Культура столонов и регуляция роста растений и клубнеобразование у картофеля in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Назарова, Нигора Нурахмадовна

• Назарова, Нигора Нурахмадовна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Назарова, Нигора Нурахмадовна

1. Введение.стр.

2. Обзор литературы.

2.1. Меристемы как саморегулирующая система и вопросы роста и развития растений in vitro.

2.2. Механизмы возникновения сомаклональной изменчивости растений.

2.3. Генетически-модифицированные растения как модель изучения физиолого-биохимических процессов устойчивости к стрессовым факторам среды.

2.4. Гормональная и углеводная регуляция клубнеобразования.

2.5. Генмодифицированный картофель и вопросы регуляции клубнеобразования.

3. Экспериментальная часть.

3.1. Объекты и методы исследований.

3.2. Методика оздоровления картофеля.

3.2.1. Столонообразование in vitro.

3.2.2. Культивирование столонов in vitro.

3.2.3. Фотопериодическая реакция генотипов картофеля к КД и ДД.

3.2.4. Условия образования микроклубней картофеля.

3.2.5. Имунноферментный анализ вирусов картофеля.

4. Результаты исследований.

4.1. Образование столонов картофеля в зависимости от сроков посадки черенков in vitro.

4.2. Особенности образования столонов in vitro.

4.3. Рост и развитие регенерантов из столонов картофеля in vitro.

5. Регуляция клубнеобразования различных генотипов картофеля in vitro.

5.1. Действие сахарозы на репродукционные процессы in vitro.

5.2. Динамика накопления биомассы органов картофеля у различных генотипов in vitro.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Культура столонов и регуляция роста растений и клубнеобразование у картофеля in vitro»

Актуальность проблемы. Прогресс в области современной биотехнологии растений непосредственно связана с разработкой методических приемов культивирования клеток in vitro. Этим методом получен ряд сомаклональных линий, форм и сортов растений с ценными хозяйственными признаками, которые используются во всех экономически развитых странах мира.

С другой стороны, человеческое сообщество остро нуждается в новых знаниях и технологиях, с тем, чтобы увеличить производство продовольствия, улучшить состояние здравохранения и охрану окружающей среды. В решение этих проблем биотехнология вносит большой вклад. Поэтому применение методов биотехнологии в Республике Таджикистан является одним из важнейших факторов повышения урожайности и, следовательно, экономического потенциала.

С использованием методов генной и клеточной инженерии получен ряд линий, форм культурных растений (картофель, соя, кукуруза и др.), обладающих признаками устойчивости к вирусам, патогенам и пластичности к стрессовым экологическим факторам. Благодаря этому сокращаются сроки получения новых сортов с хозяйственно полезными признаками и получения свободных от вирусов и патогенов семенного материала, что имеет большую перспективу для Республики Таджикистан.

В теоретическом плане представляет интерес изучение степени сортовой вариабельности ДНК, выявленой методом полимеразной цепной реакции (PCR), и физиологических процессов в культуре in vitro с целью разработки методов микроклонального размножения и микроклубнеобразования картофеля.

Зависимость клубнеобразования от действия таких факторов, как световой режим (фитохром), гормонов и, углеводов и т.д. показано в ряде работ X. Чайлахян, (1984; 19.88; Аксенова и др., 2002; Кузнецов, Кулаева, 2004).

Вместе с тем, вопрос о конкретных путях действия фитогормонов и углеводов и их взаимодействие в процессе инициации клубнеобразования остается открытым, т. к. имеющиеся результаты не всегда можно итерпретировать однозначно (Hussey, Stacey, 1995; Davies,1984).

Так, для перехода регенерантов к клубнеобразованию in vitro необходимо наличие высокой концентрации сахарозы (5-10%), но есть сведения о том, что сахароза мало влияет на инициацию клубнеобразования. Также много неясного относительно роли фитогормонов в инициации клубней. Так показано, что гиббереллины способствуют росту столонов, но ингибируют формирование клубней (Simko, 1994; Xin )lw et.al, 1998; E^rng, 1995).

Для активизации процесса клубнеобразования использовались различные сочетания гормонов и углеводов (Бутенко,1990; Palmer, Smith, 1987). Но эффективного образования микроклубней не было достигнуто, так как повышенное содержание сахарозы или кинетина не индуцировали дополнительного образования столонов с последующим образованием клубней. Не было получено положительных результатов и при культивировании микрочеренков картофеля в темноте по методу G. Hussey и N.I. Stacey (1984), а также при изменении температурного режима (+12, +16 0 С). Поэтому исследование условий, стимулирующих столоно- и клубнеобразование у картофеля in vitro остаётся актуальной задачей. Нам известно всего лишь две публикации (Sassey, Stacey, 1984; Mingo-Castel et.al. 1976), где сделана попытка культивировать столоны картофеля in vitro.

В последние годы многие используют новый подход для регуляции клубнеобразования картофеля in vitro. Так, в частности используются генетически трансформированные регенеранты картофеля с изменённым гормональным статусом, такие, как трансформанты, несущие гены roLB и roLC Agrobacterium Rhizogenes (Аксёнова и др., 2002).

Считаем, что изучение процессов инициации и роста клубней in vitro с использованием культуры столонов позволит выяснить роль углеводов и гормонов в инициации роста клубней и применить возможности методов биотехнологии для клонального размножения картофеля, что и явилось целью наших исследований.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение особенностей культивирования изолированных столонов, возможности их использования в микроклональном размножении, зависимости различных этапов клубнеобразования у генотипов картофеля. В соответствии с этим, поставлены следующие задачи исследований:

• разработка условий культивирования изолированных столонов картофеля;

• изучение ростовых процессов регенерантов, полученных из изолированных столонов;

• изучение процессов микроклубнеобразования у различных генотипов в зависимости от условий фотопериода;

• сравнительный анализ этапов инициации и роста клубнеобразования картофеля в зависимости от воздействия углеводов в культуре in vitro.

Научная новизна работы:

• При изучении роста и размножения регенерантов картофеля in vitro обнаружена сезонность их морфогенной потенции, проявляющая в процессе микроклубнеобразования у пробирочных растений, а также при образовании столонов.

• Обнаружены некоторые особенности индукции роста изолированных столонов при изменении условий их культивирования in vitro. Полученные из столонов регенераты обладают более высокой способностью к клубнеобоазованию по сравнению с исходными тодика культивирования столонов in vitro.

• Обнаружена сезонная зависимость калусообразования у пробирочных растений, индуцируемых из столонов.

• Установленно, что процесс клубнеобразования зависит от содержания углеводов и является фенотипической реакцией генотипов картофеля. При сравнении клубнеобразования различных генотипов картофеля (исходный сорт Жуковский-ранний и его температуроустойчивой линии-регененранта) показана неоднозначная реакция по ряду характерных параметров роста, развития и индекса урожая на уровне пробирочных растений. Наиболее существенным отличием является усиление иннициации и роста клубней у клеточно-модифицированных растений под влиянием высокой концентрации сахарозы в культуральной среде, по сравнению с исходным сортом Жуковский-ранний.

• Обнаружено, что процесс иннициации и темпа роста микроклубней в зависимости от концентрации сахарозы однонаправленны, но не тождественны, так как масса сформировавшихся клубней в заключительной фазе их роста во многом определяется генотипом и, следовательно, требуют дифференцированных условий инициации и роста клубней in vitro.

• Установлена зависимость действия углеводов и гормонов в процессе дифференцировки столоновых клеток картофеля в культуре тканей in vitro, вызывающая активацию морфогенетической потенции растений.

Практическая значимость. Показана возможность использовния культуры столонов in vitro в практической биотехнологии картофеля. Регенеранты, полученные из культуры столонов, обладают значительно более высокими темпами микроклубнеобразования и свободны от вирусов и патогенов, что позволяет наладить новую технологию микроклонального размножения с целью их ускоренного внедрения в семеноводство картофеля.

Апробация работы: Материалы диссертации доложены/ представлены на следующих конференциях и симпозиумах:

• Актуальные проблемы и перспективы развития физиологии растений, Душанбе 2004;

• International symposium Transgenic plants and biosafety , Moscov, 2004;

• Республиканский симпозиум экономики и науки ГБАО: прошлое, настоящее, будущее, Хорог, 2005.

• Научно-практическое совещание «Использование оздоровленного материала в семеноводстве картофеля», Муминобад, 2005.

• Конференции молодых ученых Таджикского аграрного университета, Душанбе, 2003-2005 гг.

• Международная конференция «Физиологические и молекулярно-генетические аспекты сохранения биоразнообразия», Вологда, - Россия 2005г.

• International Congress BioVision Alexandria, 2006.

Структура и объем работы: Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы. Работа изложена на 117 стр., содержит 26 рисунков, 9 таблиц. Количество цитированных источников 125.

Публикации. По материалам диссертаций опубликовано 6 экспериментальных работ, 7 тезисов.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Назарова, Нигора Нурахмадовна

Выводы

1. Разработан простой и эффективный способ культивирования изолированых столонов картофеля in vitro. Выявленны некоторые особенности индукции и роста столонов картофеля при изменении условий культивирования растений-регенерантов. Наиболее эффективным оказалась 5-7% концентрация сахарозы и НУК (1,0 мг/л) в сочетании с кинетином (0,5 мг/л). В этих условиях культивирования столоны давали полноценные регенеранты с высокой степенью морфогенетической потенции.

2. Показано, что высокое содержание сахарозы в культуральной среде является основным условием инициации микроклубнеобразования. Культивируемые in vitro температуроустойчивые регенеранты (ТУ-регенеранты) существенно отличались от исходного сорта Жуковский ранний по ряду характерных изменений в регуляции клубнеобразования. Активируется иннициация клубнеобразования под влиянием высокой концентрации сахарозы и продолжительности периода роста клубня, тогда как у исходного сорта Жуковский ранний иннициация клубнеобразования наблюдалось при низких концентрациях сахарозы и более коротких промежутках времени, это свидетельствует о том что, инициация и рост клубней это генотипически детерменированный процесс, проявляющийся даже в условиях in vitro.

3. Установлено влияние фотопериода (ДД и КД) на инициацию, рост клубнеобразования и распределение сырой массы независимо от генотипа картофеля. Клубнеобразование было больше у ТУ-регенерантов на КД и при высокой концентрации сахарозы. Фотопериод в условиях in vitro не привел к изменению морфогенетических признаков растений-регенерантов как у ТУ-регенерантов, так и у исходного сорта Жуковский ранний.

4. Установлено, что как у исходного сорта Жуковский ранний, так и у ТУ-регенерантов пороговая и оптимальная концентрация сахарозы для темпов роста были сдвинуты в сторону более повышенной концентрации сахарозы по сравнению с процессами их инициации. Регенеранты исходного сорта Жуковский ранний характеризовались более высокой способностью к инициации клубней при низких концентрациях сахарозы в среде культивирования, чем у ТУ-регенерантов.

5. Полученные результаты указывают на то, что каждому генотипу картофеля in vitro свойственна своя, специфическая реакция на условия культивирования. Процесс инициации темпа роста клубней в зависимости от содержания углеводов однонаправленны, но не тождественны. Очевидно, этот процесс контролируется группой независимых генов, экспрессия которых является важнейшим фактором регуляции клубнеобразования, роста и развития растений.

Заключение

Производство высоко продуктивного семенного материала картофеля во всех развитых странах основаны на применении, биотехнологии микроклонального размножения в культуре in vitro и in vivo. Для этого необходимо в культуре in vitro использовать сорта картофеля на сортовую типичность, продуктивность, отсутствие латентной инфекции, вирусов и вироидов и бактериальных болезней. Мы использовали следующие варианты перевода растений в культуру in vitro . а. Для здоровых клонов

Верхушки ростков здоровых клубней выращенных на свету (размером 0,5-1,0 см.) стерилизовали 7 мин. в растворе диацида (0,2%), затем промывали 3 раза по 1 мин. в автоклавированной воде, 1 раз по 1 мин. в 70 % этиловом спирте и ещё 1 раз промывали в автоклавированной воде. Стерильные ростки высаживали на среду Мурасиге-Скуга (МС) с добавлением РНК-азы в концентрации 10 "4 м. б. Растения с сомнительной оздоровленностью.

При отсутствии исходных клонов оздоровительного материала, необходимо осуществлять выше указанную процедуру путём получения in vitro растений из пазушных или верхушечных почек. Для этого экспланты размером 1,5-2,0 мм. переносят в питательную среду МС для меристем с добавлением 10'4 м РНК-азы. Использование РНК-азы увеличивает выход свободных от вирусов растений в 2-3 раза. Растения , оздоровленные этим высказать мысль о том, что как у контрольных, так и у опытных вариантов пороговая и оптимальная концентрации сахарозы для темпов роста клубней были сдвинуты в сторону более повышенной концентрации сахарозы по сравнению с процессами их инициации. Так, регенеранты контрольных вариантов (сорт Жуковский ранний) характеризовались более высокой способностью к инициации клубней при низких концентрациях сахарозы в культуральной среде, чем в опытных вариантах (клеточно-модифицированные). Вместе с тем, масса одного клубня контрольных вариантов колебалась в пределах 0.111мг до 364 мг, против 0.076-149 мг в опытных вариантах. Сходные результаты были получены при сравнении массы образовавшихся клубней с массой стеблей у обоих вариантов.

Итак, полученные результаты указывают на то, что для каждого генотипа картофеля in vitro свойственна своя специфическая реакция на концентрацию сахарозы. Процессы инициации и темпа роста клубней в зависимости от концентрации сахарозы однонаправлены, но не тождественны, поскольку масса сформировавшихся клубней в заключительной фазе эксперимента и их количество во многом определялись генотипом картофеля и, следовательно, требуют разработки условий клубнеобразования для каждого сорта, линий и форм регенерантов, что является задачей дальнейших исследований. методом использовали для получения меристем и размножали в культуре in vitro путём черенкования (до 5-6 раз) на питательной среде МС с добавлением 0,25 - 0,5 мг НУК 1,0 мг/л ИМК что увеличивает коэффициент размножения в 1,5-2 раза.

Для повышения адаптационной способности растения выращивали in vivo на различных субстратах: почва, песок, почва-песок (1:1), почва - навоз (1:1), навоз. Коэффициент приживаемости растений увеличивался до 90-93% в полевых условиях.

Поэтому развитие методической базы прикладной биотехнологии позволяет разрабатывать технологию получения свободных от вирусов и растений картофеля с высокой потенцией урожайности в культуре in vitro. Для этого необходимо развитие ряда теоретических вопросов, таких как, действие и взаимодействие регуляторных факторов (гормонов, углеводов), их роль в реализации генетической информации в процессе репродуктивных функций растений и в управлении этими явлениями в системе in vitro и/или in vivo. Нами на примере регенерантов картофеля разрабатывались вопросы гормональной и углеводной регуляции морфогенетической потенции растений. В данной работе, вопрос морфогенетического контроля основывается на регуляторной роли углеводов и сравнении системы регенерации растений различного происхождения (меристемных или столоновый).

Исходя из этого положения изучали явления различных концентраций углеводов (сахарозы), НУК, Кинетина, фолиевой кислоты, 2,4-Д на индукцию роста, развитие и микроклубнеобразование в условиях in vitro.

Кроме того, испытывались различные среды культивирования столонов содержащие разные концентрации агара. Обычная среда содержит 0,7% агара и среда содержимого 0,3% агара -жидкая среда, которая была использована нами в сравнительных экспериментах. Как показывают полученные нами результаты регенерация столонов в жидкой среде имеет высокую морфогенетическую потенцию, чем выращивание их в твёрдой среде in vitro (табл. 7). Наиболее активное каллусообразование наблюдается при использовании в системе in vitro фолиевой кислоты, НУК, глютамина. В этих условиях процент каллусообразования составляет более 50%, с побегами 90%. В других исследованных средах образование каллусов и побегов было значительно ниже. Добавление в среду культивирования столонов 2,4Д в низких концентрациях (0,1 мг/л) значительно увеличивало образование каллусов (до 78%), но сильно снижало образование побегов. В этих условиях выращивания столонов процент каллусов с побегами составлял 40% т.е. был в два раза ниже чем в среде без 2,4Д.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Назарова, Нигора Нурахмадовна, 2006 год

1. Абдулаев Х.А., Каримов Х.Х. Индексы фотосинтеза в селекции хлопчатника. Издательство «Дониш». 2001. 267с.

2. Аксенова Н.П., Константинова Т.Н., Голяновская С.А., ГукасянИ.А., Гатс К., Романов Г.К. Клубнеобразование и рост в культуре in vitro трансгенного картофеля с суперпродукцией фитохрома В. // Физиология растений, 2002, т. 49, стр. 535-540.

3. Алиев К.А. Молекулярные механизмы биогенеза хлоропластов // Автореф. докт. диссер., Минск, 1985.

4. Алиев К.А., Каримов Б.К., Возделывание оздоровленного картофеля в Таджикистане. Изд: « Дониш», 1997г стр.43

5. Алиев К.А. Молекулярные механизмы биогенеза хлоропластов растений. Из-во «Дониш», 1998, 72с.

6. Алиев К. А., Насырова Ф. Ю., Давлятназарова 3. Б. Перспективы развития современной биотехнологии. Сборник трудов конф. «Актуальные проблемы и перспективы развития физиологии растений», Дониш, Душанбе, 2004 Стр.25-27.

7. Батыгина Т.Б. Эмбриогенез и морфогенез половых и соматических зародышей.// Физиология растений. 1999. Т.46., с.884-894.

8. Бургутин А. Б., Бутенко Р. Г. , Кауров Б. А. , Ниссанка Иддагода . Селекция картофеля in vitro на устойчивость кхлористому натрию//. Физиология растений, 1996. Т.43, №4, стр.597-605.

9. Бутенко Р.Г. Некоторые физиологические проблемы при культивировании картофеля in vitro // Регуляция роста и развития картофеля // Под ред. Чайлахяна М.К. и др. М.: Наука, 1990. с.88-98.

10. Гришунина Е.В., Сергеева JI.H., Гукасян И.А., Романов Г.А. Углеводный метаболизм в процессе клубнеобразования у трансгенного картофеля. Тезисы Междун. симпоз. «Физиология трансгенного растения и проблемы биобезопасности ». Москва: 2004, стр. 34.

11. Глеба Ю.Ю., Пивень Н.М., Комарницкий И.К., Сытник К.М. Паросексуальные цитоплазматические гибриды N. tabacum + N. debney; полученные слиянием протопластов // Докл. АН. СССР 1978. 240, № 5. с.1223-1226.

12. Гостимский С., Багрова A.M.,Ежова Т.А. Обнаружение и цитогенетический анализ изменчивости, возникающей при регенерации растений и культуры тканей полевого гороха// Там же 1985-283, №4 - с. 1007 - 1011.

13. Давлятназарова З.Б., Алиев К.А., Бабаджанова М.П., Авганова Х.Х. Получение линий картофеля, устойчивых к высокой температуре с использованием методов биотехнологии. // Докл. АН РТ. 2003. № 5- 6, стр. 61-69.

14. Давлятназарова 3. Б., Каримов Б. К., Авгонова X. X., Мирзохонова Г. О., Назарова Н. Н., Алиев К. А. Регуляция клубнеобразования in vitro. Сборник трудов Конф.

15. Актуальные проблемы и перспективы развития физиологии растений», Дониш, Душанбе, 2004, Стр.62-63

16. Жуковский М.П. Культурные растения и их сородичи. JI: Колос, 1971, стр.750.

17. Зыкин А.Г. Проблемы обеспечения России картофелем -«вторым хлебом». Вопросы картофелеводства. ВНИИКХ. Научные труды. М:2001г, стр. 13-18.

18. Иванов В.Б. Содержание ДНК в ядре и скорость развития растений// Онтогенез 1978.Т.9.С.39-53

19. Кунах В.А., Алпатова JI.K. Роль фитогормонов в изменчивости числа хромосом в культуре тканей Haplopappus gracilis // Докл. АН СССР. 1979. 245, № 4, с. 967 - 970.

20. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений и факторы, регулирующие этот процесс // Там же -1980. 14, № 1. С.73 - 81.

21. Кунах В.А. Изменчивость числа хромосом в онтогенезе высших растений // Цитология и генетикиа -1978.-12, № 2 с.160-173.

22. Ложникова Р.Н., Чайлахян М.Х Влияние света и темноты на содержание гиббереллинов в проростках и взрослых растениях бобов // Докл. АН СССР, 1969 т. 188, стр. 715-718.

23. Марков А. М. Причины цветения длиннодневных видов картофеля в условиях короткого дня и холодной ночи // Физиология растений, 2002, т. 49, стр. 521-525.

24. Мокроносов А.Т.Клубнеоброзование и донорно-акцепторные связи у картофеля (регуляция роста и развития картофеля) Под ред. 1990, стр 6-12.

25. Мелик Саркисов О., С. Овчинникова В.Н., Ульянов Р. П. Получение безвирусного посадочного материала микроклубнями индуцированными в культуре in vitro (метод, рекомендации). М: ВАСХНИЛ. 1988 , 17 стр.

26. Мирзохонова Г.О., Давлятназарова З.Б , Н.Н Назарова, Алиев К.А. Действие водного стресса на содержание полирибосом растений регенерантов. // Докл. АН РТ. 2004. Т. XL VII, № 11-12.

27. Муминджанов Х.А. Физиолого биотехнологический подход к селекции и семеноводству картофеля. Душанбе, 2003, 127стр.

28. Назарова Н.Н. , Давлятназарова З.Б., Мирзохонова Г.О., Каримов Б.К., Алиев К.А. Образование столонов и микроклубней картофеля в зависимости от срока посадки in vitro // Докл. АН РТ 2004. Т. XL VII, № 11-12, с.82-91.

29. Насыров Ю.С. Фотосинтез и генетика хлоропластов. «Наука» М.: 1975. 142с.

30. Новые технологии производства оздоровленного исходного материала в элитном семеноводстве картофеля. (Рекомендации Министерства сельского хозяйства Российской Федерации). Отв. редактор Б. В. Анисимов. Москва: «Агропрогрес», 2000. стр. 76.

31. Новые технологии производства оздоровленного исходного материала в элитном семеноводстве картофеля. Рекомендации ВНИИ картофельного хозяйства РЭН. (Москва 2000) с.77.

32. Неумывакин JI.B., Кобец Н.С., Пирузян Э.С. Получение спонтантного мутанта Escyorichia coli;, способного к сверхсинтезу пролина и устойчивого к повышенным концентрациям Na С1 // Генетика. 1990. Т.26. С.1370 1379.

33. Одинцова М.С. Геном хлоропластов: организация и экспрессия // Общие проблемы физико-химической биологии. (Итоги науки и техники, ВИНИТИ АН СССР). М.:1987. т.6. с.5-95.

34. Полевой В.В., Саламатова Т.С. Механизмы регуляции роста растений клеток // Биология развития растений // Под ред. Чайлахяна М.Х. и др. Л.: Наука. 1975 с. 111-125.

35. Решетников В.Н., Ленец А.А., Голденкова И.В., Серебрийская Т.С., Кондрацкая И.П., Пирузян Э.С. Участие стрессовых белков в формировании гиперчувствительного ответа растений Nicotiana tabacum //Изв . АН Белоруси. Сер. биол. наук. 1997. №3. с.32 36.

36. Решетников В.Н., Ленц А.А., Голденкова И.В., Серебрийская Т.С., Кондрацкая И.П., Пирузян Э.С. Участие стрессовых белков в формировании гиперчувствительного ответа растений Nicotiana tabacum // Изв. АН Белоруси. Сер. биол. наук. 1997. №3 с.32 36.

37. Семенко В.Е. и др. Механизм эндогенной регуляции фотосинтеза и адаптивные свойства хлоропласта. В сб.: Физиология фотосинтеза. М.: Наука 1982. с.164-187.

38. Сидоров В.А., Пивень Н.М., Глеба Ю.Ю., Сытник К.М. Соматическая гибридизация послеповых. Киев.: Наука Думка. 1985. с.130.

39. Скрибчинский В.В. Фотопериодизм, его происхождение и эволюция. Л: Наука, 1975, стр. 300.

40. Сидоров В.А., Зубко A.M.,Кучко А.А. Получение мутантов картофеля in vitro и их использование в клеточной инженерии // Генетика и селекция.-1986- 19, №5 с.470-474.

41. Трофимец Л.Н. и др. Биотехнологические методы получения и оценка оздоровленного картофеля (метод, рекомендации). М: Агропромиздат, 1988,36 стр.

42. Трофимец Л. Н. Биотехнология в семеноводстве картофеля

43. Научные труды НИИКХ РСХА. «Биотехнология вкартофелеводстве. М.: 1991. с.3-12.

44. Чайлахян М.Х. Фотопериодическая и гормональная регуляция клубнеоброзования у растений.М:Наука 1984.61с

45. Чайлахян М.Х. Регуляция цветения высших растений: М: Наука, 1988, стр. 559.

46. Чайлахян М.Х. Гормональная регуляция цветения растений различных фотопериодических групп // Физиология растений, 1971, т. 18, стр.348-357.

47. Anil D., Noel Е.Т.Н. Deleted forms of plastid DNA in alpino plants from cereal other culture // Curr Genet.-1985. 9, №8. -P.671 -678

48. Bent A.F. Plant Disease Resistanse Genes: Function Muts Structure // Plant Cell. 1996.V.9.P.275-296.

49. Binns A., Meins F.J. Evidense that habituation of tobacco pith.cell division-promeming factors is heritable and potentially reversidle // Proc. Nat .Acad. Sci.USA.-1973-70/-P/2660-2662

50. Bretell R.I.S.,Pallotta M.A.,Gustafson J.P.,Apples R. Variation et the Nor loci in triticali derived from tissue culture //Ibid.-1986.-7 l,№4.-P.637-643

51. Bowling S.,Cuo A.,Cao H.,Gordon F.S., Klesid D.,Dong X. A Mutation in Arabidopsis that Leads to Constitutive Exspression // Plant Cell. 1994. V.6. P. 1845-1857

52. Bent A.F. Plant Disease Resistance Genes: Function Meets Structure // Plant. Cell. 1996. V.8. P. 1757-1771.

53. Biotechnology in Agriculture and Forestry. V.3 Potato/Ed. Bajaj Y.P.S. Berlin: Springer. 1987. 509p.

54. Chen Z.X., Malamy J.,Henning J., Conpath U., Sanchecasas P., Silva P., Pisidliano J., Klessig D.F. Induction, Modification and Transduction of the Salicylic Acid signal in plant Defense Responses // Proc. Natl. Acad Sci USA. 1995.V.92.P.4134-4137

55. Cloves F.A.L. Apicl Meristems of Roots // Biol. Rev 1959. V.34. P.501-502.

56. Cloves F.A.L. The Quieseht Centre // The Development and Function of Plants / Eds Torey.J.G., Glorkson D.T. London: Acfdemic, 1975. P.3-19.

57. Csonca L.N.Physiological and Genetic Responses of Bacteria to osmotic stress // Microbiol. Rev. 1989. V53. P.123-147.

58. Cheeseman J.M. Mechanism of salinity Toleranse in Plants // Plant Physiol. 1988. V.87. P547-550.

59. Day a., Ellis T.H.N. Chloroplast DNA deletions associated with wheat plants regeneranted from pollen: possible basis tor material inheritance of choloplast//Cells 1984,V.39,P.359-368.

60. Davis.H.V. Sugar Metabolism in stolon Tibs of potato duringf/f Earlu Tuberization // z. Pflanzenphysiol. 1984. Bd.l 13. S.377381.

61. Delaney T.P. Genetic Dissection of Acquired Resistanse to desease // Plant Physiol 1997. V.l 13. P.5-12.

62. Dolan L.,Janmaat K.,Willemsen V.,Linstead P., Polthing S.,Roberts K.,Scheries B. Cellular Organization of the Arabidopsis thaliana root//Development. 1993. V.l 19. P.71-84.

63. Donn G.,Tisher E.,Smith J.A.,Goodmann H.M. Herbicide-resistant alfalfa cellsion exsample of gene amplification in plants. J.Mol. Appl. Genet. - 1984. - 2, № 6. - P.621-635

64. Dixon R.A., Lamb C.J. Molecular Comunication in interactions belween Plants and Microbiol Patogenes //Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1990. V41. P.339-367.

65. Estruch J.J., Chrigui D., Grossmann K., Schell J., Spena A. The plant oncogene rol С is responsible for the relase of cytokinins from glucoside conjugates // EMBO J. 1991. V.10. P.2889-2895

66. Estruch J.J., Schell J., Spena A. The protein encoded bay the rol В plant oncogene hydrolyzes indole glucosides // EMBO J. 1991. V.10. P.3125-3128.

67. Evans D.A., Shorp W.R., BravoJ.E. Gell culture metods for crop improvement // Handbook of plant cell culture. New Vork; London: Mastillon 1984.-Vol.2.-P.47-68.

68. Ewing E.E. The role of hormones in potato ( Solanum tuderosum L.) tuberozum // Plant hormones, physiology, Biochemiaty and Molecular Biology / Ed. Davies P.G. Dordrecht: Kluwer Acad.Publ.,1995.P.698-724

69. Feldman F.J., Torey J.G. The Quiescent center and Primary vascular Tissie Potern Formation in cultured Roots of Zea mays//can. J.Bot 1975.V.53.P.2796-2803.

70. Feldman Y.J. The generation and elaboration of plant in roots of Zen Maes//Am Z.Bot. 1977. V.138. P.393-401.

71. Flor H.H. Curent status of the Gene-for Gene Consept // Annu Rev. Phytopathol 1971. V9. P.275-296.

72. Grif V.G., Ivanov V.B., Machs E.M. Cell Cycle and its Parametres in Flomering Plants // Цитология. 2002. Т. 44. C.936-980

73. Glowes F.A.L. The Quiescent center Meristems and its Dehaviour after irradiation // Meristems and Differintiation / Brookhaven Symp. Biol. 1963.VI6.P.46-58.

74. Gaffney Т., Fredrich L., Vernoij В., Nedrotto D., Nye G., Uknes., Ward E., Kessmann H.,. Ryals J. Requirement of Salicylic Acid in Plant Disease Resistanse // Sciense. 1994. V.226. P.1247-1250.

75. Gaffney Т., Fredrich L., Vernoij В., Nedrotto D., Nye G., Uknes., Ward E., Kessmann H.,. Ryals J. Requirement of Salicylic Acid for the induction of Systemic Acquired Resistanse// Sciense. 1994. V.261. P.754-756.

76. Gandin V., Vrain Т., Jonanin L. Bacterial genes modifying hormonal balances in plants // Plant Physiol. Biochem. 1994. V.32. P.ll-29.

77. Harmey M.A., Growleu M.C, Clinch P.E.M. The Growth regulators on Tuberization of cultured stem Pieces of solanum tuberosum//Eur. Potato. J.1996.V.P.146-151.

78. Hobe M., Brand U., Waites R., Simon R. Control of cell lnte in plant meristem // Novartis Found .Symp.237. The cell cycle and development / Chichester (UK): Wiley and sons. 2001. P.235-254

79. Hunt M., Ryals J. Systemic Acquired Resistanse signal Tranduction//Crit Rev.Plant sci. 1996. V 113. P. 1809-1819.

80. Hunt M., Ryals J., Systemic Acquired Resistance Signal Tranduction // Crit Rev. Plant Sci. 1996. VI5. P.583-606

81. Hussey G., Stacey N.I. Factors Affecting the Formation of in vitro Tuberes of Potato (Solanum tuberosum L) // Ann Bot 1984. V.53. P.565-578

82. Ivanov V.B. Temporal control of root meristematic cell transition of elongation and differentiftion / Abst. Botanickeztagung. 2002. Freiburg, 2002. P.29

83. Jarkson S.D., Heuer A., Dietze J., Pzat S. Phytochrome В mediates the photoperiodic control of Tuber formation in potato //Plant J. 1996, V. 9, p. 159-168.

84. Kenn N.T. The molecular Biology of Disease Resistans // Plant Mol. Biol. 1992. V.19. P. 109-122

85. Kenn N.T. The molecular Biology of Disease Resistans // Plant Physiol. 1995. V.108. P.1673-1678

86. Kemble R.J., Shepard J.F. Cumoplasmik DNA variation in a potato protoclonal population // Idid -1984.-69, № 2.-P.211-216

87. Koda Y., Okazawa Y. Inthiences of environment, Hormonal and nutritional factors on potato tuberization in vitro// J. Crop. Sci. 1983. V.52.P.582-591

88. Koch K.E. Carbogidrate-Modulated Gene expression in plants // Annu. Rev. Plant Phisiol.Plant Mol. Biol.l996.V.47. P509-540.

89. Lamb C.J., Lawton M.A., Dron M., Dixon R.A. Signals and Transduction Mechanisms for Activation of Plant Defense against Microbiol Attack // Cell. 1989. V.56. P.215-224

90. Lorz H., Brovn P.T.H. Variability in tissue culture derived plants-possidle origins; advantages and drawbacks //Genetic Manipulation in Plant Breeding-Berlin; Now York: Walter de GruyterCo., 1986-P.513-534.

91. Mett V.L., Lochead L.P., Reyolds P.H.S. Copper-Controlable Gene Expression System for whole Plants // Plant Mol.Biol.1993.V90. P.4567-4571.

92. Mingo-Castel A.M., Young R., Smith O.E. Kinetin induced tuberization of potato in vitro on the mode of Action of kinetin // Plant Cell Physiol. 1976. V.17. p.557-570.

93. Mc Grady J.J., Struik P.C., Ewing E.E. Effects of Exogenous Applications of cytokinin on the Development of potato (Solanum tuberosum L) Cuttings // Potato Pes. 1986. V.29. P.191-205.

94. Piruzian E.S., Meet V.L., Kodets N.S., Urmeeva F.I. The USE of Bacterial Genes Encoding Herbicicide Tolerance in Constructing Transgenic Plants // Microbiol. Sci.1988. V.5. P.241-248.

95. Palmer C.E., Smith O.E. Effect of Kinetin on Tuber Formation on Isolated Stolons of Solanum tuberosum L. Cultured in vitro // Plant Cell Phisiol. 1970. V. 11 P.303-311.

96. Palmer C.E. Smith O.E. Cytokinins and Tuber initiation in the Potato Solanum tuberosum L. // Nature. 1969. V.221 p.279-280.

97. Potter C.S., Loeffler M. Stem Cells and Cellular Pedigress-a Conceptual Introduction // Academic. 1997. P.l-27.

98. Reals J.A., Neueschwander U.H., Willits M.G., Molina A.,Steiener H.Y., Nunt M.P. Sistemic Acquired Resistanse // Plant Cell.l996.V.8.P. 1809-1819.

99. Ryan C.A. Protease inhibitors in Plants Genes for improving Defenses against insects and Patogens // Annu. Rev. Phytopathol. 1990. V.28. P.425-449.

100. Sabatini S„ Beis D., Wolkenfelt H.,Murfelt J., Guifoile Т., Malamy J., Benfey P.,LeiserO., Bechtold N., Weesduk P., Scheres B. An auxin-Dependent Distal Organizer of Pattern and Polarity in the Arabidopsis Root // Cell. 1999. V.56. P.463-472.

101. Sabatini S., Heidstra R., Scheres B. SCARECROW is involved in Positioning the stem Cell Niche in the Arabidopsis Root Meristem // Genes Dev. 2003. V.17. P.354 358.

102. Schmulling Т., Schell J., Spena A. Genes from Agrobacterium rhizogenes influence plant development // EMBO J. 1989. v. 7 p. 2621-2629.

103. Schmulling Т., Schafer S., Romanov G.A. Cytokinins as regulator of gene expression // Physiol. Plant. 1997. V.100. P.505-519.

104. Shedord J.F., Bidney D., Shanin E. Potato protoplast in crop improvement// Sciense 1980.208.№ 4439.P. 17-24.

105. Simonova M.S., Cabrol В., Mett V.L., Kodets N.S., Piruzian E.S. Expression of Bacterial Glyphosate-Toleranse Gene in Potato Plants // Adst te. Eighth IVPAS Int. Congr. Pestcida Chemistry. Washington (DC), 1994.V.1. P.430.

106. Simko I. Sucrose Application Couses Hormonal changres Associated with potato Tuber Induction // J.Plant Crowth Regul. 1994. V117.P.575-584.

107. Skene K.G.M., Barlass M. Studies on the fragmented shoot apex of grapevin // J. Exp. Bot. 1983-34, № 147. P.7-24.

108. Smeekens S., Rook F. Sugar senringand sugar mediated signal transduction in plants // Plants Phisiol.l997.V.115.P.7-13

109. Sonnewald U.,, Hajrezaei M.R., Kossmann J. Heyer A., Thethewey R.M., Willamiter D. Increased potato tuber size resalting from apoplastic expression of a yeast invertase // Nature Biotechnol. 1997. V.6. P.794-797.

110. Stitt M.,Sonnewald U. Regulation of metabolism in transgenetic plants // Annu. Rev. Plant Physiol. Mol. Biol. 1995. V.46. P.341-368.

111. Van den Berg D., Willemsen V.,Hage W., Weisbeek P., Scheres B. Cell for in the Arabidopsis Root Meristem Determined by Direktional Signalling // Natire. 1995. V.378. P.62-65.

112. Vreugdenhil S.P., Helder H. Hormonal and Metabolic Control of Tuber Formation // Progrese in Plant Growth Regulators / Eds Korssen C.M. et al. Dordrecht: Kluwer Acad. Publ., 1992. P.393-400.

113. Weigel D., Jargens G. Stem Cells That Make Stems // Nature.2002. V.145. P.751-754.

114. Xin Xu., Van Lameren A.M., Vermer E., Vreugdenhil D. The Roll of Gibberellin, Absciscic Acid and Sucrose in the Regulation of Potato Tuber Formation in vitro // Plant Phisiol. 1998. V.l 17. P.575-584.

115. Xuzh Xu., Zipaul H., Abscisic acid induced chilling tolerance in Maize suspension- cultured Cells // plant. Physiol/ 1998. V. 99, p. 707-711.

116. Yu D„ Liu-Fan В., Klessig D.F., Chen Z. Is the High Besal Level of Salicylic Acid for Disease Resistance in Potato? // Plant Physiol. 1997. V/l 15. P.343-349.

117. Zanov V.B. Relationship between cell proliberation and transistion to Slongution in plant Koots // Jut. J. Dev. Biol. 1997. V.41. P.907-915.

118. Zong Xui S., Cheng-Zhang., Kang-Le Z. et al. Somaclonal genetics of rice Oryza sativa L. // Theor and Appl. Genet.-1983. -87. №1.- P.67-73.