ЛИЗИН СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ, MDM2 И SET7/9, В РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНОГО ОТВЕТА НА ГЕНОТОКСИЧЕСКИЙ И МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ СТРЕСС тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Шувалов Олег Юрьевич

• Шувалов Олег Юрьевич
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Шувалов Олег Юрьевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. Актуальность исследования

2. Цели и задачи работы

3. Основные положения, выносимые на защиту

5. Научная новизна полученных результатов

6. Теоретическое и практическое значение работы

7. Апробация работы

8. Личный вклад автора

9. Список опубликованных по теме диссертации печатных работ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 РОЛЬ РЕГУЛЯТОРОВ АКТИВНОСТИ Р53 В ОНКОГЕНЕЗЕ

2.1.1 Р53-основной онкосупрессор человека

2.1.2 8е17/9 позитивный регулятор р53

2.1.3 Р 53-независимые функции 8е17/9

2.1.4 МБМ2 - основной негативный регулятор р53

2.1.5 Структура МБМ2 и его сплайс-изоформ

2.1.6 Р53-независимые онкогенные функции МБМ2

2.1.7 МБМ2 как онкосупрессор

2.1.8 Роль сплайс-изоформ МБМ2 в онкогенезе

2.1.9 Ингибиторы взаимодействия р53 с МБМ2 как потенциальные противоопухолевые препараты

2.2 ДОКСОРУБИЦИН И ЦИСПЛАТИН КАК ШИРОКО ПРИМЕНЯЕМЫЕ ГЕНОТОКСИЧЕСКИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ АГЕНТЫ

2.2.1 Репарация ДНК как фактор эффективности генотоксической противоопухолевой терапии

2.2.2 Цисплатин

2.2.3 Доксорубицин

2.3 ОДНОУГЛЕРОДНЫЙ МЕТАБОЛИЗМ И БИОСИНТЕЗ НУКЛЕОТИДОВ В РАКОВЫХ КЛЕТКАХ КАК МИШЕНИ ДЛЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ

2.3.1 Специфические изменения в метаболизме как характерная особенность

раковых клеток

3

2.3.2 Одноуглеродный метаболизм

2.3.3 Нарушения одноуглеродного метаболизма и путей биосинтеза нуклеотидов в раковых клетках

2.3.4 Нарушение метаболизма серина и глицина в раковых клетках

2.3.5 Одноуглеродный метаболизм и биосинтез нуклеотидов как мишени противоопухолевой терапии

ГЛАВА II..............................................................................МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Клеточные культуры

2.1.1 Культивирование клеточных культур

2.1.2 Трансфекция клеток

2.1.3 Получение клеток с нокдауном SET7/9 и MDM2

2.1.4 Обработка клеток химиотерапевтическими препаратами

2.2 Выделение РНК и синтез кДНК

2.3 ПЦР в режиме «реального времени»

2.4 Получения ДНК-последовательностей основной, а так же сплайс-изоформ MDM2

2.5 Создание векторных конструкций, несущих делеционные варианты и изоформы MDM2 и Set7/9 для про- и эукариотической экспрессии

2.6 Создание векторных конструкций, кодирующих полноразмерную серингидроксиметилтрансферазу SHMT2 и отдельные её домены

2.7 Получение клеточного экстракта

2.8 Экспрессия и очистка рекомбинантных белков

2.9 Метод GST-pulldown

2.10. Масс-спектрометрия

2.11. Ко-иммуннопреципитация

2.12 Убиквитинилирование in vivo

2.13 Разделение белков в ПААГ и последующая окраска Кумасси

2.14 Вестерн-блоттинг

2.15 Оценка выживаемости клеток после обработки химиотерапевтическими препаратами

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 SET7/9 и MDM2 образуют петлю отрицательной обратной связи

3.1.1 Нокдаун Set7/9 повышает экспрессию MDM2 при генотоксическом стрессе

3.1.2 Экпрессия изоформ MDM2 по-разному влияет на восприимчивость клеток к генотоксическим агентам доксорубицину и цисплатину

3.1.3 MDM2 взаимодействует физически с SET7/9, а так же контролирует уровень его экспрессии

3.2 Определение интерактома MDM2 и SET7/9

3.2.1 Выявление спектра белков, ассоциированных с рекомбинантной метилтрансферазой Set7/9

3.2.2 Выявление спектра белков, ассоциированных с рекомбинантной Е3-убиквитин лигазой MDM2

3.2.3 Анализ результатов GST pull down и отбор белков, играющих важную роль в онкогенезе

3.2.4 Верификация данных масс-спектрометрической идентификации ассоциированных с MDM2 белков с использованием иммунноблотинга

3.3 Влияние SET7/9 и MDM2 на ключевые факторы одноуглеродного метаболизма

3.3.1 Нокдаун Set7/9 повышает экспрессию MTHFD2 и SHMT2, а так же их транскрипционного регулятора c-Myc

3.3.2 Структурно-функциональной роль взаимодействия Е3 -убиквитин лигазы MDM2 с серингидроксиметилтрансферазой SHMT2

3.3.3 Set7/9 и MDM2 модулируют восприимчивость к ингибитору одноуглеродного метаболизма - метатрексату

ГЛАВА IV ОБСУЖДЕНИЕ

4.1 MDM2 образует с Set7/9 петлю отрицательной обратной связи и контролирует восприимчивость клеток к генотоксическим химиопрепаратам

4.2 MDM2 и Set7/9 принимают участие в различных клеточных процессах и имеют общих интерактантов

4.3 MDM2 и Set7/9 контролируют экспрессию SHMT2 и MTHFD2 и влияют на устойчивость клеток к метатрексату

Основные выводы:

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ЛИЗИН СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ, MDM2 И SET7/9, В РЕГУЛЯЦИИ КЛЕТОЧНОГО ОТВЕТА НА ГЕНОТОКСИЧЕСКИЙ И МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ СТРЕСС»

ВВЕДЕНИЕ 1. Актуальность исследования

Белок р53 является основным онкосупрессором человека. Нормальное функционирование р53-опосредуемых сигнальных путей несовместимо с жизнедеятельностью раковых клеток. Одним из позитивных регуляторов р53 является метилтрансфераза Set7/9, повышающая его транскрипционную активность (Chuikov et al. 2004). Помимо регуляции р53, Set7/9 играет важную роль при генотоксическом стрессе, модулируя пролиферативную активность транскрипционного фактора E2F1 (Lezina et al. 2014). Таким образом, Set7/9 обладает как про-, так и антипролиферативными свойствами.

Протоонкоген MDM2 является главным негативным регулятором важнейшего онкосупрессора человека — белка р53 (Wolf et al. 2012). MDM2 является р53-специфичной Е3-убиквитин лигазой, которая, убиквитинируя р53, маркирует данный онкосупрессор для последующей его деградации в протеасоме (Fuchs, 1998). Данный биохимический процесс, предотвращающий р53-зависимую гибель нормальных клеток, часто служит раковым клеткам для защиты от р53-опосредованной регуляции (Jones et al. 1995). Ген, кодирующий MDM2, амплифицирован более чем в 19 типах раковых опухолей, что приводит к оверэкспрессии соответствующего белка. На сегодняшний день убедительно показана клиническая роль MDM2 в онкогенезе (Tovar et al. 2006), целый ряд ингибиторов MDM2-p53 взаимодействия проходят различные стадии клинических испытаний (Vasilev, 2004).

Помимо р53, MDM2 взаимодействует по меньшей мере с 200 различными белками (http://thebiogrid.org), являясь своеобразной точкой конвергенции различных сигнальных путей онкогенеза. Однако, помимо р53-зависимых и р53-независимых онкогенных функций, MDM2 может обладать так же и онсупрессорными свойствами (Manfredi, 2010). Например, MDM2 является негативным регулятором каталитической субъединицы фермента теломеразы (Zhao et al. 2005), препятствуя теломер-ассоциированному старению клеток, а так же транскрипционных факторов Snail (Lim et al., 2010) и Slug (Wang et al., 2009), ассоциированных с эпителиально-мезенхимальной транзицией и переходом к

метастазированию. Кроме того, временная оверэкспрессия MDM2 приводит к остановке клеточного цикла при переходе из G1 в S фазу (Frum et al. 2014).

По-видимому, противоречивость в понимание функциональной значимости Mdm2 привносит также наличие целого ряда сплайс-изоформ MDM2, обнаруживаемых исключительно в раковых клетках и негативно регулирующих основную изоформу. В отличие от амплификации гена MDM2, наблюдаемой в среднем в 7% опухолей, сплайс-изоформы MDM2 обнаружены в самых различных типах рака с частотой встречаемости от 30 до 90% в зависимости от типа сплайс-формы (Okoro et al. 2012). При этом наличие сплайс-изоформ MDM2, как правило, ассоциировано с поздними стадиями развития опухолей (III и IV стадии), низкой степенью их дифференцировки и неблагоприятным прогнозом для пациентов (Rosso et al. 2014). Основными, помимо полноразмерного белка MDM2, являются изоформы MDM2-A, -B и -С. По большей части, онкогенные свойства сплайс-изоформ MDM2 остаются неизученными.

В рамках данной работы нами впервые описано взаимодействие MDM2 и Set7/9 в структурно-функциональном контексте. Мы показали влияние MDM2 и Set7/9 на восприимчивость раковых клеток к действию ряда химиотерапевтических препаратов. С использованием протеомного подхода мы идентифицировали ряд интерактантов Set7/9 и сплайс-изоформ MDM2, принимающих участие в различных клеточных процессах и продемонстрировали потенциальную вовлечённость MDM2 и Set7/9 в контроль одноуглеродного метаболизма за счет влияния на экспрессию ряда ключевых ферментов цикла превращений фолата. Мы так же показали, что в отличие от основной изоформы MDM2, экспрессия сплайс-изоформ не оказывала никакого влияния на восприимчивость к химиотерапевтическим препаратам.

Принимая во внимание растущий интерес исследователей к созданию ингибиторов MDM2 как к потенциальным противоопухолевым препаратам, важно как можно глубже понимать функциональную роль и молекулярные механизмы участия в онкогенезе как полноразмерного белка MDM2, так и его основных сплайс изоформ. Дальнейшее изучение структурно-функциональной роли Е3-убиквитин лигазы MDM2 в модуляции устойчивости раковых клеток к важнейшим химиотерапевтическим препаратам, а так же контроле одноуглеродного

метаболизма и путей биосинтеза нуклеотидов может иметь важное практическое значение для разработки сочетанной терапии.

2. Цели и задачи работы

Цель:

Целью данной работы является изучение функциональной роли Е3-убиквитин лигазы МБМ2 и метилтрансферазы 8е17/9 при генотоксическом и метаболическом стрессе

Задачи:

1. Оценить взаимовлияние регуляторов р53 - метилтрансферазы 8е17/9 и Е3-убиквитин лигазы МБМ2, на экспрессию друг друга как на транскрипционном, так и на белковом уровнях;

2. Оценить влияние экспрессии 8е17/9 и МБМ2, а так же её сплайс-изоформ, на восприимчивость раковых клеток к химиотерапевтическим препаратам, вызывающим генотоксический и метаболический стресс;

3. Идентифицировать спектр белков, ассоциированных как с Е3-убиквитин лигазой МБМ2, так и метилтрансферазой 8е17/9, используя протеомный подход;

4. Оценить влияние МБМ2 и 8е17/9 на экспрессию общих белков-интерактантов

3. Основные положения, выносимые на защиту

1. В клетках существует петля отрицательной обратной связи метилтрансферазы 8е17/9 и Е3 убиквитин-лигазы МБМ2

2. Экспрессия основной изоформы МБМ2, в отличие от сплайс-изоформ, повышает устойчивость клеток к генотоксическому химиопрепарату доксорубицину, в то же время повышает восприимчивость к другому генотоксическому препарату - цисплатину, а так же ингибитору одноуглеродного метаболизма метатрексату

3. Идентифицирован целый ряд интерактантов метилтрансферазы 8е17/9 и Е3-

убиквитин лигазы МБМ2, а так же её сплайс-изоформ. Многие из них

играют важное значение в онкогенезе и указывают на вовлечённость МБМ2

8

и 8е17/9 в различные клеточные процессы, в том числе в контроль одноуглеродного метаболизма.

4. МБМ2 и 8е17/9 вовлечены в контроль одноуглеродного метаболизма за счет влияния на экспрессию серингидроксиметилтрансферазы 8НМТ2 и МТНЕБ2 - ключевых ферментов цикла превращений фолата.

5. Научная новизна полученных результатов

В данной работе впервые показано существование в клетках потенциальной петли отрицательной обратной связи метилтрансферазы 8е17/9 и Е3 убиквитин-лигазы МБМ2. Так же продемонстрировано, что в отличие от полноразмерной изоформы МБМ2, экспрессия её основных сплайс-изоформ не модулирует устойчивость раковых клеток к важнейшим химиотерапевтическим препаратам. Идентифицирован целый ряд не известных ранее интерактантов метилтрансферазы 8е17/9 и Е3-убиквитин лигазы МБМ2, а так же её основных сплайс-изоформ, участвующих в транскрипции, трансляции, процессинге РНК, метоболизме, образовании межклеточных контактов и играющих важную роль в онкогенезе. Кроме того, продемонстрирована потенциальная вовлечённость 8е17/9 и МБМ2 в контроль одноуглеродного метаболизма за счёт влияния на экспрессию ключевых ферментов цикла превращений фолата - серингидроксиметилтрансферазы 8НМТ2 и метилентетрагидрофолатредуктазы МТНЕБ2. Показано, что МБМ2 является Е3 убиквитин-лигазой для серингидроксиметилтрансферазы 8НМТ2, приводя к её убиквитинилированию и последующей деградации.

6. Теоретическое и практическое значение работы

Во-первых, результаты данной работы имеют важное значение для фундаментального понимания механизмов МБМ2-опосредованного онкогенеза. Исследование структурно-функциональной роли взаимодействия МБМ2 и 8е17/9 с рядом идентифицированных интерактантов представляют значительный интерес для дальнейшего понимания их роли в процессах злокачественного клеточного роста и выходят далеко за рамки данной работы. Кроме того, данные МБМ2-опосредованной негативной регуляции 8НМТ2 актуальны в практическом плане в

контексте разработки и применения ингибиторов MDM2 и одноуглеродного метаболизма при разработке принципов сочетанной терапии.

7. Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на двух международных конференциях «FEBS» (Paris, 2014) и «Advances in Oncology» (Athenes, 2015), а так же на двух отечественных конференциях: «Конференции молодых ученых ИНЦ РАН (СПб, 2014)» и IV международной Школе по молекулярной генетике «Геномика и системная биология» (Звенигород, 2014).

8. Личный вклад автора

Подавляющее большинство экспериментов, вошедших в работу, были выполнены автором лично. Масс-спектрометрический анализ выполнен А. Ботрилом (Университет Лестера, Англия). Все данные, представленные в данной работе, обсуждались и публиковались совместно с соавторами и научным руководителем.

9. Список опубликованных по теме диссертации печатных работ

По результатам диссертации опубликовано 12 печатных работ, включая 4 статьи в Российских и зарубежных изданиях, рекомендованных ВАК:

Перечень опубликованных статей:

1. Lezina, L., Aksenova, V., Fedorova, O., Malikova, D., Shuvalov, O., Antonov, A. V., ... & Barlev, N. A. (2015). KMT Set7/9 affects genotoxic stress response via the Mdm2 axis. Oncotarget, 6(28), 25843-25855.

2. Vasileva, E. A., Shuvalov, O. U., Garabadgiu, A. V., Melino, G., & Barlev, N. A. (2015). Genome-editing tools for stem cell biology. Cell death & disease, 6(7), e1831.

3. Shuvalov, O., Petukhov, A., Daks, A., Fedorova, O., Ermakov, A., Melino, G., & A Barlev, N. (2015). Current Genome Editing Tools in Gene Therapy: New Approaches to Treat Cancer. Current gene therapy, 15(5), 511-529.

4. О.Ю. Шувалов, O.A. Федорова, A.B. Петухов, A.A. Дакс, E.A. Васильева, T.A. Григорьева, Г.С. Иванов, НА. Барлев. Негативные регуляторы онкосупрессора р53 в контексте направленной противоопухолевой терапии (2015). Цитология. 57 (12): 847-854

Перечень опубликованных тезисов:

1. Shuvalov O.Y., Fedorova O.A., Ivanov G.S., Lesina L., Barlev N.A. P53 specific E3 ubiquitin ligase MDM2 interacts with lysine methyltransferase Set7/9. FEBS JOURNAL, 281 (Suppl.1), p.589-590;

2. Olga Fedorova, Alexandra Daks, Alexey Petukhov, Oleg Shuvalov, G. Melino and Nikolai Barlev NR4A3 as a novel transcriptional target of p53 International scientific conference "Science of the Future"

3. Olga Fedorova, Alexandra Daks, Alexey Petukhov, Oleg Shuvalov, Nikolai A. Barlev. Transcriptional factors p53 and p63 regulate expression of orphan nuclear receptors NR4A. FEBS JOURNAL, 281 (Suppl.1), p.514-515;

4. О.Ю. Шувалов, Г.С. Иванов, О.А.Федорова, Н.А.Барлев. Изучение белок-белкового взаимодействия MDM2 и Set7/9. Цитология. Т. 56, No 5, с.390.

5. А.А.Дакс,О.Ю. Шувалов, Q.A. Федорова, Н.А.Барлев. Определение домена убиквитинлигазы PIRH2, взаимодействующего с MDM2. Цитология. Т. 56, N9, с. 365 - 366. 2014.

6. Петухов А.В., Шувалов О.Ю., Иванов Г.С., Федорова О.А., Барлев Н.А. V Конференция молодых ученых, ИНЦ РАН Санкт-Петербург, 18.03.2014 -20.03.2014. Изучение белок-белкового взаимодействия Е3-убиквитин лигаз COP1 и MDM2. Стендовый доклад.

7. Дакс А.А., Федорова О.А., Петухов А.А., Шувалов О.Ю., Барлев Н.А. VII Всероссийский симпозиум «Структура и функции клеточного ядра», ИНЦ РАН, Санкт-Петербург, 28.10.2014 - 30.10.2014. Идентификация белков, взаимодействующих с E3-y6HKBHTHHnnra3ofi Pirh2. Стендовый доклад.

8. О . Ю. Шувалов, А. В. Петухов, А. С. Ермаков, Н. А. Барлев. VII Всероссийский симпозиум «Структура и функции клеточного ядра», ИНЦ РАН, Санкт-Петербург, 28.10.2014 - 30.10.2014. Создание химерных белков на основе CRISPR/Cas9 для направленного подавления экспрессии генов. Стендовый доклад.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 РОЛЬ РЕГУЛЯТОРОВ АКТИВНОСТИ Р53 В ОНКОГЕНЕЗЕ 2.1.1 Р53-основной онкосупрессор человека

Исследования, проводимые в течение более 30 лет, наглядно демонстрируют, что р53 является основным онкосупрессором человека. Белок p53, являясь транскрипционным фактором, предохраняет организм от развития раковых клеток за счет активации экспрессии различных генов, продукты которых участвуют в регуляции клеточного цикла, репарации ДНК, инициации старения и апоптоза (Чумаков, 2007).

При этом р53 не является необходимым для развития, дифференцировки и поддержания жизнедеятельности клеток. Так, нокаутные по р53 мыши успешно развиваются и имеют нормальный фенотип (Donehower et al. 1996). Однако они редко живут дольше восьми месяцев, так как погибают от образуемых опухолей. Белок р53 выступает одновременно в роли своеобразного сенсора «пороговых величин» различных клеточных процессов и в то же время инициирует клеточный ответ, пропорциональный этим «величинам», таким образом детерминируя судьбу клетки при протекании в ней процессов, отклоняющихся от нормы (Чумаков, 2007).

В нормальных условиях р53 является короткоживущим белком, который претерпевает убиквитин-зависимый протеолиз в протеасомах (Pant et al., 2003). При различных формах стресса, когда повреждается ДНК, активируются онкогены, возникает гипоксия и т.д. белок р53 претерпевает ряд ковалентных модификаций, включая метилирование и ацетилирование (Morgunkova, Barlev, 2006; Ivanov et al., 2007), что ведет к стабилизации и накоплению р53 в ядре клетки за счет потери взаимодействия р53 со своими негативными регуляторами (Marouco et al. 2013).

По своей природе белок р53 является транскрипционным фактором. Различные стрессы, вызывающие ряд пост-трансляционных модификаций р53, приводят к его стабилизации и повышению транскрипционной активности (Bar-Or et al. 2000). Интересно, что, по-видимому, различные стрессы приводят к

различным модификациям р53 от которых зависит спектр активируемых р53 генов (Koumenis et al. 2001). Таким образом, под влиянием различных стрессовых сигналов в клетке формируются разные пулы р53, способные координировать внутриклеточные процессы в условиях специфичных стрессовых воздействий (Gu et al. 2012).

Основными мишенями р53 являются гены, кодирующие регуляторы клеточно цикла, белки-инициаторы апоптоза, участники репарации ДНК, регуляторы ангиогенеза, метаболизма и т.д. К регуляторам клеточного цикла относится p21(CIP1/WAF1) - ингибитор комплексов циклин-зависимых киназ CDK1 и CDK2 (Macleod et al. 1995), а так же GADD45 (Jin et al. 2002), приводящий к изменению внутриклеточной локализации циклина В1. Таким образом, за счёт активации экспрессии p21(CIP1/WAF1) и GADD45 стабилизация р53 вызывает арест клеточного цикла в G1/S и G2/M, соответственно.

Среди проапоптотических генов мишениями р53 являются участники как митохондриального (PUMA, BAX, NOXA), так и внешнего (APAF-1) путей апоптоза (Brady, 2009).

Недавно так же было показано, что, например, при генотоксическом стрессе р53 регулирует клеточный ответ не только за счет активации экспрессии кодирующих генов-мишеней, но и за счет некодирующих малых РНК (Barlev et al., 2010; Lezina et al., 2013).

Однако, помимо трансактиватора, p53 может являться и репрессором, ингибируя экспрессию других своих мишений. Помимо этого, имеются данные о непосредственной роли р53 в репрессии ДНК-повторов. Так, например, р53 ингибирует экспрессию фофатазы CDC25A (Rother et al. 2007), которая является активатором CDK2 и, соответственно, способствует продвижению клеток из G1 в S фазу. Кроме того, р53 репрессирует анти-апоптотический ген Bcl2 (Wu et al. 2001).

Показано, что р53 ингибирует экспрессию транспозонов и ретротраспозонов, чем предохраняет клетку от огромного количества «транскрипционного мусора» и сопутствующей геномной нестабильности, хотя конкретные механизмы данного процесса остаются пока неизученными (Leonova et al. 2013).

Помимо функционирования в качестве транскрипционного фактора р53 может играть роль онкосупрессора за счёт белок-белковых взаимодействий. Так,

моноубиквитинилированный р53 локализуется в митохондриях, где вступает во взаимодействие с анти- и проапоптотическими белками, в следствии чего происходит нарушение проницаемости мембраны митохондрий и выход цитохрома С в цитоплазму (Чумаков, 2007). Таким образом, р53 участвует в митохондриальном пути апоптоза независимо от своих свойств как трансактиватора и репрессора.

По-видимому, нормальное функционирование р53-зависимых сигнальных путей не совместимо с жизнедеятельностью раковых клеток. Поэтому в раковых опухолях либо происходит потеря участка генома, несущего ген ТА53, либо белок р53 инактивирован. Это достигается за счёт двух механизмов.

Во-первых, примерно в половине раковых опухолей ген, кодирующий р53, содержит мутации, которые приводят к инактивации соответствующего белка (Brady, 2009). Больше всего мутаций приходится на ДНК-связывающий домен р53. Как правило, единичной аминокислотной замены в данном участке р53 достаточно, чтобы белок претерпевал неправильный фолдинг и терял способность взаимодействовать с промоторами своих генов-мишений. При этом важно заметить, что р53 выполняет свои функции в составе гомотетрамера. Поэтому гетерозиготной мутации достаточно для потери транскрипционной активности р53, так как даже одна мутантная копия р53 в составе тетрамера полностью нарушает его функцию. Кроме того, известен ряд конкретных мутаций р53, наиболее часто имеющих место при самых различных опухолях. Такие мутации, помимо инактивации онкосупрессорных функций р53, придают ему онкогенные свойства (Oren et al. 2010). Опухоли, экспрессирующие мутантный р53, как правило, более агрессивны, менее дифференцированы и обладают большим метастазирующим потенциалом. Кроме того, такие опухоли более устойчивы к различным химиотерапевтическим препаратам (Mello et al. 2013).

Другим механизмом инактивации р53 в опухолевых клетках является сверхэкспрессия специфичной к нему Е3 убиквитин лигазы MDM2, о чём будет подробнее написано в следующем разделе.

Таким образом, биологическое значение р53 заключается в обеспечении стабильности генома и генетической однородности клеток в целостном организме (Чумаков, 2007).

2.1.2 Set7/9 позитивный регулятор р53

SET7/9 (Su(var)3-9, enhancer-of-zeste, trithorax (SET) domain-containing protein 7) был изначально идентифицирован как НЗК4 метилтрансфераза, ассоциированная с экспрессией генов. Однако дальнейшие исследования показали, что SET7/9 преимущественно является метилтрансферазой ряда негистоновых белков (Pradhan et al. 2009).

Одной из мишений SET7/9-3aBHCHMoro метилирования является транскрипционный фактор р53 (Chuikov et al. 2004). SET7/9 метилирует р53 в его карбокси-концевом участке по К372. Это приводит к стабилизации р53, накоплению его в ядре и повышению трансактивационной активности.

Интересно, что в карбокси-концевом участке р53 в непосредственной близости находится ещё один сайт - К370, метилируемый белком SMYD2 (SET/MYND Domain-2) (Huang et al. 2006). Это метилирование препятствует взаимодействию р53 с ДНК. При генотоксическом стрессе SET7/9-3aBHCHMoe метилирование по К372 ингибирует SMYD2-3aBHCHMoe метилирование по К370 (Huang et al. 2006). Таким образом, SET7/9-onocpe,ayeMoe метилирование р53 может повышать его транскрипционную активность за счёт влияния на другие пост-трансляционные модификации.

Кроме того, SET7/9-3aBHCHMoe метилирование р53 по К372 необходимо для взаимодействия р53 с ацетилтрансферазой TIP60 и последующего ацетилирования р53 (Kurash et al. 2008). TIP60-3aBHCHMoe ацетилирование p53 в аминоконцевом домене по К120 является решающей модификацией, инициирующей р53-засисимую экспрессию проапототических генов. Данная модификация не влияет на р53-зависимый арест клеточного цикла но является необходимой для р53-опосредуемого апоптоза (Tang et al. 2006). Это ещё один пример взаимовлияния двух ковалентных пост-трансляционных модификаций р53, в котором SET7/9-зависимое метилирование ведёт к дальнейшему ацетилированию р53 и, как следствие, способствует его проапототическим функциям.

Иным механизмом SET7/9-3aBHCHMoro позитивного влияния на активность р53 является SET7/9-0n0cpefl0BaHH0e метилирование гистоновой деацетилазы

SIRT1 (Liu et al. 2011). SIRT1 деацетилирует p53, снижая его активность при генотоксическом стрессе (Vaziri et al. 2001). SET7/9-3aBncnMoe метилирование SIRT1 приводит к ингибированию его взаимодействия с р53 и, таким образом, повышает активность р53 при повреждениях ДНК (Liu et al. 2011).

Таким образом, SET7/9 способствует позитивной регуляции р53 как напрямую за счёт метилирования, которое влияет на последующие посттрансляционные модификации р53, так и опосредованно через нарушение взаимодействия р53 со свои негативным регулятором.

2.1.3 Р53-независимые функции Set7/9

Помимо р53, метилтрансфераза SET7/9 метилирует ряд других негистоновых белков. Так, например, субстратами SET7/9 являются TAF10 (TATA box binding protein (TBP)-associated factor) (Couture et al. 2006), рецептор эстрогенов a (ERa) (Subramanian et al. 2008), активаторная субъединица транскрипционного фактора NF-kp (RelA) (Baltimore et al. 2009), PCAF (P300/CBP-associated factor) (Masatsugu et al. 2009), Yap (Oudhoff et al. 2013) и Suv39h1 (Wang et al. 2013). При этом в большинстве случаев функциональные значения данных взаимодействий во многом не изучены.

Известно, что посредством метилирования SET7/9 влияет на стабильность ряда этих белков. Так, SET7/9-3aBncnMoe метилирование ведёт к деградации DNMT1 и RelA, но при этом повышает стабильность рецептора эстрогенов ERa (Pradhan et al. 2009).

Ещё одним субстратом SET7/9 является транскрипционный фактор E2F1, важный для перехода клеток из G1 в S фазу. В то же время E2F1 позитивно контролирует экспрессию проапоптотического гомолога р53 - р73. SET7/9 метилирует E2F1 по K185, что ингибирует его ацетилирование, но способствует дальнейшему убиквитинилированию E2F1 и ведёт к его протеасомной деградации (Kontaki et al. 2010). В данной работе авторами показано, что сверхэкспрессия Set7/9 понижала выживаемость клеток при обработке генотоксическим агентом доксорубицином за счёт негативного влияния SET7/9 на E2F1, в результате чего не наблюдалось увеличение экспрессии р73. Однако при нокдауне SET7/9 повышался процент устойчивых к доксорубицину клеток, при этом количество E2F1 и

экспрессия р73 оставались на уровне контроля (Kontaki et al. 2010). Таким образом, в данной работе было показано, что SET7/9 является негативным регулятором Е2Р1-опосредованной клеточной гибели при генотоксическом стрессе.

В другой работе (Lezina et al. 2014) было показано, что при генотоксическом стрессе SET7/9 является ко-активатором транскрипционного фактора E2F1 и по-разному модулирует экспрессию E2F1-зависимых генов. В то время как SET7/9 способствует клеточной пролиферации за счёт E2F1-зависимого повышения экспрессии гена CCNE1, кодирующего циклин Е, SET7/9 подавляет E2F1-зависимую экспрессию TP73, кодирующего р73.

Таким образом, помимо влияния на стабильность транскрипционного фактора E2F1, SET7/9 является его ко-активатором и по-разному регулирует экспрессию E2F1-3aBHCHMbix пролиферативных и проапоптотических генов.

Недавно было показано участие SET7/9 в регуляции пролиферации раковых клеток за счёт влияния на стабильность Р-катенина (Shen et al. 2015). Р-катенин является регулятором клеточной адгезии, а так же контролирует транскрипцию ряда генов, в том числе онкогена с-Мус (Clevers et al. 2012). SET7/9-3aBHCHMoe метилирование Р-катенина по К180 приводит к его узнаванию киназой GSK-3b и последующей быстрой деградации (Shen et al. 2015). В свою очередь, подавление экспрессии SET7/9 приводило к повышению стабильности Р-катенина и усилению клеточной пролиферации.

2.1.4 MDM2 - основной негативный регулятор р53

Продукт гена MDM2 (murine double minute) был впервые идентифицирован как белок, амплифицированный в спонтанно трансформированной мышиной клеточной линии BALB/c (3T3-DM) (Fakharzadeh et al., 1991). Вскоре после идентификации MDM2 в качестве протоонкогена его трансформирующую способность связали с негативным влиянием на онкосупрессор р53. Так, мыши, нокаутные по MDM2, погибали в эмбриогенезе ещё до стадии имплантации. Однако этот эффект полностью нивелировался при создании двойных нокаутов (MDM2-/p53-), что свидетельствовало об активации р53 как основной причины эмбриональной летальности нокаутных по MDM2 мышей (Jones et al., 1995).

В настоящее время известно, что белок MDM2 является основной р53-специфичной Е3-лигазой и осуществляет негативную регуляцию р53 за счет нескольких механизмов. Во-первых, MDM2 является Е3-убиквитинлигазой, специфически модифицирующей р53, что способствует его деградации за счет 26S протеасомного комплекса (Honda et al. 2000). Во-вторых, MDM2 связывается с амино-концевым участком р53 и блокирует его трансактивационную активность (Bond et al., 2005). Кроме того, связываясь с р53, MDM2 блокирует сайты взаимодействия р53 с его различными транскрипционными ко-активаторами (Wadgaonkar, Collins, 1999).

Таким образом, при нормальных условиях (Рис. 1А) MDM2 ассоциирован с р53, вызывая его убиквитинилирование и протеасомную деградацию. Этот конститутивный механизм поддерживает низкий уровень р53 и предохраняет клетки от р53-зависимой гибели. Однако, при различных стрессах, таких как повреждения ДНК, гипоксия, активация онкогенов, метаболический и окислительный стрессы, инициируются каскады сигнальных реакций, которые в итоге приводят к изменению пост-трансляционных модификаций как р53, так и MDM2 (Bradley et al. 2009). Это приводит к высвобождению р53, его стабилизации и повышению активности как транскрипционного фактора.

В данном контексте лучше всего изучен генотоксический стресс (Рис. 1Б). Так, например, при действии ионизирующей радиации или жёсткого УФ-облучения образуются двуцепочечные ДНК-разрывы и сшивки ДНК («тиминовые димеры»), соответственно. В ответ на это инициируются каскады сигнальных реакций, в результате чего к местам повреждения ДНК привлекаются и активируются эффекторные киназы: ATM (ataxia telangiectasia mutated) к участкам двуцепочечных ДНК-разрывов и ATR (ataxia telangiectasia and Rad3-related protein) к местам УФ-индуцируемых повреждений (Saito et al. 2002). Эти киназы фосфорилируют ряд мишений, что в итоге приводит к аресту клеточного цикла. В числе этих мишений есть сам р53, фосфорилируемый по Ser15 (Takai et al. 2002). Кроме того, ATM фосфорилирует киназу Chk2 (Checkpoint kinase 2), a ATR -киназу Chk1 (Checkpoint kinase 1). Как Chk2, так и Chk1 фосфорилируют p53 no Ser20 (Xu et al. 2003). Эти же киназы фосфорилируют и MDM2. В результате описанные пост-трансляционные модификации приводят к диссоциации комплекса

MDM2 и р53, стабилизации р53 и, таким образом, активации его как транскрипционного фактора (Pommier et al. 2006). Это приводит к р53-опосредованной активации экспрессии ряда генов, чьи белковые продукты ведут к остановке клеточного цикла (р21, GADD45, 14-3-38) и репарации ДНК (XPE, XPC, P53RP2) и. т.д. В случае, если повреждения ДНК слишком масштабны и не могут быть репарированы в процессе остановки клеточного цикла, прооисходит р53-опосредуемая активация проапопточических мишений (PUMA, NOXA, BAX и т.д.) (Amaral et al. 2010)

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шувалов Олег Юрьевич, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Чиссов В. И., Давыдов М. И. Онкология. Национальное руководство //М. Геотар-Медия - 2014.-576 с.

2. Чумаков П. М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме //Успехи биологической химии. - 2007. - Т. 47. - №. 1. - С. 3-52.

3. AbuHammad S., Zihlif M. Gene expression alterations in doxorubicin resistant MCF7 breast cancer cell line //Genomics. - 2013. - T. 101. - №. 4. - C. 213-220.

4. Agarwala S. S., Kirkwood J. M. Temozolomide, a novel alkylating agent with activity in the central nervous system, may improve the treatment of advanced metastatic melanoma //The oncologist. - 2000. - T. 5. - №. 2. - C. 144-151.

5. Alt, J. R., Bouska, A., Fernandez, M. R., Cerny, R. L., Xiao, H., & Eischen, C. M. Mdm2 binds to Nbs1 at sites of DNA damage and regulates double strand break repair //Journal of Biological Chemistry. - 2005. - T. 280. - №. 19. - C. 1877118781.

6. Andrews P. A., Jones J. A. Characterization of binding proteins from ovarian carcinoma and kidney tubule cells that are specific for cisplatin modified DNA //Cancer communications. - 1991. - T. 3. - №. 3. - C. 93-102.

7. Antonov, A., Agostini, M., Morello, M., Minieri, M., Melino, G., & Amelio, I. Bioinformatics analysis of the serine and glycine pathway in cancer cells //Oncotarget. - 2014. - T. 5. - №. 22. - C. 11004-11013.

8. Amaral, J. D., Xavier, J. M., Steer, C. J., & Rodrigues, C. M. The role of p53 in apoptosis //Discovery medicine. - 2010. - T. 9. - №. 45. - C. 145-152.

9. Amelio, I., Cutruzzola, F., Antonov, A., Agostini, M., & Melino, G. Serine and glycine metabolism in cancer //Trends in biochemical sciences. - 2014. - T. 39. -№. 4. - C. 191-198.

10. Arias-Romero L. E., Chernoff J. Targeting Cdc42 in cancer //Expert opinion on therapeutic targets. - 2013. - T. 17. - №. 11. - C. 1263-1273.

11. Barakat K., Gajewski M., A Tuszynski J. DNA repair inhibitors: the next major step to improve cancer therapy //Current topics in medicinal chemistry. - 2012. -T. 12. - №. 12. - C. 1376-1390.

12. Bartel F., Taubert H., Harris L. C. Alternative and aberrant splicing of MDM2 mRNA in human cancer //Cancer cell. - 2002. - T. 2. - №. 1. - C. 9-15.

13. Barredo, J. C., Synold, T. W., Laver, J., Relling, M. V., Pui, C. H., Priest, D. G., & Evans, W. E. Differences in constitutive and post-methotrexate folylpolyglutamate synthetase activity in B-lineage and T-lineage leukemia //Blood. - 1994. - T. 84. -№. 2. - C. 564-569.

14. Bar-Or, R. L., Maya, R., Segel, L. A., Alon, U., Levine, A. J., & Oren, M. Generation of oscillations by the p53-Mdm2 feedback loop: a theoretical and experimental study //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2000. -T. 97. - №. 21. - C. 11250-11255.

15. Basu A., Krishnamurthy S. Cellular responses to cisplatin-induced DNA damage //Journal of nucleic acids. - 2010. - T. 2010.

16. Belkov, V. M., Krynetski, E. Y., Schuetz, J. D., Yanishevski, Y., Masson, E., Mathew, S., ... & Evans, W. E. Reduced folate carrier expression in acute lymphoblastic leukemia: a mechanism for ploidy but not lineage differences in methotrexate accumulation //Blood. - 1999. - T. 93. - №. 5. - C. 1643-1650.

17. Beaudin, A. E., Abarinov, E. V., Malysheva, O., Perry, C. A., Caudill, M., & Stover, P. J.Dietary folate, but not choline, modifies neural tube defect risk in Shmt1 knockout mice //The American journal of clinical nutrition. - 2012. - T. 95.

- №. 1. - C. 109-114.

18. Bond G. L., Hu W., Levine A. J. MDM2 is a central node in the p53 pathway: 12 years and counting //Current cancer drug targets. - 2005. - T. 5. - №. 1. - C. 3-8.

19. Boersma, B. J., Howe, T. M., Goodman, J. E., Yfantis, H. G., Lee, D. H., Chanock, S. J., & Ambs, S. Association of breast cancer outcome with status of p53 and MDM2 SNP309 //Journal of the National Cancer Institute. - 2006. - T. 98. - №. 13. - C. 911-919.

20. Bond, G. L., Hu, W., Bond, E. E., Robins, H., Lutzker, S. G., Arva, N. C., ... & Onel, K. A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans //Cell.

- 2004. - T. 119. - №. 5. - C. 591-602.

21. Bond, G. L., Hirshfield, K. M., Kirchhoff, T., Alexe, G., Bond, E. E., Robins, H., ... & Toppmeyer, D. MDM2 SNP309 accelerates tumor formation in a gender-specific and hormone-dependent manner //Cancer research. - 2006. - T. 66. - №. 10. - C. 5104-5110.

22.Bouska A., Eischen C. M. Murine double minute 2: p53-independent roads lead to genome instability or death //Trends in biochemical sciences. - 2009. - T. 34. -№. 6. - C. 279-286.

23. Bouska, A., Lushnikova, T., Plaza, S., & Eischen, C. M. Mdm2 promotes genetic instability and transformation independent of p53 //Molecular and cellular biology.

- 2008. - T. 28. - №. 15. - C. 4862-4874.

24. Brady C. A., Attardi L. D. p53 at a glance //Journal of cell science. - 2010. - T. 123. - №. 15. - C. 2527-2532.

25. Barlev, N. A., Sayan, B. S., Candi, E., & Okorokov, A. L. (2010). The microRNA and p53 families join forces against cancer. Cell death and differentiation, 17(2), 373.

26. Brown DR, Thomas CA, Deb SP The human oncoprotein MDM2 arrests the cell cycle: elimination of its cell-cycle-inhibitory function induces tumorigenesis // EMBO J.. - 1998. - №17. - C. 2513-25.

27. Cantor J. R., Sabatini D. M. Cancer cell metabolism: one hallmark, many faces //Cancer discovery. - 2012. - T. 2. - №. 10. - C. 881-898.

28. Cocker, H. A., Hobbs, S. M., Tiffin, N., Pritchard-Jones, K., Pinkerton, C. R., & Kelland, L. R.High levels of the MDM2 oncogene in paediatric rhabdomyosarcoma cell lines may confer multidrug resistance //British journal of cancer. - 2001. - T. 85. - №. 11. - C. 1746.

29. Chan E. S. L., Cronstein B. N. Molecular action of methotrexate in inflammatory diseases //Arthritis research. - 2002. - T. 4. - №. 4. - C. 266-273.

30. Cheng T. H., Cohen S. N. Human MDM2 isoforms translated differentially on constitutive versus p53-regulated transcripts have distinct functions in the p53/MDM2 and TSG101/MDM2 feedback control loops //Molecular and cellular biology. - 2007. - T. 27. - №. 1. - C. 111-119.

31. Davidovich, P., Aksenova, V., Petrova, V., Tentler, D., Orlova, D., Smirnov, S., ... & Barlev, N. Discovery of Novel Isatin-Based p53 Inducers //ACS medicinal chemistry letters. - 2015. - T. 6. - №. 8. - C. 856-860.

32. Deb S. P. Cell Cycle Regulatory Functions of the Human Oncoprotein //Molecular Cancer Research. - 2003. - T. 1. - №. 14. - C. 1009-1016.

33. Dong, X., Deng, Q., Nie, X., Zhang, M., Jia, W., Chen, C., ... & Xu, R. Downregulation of HTATIP2 expression is associated with promoter methylation and poor prognosis in glioma //Experimental and molecular pathology. - 2015. -T. 98. - №. 2. - C. 192-199.

34. Du, S., Guan, Z., Hao, L., Song, Y., Wang, L., Gong, L., ... & Shao, S. Fructose-bisphosphate aldolase a is a potential metastasis-associated marker of lung squamous cell carcinoma and promotes lung cell tumorigenesis and migration //PloS one. - 2014. - T. 9. - №. 1. - C. e85804.

35. Couture, J. F., Collazo, E., Hauk, G., & Trievel, R. C. Structural basis for the methylation site specificity of SET7/9 //Nature structural & molecular biology. -2006. - T. 13. - №. 2. - C. 140-146.

36. Clevers H., Nusse R. Wnt/p-catenin signaling and disease //Cell. - 2012. - T. 149. - №. 6. - C. 1192-1205.

37. Chuikov S. et al. Regulation of p53 activity through lysine methylation //Nature. -2004. - T. 432. - №. 7015. - C. 353-360.

38. Donehower L. A. The p53-deficient mouse: a model for basic and applied cancer studies //Seminars in cancer biology. - Academic Press, 1996. - T. 7. - №. 5. - C. 269-278.

39. Ea C. K., Baltimore D. Regulation of NF-kB activity through lysine monomethylation of p65 //Proceedings of the National Academy of Sciences. -2009. - T. 106. - №. 45. - C. 18972-18977.

40. Fakharzadeh S. S., Trusko S. P., George D. L. Tumorigenic potential associated with enhanced expression of a gene that is amplified in a mouse tumor cell line //The EMBO journal. - 1991. - T. 10. - №. 6. - C. 1565.

41. Fang, S., Krahe, R., Lozano, G., Han, Y., Chen, W., Post, S. M., ... & Amos, C. I. Effects of MDM2, MDM4 and TP53 codon 72 polymorphisms on cancer risk in a cohort study of carriers of TP53 germline mutations //PLoS One. - 2010. - T. 5. -№. 5. - C. e10813.

42. Fuchs, S. Y., Adler, V., Buschmann, T., Wu, X., & Ronai, Z. E. Mdm2 association with p53 targets its ubiquitination //Oncogene. - 1998. - T. 17. - №. 19.

43. Frum, R., Ramamoorthy, M., Mohanraj, L., Deb, S., & Deb, S. P. MDM2 controls the timely expression of cyclin A to regulate the cell cycle //Molecular Cancer Research. - 2009. - T. 7. - №. 8. - C. 1253-1267.

44. Fu, W., Ma, Q., Chen, L., Li, P., Zhang, M., Ramamoorthy, S., ... & Shen, Z. MDM2 acts downstream of p53 as an E3 ligase to promote FOXO ubiquitination and degradation //Journal of Biological Chemistry. - 2009. - T. 284. - №. 21. - C. 13987-14000.

45. Galli, F., Rossi, M., D'Alessandra, Y., De Simone, M., Lopardo, T., Haupt, Y., ... & La Mantia, G. MDM2 and Fbw7 cooperate to induce p63 protein degradation following DNA damage and cell differentiation //Journal of cell science. - 2010. -T. 123. - №. 14. - C. 2423-2433.

46. Giglio, S. I. M. O. N. A., Mancini, F., Pellegrino, M., Di Conza, G., Puxeddu, E., Sacchi, A., ... & Moretti, F. A Regulation of MDM4 (MDMX) function by p76MDM2: a new facet in the control of p53 activity //Oncogene. - 2010. - T. 29. - №. 44. - C. 5935-5945.

47. Gewirtz D. A. A critical evaluation of the mechanisms of action proposed for the antitumor effects of the anthracycline antibiotics adriamycin and daunorubicin //Biochemical pharmacology. - 1999. - T. 57. - №. 7. - C. 727-741.

48. Gu B., Zhu W. G. Surf the post-translational modification network of p53 regulation //Int J Biol Sci. - 2012. - T. 8. - №. 5. - C. 672-684.

49. Gu L., Findley H. W., Zhou M. MDM2 induces NF-kB/p65 expression transcriptionally through Sp1-binding sites: a novel, p53-independent role of MDM2 in doxorubicin resistance in acute lymphoblastic leukemia //Blood. -2002. - T. 99. - №. 9. - C. 3367-3375.

50. Hanahan D., Weinberg R. A. Hallmarks of cancer: the next generation //cell. -2011. - T. 144. - №. 5. - C. 646-674.

51. He, K., Guo, X., Liu, Y., Li, J., Hu, Y., Wang, D., & Song, J. TUFM downregulation induces epithelial-mesenchymal transition and invasion in lung cancer cells via a mechanism involving AMPK-GSK3ß signaling //Cellular and Molecular Life Sciences. - 2016. - C. 1-17.

52. Helleday, T., Petermann, E., Lundin, C., Hodgson, B., & Sharma, R. A. DNA repair pathways as targets for cancer therapy //Nature Reviews Cancer. - 2008. -T. 8. - №. 3. - C. 193-204.

53. Hedstrom L. IMP dehydrogenase: structure, mechanism, and inhibition //Chemical reviews. - 2009. - T. 109. - №. 7. - C. 2903-2928.

54. Hooijberg, J. H., De Vries, N. A., Kaspers, G. J. L., Pieters, R., Jansen, G., & Peters, G. J. Multidrug resistance proteins and folate supplementation: therapeutic implications for antifolates and other classes of drugs in cancer treatment //Cancer chemotherapy and pharmacology. - 2006. - T. 58. - №. 1. - C. 1-12.

55. Ho, S. N., Hunt, H. D., Horton, R. M., Pullen, J. K., & Pease, L. R. Site-directed mutagenesis by overlap extension using the polymerase chain reaction //Gene. -1989. - T. 77. - №. 1. - C. 51-59.

56. Honda R., Yasuda H. Activity of MDM2, a ubiquitin ligase, toward p53 or itself is dependent on the RING finger domain of the ligase //Oncogene. - 2000. - T. 19. -№. 11. - C. 1473-1476.

57. Huang, J., Perez-Burgos, L., Placek, B. J., Sengupta, R., Richter, M., Dorsey, J. A., ... & Berger, S. L. Repression of p53 activity by Smyd2-mediated methylation //Nature. - 2006. - T. 444. - №. 7119. - C. 629-632.

58. Jacob, A. G., O'Brien, D., Singh, R. K., Comiskey, D. F., Littleton, R. M., Mohammad, F., ... & Anderson, J. R. Stress-induced isoforms of MDM2 and MDM4 correlate with high-grade disease and an altered splicing network in pediatric rhabdomyosarcoma //Neoplasia. - 2013. - T. 15. - №. 9. - C. 1049-IN8.

59. Jain, M., Nilsson, R., Sharma, S., Madhusudhan, N., Kitami, T., Souza, A. L., ... & Mootha, V. K. Metabolite profiling identifies a key role for glycine in rapid cancer cell proliferation //Science. - 2012. - T. 336. - №. 6084. - C. 1040-1044.

60. Jin S. G., Guo C., Pfeifer G. P. GADD45A does not promote DNA demethylation //PLoS Genet. - 2008. - T. 4. - №. 3. - C. e1000013.

61. Jones, S. N., Roe, A. E., Donehower, L. A., & Bradley, A. Rescue of embryonic lethality in Mdm2-deficient mice by absence of p53 //Nature. - 1995. - T. 378. -№. 6553. - C. 206-208.

62. Johnson M., Sharma M., Henderson B. R. IQGAP1 regulation and roles in cancer //Cellular signalling. - 2009. - T. 21. - №. 10. - C. 1471-1478.

63. Johnson J. L., Erickson J. W., Cerione R. A. New insights into how the Rho guanine nucleotide dissociation inhibitor regulates the interaction of Cdc42 with membranes //Journal of Biological Chemistry. - 2009. - T. 284. - №. 35. - C. 23860-23871.

64. Kontaki, H., & Talianidis, I. (2010). Lysine methylation regulates E2F1-induced cell death. Molecular cell, 39(1), 152-160.

65. Korzeniewski N., Hohenfellner M., Duensing S. CAND1 promotes PLK4-mediated centriole overduplication and is frequently disrupted in prostate cancer //Neoplasia. - 2012. - T. 14. - №. 9. - C. 799-806.

66. Kondo, N., Takahashi, A., Ono, K., & Ohnishi, T. DNA damage induced by alkylating agents and repair pathways //Journal of nucleic acids. - 2010. - T. 2010.

67. Koumenis, C., Alarcon, R., Hammond, E., Sutphin, P., Hoffman, W., Murphy, M., ... & Giaccia, A. Regulation of p53 by hypoxia: dissociation of transcriptional repression and apoptosis from p53-dependent transactivation //Molecular and Cellular Biology. - 2001. - T. 21. - №. 4. - C. 1297-1310.

68. Kremer J. M. Toward a better understanding of methotrexate //Arthritis & Rheumatism. - 2004. - T. 50. - №. 5. - C. 1370-1382.

69. Kubo, N., Okoshi, R., Nakashima, K., Shimozato, O., Nakagawara, A., & Ozaki, T. MDM2 promotes the proteasomal degradation of p73 through the interaction with Itch in HeLa cells //Biochemical and biophysical research communications. -2010. - T. 403. - №. 3. - C. 405-411.

70. Kuroda, S., Fukata, M., Nakagawa, M., Fujii, K., Nakamura, T., Ookubo, T., ... & Shoji, I. Role of IQGAP1, a target of the small GTPases Cdc42 and Rac1, in regulation of E-cadherin-mediated cell-cell adhesion //Science. - 1998. - T. 281. -№. 5378. - C. 832-835.

71. Kussie, P. H., Gorina, S., Marechal, V., Elenbaas, B., Moreau, J., Levine, A. J., & Pavletich, N. P. Structure of the MDM2 oncoprotein bound to the p53 tumor suppressor transactivation domain //Science. - 1996. - T. 274. - №. 5289. - C. 948-953.

72. Kurash, J. K., Lei, H., Shen, Q., Marston, W. L., Granda, B. W., Fan, H., ... & Gaudet, F. Methylation of p53 by Set7/9 mediates p53 acetylation and activity in vivo //Molecular cell. - 2008. - T. 29. - №. 3. - C. 392-400.

73. Labuschagne, C. F., Van Den Broek, N. J., Mackay, G. M., Vousden, K. H., & Maddocks, O. D.Serine, but not glycine, supports one-carbon metabolism and proliferation of cancer cells //Cell reports. - 2014. - T. 7. - №. 4. - C. 1248-1258.

74. Leonova, K. I., Brodsky, L., Lipchick, B., Pal, M., Novototskaya, L., Chenchik, A. A., ... & Gudkov, A. V. p53 cooperates with DNA methylation and a suicidal interferon response to maintain epigenetic silencing of repeats and noncoding RNAs //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2013. - T. 110. - №. 1. - C. E89-E98.

75. Lee, G. Y., Haverty, P. M., Li, L., Kljavin, N. M., Bourgon, R., Lee, J., ... & Davis, D.Comparative oncogenomics identifies PSMB4 and SHMT2 as potential cancer driver genes //Cancer research. - 2014. - T. 74. - №. 11. - C. 3114-3126.

76. Lezina L. et al. KMTase Set7/9 is a critical regulator of E2F1 activity upon genotoxic stress //Cell Death & Differentiation. - 2014. - T. 21. - №. 12. - C. 1889-1899.

77. Lezina, L., Purmessur, N., Antonov, A. V., Ivanova, T., Karpova, E., Krishan, K., ... & Melino, G.miR-16 and miR-26a target checkpoint kinases Wee1 and Chk1 in response to p53 activation by genotoxic stress //Cell death & disease. - 2013. - T. 4. - №. 12. - C. e953.

78. Li, H. X., Meng, Q. P., Liu, W., Li, Y. G., Zhang, H. M., Bao, F. C., ... & Li, H. J. IMPDH2 mediate radioresistance and chemoresistance in osteosarcoma cells //Eur Rev Med Pharmacol Sci. - 2014. - T. 18. - №. 20. - C. 3038-3044.

79. Li, J., Yang, Z. L., Ren, X., Zou, Q., Yuan, Y., Liang, L., ... & Chen, S. ILK and PRDX1 are prognostic markers in squamous cell/adenosquamous carcinomas and adenocarcinoma of gallbladder //Tumor Biology. - 2013. - T. 34. - №. 1. - C. 359-368.

80. Liang, H., Atkins, H., Abdel-Fattah, R., Jones, S. N., & Lunec, J. Genomic organisation of the human MDM2 oncogene and relationship to its alternatively spliced mRNAs //Gene. - 2004. - T. 338. - №. 2. - C. 217-223.

81. Lind, H., Zienolddiny, S., Ekstrom, P. O., Skaug, V., & Haugen, A. Association of a functional polymorphism in the promoter of the MDM2 gene with risk of

nonsmall cell lung cancer //International journal of cancer. - 2006. - T. 119. - №. 3. - C. 718-721.

82. Lim S. O., Kim H., Jung G. p53 inhibits tumor cell invasion via the degradation of snail protein in hepatocellular carcinoma //FEBS letters. - 2010. - T. 584. - №. 11.

- C. 2231-2236.

83. Liu, X., Wang, D., Zhao, Y., Tu, B., Zheng, Z., Wang, L., ... & Zhu, W. G.Methyltransferase Set7/9 regulates p53 activity by interacting with Sirtuin 1 (SIRT1) //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2011. - T. 108. -№. 5. - C. 1925-1930.

84. Lo, P. H. Y., Ko, J. M. Y., Yu, Z. Y., Law, S., Wang, L. D., Li, J. L., ... & Lung, M. L. The LIM domain protein, CRIP2, promotes apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma //Cancer letters. - 2012. - T. 316. - №. 1. - C. 39-45.

85. Locasale J. W. Serine, glycine and one-carbon units: cancer metabolism in full circle //Nature Reviews Cancer. - 2013. - T. 13. - №. 8. - C. 572-583.

86. Locasale, J. W., Grassian, A. R., Melman, T., Lyssiotis, C. A., Mattaini, K. R., Bass, A. J., ... & Sasaki, A. T. Phosphoglycerate dehydrogenase diverts glycolytic flux and contributes to oncogenesis //Nature genetics. - 2011. - T. 43. - №. 9. - C. 869-874.

87. Longley D. B., Harkin D. P., Johnston P. G. 5-fluorouracil: mechanisms of action and clinical strategies //Nature Reviews Cancer. - 2003. - T. 3. - №. 5. - C. 330338.

88. Lundgren, K., de Oca Luna, R. M., McNeill, Y. B., Emerick, E. P., Spencer, B., Barfield, C. R., ... & Finlay, C. A. Targeted expression of MDM2 uncouples S phase from mitosis and inhibits mammary gland development independent of p53 //Genes & development. - 1997. - T. 11. - №. 6. - C. 714-725.

89. Luzhna, L., Golubov, A., Ilnytskyy, S., Chekhun, V. F., & Kovalchuk, O. Molecular mechanisms of radiation resistance in doxorubicin-resistant breast adenocarcinoma cells //International journal of Oncology. - 2013. - T. 42. - №. 5.

- C. 1692-1708.

90. Mathews C. K. Deoxyribonucleotide metabolism, mutagenesis and cancer //Nature Reviews Cancer. - 2015. - T. 15. - №. 9. - C. 528-539.

91. Marouco, D., Garabadgiu, A. V., Melino, G., & Barlev, N. A. Lysine-specific modifications of p53: a matter of life and death? //Oncotarget. - 2013. - T. 4. - №. 10. - C. 1556.

92. Macleod, K. F., Sherry, N., Hannon, G., Beach, D., Tokino, T., Kinzler, K., ... & Jacks, T. (1995). p53-dependent and independent expression of p21 during cell growth, differentiation, and DNA damage. Genes & development, 9(8), 935-944.

93. Manfredi J. J. The Mdm2-p53 relationship evolves: Mdm2 swings both ways as an oncogene and a tumor suppressor //Genes & development. - 2010. - T. 24. -№. 15. - C. 1580-1589.

94. Masatsugu T., Yamamoto K. Multiple lysine methylation of PCAF by Set9 methyltransferase //Biochemical and biophysical research communications. -2009. - T. 381. - №. 1. - C. 22-26.

95. Mello S. S., Attardi L. D. Not all p53 gain-of-function mutants are created equal //Cell Death Differ. - 2013. - T. 20. - №. 7. - C. 855-857.

96. Mohn, C., Hacker, H. G., Hilger, R. A., Guetschow, M., & Jaehde, U. Defining the role of MRP-mediated efflux and glutathione in detoxification of oxaliplatin //Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2013. - T. 68. -№. 7. - C. 622-627.

97. Momand, J., Jung, D., Wilczynski, S., & Niland, J. The MDM2 gene amplification database //Nucleic acids research. - 1998. - T. 26. - №. 15. - C. 3453-3459.

98. Nicholson, J., Scherl, A., Way, L., Blackburn, E. A., Walkinshaw, M. D., Ball, K. L., & Hupp, T. R. A systems wide mass spectrometric based linear motif screen to identify dominant in-vivo interacting proteins for the ubiquitin ligase MDM2 //Cellular signalling. - 2014. - T. 26. - №. 6. - C. 1243-1257.

99. Nilsson, R., Jain, M., Madhusudhan, N., Sheppard, N. G., Strittmatter, L., Kampf, C., ... & Mootha, V. K. . Metabolic enzyme expression highlights a key role for MTHFD2 and the mitochondrial folate pathway in cancer //Nature communications. - 2014. - T. 5.

100. Nikiforov, M. A., Chandriani, S., O'Connell, B., Petrenko, O., Kotenko, I., Beavis, A., ... & Cole, M. D.A functional screen for Myc-responsive genes reveals serine hydroxymethyltransferase, a major source of the one-carbon unit for cell metabolism //Molecular and cellular biology. - 2002. - T. 22. - №. 16. - C. 57935800.

101. Noritake, J., Watanabe, T., Sato, K., Wang, S., & Kaibuchi, K. IQGAP1: a key regulator of adhesion and migration //Journal of cell science. - 2005. - T. 118.

- №. 10. - C. 2085-2092.

102. Ohnstad, H. O., Paulsen, E. B., Noordhuis, P., Berg, M., Lothe, R. A., Vassilev, L. T., & Myklebost, O. MDM2 antagonist Nutlin-3a potentiates antitumour activity of cytotoxic drugs in sarcoma cell lines //BMC cancer. - 2011.

- T. 11. - №. 1. - C. 1.

103. Onel K., Cordon-Cardo C. MDM2 and prognosis //Molecular Cancer Research. - 2004. - T. 2. - №. 1. - C. 1-8.

104. Okoro D. R., Rosso M., Bargonetti J. Splicing up mdm2 for cancer proteome diversity //Genes & cancer. - 2012. - T. 3. - №. 3-4. - C. 311-319.

105. Oren M., Rotter V. Mutant p53 gain-of-function in cancer //Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2010. - T. 2. - №. 2. - C. a001107.

106. Oudhoff, M. J., Freeman, S. A., Couzens, A. L., Antignano, F., Kuznetsova, E., Min, P. H., ... & Arrowsmith, C. H. Control of the hippo pathway by Set7-dependent methylation of Yap //Developmental cell. - 2013. - T. 26. - №. 2. - C. 188-194.

107. Paiardini, A., Fiascarelli, A., Rinaldo, S., Daidone, F., Giardina, G., Koes, D. R., ... & McDermott, L. A. Screening and in vitro testing of antifolate inhibitors of human cytosolic serine hydroxymethyltransferase //ChemMedChem. - 2015. -T. 10. - №. 3. - C. 490-497.

108. Pant V., Lozano G. Limiting the power of p53 through the ubiquitin proteasome pathway //Genes & development. - 2014. - T. 28. - №. 16. - C. 17391751.

109. Perry, M. E., Mendrysa, S. M., Saucedo, L. J., Tannous, P., & Holubar, M. p76MDM2 Inhibits the Ability of p90MDM2to Destabilize p53 //Journal of Biological Chemistry. - 2000. - T. 275. - №. 8. - C. 5733-5738.

110. Peirce S. K., Findley H. W. The MDM2 antagonist nutlin-3 sensitizes p53-null neuroblastoma cells to doxorubicin via E2F1 and TAp73 //International journal of oncology. - 2009. - T. 34. - №. 5. - C. 1395-1402.

111. Pradhan, S., Chin, H. G., Esteve, P. O., & Jacobsen, S. E. SET7/9 mediated methylation of non-histone proteins in mammalian cells //Epigenetics. - 2009. - T. 4. - №. 6. - C. 383-387.

112. Pommier, Y., Weinstein, J. N., Aladjem, M. I., & Kohn, K. W. Chk2 molecular interaction map and rationale for Chk2 inhibitors //Clinical Cancer Research. - 2006. - T. 12. - №. 9. - C. 2657-2661.

113. Possemato, R., Marks, K. M., Shaul, Y. D., Pacold, M. E., Kim, D., Birsoy, K., ... & Chen, W. W.Functional genomics reveal that the serine synthesis pathway is essential in breast cancer //Nature. - 2011. - T. 476. - №. 7360. - C. 346-350.

114. Pollari, S., Käkönen, S. M., Edgren, H., Wolf, M., Kohonen, P., Sara, H., ... & Kallioniemi, O. Enhanced serine production by bone metastatic breast cancer cells stimulates osteoclastogenesis //Breast cancer research and treatment. - 2011. - T. 125. - №. 2. - C. 421-430.

115. Revillion, F., Pawlowski, V., Hornez, L., & Peyrat, J. P.Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene expression in human breast cancer //European Journal of Cancer. - 2000. - T. 36. - №. 8. - C. 1038-1042.

116. Rinaldo, C., Prodosmo, A., Siepi, F., & Soddu, S. HIPK2: a multitalented partner for transcription factors in DNA damage response and development This paper is one of a selection of papers published in this Special Issue, entitled 28th International West Coast Chromatin and Chromosome Conference, and has undergone the Journal's usual peer review process //Biochemistry and Cell Biology. - 2007. - T. 85. - №. 4. - C. 411-418.

117. Rother, K., Kirschner, R., Sänger, K., Böhlig, L., Mössner, J., & Engeland, K. p53 downregulates expression of the G1/S cell cycle phosphatase Cdc25A //Oncogene. - 2007. - T. 26. - №. 13. - C. 1949-1953.

118. Rossi, C. R., Mocellin, S., Pilati, P., Foletto, M., Quintieri, L., Palatini, P., & Lise, M. Pharmacokinetics of intraperitoneal cisplatin and doxorubicin //Surgical oncology clinics of North America. - 2003. - T. 12. - №. 3. - C. 781-794.

119. Sambrook, J., Fritsch, E. F., & Maniatis, T. Molecular cloning. - New York: Cold spring harbor laboratory press, 1989. - T. 2. - C. 14-9.23.

120. Saito, S. I., Goodarzi, A. A., Higashimoto, Y., Noda, Y., Lees-Miller, S. P., Appella, E., & Anderson, C. W. ATM mediates phosphorylation at multiple p53 sites, including Ser46, in response to ionizing radiation //Journal of Biological Chemistry. - 2002. - T. 277. - №. 15. - C. 12491-12494.

121. Saucedo, L. J., Carstens, B. P., Seavey, S. E., Albee L. D., & Perry, M. E. Regulation of transcriptional activation of mdm2 gene by p53 in response to UV radiation //Cell growth & differentiation: the molecular biology journal of the American Association for Cancer Research. - 1998. - T. 9. - №. 2. - C. 119-130.

122. Schonn I., Hennesen J., Dartsch D. C. Ku70 and Rad51 vary in their importance for the repair of doxorubicin-versus etoposide-induced DNA damage //Apoptosis. - 2011. - T. 16. - №. 4. - C. 359-369.

123. Sczaniecka, M., Gladstone, K., Pettersson, S., McLaren, L., Huart, A. S., & Wallace, M. MDM2 protein-mediated ubiquitination of NUMB protein identification of a second physiological substrate of MDM2 that employs a dualsite docking mechanism //Journal of Biological Chemistry. - 2012. - T. 287. - №. 17. - C. 14052-14068.

124. Shimizu, T., Nakagawa, Y., Takahashi, N., & Hashimoto, S. (2016).Thymidylate synthase gene amplification predicts pemetrexed resistance in patients with advanced non-small cell lung cancer //Clinical and Translational Oncology. - 2016. - T. 18. - №. 1. - C. 107-112.

125. Shyh-Chang, N., Locasale, J. W., Lyssiotis, C. A., Zheng, Y., Teo, R. Y., Ratanasirintrawoot, S., ... & Asara, J. M. Influence of threonine metabolism on S-adenosylmethionine and histone methylation //Science. - 2013. - T. 339. - №. 6116. - C. 222-226.

126. Siddik Z. H. Cisplatin: mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance //Oncogene. - 2003. - T. 22. - №. 47. - C. 7265-7279.

127. Sigalas, I., Calvert, A. H., Anderson, J. J., Neal, D. E., & Lunec, J.. Alternatively spliced mdm2 transcripts with loss of p53 binding domain sequences: transforming ability and frequent detection in human cancer //Nature medicine. - 1996. - T. 2. - №. 8. - C. 912-917.

128. Sombroek D., Hofmann T. G. How cells switch HIPK2 on and off //Cell Death & Differentiation. - 2009. - T. 16. - №. 2. - C. 187-194.

129. Shen, C., Wang, D., Liu, X., Gu, B., Du, Y., Wei, F. Z., ... & Zhu, Q.SET7/9 regulates cancer cell proliferation by influencing P-catenin stability //The FASEB Journal. - 2015. - T. 29. - №. 10. - C. 4313-4323.

130. Swift L. H., Golsteyn R. M. Genotoxic anti-cancer agents and their relationship to DNA damage, mitosis, and checkpoint adaptation in proliferating

cancer cells //International journal of molecular sciences. - 2014. - T. 15. - №. 3. - C. 3403-3431.

131. Subramanian, K., Jia, D., Kapoor-Vazirani, P., Powell, D. R., Collins, R. E., Sharma, D., ... & Vertino, P. M. (2008).Regulation of estrogen receptor a by the SET7 lysine methyltransferase //Molecular cell. - 2008. - T. 30. - №. 3. - C. 336347.

132. Suzuki, A., Toi, M., Yamamoto, Y., Saji, S., Muta, M., & Tominaga, T. Role of MDM2 overexpression in doxorubicin resistance of breast carcinoma //Japanese journal of cancer research. - 1998. - T. 89. - №. 2. - C. 221-227.

133. Tacar O., Sriamornsak P., Dass C. R. Doxorubicin: an update on anticancer molecular action, toxicity and novel drug delivery systems //Journal of Pharmacy and Pharmacology. - 2013. - T. 65. - №. 2. - C. 157-170.

134. Tang, Y., Luo, J., Zhang, W., & Gu, W. Tip60-dependent acetylation of p53 modulates the decision between cell-cycle arrest and apoptosis //Molecular cell. -2006. - T. 24. - №. 6. - C. 827-839.

135. Takai, H., Naka, K., Okada, Y., Watanabe, M., Harada, N., Saito, S. I., ... & Nagashima, K. Chk2-deficient mice exhibit radioresistance and defective p53-mediated transcription //The EMBO journal. - 2002. - T. 21. - №. 19. - C. 51955205.

136. Tedeschi, P. M., Markert, E. K., Gounder, M., Lin, H., Dvorzhinski, D., Dolfi, S. C., ... & Boros, L. G. Contribution of serine, folate and glycine metabolism to the ATP, NADPH and purine requirements of cancer cells //Cell death & disease. - 2013. - T. 4. - №. 10. - C. e877.

137. Thorn, C. F., Oshiro, C., Marsh, S., Hernandez-Boussard, T., McLeod, H., Klein, T. E., & Altman, R. B. Doxorubicin pathways: pharmacodynamics and adverse effects //Pharmacogenetics and genomics. - 2011. - T. 21. - №. 7. - C. 440.

138. Toschi, L., Finocchiaro, G., Bartolini, S., Gioia, V., & Cappuzzo, F. Role of gemcitabine in cancer therapy. - 2005.

139. Tovar, C., Rosinski, J., Filipovic, Z., Higgins, B., Kolinsky, K., Hilton, H., ... & Myklebost, O. Small-molecule MDM2 antagonists reveal aberrant p53 signaling in cancer: implications for therapy //Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2006. - T. 103. - №. 6. -C. 1888-1893.

140. Trotta, R., Vignudelli, T., Candini, O., Intine, R. V., Pecorari, L., Guerzoni, C., ... & Caligiuri, M. A. BCR/ABL activates mdm2 mRNA translation via the La antigen //Cancer cell. - 2003. - T. 3. - №. 2. - C. 145-160.

141. Uchida, C., Miwa, S., Kitagawa, K., Hattori, T., Isobe, T., Otani, S., ... & Yasuda, H. Enhanced Mdm2 activity inhibits pRB function via ubiquitin-dependent degradation //The EMBO journal. - 2005. - T. 24. - №. 1. - C. 160169.

142. Vander Heiden M. G. Targeting cancer metabolism: a therapeutic window opens //Nature reviews Drug discovery. - 2011. - T. 10. - №. 9. - C. 671-684.

143. Vassilev, L. T., Vu, B. T., Graves, B., Carvajal, D., Podlaski, F., Filipovic, Z., ... & Fotouhi, N. In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2 //Science. - 2004. - T. 303. - №. 5659. - C. 844-848.

144. Vazquez A., Tedeschi P. M., Bertino J. R. Overexpression of the mitochondrial folate and glycine-serine pathway: a new determinant of methotrexate selectivity in tumors //Cancer research. - 2013. - T. 73. - №. 2. - C. 478-482.

145. Vie, N., Copois, V., Bascoul-Mollevi, C., Denis, V., Bec, N., Robert, B., ... & Martineau, P. Overexpression of phosphoserine aminotransferase PSAT1 stimulates cell growth and increases chemoresistance of colon cancer cells //Molecular cancer. - 2008. - T. 7. - №. 1. - C. 1.

146. Wadgaonkar R., Collins T. Murine double minute (MDM2) blocks p53-coactivator interaction, a new mechanism for inhibition of p53-dependent gene expression //Journal of Biological Chemistry. - 1999. - T. 274. - №. 20. - C. 13760-13767.

147. Wang, S. P., Wang, W. L., Chang, Y. L., Wu, C. T., Chao, Y. C., Kao, S. H., ... & Li, K. C. p53 controls cancer cell invasion by inducing the MDM2-mediated degradation of Slug //Nature cell biology. - 2009. - T. 11. - №. 6. - C. 694-704.

148. Wu, Y. L., Mehew, J. W., Heckman, C. A., Arcinas, M., & Boxer, L. M. Negative regulation of bcl-2 expression by p53 in hematopoietic cells //Oncogene.

- 2001. - T. 20. - №. 2.

149. Wu, L., Timmers, C., Maiti, B., Saavedra, H. I., Sang, L., Chong, G. T., ... & Greenberg, M. E. The E2F1-3 transcription factors are essential for cellular proliferation //Nature. - 2001. - T. 414. - №. 6862. - C. 457-462.

150. Wu, Y., Xiao, Y., Ding, X., Zhuo, Y., Ren, P., Zhou, C., & Zhou, J.A miR-200b/200c/429-binding site polymorphism in the 3' untranslated region of the AP-2a gene is associated with cisplatin resistance //PloS one. - 2011. - T. 6. - №. 12.

- C. e29043.

151. Xu Y. Regulation of p53 responses by post-translational modifications //Cell Death & Differentiation. - 2003. - T. 10. - №. 4.

152. Yao, Y., Gu, X., Liu, H., Wu, G., Yuan, D., Yang, X., & Song, Y.Metadherin regulates proliferation and metastasis via actin cytoskeletal remodelling in non-small cell lung cancer //British journal of cancer. - 2014. - T. 111. - №. 2. - C. 355-364.

153. Zauberman, A., Flusberg, D., Haupt, Y., Barak, Y., & Oren, M. A functional p53-responsive intronic promoter is contained within the human mdm2 gene //Nucleic acids research. - 1995. - T. 23. - №. 14. - C. 2584-2592.

154. Zhao, J., Bilsland, A., Jackson, K., & Keith, W. N. MDM2 negatively regulates the human telomerase RNA gene promoter //BMC cancer. - 2005. - T. 5.

- №. 1. - C. 6.

155. Zhao, Y., Aguilar, A., Bernard, D., & Wang, S. Small-Molecule Inhibitors of the MDM2-p53 Protein-Protein Interaction (MDM2 Inhibitors) in Clinical Trials for Cancer Treatment: Miniperspective //Journal of medicinal chemistry. - 2014. -T. 58. - №. 3. - C. 1038-1052.

156. Zhao, Y., Yu, S., Sun, W., Liu, L., Lu, J., McEachern, D., ... & Zou, P. A potent small-molecule inhibitor of the MDM2-p53 interaction (MI-888) achieved complete and durable tumor regression in mice //Journal of medicinal chemistry. -2013. - T. 56. - №. 13. - C. 5553-5561.

157. Zhang, Z., Wang, H., Li, M., Rayburn, E. R., Agrawal, S., & Zhang, R. Stabilization of E2F1 protein by MDM2 through the E2F1 ubiquitination pathway //Oncogene. - 2005. - T. 24. - №. 48. - C. 7238-7247.

158. Zhang Q., Zeng S. X., Lu H. Targeting p53-MDM2-MDMX loop for cancer therapy //Mutant p53 and MDM2 in Cancer. - Springer Netherlands, 2014. - C. 281-319.

159. Zhang, J., Yan, B., Späth, S. S., Qun, H., Cornelius, S., Guan, D., ... & Su, X. (2015) Integrated transcriptional profiling and genomic analyses reveal RPN2 and HMGB1 as promising biomarkers in colorectal cancer //Cell & bioscience. -2015. - T. 5. - №. 1. - C. 1.

160. Zhang, W. C., Shyh-Chang, N., Yang, H., Rai, A., Umashankar, S., Ma, S., ... & Bhakoo, K. K.Glycine decarboxylase activity drives non-small cell lung cancer tumor-initiating cells and tumorigenesis //Cell. - 2012. - T. 148. - №. 1. -C. 259-272.

161. Zheng, T., Wang, J., Zhao, Y., Zhang, C., Lin, M., Wang, X., ... & Hu, W. Spliced MDM2 isoforms promote mutant p53 accumulation and gain-of-function in tumorigenesis //Nature communications. - 2013. - T. 4.

162. Zhou, M., Gu, L., Findley, H. W., Jiang, R., & Woods, W. G. PTEN reverses MDM2-mediated chemotherapy resistance by interacting with p53 in acute lymphoblastic leukemia cells //Cancer research. - 2003. - T. 63. - №. 19. - C. 6357-6362.

163. Zhuo, R., Kosak, K. M., Sankar, S., Wiles, E. T., Sun, Y., Zhang, J., ... & Lessnick, S. L. . Targeting Glutathione S-transferase M4 in Ewing sarcoma //Frontiers in pediatrics. - 2014. - T. 2.

164. Zou, J., Han, Z., Zhou, L., Cai, C., Luo, H., Huang, Y., ... & Zhong, W. Elevated expression of IMPDH2 is associated with progression of kidney and bladder cancer //Medical Oncology. - 2015. - T. 32. - №. 1. - C. 1-6.