Критерии активности болезни Крона и неспецифического язвенного колита у детей. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.08, кандидат медицинских наук Хандамирова, Ольга Олеговна

• Хандамирова, Ольга Олеговна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Хандамирова, Ольга Олеговна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Влияние генетических, иммунологических, микробных и факторов окружающей среды на патогенез ВЗК у детей. (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Генетические факторы развития ВЗК.

1.2 Влияние микробных агентов в развитии ВЗК.

1.3 Иммунологический фактор.

1.3.1 Роль врожденного иммунного ответа.

1.3.2 Роль адаптивного иммунного ответа.

1.3.3 Взаимодействие врожденного и адаптивного иммунитета в патогенезе ВЗК.

1.3.4 Роль восплительных и провоспалительных цитокинов при ВЗК.

1.4 Критерии активности ВЗК.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1 Общая характеристика обследуемых больных.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Изучение функциональной активности моноцитов и цитокинового статуса с использованием метода иммуномагнитной сепарации и цитометрии.

2.2.2 Методика проведения количественной ПЦР в режиме реального времени с целью определения уровня экспрессии мРНК 1Ь-12р70,1Ь-1-Ь, 2, 4, 5, 6, 8,10, ТОТ-а,Ь, N00-2 и ТОМ в биологическом материале.

2.2.3 Статистические методы.

Глава 3. Клинико-лабораторная и эндоскопическая характеристика воспалительных заболеваний кишечника у детей.

Глава 4. Особенности продукции цитокинов у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом.

Глава 5. Особенности экспрессии генов основных цитокинов и Т1Л14- и N002 рецепторов у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Критерии активности болезни Крона и неспецифического язвенного колита у детей.»

Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) до настоящего времени остаются одной из наиболее серьезных и нерешенных проблем в педиатрии и гастроэнтерологии. По тяжести течения, частоте осложнений, и летальности болезнь Крона (БК) и неспецифический язвенный колит (НЯК) занимают одно из ведущих мест в структуре болезней желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) детского возраста. В последние годы отмечается стремительный рост НЯК и, особенно, БК во всем мире, включая индустриально развитые страны, где тенденция роста наиболее высока. С каждым годом отмечается омоложение заболевания и уже регистрируются новые случаи болезни у детей первого года жизни.

На сегодняшний день распространенность ВЗК в мире составляет от 2,2 чел до 6,8 на 100 ООО детей. Частота НЯК в России составляет 20:100 000 населения из них около 10% составляют дети. Частота болезни Крона 3,5 на 100 000, из них 20-25% составляют дети [22]. Пик заболевания приходится на юношеский возраст и составляет около 1-2 случаев заболевания на 1000 человек [73]. Реальная частота ВЗК существенно выше, так как легкие формы НЯК и БК часто остаются не распознанными.

Хотя принято считать, что БК и НЯК разные заболевания, однако в своей клинической манифестации, по иммунологическим механизмам развития данной патологии и терапевтическому алгоритму они весьма схожи, что позволяет их рассматривать совместно как группу заболеваний.

Этиология ВЗК неизвестна. С современных позиций патогенез ВЗК рассматривают как генетически детерминированную дисрегуляцию иммунной системы хозяина на патоген-ассоциированные молекулы, в том i числе резидентную микрофлору кишечника и антигены пищи. В первую очередь эта дисрегуляция проявляется на уровне слизистой оболочки кишечника, где происходит максимальное взаимодействие микрофлоры с различными компонентами иммунной системы. В результате изменений функций клеток, участвующих в поддержании адекватного локального иммунного ответа происходит не контролируемое высвобождение растворимых медиаторов воспаления, итогом чего является развитие I патологии, в том числе ВЗК [131].

Иммунопатогенез БК и НЯК отличаются уровнем дифференцировки и активации Т-клеточного звена иммунитета. При обоих заболеваниях идет активация Т-клеток, но при БК в силу преобладания в слизистой СБ4-клеток с фенотипом Т-хелперов 1 типа (Thl) идет продукция преимущественно IFNy, TNFa и IL-23. В то время как при НЯК в слизистой отмечается повышение СВ4-клеток с фенотипом Т-хелперов 2 типа (Th2) и, следовательно, гиперпродукция IL-5 и IL-13 [46, 97, 165]. Подобная активация Thl возможно связана с подавлением контролирующих механизмов, в частности регуляторных клеток (CD4+CD25+,Th3). [158]. I

Важную роль в этом процессе играют и функциональные нарушения Trl-клеток, которые секретируют в высоких дозах IL-10, цитокин, подавляющий активность Thl-клеток [74]. Детальные исследования на лабораторных животных показали, что длительная стимуляция продукции цитокинов Thl-клетками вызывает активацию макрофагов, которые, в свою очередь, продуцируя IL-12, IL-18 и фактор, ингибирующий миграцию макрофагов, вызывая дальнейшую стимуляцию Thl-клеток. Активированные макрофаги в свою очередь так же продуцируют спектр различных воспалительных цитокинов - TNF, IL-1, IL-6, что, в конечном счете, приводит к продукции неспецифических медиатров воспаления и повреждению тканей, а, следовательно, манифестации заболевания [158]. Итогом чрезмерной Т-клеточной активности при ВЗК является возникновение чрезмерного и продолжительного синтеза цитокинов в очаге воспаления.

С другой стороны накоплено достаточно много новой информации о роли врожденного иммунитета в патогенезе ВЗК, что ставит под сомнение первичность Thl и Th2 ответов в возникновении БК и НЯК. Возможно, эти ответы являются следствием дефектов, в механизмах врожденных иммунных ответов. Процесс распознавания микробных агентов с помощью врожденного иммунитета, происходит через То11-подобные рецепторы (TLR), которые располагаются на мембране клеток, и протеинами NOD, располагающимися в цитоплазме. Эти рецепторы обладают строгой специфичностью. Возможно, функциональная активность TLR и NOD нарушены при ВЗК. Трансфекционные исследования показали, что мутации NOD2 приводят к дефектной способности отвечать на липополисахариды (LPS) при БК [86].

Все эти исследования совместно с наблюдением животных моделей и генетическими ассоциациями, являются серьезными фактами, объясняющими огромную роль дефектов врожденного иммунитета в качестве ключевого компонента в основе развития ВЗК и, особенно, БК. Достаточно ли одиночных дефектов иммунитета или только их комбинация необходима для запуска и поддержания воспалительного процесса пока неизвестно, и требует дальнейшего исследования.

НЯК и БК до сих пор остаются неизлечимыми заболеваниями. Лечение ВЗК является многоступенчатым и требует назначения гормональной и цитостатической терапии, а также при неэффективности терапии -хирургического лечения. Для оценки состояния больного, определения тактики терапии, ее объема, прогноза заболевания, своевременного выполнения хирургического лечения необходима адекватная оценка тяжести и активности основного процесса. Разными авторами были предложены индексы активности воспалительного процесса, выраженные в баллах, включающих, как правило, клинические и/или эндоскопические изменения. Одним из первых индексов для НЯК были разработаны критерии активности предложенные в 1955 году Truelov и Witts [1-3, 28, 161], чуть позже появились индексы Schroeder, Масевича. Для применения в педиатрии был разработан индекс активности ESPGHAN. В настоящее время в педиатрической практике широко используется индекс активности Rachmilewitz, который, как считается, наиболее полно отражает тяжесть заболевания [6,10, 23].

Для БК был разработан в 1980 году индекс Ван - Гееса, несколько I позже появился индекс активности для БК (CDAI) по Best. Для больных со свищевой формой БК в 1990г. был предложен Perianal Disease Activity Index (PDAI), но и он не дает полного представления о тяжести процесса так как не отражает эндоскопическую картину заболевания. В 1989 г. был выработан эндоскопический индекс активности CDEIS, появились и другие индексы: Harvey Bradshaw, CapeTown index. В 1991г. для использования в мультицентровых исследованиях был составлен педиатрический индекс активности болезни Крона (PCDAI) [28] и в настоящее время широко используется в практической медицине. Наличие большого количества систем оценки активности, как БК, так и НЯК, указывают на неоднозначность и недостатачную информативность этих показателей.

Практически не существует зарубежных работ, сопоставляющих индексы активности между собой и только по данным исследований отечественных авторов проведенных на базе Научного Центра Здоровья детей РАМН Цимбаловой Е.Г., была дана комплексная оценка критериев активности ВЗК и было показано, что для оценки тяжести НЯК у детей максимально информативным является клинический индекс активности Rachmilewitz, который наиболее полно отражает тяжесть заболевания ребенка, а для БК наиболее информативным является педиатрический индекс активности - PCDIA так как он учитывает возрастные особенности детей и отражает степень тяжести заболевания ребенка.

Не смотря на огромное количество спредложенных индексов активности, не один из них не дает представление об истинной картине воспалительного процесса, так как не отражает всю полноту иммунопатогенетических особенностей болезни, а следовательно требует пересмотра с учетом новых знаний о иммунных нарушениях, происходящих при этих двух заболеваниях.

Цель исследования:

Оценить информативность существующих критериев активности ВЗК заболеваний на основании комплексного изучения особенностей иммунного ответа у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом для их оптимизации и адаптации применительно к детскому возрасту.

Задачи исследования:

1. Оценить активность процесса при болезни Крона и неспецифическом язвенном колите у детей по существующим клиническим и эндоскопическим критериям.

2. Определить концентрацию про- и противовоспалительных цитокинов (IL-lß, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-y, TNF-a, TNF-ß, IL-5, IL-12) в сыворотке крови у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом с разной локализацией и активностью воспалительного процесса.

3. В эксперименте изучить спонтанную и стимулированную (липополисахаридом, мурамилпептидом, и их сочетанием) продукцию про- и противовоспалительных цитокинов (IL-lß, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, ILIO, IFN-y, TNF-a, TNF-ß) в культуре цельной крови и изолированных моноцитов периферической крови у детей с БК и НЯК с разной локализацией и активностью воспалительного процесса.

4. Оценить экспрессию м-РНК про- и противовоспалительных цитокинов (IL-lß, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-y, TNF-a, TNF-ß) и рецепторов (TLR4 и NOD2) в клетках цельной крови и биоптата слизистой оболочки кишечника у детей с БК и НЯК с разной локализацией и активностью воспалительного процесса.

5. На основании сопоставления традиционных критериев активности БК и НЯК с особенностями иммуно-воспалительной реакции при разной локализации и активности воспалительного процесса ВЗК у детей определить их информативность и предложить дополнительные критерии оценки активности заболеваний.

Научная новизна:

Впервые установлены особенности иммунного воспаления в зависимости от клинических форм, локализации процесса и течения у детей при БК и НЯК на основании проведенного комплексного изучения иммунного воспаления по данным сывороточного уровня основных про- и противовоспалительных цитокинов (1Ь-1(3,1Ь-2,1Ь-4,1Ь-6,1Ь-8,1Ь-10, ШИ-у, ТОТ-а, ТИР-Р, 1Ь-5, 1Ь-12), их спонтанной и стимулированной продукции в культуре цельной крови и изолированных моноцитов периферической крови, экспрессии м-РНК про- и противовоспалительных цитокинов и паттерн-распознающих рецепторов (N002 и ТЫ14) в клетках крови и слизистой оболочки толстой кишки.

Оптимизирована оценка информативности традиционных индексов активности БК и НЯК при сопоставлении с объективными показателями иммунного ответа у детей с ВЗК с разной локализацией и активностью воспалительного процесса.

Предложены новые дополнительные критерии активности болезни Крона и неспецифического язвенного колита у детей: клинические критерии высокой активности иммунного воспаления БК: изолированное поражения верхних отделов ЖКТ, изолированный илеит, наличие внекишечных проявлений, а также стенозирующее и/или пенетрирующее течение заболевания; клинические критерии высокой активности иммунного воспаления НЯК: наличие внекишечных проявлений; лабораторные критерии высокой активности иммунного воспаления БК и НЯК: повышенная продукция 1Ь-8, особенно ЬР8-стимулированная продукция; лабораторные критерии ремиссии является высокий уровень 1Ь-10.

Практическая значимость:

Выявленные особенности иммунного воспаления у детей с БК и НЯК с разной локализацией и активностью воспалительного процесса позволяют объективно оценить активность патологического процесса для оптимального подбора терапии.

Результаты, полученные в ходе исследования, позволили оптимизировать критерии оценки активности ВЗК у детей на основании патогенетически обоснованных научных данных, что позволяет рационализировать терапию, прогнозировать течение и рецидив заболевания. Показана высокая информативность педиатрического индекса активности болезни Крона (PCDAI).

Показано, что оценка иммунного воспаления должна базироваться на комплексном исследовании концентрации цитокинов в нативной сыворотке, их спонтанной и стимулированной продукции в культуре крови и экспрессии их генов в крови и тканях, так как исследование только концентрации в сыворотке не отражает истинного характера иммуно-воспалительной реакции.

Заключение диссертации по теме «Педиатрия», Хандамирова, Ольга Олеговна

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Оценивать активность и определять прогноз течения болезни Крона и неспецифического язвенного колита у детей необходимо по результатам исследования уровня цитокинов в сыворотке и при стимуляции цельной крови, а так же определяя уровень экспрессии основных цитокинов и рецепторов Т1Л4, N002 методом ПЦР в режиме реального времени в биоптатах слизистой толстого кишечника и в периферической крови.

2. Морфологическое исследование биоптатов слизистой оболочки толстой кишки у детей с воспалительными заболеваниями кишечника должно сопровождаться изучением уровня экспрессии основных цитокинов и рецепторов ТЬЫ4, N002 методом ПЦР в режиме реального времени, что важно для диагностики, определения распространенности патологического процесса и построения прогноза.

3. Диагностическими критериями воспалительных заболеваний кишечника у детей служат нарастание уровня провоспалительных цитокинов в сыворотке крови, при стимуляции цельной крови и снижение уровня противовоспалительных цитокинов, что требует активации проводимой терапии I

4. Для оценки активности и определения прогноза течения болезни Крона и неспецифического язвенного колита у детей целесообразно использовать разработанные нами дополнительные диагностические критерии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Хандамирова, Ольга Олеговна, 2010 год

1. Белоусова Е.А. //Болезнь Крона проблемы и перспективы лечения. // Materia Medica. - 2003.- № 2-3. С. 42-44

2. Белоусова Е.А. //Язвенный колит и болезнь Крона.// Москва.- 2002. С. 16-17

3. Белоусова Е.А.//Язвенный колит и болезнь Крона.//Тверь.- 2002.- С. 128

4. Голофеевский В.Ю., Герасимова A.B., Ситкин С.И., Асанин Ю.Ю.// Индекс Масевича: новый подход к оценке клинико-эндоскопической активности язвенного колита.// Гастроэнтерология.- 2004.-Т. 1.- С. 1415.

5. Григорьев П.Я., Яковенко A.B.// Клиническая гастроэнтерология.// -Москва.- 1998. С. 435-436

6. Гудкова Р.В., Жукова С.Г., Крумс Л.М. //Сывороточные цитокины при глютеновой энтеропатии. // Российский гастроэнтерологический журнал 2001. - №2. - С. 121

7. Демьянов A.B., Котов А.Ю., Симбирцев A.C. //Диагностическая ценность исследования уровня цитокинов в клинической практике. // Цитокины и воспаление. 2003.- №3. - С. 20-35

8. Жибурт Е.Б., Серебряная Н.Б., Каткова И.В., Дьякова В.В.//Цитокины в кроветворении, иммуногенезе и воспалении.// Терра Медика Нова.-1996.-№ 3,- С. 38

9. Ю.Ивашкин В.Т., Комаров Ф.И., Рапопорт С.И. //Краткое руководство по гастроэнтерологии.//- Москва.- 2001. С. 275-276

10. П.Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A.// Эндогенные иммуномодуляторы.// СПб. Гиппократ.- 1992.- С. 255

11. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Клебанов Г.И. и др. // Механизмы цитокининдуцированной активности фагоцитов. // Российская Иммунология. 1999. - Т.4, приложение 1. - С. 36

12. Козлов В.А.// Некотрые аспекты проблемы цитокинов. // Цитокины и воспаление. 2002. - №1. - с. 3-8

13. Маев И.В., Григорян С.С., Гаджиева М.Г., Овчинникова Н.И. //Роль цитокинов в патогенезе неспецифического язвенного колита // Клиническая медицина. 2002. - № 1. - С. 15-19

14. Насонов Е.Л. //Нарушения иммунитета при аутоиммунных заболеваниях. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -1999.- Т. 9.- № 4,- Прил. 7.- С. 43-48

15. Насонов E.JI.// Нарушение иммунитета при аутоиммунных заболеваниях. // Материалы 15 Юбилейной школы-семинара им. A.M. Уголева «Современные проблемы физиологии и патологии пищеварения».- 1999.- С.43-47

16. Павленко В.В., Ягода A.B.// Интерлейкин-8 и воспалительная реакция в слизистой оболочке толстого кишечника. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 2002. - Т. 12.-№5. -С.58

17. Пальцев М.А., Иванов A.A.// Межклеточные взаимодействия.// Москва. Медицина. 1995. - С.222

18. Парфенов А.И.// Проблемы патогенеза, диагностики и фармакотерапии ВЗК. // Consillium medicum. 2003.- Т.5.- №3.- С. 23-27

19. Рачкова Н.С., Хавкин А.И. //Воспалительные заболевания кишечника. Проблемы дифференциальной диагностики и лечения// Детская гастроэнтерология и нутрициология. 12 февраля 2006 г.- том 14.- № 3.- С. 154-159

20. Румянцев В.Г., Щиголева Н.Е. //Болезнь Крона в детском возрасте. //Прил. к журналу "Consilium Medicum". 2002. - Т. 4. - № 6. - С. 1720.

21. Симбирцев A.C. //Цитокины-новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1. - № 1С. 9-16.

22. Трэвис С.П., Тейлор Р.Х., Мисевич Дж.Дж.// Гастроэнтерология. -Москва.- 2002. С. 392-393

23. Фрейдлин И.С. //Система мононуклеарных фагоцитов. //М. Медицина.-1984. С. 272

24. Фрейдлин И.С., Тотолян A.A. //Клетки иммунной системы // СПб. Наука.- 2001.- Т. 3-4. С. 390

25. Хаитов P.M. //Иммунная система ЖКТ: особенности строения и функционирования в норме и патологии. // Иммунология. — 1997. №5. - С. 4-7

26. Царегородцева Т.М., Серова Т.И., Ильченко Л.Ю. и др. Цитокины и цитокинотерапия при заболеваниях органов пищеварения.// Терапевтический архив. Москва. - 2004. - №4. - С. 69-72

27. Цимбалова Е.Г. //Клинико-лабораторные проявления и критерии активности воспалительных заболеваний кишечника у детей// Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва. - 2005. - С. 5

28. Черешнев В.А., Гусев Е.И. //Иммунология воспаления: роль цитокинов.// Мед. иммунол. — 2001. №3. - С. 361-368

29. Atsangi J., Silverberg М. S., Vermeire S., J-F et al. // The Montreal classification of inflammatory bowel disease: controversies, consensus, and implications. //Gut. 2006. - Vol. 55. - P. 749-753

30. Aste-Amerzaga M., Valiantae N.M., Ma X., et al. // Interleukin 10 (IL-10) inhibitis human lymphocyte interferon gamma-production by suppressing natural killer cell stimulatory factor/11-12 synthesis in accessory cells. // J.

31. Exp. Med. 1993. - Vol. 178, N3. - P. 1041-1048

32. Abrams J., Waal Malefyt R., Bennett B., Figdor C.G., et all. // Interleukin 10 (IL-10) inhibits cytokine synthesis by human monocytes: an autoregulatory role of IL-10 produced by monocytes. // J. of Exp. Med.-1991.- Vol. 174. N.5. - P. 1209-1220

33. Abreu MT., Fukata M., Arditi M. // TLR signaling in the gut in helth and disease. // J. Immunol.- 2005,- Vol. 174.- P.4453-4460

34. Ahmad T., Armuzzi A., Bunce M., Mulcahy-Hawes K., Marshall S.E., Orchard T.R., et al. // The molecular classification of the clinical manifestations of Crohn's disease. // Gastroenterology.- 2002.-Vol. 122. P. 854-866

35. Ahmad T., Tamboli C.P., Jewell D., et.al. // Clinical relevance of advances in genetics and pharmacogenetics of IBD. // Gastroenterology. 2004.- Vol. 126. - P. 1533-1549

36. Aksoy E., Zouain C.S., Vanhoutte F., at all. // Double-stranded RNAs from the helminth parasite Schistosoma activate TLR3 in dendritic cells. // J. Biol. Chem.-2005. Vol. 280. - P. 277-283

37. Bach J.F. // Regulatory T cells, under scrutiny. // Nat. Rev. Immunol. -2003. Vol. 3. - P. 189-198

38. Bamias G., Okazava, Rivera-Nieves I., et. al. // Commensale bacteria exacerbatae intestinale inflammation but are not essential for the development of murine colitis. // J. Immunol. 2007. - Vol. 178. - P. 18091818

39. Behrens R. // Crohn's desease and ulcerative colitis in children and adolescence.// Practice Manual. Dr.Falk pharma GmbH. 2003.

40. Best W.R., Becktel J.M., Singleton J.W., Kern F. // Development of a Crohn's disease activity index. National Cooperative Crohn's Disease Study. // Gastroenterol. 1976. - Vol. 70. - P. 439-440

41. Betteli E., Carrier Y., Gao W., Korn T., et all. // Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector TH17 and regulatory T cells. // Nature.-2006. Vol. 441. - P. 235-238

42. Bilsborough J., George T.C., Norment A., et al. // Mucosal CD8alpha+ DC, with a plasmacytoid phenotype, induce differentiation and support function of T cells with regulatory properties. // Immunology. 2003. - Vol. 108. - P. 481-492

43. Bluestone J.A., Abbas A.K. // Natural versus adaptive regulatory T cells.// Nat. Rev. Immunol. 2003. - Vol. 3. - P. 253-257

44. Boirivant M., Fuss I.J., Chu A., et al. // Oxazolone colitis: A murine model of T helper cell type 2 colitis treatable with antibodies to interleukin 4. // J. Exp. Med. -1998. Vol. 188. - P. 1929-1939

45. Brand S., Stauolinger T., Schnitzler F., et al. // The role1 of Toll-lake receptor

46. Asp 299gly and Th399 ile polymorphisms and Cardl5/NOD2 mutation in the susceptibility and phenotype of Crohns disease. // Inflamm Bowel disease. 2005. -Vol. 11. - P. 645-652

47. Caramalho I., Lopes-Carvalho T., Ostler D., Zelenay S., et al. // Regulatory T cells selectively express toll-like receptors and are activated by lipopolysaccharide. // J. Exp. Med. 2003. - Vol. 197. - P.403-411

48. Cario E., Podolsky D.K. // Differential alteration in intestinal epithelial cell expression of toll-like receptor 3 (TLR3) and TLR4 in inflammatory bowel disease. // Infect. Immun. 2000. - Vol. 68. - P.7010-7017

49. Cario E., Rosenberg I.M., Brandwein S.L., et al. // Lipopolysaccharide activates distinct signaling pathways in intestinal epithelial cell lines expressing Toll-like receptors. // J. Immunol. 2000. - Vol. 164. - P. 966972

50. Cario E. //Bacterial interactions with cells of the intestinal mucosa: Toll-like receptors and NOD2. // Gut. 2005. - Vol. 54. - P. 1182-1193

51. Cerami A., Beutler B. // The role of cachectin / TNF in endotoxin shok and cachexia. //Immunol. 1988. - Vol. 9. - P. 28-31

52. Cho J.H. // The NOD2 gene in Crohn's disease: implications for future research into the genetics and immunology of Crohn's disease. //Inflamm. Bowel Dis. 2001. - Vol. 7. - P. 271-275

53. Cuthbert A.P., Fisher S.A., Mirza M.M., King K., Hampe J., Croucher P.J., et al. // The contribution of NOD2 gene mutations to the risk and site of disease in inflammatory bowel disease. // Gastroenterology. 2002. - Vol. 122. - P. 867-874

54. Dalton H.R., Jewell D.P. // The immunology of inflammatory bowel disease. // Inflammatory bowel disease. Ed. By G. Jarnerot. 1992. - Vol. 23. -P.125-147

55. Dalwadi H., Wei B., Schräge M., et al. // B cell developmental requirement for the G alpha i2 gene. // J. Immunol. 2003. - Vol. 170. - P. 1707-1715

56. Daperno M., D'Haens G., Van Assche G., et al. // Development and validation of a new, simplified endoscopic activity score for Crohn's disease: the SES-CD. // Gastrointest. Endosc. 2004. - Vol. 60. - N. 4. - P. 505-512

57. Eckmann L., Karin M. // NOD2 and Crhons disease: loss or gain of function? // Immunity. 2005. - Vol. 22. - P. 661-667

58. Elson C.D., McCracken V.I., Dimmit R.A., et al. // Experimental models of Inflamatory Bowel Disease reveal innate, adaptive and regulatory mechanisms of host dialogue with the microbiota// Immunol. Rov. 2005. -Vol. 206. - P. 260-276

59. Fahlen L., Read S., Gorelik L., et al. // T cells that cannot respond to TGF-beta escape control by CD4(+)CD25(+) regulatory T cells. // J. Exp. Med. -2005. Vol. 201. - P. 737-746

60. Fellermann K., Stauge D.E., Schaeffeler E., et al. // A chromosome 8 gene-claster polymorphism with low human beta-defensin 2 gene copy number predisposes to Crohns disease of the colon. // Am O Hum Genet. 2006. -Vol. 79. - P. 439-448

61. Fiocchi C. // Inflammatory bowel disease: etiology and pathogenesis. // Gastroenterology. 1998. - Vol. 115. - P. 182-205

62. Fiorentino D.F., Bond M.W., Mosmann T.R. // Two types of mouse T helper cell. IV. Th2 clones secrete a factor that inhibits cytokine production by Thl clones.// J. of Exp. Med. 1989.-Vol. 170. - N. 6. - P. 2081-2095

63. Fitzgerald K.A., Rowe D.C., Barnes B.J., et all. // LPS-TLR4 signaling to IRF-3/7 and NF-kappaB involves the toll adapters TRAM and TRIF. // J. Exp. Med. 2003. - Vol. 198. - P. 1043-1055

64. Franchimont D., Vermeire S., Housni H., et al. // Deficent host-bacteria interactions in inflammatory bowel disease? The TLR4 Asp 299gly polimorfhism is associated with Crohns disease and ulcerayive colitis. // Gut. 2004. - Vol. 53. - P. 987-992

65. Fuss I.J., Boirivant M., Lacy B., et al. // The interrelated roles of TGF-beta and IL-10 in the regulation of experimental colitis. // J. Immunol. 2002. -Vol. 168. - P. 900-908

66. Gorelik L., Flavell R.A. //Abrogation of TGFbeta signaling in T cells leads to spontaneous T cell differentiation and autoimmune disease.// Immunity. -2000. -Vol. 12. P. 171-181

67. Goyette P., Labbe C., Trinh Truc T., et al.// Molecular pathogenesis of inflammatory bowel disease.// Annals of medicine. 2007. - Vol. 39. -N. 3. - P. 177-199.

68. Groux H., O'Garra A., Bigler M., et al. //A CD4+ T-cell subset inhibitsantigenspecific T-cell responses and prevents colitis.//Nature. 1997. - Vol. 389.- P. 737-742

69. Hampe J., Cuthbert A., Croucher P.J., Mirza M.M., Mascheretti S., Fisher S., et al. //Association between insertion mutation in NOD2 gene and Crohn's disease in German and British populations.// Lancet. 2001. - Vol. 357. - P. 1925-1928.

70. Harms H.K., Blomer R., et al.// A paediatric Crohn's Disease activity index (PCDAI). Is it useful?//Acta Paediatr. 1994. - Vol. 395. - P. 22-26

71. Hart A.L., Al Hassi H.O., Rigby R.J., et al.// Characteristics of intestinal dendritic cells in inflammatory bowel diseases. //Gastroenterology.- 2005. -Vol. 129. P. 50-65

72. Heine H. Lien EM Int. Arch. Allergy Immunol. 2003. - Vol. 130. -N. 3. -P. 180-191

73. Honda K., Yanai H., Negishi H., et al. // IRF-7 is the master regulator of type-1 interferon immune responses.// Nature. 2005. - Vol. 434. - P. 772777.

74. Hout R., Perrot I., Garcia E., Durand I., and all. // CD4+CD25 high regulatory T cells modulate myeloid but not plasmacytoid dendritic cells activation.// J. Immunol. 2006. - Vol. 176. - P. 5293-5298

75. Howard M., O'Garra A.//Biological properties of interleukin 10.//Immunology Today. 1992. - Vol. 13. - N.6. - P. 198-200

76. Hugot J.P., Chamaillard M., Zouali H., et al. //Association of NOD2 leucine-rich repeat variants with susceptibility to Crohn's disease.// Nature. 2001. - Vol. 411. - P. 599-603

77. Inohara N., Nunez G. //NODs: intracellular proteins involved in inflammation and apoptosis.// Nature. 2003. - Vol. 3. - P. 371-382

78. Jung D.Y., Lee H., Jung B.Y., Ock J., at all. // TLR4, but not TLR2, signals autoregulatory apoptosis of cultured microglia: a critical role of IFN-beta asa decision maker.// J. Immunol. 2005. - Vol. 174. - P.6467-6476

79. Kato H., Sato S., Yoneyama M., at all.// Cell type-specific involvement of RIG-I in antiviral response.//Immunity. 2005. - Vol. 23. - P. 19-28

80. Kawai T., Akira S.// TLR signaling// Cell Death Differ. 2006. - Vol. 13. -P. 816-825

81. Kelsall B.L., Leon F.// Involvement of intestinal dendritic cells in oral tolerance,immunity to pathogens, and inflammatory bowel disease.// Immunol Rev. 2005. - Vol. 206. - P. 132-148

82. Kobayashi K.S., Chamaillard M., Ogura Y., Henegariu O., Inohara N., Nunez G., et al.// NOD2-dependent regulation of innate and adaptive immunity in the intestinal tract.// Science. 2005. - Vol. 307. - P. 731^734

83. Koizumi M., KingN., Lobb R., Benjamin C., Podolsky D.K.// Expression of vascular adhesion molecules in inflammatory bowel disease.// Gastroenterology.- 1992. Vol. 103. - P. 840-847

84. Komai-Koma M., Jones L., Ogg G.S., Xu D., at all.// TLR2 is expressed on activated T cells as a costimulatory receptor.// Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -2004. -Vol. 101. P. 3029-3034

85. Krajina T., Leithauser F., Moller P., et al. // Colonic lamina propria dendritic cells in mice with CD4+ T cell-induced colitis. // Eur. J. Immunol. 2003. - Vol. 33. - P. 1073-1083

86. Kudo T., Hatton R.D., Oliver J., Liu X., at all.// Regulatory T cells suppression and anergy are differentially regulated by1 proinflammatory cytokines produced by TLR-activated dendritic cells.// J. Immunol. 2004. -Vol. 173. - P. 7249-7258

87. Kuhn R., Lohler J., Rennick D., et al.// Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis.// Cell. 1993. - Vol. 75. - P. 263-274

88. Lepage P., Seksik P., et al.// Biodivesity of the mucosa-associated microbiota is stable along the distal digestive tract in helthy individuals and patients with IBD.// Inflamatory Bowel Disease . 2006. - Vol. 12. - P. 106111

89. Lesage S., Zouali H., Cezard J.P., Colombel J.F., Belaiche J., Almer S., et al. //CARD15/NOD2 mutational analysis and genotype-phenotype correlation in 612 patients with inflammatory bowel disease.// Am. J. Hum. Genet. 2002. - Vol. 70.- P. 845-857

90. Li J., Moran T., Swanson E., et al. // Regulation of IL-8 and IL-1 beta expression in Crohn's disease associated NOD2/CARD15 mutations. //Hum. Mol. Genet. 2004. - Vol. 13. - P. 1715-1725

91. Li X., Shen S., Urso D., Kalique S., Park S.H., at all.// Phenotypic and immunoregulatory characteristics of monocytic iris cells.// Immunology. -2006. -Vol. 117. P. 566-575

92. Liew F.Y., Xu D., Brint E.K.// Negayive regulation of toll-like receptormediated immune responses.// Nat. Rev. Immunol. 2005. - Vol. 5. - P. 446-458

93. Lim H.W., Hillsamer P., Banham A.H., et al.// Cutting edge: direct suppression of B cells by CD4+ CD25+ regulatory T cells. //J. Immunol.2005. Vol. 175. - P. 4180-4183

94. Liu G., Wu Y., Gong S., Zhao Y. // Toll-like receptors and graft rejection.// Transpl. Immunol. 2006. - Vol. 16. - P. 25-31

95. Liu G., Xia X.P., Gong S.L., Zhao Y.// The macrophage heterogeneity: difference between mouse peritoneal exudates and splenic F4/80+macrophages.// J. Cell Phisiol. 2006. - Vol. 209. - P. 341-352

96. Liu H., Komai-Koma M., Xu D., Liew F.Y.// Toll-like receptor2 signaling modulates the functions of CD4+CD25+ regulatory T cells.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol. 103. - P. 7048-7053

97. Maeda S., Hsu L.C., Liu H., Bankston L.A., Iimura M., Kagnoff M.F., et al. //NOD2 mutation in Crohn's disease potentiates NF-kappaB activity and IL-1 beta processing.// Science. 2005. - Vol. 307. - P. 734-738

98. Male D., Brostoff J., Roitt I. // Immunology. Seventh Ed. Elsevier.2006.-P. 552

99. Maloy K.J., Antonelli L.R., Lefevre M., et al. //Cure of innate intestinal immune pathology by CD4+CD25+ regulatory T cells.// Immunol Lett. -2005.-Vol. 97.-P. 189-192

100. Manichanch C., Rigottier-Gois L., Bonnaud et al.// Redused divercity of faecal microbiota in Crohn s disease revaled by a metagenomic analysis.// Cut. 2006. - Vol. 55. - P. 205-211

101. Mannon P.J., Fuss I.J., Mayer L., Elson C.O., Sandborn W.J., Present D., et al.// Anti-interleukin-12 antibody for active Crohn's disease.//N. Engl. J. Med. 2004. - Vol. 351. - P. 2069-2079

102. Matija Hedl, Jing Li, Judy H. Cho. //Chronic stimulation of NOD2 mediates tolerance to bacteriae products.// Immunology. 2007. - Vol. 104. -P. 1940-1945

103. Matsuoka K., Inoue N., Sato T., et al.// T-bet upregulation and subsequent interleukin 12 stimulation are essential for induction of Thl mediated immunopathology in Crohn's disease.// Gut. 2004. - Vol. 53. - P. 13031308

104. Maul J., Loddenkemper C., Mundt P., et al.// Peripheral and intestinal regulatory CD4+ CD25(high) T cells in inflammatory bowel disease. //Gastroenterology.- 2005. Vol. 128. - P. 1868-1878

105. McKenzie B.S., Kastelein R.A., Cua D.J.// Understanding the IL-23/ IL-17 immune pathway. //Trends Immunol. 2006. - Vol. 27. - P. 17-23

106. Medzhitov R., Janeway C., Jr A.// Innate immunity: impact on the adaptive immune response. // Curr. Opin. Immunol. 1997. - Vol. 9. - P. 4-9

107. Miyake 2004 Endotoxin Recognition Molecules MD-2 and Toll-like Receptor 4 as Potential Targets for Therapeutic Intervention of Endotoxin Shock Kensuke Miyake.// Inflammation & Allergy. 2004. - Vol. 3. -N. 3. - P. 291-297

108. Monteleone G., Biancone L., Marasco R., Morrone G., Marasco O., Luzza F., et al. //Interleukin 12 is expressed and actively released by Crohn's disease intestinal lamina propria mononuclear cells.// Gastroenterology. -1997. Vol. 112. - P. 1169-1178

109. Monteleone G., Kumberova A., Croft N.M., et al. //Blocking Smad7 restores TGFbetal signaling in chronic inflammatory bowel disease.// J. Clin. Invest. -2001. Vol. 108. - P. 601-609

110. Morgan M.E., Witteveen H.J., Sutmuller R.P., et al.// CD25+ regulatory cells from HLA-DQ8 transgenic mice are capable of modulating collagen-induced arthritis.// Hum. Immunol. 2004. -Vol. 65. - P. 1319-1327

111. Mottet C., Uhlig H.H., Powrie F. //Cutting edge: cure of colitis by CD4+CD25+ regulatory T cells.// J. Immunol. 2003. - Vol. 170. - P. 39393943

112. Neurath M.F., Fuss I., Kelsall B.L., et al. //Experimental granulomatous colitis in mice is abrogated by induction of TGF-beta-mediated oral tolerance.//J. Exp. Med.-1996. Vol. 183. - P. 2605-1266

113. Neurath M.F., Fuss I., Kelsall B.L., Stuber E., Strober W. //Antibodies to interleukin 12 abrogate established experimental colitis in mice.// J. Exp. Med. 1995. - Vol. 182. - P. 1281-1290

114. Pallone F., Monteleone G., Monteleone I., Biancone L. // Chapter 6. The Immune System in Inflammatory Bowel Disease.Inflammatory bowel diseases. // J. Satsangi & L. R. Sutherland. Elsevier: Churchill Livingstone. - Philadelphia. - 2003. - P. 85-93

115. Parrello T., Monteleone G., Cucchiara S., et al. //Up-regulation of the IL-12 receptor beta 2 chain in Crohn's disease.// J. Immunol. 2000. - Vol. 165. - P. 7234-7239

116. Parronchi P., Romagnani P., Annunziato F., Sampognaro S., Becchio A., Giannarini L., et al.// Type 1 T-helper cell predominance and interleukin-12 expression in the gut of patients with Crohn's disease.//Am. J. Pathol. -1997. Vol. 150. - P. 823-832

117. Pasare C., Medzhitov R. // Toll-dependent control mechanisms of CD4 T cell activation.// Immunity. 2004. - Vol. 21. - P. 733-741

118. Pasare C., Medzhitov R. // Toll-like receptors: balancing host resistance with immune tolerance.// Curr. Opin. Immunol. 2003. - Vol. 15. - P. 677682

119. Passare C., Medzhitov R. // Toll pathway- dependent blockade of CD4+CD25+ T cell-mediated suppression by dendritic cells.//Sciens. -2003. Vol. 2003. - P. 1033-1036

120. Peltekova V.D., Wintle R.F., Rubin L.A. et al// Functional variants of OCTN cation transporter genes are associated with Crohns disease disease// Nat. Genet. 2004. - Vol. 36. - P. 471-475

121. Phillip West, Anna Alicia Koblansky, and Sankar Ghosh. // Recognition and Signaling by Toll-Like Receptors./ / Cell Dev. Biol. 2006. - Vol. 22. -P. 409-437

122. Podolsky D.K. //Inflammatory bowel disease.// N.Engl. J. Med. 2002.-Vol. 347.- N. 6.- P. 417-429

123. Rachmilewitz D. //Coated mesalazine (5 aminosalicylic acid) versus sulphasalazine in the treatment of active ulcerative colitis: a randomized trial // Br. Med. J.— 1989.— Vol. 289.— P. 82—86

124. Rath H.C., Schultz M., Freitag R., et al. //Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice.// Infect. Immun. 2001. - Vol. 69. - P. 2277-2285

125. Rimoldi M., Chieppa M., Salucci V., et al.// Intestinal immune homeostasis isregulated by the crosstalk between epithelial cells and dendritic cells.//Nat. Immunol. 2005. - Vol. 6. - P. 507-514

126. Rook GA.W., Brunei L.R. // Microbes immunoregulation and the gut// Gut. 2005. -Vol. 54. - P. 317-320

127. Sakaguchi S.// Naturally arising CD4+ regulatory t cells for immunologic selftolerance and negative control of immune responses.// Annu Rev. Immunol.- 2004. Vol. 22. - P. 531-562

128. Sans M., Salas A., Soriano A., et al.// Differential role of selectins in experimental colitis.// Gastroenterology. 2001. - Vol. 120. - P. 1162-1172

129. Scaldaferri F., Fiocchi C. // Inflammatory bowel disease: Progress and current concepts of etiopathogenesis. // Gastroenterology. 2007.- P. 9-15

130. Schlee M. //NOD2 (CARD15) mutations in Crohn's disease are associated with diminished mucosal alpha-defensin expression.// Gut. 2004. - Vol. 53. - P. 1658-1664

131. Schuppan D., Hahn E.G. // MMPs in the gut: inflammation hits the matrix. // Gut. 2000. - V. 47. - P. 12-14

132. Simon H., Murch A., et al. // Inflammatory bowel disease: working group report of the second world congress of pediatric gastroenterology,hepatology and nutrition. // J. Ped. Gastroenerol. Nutr. 2004. - Vol. 6. - P. 647-654.

133. Sokol H., Seksik P., Rigottier-Gois L., et al.// Specificis of the fecal microbiota in Inflamatory bowel disease.// Inflamatory Bowel Disease. -2006.-Vol. 12.-P. 106-111

134. Spiekermann G.M., Walker W.A. //Oral tolerance and its role in clinical disease.// J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2001. - Vol. 32. - P. 237-255

135. Stange E.F., Travis S.PL., Vermeire S., et al. //European evidence based consensus on the diagnostic and management of Crohn's disease: definitions and diagnostic.// Gut. 2006. - Vol. 55. - N. 1. - P. 1-15

136. Stoll M., Corneliussen B., Costello C.M., et al. // Genetic variation in DLG5 is associated with inflammatory bowel disease.// Nat. Genet. 2004.- Vol. 36. P. 476-480

137. Strober W., Murray P.J., Kitani A., Watanabe T. // Signalling pathways and molecular interactions of NODI and NOD2. // Nat. Rev. Immunol. -2006. Vol. 6. - P. 9-20

138. Swidsinski A., Ladhoff A., Pernthaler A., et al. //Mucosal flora in inflammatory bowel disease .//Gastroenterology. 2002. - Vol. 122. - P. 4454

139. Toms C., Powrie F. //Control of intestinal inflammation by regulatory T cells. // Microbes Infect. 2001. - Vol. 3. - P. 929-935

140. Torok H.P., Glas J., Tonenchi L., et al.// Crohn's disease is associated with atoll-like receptor-9 polymorphism. //Gastroenterology. 2004. - Vol. 127.- P.365-366

141. Tremelling M., Cummings F., Fisher S.A. et al.// IL23R varaiation determines susceptibility but not disease phenotype in inflammatory bowel disease.// Gastroenterology. 2007. -Vol. 132. - P. 1657-1664

142. Truelove S.C., Witts L.J.//Cortisone in ulcerative colitis: final report on a therapeutic trial.// BMJ. 1955. - P. 1041-1048

143. Turnbull E.L., Yrlid U., Jenkins C.D., et al.// Intestinal dendritic cell subsets: differential effects of systemic TLR4 stimulation on migratory fate and activation in vivo.// J. Immunol. 2005. - Vol. 174. - P. 1374-1384

144. Tysk C., Lindberg E., Jarnerot G., Floderus-Myrhed B. // Ulcerative colitis and Crohn's disease in an unselected population of monozygotic and dizygotic twins: a study of heritability and the influence of smoking.// Gut. -1988.-Vol. 29. P. 990-996.

145. Uematsu S., Sato S., Yamomoto M., et al.// Interleukin-1 receptorassociated kinase-1 plays an essential role for Toll-like receptor (TLR)7- and TLR9-mediated interferon-a induction.// J. Exp. Med. 2005. -Vol. 201.-P. 915-923

146. Vainer B., Nielsen O.H., Hendel J., et al. //Colonic expression and synthesis of interleukin 13 and interleukin 15 in inflammatory bowel disease. //Cytokine.- 2000. Vol. 12. - P. 1531-1536

147. Van Deventer S. //Targeting TNF-a a key in the inflammatory process in Crohn's disease the mechanism of action of infliximab.// ¡Aliment. Pharmacol. Ther. - 1999. - Vol. 13. - P.43-48

148. Van Deventer S.// Tumor necrosis factor and Crohn's disease.// Gut.-1997.- Vol. 40. -N. 4. P. 443-448

149. Van Heel D.A., Ghosh S., Butler M., Hunt K.A., Lundberg A.M., Ahmad T., et al.// Muramyl dipeptide and toll-like receptor sensitivity in NOD2-associated Crohn's disease.//Lancet. 2005. - Vol. 365. - P. 1794-1796

150. Van Limbergen J., Russel R.K., Nimmo E.R., et al. //Genetics of the innate immune response in inflammatory bowel disease// Inflamm. Bowel disease. 2007. - Vol. 13. - P. 338-355

151. Vermeire S., Wild G., Kocher K., Cousineau J., Dufresne L., Bitton A., et al.// CARD 15 genetic variation in a Quebec population: prevalence, genotype-phenotype relationship, and haplotype structure.// Am. J. Hum. Genet. 2002. - Vol. 71. - P. 74-83

152. Wang R.F., Peng G., Wang H.Y.// Regulatory T cells and Toll-like receptors in tumor immunity.// Semin Immunol. 2006. - Vol. 18. - P. 136142

153. Warger T., Osterloh P., Rechtsteiner G., at all.// Synergistic activation of dendritic cells by combined Toll-like receptor ligation induces superior CTL responses in vivo.//Blood. 2006. - Vol. 108. - P. 544-550

154. Yazdanbakhsh M., Kremsner P.G., van Ree R.// Allergy, parasites and the hygiene hypothesis// Scince. 2002. - Vol. 296. - P. 490-494

155. Zanin-Zhorov A., Cahalon L., Tal G., Margalit R., at all.// Heat shock protein 60 enhances CD4CD25 regulatory T cell function via innate TLR2 signaling.// J. Clin. Invest. 2006. - Vol. 116. - P. 2022-2032

156. Zou W. // Regulatory T cells, tumor immunity and immunotherapy .//Nat. Rev. Immunol. 2006. - Vol. 6. - P. 295-307