 5(8). - P. 2230-2235.

87. Puthalakath H., Huang D.C., O'Reilly L.A. The proapoptotie activity of the Bcl-2 family member Bim is regulated by interaction with the dynein motor complex. // Mol. Cell. 1999. - Vol. 3(3). - P. 287-296.

88. Rai N.K., Suryabhan, Ansari M. et al. Effect of glycaemic control on apoptosis in diabetic wounds. // J. Wound Care. 2005. - Vol.14. - P. 277-281.

89. Rai N.K., Tripathi K. Apoptosis: a basic physiologic process in wound healing. // Int. J. Low Extrern. Wounds. 2005. - Vol. 4. - P. 138-144.

90. Reddien P.W., Cameron S., Horvitz H.R. Phagocytosis promotes programmed cell death in C. elegans. // Nature. 2001. - Vol. 12. - P. 198-202.

91. Reed J.C., Zha H., Aime-Sempe C, Takayama S, Structure-function analysis of Bcl-2 family proteins. Regulators of programmed cell death. // Adv. Exp. Med. Biol. — 1996.-Vol. 406. P. 99-112.

92. RPA and ATR link transcriptional stress to p53. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -2007.-Vol. 104(31).-P. 12778-12783.

93. Rubio-Moscardo F., Blesa D., Mestre C. Characterization of 8p21.3 chromosomal deletions in B-cell lymphoma: TRAIL-R1 and TRAIL-R2 as candidate dosage-dependent tumor suppressor genes. // Blood. 2005. - Vol. 106. - P. 3214-3222.

94. Ryan K.M., Ernst M.K., Rice N.R. Role of NF-kappaB in p53-mediated programmed cell death. // Nature. 2000. - Vol. 404. - P. 892-897.

95. Sandig V. Adenovirally transferred pl6INK4/CDKN2 and p53 genes cooperate to induce apoptotic tumor cell death. // Nat. Med. 1997. — Vol. 3. — P. 313— 319.

96. Savill J., Fadok V. Corpse clearance defines the meaning of cell death. // Nature. 2000. - Vol. 12(6805). - P. 784-788.

97. Scaffidi С, Kirchhoff S, Krammer PH. Apoptosis signaling in lymphocytes. // Curr. Opin. Immunol. 1999. - Vol. 11. - P. 277-285.

98. Schimmer A.D. Inhibitor of apoptosis proteins: translating basic knowledge into clinical practice. // Cancer Res. 2004. - Vol. 15. - P. 7183-7190.

99. Schmitt, E., Boutros, R., Froment, C. et al. CHK1 phosphorylates CDC25B during the cell cycle in the absence of DNA damage. // J. Cell Sci. 2006. - Vol.119. - P. 4269-4275.

100. Schuler M., Green D.R. Mechanisms of p53-dependent apoptosis. // Biochem Soc Trans. 2001. - Vol. 29. - P. 684-688.

101. Schuler M., Green D.R. Transcription, apoptosis and p53: catch-22. // Trends Genet.-2005.-Vol. 21.-P. 182-187.

102. Sherr C.J., Roberts J.M. CDK inhibitors: positive and negative regulators of G1-phase progression. // Genes Dev. 1999. - Vol. 13. - P. 1501-1512.

103. Sherr, C.J., Roberts, J.M. Inhibitors of mammalian G1 cyclin-dependent kinases. // Genes. 1995. - Vol. 9. - P. 1149-1163.

104. Shiloh S., Illness representations, self-regulation, and genetic counseling: a theoretical review. // J. Genet. Couns. 2006. 15(5). P. 325-337.

105. Shiloh Y. ATM and ATR: networking cellular responses to DNA damage. // Curr. Opin. Genet. Dev. 2001. - Vol. 11. - P. 71-77.

106. Shimizu S., Eguchi Y., Kamiike W. Bcl-2 prevents apoptotic mitochondrial dysfunction by regulating proton flux. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998. - Vol. 95(4).-P. 1455-1519.

107. Shimizu S., Yamabe K., Kamiike W. et al. Prevention of hypoxic liver cell necrosis by in vivo human bcl-2 gene transfection. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1998.-Vol. 4.-P. 217-223.

108. Slee E.A., Adrain C., Martin S.J. Executioner caspase-3, -6, and -7 perform distinct, non-redundant roles during the demolition phase of apoptosis. // J. Biol. Chem. -2001. Vol. - 276. - P. 7320-7326.

109. Smits V.A., Klompmaker R., Arnaud L. et al. Polo-like kinase-1 is a target of the DNA damage checkpoint. // Nat. Cell Biol. 2000. - Vol. 2. - P. 672-676.

110. Stiewe Т., Putzer B.M. Role of the p53-homologue p73 in E2Fl-induced apoptosis. // Nat. Genet. 2000. - Vol. 26. - P. 464-469.

111. Suliman I.A., Lindgren J.U., Elhassan A.M. Effects of short- and long-term rat hind limb immobilization on spinal cord insulin-like growth factor-I and its receptor. // Brain Res. 2001. - Vol. 31. - P. 17-23.

112. Susin S.A., Zamzami N., Castedo M. Bcl-2 inhibits the mitochondrial release of an apoptogenic protease. // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 184(4). - P. 1331-1341.

113. Svejstrup JQ. Mechanisms of transcription-coupled DNA repair. // Nat. Revv Mol. Cell Bio. 2002. - Vol. 3(1). - P. 21-29.

114. Tamatani M., Che Y.H., Matsuzaki H. Tumor necrosis factor induces Bcl-2 and Bcl-x expression through NFkappaB activation in primary hippocampal neurons. // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274(13).-P. 8531-8538.

115. Tanaka N., Ishihara M., Lamphier M.S. et al. Cooperation of the tumour suppressors Irf-1 and p53 in response to DNA damage. // Nature. 1996. - Vol. 382. - P. 816-818.

116. Transcriptional blockade induces p53-dependent apoptosis associated with translocation of p53 to mitochondria. // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280(19). - P. 19166-19176.

117. Vaux D.L., Silke J. IAPs, RINGs and ubiquitylation. // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2005. - Vol. 6(4). - P. 287-297.

118. Verhagen A.M., Ekert P.G., Pakusch M. Identification of DIABLO, a mammalian protein that promotes apoptosis by binding to and antagonizing IAP proteins. // Cell. 2000. - Vol. 102(1). - P. 43-53.

119. Wajant H., Pfizenmaier K., Scheurich P. TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) and its receptors in tumor surveillance and cancer therapy. // Apoptosis. -2002.-7(5).-P. 449-459.

120. Wang C.Y., Guttridge D.C., Mayo M.W. et al. NF-kappaB induces expression of the Bcl-2 homologue Al/Bfl-1 to preferentially suppress chemotherapy-induced apoptosis. // Mol. Cell Biol. 1999. - Vol. 35. - P. 123-130.

121. Xie S., Wu H., Wang Q. et al. Plk3 functionally links DNA damage to cell cycle arrest and apoptosis at least in part via the p53 pathway. // J. Biol. Chem. 2001. -Vol. 276.-P. 43305-43312.

122. Yamaizumi M. Sugano T. IJV-mduced nuclear accumulation of p53 is evoked through DNA damage of actively transcribed genes independent of the cell cycle. // Oncogene. 1994. - Vol. 9(10). - P. 2775-2784.

123. Zamzami N., Kroemer G. The mitochondrion in apoptosis: how Pandora's box opens. //Nat. Rev. Mo.l Cell Biol. -2001. Vol. 2(1). - P. 67-71.

124. Zamzami N., Marchetti P., Castedo M. Sequential reduction of mitochondrial transmembrane potential and generation of reactive oxygen species in early programmed cell death. // J. Exp. Med. 1995. Vol. 182(2). - P. 367-377.

125. Zeiss C.J. The apoptosis-necrosis continuum: insights from genetically altered mice. // Vet. Pathol. 2003. - Vol. 40(5). - P. 481-495.

126. Zhan, Q., Antinore, M.J., Wang, X.W. Association with Cdc2 and inhibition of Cdc2/Cyclin B1 kinase activity by the p53-regulated protein Gadd45. // Oncogene. -1999. Vol. 18.-P. 2892-2900.

127. Zoratti M., Szabo I. The mitochondrial permeability transition. // Biochim. Biophys. Acta. 1995. - Vol. 1241(2). - P. 139-176.

128. Zoratti M., De Marchi U., Gulbins E., et al. Novel channels of the inner mitochondrial membrane. // Biochim. Biophys. Acta. 2009. - Vol. 1787. - P. 351-363.

129. Zoratti M., De Marchi U., Basso E., et al. Electrophysiological characterization of the Cyclophilin D-deleted mitochondrial permeability transition pore. // Mol. Membr. Biol. -2006.-Vol. 23.-P. 521-530.