Маннан-связывающие лектины из морского червя Serpula vermicularis и GlcNAc/GalNAc-специфический лектин из колониальной асцидии Didemnum ternatanum тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Ли Вэй

• Ли Вэй
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ли Вэй

Список сокращений

1. Введение

2. Литературный обзор

2.1. Введение

2.2. Лектины морских беспозвоночных

2.2.1. Происхождение, локализация и биосинтез лектинов

2.2.2. Функции лектинов в организме

2.3. Углеводная специфичность лектинов '

2.3.1. Моносахариды 15 2.3.1.1. GalNAc/GlcNAc специфичные лектины

2.3.2. Олигосахариды и полисахариды 19 2.3.2.1. Маннан-связывающие белки

2.3.3. Углевод-содержащие гетерополимеры 22 2.3.3.1. Гепарин-связывающие лектины

2.4. Строение углевод-связывающих сайтов лектинов

2.5. Биологическая активность лектинов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Маннан-связывающие лектины из морского червя Serpula vermicularis и GlcNAc/GalNAc-специфический лектин из колониальной асцидии Didemnum ternatanum»

Углевод-опосредованное узнавание является одним из центральных событий в функционировании биологических систем. На клеточном уровне такое распознавание обычно осуществляется путем специфического углевод-белкового взаимодействия и предшествует таким важным биологическим процессам как оплодотворение, эмбриогенез, миграция лейкоцитов к месту воспаления, проникновение инфекции в клетки хозяина. Информация об узнавании заключена в углеводных структурах, которые представлены на поверхности клеток в виде гликопротеинов, гликолипидов и полисахаридов. Эту информацию воспринимают углевод-узнающие белки, иначе называемые лектинами, путем специфического связывания с углеводными структурами по типу ключ-замок. Хотя о существовании лектинов известно уже более 100 лет (Sharon and Lis, 1989b), идея, что они могут выступать как сигнал-передающие молекулы, до сих пор не утратила актуальности и, более того, интерес к лектинам продолжает расти.

К настоящему времени выделенные и охарактеризованные лектины являются эффективным инструментом в исследовании структуры гликоконъюгатов клеточной поверхности и в понимании углевод-зависимых процессов передачи сигнала. Лектины оказались полезным инструментом при исследовании патологически измененных гликоконъюгатов и при диагнозе углевод-зависимых патологий.

Морские беспозвоночные мало изучены в качестве источника лектинов по сравнению с микроорганизмами, растениями и теплокровными животными. Изучение лектинов из морских беспозвоночных впервые в мире было предпринято в начале 20 века Ногути Хидэё, который первым опубликовал сообщение об их способности агглютинировать эритроциты. В настоящее время обнаружено присутствие лектинов в различных органах и тканях лимфе, слизи поверхности тела, гонадах и др.) в более чем 300 видов морских организмов (морские водоросли, кишечнополостные, членистоногие, иглокожие, хордовые и др.), но недостаточно известно об их углеводной специфичности, структуре и физиологических функциях (Shimizu and Kamiya, 1983).

Многие лектины из морских беспозвоночных обладают различной биологической активностью. Так лектин из морской губки Haliclona cratera токсичен по отношению к опухолевым клеткам HeLa и клеткам FemX (Pajic et ah, 2002), с другой стороны, он обладает митогенной активностью по отношению к другим клеткам. Лектин из морской губки Chondrilla nucula способен ингибировать прикрепление ВИЧ к клетке хозяина (Т-клеткам человека) (Schroder et ah, 1990). GlcNAc-епецифичный лектин из колониальной асцидии Didemnum ternatanum (DTL) ингибирует пролиферацию, снижает уровень включения [3Н]-тимидина, изменяет морфологию опухолевых клеток HeLa (Белогорцева и др., 1994; Odintsova et ah, 2001) и проявляет себя как адгезивный и ростовый фактор по отношению к клеткам морского ежа и мидии (Одинцова и др., 1999) и др.

Настоящая работа посвящена выделению, характеристике и изучению углеводной специфичности лектинов из двух видов морских беспозвоночных морского червя Serpula vermicularis и колониальной асцидии Didemnum ternatanum. Целью данного исследования является выяснение биологической активности этих лектинов, в частности, как эффекторов процесса инвазии ВИЧ. Охарактеризованные лектины могут быть использованы как полезные инструменты для исследования заболеваний иммунной системы и нарушений процессов гликозилирования при различных патологиях.

2.ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1 Введение

Углевод-связывающие белки (пектины) были открыты более 100 лет тому назад (Sharon and Lis, 1989b). Однако, только в последние годы они оказались в центре внимания клеточных биологов, поскольку научные открытия последних лет показали, что углевод-белковое взаимодействие является важным механизмом передачи биологической информации на уровне клетки, то есть передачи информации при взаимодействии клеток друг с другом и межклеточным матриксом. Через углевод-зависимые взаимодействия осуществляются такие важные биологические процессы как оплодотворение, проникновение патогена в клетки хозяина, миграция лейкоцитов к месту воспаления, а также процессы малигнизации и метастазирования.

В настоящее время в различных областях биологических и медицинских исследований, в частности для решения проблем в области мембранологии и гликобиологии, широко используются и изучаются лектины.

Лектины - это общее название белков, обладающих свойством обратимо и избирательно связывать углеводы, не вызывая их химического превращения. Термин лектины (от латинского Legere-выбирать), предложенный У. Бойдом, подчеркивает избирательность их взаимодействия с углеводами. В 70-х годах его начали применять для обозначения • углевод-связывающих белков растительного и животного происхождения. Позже появились сообщения, что лектины широко распространены в биологическом мире, начиная с вирусов и кончая млекопитающими (Kamiya, 1995).

Одним из главных свойств лектинов является их избирательное взаимодействие с углеводами. На сродство лектинов к углеводам обратили внимание исследователи, которые обнаружили, что моносахариды подавляют гемагглютинирующую активность лектинов. Углеводы, выступая в качестве гаптенов, блокируют сайты связывания лектинов. Изучение специфичности взаимодействия лектинов с углеводами проводилось на сходном принципе блокирования активных антител гаптеном.

Одна из первых классификаций лектинов, которая сохранилась и сейчас, основывается на том, что специфичность взаимодействия лектина с углеводом зависит от положения гидроксилов при 3-м и 4-м атомах углерода, а так же D-или L-формы пиранозного цикла углеводов.

В наше время лектины по специфичности подразделяют на четыре типа, первые два из которых наиболее широко представлены в природе: 1) С-тип лектины 2) S-тип лектины 3) Р-тип лектины 4) и другие. С-тип лектинов называется так потому, что для их связывающей активности необходимы ионы кальция. К S-типу относятся лектины способные связывать Р-галактозиды, отсюда их второе название - галектины. Р-тип лектинов является специфичным для гликопротеинов, содержащих остатки маннозо-6-фосфата. Среди других групп следует отметить пентраксины, характеризующиеся пентамерной субъединичной структурой и I-тип лектинов имеющих сходство с иммуноглобулинами.

Различные лектины способны реагировать с редко встречающимися в обычной практике углеводами и их производными, содержащими N- и О-ацетильную группу, сиаловыми и уроновыми кислотами, дигалактозидами, пентозами, фосфорилированными и сульфатированными углеводами.

Аминокислотный состав лектинов, особенно из эволюционно отдаленных организмов, существенно различается. Поэтому говорить об одном характерном типе аминокислотного состава для лектинов не представляется возможным.

В качестве кофакторов, поддерживающих их третичную и четвертичную структуру, лектины могут содержать углеводы и ионы металлов Са , Мп , в меньшей степени Zn , Mg и прочие. Удаление их из молекулы лектина приводит к потере их биологической активности. Вместе с тем, для некоторых лектинов ионы металлов не являются обязательным компонентом и не влияют на их биологическую активность (Луцик, 1981).

Количество углеводов в различных лектинах колеблется в широких пределах от 3% до 80%, но в типичных случаях составляет 3-10%. Моносахариды, образующие основные олигосахаридные цепи, представлены, как правило, И-ацетил-О-глюкозамином (GlcNAc) и D-маннозой (Man). Из всех известных лектинов только конканавалин А (сопА) и лектин гороха не содержат углеводной компоненты.

Для выполнения своих биологических функций лектин либо содержит 2 и более углевод-связывающих доменов в молекуле, либо имеет способность к олигомеризации мономеров, содержащих один углевод-связывающий сайт (CRD). Это свойство позволяет лектинам перекрестно сшивать клетки (агглютинировать). Агглютинация эритроцитов, или гемагглютинация, - это главное свойство лектинов, которое позволяет обнаружить и охарактеризовать их (Lis and Sharon, 1998).

Четвертичная структура большинства известных лектинов построена из нескольких полипептидных цепей или субъединиц. Компоновка субъединиц в молекуле лектина весьма разнообразна. Для лектинов характерно явление множественности форм, т.е. наличие изолектинов в одном организме, необходимых для проявления мультифункциональности их действия в сложном организме. Множественные формы могут быть построены из различных видов субъединиц. Наиболее простым вариантом структуры молекулы является димер или тример, построенный из субъединиц одного типа, что характерно для растений. Более сложным вариантом структуры молекулы лектина являются олигомеры, построенные из субъединиц разного типа, характерные для высших организмов. Существенную роль в стабилизации третичной и четвертичной структуры лектинов играют дисульфидные мостики. Если же они отсутствуют, то субъединицы способны к самоассоциации за счет гидрофобных и водородных связей, в некоторых случаях за счет коллаген-подобных доменов по типу «подобное взаимодействует с подобным».

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Ли Вэй

5. ВЫВОДЫ

1. 1. Из колониальной асцидии Didemnum ternatanum впервые был выделен новый GIcNAc/GalNAc-специфичный Са -независимый лектин (DTL-A), проявляющий гепарин-связывающие свойства. Установлено, что лектин в нативном состоянии существует в виде высокомолекулярных агрегатов, способных диссоциировать в растворах с высокой ионной силой до димера и мономера.

2. Из морского червя Serpula vermicularis выделены и охарактеризованы два новых Са -независимых лектина SVL-1 и SVL-2, специфичных к разветвленным маннанам. SVL-1 способен также связывать муцин, фетуин и их десиалированные производные, SVL-2 имеет сродство к овальбумину и Ы-ацетил-О-глюкозамину.

3. DTL, SVL-2 и DTL-A ингибируют адгезию вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1 Шв к Т-лимфобластоидным клеткам линии С8166 в экспериментах in vitro. DTL, SVL-2 и DTL-A эффективно тормозят репликацию вируса с ЕС50 6-590 нг/мл, антивирусный индекс (СС50/ЕС50) для DTL составляет более 80000, для SVL-2 более 2000 и для DTL-A-более 200.

4. DTL и DTL-A ингибируют межклеточное слияние и образование синцитиев между неинфицированными клетками линии С8166 и хронически инфицированными Н9/ВИЧ-1 Шв клетками с ЕС50 в диапазоне 1,4-7,0 мкг/мл.

Благодарности.

Я благодарю директора ТИБОХДВО РАН академика В.Л. Стоника за предоставленную возможность проведения запланированных исследований в Институте, зам. директора по научной работе к.б.н. В.А. Рассказова, зав. отделом молекулярной иммунологии чл.-корр. РАН В.Е. Васьковского.

Выражаю искреннюю благодарность моему научному руководителю д.х.н. П.А. Лукьянову и научным консультантам ст.н.с. к.х.н.

B.И. Молчановой и ст.н.с. к.х.н. Н.И. Белогорцевой за неоценимую помощь на всех этапах выполнения и написания данной работы.

Я признателен также к.х.н. И.В. Чикаловец, к.х.н. А.В. Курике, к.х.н. А.А. Булгакову, вед. инж. Н.М. Вахрушевой, ст. лаб. JJ.P. Захаркиной, м.н.с.

C.С. Кобелеву, м.н.с. Н.В. Журавлевой и сотрудникам лаборатории молекулярных основ антибактериального иммунитета ТИБОХДВО РАН за помощь в проведении исследований и заинтересованное отношение к диссертационной работе. Я хочу выразить благодарность сотрудникам Института зоологии Китайской Академии Наук (КНР, Кунминг) к.б.н. Ю.Т. Чжэну, к.б.н. Ж. X. Вану и к.б.н. Д.Ю. Ояну за помощь в проведении экспериментов, связанных с исследованием анти-ВИЧ активности лектинов. Также хочу выразить благодарность профессору Э. Ховарду из Вандербилт университета (Теннеси, США) за проведение анализа N-концевой последовательности аминокислот исследоанных лектинов.

4.6. Заключение

В процессе исследования лектинов морских беспозвоночных, были выделены и охарактеризованы новые лектины из двух видов морских беспозвоночных. Нами выделен новый лектин (DTL-A) из колониальной асцидии Didemnum ternatanum последовательной аффинной хроматографией на перекрестно-сшитом овальбумине, GlcNAc-агарозе и последующей гель-проникающей хроматографией. Из другого беспозвоночного - морского червя Serpula veramicularis, выделены два новых лектина - SVL-1 и SVL-2 сочетанием методов аффинной хроматографии на перекрестно-сшитом овальбумине с муцином, ионообменной и гель-фильтрационной хроматографий.

DTL-A не взаимодействует с перекрестно-сшитым овальбумином, но связывается с GlcNAc-агарозой. Этот предполагает, что DTL-A не способен узнавать углеводные цепи овальбумина, но способен взаимодействовать с терминальными остатками N-ацетил-глюкозамина. Результаты данных ингибировании гемагглютинации подтверждают это.

Изучение углеводной специфичности DTL-A проводили методом ингибирования РПГА эритроцитов человека и твердофазного анализа с использованием различных моносахаридов и их производных, олигосахаридов, гликопротеинов, гликозаминогликанов и полисахаридов. Среди изученных простых моносахаридов ингибирующей активностью обладают лишь GlcNAc и GalNAc. На основании этого DTL-A был нами определен как GlcNAc/GalNAc-специфичный лектин. С другой стороны, среди полисахаридов гепарин является наилучшим ингибитором. Независимое взаимодействие DTL-A с GlcNAc/GalNAc или гепарином дает возможность предположить, что углевод-связывающий сайт лектина обладает независим от гепарин-связывающего, что придает ему возможность проявлять различные функции в живом организме.

Изучение тонкой углеводной специфичности SVL-1 и SVL-2 показало, что лектины преимущественно взаимодействуют с высокоманнозным типом углеводных цепей, построенных из а-1,2 и а-1,6-связанных остатков D-маннозы, дрожжеподобные высокоразветвленные маннаны морских бактерий являются высокоспецифическими лигандами для этих лектинов. В случае SVL-1 среди исследованных гликопротеинов высокую ингибирующую активность проявляли муцин, фетуин и их десиалированные производные. В отличие от SVL-1 агглютинирующая активность SVL-2 не ингибировалась этими гликопротеинами. В случае SVL-2 наилучшим ингибитором является овальбумин. Кроме того, для SVL-2 выявляется низкоаффинное сродство к

Ы-ацетил-О-глюкозамину, что характерно для некоторых МВР. Этот позволяет отнести выделенные нами лектины SVL-1 и SVL-2 к группе маннан-связывающих белков, которые также имеют незначительное сродство GicNAc.

Для выявления биологической активности изучаемых в лаборатории лектинов против вируса иммунодефицита человека нами проведены эксперименты по определению цитотоксичности этих лектинов для клеток, используемых в тест-системах. DTL-A и CGL показали слабую цитотоксичность для клеток Т-лимфобластоидной линии С8166 в экспериментах in vitro. В области концентраций, используемой в анти-ВИЧ тест-системах, они были не токсичны для клеток. Лектины DTL-A, SVL-2, DTL и CGL обладают анти-ВИЧ-1IIIB активностью при концентрации (ЕС5о) 0,59, 0,23, 0.006, и 45,7 мкг/мл, соответственно. DTL-A, DTL и CGL аффективно ингибируют межклеточное слияние между клетками линии С8166 и хронически инфицированными клетками линии Н9/ВИЧ-1 Шв

DTL и SVL-2 были значительно эффективнее, по сравнению с азидотимидом, в ингибировании репродукции ВИЧ-1. DTL-A и CGL проявляют более слабое ингибирующее действие на репликацию вируса, чем DTL. SVL-1 не проявлял такой активности. Сравнение этих результатов с данными по их гемагглютинирующей активности показало низкую корреляцию между анти-ВИЧ активностью и лектинной активностью исследованных лектинов; высоко аффинные к эритроцитам человека лектины, например DTL-A, не столь эффективны против ВИЧ инфекции. Этот факт открывает новую возможность борьбы с ВИЧ инфекцией — можно препятствовать взаимодействию вируса с клеточным рецептором CD4, блокируя вирусные gpl20 или gp41, являющиеся гликопротеинами с высокоманнозным и гибридным типом углеводных цепей, различными маннан-связывающими лектинами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ли Вэй, 2004 год

1. Белогорцева Н.И., Оводова Р.Г., Мороз С.В.Одинцова Н.А., Ермак А.В., Оводов Ю.С. Выделение и общая характеристика лектина из асцидии Didemnum ternatanum II Биоорган, химия. 1994. Т.20. N.8 9. С. 975 - 983.

2. Булгаков А.А., Елисейкина М.Г., Петрова И. Ю., Вахрушева Н.М., Свойства маннан-связывающего лектина из целомической жидкости трепанга Stichopus japonicus II Биология моря. 1999. Т.25. N.2. С.91 93.

3. Булгаков А.А., Назаренко Е.Л., Петрова И. Ю., Елисейкина М.Г., Вахрушева Н.М., Зубков В. А. Выделение и свойства маннан-связывающего лектина из целомической жидкости голотурии Cucumariajaponica И Биохимия. 2000. Т.65. N.8. С.75 82.

4. Гафуров Ю.М., Булгаков А.А., Рассказов В.А. // Тез. докл. Научн. конф. ТИБОХ ДВО РАН. Исследования в области физико-химимической биологии и биотехнологии. Владивосток. 1998. С. 147 148.

5. Горшкова Р.Н., Исаков В.В., Командрова Н.А., Иванова Е.Р., Оводов Ю.С. Структурное исследование биогликанов, продуцируемых Baclluspumilus И Биоорган, химия. 1992. Т. 18. N.4. С.413 417.

6. Луцик М.Д., Панасюк У.Н., Луцик А.Д. Лектин // Вища школа. Львов 1981. С.7 62.

7. Одинцова Н.А., Белогорцева Н.И., Ермак А.В., Лукьянов П.А. Новый адгезивный и ростовой фактор для клеток морских беспозвоночных // ДАН 1999. Т.364. N.2. С.271 -273.

8. Руослахти Э. Иммуносорбенты в очистке белков // Медицина, М. 1979. Степаненко Б.И. Химия и биохимия углеводов (полисахариды). М.1978.

9. Amano Т., Kawabata Н., Yochisato К. Characterisation of metamorphicchanges in anuran larval epidermis using lectins as probes // Develop. Growth. Differ. 1995. V.37. P.211 -220.

10. Ambrosio A.L., Iglesias M.M., Wolfentein-Todel C. The heparin binding lectin from ovine placenta: purification and. Identification as histon H4 // Clycoconj. J. 1997. V.14. N.7. P.831 836.

11. Azumi K., Ozeki S., Yokosawa H., Ishii S. A Novel lipopolysaccharide-binding hemagglutinin isolated from hemocytes of the solitary ascidian, Holocynthia roretzi it can agglutinate bacteria // Dev. Сотр. Immunol.1991. V.15. P.16-23.

12. Beintema J.J., Peumans W.J. The primary structure of stinging nettle (Urtica dioica) agglutinin. A two-domain member of the hevein family // FEBS Lett.1992. V.299. P. 131 134.

13. Belogortseva N.I., Molchanova V.I, Kurika A.V., Skobun A.S., GlazkovaV.E Isolation and characterization of new GalNAc/Gal-specific lectin from the sea mussel Crenomytilus grayanus I/ Сomp. Biochem. Physiol. 1998a. V.119C. N.l. P. 45 50.

14. Belogortseva N., Molchanova V., Glazunov V., Evtushenko E., Luk'yanov P., N-Acetyl-glucosamine-specific lectin from the ascidian Didemnum ternatanum /I Biochim. Biophys. Acta 1998b. V.1380. P.249 256.

15. Beutler J.A., McMahon J.B., Johnson T.R., O'keefe B.R., Buzzell R.A., Robbins D., Gardella R., Wilson J., Boyd M.R. High throughput screening for cyanovirin-N mimetics binding to HIV-1 gp41 // J. Biomol. Screen. 2002. N.7. P.105 110.

16. Bonaterra G.A., Aoki A. Isolation of a frog lectin using polylysine to reduce non-specific interactions with heparin binding ligand //Biocell. 1998. V.22. P.163 -166.

17. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. V.72. P.248 -254.

18. Bretting H., Kabat E.A., Liao J., Pereira E.A. Purification Characterization of the agglutinins from the sponge Aaptos papillata and a study of their combining sites // Biochemistry, 1976. V.15. N.23. P.5029 5038.

19. Carred P. Harboe M., Oettinger Т., Koch C., Svejgaard A. Dual role mannan-binding protein in infection another case of heterocyst // Eur. J. Immunogenetics. 1994. V.21. N.2. P. 125 - 131.

20. Cavalcante C.M., Mourao A.S., Pavao S.G. Isolation and characterization of a highly sulfated heparan sulfate from ascidian test cells // Biochim. Biophys. Acta 1999. N. 1428. P.77 87.

21. Ceri H., Kobiler D, Barondes S.H. Heparin inhibitable lectin. Purification from chicken liver and embryonic chicken muscle // J. Biol. Chem. 1981. V.256. N.l. P.390 - 400.

22. Ceri H., Roberts D. Endogenous lectins in normal and dystrophic muscle development // Muscle Nerve. 1985. V.8. N.8. P.710 713.

23. Chang N.C.A., Hung S.I., Hwa K.Y., Chen J.E., Liu C.H., Chang A.C. A macrophage protein, Yml, transiently expressed during inflammation is a novel mammalian lectin // J. Biol. Chem. 2001. V.276. N.20. P.17497 17506.

24. Charan R.D., Munro M.H.G., O'keefe B.R., Sowder II R.C., McKee T.C., Currens M.J., Pannell L.K., and Boyd M.R. Isolation and Characterization of

25. Myrianthus holstii lectin, a Potent IIIV-1 inhibitory protein from the plant Myrianthus holstii // J. Nat. Prod. 2000. V.63. P.l 170 1174.

26. Chay C.H., Pienta K.J. Evidence for lectin signaling to the nuclear matrix: cellular interpretation of the glvcocode//J. Cell Biochem. 2000. V.35. P.l 23 129.

27. Corbeau P., l laran M., Binz H., Devaux C. Jacalin, a lectin with anti-HIV-1 properties, and HIV-1 gpl20 envelope protein interact with distinct regions of the CD4 molecule // Moi. Immun. 1994. V.31. P.569 575.

28. Dam Т.К., Sarkar M., Ghosh J., Choudhury A. A novel galactosyl-binding lectin from the plasma of the blood clam, Anadara granosa (L) and a study of its combining site//Mol. Cell. Biochem. 1992. V.U7. P.l 9.

29. Dam Т., Bondyopadhyay В., Sarkar M., Ghosa J., Bhattacharya A., Choudhury A. Purification and partial characterization of a heparin-binding lectin from marine clam Anadara granoza II Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. V.203. N.l. P.36 45.

30. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton I.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of the sugars and related substances // Anal. Chem. 1956. V.28. P.350 356.

31. Eloumami H., Bladier D., Caurty J., Caron M. Soluble heparin-binding lectins from human brain: purification, specificity and relationship to an heparin binding grows factor// Int. J. Biochem. 1990. V.22. N.5. P.539 540.

32. Engel M., Bachman M., Schroder H.C., et al. A novel galactose- and arabinose-specific lectin from the sponge Pellina semitubulosa: isolation, characterization and immunobiological properties // Biochimie. 1992. V.74. P.527 -537.

33. Emsley J., White H.E., O'Hara B.P., Oliva G., Srinivasan N., Tickle I.J., Blundell Т., Pepys M.B., Wood S.P. Structure ofpentameric human serum amyloid P component//Nature. 1994. V.367(6461). P.338 345.

34. Gabius H.J. Concepts of tumor lectinology // Cancer Investig. 1997. V.15. P.454 464.

35. Gabius H.J. Probing the cons and pros of lcctin-induced immunomodulation: case studies for the mistletoe lectin and galectin-1 // Biochimie 2001. V.83. P. 659 -666.

36. Gamulin V., Rinkevich В., SchackeH., Kruse M., Muller I.M., Werner E.G. Cell adhesion receptor and nuclear receptors a highly conserved from the lowest Metazoa (Marine Sponges ) to vertebrates // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1994. V.375. P.583 588.

37. Gilljam G. Envelope glycoproteins of HIV-1, HIV-2, and SIV purified with Galanthus nivalis agglutinin induce strong immune responses // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1993. N.9. P.431 438.

38. Gold M., Balding P. Plant and animal lectins. In: Receptor-specific proteins. Excerpta Medica. Amsterdam. 1975. P.123 130.

39. Goldstein I.J., Poretz R.D. Properties, functions and applications in Biology and Medicine. In:The lectins. Liener I.E., Sharon N., Goldstein I.J. Eds. Academic Press. Inc. Orlando. 1986. P.35.

40. Hall J.L., Rowlands D.R. Heterogeneity of lobster agglutinins specifisity of agglutinin-erythrocyte binding // J. Biochem. 1974. V.13. N.4. P.828-832.

41. Hatakeyama Т., Himeshima Т., Komatsu A., Yamasaki N. Purification and characterization of two lectins from the sea cucumber Stichopus japonicus II Biosci. Biotech. Biochem. 1993. V.57. N.10. P. 1736 1739.

42. Hatakeyama Т., Kohzaki H., Nagatomo H., Yamasaki N. Purification andл .characterization of four Ca -dependent lectins from the marine invertebrate, Cucumaria echinata И J. Biochem. 1994. V.l 16. P.209 214.

43. Holt P., Holmskov U., Thiel S., Teisner В., Hojrup P., Jevisenius J.C. Purification and characterisation of mannan-binding protein from mouse serum // Scand. J. Immun. 1984. V.39. N.2. P.202 208.

44. Horak P., Grubhoffer L., Mikes L., Ticha M. Lectins of Trichobilharzia szidati cercariae I I Parasite. 1997. V.4. N. 1. P.27 35.

45. Johson V.A., Walker B.D. HIV-infected cell fusion assay. In: Techniques in HIV research. Aldovini A., Walker B.D. eds. Stockton. New York. 1990. P.92 94.

46. Johnson V.G., Byington R.E. Quantitative assay for virus infectivity. In: Techniques in HIV research. Aldovini A., Walker B.D. eds. Stockton. New York. 1990.P.71-76.

47. Kamiya H. Possible multiple factions of the invertebrate humoral lectins // Fish pathology. 1995. V.30. N.2. P. 129 139.

48. Kamo Т., Furukawa K.S., Akazawa S., Fujsaa K., Tada-Kikuchi A., Nonaka I., Satayoshi E. Mitogenic heparin-binding lectin-like protein from cloned thymic myoid cells//Cell Immunol., 1986. V. 103. N.l. P. 183 190.

49. Kaoru H.-A., Yokosawa H.and Ichii S. // Сотр. Biochem. Physiol. 1987. V.88B. N.l. P. 375 381.

50. Kawagishi H., Yamawaki M., Isobe S., Usui Т., Kimura A., Chiba S. Two lectins from the marine sponge Halichondria okadai I I J. Biol. Chem. 1994. V.269. N.2. P.1375 1379.

51. Kitagaki H., Inda N., Matsumoto I., Seno N. Carbohydrate-binding specificity of silkworm lectin // Carbohydr. Res. 1986. V.151. P.271 278.

52. Kobelev S., Molchanova V., Belgortseva N., Luk'yanov P. Interaction of a lectin from the mussel Crenomytilus grayanus with polyvalent neoglycoconjugates // GLYCO XVI Symposium.The Hague. 2001. C26.6. P. 100.

53. Kochibe N., Matta K.L. Purification and properties of an N-acetylglucosamine specific lectin from Psathyrella velutina mushroom // J. Biol. Chem. 1989. V.264. P. 173 177.

54. Kohnke-Godt В., Gabius H.J. Heparin-binding lectin from human placenta: purification and partial molecular characterization and its relationship to basicfibroblast growtb.factors//Biochemistry. 1989. V.28. N.16. P.6531 6538.

55. Kohnke-Godt В., Gabius H.J. Heparin-binding lectin from human placenta: further characterization of ligand binding and structural properties and its relationship to histones and heparin-binding growth factors // Biochemistry. 1991. V.30. N.l. P.55 65.

56. Koppel R., Litvak M., Solomon B. Affinity purification of a mannose-binding protein, a sensitive tool in the diagnostics of IgM, via site-directed phosphorylated mannan bound to alumina // J. Chromatogr. B. 1994. V.662. P.191 196.

57. Mandal S., Mahajan R.GLactose- and heparin-inhibitable agglutinin from human fetal brain // J. Neurochem., 1990. V.54. N.l. P.288 293.

58. Matsumoto I., Kitagaki H., Iida N., Saito Y., Seno N. Mammalian kidney lectin// Carbohydr. Res., 1986. V.151. P.261 270.

59. Matsushita M. et al. Complement-related serine proteases in tunicates and vertebrates // Curr. Opin. Immunol. 1998. N.10. P.29 35.

60. Matsushita M. et al. Complement-activating complex of ficolin and mannose-binding lectin-associated serine protease // J. Immunol. 2000.'V. 164. P.2281 -2284.

61. Mebs D., Weiler I., Heinke F., Bioactive proteins from marine sponges: screening of sponge extracts for hemagglutinating, hemolytic, ichthyotoxic and lethal properties and isolation and characterization of hemagglutinins // Toxicon. 1985. N.6.R955 -962.

62. Menozzi F., Mutombo R., Renauld G., Gentiez C. Heparin- inhibitable lectin activity of the filamentous hemagglutinin adhesion of Bordetella pertussis И Infect. Immun. 1994. V.62. N.3. P.769 778.

63. Mikes L, Horak P. A protein with lectin activity in penetration glands of

64. Diplostomum pseudospathaceum cercariae // Int. J. Parasitol., 2001. V.31. N.3. P.245 252.

65. Mikheyskaya L.V., Evtushenko E.V., Ovodova R.G., Belogortseva N.I., Ovodov Yu.S. Isolation and characterization of a new P-galactose-specific lectin from the sea worm Chaetopterus variopedatus II Carbohydr. Res. 1995. V.275. N.l. P. 193 200.

66. Misra R.R., Pinsky P.F., Srivastava S. Prognostic factors for hematologic cancers // Hematol. Oncol. Clin. North Am. 2000. N.14. P.907 924.

67. Mody R., Joshi S., Chaney W. Use of lectins as diagnostic and therapeutic tools for cancer//J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 1995. V.33. P.l 10.

68. Muramoto K., and Kamiya H. The amino-acid sequence of multiple lectins of the acron barnacle Megabalanus rosa and its homology with animal lectins // Biochim. Biophys. Acta. 1990a. V.1039. P.42-51.

69. Muramoto K., and Kamiya H. The position of the disulfide bonds and the glycosylation site in a lectin of Inhibition of the growth of the acorn barnacle Megabalanus rosa И Biochim. Biophys. Acta. 1990b. V.1039. P.52-60.

70. Muramoto K., Kado R., Takei Y., Kamiya H. Seasonal changes in the multiple lectin compositions of the acorn barnacle Megabalanus rosa as related to ovarian development // Сотр. Biochem. Physiol. 1991. V.98B. P.603-607.

71. Muramoto K., Yako H., Kamiya H. Multiple lectins as major proteins in the coelomic fluid of the acorn barnacle Megabalanus rosa II Сотр. Biochem. Physiol. 1994. V.107B.P.395 399.

72. Nakagawa H., Yamaguchi C., Sakai H., Kanemaru K., Hayashi H., Araki Y., Shinomora M., Ohura K., Kitagawa H. Biochemical and physiological properties of pedicellarial lectins from the toxopneustid sea urchins // J. Nat. Tox. 1999. V.8. N.3. P. 297 308.

73. Nisizawa K., Yamaguchi Т., Handa N., Maeda M., Yamazaki H. Chemical nature of a uronic acid-contating polysaccharide in the peritrophic membrane of the silkworm // J. Biochem. 1963. V.54. P.419 426.

74. Norgaard-Pedersen В., Toftager-Larsen К., Philip J. Concanavalin A reactivity pattern of human amniotic fluid AFP examined by crossed * affinoimmunoelectrophoresis. A define test for neural tube defect // Clin. Genet.1980. V. 17. N.5. P.355 362.

75. Odintsova N.A., Belogortseva N.I., Khomenko A.V., Chikalovets I.V., Luk'yanov P. A. Effect of lectin from the ascidian on the growth and the adhesion of HeLa cells // Mol. Cell Biochem. 2001. V.221. P. 133 138.

76. Ohta M. and Kawasaki T. Complement-dependent cytotoxic activity of serum mannan-binding protein towards mammalian cells with surface-exposed high-mannose type glycans // Glycoconj. J. 1994. N.ll. P.304 308.

77. Ortega-Barria E., Boothroyd J.C. A Toxoplasma lectin-like activity specific for sulfated polysaccharides is involved in host cell infection // J. Biol. Chem. 1999. V.274.N.3. 1267- 1276.

78. Pajic I., Kljajic Z., Dogovic N., Sladic D., Juranic Z., Gasic M.J. A novel lectin from the sponge Haliclona cratera: isolation, characterization and biological activity // Сотр. Biochem. Physiol. 2002. V.132C. P.213 221.

79. Parente J.P., Wieruszeski J.M., Strecker G., Montreuil J., Fournet В., van Halbeek H., Dorland L., Vliegenthart J.F.G. A novel type of carbohydrate structure present in hen ovomucoid //J. Biol. Chem. 1982. V.257. N.22. P.l 3173 13176.

80. Pauwels R., Balzarini J., Snoeck R., Herdewijin P., Desmyter J., De Clercq E. Rapid and automated tetrazolium-based colorimetric assay for the detection of anti-HIV compounds // J. Virol. Methods. 1988 V.20 N.4. P.309-21.

81. Petitou M., Herault J.P., Bernat A., Driguez P.A., Duchaussoy P., Lormeau J.C., Herbert JM.Synthesis of thrombin-inhibiting heparin mimetics without side effects //Nature. 1999. V.398. P.417 422.

82. Punkhurst G.J., Bennet C.A., Easterbrook-Smith S.B. Characterization of the heparin-binding properties of human clusterin // Biochem. 1998. V.37. P.4823 -4830.

83. Quiocho F.A. Probing the atomic interactions between proteins and carbohydrates // Biochem-,Soc. Trans. 1993. V.21. P.442'

84. Ratanapo, S., Chulavatnatol, M. Monodin, a new sialic acid specific lectin from black tiger prawn (Penaeus monodon) I I Сотр. Biochem. Physiol. 1990. V.97. N.3. P.515 520.

85. Reed A., Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints //Amen J. Hyg. 1938. V.27. P.493 498.

86. Rini J.M. Lectin structure //Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1995. V.24. P.551 -577.

87. Robertson M.M., Ceri H., Shadle P.J., Barondes S.H. Heparin inhibitable lectin: marked similarities in chicken and rat// J. Supramol. Struct. Cell Bioch. 1981. V.15.N.4. P. 395 -402.

88. Saito F., Yamada H., Sanada Y., Hori H.,Shimizu Т., Matsumara K. Characterization of a 30kDa peripheral nerve laminin and heparin // J. Biol. Chem. 1997. V. 17. P. 26708-26713.

89. Sallay I., Hatakeyama Т., Yamasaki N. Studies on the carbohydrate binding sites of the hemolytic lectin CEL-III isolated from the marine invertebrate

90. Cucumaria echinata H Biosci. Biotechnol. Biochem. 1998. V.62. N.9. P.1757 -1761.

91. Sato Т., Endo Y., Matsushita M., Fujita T. Molecular characterisation of a novel serine-protease involved in activation of the complement- system by mannose-binding protein // Int. Immunology. 1994. V.6. N.4. P. 665 669.

92. Satoh F., Nakagawa H, Yamada H, Nagasaka K, Nagasaka T, Araki Y, Tomihara Y, Nozaki M, Sakuraba H, Ohshima T, Hatakeyama T, Aoyagi H.Fishing for bioactjve substances from scorpionfish and some sea urchins // J. Nat. Tox. 2002. V.11.N.4.P.297-304.

93. Schwarz F.P., Misquith S., Surolia A. Effect of substituent on the thermodynamics of D-glucopyranoside binding to concanavalin A, pea {Pisum sativum) lectin and lentil {Lens culinaris) lectin // Biochem. J. 1996. V.316. P. 123 -129.

94. Semenov A.V., Mazurov A.V., Preobrazhenskaya M.E., Ushakova N.A. Sulfated polisaccharides as inhibitors of P-selectin ligand interaction // Voprosy Meditsinskoi Khimii.1998. W28. V.144. P. 135 144.

95. Shaanan В., Lis H., Sharon N., Structure of a legume lectin with an ordered N-linked carbohydrate in complex with lactose // Science. 1991. V.254. P.862 866.

96. Sharon N., Lis H. Lectins as cell recognition molecules // Science. 1989a. V.246. P.227 234.

97. Sharon N., Lis H. Lectins. Chapman and Hall: London. 1989b. P. 127.

98. Shimizu Y., Kamiya H. Bioactive biopolymers. In: Marine Natural Products. Scheuer P. eds. Academic Press. New York. 1983 V.5. P.391 428.

99. Sinay P. Sugars slide into heparin activity //Nature. 1999. V.398. P.377 378.

100. Solis D., Feizi Т., Yuen C.T., Lawson A.M., Harrison R.A., Loweless R.W.

101. Differential recognition by conglutinin and mannan-binding protein of N-glycans presented on neoglycolipids and glycoproteins with special reference to complement glycoprotein C3 and ribonuclease В //J. Biol. Chem. 1994. V.269. P. 11555 11562.

102. Takamatsu N., Takeda Т., Kojima M., Heishi M., Muramoto K., Kamiya H., Shiba T. Acorn barnacle Megabalanus rosa lectin (BRA-3): cDNA cloning, gene structure and seasonal changes of mRNA and protein levels // Gene. 1993. V.128. P.251 -255.

103. Tan S.M., Chung M.C.M., Kon O.L., Thiel S., Lee S.H., Lu J. Improvements on the purification of mannan-binding lectin and demonstration of its Ca2+-independent association with a Cls-like serine protease // Biochem. J. 1996. V.319. P.329 332.

104. Ticha M., Cechova D., Janakova V. Saccharide-binding properties of boar AQN spermadhesins and DQH sperm surface protein // Folia Biologica 1998. V.44. P.15-21.

105. Toone E.J. Structure and energetics of protein-carbohydrate complexes // Curr. Opin. Struct. Biol. 1994. V.4. P.719 728.

106. Tsutsui S, Tasumi S, Suetake H, Suzuki Y. Lectins homologous to those of monocotyledonous plants in the skin mucus and intestine of pufferfish, Fugu rubripes. // J. Biol. Chem. 2003. V.278. N.23. P. 20882 20889.

107. Uelda H., Saitoh Т., Kojima K. And Ogawa H. Multi-Specificity of a Psathyfella velutina lectin: heparin/pectin binding occurs at a site different from the

108. N-acetylglucosamine/N-acetylneuraminic acid-specific site // J. Biochem. 1999. V.126. P.530 537.

109. Uemura K., Yokota Y., Kozusumi Y., Kawasaki T. A unique CD45 glycofonn recognized by the serum mannan-binding protein in immature thymocytes //J. Biol. Chem. 1996. V.271. 4581 4584.

110. Unlenbruck G., Pardoe G.I., Prokop O., Ishiyama I. The serological specificity of snail agglutinins. // Biochem. 1983. N.3. P. 125 139.

111. Vasta G. R. The multiple biological roles of invertebrate lectins: Their participation in nonself recognition mechanisms In: Phylogenesis of immune functions. CRC Press. Boston. 1991. P. 73 101.

112. Van Damme E.J.M., Allen A.K., Peumans W.J. Isolation and characterization of a lectin with exclusive specificity towards mannose from snowdrop (Galanthus nivalis) bulbs // FEBS Lett. 1987. V.215. P.140 144.

113. Van Damme E.J.M., Allen A.K., Peumans W.J. Related mannose-specific lectins from different species of the family Amaryllidaceae // Physiol. Plant 1988. V.73. P.52 57.

114. Vandermulen D.L., Prasad V.V.T.S., Moskal J.R. The identification of glioblastoma-associated, fucose-containing glycoproteins induced by retinoic acid // Mol. Chem. Neuropathology. 1994. V.21. N.2-3. P.311 327.

115. Walker B.D., Kowalshi M., Goh W.C. Inhibition of human immunodeficiency virus syncytium formation and virus replication by castanospermine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. V.84. P.8120 8124.

116. Wang K.Y., Xu Q. Lectins and toxins // Acta Biochim. Biophys. Sinica. 2000. V.32. N.3.P.201 -205.

117. Weber P., Zimmermann D.R., Winterhalter K.H., Vaughan L. Tenascin-C Binds Heparin by Its Fibronectin Type III Domain Five //J. Biol. Chem. 1995. V.270. P.4619 4623.

118. Weis W., Drickamer K. Structural basis of lectin-carbohydrate recognition // Ann. Rev. Biochem. 1996. V.65. P.441.

119. Wiseman Т., Williston S., Brandts J. F., Lin L.-N. Rapid measurement of binding constants and heats of binding using a new titration calorimeter // Anal. Biochem. 1989. V.179. P.131.

120. Yamashita K., Kamerling J.P., Kobata A. Structural study of the carbohydrate moiety of hen ovomucoid. Occurrence of a series of pentaantennary complex-type asparagine-1 inked sugar chains // J. Biol. Chem. 1982. V.257. N.21. P.12809- 12814.

121. Yamashita K., Tachibana Y., Kobata A. The structures of the galactose-containing sugar chains of ovalbumin // J. Biol. Chem. 1978. V.253. P. 3862 -3869.