Лазерно-индуцированная флуорисценция биологических тканей при импульсном ультрафиолетовом возбуждении тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 01.04.21, доктор наук Маслов Николай Анатольевич

• Маслов Николай Анатольевич
• доктор наук
• 2018

Оглавление диссертации доктор наук Маслов Николай Анатольевич

Содержание

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Цели и задачи исследования

Методы исследования

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности

Новизна полученных результатов

Научная ценность полученных результатов

Практическая значимость полученных результатов

Апробация результатов 21 Внедрение результатов и предложения по их дальнейшему

использованию

Личный вклад

Структура и объем работы

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1 Флуоресцентная диагностика

1.2. Влияние оптических свойств ткани на спектры ЛИФ

1.3. ЛИФ биологических тканей и веществ при УФ возбуждении

1.4. Изменение свойств ЛИФ биологических тканей под воздействием лазерного излучения

1.5. Заключение

ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Многоканальная система регистрации спектров ЛИФ, возбуждаемой импульсными газоразрядными лазерами

2.2. Анализ спектров ЛИФ методом главных компонент

2.3. Система визуализации ЛИФ, возбуждаемой импульсными газоразрядными лазерами

2.4. Многоканальная система регистрации спектров ЛИФ с возможностью сканирования длины волны облучения в диапазоне 220-350 нм

2.5. Заключение

ГЛАВА 3. СПЕКТРАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МАТРИЦ ВОЗБУЖДЕНИЯ-ЭМИССИИ ЛАЗЕРНО-ИНДУЦИРОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ РАЗЛИЧНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ И ТКАНЕЙ ПРИ УФ ВОЗБУЖДЕНИИ

3.1. Введение

3.2. Особенности флуоресценции органических структур и биологических тканей при импульсном лазерном возбуждении

3.2.1. Исследование линейности флуоресценции и фотовыцветания бумаги при импульсном лазерном возбуждении

3.2.2. Исследование линейности флуоресценции и фотовыцветания триптофана при импульсном лазерном возбуждении

3.2.3. Исследование линейности флуоресценции и фотовыцветания тканей крысы при импульсном лазерном возбуждении

3.2.4. Исследование линейности флуоресценции бумаги и тканей крысы при возбуждении Кг¥ эксимерным лазером

3.2.4. Обсуждение

3.3. Влияние облучения азотным и эксимерным КгБ лазером на культуры клеток

3.4. Влияние лазерного облучения в области длин волн 210-350 нм на перевиваемые опухоли мышей и крыс

3.5. Влияние лазерного облучения на уровне органов

3.6. Особенностей матриц возбуждения-эмиссии флуоресценции биологических тканей

3.7. Особенности матриц возбуждения-эмиссии ЛИФ тканей глаза человека

3.8. Заключение

ГЛАВА 4. ЛАЗЕРНАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ СПЕКТРОСКОПИЯ

МИНЕРАЛИЗОВАННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ

4.1. Введение

4.2. Имеющийся задел

4.3. Поверхностное распределение интенсивности ЛИФ минерализованных тканей сердечно-сосудистой системы

4.4. Матрицы возбуждения-эмиссии ЛИФ костных тканей

4.4.1. Материалы и методы

4.4.2. Результаты и обсуждение

4.5. ЛИФ-спектроскопия твердых тканей зуба

4.4.1. Материалы и методы

4.4.2. Результаты и обсуждение

4.6. Заключение

ГЛАВА 5. ЛАЗЕРНАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ СПЕКТРОСКОПИЯ

ТКАНИ МИОКАРДА РАЗЛИЧНОЙ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ

5.1. Введение

5.2. Имеющийся задел

5.3. ЛИФ-спектроскопия культур клеток различной жизнеспособности

170

5.3.1. Материалы

5.3.2 Методы

5.3.3. Результаты и обсуждение

5.4. ЛИФ-спектроскопия донорского миокарда различной жизнеспособности

5.2.1. Материалы

5.2.2. Исследование ЛИФ погружённых в холодный физиологический раствор отдельных фрагментов миокарда свиньи в процессе хранения

5.2.3. Исследование ЛИФ отдельных фрагментов миокарда свиньи в процессе хранения в холодном физиологическом растворе с отмыванием

5.2.4. Исследование ЛИФ фрагментов миокарда свиньи после хранения целого сердца в холодном физиологическом растворе

202

5.2.5. Исследование изображений ЛИФ фрагментов миокарда крыс после хранения целого сердца в холодном физиологическом растворе

5.2.6. Обсуждение

5.5. Выводы

ГЛАВА 6. ЛАЗЕРНАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ СПЕКТРОСКОПИЯ ТРАНСПЛАНТАТА АОРТЫ НА РАЗЛИЧНЫХ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЭТАПАХ

6.1.Введение

6.2. Имеющийся задел

6.3. Динамика ЛИФ аорты человека в процессе хранения в холодном физиологическом растворе

6.3.1. Материалы и методы

6.3.2. Результаты и обсуждение

6.4. Исследование однородности ЛИФ аорты человека

6.4.1. Материалы и методы

6.4.2. Зависимость спектра ЛИФ аорты человека от ориентации образца

6.4.3. Зависимость спектра ЛИФ аорты человека от расстояния до фиброзного кольца

6.5. ЛИФ-спектроскопия аорты кролика на этапах получения ацеллюлярного гомографта

6.5.1. Материалы и методы

6.5.2. Зависимость спектра ЛИФ аорты кролика от расстояния до фиброзного кольца

6.5.3. Зависимость спектра ЛИФ аорты кролика от времени хранения образца в холодном физиологическом растворе

6.5.4. Влияние криосохранения на спектры ЛИФ ткани аорты кролика

6.5.5. Исследование графтов аорты кролика в процессе децеллюляризации

6.5.6. Обсуждение

6.6. ЛИФ-спектроскопия аорты человека на этапах получения ацеллюлярного гомографта

6.6.1. Материалы и методы

6.6.2. Результаты

6.6.3. Обсуждение

6.7. Выводы

ГЛАВА 7. МАТРИЦЫ ВОЗБУЖДЕНИЯ-ЭМИССИИ ЛАЗЕРНО-ИНДУЦИРОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ НОРМАЛЬНЫХ И ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ

7.1. Введение

7.2. ЛИФ здоровых и поражённых опухолями тканей лёгкого мыши

7.3. ЛИФ суспензии здоровых клеток селезёнки мыши и клеток опухоли

266

7.4. ЛИФ злокачественных глиом головного мозга человека

7.5. Аппаратный комплекс для интраоперационной диагностики границ злокачественной опухоли

7.6. Выводы

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Лазерно-индуцированная флуорисценция биологических тканей при импульсном ультрафиолетовом возбуждении»

Актуальность темы исследования

Сегодня многие перспективные исследования ведутся на стыке наук. В частности, создание новых методов медицинской диагностики происходит благодаря взаимодействию физики, химии, биологии и медицины. Многие процессы, происходящие в живом организме, физиологические или патологические, приводят к изменениям физико-химических свойств тканей, вариациям агрегатного состояния некоторых ее компонент, механическим превращениям. Регистрация подобных изменений физическими методами способна дать информацию о происходящих процессах, что, в частности, может использоваться и для медицинской диагностики. Примеры широко известны: магнитно-резонансная томография, рентгенография, ультразвуковые исследования.

В наши дни активно развиваются оптические методы медицинской диагностики, основное достоинство которых - возможность определять состояние тканей в реальном времени. Для этого могут использоваться рассеяние и поглощение света (спектральные измерения, оптическая когерентная томография, усиленное обратное рассеяние). Широко применяются флуоресцентные красители для исследований in vitro и все активнее их используют для интраоперационной диагностики. Например, мировое признание получил метод микрохирургического удаления злокачественных глиом головного мозга с применением интраоперационной флуоресценции метаболитов 5-аминолевулиновой кислоты (5-ALA), вводимой пациенту перед операцией. Продукты химических реакций, происходящих в организме с участием 5-ALA, с высокой избирательностью накапливаются в клетках злокачественных глиом и позволяют визуально определить границу опухоли [82, 211]. Однако обычно наблюдается флуоресценция низкой интенсивности, это приводит к необходимости проводить диагностику в темноте, что осложняет работу хирурга. Кроме того, не все

опухоли активно метаболизируют 5-ЛЬЛ и, соответственно, флуоресцируют. Поэтому поиск новых подходов в области интраоперационной оптической диагностики никогда не перестает быть актуальным.

Для диагностики не обязательно использовать красители, привнесенные извне, так как некоторые вещества, составляющие биологические ткани, имеют свойство флуоресцировать под воздействием излучения. По спектрам флуоресценции могут быть зарегистрированы любые превращения в тканях, сопровождающиеся разрушением или появлением флуорофоров, изменением их физико-химического окружения, агрегатного состояния. Использование лазеров в качестве источников возбуждающего излучения позволяет производить измерения флуоресценции с высокой эффективностью и избирательностью.

Как правило, для исследования лазерно-индуцированной флуоресценции (ЛИФ) стараются применять видимое и ближнее инфракрасное излучение как наименее вредное и глубоко проникающее в ткань. Лишь в единичных работах было использовано ближнее ультрафиолетовое (УФ) излучение с длиной волны, начиная от 280 нм, а, как правило - начиная от 337 нм. С использованием различных лазеров изучались пораженные раком ткани желудка [36], пищевода [52, 216], толстой кишки [52, 111], матки [71, 166], груди и легких [95, 98, 219], дыхательных путей [45, 88], мочевого пузыря [7, 232], полости рта [220], головного мозга [21, 23, 35], кожи [156, 184]. Большое число публикаций посвящено ЛИФ диагностике атеросклероза сосудов [9, 15, 19, 37, 40, 43, 42, 61, 62, 108, 109, 142, 143, 151, 150, 159]. Таким образом, метод обладает большими перспективами, и в то же время существует множество актуальных нерешенных задач.

В частности, возникает вопрос о возможности применения УФ излучения с длиной волны меньше 330 нм, поскольку использование коротковолновых источников света потенциально позволяет наблюдать флуоресценцию от большего числа компонент, что может иметь значение для эффективности диагностики. В то же время флуоресценция, индуцированная излучением с

длиной волны в пределах 200-330 нм, практически не изучена, и ее применение может открыть новые перспективы в разработке методов диагностики патологических состояний организма. Для этого необходимо исследовать особенности использования данного диапазона длин волн для возбуждения флуоресценции биологических тканей: найти характерные для различных состояний спектральные полосы возбуждения и излучения, изучить возможное повреждающее влияние возбуждающего лазерного излучения на исследуемые ткани.

На основе знаний, полученных в такого рода исследованиях, возможно создание новых оптических методов, работающих в режиме реального времени, что, несомненно, является актуальной задачей в области медицинской диагностики. Такие методы могут найти применение в самых различных областях медицины.

В офтальмологической практике, например, возникает необходимость дифференцировки тканей по типу. Так, во время хирургического лечения катаракты в капсульном мешке могут оставаться остатки эпителия капсулы хрусталика, регенерация которых приводит к помутнению стенки капсульного мешка и к развитию так называемой вторичной катаракты. Интраоперационное обнаружение с помощью ЛИФ оставшихся в капсульном мешке мелких фрагментов эпителия капсулы хрусталика может оказать существенную помощь в предотвращении рецидива болезни.

Поиск новых методов непрерывного мониторинга состояния тканей и органов, используемых для трансплантации, никогда не теряет свою актуальность. Кроме того, с развитием биотехнологий появился новый класс задач, связанный с контролем технологических этапов в процессе создания искусственных тканей и органов методами тканевой инженерии, например, для замещения поврежденных структур при хирургическом лечении дефектов крупных сосудов или приобретенных пороков клапанов сердца. Целью такого подхода является предотвращение гистонесовместимости имплантата и тканей

реципиента, ведущей к отторжению имплантируемой структуры. Для этого донорская ткань децеллюляризируется - из нее различными ферментами удаляются присутствующие в ней клетки. В результате остается только внеклеточный матрикс - строма, представленная эластичными волокнами. Параллельно создаются базовые клеточные линии из собственных клеток реципиента. Заселяя ими донорский внеклеточный матрикс, создается тканевая или органная конструкция, которая впоследствии может быть имплантирована в организм пациента. На каждом из этапов требуется вести контроль в режиме реального времени, и ЛИФ-диагностика может оказаться перспективной для решения этой задачи.

Метод регистрации и анализа спектров ЛИФ позволяет осуществлять контроль состояния минерализованных тканей [244] и перспективен для диагностики во время хирургических манипуляций на клапанном аппарате сердца, пораженного кальцинозом, для установления границы между интактной и пораженной кариесом зубной ткани. Возникает также вопрос о возможности интраоперационной диагностики остеопороза.

В сфере онкологии, несмотря на наличие множества публикаций по исследованию флуоресценции различных опухолей, проблема оптической диагностики новообразований далека от окончательного решения. Принятые в клиническую практику методы не всегда удобны и нуждаются в совершенствовании, а использование ультрафиолетового лазерного излучения может быть использовано для поиска новых подходов.

Цели и задачи исследования

Целью работы является разработка методики анализа флуорофорного состава ЛИФ биологических тканей и органических веществ при ультрафиолетовом лазерном возбуждении в диапазоне длин волн 210-350 нм. Для ее достижения были поставлены следующие задачи.

1. Изучить общие особенности ЛИФ различных биологических тканей при импульсном ультрафиолетовом возбуждении в диапазоне длин волн 210-350 нм.

2. Разработать методику анализа сплошных спектров ЛИФ биологических тканей.

3. Исследовать влияние ультрафиолетового лазерного излучения, используемого для измерений ЛИФ, на некоторые жизненные показатели исследуемых живых клеток и биологических тканей, чтобы оценить потенциальный вред и определить безопасные, если таковые имеются, дозы облучения.

Второй целью данной работы является изучение возможности применения

разработанной методики для конкретных диагностических задач. Для ее

достижения были поставлены следующие задачи.

1. Исследовать спектры ЛИФ капсульного мешка хрусталика глаза человека и эпителия капсулы хрусталика, чтобы определить возможность различать эти ткани по ходу операции и вовремя обнаруживать и удалять фрагменты эпителия, которые могут вызвать послеоперационные осложнения.

2. Проследить изменения ЛИФ аорты в процессе децеллюляризации, то есть удаления клеток, - первого биотехнологического этапа создания искусственной ткани, не обладающей антигенными свойствами в организме реципиента.

3. Оценить возможности применения ЛИФ в контроле состояния минерализованных тканей: для диагностики во время хирургических манипуляций на клапанном аппарате сердца, пораженного кальцинозом; для установления границы между здоровой и пораженной кариесом зубной тканью; для интраоперационной диагностики остеопороза.

4. Изучить изменения ЛИФ, происходящие в процессе хранения донорских тканей сердца, используемых для пересадки реципиенту.

5. Исследовать возможности использования аутофлуоресценции, возбуждаемой ультрафиолетовым лазерным излучением, для определения здоровых и

опухолевых клеток и тканей в эксперименте и в ходе нейрохирургических операций.

6. Создать оптический прибор, позволяющий проводить интраоперационную визуализацию микрохирургической картины и одновременную диагностику опухолевых тканей и клеток мозга по флуоресценции протопорфирина IX.

Методы исследования

Для исследований ЛИФ в качестве источников возбуждающего излучения были использованы следующие типы лазеров, работающих в указанном выше перспективном для исследований ЛИФ диапазоне:

- КгБ эксимерный лазер с длиной волны излучения 248 нм, который эффективно возбуждает флуоресценцию белков;

- азотный лазер с длиной волны 337 нм для сравнения с ЛИФ, возбуждаемой излучением с большей длиной волны;

- Кё:УЛв лазер с оптопараметрическим преобразованием длины волны в диапазоне 210-350 нм, с его помощью исследовали матрицы возбуждения-эмиссии.

Регистрацию спектров флуоресценции осуществляли спектрометрами с дифракционной решёткой и электронно-оптическим преобразователем или матричным прибором с зарядовой связью с разрешением 0,5 нм в диапазоне 280700 нм. Полученные сплошные спектры сравнивали по форме путём нормировки на максимум. Также на основе естественных различий спектров различных образцов итеративным частичным методом наименьших квадратов вычисляли главные компоненты спектров. Из них составляли методом перебора линейные комбинации, соответствующие наименьшей ширине пика и анализировали их вклады в спектр. Для сравнения групп образцов использовали дисперсионный анализ (ЛКОУЛ, БТАТКИСЛ 7), при этом состояние биологических материалов определяли стандартными гистологическими и клиническими биохимическими

методами и электронной микроскопией. Поверхностное распределение

флуоресценции осуществляли видеокамерами с интерференционными фильтрами.

Положения, выносимые на защиту

1. При импульсном ультрафиолетовом возбуждении лазерным излучением с длинами волн в диапазоне 210-300 нм, длительностью импульса менее 5 нс, плотностью энергии импульса до 10 мДж/см интенсивность лазерно-индуцированной флуоресценции оптически протяжённых образцов биологических тканей зависит от энергии импульса нелинейно вследствие поглощения возбуждающего излучения нефлуоресцирующими соединениями, ограничивающими глубину проникновения излучения в ткань, и, соответственно, количество возбуждаемых флуорофоров.

2. Главные компоненты сплошных спектров лазерно-индуцированной флуоресценции биологических тканей, вычисленные нелинейным итеративным частичным методом наименьших квадратов на основе статистических различий спектров, при отсутствии реабсорбции флуоресценции сводимы приближённо к спектрам отдельных флуоресцирующих веществ составлением из них линейных комбинаций, соответствующих наибольшему отношению максимума спектра к его интегралу по всему измеряемому диапазону длин волн (пики минимальной возможной ширины).

3. Спектры ЛИФ тканей капсулы хрусталика, её эпителия и ядра хрусталика глаза человека в диапазоне длин волн возбуждения 210-290 нм содержат три основные спектральные полосы (пики минимальной возможной ширины по положению 2) с максимумами на длинах волн 303, 320 и 420 нм. Наибольшим образом спектры тканей различаются для длины волны возбуждения 210 нм, когда в спектре эпителия максимальный вклад даёт первая компонента, в спектре ядра - вторая, капсулы - третья.

4. Спектры ЛИФ минерализованных тканей (кальцинированных сосудов и клапанов сердца, зубных тканей, губчатого вещества кости) при использовании лазерного излучения с длиной волны 248 нм содержат три основные спектральные полосы (пики минимальной возможной ширины по положению 2) по длине волн максимумов 330, 380 и 460 нм, соответствующих белковой, эластичной и минеральной составляющим. Поражение кальцинозом тканей сосудов и клапанов сердца приводит к появлению в спектре вклада минеральной компоненты; поражение кариесом зубной ткани приводит к уменьшению вклада эластичной составляющей.

5. Спектры ЛИФ тканей и органов, используемых для трансплантации, при возбуждении излучением с длиной волны 248 нм обнаруживают следующую динамику:

- в процессе хранения ткани миокарда свиньи в физиологическом растворе относительная интенсивность спектральной полосы 400-500 нм уменьшается (в среднем на 30%), причём неоднородно (интерквартильный размах до 33%) внутри тканей сердца вследствие их неравномерной деградации;

- у криосохранённых трансплантатов аорты кролика в спектре ЛИФ появляется полоса реабсорбции флуоресценции в области 380-450 нм вследствие пропитывания ткани кровью из сосудов неиссечённых участков адвентиции (внешней оболочки);

- в биотехнологическом процессе децеллюляризации трансплантата аорты человека происходит уменьшение интенсивности спектральной полосы (пика минимальной возможной ширины по положению 2) с максимумом на длине волны 470 нм, по сравнению с пиком с максимумом на длине волны 375 нм (в среднем в 2,7 раза)

6. При использовании длин волн возбуждения 210-290 нм спектры ЛИФ интактной и поражённой опухолью Льюиса ткани легкого мыши, интактной и поражённой метастазами опухоли Эрлиха селезёнки мыши, здоровой и

поражённой злокачественной глиомой ткани мозга человека отличаются в спектральной полосе 350-370 нм: у поражённых тканей в нормированных на максимум спектрах интенсивность в среднем выше (на 5-10% при использовании оптимального для выявления различий диапазона длин волн возбуждения 230-260 нм).

Степень достоверности

Достоверность первого защищаемого положения гарантируется совпадением в пределах экспериментального разброса (10%) кривых насыщения для различных типов биологических тканей с преимущественно триптофановой флуоресценцией, а также совпадением измеренных кривых насыщения и аппроксимированных, исходя из двухкомпонентной модели. Применимость модели также подтверждают переход к линейному режиму у фотообесцвеченных образцов и изменение характера насыщения при уменьшении толщины образцов.

Достоверность второго защищаемого положения обеспечивается совпадением в модельном эксперименте спектров флуорофоров, измеренных непосредственно, и расчётных пиков минимальной возможной ширины со среднеквадратичным отклонением менее 6%. Для всех измеренных спектров биологических тканей аппроксимация пиками минимальной возможной ширины дает среднеквадратичное отклонение не более 2%.

Достоверность защищаемых положений 3-6 обеспечивается контролем стандартными гистологическими и клиническими биохимическими методами и электронной микроскопией. Обнаруженные различия между группами образцов подтверждены статистическим анализом (р < 0,05). В спектрах ЛИФ присутствуют компоненты, соответствующие известным флуорофорам: триптофану, тирозину, КАБЫ, поперечным связям в коллагене. Характер спектров ЛИФ сосудов с учётом разницы длин волн возбуждения аналогичен данным, полученным при изучении атеросклероза с использованием лазеров с большими длинами волн излучения (например, [13, 125]).

Новизна полученных результатов

Впервые исследованы спектральные особенности матриц возбуждения-эмиссии лазерно-индуцированной флуоресценции различных типов биологических тканей для импульсного лазерного возбуждения УФ диапазона 210-350 нм и установлены общие закономерности формирования спектров и условия, необходимые для корректного их измерения.

Новизна первого защищаемого положения состоит в том, что выявлен, теоретически описан с помощью двухкомпонентной модели и экспериментально подтверждён механизм проявления нелинейных эффектов при возбуждении ЛИФ оптически протяжённых (толщина образцов 1-5 мм при характерной глубине поглощения излучения 50-100 мкм) биологических тканей низкоэнергетического (<10 мДж/см ) импульсного лазерного излучения в диапазоне длин волн 210-300 нм. В представленных ранее в литературе исследованиях биологических тканей либо использовалось непрерывное излучение, либо при применении импульсных лазеров внимание уделялось только суммарной дозе поглощённого излучения для контроля возможных повреждений образца. Характер насыщения при этом отличается от результатов, известных для протяжённых газообразных сред, где применима однокомпонентная модель.

Новизна второго защищаемого положения состоит в том, что известный метод главных компонент впервые был адаптирован и экспериментально обоснован для представления спектров ЛИФ в виде суммы пиков минимальной возможной ширины: линейных комбинаций небольшого числа (2-4) главных компонент.

Новизна положений 3-6 и связанных с ними результатов исследований обусловлена применением импульсных эксимерного КгБ лазера с длиной волны 248 нм и твёрдотельного лазера с длиной волны перестраиваемой в диапазоне 210-300 нм для измерения спектров ЛИФ тканей миокарда в процессе хранения, ткани аорты в процессе криосохранения и децеллюляризации, глаза, минерализованных тканей, здоровых и пораженных глиомой тканей мозга. Для

всех вышеперечисленных задач аутофлуоресценция ранее не изучалась или для возбуждения ЛИФ использовали лазеры с большей длиной волны. Получены патенты на лазерные способы диагностики минерализации кости (№2244292, 11.02.2003), этапов биотехнологии целлюляризации-децеллюляризации тканевых конструкций (№ 2343481, 09.08.2006).

На основе использованных в данной работе технологий разработаны: система с импульсно-периодической регистрацией флуоресценции протопорфирина IX (патент № 2574793, 01.08.2013; №142307, 24.07.2013) для визуализации границ злокачественных опухолей в условиях стандартного освещения операционной, способ измерения полей температуры с помощью флуоресцирующих покрытий (патент №2607225, 23.03.2015).

Научная ценность полученных результатов

Ценность первого защищаемого положения заключается в том, что оно: показывает, что при измерениях спектров ЛИФ с использованием импульсного лазерного излучения возникает необходимость контролировать линейность отклика в зависимости от энергии импульса. Оно также указывает значения параметров лазерного излучения, гарантирующих линейность отклика: для диапазона длин волн возбуждения 210-300 нм и длительностей импульса менее 5 нс плотность энергии не должна превышать 200 мкДж/см .

Как известно, спектры ЛИФ биологических тканей при отсутствии реабсорбции флуоресценции представляют собой линейные комбинации спектров присутствующих в образце флуорофоров, которые при УФ возбуждении могут сильно перекрываться, превращаясь в широкие полосы без явно выраженных особенностей. Проблема в том, что линейная регрессия к известным спектрам флуорофоров не всегда даёт адекватный результат - при выполнении новых исследований в образцах могут присутствовать неустановленные вещества, некоторые флуорофоры меняют свой спектр в зависимости от окружения. Разработанный по второму защищаемому положению метод представления

спектров ЛИФ в виде линейных комбинаций главных компонент - пиков минимальной возможной ширины, существенно упрощает анализ спектров, так как для него не требуется заранее знать все флуоресцирующие в ткани вещества. Исходные главные компоненты, которые также используются и для анализа ЛИФ (например, [187, 189]), представляют собой абстрактные функции, знакопеременные, дающие как положительный, так и отрицательный вклад в спектр, что невозможно для реальных флуорофоров. Существуют различные методы факторизации с неотрицательными спектрами, однако, они могут также давать отрицательные вклады для компонент [66] или неоднозначный результат разложения, например, в зависимости от начальных условий при итерационном расчёте [146]. Вычисленные согласно второму защищаемому положению линейные комбинации главных компонент во всех проведённых экспериментах с точностью аппроксимации однозначны и вносят положительный вклад в спектры, а также имеют физический смысл - приближённо описывают сплошные спектры флуорофоров присутствующих в образце.

Сформулированные в положениях 3-6 результаты получены при использовании длин волн возбуждения 210-300 нм и дают информацию о флуорофорах, не возбуждающихся излучением с большей длиной волны. При этом, несмотря на фототоксичность данного излучения, применённые в этой работе условия для измерений ЛИФ могут быть безопасно использованы. При дозах облучения импульсного УФ лазерного излучения менее 100 мДж/см не выявлено повреждающего действия на биологический материал (на жизнеспособность, функционирование и спектральные свойства клеток и биологических тканей). Для получения информативных спектров на текущем техническом уровне достаточны дозы, меньшие на четыре порядка.

Практическая значимость полученных результатов

Относящиеся к третьему защищаемому положению различия спектров ЛИФ тканей глаза открывают возможность осуществлять интраоперационное

обнаружение оставшихся в капсульном мешке мелких фрагментов эпителия капсулы хрусталика, которое сейчас не ведётся. Удаление фрагментов эпителия снижает риск развития вторичной катаракты.

Относящиеся к четвёртому защищаемому положению результаты позволяют проводить ЛИФ диагностику фрагментов минерализованных тканей во время хирургических манипуляций на клапанном аппарате сердца, пораженном кальцинозом, осуществлять обратную связь во время лазерного удаления поражённых участков тканей. Сейчас единственным методом диагностики является ультразвуковое исследование, проводимое до операции. ЛИФ диагностика позволяет также определять объём резекции тканей зуба и характер его лечения - для установления границы между здоровой и поражённой кариесом тканями зуба существует набор традиционных методов, таких как электроодонтодиагностика, дентальная рентгенография и т.д., однако, они далеки от совершенства и/или не могут использоваться в процессе механической обработки ткани.

Для нижеперечисленных задач контроль может осуществляться гистохимическими методами, для которых требуется забор биопсийного материала и время: от десятков минут до нескольких часов. ЛИФ диагностика же даёт информацию в режиме реального времени. Контроль процесса децеллюляризации с помощью ЛИФ при создании искусственных тканей и органов методами тканевой инженерии позволит получить из ткани донора оптимальный для заселения клетками реципиента внеклеточный матрикс. Для предварительного контроля жизнеспособности используемых для трансплантации органов существует оптический метод диагностики по флуоресценции КАБЫ, однако, он даёт информацию только о тканевом дыхании, которое не является определяющим фактором. Найденные в данной работе спектральные закономерности при хранении тканей коррелируют с результатами гистохимических исследований и являются дополнительным параметром для контроля исходного состояния донорских тканей.

Для интраоперационной диагностики злокачественных глиом головного мозга сейчас используется флуоресценция протопорфирина IX, однако в существующих системах наблюдать её приходится в темноте вследствие её слабой интенсивности. Разработанное устройство с импульсно-периодической системой регистрации и вычитанием фона позволяет производить визуализацию границ злокачественных опухолей при обычном освещении операционной и одновременно представляет микрохирургическую картину, что значительно повышает удобство диагностического метода, безопасность хирургического вмешательства и радикальность удаления опухоли в пределах здоровой ткани. Однако не все опухоли накапливают протопорфирин IX, и спектры аутофлуоресценции возбуждаемой УФ лазерным излучением могут быть дополнительным параметром для интраоперационного определения их границ и последующего удаления.

Апробация результатов

Основные результаты данной работы были доложены на 30 российских и международных конференциях [49, 53, 58, 90, 91, 104, 105, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 152, 162, 193, 253, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 266, 268, 274]. По теме диссертации опубликованы 22 статьи в рецензируемых научных журналах [8, 57, 78, 79, 94, 100, 101, 102, 103, 106, 113, 128, 129, 194, 236, 237, 245, 246, 248, 257, 271, 273]. По результатам работы получены 5 патентов [239, 247, 259, 260, 267]. Прочие публикации - глава в монографии [54].

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Маслов Николай Анатольевич, 2018 год

Список литературы

1. Aboumarzouk O. et al. Laser-induced autofluorescence spectroscopy: Can it be of importance in detection of bladder lesions? // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. - 2015. - № 1 (12). - C. 76-83.

2. Agrawal A. и др. Fluorescence spectroscopy of the cervix: influence of acetic acid, cervical mucus, and vaginal medications // Lasers Surg. Med. - 1999. - Т. 25. - № 3. - С. 237-249.

3. Alfano R. R. et al. Light sheds light on cancer--distinguishing malignant tumors from benign tissues and tumors //Bulletin of the New York Academy of Medicine. - 1991. - Т. 67. - №. 2. - С. 143.

4. Alvarez R.D., Wright T.C. Effective cervical neoplasia detection with a novel optical detection system: A randomized trial // Gynecologic Oncology. - 2007. -№ 2 (104). - C. 281-289.

5. Anastassopoulou N. et al. Spectroscopic characterisation of carotid atherosclerotic plaque by laser induced fluorescence // Lasers Surg. Med. 2001. - Т. 28. - № 1. -С. 67-73.

6. Angelova L. et al. Fluorescence spectroscopy of gastrointestinal tumors: in vitro studies and in vivo clinical applications // Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. 2013. - Т. 9032. - C. 1-11.

7. Anidjar M. et al. The Role of Laser-Induced Autofluorescence Spectroscopy in Bladder Tumor Detection: Dependence on the Excitation Wavelength //Annals of the New York Academy of Sciences. - 1998. - Т. 838. - №. 1. - С. 130-141.

8. Aniskin V.M. An experimental study of the flow of subsonic flat mini and micro air jets / Aniskin V.M., Lemanov V.V., Maslov N.A., Mukhin K.A., Terekhov V.I., Sharov K.A. // Technical Physics Letters. - 2015. - Т. 41 - №. 1. - С. 4649.

9. Arakawa K. O. H. et al. XeCl excimer laser-induced fluorescence for selective ablation of atheromatous tissue //Japanese circulation journal. - 1991. - Т. 55. -№. 11. - С. 1094-1105.

10. Baek D.S.H. et al. Fundus autofluorescence (FAF) non-invasively identifies chorioretinal toxicity in a rat model of retinal pigment epithelium (RPE) damage // Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. - 2015. - (71). - C. 7782.

11. Bagdonas S. et al. Spectroscopic studies of the human heart conduction system ex vivo: implication for optical visualization. // Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. - 2008. - № 2 (92). - C. 128-34.

12. Baraga J. J. et al. Characterization of the fluorescent morphological structures in human arterial wall using ultraviolet-excited microspectrofluorimetry //Atherosclerosis. - 1991. - T. 88. - №. 1. - C. 1-14.

13. Baraga J. J. et al. Laser induced fluorescence spectroscopy of normal and atherosclerotic human aorta using 306-310 nm excitation //Lasers in surgery and medicine. - 1990. - T. 10. - №. 3. - C. 245-261.

14. Baraga J. J. et al. Ultraviolet laser induced fluorescence of human aorta //Spectrochimica Acta Part A: Molecular Spectroscopy. - 1989. - T. 45. - №. 1. -C. 95-99.

15. Bartorelli A. L. et al. In vivo human atherosclerotic plaque recognition by laser-excited fluorescence spectroscopy //Journal of the American College of Cardiology. - 1991. - T. 17. - №. 6s2. - C. 160-168.

16. Batioglu F. et al. Autofluorescence patterns as a predictive factor for neovascularization. // Optometry and vision science: official publication of the American Academy of Optometry. 2014. № 8 (91). C. 950-5.

17. Bhartia R. et al. Classification of Organic and Biological Materials with Deep Ultraviolet Excitation // Applied Spectroscopy. - 2008. - № 10 (62). - C. 1070-7.

18. Borisova E. et al. Endogenous and exogenous fluorescence of gastrointestinal tumors: initial clinical observations // Seventeenth International School on Quantum Electronics: Laser Physics and Applications. - 2013. -T. 8770. - C. 87701C.

19. Borisova E. et al. Light-induced autofluorescence and diffuse reflectance spectroscopy in clinical diagnosis of skin cancer // Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. - 2014. -T. 9129. - C. 91291O1-8.

20. Borisova E. et al. Polarization sensitive excitation-emission matrices for detection of colorectal tumours - initial investigations // Journal of Physics: Conference Series. - 2015. -T. 594. - C. 12031.

21. Bottiroli G. et al. Brain tissue autofluorescence: an aid for intraoperative delineation of tumor resection margins //Cancer detection and prevention. - 1997. - T. 22. - №. 4. - C. 330-339.

22. Bruschi G. et al. The endomyocardial biopsy initially described by Caves in 1973 remains the standard method for detection of rejection following heart transplantation. //J. Cardiovasc. Med. (Hagerstown). - 2013. - T. 14 - №9 - C. 637-647.

23. Butte P. V. et al. Fluorescence lifetime spectroscopy for guided therapy of brain tumors //Neuroimage. - 2011. - T. 54. - C. S125-S135.

24. Cabredo S., Parra A., Anzano J. Bacteria spectra obtained by laser induced fluorescence. // Journal of fluorescence. - 2007. - № 2 (17). - C. 171-80.

25. Canter C. et al. Survival and Risk Factors for Death After Cardiac Transplantation in Infants A Multi-institutional Study //Circulation. - 1997. - T. 96. - №. 1. - C. 227-231.

26. Capasso L. et al. Bone natural autofluorescence and confocal laser scanning microscopy: Preliminary results of a novel useful tool to distinguish between forensic and ancient human skeletal remains // Forensic Science International. -2017. - T. 272. - C. 87-96.

27. Chagnot C. et al. Deep UV excited muscle cell autofluorescence varies with the fibre type // Analyst. - 2015. - № 12 (140). - C. 4189-4196.

28. Chaudhry H. W. et al. Alteration of spectral characteristics of human artery wall caused by 476-nm laser irradiation //Lasers in surgery and medicine. - 1989. - T. 9. - №. 6. - C. 572-580.

29. Cheong W. F., Prahl S. A., Welch A. J. A review of the optical properties of biological tissues //iEEE J. Quantum Electronics. - 1990. - T. 26. - C. 21662185.

30. Christov A. et al. Detection of transplant vasculopathy in a rat aortic allograft model by fluorescence spectroscopic optical analysis //Lasers in surgery and medicine. - 1999. - T. 24. - №. 5. - C. 346-359.

31. Christov A. et al. Optical detection of triggered atherosclerotic plaque disruption by fluorescence emission analysis //Photochemistry and photobiology. - 2000. -T. 72. - №. 2. - C. 242-252.

32. Christov A. M. et al. Laser-induced fluorescence (LIF) recognition of the structural composition of porcine heart valves //Photochemistry and photobiology. - 1999. - T. 69. - №. 3. - C. 382.

33. Chu S.C., Chiang H.K. Monte Carlo Simulation of Fluorescence Spectra of Normal and Dysplastic Cervical Tissues for Optimizing Excitation/Receiving Arrangements // Applied Spectroscopy. - 2010. - № 7 (64). - C. 708-13.

34. Chuck R. S. et al. 193-nm Excimer Laser-Induced Fluorescence Detection of Fluoroquinolonesin Rabbit Corneas //Archives of Ophthalmology. - 2004. - T. 122. - №. 11. - C. 1693-1699.

35. Chung Y. G. et al. Fluorescence of normal and cancerous brain tissues: the excitation/emission matrix //OE/LASE'94. - International Society for Optics and Photonics, 1994. - C. 66-75.

36. Chwirot B. W. et al. Ultraviolet laser-induced fluorescence of human stomach tissues: Detection of cancer tissues by imaging techniques //Lasers in surgery and medicine. - 1997. - T. 21. - №. 2. - C. 149-158.

37. Clarke R. H. et al. Spectroscopic characterization of cardiovascular tissue //Lasers in surgery and medicine. - 1988. - T. 8. - №. 1. - C. 45-59.

38. Coda S. et al. Fluorescence lifetime spectroscopy of tissue autofluorescence in normal and diseased colon measured ex vivo using a fiber-optic probe. // Biomedical optics express. - 2014. № 2 (5). - C. 515-38.

39. Cothren R. M. et al. Gastrointestinal tissue diagnosis by laser-induced fluorescence spectroscopy at endoscopy //Gastrointestinal Endoscopy. - 1990. -T. 36. - №. 2. - C. 105-111.

40. Cutruzzola F. W. et al. Change in laser-induced arterial fluorescence during ablation of atherosclerotic plaque //Lasers in surgery and medicine. - 1989. - T. 9.

- №. 2. - C. 109-116.

41. Daniels M. et al. Intrinsic fluorescence of B and Z forms of poly d(G-m5C).poly d(G-m5C), a synthetic double-stranded DNA: spectra and lifetimes by the maximum entropy method. // Photochemical & photobiological sciences. - 2007.

- № 8 (6). - C. 883-93.

42. Deckelbaum L. I. et al. Fluorescence spectroscopy guidance of laser ablation of atherosclerotic plaque //Lasers in surgery and medicine. - 1989. - T. 9. - №. 3. -C. 205-214.

43. Deckelbaum L. I. et al. Evaluation of a fluorescence feedback system for guidance of laser angioplasty //Lasers in surgery and medicine. - 1995. - T. 16. - №. 3. - C. 226-234.

44. Deli A. et al. Comparison of fundus autofluorescence images acquired by the confocal scanning laser ophthalmoscope (488 nm excitation) and the modified Topcon fundus camera (580 nm excitation) // International Ophthalmology. -2013. - № 6 (33). - C. 635-643.

45. Dhingra J. K. et al. Early diagnosis of upper aerodigestive tract cancer by autofluorescence //Archives of Otolaryngology-Head & Neck Surgery. - 1996. -T. 122. - №. 11. - C. 1181-1186.

46. Di Lullo G. A. et al. Mapping the ligand-binding sites and disease-associated mutations on the most abundant protein in the human, type I collagen //Journal of Biological Chemistry. - 2002. - T. 277. - №. 6. - C. 4223-4231.

47. Drakaki E. et al. Laser induced autofluorescence for diagnosis of non-melanoma skin cancer // Eighteenth International School on Quantum Electronics: Laser Physics and Applications. - 2015. - T. 9447. - C. 94470Y.

48. Dreyer C., Mildner F. III-Nitride Ultraviolet Emitters / C. Dreyer, F. Mildner, 2016. 415-434 c.

49. Druzhinin I. Using laser-induced fluorescent spectroscopy at different the posterior capsule opacification after phacoemulsification / Druzhinin I., Larionov P., Maslov N. // XXIX Congress of the ESCRS, Vienna, Austria, 17-21 September 2011. - 2011.

50. Duisdieker V. et al. Long-Term Follow-Up of Fundus Autofluorescence Imaging Using Wide-Field Scanning Laser Ophthalmoscopy // Ophthalmologica. 2015. № 4 (234). C. 218-226.

51. Eftink M. R. Intrinsic fluorescence of proteins // Topics in fluorescence spectroscopy. - Springer US, 2002. - C. 1-15.

52. Eker C. et al. Clinical spectral characterisation of colonic mucosal lesions using autofluorescence and 5 aminolevulinic acid sensitisation // Gut. - 1999. - T. 44. -№. 4. - C. 511-518.

53. Fatyukhina O.E. et al. The approaches to developing a new method to control the viability of cells and tissues using laser - induced fluorescence, the study of the UV-radiation effect on native tissues and cells / Fatyukhina O. E., Kolokoltsova T. D., Troshkova G. P., Maslov N. A., Malov A. N., Orishich A. M., Larionov P. M. // International Conference on the Methods of Aerophysical Research: Proceedings Part IV. Novosibirsk, Russia. - 2004. - C. 115-120.

54. Fatyukhina O.E. et al. The Effect of Laser UV-Irradiation on a model system of cultivated cells / Fatyukhina O.E., Troshkova G.P., Kolokoltsova T.D., Maslov N.A., Malov A.N., Orishich, A.M. // Biotechnology and Medicine. - New York: Nova Science Publishers, Inc. - 2004. - C. 31-36.

55. Fereidouni F. et al. Microscopy with UV Surface Excitation (MUSE) for slide-free histology and pathology imaging // Progress in Biomedical Optics and Imaging -Proceedings of SPIE. 2015. (9318). C. 93180F.

56. Ferulova I., Lihachev A., Spigulis J. Photobleaching effects on in vivo skin autofluorescence lifetime // Journal of Biomedical Optics. - 2015. - № 5 (20). -C. 51031.

57. Fomin V. M. et al. Determination of myocardium viability on the basis of the spectra of laser-induced fluorescence / Fomin V.M., Karaskov A.M., Larionov P.M., Malov A.N., Maslov N.A., Orishich A.M. // Doklady Biological Sciences. -MAIK Nauka/Interperiodica, 2003. - T. 391. - №. 1. - C. 296-298.

58. Fomin V.M. et al. Development of diagnostic technique for biological subjects with LIF excited by pulse UV lasers / Fomin V. M., Orishich A. M., Kolokoltsova T. D., Kushnir A. V., Larionov P. M., Malov A. N., Maslov N. A., Maslova L. N., Titov A. T. // International Conference on the Methods of Aerophysical Research: Proceedings Part III. Novosibirsk, Russia. - 2004. - C. 71-76.

59. Fu Y., Zhang J., Lakowicz J.R. Highly efficient detection of single fluorophores in blood serum samples with high autofluorescence. // Photochemistry and photobiology. - 2009. - № 3 (85). - C. 646-51.

60. Gaffney E. J. et al. Correlation of fluorescence emission with the plaque content and intimal thickness of atherosclerotic coronary arteries // Lasers in surgery and medicine. - 1989. - T. 9. - №. 3. - C. 215-228.

61. Garrand T. J. et al. Characterization of the site dependency of normal canine arterial fluorescence // Lasers in surgery and medicine. - 1990. - T. 10. - №. 4. -C. 375-383.

62. Geschwind H. J. et al. Results and follow-up after percutaneous pulsed laserassisted balloon angioplasty guided by spectroscopy // Circulation. - 1991. - T. 83. - №. 3. - C. 787-796.

63. Ghadially F. N. Red fluorescence of experimentally induced and human tumours // The Journal of Pathology and Bacteriology. - 1960. - T. 80. - №. 2. - C. 345351.

64. Ghadially F. N., Neish W. J. P., Dawkins H. C. Mechanisms involved in the production of red fluorescence of human and experimental tumours // The Journal of pathology and bacteriology. - 1963. - T. 85. - №. 1. - C. 77-92.

65. Gillenwater A., Jacob R., Richards-Kortum R. Fluorescence spectroscopy: a technique with potential to improve the early detection of aerodigestive tract neoplasia // Head & neck. - 1998. - T. 20. - №. 6. - C. 556-562.

66. Gobinet C., Perrin E., Huez R. Application of Non-negative Matrix Factorization to Fluorescence Spectroscopy // Eusipco. - 2004. - C. 1095-1098.

67. Göbel A.P. et al. In-vivo mapping of drusen by fundus autofluorescence and spectral-domain optical coherence tomography imaging. // Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv für klinische und experimentelle Ophthalmologie. - 2016. - № 1 (254). - C. 59-67.

68. Gott J. P. et al. Calcification of porcine valves: a successful new method of antimineralization // The Annals of thoracic surgery. - 1992. - T. 53. - №. 2. - C. 207-216.

69. Hariri L. P. et al. Ex vivo optical coherence tomography and laser-induced fluorescence spectroscopy imaging of murine gastrointestinal tract // Comparative medicine. - 2007. - T. 57. - №. 2. - C. 175-185.

70. Harris D. M., Werkhaven J. Endogenous porphyrin fluorescence in tumors //Lasers in surgery and medicine. - 1987. - T. 7. - №. 6. - C. 467-472.

71. Heintzelman D. L., Lotan R., Richards-Kortum R. R. Characterization of the autofluorescence of polymorphonuclear leukocytes, mononuclear leukocytes and cervical epithelial cancer cells for improved spectroscopic discrimination of inflammation from dysplasia //Photochemistry and photobiology. - 2000. - T. 71. - №. 3. - C. 327-332.

72. Heintzelman D.L. h gp. Optimal excitation wavelengths for in vivo detection of oral neoplasia using fluorescence spectroscopy // Photochem. Photobiol. 2000. -T. 72. - № 1. - C. 103-113.

73. Hu S. et al. Fluorescence-guided resection of brain tumor: review of the significance of intraoperative quantification of protoporphyrin IX fluorescence review of the significance of intraoperative // Neurophotonics. - 2017. - № 1 (4). - C. 2-7.

74. Huang Z. et al. Laser-induced autofluorescence microscopy of normal and tumor human colonic tissue. // International journal of oncology. - 2004. - № 1 (24). -C. 59-63.

75. Huennekens J., Gallagher A. Radiation diffusion and saturation in optically thick Na vapor //Physical Review A. - 1983. - T. 28. - №. 1. - C. 238.

76. Hung J. et al. Autofluorescence of normal and malignant bronchial tissue //Lasers in surgery and medicine. - 1991. - T. 11. - №. 2. - C. 99-105.

77. Hyde J. A. J. et al. Immunohistochemical identification of complement membrane attack complex and subclinical iscemia in donor hearts // 12 th Annual Meetting of the EACTS. - 1998.

78. Jen C. P., Hsiao J. H., Maslov N. A. Single-cell chemical lysis on microfluidic chips with arrays of microwells / Jen C. P., Hsiao J. H., Maslov N. A. // Sensors. -2011. - T. 12. - №. 1. - C. 347-358.

79. Jen C.-P. Particle focusing in a contactless dielectrophoretic microfluidic chip with insulating structures / Jen C.-P., Maslov N.A., Shih H.-Y., Hsiao F.-B., Lee Y.-C. // Microsystem Technologies. - 2012. - T. 18. - № 11. - C. 1879-1886.

80. Joseph B. et al. Detection and quantification of dental plaque based on laser-induced autofluorescence intensity ratio values // Journal of Biomedical Optics. -2015. - № 4 (20). - C. 48001.

81. Kamath S.D. et al. Autofluorescence of normal, benign, and malignant ovarian tissues: a pilot study. // Photomedicine and laser surgery. - 2009. - № 2 (27). - C. 325-35.

82. Kaneko S., Kaneko S. Fluorescence-guided resection of malignant glioma with 5-ALA //Int. J. Biomed. Imaging. - 2016. - C. 2016:6135293.

83. Kanniyappan U. et al. An in vitro diagnosis of oral premalignant lesion using time-resolved fluorescence spectroscopy under UV excitation- a pilot study. // Photodiagnosis and photodynamic therapy. - 2016. - №14. - C. 18-24.

84. Kapadia C. R. et al. Laser-induced fluorescence spectroscopy of human colonic mucosa. Detection of adenomatous transformation // Gastroenterology. - 1990. -T. 99. - №. 1. - C. 150-157.

85. Kirkpatrick N.D. et al. In vitro model for endogenous optical signatures of collagen. // Journal of biomedical optics. - 2006. - № 5 (11). - C. 54021.

86. Kochevar I. E. Cytotoxicity and mutagenicity of excimer laser radiation // Lasers in surgery and medicine. - 1989. - T. 9. - №. 5. - C. 440-445.

87. Koenig F. et al. Laser induced autofluorescence diagnosis of bladder cancer // The Journal of urology. - 1996. - T. 156. - №. 5. - C. 1597-1601.

88. Kolli V. R. et al. Native cellular fluorescence of neoplastic upper aerodigestive mucosa // Archives of Otolaryngology-Head & Neck Surgery. - 1995. - T. 121. -№. 11. - C. 1287-1292.

89. Koumantakis E. et al. Spectral variations of laser-induced tissue emission during in vivo detection of malignancies in the female genital tract // Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. - 1997. - T. 40. - №. 2. - C. 183186.

90. Krivoshapkin A., Gaytan A., Maslov N. 5-ALA Based Technology New Device for Safe Maximal Resection of Malignant Gliomas / Krivoshapkin A., Gaytan A., Maslov N. // EORTC, EANO, ESMO Conference 2013 Trends in Central Nervous System Malignancies, 22-23.03.2013, Prague, Czech Republic, Programme book. - 2013. - Abstract №123.

91. Krivoshapkin A. 5-ALA-based technology new device for intraoperative diagnostics of malignant glioma margins / Krivoshapkin A., Gaytan A., Maslov N.A., Mordvinov V. // The 5th Russian-Japanese neurosurgical symposium (Russia, Kazan, 22-25 June, 2016). - 2016. - C. 11.

92. Kroemer G., Dallaporta B., Resche-Rigon M. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis // Annual review of physiology. - 1998. - T. 60. - №. 1. - C. 619-642.

93. Kshettry V. R. et al. Does donor organ ischemia over four hours affect long-term survival after lung transplantation? // The Journal of heart and lung transplantation: the official publication of the International Society for Heart Transplantation. - 1996. - T. 15. - №. 2. - C. 169-174.

94. Kushnir A. V. et al. Study of heart tissue viability using fluorescent probes and native laser-induced fluorescence / Kushnir A.V., Larionov P.M., Litasova E.E., Malov A.N., Mandrik M.M., Maslov N.A., Orishich A.M., Vasilieva M.B. // Proceedings of SPIE. - 2002. - T. 4900. - C. 1039-1044.

95. Kusunoki Y. et al. Early detection of lung cancer with laser-induced fluorescence endoscopy and spectrofluorometry // CHEST Journal. - 2000. - T. 118. - №. 6. -C.1776-1782.

96. Lacroix M. et al. A multivariate analysis of 416 patients with glioblastoma multiforme: prognosis, extent of resection, and survival // Journal of neurosurgery. - 2001. - T. 95. - №. 2. - C. 190-198.

97. Laifer L. I. et al. Biochemical basis for the difference between normal and atherosclerotic arterial fluorescence // Circulation. - 1989. - T. 80. - №. 6. - C. 1893-1901.

98. Lam S. et al. Localization of bronchial intraepithelial neoplastic lesions by fluorescence bronchoscopy // CHEST Journal. - 1998. - T. 113. - №. 3. - C. 696702.

99. Lange B., Cordes J., Brinkmann R. Stone/tissue differentiation for holmium laser lithotripsy using autofluorescence // Lasers in Surgery and Medicine. - 2015. - № 9 (47). - C. 737-744.

100. Larionov P. M. et al. Changes in the laser-induced fluorescence spectrum of myocardium tissue with decrease in its viability / Larionov P.M., Malov A.N.,

Mandrik M.M., Maslov N.A., Orishich A.M. //Journal of Applied Spectroscopy. -2003. - T. 70. - №. 1. - C. 38-42.

101. Larionov P.M. Designing the method for optical in vitro monitoring of the cellmediated scaffold technology for bone regeneration based on laser-induced fluorescence spectroscopy / Larionov P.M., Maslov N.A., Papaeva E.O., Tereshchenko V.P., Khlestkin V.K., Bogachev S.S., Proskurina A.S., Titov A.T., Filipenko M.L., Pavlov V.V., Kudrov G.A., Orishich A.M. // Proceedings AIP Conference. - 2016. - T. 1760. - S. 020041.

102. Larionov P. M. et al. Influence of mineral components on laser-induced fluorescence spectra of calcified human heart-valve tissues / Larionov P.M., Malov A.N., Maslov N.A., Orishich A.M., Titov A.T., Shchukin, V. S. // Applied optics. - 2000. - T. 39. - №. 22. - C. 4031-4036.

103. Larionov P. M. et al. Influence of the mineral component in biotissues affected by calcinosis on their laser-induced fluorescence spectrum / Larionov P.M., Malov A.N., Maslov N.A., Orishich A.M., Titov A.T., Shchukin V.S. // Journal of Applied Spectroscopy. - 1999. - T. 66. - №. 6. - C. 989-993.

104. Larionov P.M. et al. Evolution of a method of biotissue state diagnostics with a laser-induced fluorescence excited by impulse UV-lasers / Larionov P. M., Malov A. N., Maslov N.A., Orishich A.M., Rojin I.A. // New Technology in Integrative Medicine and Biology: International scientific interdisciplinary workshop. Bangkok-Pattaya, Thailand. - 2006. - C. 42-44.

105. Larionov P.M. et al. Investigation of the effect of UV-radiation dose on biological tissues and determination of myocardium viability on the basis of the laser-induced fluorescence spectra / Larionov P.M., Malov A.N., Maslov N.A., Orishich A.M. // International Conference on the Methods of Aerophysical Research: Proceedings Part III. Novosibirsk, Russia. - 2004. - C. 107-112.

106. Larionov P.M. et al. The effect of UV radiation dose on biological tissues' laser-induced fluorescence spectra / Larionov P. M., Malov A. N., Maslov N.A., Orishich A. M. // Proceedings of SPIE. - 2004. - T. 5474. - C. 385-388.

107. Laufer G. et al. Characteristics of 308 nm excimer laser activated arterial tissue photoemission under ablative and non-ablative conditions // Lasers in surgery and medicine. - 1989. - T. 9. - №. 6. - C. 556-571.

108. Laufer G. et al. Excimer laser-induced simultaneous ablation and spectral identification of normal and atherosclerotic arterial tissue layers // Circulation. -1988. - T. 78. - №. 4. - C. 1031-1039.

109. Leon M. B. et al. Human arterial surface fluorescence: atherosclerotic plaque identification and effects of laser atheroma ablation // Journal of the American College of Cardiology. - 1988. - T. 12. - №. 1. - C. 94-102.

110. Li B. H., Xie S. S. Autofluorescence excitation-emission matrices for diagnosis of colonic cancer // World journal of gastroenterology. - 2005. - T. 11. - №. 25. - C. 3931.

111. Li X. et al. Detection of colon cancer by laser induced fluorescence and raman spectroscopy // Engineering in Medicine and Biology Society, 2005. IEEE-EMBS 2005. 27th Annual International Conference of the. - IEEE, 2006. - C. 69616964.

112. Lian X. et al. Robust cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells via temporal modulation of canonical Wnt signaling // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2012. - T. 109. - №. 27. - C. E1848-E1857.

113. Lidman G. Y. et al. Laser-Induced Fluorescence and X-Ray Spectral Analysis of Carious Process in Hard Dental Tissues / Lidman G.Y., Larionov P.M., Savchenko S.V, Lushnikova E.L., Orishich A.M., Rozhin I.A., Malov A.N., Maslov N.A., Titov A.T., Kositsyna, I. G // Bulletin of experimental biology and medicine. -2010. - T. 149. - №. 3. - C. 373-376.

114. Lin B. et al. Characterizing the origin of autofluorescence in human esophageal epithelium under ultraviolet excitation. // Optics express. 2010. - № 20 (18). - C. 21074-82.

115. Lin B. et al. Endomicroscopy imaging of epithelial structures using tissue autofluorescence // Journal of biomedical optics. - 2011. - T. 16. - №. 4. - C. 046014.

116. Lin B. et al. Real-time microscopic imaging of esophageal epithelial disease with autofluorescence under ultraviolet excitation. // Optics express. - 2009. - № 15 (17). - C. 12502-9.

117. Lin W. et al. Classification of in vivo autofluorescence spectra using support vector machines. // Journal of biomedical optics. - 2004. - № 1 (9). - C. 180-186.

118. Loning M. et al. [Fluorescence diagnosis and photodynamic therapy with 5-aminolevulinic acid induced protoporphyrin IX in gynecology: an overview] // Zentralblatt fur Gynakologie. - 2006. - T. 128. - №. 6. - C. 311-317.

119. Lu H.H. et al. Molecular Imaging of Ischemia and Reperfusion in Vivo with Mitochondria! Autofluorescence // Analytical Chemistry. - 2014. - № 10 (86). -C.5024-5031.

120. Mahadevan A. et al. Study of the fluorescence properties of normal and neoplastic human cervical tissue // Lasers in surgery and medicine. - 1993. - T. 13. - №. 6. -C. 647-655.

121. Majumder S.K. et al. A probability-based spectroscopic diagnostic algorithm for simultaneous discrimination of brain tumor and tumor margins from normal brain tissue. // Applied spectroscopy. - 2007. - № 5 (61). - C. 548-57.

122. Mandelis A., Kwan C.-H., Matvienko A. Dynamic photophysical processes in laser-irradiated human cortical skull bone measured by means of modulated diffuse luminescence // Physical Review E. - 2009. - № 2 (80). - C. 21920.

123. Marchesini R. et al. Light-induced fluorescence spectroscopy of adenomas, adenocarcinomas and non-neoplastic mucosa in human colon I. In vitro measurements // Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. - 1992. - T. 14. - №. 3. - C. 219-230.

124. Marcu L. et al. Fluorescence lifetime spectroscopy of glioblastoma multiforme. // Photochemistry and photobiology. 2004. № 1 (80). C. 98-103.

125. Marcu L. et al. In vivo detection of macrophages in a rabbit atherosclerotic model by time-resolved laser-induced fluorescence spectroscopy // Atherosclerosis. -2005. - T. 181. - №. 2. - C. 295-303.

126. Marcu L. L. et al. Detection of rupture-prone atherosclerotic plaques by time-resolved laser-induced fluorescence spectroscopy // Atherosclerosis. - 2009. - T. 204. - №. 1. - C. 156-164.

127. Marcu L., Grundfest W. S., Maarek J. M. I. Photobleaching of Arterial Fluorescent Compounds: Characterization of Elastin, Collagen and Cholesterol Time-resolved Spectra during Prolonged Ultraviolet Irradiation // Photochemistry and photobiology. - 1999. - T. 69. - №. 6. - C. 713-721.

128. Maslov N. A. et al. Laser-induced fluorescence spectroscopy of the secondary cataract / Maslov N.A., Larionov P.M., Rozhin I.A., Druzhinin I.B., Chernykh V.V. // Optics and Spectroscopy. - 2016. - T. 120. - №. 6. - C. 983-987.

129. Maslov N. A. Statistical analysis of excitation-emission matrices for laser-induced fluorescence spectroscopy / Maslov N. A., Papaeva E. O // Technical Physics Letters. - 2016. - T. 42. - №. 7. - C. 718-721.

130. Maslov N. et al. Investigation of human brain malignant gliomas laser-induced fluorescence / Maslov N., Krivoshapkin A., Gaitan A., Rojin I. // Taiwan-Russia Symposium on Methods of Mechanics for Physiology and Cell Biology, Taiwan, November 08-11, 2013. - 2013. - C. 12.

131. Maslov N.A. et al. Cardiac tissue diagnostics based on intrinsic fluorescence excited by pulsed UV lasers / Maslov N. A., Malov A. N., Orishich A.M., Rojin I.A., Larionov P. M., Potapenko M.M. // Atomic and Molecular Pulsed Lasers: International Conference. Tomsk, Russia. - 2007.

132. Maslov N.A. et al. Development of noninvasive medical diagnostics based on intrinsic fluorescence excited by UV lasers / Maslov N. A., Malov A. N., Orishich A.M., Rojin I.A., Fatyukhina O.E., Larionov P.M., Mandrik M.M., Subbotin D.V. // Taiwan-Russia Symposium on Numerical and Experimental Modeling of

Microprocesses and Its Application in Continuum Mechanics. Tainan, Taiwan. -

2006. - Paper II-4.

133. Maslov N.A. et al. Development of UV-laser exited fluorescent technique for cardiac tissue diagnostics / Maslov N.A., Malov A.N., Orishich A.M., Rojin I.A., Larionov P.M., Potapenko M.M., Subbotin D.V. // International Conference on the Methods of Aerophysical Research: Proceedings Part II. Novosibirsk, Russia. -

2007. - C. 109-114.

134. Maslov N.A. et al. Laser fluorescent diagnostics of blood vessels during biotechnology of acellular graft preparation / Maslov N.A., Subbotin D.V., Rojin I.A., Larionov P.M., Orishich A.M. // Atomic and Molecular Pulsed Lasers: International Conference. Tomsk, Russia. - 2009 - C. 43.

135. Maslov N.A. et al. Low-invasive diagnostics of cardiac tissues using 248nm laser-induced autofluorescence / Maslov N. A., Malov A. N., Orishich A.M., Rojin I.A., Larionov P.M., Potapenko M.M., Subbotin D.V. // Laser Applications in Life Sciences. Moscow, Russia. - 2007.

136. Maslov N.A. Investigation of UV laser radiation effect on Krebs 2 cells viability / Maslov N.A., Rojin I.A., Popova N.A., Nikolin V.P., Kaledin V.I., Amstislavskaya T.G. // 15th International Conference On The Methods Of Aerophysical Research, November 01 - 06, 2010, Novosibirsk, Russia, Abstracts. - Part II. - C. 169.

137. Maslov N.A. Laser-induced fluorescence excitation-emission matrices of cancer cells / Maslov N.A., Rojin I.A., Popova N.A., Nikolin V.P., Kaledin V.I., Amstislavskaya T.G., Jen C.-P. // Taiwan-Russia Bilateral Symposium on Mechanical Engineering, November 06-14, 2011, National Tsing Hua University, HinChu, Taiwan. - 2011.

138. Maslov N.A. Principal component analysis of laser-induced fluorescence spectra of blood vessels / Maslov N.A., Subbotin D.V., I.A. Rojin, Larionov P.M. , Orishich A.M. // 15th International Conference On The Methods Of Aerophysical

Research, November 01 - 06, 2010, Novosibirsk, Russia, Abstracts. - Part II. - C. 170.

139. Maslov N.A., Malov A.N., Orishich A.M. Investigation on creating of the laser-induced fluorescence diagnostics of condition of heart tissues, transplants and allografts in cardiosurgery / Maslov N.A., Malov A.N., Orishich A.M. // The Fifth international symposium Modren Problems of Laser Physics. Novosibirsk, Russia. - 2008.

140. Mayevsky A. et al. Real time monitoring of intraoperative allograft vitality // Transplantation proceedings. - Elsevier, 2000. - T. 32. - №. 4. - C. 684-685.

141. Morgan D. C. et al. New method for detection of heart allograft rejection validation of sensitivity and reliability in a rat heterotopic allograft model // Circulation. - 1999. - T. 100. - №. 11. - C. 1236-1241.

142. Morguet A. J. et al. Autofluorescence spectroscopy using a XeCl excimer laser system for simultaneous plaque ablation and fluorescence excitation // Lasers in surgery and medicine. - 1994. - T. 14. - №. 3. - C. 238-248.

143. Morguet A. J. et al. Single-laser approach for fluorescence guidance of excimer laser angioplasty at 308 nm: Evaluation in vitro and during coronary angioplasty //Lasers in surgery and medicine. - 1997. - T. 20. - №. 4. - C. 382-393.

144. Najda S.P. et al. A multi-wavelength (u.v. to visible) laser system for early detection of oral cancer // Progress in Biomedical Optics and Imaging -Proceedings of SPIE. 2015. (9328). C. 1-6.

145. Nam K.T. et al. Central serous chorioretinopathy fundus autofluorescence comparison with two different confocal scanning laser ophthalmoscopes. // Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. - 2015. - № 12 (253). - C. 2121-2127.

146. Neher R.A. h gp. Blind source separation techniques for the decomposition of multiply labeled fluorescence images // Biophys. J. - 2009. - T. 96. - № 9. - C. 3791-3800.

147. Novak K. US FDA to issue new rules on xenotransplantation //Nature medicine. -1998. - T. 4. - №. 8. - C. 876.

148. O'Melia M.J. et al. FLIM data analysis of NADH and Tryptophan autofluorescence in prostate cancer cells // Progress in Biomedical Optics and Imaging - Proceedings of SPIE. - 2016. - T. 9712. - C. 1-6.

149. Opoku-Ansah J. et al. Laser-Induced Autofluorescence Technique for Plasmodium falciparum Parasite Density Estimation // Applied Physics Research. - 2016. - № 2 (8). - C. 43.

150. Oraevsky A. A. et al. XeCl laser ablation of atherosclerotic aorta: luminescence spectroscopy of ablation products //Lasers in surgery and medicine. - 1993. - T. 13. - №. 2. - C. 168-178.

151. Oraevsky A. A. et al. XeCl laser-induced fluorescence of atherosclerotic arteries. Spectral similarities between lipid-rich lesions and peroxidized lipoproteins // Circulation research. - 1993. - T. 72. - №. 1. - C. 84-90.

152. Orishich A.M. et al. 248nm laser induced fluorescence of biological tissues and cell cultures with different viability. Spectroscopic studies and imaging. / Orishich A.M., Malov A.N., Maslov N.A., Rojin I.A., Kolokoltsova T.D., Fatyukhina O.E., Larionov P.M., Mandrik M.M., Subbotin D.V. //Advances in optics for biotechnology, medicine and surgery. Copper Mountain, Colorado, USA. - 2005 - Poster #16.

153. Orthaus S. et al. Crossing the Limit Towards Deep UV Time-resolved microscopy of native fluorophores // Optik&Photonik. - 2013. - № 1. - C. 33-36.

154. Osawa H. et al. Blue laser imaging provides excellent endoscopic images of upper gastrointestinal lesions // Video Journal and Encyclopedia of GI Endoscopy. -2014. - № 3-4 (1). - C. 607-610.

155. Palmer S. et al. Discrimination of healthy and cancer cells of the bladder by metabolic state, based on autofluorescence // SPIE BiOS. - 2015. - T. 9303. - C. 93030T.

156. Panjehpour M. et al. Laser-induced fluorescence spectroscopy for in vivo diagnosis of non-melanoma skin cancers //Lasers in surgery and medicine. - 2002.

- T. 31. - №. 5. - C. 367-373.

157. Panjehpour M. et al. Spectroscopic diagnosis of esophageal cancer: new classification model, improved measurement system // Gastrointestinal endoscopy.

- 1995. - T. 41. - №. 6. - C. 577-581.

158. Panou-Diamandi O. et al. A one layer tissue fluorescence model based on electromagnetic theory //Journal of electromagnetic waves and applications. -1998. - T. 12. - №. 8. - C. 1101-1121.

159. Papazoglou T. G. et al. Control of excimer laser aided tissue ablation via laser-induced fluorescence monitoring //Applied optics. - 1990. - T. 29. - №. 33. - C. 4950-4955.

160. Perk M. et al. Laser-induced fluorescence emission: I. The spectroscopic identification of fibrotic endocardium and myocardium // Lasers in surgery and medicine. - 1991. - T. 11. - C. 523-534.

161. Phillips A. F., McDonnell P. J. Laser-induced fluorescence during photorefractive keratectomy: a method for controlling epithelial removal // American journal of ophthalmology. - 1997. - T. 123. - №. 1. - C. 42-47.

162. Potapenko M.M. et al. Estimation of the ofmyocardium viability in the isolated heart by the method of laser-induced fluorescence / Potapenko M.M., Larionov P.M., Subbotin D.V., Sergeevichev D.S., Malov A.N., Maslov N.A., Orishich A.M. // International Conference on the Methods of Aerophysical Research: Proceedings Part II. Novosibirsk, Russia. - 2007. - C. 153-157.

163. Prabhu V. et al. Objective assessment of endogenous collagen in vivo during tissue repair by laser induced fluorescence // PLoS ONE. - 2014. - № 5 (9). - C. e98069.

164. Raman R. N. et al. A non-contact method and instrumentation to monitor renal ischemia and reperfusion with optical spectroscopy // Optics express. - 2009. - T. 17. - №. 2. - C. 894-905.

165. Raman R.N. et al. Evaluation of the contribution of the renal capsule and cortex to kidney autofluorescence intensity under ultraviolet excitation. // Journal of biomedical optics. - 2009. - № 2 (14). - C. 20505.

166. Ramanujam N. et al. Spectroscopic diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) in vivo using laser-induced fluorescence spectra at multiple excitation wavelengths // Lasers in surgery and medicine. - 1996. - T. 19. - №. 1. - C. 6374.

167. Reznicek L. et al. Role of wide-field autofluorescence imaging and scanning laser ophthalmoscopy in differentiation of choroidal pigmented lesions. // International journal of ophthalmology. - 2014. - № 4 (7). - C. 697-703.

168. Reznicek L. et al. Systematic analysis of wide-field fundus autofluorescence (FAF) imaging in posterior uveitis. // Current eye research. - 2014. - № 2 (39). -C. 164-171.

169. Richards-Kortum R. et al. 476 nm excited laser-induced fluorescence spectroscopy of human coronary arteries: applications in cardiology // American heart journal. -1991. - T. 122. - №. 4. - C. 1141-1150.

170. Richards-Kortum R. et al. A model for extraction of diagnostic information from laser induced fluorescence spectra of human artery wall // Spectrochimica Acta Part A: Molecular Spectroscopy. - 1989. - T. 45. - №. 1. - C. 87-93.

171. Richards-Kortum R. et al. A one-layer model of laser-induced fluorescence for diagnosis of disease in human tissue: applications to atherosclerosis // IEEE Transactions on biomedical engineering. - 1989. - T. 36. - №. 12. - C. 12221232.

172. Richards-Kortum R. et al. Spectral diagnosis of atherosclerosis using an optical fiber laser catheter // American heart journal. - 1989. - T. 118. - №. 2. - C. 381391.

173. Richards-Kortum R., Sevick-Muraca E. Quantitative optical spectroscopy for tissue diagnosis // Annual review of physical chemistry. - 1996. - T. 47. - №. 1. -C. 555-606.

174. Sanai N. et al. An extent of resection threshold for newly diagnosed glioblastomas: clinical article // Journal of neurosurgery. - 2011. - T. 115. - №. 1. - C. 3-8.

175. Sanai N., Berger M. S. Glioma extent of resection and its impact on patient outcome // Neurosurgery. - 2008. - T. 62. - №. 4. - C. 753-766.

176. Sartori M. et al. Laser-induced autofluorescence of human arteries // Circulation research. - 1988. - T. 63. - №. 6. - C. 1053-1059.

177. Satoh K., Bando M., Nakajima A. Fluorescence in human lens // Experimental eye research. - 1973. - T. 16. - №. 2. - C. 167-172.

178. Schäfauer C. et al. Detection of bladder urothelial carcinoma using in vivo noncontact, ultraviolet excited autofluorescence measurements converted into simple color coded images: A feasibility study // Journal of Urology. - 2013. - № 1 (190). - C. 271-277.

179. Schleusener J., Lademann J., Darvin M.E. Depth-dependent autofluorescence photobleaching using 325, 473, 633, and 785 nm of porcine ear skin ex vivo // Journal of Biomedical Optics. - 2017. - № 9 (22). - C. 91503.

180. Schlüter K. D., Piper H. M. Isolation and culture of adult ventricular cardiomyocytes //Practical methods in cardiovascular research. - Springer Berlin Heidelberg. - 2005. - C. 557-567.

181. Schomcker K. T. et al. Ultraviolet laser-induced fluorescence of colonic tissue: basic biology and diagnostic potential // Lasers in surgery and medicine. - 1992. -T. 12. - №. 1. - C. 63-78.

182. Setlow R., Doyle B. The action of monochromatic ultaviolet light on proteins // Biochimica et biophysica acta. - 1957. - T. 24. - C. 27-41.

183. Shin J.Y. et al. Fundus autofluorescence findings in central serous chorioretinopathy using two different confocal scanning laser ophthalmoscopes: correlation with functional and structural status // Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. - 2016. - № 8 (254). - C. 1537-1544.

184. Sinichkin Y. P. et al. In vivo fluorescence spectroscopy of the human skin: experiments and models // Journal of biomedical optics. - 1998. - T. 3. - №. 2. -C. 201-211.

185. Skomorokha D.P., Pigoreva Y.N., Salmin V. V. UV laser-induced fluorescence spectroscopy and laser Doppler flowmetry in the diagnostics of alopecia // Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. - 2016.

- № 983 (9917). - C. 991705.

186. Smith S.E. et al. Differential laser-induced perturbation spectroscopy using a deep-ultraviolet excimer laser. // Optics letters. - 2011. - № 11 (36). - C. 2116-8.

187. Sordillo L. et al. Optical spectral fingerprints of tissues from patients with different breast cancer histologies using a novel fluorescence spectroscopic device. // Technol. Cancer Res. Treat. - 2013. - T. 12. - № 5. - C. 455-461.

188. Steenbergen C. et al. Correlation between cytosolic free calcium, contracture, ATP, and irreversible ischemic injury in perfused rat heart // Circulation research.

- 1990. - T. 66. - №. 1. - C. 135-146.

189. Stelzle F. et al. Tissue discrimination by uncorrected autofluorescence spectra: a proof-of-principle study for tissue-specific laser surgery. // Sensors (Basel, Switzerland). - 2013. - № 10 (13). - C. 13717-13731.

190. Strebel R. T. et al. Excimer laser spectroscopy: Influence of tissue ablation on vessel wall fluorescence // Journal of laser applications. - 1998. - T. 10. - №. 1. -C. 34-40.

191. Stummer W. et al. Extent of resection and survival in glioblastoma multiforme: identification of and adjustment for bias // Neurosurgery. - 2008. - T. 62. - №. 3.

- C. 564-576.

192. Stummer W. et al. Fluorescence-guided surgery with 5-aminolevulinic acid for resection of malignant glioma: a randomised controlled multicentre phase III trial // The lancet oncology. - 2006. - T. 7. - №. 5. - C. 392-401.

193. Subbotin D. V et al. Dynamics of change of spectral characteristics on the laser-induced fluorescence on the stages of biotechnology of the acellular valve -

containing graft / Subbotin D.V., Larionov P.M., Potapenko M.M., Sergeevichev D.S., Malov A.N., Maslov N.A., Orishich A.M. // International Conference on the Methods of Aerophysical Research: Proceedings Part II. Novosibirsk, Russia. -2007. - C. 195-199.

194. Subbotin D. V. et al. Morphological evaluation of cytoarchitectonics of aortic graft at the biotechnological stage with analysis of changes in laser-induced fluorescence spectra / Subbotin D.V, Larionov P.M., Sergeevichev D.S., Subbotina O.A., Zaitsev G.S., Novruzov R.B., Orishich A.M., Malov A.N., Maslov N.A., Rozhin I.A., Lushnikova E.L., Nepomnyashih L. M. //Bulletin of experimental biology and medicine. - 2009. - T. 148. - №. 4. - C. 684-688.

195. Subhash N. et al. Tooth caries detection by curve fitting of laser-induced fluorescence emission: a comparative evaluation with reflectance spectroscopy. // Lasers in surgery and medicine. - 2005. - № 4 (37). - C. 320-328.

196. Sun Y. et al. Fluorescence lifetime imaging microscopy for brain tumor image-guided surgery //Journal of biomedical optics. - 2010. - T. 15. - №. 5. - C. 056022.

197. Sundelin K. et al. In vitro growth of lens epithelial cells from cataract patients-association with possible risk factors for posterior capsule opacification // The open ophthalmology journal. - 2014. - T. 8. - №. 1. - C. 19-23.

198. Tang G. C. et al. Pulsed and CW laser fluorescence spectra from cancerous, normal, and chemically treated normal human breast and lung tissues // Applied optics. - 1989. - T. 28. - №. 12. - C. 2337-2342.

199. Tang G. C., Pradhan A., Alfano R. R. Spectroscopic differences between human cancer and normal lung and breast tissues //Lasers in surgery and medicine. -1989. - T. 9. - №. 3. - C. 290-295.

200. Tang J. et al. Laser irradiative tissue probed in situ by collagen 380-nm fluorescence imaging //Lasers in surgery and medicine. - 2000. - T. 27. - №. 2. -C.158-164.

201. Tani M., Neely J. R. Role of intracellular Na+ in Ca2+ overload and depressed recovery of ventricular function of reperfused ischemic rat hearts. Possible involvement of H+-Na+ and Na+-Ca2+ exchange // Circulation Research. - 1989. -T. 65. - №. 4. - C. 1045-1056.

202. Tian F. et al. Rapamycin-Induced apoptosis in HGF-stimulated lens epithelial cells by AKT/mTOR, ERK and JAK2/STAT3 pathways // International journal of molecular sciences. - 2014. - T. 15. - №. 8. - C. 13833-13848.

203. Tuft S. et al. Characterization of the fluorescence spectra produced by excimer laser irradiation of the cornea // Investigative ophthalmology & visual science. -1990. - T. 31. - №. 8. - C. 1512-1518.

204. Tyurikova O. et al. Perspectives in Intraoperative Diagnostics of Human Gliomas // Computational and mathematical methods in medicine. - 2015. - T. 2015.

205. Ughi G.J. et al. Clinical Characterization of Coronary Atherosclerosis With Dual-Modality OCT and Near-Infrared Autofluorescence Imaging // JACC: Cardiovascular Imaging. - 2016. - № 11 (9). - C. 1304-1314.

206. Uherek M. et al. Alteration of time-resolved autofluorescence properties of rat aorta, induced by diabetes mellitus // Laser Physics. - 2016. - № 10 (26). - C. 105606.

207. Ushenko O.G. et al. System of scale-selective tomography of myocardium birefringence // Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. - 2015. - (9599). - C. 95991Z.

208. Ushenko Y.A. et al. Method of azimuthally stable Mueller-matrix diagnostics of blood plasma polycrystalline films in cancer diagnostics // Proceedings of SPIE -The International Society for Optical Engineering. - 2015. -T. 9258. - C. 925807.

209. Ushenko Y.A. Laser autofluorescence polarimetry of optically anisotropic structures of biological tissues in cancer diagnostics // Optics and Spectroscopy. -2015. - № 6 (118). - C. 1007-1016.

210. Utzinger U. et al. Performance estimation of diagnostic tests for cervical precancer based on fluorescence spectroscopy: effects of tissue type, sample size,

population, and signal-to-noise ratio // IEEE transactions on biomedical engineering. - 1999. - T. 46. - №. 11. - C. 1293-1303.

211. Valdes P. A. et al. Optical technologies for intraoperative neurosurgical guidance // Neurosurgical focus. - 2016. - T. 40. - №. 3. - C. E8.

212. Vanderlaan R. D. et al. Perioperative factors associated with in-hospital mortality or retransplantation in pediatric heart transplant recipients // The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. - 2014. - T. 148. - №. 1. - C. 282-289.

213. Venius J. et al. Visualization of human heart conduction system by means of fluorescence spectroscopy // Journal of biomedical optics. - 2011. - T. 16. - №. 10. - C. 107001.

214. Vescovi P. et al. Medication-Related Osteonecrosis of the Jaw: An Autofluorescence-Guided Surgical Approach Performed with Er:YAG Laser. // Photomedicine and laser surgery. - 2015. - № 8 (33). - C. 437-442.

215. Vidal F. et al. A simple model of laser-induced fluorescence under arbitrary optical thickness conditions at the excitation wavelength // Journal of Quantitative Spectroscopy and Radiative Transfer. - 2010. - T. 111. - №. 17. - C. 2528-2533.

216. Vo-Dinh T. et al. In vivo cancer diagnosis of the esophagus using differential normalized fluorescence (DNF) indices // Lasers in surgery and medicine. - 1995.

- T. 16. - №. 1. - C. 41-47.

217. Wagner F. D. et al. Procalcitonin, a donor-specific predictor of early graft failure-related mortality after heart transplantation // Circulation. - 2001. - T. 104. - №. suppl 1. - C. I-192-I-196..

218. Wagnieres G. A., Star W. M., Wilson B. C. In vivo fluorescence spectroscopy and imaging for oncological applications // Photochemistry and photobiology. - 1998.

- T. 68. - №. 5. - C. 603-632.

219. Walsh 1. Walsh G.L. Lasers for the early detection of lung cancer // Semin. Thorac. Cardiovasc. Surg. - 1993. - T. 5. - № 3. - C. 194-200.

220. Wang C. Y. et al. Diagnosis of oral cancer by light-induced autofluorescence spectroscopy using double excitation wavelengths //Oral oncology. - 1999. - T. 35. - №. 2. - C. 144-150.

221. Wang G., Platz C.P., Geng M.L. Probability-Based Differential Normalized Fluorescence Bivariate Analysis for the Classification of Tissue Autofluorescence Spectra // Applied Spectroscopy. - 2006. - № 5 (60). - C. 545-50.

222. Wang L. et al. Tryptophan as key biomarker to detect gastrointestinal tract cancer using non-negative biochemical analysis of native fluorescence and Stokes Shift spectroscopy // Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. - 2015. - № October 2016 (9318). - C. 93180X.

223. Wang M. et al. Autofluorescence Imaging and Spectroscopy of Human Lung Cancer // Applied Sciences. - 2016. - № 1 (7). - C. 32.

224. Welch A. J. et al. Propagation of fluorescent light //Lasers in surgery and medicine. - 1997. - T. 21. - №. 2. - C. 166-178.

225. Xu H.N. et al. Optical redox imaging indices discriminate human breast cancer from normal tissues // Journal of Biomedical Optics. - 2016. - № 11 (21). - C. 114003-114003.

226. Yan W. D. et al. Laser-induced fluorescence: III. Quantitative analysis of atherosclerotic plaque content // Lasers in surgery and medicine. - 1995. - T. 16. -№. 2. - C. 164-178.

227. Yuvaraj M. et al. Fluorescence spectroscopic characterization of salivary metabolites of oral cancer patients // Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. - 2014. - T. 130. - C. 153-160.

228. Zaak D. et al. Ultraviolet-excited (308 nm) autofluorescence for bladder cancer detection // Urology. - 2002. - T. 60. - №. 6. - C. 1029-1033.

229. Zagdi M. et al. Laser induced fluorescence in diagnostics of laryngeal cancer // Acta Oto-Laryngologica. - 1997. - T. 117. - №. sup527. - C. 125-127.

230. Zeng H. et al. The Dynamics of Laser-Induced Changes in Human Skin Autofluorescence—Experimental Measurements and Theoretical Modeling // Photochemistry and photobiology. - 1998. - Т. 68. - №. 2. - С. 227-236.

231. Zhelyazkova A. et al. Investigating different skin and gastrointestinal tract (GIT) pathologies ex vivo by autofluorescence spectroscopy and optical imaging // Proceedings of SPIE - The International Society for Optical Engineering. - 2017.

- (10226). - C. 1022615.

232. Zheng W. et al. Optimal excitation-emission wavelengths for autofluorescence diagnosis of bladder tumors // International journal of cancer. - 2003. - Т. 104. -№. 4. - С. 477-481.

233. Zonios G. et al. Spectral Pathology // Annals of the New York Academy of Sciences. - 1998. - Т. 838. - №. 1. - С. 108-115.

234. Zuclich J. A. et al. Near-UV/blue light-induced fluorescence in the human lens: potential interference with visual function // Journal of biomedical optics. - 2005.

- Т. 10. - №. 4. - С. 044021.

235. Zuluaga A.F. et al. Fluorescence Excitation Emission Matrices of Human Tissue: A System for in Vivo Measurement and Method of Data Analysis // Appl. Spectrosc. - 1999. - Т. 53. - № 3. - С. 302-311.

236. Бардаханов С. и др. Структура и свойства нанокерамики на основе оксида алюминия / Бардаханов С.П., Ким А., Лысенко В.И., Маслов Н.А., Номоев А.В., Рожин И.А., Труфанов Д. // Наноиндустрия. - 2009. - № 2. - С. 22-25.

237. Бардаханов С.П. и др. Структура и свойства керамики на основе нанодисперсных порошков оксида гадолиния и оксида иттрия / Бардаханов С.П., Лысенко В.И., Малов А.Н., Маслов Н.А., Номоев А.В. // Физическая мезомеханика. - 2008. - Т. 11. - № 5. С. 111-114.

238. Бурштейн Э. И. Люминесценция белка. Природа и применение //Итоги науки и техники. Сер. Молекулярная биология. - 1973. - Т. 3. - С. 126.

239. Гайтан А.С., Маслов Н.А., Кривошапкин А.Л., Мордвинов В.А. Способ интраоперационной диагностики границ злокачественной опухоли и

устройство для его осуществления // Патент РФ на изобретение № 2574793. -приоритет 01.08.2013.

240. Гиллет Д., Гольдфельд М. Г. Фотофизика и фотохимия полимеров: Введение в изучение фотопроцессов в макромолекулах. - М.: Мир, 1988.

241. Горяйнов С. А., Потапов А. А., Пицхелаури Д.И., Кобяков Г.Л., Охлопков В.А., Гаврилов А.Г., Шурхай В.А., Жуков В.Ю., Шишкина Л.В., Лощенов В.Б., Савельева Т.А., Кузьмин С.Г., Чумакова А.П., Spallone A. Интраоперационная флуоресцентная диагностика и лазерная спектроскопия при повторных операциях по поводу глиом головного мозга // Вопросы нейрохирургии им. Н.Н. Бурденко. - 2014. - Т. 78. - №2. - С. 22-31.

242. Кнорре Д. Г., Мызина С. Д. Биологическая химия. - М.: Высшая школа, 2000.

243. Конев С. В., Волотовский И. Д. Введение в молекулярную фотобиологию. -Минск: Наука и техника, 1971.

244. Ларионов П. М. и др. Лазерно-индуцированная флюоресценция сердечных тканей при поражении кальцинозом //Журнал прикладной спектроскопии. -1997. - Т. 64. - С. 539-544.

245. Ларионов П.М. и др. Исследование жизнеспособности тканей сердца методами лазерно-индуцированной флуоресценции и флуоресцентных зондов. / Ларионов П.М., Литасова Е.Е., Малов А.Н., Мандрик М.М., Маслов Н.А., Оришич А.М, Седюк Ю.А. // Патология Кровообращения и Кардиохирургия. - 2002. - №22. - С.61-66.

246. Ларионов П.М. и др. Применение метода ЛИФ для исследования влияния УФ-излучения на биологические ткани / Ларионов П.М., Малов А.Н., Маслов Н.А., Оришич А.М. // Оптика атмосферы и океана. - 2000. - Т. 13. -№ 3. - С. 305-308.

247. Ларионов П.М., Караськов А.М., Субботин Д.В., Потапенко М.М., Оришич А.М., Малов А.Н., Маслов Н.А. Способ лазерной диагностики этапов

биотехнологии целлюляризации-децеллюляризации тканевых конструкций // Патент РФ на изобретение № 2343481. — приоритет 09.08.2006.

248. Лидман Г. Ю. и др. Возможности диагностики кариозного процесса на основе лазерно-индуцированной флуоресценции и рентгенспектрального анализа / Лидман Г.Ю., Ларионов П.М., Савченко С.В., Оришич А.М., Рожин И.А., Малов А.Н., Маслов Н.А., Титов А.Т., Косицына И.Г. Зайцева, Я. А. // Сибирский медицинский журнал. - 2009. - Т. 24. - №. 3-2 - С. 16-19.

249. Литасова Е.Е., Караськов А.М., Ларионов П.М., Горбатых Ю.Н., Чащин О.В., Малов А.Н., Оришич А.М., Щукин В.С., Касаткин А.С., Бакарев А.Е., Горшенина К.А., Маслов Н.А. Способ определения жизнеспособности тканей сердца // Патент РФ на изобретение № 2181486. - 2002.

250. Мандрик М.М. и др. Исследование электрофизиологического состояния донорского сердца перед трансплантацией (экспериментальная работа). // Вестник аритмологии. - 2005. - №40. - С.59-63.

251. Марри Р. и др. Биохимия человека: в двух томах. Т. 1 - Москва: Мир, 2004.

252. Маслов Н. А. Исследование динамики состояния тканей сердца методом лазерно-индуцированной флуоресценции: дис. ... канд. физ.-мат. наук: 01.04.05/ Маслов Николай Анатольевич. - Новосибирск, 2004. - 134 с.

253. Маслов Н.А. Лазерная флуоресцентная спектроскопия для медицинской диагностики / Маслов Н.А. // VI Всероссийская конференция «Взаимодействие высококонцентрированных потоков энергии с материалами в перспективных технологиях и медицине» (CLAPT-2015), 2427 марта 2015 г., Новосибирск, Россия. - 2015.

254. Маслов Н.А. Исследование плоских дозвуковых микроструй методом лазерно-индуцированной флуоресценции / Маслов Н.А., Анискин В.М., Цырюльников И.С., Мухин К.А., Рудишин М.О. // VI Всероссийская конференция «Взаимодействие высококонцентрированных потоков энергии с материалами в перспективных технологиях и медицине» (CLAPT-2015), 24-27 марта 2015 г., Новосибирск, Россия. - 2015.

255. Маслов Н.А. и др. Исследование спектров лазерно-индуцированной флуоресценции сосудов в процессе децеллюляризации / Маслов Н.А., Субботин Д.В., Рожин И.А., Ларионов П.М., Оришич А.М. // Взаимодействие высококонцентрированных потоков энергии с материалами в перспективных технологиях и медицине: Тезисы докладов III Всероссийской конференции. Новосибирск, Россия. - 2009. - С. 111-112.

256. Маслов Н.А. и др. Оценка изменений спектральных характеристик лазерно-индуцированной флюоресценции на этапах биотехнологии аутоклапана / Маслов Н.А., Субботин Д.В., Рожин И.А. // Проблемы механики: теория, эксперимент и новые технологии. - VII Всероссийская конференция молодых ученых: Тезисы докладов. Новосибирск, Россия. - 2009. - С. 152153.

257. Маслов Н.А. и др. Разработка метода флуоресцентной диагностики биологических тканей с использованием ультрафиолетового излучения / Маслов Н.А., Рожин И.А., Малов А.Н., Оришич А.М, Ларионов П.М., Потапенко М.М. // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Физика. - 2008. - Т. 3. - № 1. - С. 29-36.10.

258. Маслов Н.А. Нелинейные особенности лазерно-индуцированной флуоресценции биологических тканей при импульсном ультрафиолетовом возбуждении / Маслов Н.А., Рожин И.А. // Проблемы механики: теория, эксперимент и новые технологии. Доклады IX Всероссийской конференции молодых ученых: 23-25 апреля 2012 г., Новосибирск, Россия. - 2012. - С. 192-194.

259. Маслов Н.А., Анискин В.М. Способ измерения полей температуры на поверхности исследуемого объекта с помощью люминесцентных преобразователей температуры // Патент РФ на изобретение №2607225. -приоритет 23.03.2015.

260. Маслов. Н.А., Гайтан А.С., Кривошапкин А.Л., Мордвинов В.А. Устройство для интраоперационной диагностики границ злокачественной опухоли // Патент РФ на полезную модель №142307. — приоритет 24.07.2013.

261. Михайлов Е. Е., Беневоленская Л. И., Мылов Н. М. Распространенность переломов позвоночника в популяционной выборке лиц 50 лет и старше //Вестник травматологии и ортопедии им. НН Приорова. - 1997. - Т. 3. - С. 20-7.

262. Недосеко В. Б. и др. Оптимизация процесса профилактики кариеса зубов //Ин-т стоматологии. - 2003. - №. 1. - С. 38-41.

263. Онищенко Н.А. Трансплантология. Руководство. Под редакцией В.И. Шумакова - М.: Медицина , 1995.

264. Оришич А.М. и др. Лазерно-индуцированная флуоресценция тканей и культур клеток различного уровня жизнеспособности возбуждаемая излучением 248 нм. Спектроскопические исследования и получение изображения. / Оришич А.М., Малов А.Н., Маслов Н.А., Рожин И.А., Колокольцова Т.Д., Фатюхина О.Е., Ларионов П.М., Мандрик М.М., Субботин, Д. В. // От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине: Международный Междисциплинарный Симпозиум. Труды Симпозиума. Судак, Украина. - 2005. - С. 56-57.

265. Папаева Е.О. Разработка методики анализа матриц возбуждения-эмиссии для метода лазерно-индуцированной флуоресценции / Папаева Е.О., Маслов Н.А. // VI Всероссийская конференция «Взаимодействие высококонцентрированных потоков энергии с материалами в перспективных технологиях и медицине» (CLAPT-2015), 24-27 марта 2015 г., Новосибирск, Россия. - 2015.

266. Папаева Е.О. Статистический анализ матриц возбуждения-эмиссии для метода лазерно-индуцированной флуоресценции / Папаева Е.О., Маслов Н.А. // Теория и численные методы решения обратных и некорректных задач. Новосибирск: 2016. - 2016. - С. 99.

267. Петренко П.П., Маслов Н.А., Рамих Э.А., Зайдман А.М., Рерих В.В., Оришич А.М., Малов А.Н., Титов А.Т., Ларионов П.М. Способ диагностики остеопороза методом лазерно-индуцированной флуоресценции // Патент РФ на изобретение № 2244292. - приоритет 11.02.2003.

268. Попова Н.А. Определение параметров УФ лазерного излучения, малоинвазивного для живых клеток / Попова Н.А., Маслов Н.А., Рожин И. А, Николин В.П., Каледин В.И., Амстиславская Т.Г. // Сборник трудов первой международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». Санкт-Петербург. - 2010. - Т. 2 - С. 212-213.

269. Приезжев Ф.В., Тучин В.В., Шубочкин А.П. Лазерная диагностика в биологии и медицине - М.: Наука, 1986.

270. Северин Е. С. Биохимия: учеб. для вузов/Под ред. ЕС Северина // М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2003.

271. Субботин Д.В. и др. Морфологическая и биофизическая оценка (лазерно-индуцированная флюоресценция) структуры аорты на этапах биотехнологии аортального графта / Субботин Д.В., Ларионов П.М., Сергеевичев Д.С., Субботина О.А., Зайцев Г.С., Омельченко А.Ю., Оришич А.М., Малов А.Н., Маслов Н.А., Рожин И.А. // Патология кровообращения и кардиохирургия. -2008. - № 4. - С. 81-84.

272. Титов А. Т. и др. Механизм минерализации сердечных клапанов // Поверхность, рентгеновские, синхротронные и нейтронные исследования. -2001. - №. 3. - С. 74.

273. Фомичев Н.Г. Лазерно-индуцированная флюоресценция как метод диагностики остеопороза при переломах грудных и поясничных позвонков / Фомичев Н.Г., Петренко П.П., Фаламеева О.В., Малов А.Н., Маслов Н.А., Оришич А.М., Титов А.Т., Ларионов П.М. // Хирургия позвоночника. -2004. -No. 3. -С. 53-59.

274. Фатюхина О.Е. и др. Действие лазерного УФ-излучения на модельную систему культивируемых клеток / Фатюхина О.Е., Трошкова Г.П., Колокольцова Т.Д., Малов А.Н., Маслов Н.А., Оришич А.М. // Международная научная конференция «БИОТЕХНОЛОГИЯ -2003» - 2003.

275. Черницкий Е..А., Слобожанина Е.И. Спектральный люминесцентный анализ в медицине - Минск: Наука и техника, 1989.

Приложение.

«УТВЕРЖДАЮ» Медицинский директор тейский медицинский центр» Е. Г. Аветисов

АКТ

внедрения в практику АО «Европейский медицинский центр» аппаратного комплекса для проведения лазерной интраоперационной диагностики границ злокачественных опухолей, разработанного Масловым Николаем Анатольевичем

Мы, нижеподписавшиеся, комиссия в составе: председатель - заведующий отделением

нейрохирургии, чл.-корр. РАН, проф., д.м.н. Кривошапкин А. Л., секретарь - врач-

нейрохирург, к.м.н. Гайтан A.C. и член комиссии врач-нейрохирург Сергеев Г. С.

удостоверяем, что вышеуказанный аппаратный комплекс для проведения лазерной

интраоперационной диагностики границ злокачественных опухолей внедрён в

практическую деятельность отделения нейрохирургии АО «Европейский медицинский центр».

1. Сущность аппаратного комплекса заключается в том, что он визуализирует границы распространения злокачественной опухоли (в частности, головного мозга) непосредственно в процессе операции, при одновременной визуализации микрохирургической картины в условиях естественного освещения операционной белым светом. Перед операцией пациенту вводится фотосенсибилизатор 5-аминолевулиновая кислота в соответствии с указаниями по применению препарата. С помощью насадки производится облучение оперируемой зоны и патологической ткани белым светом и излучением, возбуждающим флуоресценцию фотосенсибилизатора или его производных, и^ регистрация отражённого излучения и флуоресценции с последующей цифровой обработкой кадров и выводом на монитор ЭВМ изображения оперируемой зоны, на котором флуоресцирующие области выделены контрастным зелёным цветом.

Необходимость внедрения данного аппаратного комплекса определяется потребностью в дальнейшем совершенствовании хирургического лечения злокачественных опухолей: повышения радикальности их резекции.

3. Новизна предложенного аппаратного комплекса заключается в том, что, в отличие от других технологических решений, комплекс способен визуализировать ткань опухоли в условиях обычного освещения операционной белым светом без необходимости частого переключения между режимами визуализации.

4. Преимущество разработанного аппаратного комплекса заключается в возможности с его помощью отчётливой визуализации флуоресценции патологической ткани в условиях обычного освещения операционной, что позволяет хирургу надёжнее обнаружить патологическую ткань и принять решение о необходимости её удаления.