Люминесцентный микробиотест: возможные пути его оптимизации и расширение сферы использования тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Шмырина, Ирина Леонидовна

• Шмырина, Ирина Леонидовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шмырина, Ирина Леонидовна

Основные обозначения и сокращения

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Феномен биолюминесценции, его механизм и связь с общим метаболизмом клетки - основа люминесцентных микробиотестов.

1.2. Фенетико-популяционный анализ реципиента и возможных доноров /шг-оперона. Свечение в различных условиях обитания.

1.3. Возможные пути оптимизации сенсоров на основе люминесцентных бактерий.

1.4. Влияние критических условий на свечение люминесцентных бактерий. 'N>; •

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфо-физиологическая характеристика популяции генно-инженерного штамма Escherichia coli lum+.

3.2. Динамика роста и свечения Escherichia coli lum+ на различных питательных средах.

3.3. Некоторые пути селекции культуры по признаку чувствительности люминесценции к токсикантам и попытка ее последующей стабилизации.

3.4. Воспроизведение ряда критических состояний для Escherichia coli lum+ и возможные пути расширения сферы применения реакции ингибирования биолюминесценции. g9 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 119 ВЫВОДЫ 12з

Основные обозначения и сокращения

А . - относительные единицы «Биотокса-6» АТФ - аденозинтрифосфат , АШ - алкогольный шок | ' БОЕ ^ - бляшко-образующие единицы БТШ - белки теплового шока БХШ - белки холодового шока ГХЦГ - гексахлорциклогексан ДГТ - дегидрогеназы ДС - дополнительная селекция Е -люцифераза ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ИТ - индекс токсичности К - темновой вариант КОЕ - колонии образующие единицы ЛПС - липополисахариды

МИТ - Микробиолюминесцентный Индикатор Токсичности

МПК - минимальная подавляющая концентрация

ПАВ - поверхностно-активные вещества

ПДК - предельно допустимая концентрация

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ТШ - тепловой шок

Ф.р. - физиологический раствор

РМИ - флавинмононуклеотид

МАО(Р)- никотинамидадениндинуклеотид(фосфат)

Ьу - свет

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Люминесцентный микробиотест: возможные пути его оптимизации и расширение сферы использования»

Актуальность

Достижением XX века является необычайно быстрое развитие промышленности, оборотная сторона которого - возрастающее загрязнение окружающей среды химическими соединениями. Многие из них обладают опасными для живых организмов токсическими, мутагенными и канцерогенными свойствами (Хрипач и др., 1998). Хотя за период 1992-1997гг. общий объем выбросов в РФ стабилизировался и даже снизился из-за резкого спада промышленного производства, но старение существующих очистных сооружений, малые вложения в их строительство и модификацию неизменно увеличивают антропогенную нагрузку на окружающую среду (Онищенко, 1997).

Это выдвигает в число первоочередных задач разработку и применение простых, надежных, экспрессных и общедоступных способов контроля за состоянием природы (Леванова и др., 1999). В целом необходимо решить что, как и чем контролировать.

Во всем мире ведутся работы по определению наиболее значимых загрязняющих факторов и созданию общедоступных средств для измерения их концентраций. Но к 1997 году число зарегистрированных химических соединений уже превысило 13 миллионов, по литературным данным около 10% из них обладают выраженным обще- и генотоксическим действием на биоту (Пшеничнов и др., 1990), более 300.000 находятся в обращении на международном торговом рынке (Румянцев и др., 1997).

До недавнего времени основным, а чаще и единственным путем определения токсикантов в среде являлись химические анализы. Они и сегодня доминируют при проведении соответствующих исследований. Отдавая им должное, не следует закрывать глаза на ряд недостатков этой системы контроля. Во-первых, она не универсальна и отработана только для ограниченного числа (около 1000) доминирующих или высокотоксичных соединений на уровне ГОСТов, ПДК (Безель и др., 1992; Пшеничнов и др., 1995; Леванова и др., 1999). Во-вторых, выявление и количественное определение поллютантов требуют использования разнообразных и достаточно сложных методик, часто набора высокоточной и дорогостоящей аппаратуры, иногда импортных реактивов, что не всегда посильно даже крупным специализированным, а тем более, практическим лабораториям Госсанэпиднадзора. Развернутый химический анализ нескольких образцов лишь по основным параметрам занимает длительное время, является дорогостоящим. В-третьих, интегративная оценка влияния суммы присутствующих токсикантов требует использования сложного математического аппарата, который к тому же не всегда применим.

Поэтому за последнее десятилетие в экотоксикологических исследованиях все большее применение получает биотестирование. Во Франции подобная оценка качества водной среды является обязательной в «Системе контроля качества пресных вод» на межведомственном уровне. Многотесторная система биологического анализа токсичности вод введена в США (Захарченко и др., 1994), рекомендована в РФ (Методические рекомендации , 1996), используется в экологическом аудите в Голландии.

Биотестирование выгодно отличается от химических анализов. Оно позволяет определить не только присутствие, но эффект действия токсикантов на организмы. Биотестирование в одинаковой мере пригодно как для оценки влияния отдельных, так и суммы токсикантов, в том числе тех, которые не определяются общепринятыми химическими анализами или являются неизвестными, но присутствующими в пробах.

Идеальный» контроль предусматривает оценку действия токсикантов на наиболее чувствительный компонент конкретного биоценоза, обусловливающий доминирующий вклад в круговорот веществ и энергии в природе. В соответствии с этим разработано более 200 типов биотестов с использованием около 70 видов лабораторных и природных моделей

Унифицированные методы исследования качества вод, 1983; Захарченко и др., 1994).

В практике наибольшее признание и применение нашло микробиотестирование. При наличии качественных микробиодетекторов система относительно проста, экспрессна, не требует существенных затрат и поэтому доступна рядовым баклабораториям Госкомприроды - и Санэпиднадзора. К таковым относятся методы с использованием люминесцентных бактерий. Здесь система учета общепринята (Ribo et al., 1987; Методические рекомендации, 1996), универсальна для всех токсикантов и их смесей. Будучи выражена через Индекс токсичности (ИТ, %), она автоматически и реально учитывает эффекты суммирования, взаимоусиления, ослабления действия отдельных токсикантов в смесях. Поэтому не требуется сложная математическая интегративная обработка результатов, применяемая при химических анализах.

Три основных обстоятельства определяют перспективность использования биолюминесценции для анализа: 1. Современные методы детекции излучения в оптическом диапазоне хорошо разработаны и достигли чувствительности, позволяющей считать отдельные кванты (Stanley, 1981); 2. Высокая специфичность, которая определяется тем, что в основе метода лежит ферментативная реакция; 3. Энергетическое обеспечение биолюминесценции осуществляется через общие метаболические пути клетки, поэтому уровень свечения характеризует общий физиологический статус организма и его изменение под влиянием токсикантов.

Субстраты бактериальной люминесцентной системы пиридиннуклеотиды, флавины, алифатические альдегиды, кислород) занимают ключевые позиции в обмене веществ. Предполагается конкурентное функционирование люминесцентной и дыхательной цепей (02, FMN-H2), а также других шунтирующих люциферазу окислительных систем (Данилов и др., 1990). В связи с чем, ксенобиотики могут уменьшать уровень восстановленных нуклеотидов (Хрипач и др., 1998), конкурировать с эндогенным FMN-H2 и альдегидом за активный центр люциферазы. Гидрофобные токсические вещества действуют на синтез альдегидного фактора (Гительзон и др., 1984).

Но независимо от конкретной точки действия ксенобиотиков (метаболические пути, генетический аппарат, мембрана бактериальной клетки), точное стехиометрическое соответствие числа молей субстратов, потребляемых в реакции люминесценции, обусловливает снижение интенсивности свечения клетки пропорционально токсичности образца (Постникова и др., 1992; Хрипач и др., 1998).

Поэтому интерпретация уровня люминесценции целых клеток более многогранна по сравнению с ферментами клеточных экстрактов (Meighen, 1991). При использовании живых систем появляется возможность прямо и опосредовано (через рост, деление, метаболизм) воздействовать на излучающую систему, при этом класс анализируемых веществ расширяется (Гительзон и др., 1984). Перспективным представляется разработка биосенсоров, чувствительным элементом которых является цельная клетка, что обусловлено большей толерантностью к субоптимальным величинам температуры и рН, большей стабильностью при функционировании и хранении (Корпан и др., 1995).

Наиболее распространенным вариантом такой тест-системы на Западе является лиофилизированный препарат морских бактерий Photobacterium phosphoreum (Microtox) (EPS, 1990). В литературе широко представлены данные об изучении влияния более 300 индивидуальных химических соединений разных классов на люминесценцию бактерий в тесте «Microtox» (Kaizer et ai, 1990). Выявлена высокая степень корреляции с биотестами на основе эукариот (цит. по Хрипач и др., 1998).

В настоящее время «Microtox» используется в качестве первичного скринингового метода в подавляющем большинстве реализуемых в мировой практике научно-исследовательских и коммерческих программ по изучению безопасности проб окружающей человека среды (Хрипач и др., 1998).

В России пионером таких работ выступил Институт биофизики Сибирского отделения РАН. Здесь создан каталог морских светящихся бактерий (Каталог светящихся культур, 1997). На основе Р. phosphoreum создан j отечественный коммерческий препарат «Микробиосенсор В17 677F», который | прошел широкие лабораторные испытания (Кузнецов и др., 1998).

Вместе с тем следует отметить, что галофильные морские бактерии могут быть обоснованно использованы только для анализа морских или засоленных объектов. В других ситуациях они оказываются как бы вырванными из естественных условий обитания. Вероятно, поэтому при экотоксиколргических исследованиях гигиенисты отдавали предпочтение общепринятым санитарным микробным индикаторам типа Е. coli commune.

Указанный вид широко и массово распространен во всех окружающих нас средах - почве, пресных водах, промышленных стоках, воздухе. Он постоянно в высоких концентрациях присутствует в организме людей и животных, где прямо или опосредовано подвержен действию окружающих токсикантов, подлежащих анализу.

Развитию этого нового направления немало способствовало и глубокое разностороннее изучение наследственной структуры этих бактерий, построение полных генетических карт микроба, отработка способов внутри- и межвидового переноса отдельных и групп оперонов, формирование генной инженерии как науки. Все это формировало мнение о возможности и целесообразности получения рекомбинантных штаммов Е. coli с клонированным опероном люциферазы как основы возможного индикатора для тестирования пресных вод методом ингибирования биолюминесценции, а также для выявления отдельных, суммы токсикантов в промышленных сбросах и других объектах окружающей среды (Родичева и др., 1998). В России впервые такой генно-инженерный штамм был получен на кафедре микробиологии МГУ им.

М.В.Ломоносова профессором Даниловым B.C. с сотрудниками, и на его основе разработан биосенсор «Эколюм», рекомендованный для тестирования объектов окружающей среды (Методические рекомендации, 1996).

С одной стороны, достаточно широкое его использование подтвердило рациональность такого подхода, с другой - породило ряд вопросов, требующих j дополнительного изучения штамма и препарата, условий воспроизведения J теста. К их числу относятся:

1.Стабильность сформированного генома. Так, среди субпопуляций штамма регулярно регистрируют, так называемые, темновые варианты, частота возникновения и свойства которых, влияют на общий уровень свечения культур и сенсоров, получаемых на их основе;

2.Есть основания считать, что тип и качество питательных сред существенно влияют на динамику развития клеток, накопление биомассы и общее свечение культур, что определяет свойства сенсора (чувствительность люминесценции к токсикантам);

3.Должная стабилизация препарата достигается лиофилизацией. Возникает необходимость подбора оптимальных криозащитных сред и режимов лиофилизации, воспроизводимых в условиях производства;

4. Реципиент lux-оперона - Е. coli - наиболее полно реализует свои физиологические функции при 37°С, доноры имеют оптимумы развития 10-30°С. Оставалось не ясным, как это сказалось на физиологии генно-инженерного штамма и чувствительности его свечения к токсикантам, от чего может зависеть выбор температурного режима индикации.

Перечень вопросов можно было бы продолжить, но хотелось бы отметить одно обстоятельство, усугубляющее сложность их решения. В связи с коммерциализацией науки, формированием рыночной экономики, когда практически любое достижение научной мысли, имеющее практический выход - новый продукт - является коммерческой, тщательно оберегаемой тайной. В данном случае штамм не патентуется и не передается, как обычно, с характеристикой в Российскую Национальную коллекцию промышленных микроорганизмов, технология приготовления соответствующего препарата является собственностью автора, а накопленная информация не публикуется, кроме рекламы продукта и сферы его использования. Это вынуждает исследователей, заинтересованных в совершенствовании препарата, возможном | расширении сферы его использования, более глубоком познании проблемы в 1 j целом, возвращаться к характеристике штамма, дополняя ее, и лишь затем переходить к решению новых вопросов.

Цель работы. На основе углубленного фенетико-популяционного анализа оптимизировать условия культивирования и стабилизации генно-инженерного штамма Escherichia coli lum+ для получения сенсора с улучшенными характеристиками и расширенной сферой его использования.

Основные задачи исследования

1. Морфо-физиологическая характеристика популяции генно-инженерного штамма Е. coli lum+ на примере его световых и темновых вариантов, изучение их биохимической активности и антибиотикорезистентности.

2. Сравнительная характеристика и подбор питательных сред, условий, оптимальных для развития культур, накопления биомассы и максимального ее свечения. Проведение направленной клоновой селекции вариантов с высоким и стабильным уровнем люминесценции.

3. Исследование факторов, способствующих повышению чувствительности люминесценции Е. coli lum+ к токсикантам. Определение температурного оптимума воспроизведения микробиолюминесцентного теста.

4. Расширение сферы применения реакции ингибирования свечения для оценки критических ситуаций при температурном и алкогольном шоке, а также для испытания антимикробных препаратов, в том числе антибиотиков, фаговой инфекции.

Научная новизна работы

Сравнительно исследованы динамика накопления биомассы, уровни общего и удельного свечения и чувствительность люминесценции к стандартным токсикантам Е. coli lum+ в условиях различных питательных сред и режимов выращивания. Показано, что клоновая селекция колоний на ; I однотипной среде способствует получению культур с более стабильной общей j и удельной люминесценцией. Определены факторы, влияющие на чувствительность Е. coli lum+ в соответствии со степенью ингибирования свечения.

Лиофилизация препарата проведена с использованием оригинального стабилизатора и режима сушки «Колибактерина». Разработаны подходы определения рабочей концентрации готового препарата, учитывающего уровень свечения и дозозависимость степени ингибирования биолюминесценции токсикантами в диапазоне средних значений шкалы «Биотокса-6» . Основные положения включены в заявку на патент «Способ изготовления Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности (МИТ) для определения загрязнения окружающей среды» (Приоритетная справка № 2000302199 от 21 января 2000 г).

Показано, что биолюминесценция может быть дополнительным критерием при оценке критических состояний культуры. Существует адекватное реагирование люминесцентной системы в ответ на физические (ТШ), химические (этанол, антибиотики) и биологические (фаговая инфекция) воздействия.

Практическая значимость работы

Предложена схема оптимизации сенсора на основе люминесцентных бактерий и разработана технология получения препарата с лучшими индикационными свойствами.

Составлены технические условия на модифицированный сенсор «Микробиолюминесцентный индикатор токсичности» (ТУ 846-001-04538050

00) и утверждены рекомендации по его применению «Наставления по применению препарата Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности -МИТ».

Проведенные исследования способствуют расширению сферы использования реакции ингибирования биолюминесценции.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на конференции молодых ученых-экологов Уральского региона «Современные проблемы популяционной, исторической и прикладной экологии», Екатеринбург, 1998; Международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды - 98», Москва, 1998; Региональной конференции «Проблемы экологии Уральского региона», Оренбург, 1998; Региональной конференции молодых ученых «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии», Пермь, 1999.

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 171 страницах машинописного текста, иллюстрирована 8 таблицами и 34 рисунками; состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, приложения. Список литературы включает 208 наименований работ отечественных и зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Шмырина, Ирина Леонидовна

ВЫВОДЫ:

1. Среди изученных питательных сред установлено, что среда Эндо обеспечивает меньшую частоту возникновения темновых вариантов и более стабильное свечение культуры Е. coli lum+, вероятно, в результате прохождения адаптивных физиологических перестроек и лучшего соответствия обменных характеристик клеток качеству среды обитания. Полные органические среды в условиях аэрации формируют оптимальное соотношение уровня биомассы и свечения, способствуя стабильному выявлению действия токсикантов.

2. Показано, что в период адаптации и стационарной фазы роста увеличивается степень ингибирования свечения Е. coli lum+ поллютантами. Отмечается более высокая чувствительность люминесценции культур, выращенных и тестированных при температуре, оптимальной для клеток-реципиента (37°С). Максимальная биолюминесценция регистрируется при более низких температурах, типичных для клеток-донора /ш>оперона.

3. Расширен круг химических и абиотических факторов, влияние которых регистрируется и в динамике описывается по реакции ингибирования микробиолюминесценции. Впервые показано, что повышение температуры и присутствие этанола экспрессно выявляются по гашению свечения. Подтвержден градиентный тип реакции на данные факторы.

4. Впервые выявлено соответствие между чувствительностью сенсора на основе культур Е. coli lum+ к широкому спектру антибиотиков и степенью ингибирования ими биолюминесценции. Исследования динамики свечения при действии новых антибиотиков (аугментина), пробиотиков и фаговой инфекции свидетельствуют о возможности и целесообразности применения рекомендуемого теста для контроля качества средств лечения, профилактики коли инфекций.

Заключение

Микробиотесты на основе люминесцентных бактерий вполне отвечают требованиям, предъявляемым современными условиями к разработкам подобного типа. Такие системы уже получили права гражданства и широко используются во всем мире (Гительзон др., 1983; Шендеров и др., 1985; I

Бержанская и др., 1987; Попова и др., 1991; Bulich, 1982; iBulich et al., 1990). Они характеризуются быстродействием, высокой чувствительностью и корреляцией результатов с данными определения острой и хронической токсичности на млекопитающих, поскольку основные метаболические пути, обеспечивающие поддержание структуры клетки и ее жизнедеятельности, в принципе, одинаковы для бактерий и клеток высших организмов (Ревазова и др., 1997)

По данным литературы и результатам предварительных лабораторных исследований показана необходимость стабилизации характеристик тестовых „ культур люминесцентных бактерий и генно-инженерных штаммов с lux генами. Предлагаются разные подходы для ее реализации.

В современных условиях предварительная типизация рекомендуемых штаммов и дополнительное их описание является необходимым условием успешной работы, и диссертация содержит ряд таких наблюдений. В наших экспериментах отмечено, что на эффективность люминесценции и адекватную чувствительность свечения к токсикантам оказывают влияние многие факторы.

Использование дифференциально-диагностических сред и постоянный искусственный отбор обусловили получение клонов с лучшим, более стабильным свечением. Определенный срок культивирования на полных питательных средах, температурный режим выращивания оптимальный для клеток-реципиента, наличие интенсивного массообмена, удаление метаболитов, мягкие условия сушки способствовали сохранению, а в некоторых случаях улучшению свойств культуры Е. coli lum+.

На основании собственных экспериментов, а также опыта работы лаборатории с учетом данных литературы, предложена общая схема возможной оптимизации сенсоров на основе люминесцентных генно-инженерных штаммов бактерий, включающая ряд оригинальных этапов: дополнительную двухлетнюю искусственную селекцию светящихся вариантов, подбор оптимальных сред и условий их культивирования, удаление экзометаболитов, лиофилизацию препарата по оптимальной методике. Далее определение рабочей концентрации препарата и условий адекватного реагирования люминесценции на неблагоприятные факторы.

Схема.

Стадии и этапы оптимизации люминесцентного сенсора I. Подготовка штамма

II. Получение препарата

III. Анализ и стандартизация готового препарата

В соответствии со схемой, изготовлены экспериментальные серии препарата, которые, по предварительным данным, имеют ряд преимуществ в сравнении с исходным препаратом «Эколюм», что указывает на успешность реализации предложенного принципа оптимизации. Свечение культур в рабочем разведении было не менее 100000 отн.ед. на фоне соответствия дозы токсиканта и степени угнетения им свечения в диапазоне средних значений шкалы Т (%) «Биотокса-6». Наши наблюдения подтверждены результатами -независимой экспертизы, материалы которой представлены в приложении.

Основные положения выполненной работы и включающие этапы приведенной выше схемы отражены в заявке на патент «Способ изготовления Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности (МИТ) для биоиндикации загрязнения окружающей среды» - приоритетная справка №2000302199 от 21.01.2000 и ТУ на МИТ №846-001-04538050-00. Указания по применению изложены в «Наставлении по применению препарата Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности - МИТ» (см.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шмырина, Ирина Леонидовна, 2000 год

1. Авакян A.A., Кац J1.H., Павлова И.Б. Атлас анатомии бактерий патогенных для животных и человека. М.: Медицина. 1972. - 180 с.

2. Баранова H.A., Данилов B.C., Егоров Н.С. Особенности функционирования биолюминесцентной цепи «тусклого» штамма Photobacterium fischeri/ZJlAH СССР. 1980. - Т.252, № 4. - С. 1009-1012.

3. Баранова H.A., Данилов B.C., Егоров Н.С. NADH-зависимое свечение и эффективность деятельности люминесцентных систем различных видов морских бактерий//Микробиология. 1984. - Т.53, № 2. - С. 896-901.

4. Басс М.Г., Худяков П.Г., Шелегедин В.И. Метод биотестирования сточных вод на основе бактерий Escherichia coli К 12//Биотехнология. 1993. - № 7. -С. 36-40.

5. Безель B.C., Кряжимский Ф.В., Семериков Л.Ф., Смирнов Н.Г. Экологическое нормирование антропогенных нагрузок//Экология. 1992. -№6. -С. 3-12.

6. Белогурова Н.Г., Мосолова Т.П., Калюжный C.B., Варфоломеев С.Д. Кинетические закономерности роста, метаболизма культуры Clostridium thermosaccharoluticiim. Выделение и характеристика плазмид//Микробиология. 1991. - Т.60, вып.2. - С. 245-252.

7. Березин И.В., Угарова Н.И., Бровко Л.Ю., Филиппова Н.И. Перспективы применения биолюминесценции с целью медицинской диагностики/ЛВ кн. Биолюминесценция в Тихом океане. Красноярск. 1982. - 417с., ил.

8. Бержанская Л.Ю., Постникова О.Н., Кривошеин Ю.С. Биосенсор для количественного определения в воде синтетических поверхностно-активных веществ//Авт. св-во, № 1335569, кл G 12 Q V*. 1987. - 8с.

9. Берия Л.В., Исмаилов А.Д., Данилов B.C. Стимуляция биолюминесцентной активности бактериальной люциферазы продуктами Fe 2+-индуцированного перекисного окисления липидов//Биохимия. 1991. - Т.56, вып.З. - С. 477485.

10. Благой Ю.П. Взаимодействие ДНК с биологически активными веществами (ионами металлов, красителями, лекарствами)//Соросовский образовательный журнал. 1998. - № 10. - С. 18-24.

11. П.Варфоломеев С.Д., Калюжный C.B. Биохимическая кинетика процессов репликации плазмид/УБиохимия. 1991. - Т.56, вып.Ю. - С. 1731-1747.

12. Вахитов Т.Я., Петров JI.H. Выживаемость клеток Escherichia coli при хранении в суспензиях различной концентрации//Микробиология. 1992. -Т.61, вып.6. - С. 1087-1095.

13. Вельков В.В. Нестабильность рекомбинантных молекул//Генетика. 1983. -Т. 19, № 10.-С. 1575-1581.

14. Н.Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. M.: 1972. 252с.

15. Волков В.Я. К вопросу о физиологических и физико-химических механизмах устойчивости микроорганизмов к замораживанию и высушиванию//Микробиология. 1994. - Т.63, вып.1. - С. 5-15.

16. Выпияч А.Н., Маркелова С.И. Жизнеспособность и биолюминесценция лиофильно высушенных клеток морских бактерий в процессе хранения/УВестник Моск. Ун-та, сер. 16, Биология. 1995. - № 3. - С. 33-37.

17. Высоцкий Е.С., Заворуев В.В., Межевикин В.В., Родичева Э.К. Люминесценция светящихся бактерий при диауксии//Изв. СО АН СССР. Сер. биол. 1982. - № 15, вып.З. - С. 69-71.

18. Высоцкий Е.С., Заворуев В.В., Межевикин В.В., Фиш A.M. Связь между ростом и люминесценцией в периодической культуре светящихся бактерий//Биохимия и биофизика микроорганизмов: Межвузовский сборник. 1978.-С. 111-115.

19. Гершанович В.Н. Биохимия и генетика транспорта ионов у бактерий. АМН СССР, М.: Медицина. 1980. - 176с., ил.

20. Гинвенталь Н.И;, Соболев В.Р., Ведьмина Е.А., Богданова Л.Ф., Воробьева Л.С. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с полуколичественной оценкой полученных результатов//Лаб. дело. 1982. - № 1. - С. 44-48.

21. Гительзон И.И., Воробьева Т.И., Шендеров А.Н., Виделец И.Ю., Сименская Т.Ф. Штамм бактерий Photobacterium leiognathi, используемый в качестве тест-культуры на токсичность ксенобиотиков//Авт. св-во № 1097947, кл G 01 № 33/18,- 19,- 1983.- 7с.

22. Гительзон И.И., Родичева Э.К., Медведева С.Е., Примакова Г.А., Барцев С.И., Кратасюк Г.А., Петушков В.Н., Межевикин В.В., Высоцкий Е.С., Заворуев В.В., Кратасюк В.А. Светящиеся бактерии. Новосибирск: Наука. Сиб. Отд-е. - 1984. - 275с.

23. Глемжа А., Рузгине А., Вашкайте В., Рузгите Р., Дилявитюче Я. Исследование условий биосинтеза люциферазы культурой Photobacterium phosphoreum 430//Прикладная биохимия и микробиология. 1994. - Т.30, вып.4-5. - С. 582-588.

24. Горлатова И.В., Крючкова Е.Г., Акименко Л.В., Вельков В.В. Влияние регуляторных генов бактериофага X с lrex АВ на физиологию Escherichia coli К-12//Биотехнология. 1991. - № 4. - С. 13-16.

25. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий.-М.: Мир. 1982. - 310с.

26. Грагеров А.И., Миркин С.М. Влияние сверхспирализации ДНК на основные генетические процессы у прокариот//Молекулярная биология. 1980. - Т. 14, вып. 1. - С. 8-33.

27. Данилов B.C., Егоров Н.С. Бактериальная биолюминесценция. М.: Изд-во МГУ, - 1990.- 152с., ил.

28. Данилов B.C., Исмаилов А.Д., Малков Ю.А., Егоров Н.С. Взаимодействие алифатического альдегида с цитохромом Р-450 в реакциях бактериальной люциферазы//Биоорганическая химия. 1981. - Т.7, № 1. - С. 68-74.

29. Данилов B.C., Малков Ю.А. Влияние гемовых лигандов СО и цианида на реакцию, катализируемую бактериальной люцйферазой//Биохимия. 1986. -Т.51,вып.5.-С. 782-787.

30. Дементьева Е.И., Угарова H.H., Кобболд П.Х. Изменение АТФ в интактных клетках Escherichia coli, содержащих рекомбинантную люциферазу светляков//Биохимия. 1996. - Т.61, вып.7. - С. 1285-1293.

31. Дужий Д.Е., Завильгельский Г.Б. Бактериофаг À,:lux: Конструирование и экспрессия биолюминесценции в клетках Е. со/г7/Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1994. - № 3. - С. 36-38.

32. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках: Учеб. для студентов биолог, спец. ун-тов.- 4-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1986. - 448с.,ил.

33. Егорова Т.С., Исмаилов А.Д. Факторы, регулирующие люминесцентную активность Photobacterium phosphoreum при глубинном культивировании//Микробиология. 1998. - Т.67, № 2. - С. 182-187.

34. Жолданов И.А., Даллакян Г.А., Максимов В.Н. Морские люминесцентные бактерии как тест-объект для исследования изолированного и комбинированного действия тяжелых металлов//Вестник Моск. Ун-та, сер. 16, Биология. 1989. - № 2. - С. 64-68.

35. Зубарева H.A. Инфекция в патологии и хирургии билиарной системы при желчнокаменной болезни//Автореф. дис. на соис. уч. ст. д.м.н. Пермь. -1999. -34с.

36. Зубарева H.A., Ершов О.Ю., Соснин Д.Ю., Сандаков П.Я., Терехина H.A. Способ диагностики холангита//Патент № 2109283 от 20.04.1998.

37. Иванов В.Н., Угодчиков Г.А. Клеточный цикл микроорганизмов и гетерогенность их популяций. Киев: Наукова думка. - 1984. - 280с.

38. Илларионов Б.А., Протопопов М.В. Клонирование и экспрессия генов люминесцентной системы Photobacterium /ezogwa/М/Молекулярная генетика. 1987. - Т. 13, № 8. - С. 41-46.

39. Инструкция по применению дисков для определения чувствительности к антибиотикам. 1986.

40. Исмаилов А. Д., Берия JI.B., Данилов B.C. Ферментативный и неферментативный процессы перекисного окисления липидов в бесклеточном экстракте Vibrio harveiyf/Микробиология. 1994. - Т.63, вып.З. -С. 466-471.

41. Какорин С.А., Ровнов Н.В., Рыбальченко О.В., Сорвин C.B., Трусов A.A. Структура бактериальной суспензии Escherichia со////Биофизика. 1991. -Т.36,вып.6. -С. 1043-1047.

42. Каргатова Т.В., Максимова Е.Е., Попова Л.Ю., Брильков A.B., Печуркин Н.С. Фенотипическая изменчивость популяции рекомбинантного люминесцентного штамма Escherichia coli в водных микрокосмах//Микробиология. 1997. - Т.66, № 1. - С. 101-106.

43. Каталог светящихся культур. Под ред. Э.К.Родичевой: Новосибирск: Наука. Сиб. предприятие РАН. - 1997. - 125с.

44. Квасников Е.И., Нестеренко O.A. Молочнокислые бактерии и пути их использования. М., 1975. - 389с., ил.

45. Корпан Я.И., Ельская A.B. Микробные сенсоры: достижения, проблемы, перспективы//Биохимия. 1995. - Т.60, вып. 12. - С. 1988-1998.

46. Кратаскж В.А. Люциферазное биотестирование: биофизические основы, методы и применение//Автореф. дисс. на соиск. уч.ст.д.б.н. Красноярск.: ИБФ СО РАН. 1994.-31с.

47. Кудрявцева O.A., Барцев С.И., Охонин В.А., Межевикин В.В. Локализация люминесцентной системы светящихся бактерий//Биофизика. 1993. - Т.38, вып.З.-С. 435-440.

48. Кудряшева Н.С., Зюзикова Е.В., Гутник Т.В., Кузнецов A.M. Действие солей металлов на бактериальные биолюминесцентные системы различной сложности//Биофизика. 1996. - Т.41, вып.6. - С. 1264-1269.

49. Кудряшева Н.С., Шалаева Е.В., Задорожная E.H., Кратасюк В.А., Балаян А.Э., Стом Д.И. Закономерности ингибирования бактериальной биолюминесценции in vitro хинонами и фенолами компонентами сточных вод//Биофизика. - 1994. - Т.39, вып.З. - С. 455-464.

50. Кузнецов A.M., Родичева Э.К., Медведева С.Е. Использование светящихся бактерий в биотестировании окружающей среды//Материалы Международной конференции, 12-18 сентября, 1998. Москва, Пермь. 1998.-С. 395.

51. Лебедев B.C., Веселовский A.B., Федоров Ю.И. Роль кислорода в ингибировании дыхания Escherichia coli ионами меди//Изв. Акад. Наук, Сер. Биол. 1990. - № 5. - С. 782-785.

52. Лебедева М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.: Медицина. 1973. - 313с.

53. Леванова Г.Ф., Юшин А.С., Кашников С.Ю. Метод сравнительного биотестирования питьевой воды с помощью индикаторных штаммов бактерий//Гигиена и санитария. 1999. - № 2. - С. 77-79.

54. Ленцнер А.А. Лактобациллы микрофлоры человека//Автореф. дис. д-ра. мед. наук. Тарту. - 1973. - 30с.

55. Ленцнер А.А. Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э., Тюри М.Э., Бримне Т.А., Брилис В.И., Левков А.А. Лактофлора и колонизационная резистентность//Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - № 3. -С. 173-179.

56. Леонтьева О.В., Угарова Н.Н. Участие шаперона Dna К и АТФ в сворачивании in vivo люциферазы светляков, синтезируемой клетками Escherichia со////Биохимия. 1996. - Т.61, вып.4. - С.721-725.

57. Лохвицкий С.В., Абеузов М.Е., Щепеткина Л.В. Лизоцимообразовательная функция печени при осложненном остром холецистите//Вестник хирургии им. Грекова. 1989. - № 5. - С. 29-30.

58. Ляхович В.В., Цырлов И.В. Структурные аспекты биохимии монооксигеназ. Новосибирск. Наука. 1978. - 238с., ил.

59. Максимова Е.Е., Попова Л.Ю., Каргатова Т.В., Шпагина В.В. Регулируемая экспрессия генов бактериальной люминесценции, клонированных в многокопийной рекомбинантной плазмиде//Микробиология. 1997. - Т.66, № 2. - С. 223-227.

60. Манниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.:Мир. 1984. - 480с., ил.

61. Манухов И.В., Дужий Д.Е., Завильгельский Г.Б. Клонирование генов lux А и lux В Vibrio harveyi и экспрессия биолюминесценции в клетках Escherichia coli и Bacillus ^¿»¿///¿•//Биотехнология. 1996. - № 1. - С. 3-8.

62. Марквичев Н.С., Мельниченко Е.Г., Бержанская Л.Ю., Кривошеин Ю.С., Манаков М.Н. Изучение кинетики роста и светопродукции генно-инженерного штамма Escherichia coli (1иш)//Биотехнология. 1991. - № 6. -С. 12-15.

63. Маянский Д.Н. Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов.-Новосибирск.: Наука. 1981. - 169с., ил.

64. Медведева С.Е., Выдрякова Г.А., Пузырь А.П., Могильная O.A. Морфологические особенности роста светящихся бактерий Photobacterium и Vibrio на агаризованных средах различной вязкости//Изв. СО РАН, Сиб. биол. журнал. 1993. - вып.6. - С. 18-23.

65. Медведева С.Е., Медведев А.Н., Примакова Г.А., Сальников М.В. АТФ-азная активность светящихся бактерий и их темновых вариантов//Изв. СО РАН СССР, серия биол. наук. 1982. - вып.2,№ 10. - С. 113-117.

66. Медведева С.Е., Могильная O.A., Пузырь А.П. Структура колоний и генома бактерий рода Photobacterium!Í.Микробное разнообразие: состояние, стратегия сохранения,экологические проблемы: Материалы Международной конференции, 8-11 окт., Пермь. 1996. - 276с.

67. Межевикин В.В., Высоцкий Е.С., Заворуев В.В. Метаболическая организация люминесцентной системы у светящихся бактерий//ДАН СССР. 1983. - Т.272, №6. - С. 1485-1487.

68. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. М.: Мир. -1967.-347с.

69. Методические рекомендации. Определение токсичности воды и водных экстрактов из объектов окружающей среды по интенсивности биолюминесценции бактерий. Утв. Зам. председателя Госкомсанэпиднадзора России Г.Г.Онищенко 26.02.96, № 01-19/16.17. 9с.

70. Методы общей бактериологии: Пер. с англ. Под ред. Ф. Герхардта и др. М.: Мир. 1983.- 536с.

71. Нахаба В.А., Полюдов С.И. Использование микроЭВМ при определении чувствительности бактерий к антибиотикам//Лабораторное дело. 1990. -№3.-С. 60-63.

72. Несчисляев В.А. Колибактерин сухой (Colibacterinum siccumy/Регламент производства №737-98, Пермь. 1998. - 35с.79.0нищенко Г.Г. О санитарно-эпидемиологической обстановке в России//Гигиена и санитария. 1997. - № 6. - С. 4-12.

73. Петушков В.И., Кратасюк Г.А., Кратасюк В.А., Белобров П.И. Термоинактивация бактериальной люциферазы//Биохимия. 1982. - Т.42, вып. 11.- С. 1773-1777. . .

74. Пехов А.П. Генетика бактерий. Изд. 2. М.: Медицина. 1977. - 408с.

75. Попова Л.Ю., Калачева Г.С., Могильная O.A., Медведева С.Е., Печуркин Н.С. Штамм светящихся бактерий с повышенной чувствительностью к гексахлорциклогексану//Прикладная биохимия и микробиология. 1994. -Т.ЗО, вып.4-5. - С. 650-656.

76. Попова Л.Ю., Луцкая Н.И., Жуков А.Г. и др. Микробные тест-системы для оценки степени токсичности химических соединений. Красноярск. - 1991. -31с.-Препр. № 163Б.

77. Попова Л.Ю., Медведева С.Е., Могильная O.A., Пузырь А.П., Печуркин Н.С. Использование светящихся бактерий для создания тест-системы на гексахлорциклогексан//Прикладная биохимия и микробиология. 1991. -Т.27, вып.6.- С. 905-910.

78. Постникова О.Н., Кривошеин Ю.С., Бержанская Л.Ю. Влияние поверхностно-активных веществ на люминесцентную систему светящихся бактерий//Биотехнология. 1992. - № 4. - С. 56-59.

79. Примак A.B., Кафаров В.В., Качиашвили К.И. Системный анализ контроля и управления качеством воздуха и воды. Киев: Наукова думка. 1991. - 360с.

80. Примакова Г.А., Сандалова Т.П. Влияние pH на константу скорости затухания люминесценции у различных видов светящихся бактерий//Прикладная биохимия и микробиология. 1991. - Т.27, вып.1. -С. 142-145.

81. Птицын Л.П., Фатова М.А., Степанов А.И. Экспрессия генов биолюминесцентной системы Photobacterium leiognathi в Е.^////Молекулярная генетика. 1990. - № 2. - С. 26-29.

82. Пшеничнов P.A., Закиров Ф.Н., Никитина Н.М. Микробиотест для оценки мониторинга загрязнения почв//Экология. 1995. - № 4. - С. 332-334.

83. Пшеничнов P.A., Пашин Ю.В., Захаров И.А. Современные тест-системы выявления мутагенов окружающей среды. Свердловск: УрО АН СССР. -1990.- 135с.

84. Пшеничнов P.A., Соколова H.A., Лебединский А.И. Фотометрический метод изучения морфологии бактериальных колоний//Экология и популяционная генетика микроорганизмов. Сб. статей. Свердловск. 1975. - С. 35-41.

85. Ревазова Ю.А., Ингель Ф.И., Цуцман Т.Е., Хрипач Л.В., Кривцова Е.К., Юрченко В.В., Геворкян Н.М. Методология проведения комплексных генетико-токсико логических исследований//Вестник Российской АМН.-1997. -№ 7. С. 18-24.

86. Рощина Е.К., Петров Л.И. Выделение белка во внеклеточное пространство как неспецифическая реакция Escherichia coli на стресс//Микробиология. -1997.-Т.66,№2.-С. 179-184.

87. Рузгене А., Глемжа А., Текорене Р. Влияние разных аминокислот на рост Photobacterium phosphoreum и синтез люциферазного комплекса//Вiologiya. 1996.-№ 1.-С. 39-43.

88. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Практическое пособие. Под ред. Н.С.Егорова.-2 изд-е.-М.: Изд-во Моск. ун-та. 1983. -215с.

89. Румянцев Г.И., Новиков С.М. Проблемы прогнозирования токсичности и риска воздействия химических веществ на здоровье населения//Гигиена и санитария. 1997.-№ 6. - С. 13-18.

90. Сальников М.В., Высоцкий Е.С., Заворуев В.В., Межевикин В.В. Изменение периплазматического пространства светящихся бактерий в зависимости от интенсивности люминесценции//Микробиология. 1984. -Т.53, № 5. - С. 744-748.

91. Сахаров Г.Н., Исмаилова А.Д., Данилов B.C. Температурные зависимости реакции бактериальной люциферазы из Вепескеа harveiy и Photobacterium fischeril/Биохимия. 1988. - Т.53, вып.6. - С. 891-898.

92. Соболев А.Ю., Исмаилов А.Д., Данилов B.C. Кинетика биолюминесценции в реакции бактериальной люциферазы с различными алифатическими альдегидами//Биохимия. 1989. - Т.54, вып.2. - С. 20612065.

93. Сорокин В.А., Валеев В.А., Гладченко Г.О., Сыса И.В. Изучение взаимодействия ионов кадмия с нуклеотидами и природной ДНК//Биофизика. 1997. -Т.42, вып.1. - С. 105-116.

94. Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов. Т.1, 2, 3. М.: Мир. 1979.

95. Суходолец В.В. Регуляторный отбор как альтернатива теории нейтральности//Генетика. 1995. - Т.31, № 12. - С. 1589-1597.

96. Титов А.Н., Романова H.A., Данилова Т.М., Бровко Л.Ю., Угарова H.H., Толстых П.И. Биолюминесцентный метод определения чувствительности микрофлоры к антибиотикам//Лабораторное дело. 1990. - № 10. - С. 61-66.

97. Тихомирова М.М., Мазур Е.Л., Баранова Л.В., Мамон Л.А. Температурная модификация мутационного процесса и белки теплового шока//Генетика. 1993. - Т.29, № 2. - С. 280-287.

98. Ткаченко А.Г., Чудинов A.A., Чурилова Н.С. Влияние физиологического состояния Escherichia coli на ультраструктуру нуклеоида в условиях стрессовых воздействий//Известия академии наук СССР. Серия биологическая. 1992. - № 1. - С. 42-51.

99. Тюлькова Н.А., Сандалова Т.П. Сравнительное исследование влияния температуры на бактериальные люциферазы//Биохимия. 1996. - Т.61, вып.2. -С. 275-287.

100. Унифицированные методы исследования качества вод. Часть III. Методы биологического анализа вод. М. 1983. - 372с.

101. Ураков И.И., Волков В.Я., Боровик Р.В. Функциональное состояние и механизмы повреждения микроорганизмов в процессе приготовления бактериальных препаратов//Биотехнология. 1988. - Т.4, № 4. - С. 420-432.

102. Хрипач JI.B., Ревазова Ю.А., Ходжаян А.Б. Оценка суммарной токсичности тяжелых металлов на основе люминесцентного бактериального теста//Гигиена и санитария. 1998. - № 4. - С. 67-72.

103. Чернова Т.А., Завильгельский Г.Б. Клонирование генов lux-регулона Vibrio fischeri в клетках Escherichia со////Биотехнология. 1991. - № 3. -С. 17-18.

104. Четина Е.В. Влияние некоторых физиологических и генетических факторов на процесс перехода энтеротоксигенных штаммов E.coli в некультивируемое состояние//Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1997. - № 1. - С. 8-14.

105. Чумакова Р.И., Гительзон И.И. Светящиеся бактерии. М.: Наука. 1975. -104с.

106. Шендеров А.Н., Виделец И.Ю., Луцкая Н.И., Гуревич В.Б., Светлаков А.В. Физиолого-биохимические свойства наследственных вариантов, возникающих в популяции Photobacterium /е/о^па?/гг//Микробиология. -1989. Т.58, вып.6. - С. 1000-1006.

107. Шендеров А.Н., Попова Л.Ю., Виделец И.Ю. Механизмы регуляции синтеза ферментов люминесцентной системы у Photobacterium leiognathi и Вепескеа harveyi//B кн. Биолюминесценция в Тихом океане. Красноярск. -1982.-417с., ил.

108. Шендеров А.Н., Сименская Т.Ф., Виделец И.Ю. Способ биоиндикации загрязнения водной среды//Авт. свид. СССР №1097947; кл. G 01 № 33/48. -1985. 7с.

109. Шлегель Г. Общая микробиология: Пер. с нем.- М.: Мир. 1987. - 567с., ил.

110. Щелкунов С.Н. Клонирование генов. Новосибсрск: Наука. 1986. - 228с.

111. Щелкунов С.Н. Конструирование гибридных молекул ДНК. Новосибирск: Наука. 1987. - 168с.

112. Backhaus Т., Grimme L.H. The toxicity of antibiotic agents to the luninescent bacterium Vibriofischeri/fChemospherQ. 1999. - V.38, N 14. - P. 3291-3301.

113. Baldwin Т.О., Nicoli M.Z., Becvar J.E., Hastings J.W. Bacterial luciferase. Binding of oxidized FMN//J. Biol. Chem. 1975. - V.250, N 8. - P. 2763-2768.

114. Balny C., Hastings J.W. Fluorescence and bioluminescence of bacterial luciferase intermediates//Biochemistry. 1975. - V.14, N 21. - P. 4719-4723.

115. Bennett A., Lenski R. Escherichia coli. Evolutionary adaptatiom to temperature: V. Adaptive mechanism and correlated responses in experimental lines of Escherichia coli// Evolution (USA). 1996. - V.50, N 2. - P. 493-503.

116. Bennett A., Lenski R. Evolutionary adaptation to temperature 6. Phenotyric acclimation and its evolution in Escherichia co////Evolution. 1997. - V.51, N 1. -P. 36-44.

117. Berger В., Carty C.E., Ingram L.O. Alcohol-induced changes in the phospholipid molecular species of Escherichia coli/U. Bacteriol. 1980. - V.142. -P. 1040-1044.

118. Billard P., DuBow M.S. Bioluminescence-based assay for detection and characterization of bacteria in clinical laboratories//Clinical Biochemistry. 1998. - V.31, N 1. -P. 1-14.

119. Bridges B.A., Ashwood-Smith M.J., Munson R.I. Correlation of bacterial sensitivities to ionizing radiation and mild heating//J. Gen. Microbiol. 1969. -V.58.-P. 115-124.

120. Bucheder F., Broda E. Energy-dependent zink transport by E.colillJ. Biochem. 1974.-V.45.-P. 555-559.

121. Bulich A.A. A practical and reliable method for monitoring the toxicity of aquatic samples. Process Biochem. 1982. - V.17. - P. 45-47.

122. Bulich A.A., Tung K.K., Scheibner G. The luminescent bacterial toxicity test, its potential as an in-vitro alternative//!. Biolumin. Chemilum. 1990. - V.5. -P. 71-78.

123. Conrad R.S., Galanos C.//Antimicr. Agents and Chemotherapy. 1989. - V.33, N 10.-P. 1724-1728.

124. Delong E.F., Steinhauer D., Israel A., Nealson K.H. Isolation of genes from Photobacterium leiognathi and expression in E.coli/IGenQ. 1987. - V.54. -P. 203-210.

125. Drahos D.J., Hendrix R.W. Effect of bacteriophage lambda infection on the synthesis of groE protein and other Escherichia coli proteins//J.Bacteriol. 1982. -V. 149.-P. 1050-1063.

126. Drlica K. Biology of bacterial deoxyribonucleic and topoisomerases//Microbiol. Rew. 1984. - V.48, N 4. - P. 273-276.

127. Dolan K.M., Greenberg E.P. Evidence that Gro EL, not sigma 32, is involved in transcriptional regulation of the Vibrio fisheri luminescence genes in Escherichia colil/J. Bacteriol. 1992. - V.174, № 15. - P. 5132-5135.

128. Eley M., Cormier M.//J. Biochem and Biophys. Res. Commun. 1968. - V.32, N3,- P. 454-460.

129. Engebrecht J.K., Nealson H., Silverman M. Bacterial bioluminescence: isolation and genetic analysis of function from Vibrio fisheri!/Cell. 1983. - V.32. -P. 773-781.

130. Engebrecht J.K., Silverman M. Identification of genes and gene products necessary for bacterial bioluminescence//Proc. National, Acad. Sci. USA. 1984. -V.81.- P. 4154-4158.

131. EPS, Guidance Document on Control of Toxicity Test Precision Using Reference Toxicants. Report EPS1/RM/12, August 1990, Environmental Protection, Conservation and Protection, Environment Canada. 1990. - 85p.

132. Esterbauer H. Free radicals, Lipid peroxidation and cancer//Eds D.S. McBrien, T.F.L.Slater. N.Y.: Acad. Press. 1982. - 102 p.

133. Eymers J.G., Van Schouwenburg K.L. On the luminescence of bacteria. 3. Futher quantitative data regarding spektra connected with bioluminescence//Enzymologia. 1937. - V.3. - P. 235-241.

134. Farewell A., Neidhardt F.C. Effect of temperature on in vivo protein synthetic capacity in Escherichia colillL of Bacteriology. 1998. - V. 180, N 17. - P. 47044710.

135. Gunsalus I.C., Sligar S.G.//Adv. Enzymol. 1978. - V.47, N 1. - P. 1-44.

136. Gosh B.K., Murray R.G. Fine structure of Listeria monocytogenes in relation to protoplast formation//J. Bacteriol. 1967. - V.93, N 1. - P.411-426.

137. Halegona S., Inouye M. Translocation and assembly of outer membrane proteins of Escherichia coli/ll. Mol. Biol. 1979. - V.130. - P. 39-61.

138. Hastings J.W. Oxigen concentration and bioluminescence intensity. 1. Bacteria and fungi//J. Cell. Comp.Physiol. 1952. - V.39. - P. 1-30.

139. Hastings J.W. The chemistry and biology of bacterial light emission//Photochem. Photobiol. 1978. - V.27, N 4. - P. 397-404.

140. Hastings J.W., Nealson K.H. Bacterial bioluminescence//Ann. Rev. Microbiol. 1977.-V.31.-P. 549-595.

141. Hayashi Y., Hayashi M.//Biochemistry. 1971. -N 10. - P. 4212-4218.

142. Hendrix R.W. Purification and properties of gro E, a host protein involved in bacteriphage assembly//! Mol. Biol. 1979. - V.129. - P. 375-392.

143. Holzman T.F., Baldwin T.O.//Biochemistry. 1983. - V.22, N 12. - P. 28382846.

144. Ianda I., Opekarova M. Long-term preservation of active luminous bacteria by liophilization//J. Biol. Chem. 1989. - V.3. - P. 27-29.

145. Ingram L.O., Buttke T.M. Effect of alcohol on microorganisms//Advance in Microbial Physiology. 1984. - P. 26-28.

146. Jones R.P. Biological principles for the effect of ethanol//Enzyme and Microbial Technol. 1989. - V.ll. - P. 130-153.

147. Kaiser R.L.E., Palabrica V.S. Pkotobacterium phosphoreum. Toxicity Data Index//Water Poll. Res. J. Canada. 1991. - V.26, N 3. - P. 361-431.

148. Karl D.M., Nealson K.H. Regulation of cellular metabolism during synthesis and expression of the luminous system in Beneckea and Photobacterium//. Gen. Microbial. 1980. - V.117. - P. 357-368.

149. Klein G., Zmijewski M., Krzewska J., Czeczatka M., Lipinska B. Cloning and characterization of the dna K heat shock operon of the marine bacterium Vibrio harveyi//Molecular and General Genetics. 1998. - V.259, N 2. - P. 179-189.

150. Klein G., Walczak R., Krasnowska E., Biaszczak A., Lipinska B. Characterization of heat-shock response of the marine bacterium Vibrio harveyi/Mol Microbiol. 1995. - V.16, N 4. - P. 801-811.

151. Kochan J., Murialdo H. Stimulation of groE synthesis in Escherichia coli by bacteriophage lambda infection//J.Bacteriol. 1982. - 149. - P. 1166-1170.

152. Korpela M., Mantsala P., Lilius F. et al/U. Biolumin. Chemilumin. 1989. -V.4.-P. 551-554.

153. Lemaux P.G., Herendeen S.L., Bloch P.I., Neidhardt F.C. Transient rates of synthesis of individual polypeptides in E.coli following temperature shifts//Cell. -1978. V. 13.-P. 427-434.

154. Lezoi A., Bennett A., Lenski R. Temperature acclimation and competitive fitness: an experimental test of the beneficial acclimation assumption//Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1994. - V.91, N 5. - P. 1917-1921.

155. Magner Y. et al. Characterization of bioluminescent bacteria by studies of the inductors of luciferase synthesis//Biol. Bull. 1972. -N 6. - P. 143-169.

156. Makiguchi N., Arita M., Asai Y. Isolation, identification and several characterization of luminous bacteria//J. Gen. Appl.Microbiol. 1979. - V.25. -P. 387-396.

157. Makiguchi N., Arita M., Asai Y. Optimum cultural condition for strong light production by Photobacterium phosphor eumlll. Gen. Appl. Microbiol. 1980. -V.26. -P. 75-83.

158. Marr A.G., Ingraham J.L. Effects of temperature on the composition of fatty acids in Escherichia coli//L Bacteriol. 1962. - V.84. - P. 1260-1267.

159. Meighen E.A. Autoinduction of light emission in different species of bioluminescent bacteria//Luminescence. 1999. - V. 14, N 1. - P. 3-9.

160. Meighen E. Molecular biology of bacterial bioluminescence//Microbiol. Rev. -1991. V.55, N l.-P. 123-142.

161. Meighen E.A., Hastings J.W. Binding site determination from kinetic data//J.Biol. Chem. 1971. - V.246. - P. 7666-7674.

162. Minton K.W., Karmin P., Hahn G.M., Minton A.D. Nonspecific stabilization of stress-susceptible proteins by stress-resistant proteins: A model for a biological role of heat shock protein//Proc.Nat. Acad. Sci. 1982. - V.79. - P. 7107-7111.

163. Miyamoto C.M., Byers D., Graham A.F., Meighem E.A. Expression of bioluminescence in E.coli by recombinant Vibrio harveyi DNA//J. Bacteriol. -1987. V.169,№ l.-P. 247-253.

164. Moran L.A., Chawin M., Kennedy M.E., Korri M., Lowe D.G. et al. The major heat shock proteins (hsp 70) gene family. Related sequences in mouse, Drosophila and yeast//Can. J. Biochem. Cell. Biol. 1982. - V.61. - P. 488-499.

165. Murray I.A., Show W.V. O-acetyltransferases for chloramphenicol and other natural products//Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1997. - V.41,№ 1. -P. 1-6.

166. Nealson K.H. Autoinduction of bacterial luciferase: occurence, mechanism and significance//Arch. Microbiol. 1977. - V.l 12. - P. 73-79.

167. Nealson K.H. Isolation, identification and manipulation of lumonous bacteria//Methods in Enzymology. Acad.Press. N.Y. 1978. - V.57. - P. 153-166.

168. Nealson K.H., Hastings J.W. Bacterial bioluminescence: its control and ecological significance//Microbiol. Rev. 1979. - V.43, N 4. - P. 496-518.

169. Nealson K.H., Markowitz A. Mutant analysis and enzyme subunit complementation in bacterial bioluminescence in Photobacteriumf/J. Bacteriol. -1970.-V.104, N1.-P. 313-322.

170. Neidhardt F.C., Van Bogelen R.A., Lau E.T. The high temperature regulon in Escherichia coW/Sqq Ref. 1982. - V. 131. - P. 139-145.

171. Neidhardt F.C., Van Bogelen R.A., Vaughn V. The Genetics and Regulation of Heat-shock proteins//Ann. Rev. Genet. 1984. - V. 18. - P. 295-329.

172. Pellon Y.R. Heat damage and repair in the Escherichia coli nucleoid kinetics based on sedimentation analysis//Expan. Fisiol. 1983. - V.39. - P. 321-326.

173. Presswood R.P., Shannon P., Spencer R. et al. Effect of deuterium substitution of the C carbon of decanal in the bacterial luciferase reaction//Flavins and Flavoproteins. Tokyo. 1980. - P. 155-160.

174. Ribo M.J., Kaizer R.L. Photobacterium phosphoreum Toxicity Bioassay//Toxic. Asses. Int. Quart. 1987. - V.2. - P. 305-323.

175. Rick P.D.//Cell and Mol. Biol. 1987. - V.l. - P. 648-662.

176. Ryter A., Chang A. Localization of transcribing genes in the bacterial cell by high resolution autoradiography//!. Mol .'Biol. 1975. - V.98. - P. 797-803.

177. Schroder H., Langer T., Hartl F.U., Bukau B.//EMBOJ. 1993. - V.12. -P. 4137-4144.

178. So A., Davie E.W. The effect of organic solvents on protein biosynthesis and their influence on the aminoacid code//Biochemistry. 1964. - V.3. - P. 11651169.

179. Stanley P.E. Overview of application of bioluminescence//Bioluminescence and Chemiluminescence. Acad. Press . N.Y. 1981. - P. 275-282.

180. Sugino A., Higgins N.P., Brown P.O. et al. Energy coupling in DNA gyrase and the mechanism of action of novobiocin//Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1987. -V.75,N 10.-P. 4838-4845.

181. Szittner R.A., Meighen E.A. Nucleotide sequence, expression and properties of luciferase coded by lux genes from a terrestrial bacterium//!. Biol. Chemr- 1990. -V.265, N 27. P. 16581-16587.

182. Tolner B., Poolman B., Konings W.N. Adaptation of microorganisms and their transport system to high temperature//Physiology. 1997. - V. 118, N 3. - P. 423428.

183. Tyulkova N.A., Sandalova T.P. Comparative study of temperature effects on bacterial luciferase//Biochemistry-Moscow. 1996. - V.61, N 2. - P. 205-214.

184. Ulitzur S. Established technologies and new approaches in applying luminous bacteria for analytical purposes//J. Of Bioluminescence and Chemiluminescence. -1997.-V.12,N4.-P. 179-192.

185. Ulitzur S. Factors affecting the cellular expression of bacterial luciferase//Arch. Microbiol. 1981. - V. 129. - P. 67-71.

186. Ulitzur S., Hastings J. Growth, luminescence, respiration and ATP pool during autoinduction in Beneckea harveyil/1. Bacteriol. 1978. - V.133, N 3. - P. 13071313.

187. Ulitzur S., Heller M. A new fast and very sensitive bioluminescent assay for phospholipases a and al//Anal. Biochem. 1978. - V.91, N 2. - P. 421-431.

188. Vaara M. Agents that increase the permeability of the outer membrane//Microbiol. Rev. 1992. - V.56. - P. 395-411.

189. Wagner A., Winkler U., Lummen P//J. Biolum. And Chemilum. 1989. - V.4. -P. 342-345.147

190. Заявка на патент «Способ изготовления Микробиолюминесцентного Индикатора Токсичности (МИТ) для биоиндикации загрязнения окружающей среды». Приоритетная справка № 20003021199 от 21.01.2000.

191. МПК С 12 С 11/00 в 01 N33/18 Способ изготовления микробиолюминисцентного индикаторатоксичности для определения загрязнения окружающей среды

192. Изобретение относится к токсикологии, биологическим методам контроля качества окружающий среды и может быть использовано для количественного определения отдельных и суммы токсикантов в объектах окружающей среды.

193. Недостатками известного способа получения препарата Эколюм является недостаточно высокая чувствительность, стабильность препарата при хранении(срок годности не более 1 года), общее низкое свечение, недостаточно стабильное значение биолюминисценции

194. Способ изготовления осуществляется следующим образом.

195. Надосадочная жидкость отбрасывается, а клеточный седимент развойся в прежнем объеме стабилизатором следующего состава: 20% сахарозы 0%), 10% Зкелатиноля, 70% - охлажденного до 4°С физиологического рас-ора (Ф.Р.).

196. Обеспечивает шестизначный уровень свечения контроля или не менее 100.000А,

197. Степень ингибирования свечения токсикантами в испытанных разведениях (1-2,5 мг/л) должна приходиться на наиболее достоверный средний - диапазон шкалы люминометра (20-75%), см.график.

198. В пределах указанных концентраций токсикантов должна наблюдаться прямая линейная зависимость между концентрацией токсиканта и степенью ингибирования уровня свечения.(см.график)

199. Способ изготовления микробиолюминисценгного индикатора токсичности

200. Изобретение относится к токсикологии, биологическим методам кон-юля качества окружающий среды и может быть использовано для количе-венного определения отдельных и суммы токсикантов в объектах окру-ающей среды.

201. Физиологический раствор остальное,последующей сублимационной сушкой в течение 55-65 часов и подтитроь-кой готового продукта с выбором его оптимальной рабочей концентрации.