Коррекция патогенетических факторов развития ишемического инсульта у крысы с помощью превентивной доставки генов, кодирующих VEGF, GDNF, NCAM тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Маркосян Ваге Аршалуйсович

• Маркосян Ваге Аршалуйсович
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Маркосян Ваге Аршалуйсович

Введение

Актуальность исследования

Цель и задачи исследования

Научная новизна

Научно-практическая значимость работы

Степень достоверности и апробация работы

Положения, выносимые на защиту:

Личный вклад автора

Структура и объем диссертационной работы

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Церебральный ишемический инсульт

1.1.1. Эпидемиология

1.1.2. Этиология

1.1.3. Патогенез

1.1.4. Лечение

1.2. Моделирование ишемического инсульта на животных

1.3. Стратегии генной и клеточной терапии инсульта

1.3.1. Экспрессионные вирусные вектора

1.3.2. Генная терапия in vivo

1.3.3. Клеточная терапия

1.3.4. Генная терапия ex vivo

1.4. Превентивная терапия ишемического инсульта

1.4.1. Антикоагулянтная терапия

1.4.2. Генная терапия

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Создание генных препаратов

2.1.1. Наработка аденовирусных векторов, несущих рекомбинантные гены

2.1.2. Композиция генных препаратов

2.2. Создание генно-клеточных препаратов

2.2.1. Получение мононуклеарных клеток крови пуповины человека

2.2.2. Генетическая модификация мононуклеарных клеток крови пуповины человека

2.2.3. Анализ эффективности трансдукции мононуклеарных клеток крови пуповины человека

2.3. Оперативные вмешательства на животных

2.3.1. Моделирование ишемического инсульта головного мозга

2.3.2. Превентивная доставка генных препаратов

2.3.3. Превентивная доставка генно-клеточных препаратов

2.4. Экспериментальные группы животных

2.5. Поведенческий тест «Липкая лента»

2.6. Гистологическое исследование головного мозга экспериментальных животных

2.6.1. Морфометрический анализ объема инфаркта головного мозга

2.6.2. Иммунофлуоресцентное окрашивание

2.6.3. Экспрессия рекомбинантных генов in vivo

2.7. Мультиплексный анализ цитокинов, хемокинов и факторов роста

2.8. Статистический анализ

Глава 3. Результаты исследования

3.1. Характеристики аденовирусных векторов, несущих гены человека (vegf165, gdnf, ncaml) и репортерный ген зеленого флуоресцирующего белка (gfp)

3.1.1. Экспрессия зеленого флуоресцентного белка в генетически модифицированных мононуклеарных клетках крови пуповины

3.1.2. Оценка уровня мРНК трнасгенов vegf165, gdnf и ncaml в МНКП

3.1.3. Мультиплексный анализ цитокинов, хемокинов и факторов роста в генетически модифицированных мононуклеарных клетках крови пуповины

3.1.1. Иммунофлуоресцентный анализ экспрессии GFP, VEGF, GDNF и NCAM в головном мозге крысы

3.2. Оценка эффективности превентивной доставки генного и генно-клеточного препаратов на сдерживание патогенетических факторов развтия ишемического инсульта

3.2.1. Оценка неврологического дефицита с помощью поведенческого теста «Липкая лента»

3.2.2. Морфометрический анализ объёма инфаркта мозга

3.2.3. Иммунофлуоресцентное исследование головного мозга

3.3. Мультиплексный анализ цитокинов, хемокинов и факторов роста в образцах сыворотки крови и цереброспинальной жидкости экспериментальных и интактных животных

Глава 4. Обсуждение результатов

Перспективы дальнешей разработки темы

Заключение

Выводы

Список литературы

Список сокращений

Список иллюстративного материала

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Коррекция патогенетических факторов развития ишемического инсульта у крысы с помощью превентивной доставки генов, кодирующих VEGF, GDNF, NCAM»

Актуальность исследования

В Российской Федерации каждый год фиксируется более 450 000 случаев инсульта головного мозга (ГМ) [14]. Несмотря на повышение эффективности современных методов терапии, смертность по причине инсульта составляет 125 человек на 100 тысяч населения, а у 70-80% выживших пациентов, сохраняются стойкие неврологические нарушения, что ведет к росту инвалидизации и является значимым социально-экономическим бременем не только для пациента и членов его семьи, но и для государства [14]. В центральной нервной системе существуют значительные ограничения регенерации, поэтому проблема сдерживания негативных последствий ВВ и стимулирования постишемической нейрорегенерации остается актуальной со времен античной медицины и до настоящего времени. Продолжающийся активный поиск новых эффективных методов лечения инсульта, позволил сформировать новое направление, основанное на генных и клеточных технологиях, которые открывают широкие перспективы в лечении инсульта.

В случае острого нарушения мозгового кровообращения запускаются сложные патофизиологические процессы, которые могут развиваться как в первые часы после сосудистой катастрофы, так и в последующие дни и недели [14]. Высокий риск гибели нейронов связан с некрозом и апоптозом, которые возникают на фоне острой ишемии, эксайтотоксичности, воспалительных процессов, клеточного стресса и дисфункции митохондрий [2]. Область сформировавшегося ишемического инфаркта с необратимыми изменениями окружает, так называемая «ишемическая полутень», или «пенумбра», в которой существенно снижено кровоснабжение [3]. Однако нервные клетки в ишемической полутени сохраняют жизнеспособность в течение 3-6 часового периода, известного как «терапевтическое окно», во время которого возможно предупредить массовую гибель нейронов. Специфическая терапия острого инсульта в этот временной

интервал ориентирована на восстановление кровообращения, поддержание обмена веществ и повышение жизнеспособности клеток мозга. Таким образом, в течение данного периода можно сдержать распространение инфаркта мозга на пограничные с первичным очагом некроза области ткани мозга.

Особый интерес представляет разработка методов превентивной генной терапии пациентов, подверженных риску ишемического инсульта, направленной на повышение физиологических адаптивных механизмов мозга (нейропластичности) при наступлении инсульта. Ранее нами было установлено положительное влияние интратекальной доставки генов, кодирующих сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), глиальный нейротрофический фактор (GDNF) и нейрональную молекулу клеточной адгезии (NCAM) на ремоделирование мозга крысы в периинфарктной области [181]. Следовательно, такая комбинация комбинация генов может быть использована для превентивной генной терапии при высоком риске возникновения ишемического инсульта головного мозга для сдерживания развития негативных последствий при наступлении инсульта [9].

Одним из препятствий внедрения в практическую медицину прямой (in vivo) генной терапии является цитопатическое и иммунногенное влияние генетической конструкции на организм реципиента, в качестве которой для доставки терапевтического гена, обычно используют рекомбинантные вирусы (аденовирус, аденоассоциированный вирус и др.) [82, 104, 110]. Клеточно-опосредованная (ex vivo) генная терапия, в отличие от прямой генной терапии, является альтернативным способом введения рекомбинантных генов пациенту с помощью клеточных носителей [14, 15]. Однако в связи этим возникает вопрос об адекватном выборе клеток для доставки искусственного генетического материала. В эксперименте используют различные клеточные типы в качестве носителя рекомбинантного гена и продуцента терапевтической молекулы. Среди известных клеток, используемых для доставки трансгенов в ЦНС, широко используют фибробласты [64], нейрональные стволовые клетки [106] и швановские клетки [153]. Одним из перспективных клеточных носителей терапевтических генов

считаются мононуклеарные клетки крови пуповины человека. Преимущество применение мононуклеарных клеток крови пуповины человека связано с их пригодностью не только для аутотрансплантации, но и для аллотрансплантации, а также отсутствием законодательных, этических и религиозных запретов, связанных с их использованием в регенеративной медицине [17].

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является установление механизмов влияния превентивной доставки рeкoмбинантных генов, кодирующих cocyдистый эндoтелиальный фaктор рoста (VЕGF), глиальный нейpoтpoфический фaктор (GDNF) и нейрональную молекулу клеточной адгезии (КСАМ), на патофизиологичские аспекты повреждения головного мозга крысы после моделирования инсульта.

В соответствии с целью были сформулированы следующие конкретные задачи исследования, решаемые на модели ишемического инсульта у крысы в условиях превентивной интратекальной прямой и клеточно-опосредованной доставки комбинации рекомбинантных репликативно-дефектных аденовирусов человека 5 серотипа, несущих по-отдельности гены vеgf165, gdnf и псам1, через 21 сутки после окклюзии средней мозговой артерии:

1. Оценить механизмы повреждения головного мозга крысы после моделирования ишемического инсульта с помощью поведенческого теста, морфометрического и иммунофлуоресцентного исследования периинфарктной области.

2. Оценить влияние трансдукции мононуклеарных клеток крови пуповины человека аденовирусным вектором Аё5-ОЕР, экспрессирующим репортерный зеленый флуоресцентный белок, и смесью аденовирусных векторов, несущих нейропротекторные факторы (Лё5-УБОЕ, Аё5-ОБ№' и Аё5-ЫСЛМ) на способность генетически модифицированных клеток продуцировать цитокины, хемокины и факторы роста.

3. Изучить экспрессию рекомбинантных генов (\egf165, gdnf и псам1) в периинфарктной области головного мозга крысы после интратекальной доставки с помощью аденовирусных векторов или мононуклеарных клеток крови пуповины человека.

4. Изучить мeханизмы нейpoпластичности при ишeмическом повpeждении головного мозга крысы в условиях пpeвентивной интpaтекальной доставки peкомбинантных генов \egf165, gdnf и псам1 с помощью aденовирусных вектopoв или мононуклeapных клеток крови пуповины человека.

5. Oценить влияние интpaтекальной доставки peкомбинантных гeнов \egf165, gdnf и псам1 с помощью aденовирусных вектopoв или мононуклеарных клеток крови пуповины человека на содержание цитокинов, хемокинов и факторов роста в образцах крови и ликвора подопытных животных после моделирования ишемического инсульта головного мозга.

Научная новизна

В данной работе были изучены механизмы, определяющие эффективность превентивной доставки рекомбинантных генов \egf165, gdnf и псат1 с помощью Ad5 или МНКП человека на патогенетические факторы развития ишемического повреждения головного мозга крысы. Морфофункциональное исследование последствий окклюзии средней мозговой артерии (СМА) у крысы через 3 недели обнаружило стандартный очаг инфаркта в теменной доле, который не приводит к существенным сдвигам со стороны сенсорного и моторного ответов у экспериментальных животных. При этом в периинфарктной области были обнаружены патологические изменения, включающие в себя клеточный стресс, апоптоз, астроглиоз, уменьшение количества миелинообразующих клеток, снижение уровня экспрессии синаптических белков. Данные о содержании эндогенных цитокинов, хемокинов и факторов роста в крови и спинномозговой жидкости (СМЖ) крысы указывают на прекращение воспалительной реакции через 3 недели после модел^ования инсyльтa, что может быть следствием разрешения

острой фазы ишемического повреждения мозга.

В условиях превентивной интратекальной доставки рекомбинантных генов vеgf165, gdnf и псам1 с помощью Ad5 или МНКП человека установлены сохранность ткани мозга и положительное действие на постишемическое ремоделирование периинфарктной области, характеризующееся препятствием развития астроглиоза и поддержанием миелинизации, восстановлением продукции синаптических белков в нейронах.

Принципиально новыми являются данные об адресной миграции генетически модифицированных МНКП, трансплантированных до моделирования ИИ головного мозга. После интратекальной инфузии генетически модифицированные МНКП человека с током СМЖ достигают ГМ, где они мигрируют в периинфарктную область и локально продуцируют рекомбинантные молекулы VEGF GDNF и КСЛМ.

Приоритетными следует признать результаты генетической модификации МНКП человека комбинацией Ad5, несущих нейропротекторные факторы (Аd5-VЕGF, Аd5-GDNF и Аd5-NCАМ), свидетельствующих об увеличении синтеза мРНК соответствующих трансгенов и отсутствии эффекта трансдукции на экспрессию данными клетками цитокинов, хемокинов и факторов роста. Кроме того, одновременная интратекальная инъекция комбинации из трех Ad5, или генетически модифицированных МНКП не влияет на содержание СМЖ жидкости экспериментальных животных, что свидетельствует об отсутствии иммунной реакции организма крысы на интратекальное введение Ad5 и генетически модифицированных МНКП человека.

Научно-практическая значимость работы

В исследовании получены новые фундаментальные сведения о патогенезе постишемических повреждений в периинфарктной области коры мозга крысы после моделирования ИИ. Правительство Российской Федерации в научно -техническом развитии поставило в приоритет: "Переход к персонализированной

медицине, высокотехнологичному здравоохранению и технологиям здоровьесбережения, в том числе за счет рационального применения лекарственных препаратов (прежде всего антибактериальных)" и в этой связи было проведено исследование, цель которого - выявление механизмов морфо-функционального восстановления мозга при наступлении ишемического инсульта на фоне превентивной доставки искусственного генетического материала в СМЖ крысы. В рамках данной работы были разработаны основы превентивной персонализированной генной терапии при угрозе ИИ. Следует отметить, что в настоящее время в практической медицине не существует препаратов, содержащих искусственный генетический материал, для терапии ИИ. Таким образом, данное исследование вносит важный вклад для создания принципиально новых методов персонализированной генной терапии не только при угрозе ИИ, но и для лечения других повреждений центральной нервной системы, например, нейротравм и нейродегенеративных заболеваний.

Степень достоверности и апробация работы

Согласно поставленной цели и задачам настоящего исследования был разработан оригинальный дизайн эксперимента и использованы современные методы (молекулярные, клеточные, иммунофлуоресцентные, морфометрические, гистологические), соответствующие мировому уровню. Статистический анализ полученных результатов подтверждает их достоверность. Результаты научно-квалификационной работы были доложены на V Международном молодежном научном медицинском форуме «Белые цветы» (Казань, 2018 г.; Казань, 2019 г.; Казань, 2019 г.; Казань, 2020 г.; Казань, 2021 г.; Казань, 2022 г.;), конференциях проводимых EJCI (Барселона, 2018 г.; Бари, 2020 г.), на национальных конгрессах по регенеративной медицине (IV - Москва, 2019 г.; V - Москва 2022 г.), конференции ASCB, ЕМВО 2019 (Вашингтон, 2019).

Положения, выносимые на защиту:

1. Превентивная интратекальная доставка в цереброспинальную жидкость комбинации рекомбинантных генов, кодирующих сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), глиальный нейротрофический фактор (GDNF) и нейрональную молекулу клеточной адгезии (ЫСАМ), в составе аденовирусных векторов или с помощью мононуклеарных клеток крови пуповины человека сдерживает развитие негативных последствий ишемического инсульта, а именно, препятствует развитию астроглиоза, поддерживает миелинизацию и содействует восстановлению продукции синаптических белков в нейронах периинфарктной области головного мозга крысы после моделирования ишемического инсульта.

2. Превентивная интратекальная доставка рекомбинантных генов \egf165, gdnf и псат1 с помощью аденовирусных векторов или мононуклеарных клеток крови пуповины человека обеспечивает продукцию рекомбинантных молекул VEGF, GDNF и NCAM, оказывающих нейропротекторное действие в области ишемической полутени в первые часы наступления инсульта, а также в последующие три недели реабилитационного периода.

Личный вклад автора

Соискатель ученой степени в индивидуальном порядке участвовал в постановке цели, задач и планировании диссертационной работы. Поиск и анализ научной литературы по теме исследования, проведение экспериментальной работы, включая разработку методов моделирования ИИ головного мозга и способов доставки в ЦНС генных и генно-клеточных препаратов для предупреждения развития негативных последствий ишемического повреждения, забор биоматериала, морфометрические, гистологические,

иммунофлуоресцентные и поведенческие методы исследования проведены непосредственно автором. Положения и выводы, представленные в диссертации, базируются на результатах собственного научного исследования автора.

Соискатель самостоятельно проводил статистическую обработку и интерпретацию данных, полученных в ходе выполнения исследования. Диссертант самостоятельно подготовил к публикации научные труды по теме диссертации, текст написан автором самосильно.

По тeме диссертацтонной рабoты опубликовaно 11 научных трудов, в которые входят 4 статьи, рецeнзируемыe в тучных издaниях. Важно отметить, что данные издания были индексированы в международных библиографических базах Scopus и Web of Science. В целом, этот аспект продемонстрировал интенсивную работу автора и значительный вклад в развитие научной области, связанной с тематикой диссертационного исследования.

По теме кандидатской диссертации было запатентовано 2 изобретения РФ (№2676701 «Средство для сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга и способ клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта головного мозга средством сдерживания гибели нейронов головного мозга при ишемическом инсульте головного мозга» и №2748940 «Способ превентивной генной терапии для сдерживания гибели нейронов при ишемическом инсульте головного мозга»). Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (№17-75-10053 «Клеточно-опосредованная терапия ишемического инсульта головного мозга»).

Структура и объем диссертационной работы

Текст работы уместился на 136 страницах и включает в себя введение, 4 главы (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, обсуждение результатов), заключение, выводы, список литературы и список сокращений. Диссертация содержит 5 таблиц, 19 рисунков. Список литературы состоит из 191 источника.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Церебральный ишемический инсульт

Согласно международной классификации болезней одиннадцатого пересмотра церебральный ишемический инсульт относится к цереброваскулярным заболеваниям, которые сопровождаются поражением церебральных сосудов, приводя к повреждению вещества ГМ. Термин инсульт происходит от латинского слова «тэикш», что в переводе означает «удар». Ранее широко использовался предложенный Гиппократом термин апоплексия, имеющий аналогичное значение. Инсульт - сосудистый мозговой удар - возникает в результате ухудшения кровоснабжения ГМ, сопровождающегося внезапным (в течение нескольких минут или часов) появлением очаговой и/или общемозговой неврологической симптоматики, которая длится более 24 часов и способна приводить к смерти [11]. В клинических рекомендациях по ИИ от 2021 года определением данного понятия служит следующая формулировка: «Ишемический инсульт - эпизод неврологической дисфункции, вызванный фокальным инфарктом головного мозга» [4]. Вышеуказанное пояснение термина лаконично объясняет развитие патологического состояния, в процессе которого происходит гибель клеток нервной ткани вследствие нарушения/прекращения кровоснабжения определенного отдела ГМ [12].

Кроме ИИ, также различают геморрагические инсульты, отличающиеся внутримозговым или субарахноидальным нетравматическим кровоизлиянием в ГМ [12], причиной которого в первую очередь является аневризма церебральных сосудов [4]. Повреждения стенки внутримозговых сосудов могут быть первичными (разрыв вследствие повышенного артериального давления) и вторичными (коагулопатии, разрывы артериовенозных мальформаций, васкулопатии и кровоизлияния в опухоли). При этом соотношение между ишемическими и геморрагическими инсультатми составляет 4:1 [12].

1.1.1. Эпидемиология

На сегодняшний день по данным Всемирной организации здравоохранения в мире насчитывается 10 заболеваний, являющихся основными причинами смертности населения [2]. Первые два заболевания из указанного выше списка -это ишемическая болезнь сердца и ИИ, которые являются единственными причинами смертности, в отношении которых общее число случаев смерти за 20002019 гг. снизилось, соответственно, на 16% (или 327 000 случаев) и 21% (или 205 000 случаев). Тем не менее, данные заболевания в 2019 г. стали причиной смерти в общей сложности более 2,5 млн человек [2].

В Российской Федерации каждый год фиксируется около 400 тыс. случаев инсультов, причем лишь 8-10% из них оказываются относительно легкими и заканчиваются восстановлением нарушенных функций в первые 3 недели заболевания. При этом в течение первого года после развития ИИ умирают более 150 тыс. человек [7]. В нашей стране проживают более 1 млн человек, перенесших инсульт, что составляет около 0,7% всего населения. В последние годы в Российской Федерации отмечается снижение смертности от цереброваскулярных заболеваний. С 2000 по 2016 г. этот показатель уменьшился с 318,6 до 190,8 случаев на 100 тыс. населения. С 2008 по 2016 г.г. смертность от инсульта в Российской Федерации снизилась на 45% и составила 123 случая на 100 тыс. населения [7]. Не смотря на вышеизложенные данные с позитивными тенденциями, абсолютные показатели заболеваемости, смертности и распространенности инсульта позволяют рассматривать термин «инсультной эпидемии».

В медицинском сообществе широко применяется концепция заболеваний, которая учитывает не только количество смертей, но и их влияние на качество жизни. Один из наиболее распространенных показателей - преждевременно утраченные годы жизни с ограниченной способностью к деятельности (Disability -Adjusted Life Years). Глобально, общая нагрузка болезни ИИ превышает 113 миллионов лет.

В 2013 году в Российской Федерации инсульт был причиной 5,3 миллионов потерянных лет с ограниченной способностью к деятельности и преждевременной смертности. Таким образом, инсульт существенно влияет на качество жизни, а количество потерянных дееспособных лет подчеркивает необходимость дополнительных исследований, направленных на превентивные меры и лечение.

Исход инсульта зависит от вклада различных этиологических, патогенетических, терапевтических и др. факторов. Важную роль здесь могут играть тяжесть, размер очага инфаркта, механизм развития патологического процесса, возраст пациента, сопутствующие заболевания и возможность своевременного проведения тромболитической терапии [12]. Следует рассмотреть три основных варианта исхода ИИ. При своевременной терапии и успешном разрешении патологического процесса у 20% пациентов возможно восстановление утраченных функций, и они способны продолжать качественную активную жизнь. В странах, в которых проводится учет причин смерти от ишемического инсульта, существует значительное различие в показателях смертности. В Европе, США, Австралии и Японии смертность была наименьшей на протяжении 1990-х годов и продолжает снижаться. С другой стороны, в Южной Америке смертность от инсульта была выше в 2-3 раза. В странах Восточной Европы и бывшего Советского Союза смертность от инсульта была особенно высокой и продолжает расти. Надежность данных о смертности ограничивается точностью свидетельств о смерти и недостатком информации о конкретных типах инсульта [12]. Кроме того, в некоторых случаях смерть может не быть зафиксирована как исход инсульта, из-за чего показатели могут быть недооценены. Все это говорит о необходимости улучшения методов сбора и обработки данных о смертности ишемических инсультов, чтобы более точно изучать вопрос и предотвращать преждевременные случаи не только смерти, но и инвалидизации. По данным Рочестерского эпидемиологического проекта и NOMASS (Northern Manhattan Stroke Study) смертность от ИИ составляет в течение первого года после постановки диагноза - 30%, а в течение 5 лет около 40-50% [12].

Инсульт является преобладающей причиной инвалидизации населения (3,2 на 1000 населения) [4]. Инвалидность является важным, однако, менее контролируемым показателем при первичной оценке исходов инсульта. Это связано с большой вариативностью симптомов и сложностью предположения степени функционального восстановления. Среднее значение инвалидизации от различных видов инсульта через 3 месяца после госпитализации составляет 29%, а через 1 год - 23% [12]. Постинсультная инвалидизация является значимым социально-экономическим бременем не только для пациента и членов его семьи, но и для государства.

1.1.2. Этиология

Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment (TOAST) - классификация, основывающаяся на выявлении этиологии окклюзии артерий питающих ГМ, является общепризнанной системой группирования патогенетических подтипов ИИ [41]. Дaннaя клaccификaция oснoвывaется на опpeделeнии пpичины вoзникнoвeния oкклюзии в cocyдистом руслe ГМ. В дай выдeляют пять пoдтипов: aтepoтpoмботический (вслeдствие aтepoсклероза крупных apтeрий), кapдиоэмбoлический, лакунapный (вслeдствие oкклюзии перфopaнтной apтерии), инсульт другой ycтанoвленной этиoлoгии и инсульт неycтaновленной этиoлoгии

[4].

Атеротромботический подтип ИИ является наиболее часто встречающимся и возникает вследствие окклюзии одной из магистральных артерий головы [4]. Он включает в себя следующие критерии: поражение коры ГМ или мозжечка; в анамнезе - транзиторная ишемическая атака, перемежающаяся хромота; на рентгено-компьютерной томографии/магнитно-резонансной томографии -признаки повреждения коры ГМ, мозжечка или наличие субкортикального инфаркта [4]; более 50% стеноза или окклюзия артерии со стороны пораженного полушария.

Кардиоэмболический ИИ является подтипом, который диагностируют у пациентов с полным нарушением проходимости внутричерепных артерий из-за

кардиогенной эмболии. Для этого подтипа характерно наличие кардиогенных причин возникновения эмбола высокого (механические протезы клапанов, фибрилляция предсердий, тромбоз ушка левого предсердия, инфаркт миокарда и др.) и среднего (пролапс митрального клапана, кальцификация митрального кольца, митральный стеноз, небактериальный эндокардит, аневризма межпредсердной перегородки, открытое овальное окно, трепетание предсердий и др.) риска.

При окклюзии мелкой перфорантной артерии патогенетический подтип ИИ относится к лакунарному и доказывается на основании следующих критериев: только «двигательный» инсульт или только «чувствительный» инсульт; сенсомоторный инсульт; синдром дизартрии с неловкостью руки; синдром атактического гемипареза и отсутствие нарушений корковых функций; наличие гипертонической болезни или сахарного диабета в анамнезе.

Инсульт неустановленной этиологии определяют у пациентов с неполным обследованием или неустановленной причиной ИИ, а также у пациентов с двумя и более потенциальными причинами инсульта (например, пациент с фибрилляцией предсердий и ипсилатеральным стенозом сонной артерии более 50%).

Эмболический инсульт из неустановленного источника - патогенетический подтип ИИ с неустановленным источником эмболии (Embolic Stroke of Undetermined Source, ESUS). Данный подтип констатируют у пациентов с нелакунарным криптогенным ИИ, у которых эмболия является наиболее вероятной причиной инсульта [4].

1.1.3. Патогенез

Вследствие высокой чувствительности мозга к недостаточному поступлению кислорода и глюкозы с током крови гибель нервных клеток происходит уже в первые минуты случившегося ИИ, запуская каскад патофизиологических реакций. В результате первичной постишемической нейродегенерации в центре поражения возникают необратимые патологические изменения: формируется зона некроза

(очаг инфаркта), окруженная пенумброй - зоной «ишемической полутени» с пониженным уровнем кровотока.

В ядре ишемии (очаг инфаркта) быстрое падение уровня высокоэнергетического фосфата вызывает отказ работы натрий-калиевой АТФазы в течение нескольких минут [135]. В результате деполяризации клеточной мембраны нарушается ионный градиент, а неспособность к реполяризации приводит к быстрой гибели клеток [135]. Однако в окружающей очаг инфаркта области, где перфузия частично поддерживается за счет дилатации проходимых сосудов и кровоснабжения из соседних коллатеральных артерий несмотря на то, что нервная ткань метаболически скомпрометирована и электрически гипоактивна [135], выжившие нейроны сохраняют возможность восстановить функциональную активность. Концепция ишемической полутени (названной в честь ореола, окружающего затмение) возникла несколько десятилетий назад и в широком смысле определяется как область потенциально восстанавливаемой, ткани мозга вокруг ишемического ядра, которую можно спасти в период терапевтического окна (3-6 часов) после наступления ИИ [135].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Маркосян Ваге Аршалуйсович, 2023 год

- 52 с.

11. Сафиуллов, З. З. Нейрональная молекула адгезии NCAM в сочетании с нейротрофическими факторами для клеточно-опосредованной генной терапии мышей с моделью бокового амиотрофического склероза : специальность 03.03.04 «Клеточная биология, цитология, гистология» : диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук / Сафиуллов Зуфар Зуфарович ; Казанский государственный медицинский университет. - Казань, 2015. - 108 с.

12. Соколов, М.Е. Морфологические и молекулярные изменения в области ишемии коры головного мозга крысы в условиях одноврменной доставки генов сосудистого эндотелиального фактора роста, глиального нейротрофического фактора и нейрональной молекулы клеточной адгезии : специальность 03.03.04 «Клеточная биология, цитология, гистология» : диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук / Соколов

Михаил Евгеньевич ; ФГАОУ ВО "Казанский (Приволжский) федеральный университет".- Казань, 2020. - 154 с.

13. Соколов, М.Е. Экспериментальное обоснование генной терапии ишемического инсульта головного мозга / М.Е. Соколов, Ф.В. Баширов, З.З. Сафиуллов // Казанский медицинский журнал. - Казань, - 2018. - 98. №2 5. - С.763-769.

14. Скворцова, В. И. Анализ медико-организационных мероприятий по профилактике инсультов и реабилитации постинсультных состояний на современном этапе / В. И. Скворцова, Г. С. Алексеева, Н. Ю. Трифонова // Социальные аспекты здоровья населения. - 2013. - № 1 (29). - С. 2.

15. Стулин, И. Д. Инсульт с точки зрения доказательной медицины / И. Д. Стулин, Р. С. Мусин, Ю. Б. Белоусов // Качественная клиническая практика. -2003. - № 4. - С. 100-118.

16. Ючино, К. Острый инсульт / К. Ючино, Д. Пари, Д. Гротта ; перевод с английского К. В. Шеховцовой ; под редакцией В. И. Скворцовой. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 232 с. - ISBN 978-5-9704-1387-6 (в пер.).

17. A dual-functioning adenoviral vector encoding both transforming growth factor-beta3 and shRNA silencing type I collagen: construction and controlled release for chondrogenesis / F. Zhang, Y. Yao, J. Hao [et al.] // J Control Release. - 2010. -Vol. 142, No. 1. - Pp. 70-77, doi: 10.1016/j.jconrel.2009.09.027.

18. A long-term follow-up study of intravenous autologous mesenchymal stem cell transplantation in patients with ischemic stroke / J. Lee, J. Hong, P. Lee, G. Moon // Stem Cells. - 2010. - Vol. 28, No. 6. - Pp. 1099-1106.

19. A Randomized, Placebo-Controlled Trial of Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stem Cell Infusion for Children With Cerebral Palsy / L. Huang, C. Zhang, J. Gu [et al.] // Cell Transplant. - 2018. - Vol. 27, No. 2. - Pp. 325-334.

20. AAV-mediated targeting of gene expression to the peri-infarct region in rat cortical stroke model / K. Matlik, U. Abo-Ramadan, B. K. Harvey [et al.] // J Neurosci Methods. - 2014. - Vol. 326. - Pp. 107-113.

21. Absence of an intrathecal immune reaction to a helper-dependent adenoviral vector delivered into the cerebrospinal fluid of non-human primates / E. Butti, A. Bergami, A. Recchia [et al.] // Gene Ther. - 2008. - Vol. 15, No. 3. - Pp. 233238, doi: 10.1038/sj.gt.3303050.

22. Acute stroke therapy: A review / T. Peisker, B. Koznar, I. Stetkarova, P. Widimsky // Trends Cardiovasc Med. - 2017. - Vol. 27, No. 1. - Pp. 59-66, doi: 10.1016/j.tcm.2016.06.009.

23. Adeno-associated virus-mediated delivery of BCL-w gene improves outcome after transient focal cerebral ischemia / Y. Sun, K. Jin, K. R. Clark [et al.] // Gene Ther. - 2003. - Vol. 10, No. 2. - Pp. 115-122.

24. Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer for Human Gene Therapy / B. Breyer, W. Jiang, H. Cheng [et al.] // Curr Gene Ther. - 2001. - Vol. 1, No. 2. - Pp. 149-162, doi: 10.2174/1566523013348689.

25. Adenovirus-Mediated Bcl-XL Expression Using a Neuron-Specific Synapsin-1 Promoter Protects against Disseminated Neuronal Injury and Brain Infarction Following Focal Cerebral Ischemia in Mice / E. Kilic, D. M. Hermann, S. Kugler [et al.] // Neurobiol Dis. - 2002. - Vol. 11, No. 2. - Pp. 275-284.

26. Adenovirus-Mediated GDNF and CNTF pretreatment protects against striatal injury following transient middle cerebral artery occlusion in mice / D. M. Hermann, E. Kilic, S. Kügler [et al.] // Neurobiol Dis. - 2001. - Vol. 8, No. 4. - Pp. 655-666, doi: 10.1006/NBDI.2001.0399.

27. Adenovirus-Mediated Gene Transfer of Fibroblast Growth Factor-2 Increases BrdU-Positive Cells After Forebrain Ischemia in Gerbils / N. Matsuoka, K. Nozaki, Y. Takagi [et al.] // Stroke. - 2003. - Vol. 34, No. 6. - Pp. 1519-1525, doi: 10.1161/01.STR.0000070840.56414.3B.

28. Administration of CD34+ cells after stroke enhances neurogenesis via angiogenesis in a mouse model / A. Taguchi, T. Soma, H. Tanaka [et al.] // J Clin Invest. - 2004. - Vol. 114, No. 3. - Pp. 330-338, doi: 10.1172/JCI20622.

29. Advantages and challenges of alternative sources of adult-derived stem cells for brain repair in stroke / P. R. Sanberg, D. J. Eve, C. Metcalf, C. V. Borlongan //

Prog Brain Res. - 2012. - Vol. 201. - Pp. 99-117, doi: 10.1016/B978-0-444-59544-7.00006-8.

30. Aging is associated with decreased maximal life span and accelerated senescence of bone marrow stromal cells / K. Stenderup, J. Justesen, C. Clausen, M. Kassem // Bone. - 2003. - Vol. 33, No. 6. - Pp. 919-926.

31. Aiuti, A. Gene therapy for ADA-SCID, the first marketing approval of an ex vivo gene therapy in Europe: paving the road for the next generation of advanced therapy medicinal products / A. Aiuti, M. G. Roncarolo, L. Naldini // EMBO Mol Med.

- 2017. - Vol. 9, No. 6. - Pp. 737-740.

32. ARTEMIDA Trial (A Randomized Trial of Efficacy, 12 Months International Double-Blind Actovegin) / A. Guekht, I. Skoog, S. Edmundson [et al.] // Stroke. - 2017. - Vol. 48, No. 5. - Pp. 1262-1270, doi: 10.1161/STR0KEAHA.116.014321.

33. Autologous Bone Marrow Mononuclear Cells Enhance Recovery after Acute Ischemic Stroke in Young and Middle-Aged Rats / M. Brenneman, S. Sharma, M. Harting [et al.] // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 2010. - Vol. 30, No. 1. - Pp. 140-149, doi: 10.1038/jcbfm.2009.198.

34. Autologous Cord Blood Infusions Are Safe and Feasible in Young Children with Autism Spectrum Disorder: Results of a Single-Center Phase I Open-Label Trial / G. Dawson, J. M. Sun, K. S. Davlantis [et al.] // Stem Cells Transl Med. - 2017. - Vol. 6, No.5. - Pp. 1332-1339.

35. Autologous mesenchymal stem cell transplantation in stroke patients // O. Y. Bang, J. S. Lee, P. H. Lee, G. Lee // Ann Neurol. - 2005. - Vol. 57, No. 6. - Pp. 874882, doi: 10.1002/ana.20501.

36. Bacigaluppi, M. Animal Models of Ischemic Stroke. Part Two: Modeling Cerebral Ischemia / M. Bacigaluppi, G. Comi, D. M. Hermann // Open Neurol J. - 2010.

- Vol. 4, No. 2. - Pp. 34-38, doi: 10.2174/1874205X01004020034.

37. Bogousslavsky, J. The Lausanne Stroke Registry: Analysis of 1,000 Consecutive Patients with First Stroke / J. Bogousslavsky, G. van Melle, F. Regli //

Original Contributions. - 1988. - Vol. 19, No. 9. - Pp. 1083-1092, doi: 10.1161/01.str.19.9.1083.

38. Bone marrow stromal cells protect and repair damaged neurons through multiple mechanisms / M. Hokari, S. Kuroda, H. Shichinohe [et al.] // J Neurosci Res. -2008. - Vol. 86, No. 5. - Pp. 1024-1035, doi: 10.1002/jnr.21572.

39. Bradl, M. Oligodendrocytes: Biology and pathology / M. Bradl, H. Lassmann // Acta Neuropathologica. - 2010. - Vol. 119, No. 1. - Pp. 37-53, doi: 10.1007/s00401-009-0601-5.

40. Buchan, A. M. A new model of temporary focal neocortical ischemia in the rat / A. M. Buchan, D. Xue, A. Slivka // Stroke. - 1992. - Vol. 23, No. 2. - Pp. 273279, doi: 10.1161/01.STR.23.2.273.

41. Burger, C. Recombinant Adeno-Associated Viral Vectors in the Nervous System / C. Burger, K. Nash, R. J. Mandel // Hum Gene Ther. - 2005. - Vol. 16, No. 7. - Pp. 781-791, doi: 10.1089/hum.2005.16.781.

42. Central Nervous System Entry of Peripherally Injected Umbilical Cord Blood Cells Is Not Required for Neuroprotection in Stroke / C. V. Borlongan, M. Hadman, C. D. Sanberg, P. R. Sanberg // Stroke. - 2004. - Vol. 35. - Pp. 2385-2389, doi:10.1161/01.str.0000141680.

43. Characterizing learning deficits and hippocampal neuron loss following transient global cerebral ischemia in rats / R. E. Hartman, J. M. Lee, G. J. Zipfel, D. F. Wozniak // Brain Res. - 2005. - Vol. 1043, No. 1-2. - Pp. 48-56, doi: 10.1016/j.brainres.2005.02.030.

44. Cheng, H. Neuroprotection of glial cell line-derived neurotrophic factor in damaged spinal cords following contusive injury / H. Cheng, J.-P. Wu, S.-F. Tzeng // J Neurosci Res. - 2002. - Vol. 69, No. 3. - Pp. 397-405, doi: 10.1002/jnr.10303.

45. Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. TOAST. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment / H. P. Adams, B. H. Bendixen, L. J. Kappelle [et al.] // Stroke. - 1993. - Vol. 24, No. 1. - Pp. 35-41, doi: 10.1161/01.STR.24.1.35.

46. Clinical and morphological correlations in acute ischemic stroke / A. S. Slujitoru, A. L. Enache, I. L. Pintea [et al.] // Rom J Morphol Embryol. - 2012. - Vol. 53, No. 4. - Pp. 917-926.

47. Combination of epidural electrical stimulation with ex vivo triple gene therapy for spinal cord injury: A proof of principle study / F. Fadeev, F. V. Bashirov, V. A. Markosyan [et al.] // Neural Regen Res. - 2021. - Vol. 16, No. 3. - Pp. 550-560, doi: 10.4103/1673-5374.293150.

48. Combined supra-and sub-lesional epidural electrical stimulation for restoration of the motor functions after spinal cord injury in mini pigs / F. Fadeev, A. Eremeev, F. Bashirov [et al.] // Brain Sci. - 2020. - Vol. 10, No. 10. - Pp. 774, doi: 10.3390/brainsci10100744.

49. Comparative analysis of transposable element vector systems in human cells / I. Grabundzija, M. Irgang, L. Mates [et al.] // Mol Ther. - 2010. - Vol. 18, No. 6. - Pp. 1200-1209, doi: 10.1038/mt.2010.47.

50. Construction of recombinant adenovirus containing picorna-viral 2A-peptide sequence for the co-expression of neuro-protective growth factors in human umbilical cord blood cells / E. E. Garanina, Y. O. Mukhamedshina, I. I. Salafutdinov [et al.] // Spinal Cord. - 2016. - Vol. 54, No. 6. - Pp. 423-430, doi: 10.1038/sc.2015.162.

51. Craig, A. J. Evaluation of Gene Therapy as an Intervention Strategy to Treat Brain Injury from Stroke / A. J. Craig, G. D. Housley // Front Mol Neurosci. -2016. - Vol. 9. - Pp. 1-9.

52. Current Progress in Gene Delivery Technology Based on Chemical Methods and Nano-carriers / L. Jin, X. Zeng, M. Liu [et al.] // Theranostics. - 2014. -Vol. 4, No. 3. - Pp. 240-255, doi: 10.7150/thno.6914.

53. Dalous, J. Transplantation of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells as a novel strategy to protect the central nervous system: technical aspects, preclinical studies, and clinical perspectives / J. Dalous, J. Larghero, O. Baud // Pediatr Res. - 2012. - Vol. 71, No. 2-4. - Pp. 482-490.

54. Danby, R. Improving Engraftment and Immune Reconstitution in Umbilical Cord Blood Transplantation / R. Danby, V. Rocha // Front Immunol. - 2014.

- Vol. 5. - Pp. 68, doi: 10.3389/fimmu.2014.00068.

55. Day, L. B. Anticholinergic effects on acquisition of place learning in the Morris water task: Spatial mapping deficit or inability to inhibit nonplace strategies? / L. B. Day, T. Schallert // Behavioral Neuroscience. - 1996. - Vol. 110, No. 5. - Pp. 998-1005, doi: 10.1037/0735-7044.110.5.998.

56. Devan, B. D. Effects of medial and lateral caudate-putamen lesions on place- and cue-guided behaviors in the water maze: relation to thigmotaxis / B. D. Devan, R. J. Mc Donald, N. M. White // Behavioural Brain Research. - 1999. - Vol. 100, No. 1-2. - Pp. 5-14, doi: 10.1016/S0166-4328(98)00107-7.

57. Dewar, D. Oligodendrocytes and Ischemic Brain Injury // D. Dewar, S. M. Underhill, M. P. Goldberg // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 2003. -Vol. 23, No. 3. - Pp. 263-274, doi: 10.1097/01.WCB.0000053472.41007.F9.

58. Different Strokes for Different Folks: The Rich Diversity of Animal Models of Focal Cerebral Ischemia / D. W. Howells, M. J. Porritt, S. S. J. Rewell [et al.] // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 2010. - Vol. 30, No. 8. - Pp. 14121431, doi: 10.1038/jcbfm.2010.66.

59. Differentiation of human olfactory bulb-derived neural stem cells toward oligodendrocyte / H. E. Marei, Z, Shouman, A. Althani [et al.] // J Cell Physiol. - 2018.

- Vol. 233, No. 2. - Pp. 1321-1329, doi: 10.1002/jcp.26008.

60. DNA transposon-based gene vehicles - scenes from an evolutionary drive / K. A. Skipper, P. R. Andersen, N. Sharma, J. G. Mikkelsen // J Biomed Sci. - 2013. -Vol. 20, No. 1. - Pp. 92, doi: 10.1186/1423-0127-20-92.

61. Dynamics of hippocampal neurogenesis in adult humans / K.-L. Spalding, O. Bergmann, K. Alkass [et al.] // Cell. - 2013. - Vol. 153, No. 6. - Pp. 1219-1227.

62. Effects of stromal cell-derived factor 1a delivered at different phases of transient focal ischemia in rats / J. Yoo, J.-J. Seo, J.-H. Eom, D.-Y. Hwango // Neuroscience. - 2012. - Vol. 209. - Pp. 171-186.

63. Efficacy and Safety of Sleeping Beauty Transposon-Mediated Gene Transfer in Preclinical Animal Studies / P. B. Hackett, E. L. Aronovich, D. Hunter [et al.] // Curr Gene Ther. - 2011. - Vol. 11, No. 5. - Pp. 341-349, doi: 10.2174/156652311797415827.

64. Efficient Intracytoplasmic Labeling of Human Umbilical Cord Blood Mesenchymal Stromal Cells with Ferumoxides / J. K. Lee, M. K. Lee, H. J. Jin [et al.] // Cell Transplant. - 2007. - Vol. 8, No.8. - Pp. 849-857.

65. Eglitis, M. A. Hematopoietic cells differentiate into both microglia and macroglia in the brains of adult mice / M. A. Eglitis, É. Mezey // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1997. - Vol. 94, No. 8. - Pp. 4080-4085, doi: 10.1073/pnas.94.8.4080.

66. Elevated Expression of VEGF-C and Its Receptors, VEGFR-2 and VEGFR-3, in Patients with Mesial Temporal Lobe Epilepsy / F.-J. Sun, Y.-J. Wei, S. Li [et al.] // J Mol Neurosci. - 2016. - Vol. 59, No. 2. - Pp. 241-250, doi: 10.1007/s12031-016-0714-y.

67. Elevated GDNF levels following viral vector-mediated gene transfer can increase neuronal death after stroke in rats / A. Arvidsson, D. Kirik, C. Lundberg [et al.] // Neurobiol Dis. - 2003. - Vol. 14, No. 3. - Pp. 542-556, doi: 10.1016/j.nbd.2003.08.002.

68. Emerging roles for CNS fibroblasts in health, injury and disease / C. E. Dorrier, H. E. Jones, L. Pintaric [et al.] // Nat Rev Neurosci. - 2022. - Vol. 23, No. 1. -Pp. 23-34, doi: 10.1038/s41583-021-00525-w.

69. Ende, M. Hematopoietic transplantation by means of fetal (cord) blood. A new method / M. Ende, N. Ende // Va Med Mon. - 1972. - Vol. 99, No. 3. - Pp. 276280.

70. Experimental treatment of stroke in spontaneously hypertensive rats by CD34+ and CD34- cord blood cells / J. Boltze, I. Kowalski, K. Geiger [et al.] // Ger Med Sci. - 2005. - Vol. 3. - Pp. Doc09.

71. Expression of Cytokine Receptors by Human Cord Blood Lymphocytes: Comparison with Adult Blood Lymphocytes / H. Zola, M. Fusco, P. J. Macardle [et al.] // Pediatr Res. - 1995. - Vol. 38, No. 3. - Pp. 397-403.

72. Fisher, M. The Ischemic Penumbra: Identification, Evolution and Treatment Concepts / M. Fisher // Cerebrovascular Diseases. - 2004. - Vol. 17, Suppl. 1. - Pp. 1-6, doi: 10.1159/000074790.

73. Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion / A. Tamura, D. I. Graham, J. Mc Culloch, G. M. Teasdale // J Cereb Blood Flow Metab. -1981. - Vol. 1, No. 1. - Pp. 53-60, doi: 10.1038/jcbfm.1981.6.

74. Frautschy, S. A. Localization of basic fibroblast growth factor and its mRNA after CNS injury / S. A. Frautschy, P. A. Walicke, A. Baird // Brain Research. -1991. - Vol. 553, No. 2. - Pp. 291-299, doi: 10.1016/0006-8993(91)90837-l.

75. Functional Improvement of Focal Cerebral Ischemia Injury by Subdural Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cells with Fibrin Glue / S.-J. Chen, C.-M. Chang, S.-K. Tsai [et al.] // Stem Cells Dev. - 2010. - Vol. 19, No. 11. - Pp. 1757-1767, doi: 10.1089/scd.2009.0452.

76. Garcia, J. H. Neuronal Necrosis After Middle Cerebral Artery Occlusion in Wistar Rats Progresses at Different Time Intervals in the Caudoputamen and the Cortex / J. H. Garcia, K.-F. Liu, K.-L. Ho // Stroke. - 1995. - Vol. 26, No. 4. - Pp. 636-643, doi: 10.1161/01.STR.26.4.636.

77. Gene delivery to the spinal cord: Comparison between lentiviral, adenoviral, and retroviral vector delivery systems / A. A. Abdellatif, J. L. Pelt, R. L. Benton [et al.] // Neurosci Res. - 2006. - Vol. 84, No. 3. - Pp. 553-567.

78. Gene therapy for neurological disorders / C.-J. Choong, K. Baba, H. Mochizuki [et al.] // Expert Opin Biol Ther. - 2016. - Vol. 16, No. 2. - Pp. 143-159, doi: 10.1517/14712598.2016.1114096.

79. Gene-modified leucoconcentrate for personalized ex vivo gene therapy in a mini pig model of moderate spinal cord injury / R. R. Islamov, F. V. Bashirov, M. E. Sokolov [et al.] // Neural Regen Res. - 2021. - Vol. 16, No. 2. - Pp. 357-361.

80. Ginsberg, M. D. Rodent models of cerebral ischemia / M. D. Ginsberg, R. Busto // Stroke. - 1989. - Vol. 20, No. 12. - Pp. 1627-1642, doi: 10.1161/01.STR.20.12.1627.

81. Glial cell line-derived neurotrophic factor-enriched bridging transplants promote propriospinal axonal regeneration and enhance myelination after spinal cord injury / C. Iannotti, H. Li, P. Yan [et al.] // Exp Neurol. - 2003. - Vol. 183, No. 2. - Pp. 379-393, doi: 10.1016/S0014-4886(03)00188-2.

82. Grafting neural stem cells improved the impaired spatial recognition in ischemic rats / H. Toda, J. Takahashi, N. Iwakami [et al.] // Neurosci Lett. - 2001. -Vol. 316, No. 1. - Pp. 9-12, doi: 10.1016/s0304-3940(01)02331-x.

83. Hall, R. Antiplatelet drugs: a review of their pharmacology and management in the perioperative period / R. Hall, C. D. Mazer // Anesth Analg. - 2011. - Vol. 112, No. 2. - Pp. 292-318.

84. Hematopoietic Reconstitution in a Patient with Fanconi's Anemia by Means of Umbilical-Cord Blood from an HLA-Identical Sibling / E. Gluckman, H.-E. Broxmeyer, A.-D. Auerbach [et al.] // New England Journal of Medicine. - 1989. - Vol. 321, No. 17. - Pp. 1174-1178.

85. Hematopoietic Stem Cell Gene Therapy with a Lentiviral Vector in X-Linked Adrenoleukodystrophy / N. Cartier, S. Hacein-Bey-Abina, C. C. Bartholomae [et al.] // Science. - 2009. - Vol. 326, No. 5954. - Pp. 818-823.

86. Heparan Sulfate Glycosaminoglycans Are Receptors Sufficient To Mediate the Initial Binding of Adenovirus Types 2 and 5 / M. C. Dechecchi, P. Melotti, A. Bonizzato [et al.] // J Virol. - 2001. - Vol. 75, No. 18. - Pp. 8772-8780, doi: 10.1128/JVI.75.18.8772-8780.2001.

87. Hernandez, J. Adult Stem Cell Transplants for Spinal Cord Injury Repair: Current State in Preclinical Research / J. Hernandez, A. Torres-Espin, X. Navarro // Curr Stem Cell Res Ther. - 2011. - Vol. 6, No. 3. - Pp. 273-287.

88. Highly efficient differentiation of neural precursors from human embryonic stem cells and benefits of transplantation after ischemic stroke in mice / D. Drury-

Stewart, O. Mohamad, Y. Guo, M. Song // Stem Cell Res Ther. - 2013. - Vol. 4, No. 4.

- Pp. 93.

89. Histopathological changes in acute ischemic stroke / O. Märgäritescu, L. Mogoantä, I. Pirici [et al.] // Rom J Morphol Embryol. - 2009. - Vol. 50, No. 3. - Pp.

327-339.

90. Homing and survivability of genetically modified mononuclear umbilical cord blood cells after transplantation into transgenic G93A mice with amyotrophic lateral sclerosis / Z. Z. Safiullov, E. E. Garanina, A. A. Izmailov [et al.] // Genes Cells.

- 2015. - Vol. 10, No. 4. - Pp. 1-4.

91. Hossmann, K.-A. The Two Pathophysiologies of Focal Brain Ischemia: Implications for Translational Stroke Research / K.-A. Hossmann // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 2012. - Vol. 32, No. 7. - Pp. 1310-1316, doi: 10.1038/jcbfm.2011.186.

92. HSV amplicon delivery of glial cell line-derived neurotrophic factor is neuroprotective against ischemic injury / B.K. Harvey, C.F. Chang, Y.H. Chiang [et al.] // Exp Neurol. - 2003. - Vol. 183, No. 1. - Pp. 47-55.

93. Human induced pluripotent stem cell-derived neural stem cells survive, migrate, differentiate, and improve neurologic function in a rat model of middle cerebral artery occlusion / T. Yuan, W. Liao, N.-H. Feng [et al.] // Stem Cell Res Ther. - 2013.

- Vol. 4, No.3. - P. 73.

94. Human Mesenchymal Stem Cells Derived from Limb Bud Can Differentiate into All Three Embryonic Germ Layers Lineages / F. Jiao, J. Wang, Z.-L. Dong [et al.] // Cell Reprogram. - 2012. - Vol. 14, No. 4. - Pp. 324-333, doi: 10.1089/cell.2012.0004.

95. Human neural stem cells can migrate, differentiate, and integrate after intravenous transplantation in adult rats with transient forebrain ischemia / K. Chu, M. Kim, S.-W. Jeong [et al/.] // Neurosci Lett. - 2003. - Vol. 343, No. 2. - Pp. 129-133, doi: 10.1016/S0304-3940(03)00174-5.

96. Human neural stem/progenitor cells, expanded in long-term neurosphere culture, promote functional recovery after focal ischemia in Mongolian gerbils / S.

Ishibashi, M. Sakaguchi, T. Kuroiwa [et al.] // J Neurosci Res. - 2004. - Vol. 78, No. 2.

- Pp. 215-223, doi: 10.1002/jnr.20246.

97. Human umbilical cord blood as a potential source of transplantable hematopoietic stem/progenitor cells / H. E. Broxmeyer, G. W. Douglas, G. Hangoc [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 1989. - Vol. 86, No. 10. -Pp. 3828-3832, doi: 10.1073/pnas.86.10.3828.

98. Human Umbilical Cord Blood Cells Have Trophic Effects on Young and Aging Hippocampal Neurons in Vitro / N. Chen, J. Newcomb, S. Garbuzova-Davis [et al.] // Aging Dis. - 2010. - Vol. 1, No. 3. - Pp. 173-190.

99. Human umbilical cord blood cells transfected with VEGF and L1CAM do not differentiate into neurons but transform into vascular endothelial cells and secrete neuro-trophic factors to support neuro-genesis - a novel approach in stem cell therapy / A. A. Rizvanov, A. P. Kiyasov, I. M. Gaziziov [et al.] // Neurochem Int. - 2008. - Vol. 53, No. 6-8. - Pp. 389-394.

100. I.v. infusion of brain-derived neurotrophic factor gene-modified human mesenchymal stem cells protects against injury in a cerebral ischemia model in adult rat / T. Nomura, O. Honmou, K. Harada [et al.] // Neuroscience. - 2005. - Vol. 136, No.1.

- Pp. 161-169.

101. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors / K. Takahashi, K. Tanabe, M. Ohnuki [et al.] // Cell. - 2007. - Vol. 131, No. 5.

- Pp. 861-872.

102. Induction of VEGF and its Flt-1 receptor after sciatic nerve crush injury / R. R. Islamov, V. Chintalgattu, E. S. Pak [et al.] // Neuroreport. - 2004. - Vol. 15, No. 13. - Pp. 2117-2121, doi: 10.1097/00001756-200409150-00024.

103. Infusion of human umbilical cord blood cells protect against cerebral ischemia and damage during heatstroke in the rat / S. H. Chen, F. M. Chang, Y. C. Tsai [et al.] // Exp Neurol. - 2006. - Vol. 199, No. 1. - Pp. 67-76, doi: 10.1016/j.expneurol.2005.11.015.

104. Intracerebroventricular injection of epidermal growth factor reduces neurological deficit and infarct volume and enhances nestin expression following focal

cerebral infarction in adult hypertensive rats / J. Yu, J. Zeng, R. T. Cheung [et al.] // Clin Exp Pharmacol Physiol. - 2009. - Vol. 36, No. 5-6. - Pp. 539-346, doi: 10.1111/j.1440-1681.2008.05105.x.

105. Intravenous Administration of Human Umbilical Cord Blood Reduces Behavioral Deficits After Stroke in Rats / J. Chen, P. R. Sanberg, Y. Li [et al.] // Stroke. - 2001. - Vol. 32, No. 11. - Pp. 2682-2688.

106. Intraventricular Brain-Derived Neurotrophic Factor Reduces Infarct Size after Focal Cerebral Ischemia in Rats / W.-R. Schabitz, S. Schwab, M. Spranger, W. Hacke // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 1997. - Vol. 17, No. 5. - Pp. 500-506.

107. Investigation of cerebral ischemia using magnetization transfer contrast (MTC) MR imaging / R. J. Ordidge, J. A. Helpern, R. A. Knight [et al.] // Magn Reson Imaging. - 1991. - Vol. 9, No. 6. - Pp. 895-902, doi: 10.1016/0730-725X(91)90533-R.

108. Isolation of a common receptor for Coxsackie B viruses and adenoviruses 2 and 5 / J. M. Bergelson, J. A. Cunningham, G. Droguett [et al.] // Science. - 1997. -Vol. 275, No. 5304. - Pp. 1320-1323, doi: 10.1126/SCIENCE.275.5304.1320.

109. Ivics, Z. Sleeping Beauty Transposition / Z. Ivics, Z. Izsvak // Microbiol Spectr. - 2015. - Vol. 3, No. 2. - Pp. 147-156, doi: 10.1128/microbiolspec.MDNA3-0042-2014.

110. Jin, L. Marrow sensitization to 5-fluorouracil using the ligands for Flt-3 and c-Kit / L. Jin, T. Neff, C. A. Blau // Exp Hematol. - 1999. - Vol. 27, No. 3. - Pp. 520-525, doi: 10.1016/S0301-472X(98)00039-3.

111. Khodanovich, M. Yu. Animal models of cerebral ischemia / M. Yu. Khodanovich, A. A. Kisel // New operational technologies (Newot'2015). - 2015. - Vol. 1688, No. 1. - Pp. 030037, doi: 10.1063/1.4936032.

112. Krypton laser-induced photothrombotic distal middle cerebral artery occlusion without craniectomy in mice / H. Sugimori, H. Yao, H. Ooboshi [et al.] // Brain Research Protocols. - 2004. - Vol. 13, No. 3. - Pp. 189-196, doi: 10.1016/j .brainresprot.2004.06.001.

113. Lachmann, R. H. The use of herpes simplex virus-based vectors for gene delivery to the nervous system / R. H. Lachmann, S. Efstathiou // Mol. Med. Today. -1997. - Vol. 3, No. 9. - Pp. 404-411, doi: 10.1016/S1357-4310(97)01106-4.

114. Lammie, G. A. Incomplete lacunar infarction (Type I b lacunes) / G. A. Lammie, F. Brannan, J. M. Wardlaw // Acta Neuropathol. - 1998. - Vol. 96, No. 2. -Pp. 163-171, doi: 10.1007/s004010050877.

115. Lentiviral gene delivery to CNS by spinal intrathecal administration to neonatal mice / E. Fedorova, L. Battini, A. Prakash-Cheng [et al.] // J Gene Med. - 2006. - Vol. 8, No. 4. - Pp. 414-424, doi: 10.1002/jgm.861.

116. Lentiviral-mediated delivery of Bcl-2 or GDNF protects against excitotoxicity in the rat hippocampus / L.-F. Wong, G. S. Ralph, L. E. Walmsley [et al.] // Mol Ther. - 2005. - Vol. 11, No. 1. - Pp. 89-95, doi: 10.1016/j.ymthe.2004.08.026.

117. Li, F. Spontaneous Hyperthermia and its Mechanism in the Intraluminal Suture Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Rats / F. Li, T. Omae, M. Fisher // Stroke. - 1999. - Vol. 30, No. 11. - Pp. 2464-2471, doi: 10.1161/01.STR.30.11.2464.

118. Lim, S. T. Viral vectors for neurotrophic factor delivery: A gene therapy approach for neurodegenerative diseases of the CNS / S. T. Lim, M. Airavaara, B. K. Harvey // Pharmacol Res. - 2010. - Vol. 61, No. 1. - Pp. 14-26, doi: 10.1016/j.phrs.2009.10.002.

119. Local Administration of AAV-BDNF to Subventricular Zone Induces Functional Recovery in Stroke Rats / S.-J. Yu, K.-Y. Tseng, H. Shen [et al.] // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, No. 12. - P. e81750.

120. Mc Gee-Russell, S. M. A combined light and electron microscope study of early anoxic-ischaemic cell change in rat brain / S. M. Mc Gee-Russell, A. W. Brown, J. B. Brierley // Brain Res. - 1970. - Vol. 20, No. 2. - Pp. 193-200, doi: 10.1016/0006-8993(70)90288-X.

121. Mesenchymal stem cells: therapeutic outlook for stroke / O. Honmou, R. Onodera, M. Sasaki [et al.] // Trends Mol Med. - 2012. - Vol. 18, No. 5. - Pp. 292-297, doi: 10.1016/j.molmed.2012.02.003.

122. Mies, G. Correlation between periinfarct DC shifts and ischaemic neuronal damage in rat / G. Mies, T. lijima, K.-A. Hossmannd // Neuroreport. - 1993. - Vol. 4, No. 6. - Pp. 709-711.

123. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse / W. Clark, N. Lessov, M. Dixon, F. Eckenstein // Neurol Res. - 1997. - Vol. 19, No. 6. - Pp. 641-648, doi: 10.1080/01616412.1997.11740874.

124. Morphological, biochemical and physiological changes in brain nervous tissue of adult intact and hypoxia-subjected rats after transplantation of embryonic nervous tissue / L. V. Polezhaev, M. A. Alexandrova, V. N. Vitvitsky [et al.] // J Hirnforsc. - 1985. - Vol. 26, No. 3. - Pp. 281-289.

125. Moskowitz, M. A. The science of stroke: mechanisms in search of treatments / M. A. Moskowitz, E. H. Lo, C. Iadecola // Neuron. - 2010. - Vol. 67, No. 2. - Pp. 181-198, doi: 10.1016/j.neuron.2010.07.002.

126. Namiecinska, M. VEGF as an angiogenic, neurotrophic, and neuroprotective factor / M. Namiecinska, K. Marciniak, J. Z. Nowak // Postepy Hig Med Dosw (Online). - 2005. - Vol. 59. - Pp. 573-583.

127. Nerve Growth Factor Gene Therapy: Activation of Neuronal Responses in Alzheimer Disease / M. H. Tuszynski, J. H. Yang, D. Barba [et al.] // JAMA Neurol. -2015. - Vol. 72, No. 10. - Pp. 1139-1347, doi: 10.1001/jamaneurol.2015.1807.

128. Neural Stem Cells Genetically Modified to Overexpress Cu/Zn-Superoxide Dismutase Enhance Amelioration of Ischemic Stroke in Mice / H. Sakata, K. Niizuma, T. Wakai [et al.] // Stroke. - 2012. - Vol. 43, No. 9. - Pp. 2423-2429, doi: 10.1161/STROKEAHA.112.656900.

129. Neuroglia in rat spinal cord contusion injury with cell-mediated delivery of a combination of VEGF165, GDNF, and NCAM1 genes in combination with epidural electrical stimulation / F. O. Fadeev, F. V Bashirov, A. A. Izmajlov [et al.] // Genes and Cells. - 2020. - Vol. 15, No. 2. - Pp. 58-65.

130. Neuronal death/survival signaling pathways in cerebral ischemia / T. Sugawara, M. Fujimura, N. Noshita [et al.] // NeuroRx. - 2004. - Vol. 1, No. 1. - Pp. 17-25, doi: 10.1602/neurorx.1.1.17.

131. Neuropathological and Behavioral Consequences of Adeno-Associated Viral Vector-Mediated Continuous Intrastriatal Neurotrophin Delivery in a Focal Ischemia Model in Rats / G. Andsberg, Z. Kokaia, R. L. Klein [et al.] // Neurobiol Dis. - 2002. - Vol. 9, No. 2. - Pp. 187-204, doi: 10.1006/nbdi.2001.0456.

132. Neuroprotection by PlGF gene-modified human mesenchymal stem cells after cerebral ischaemia / H. Liu, O. Honmou, K. Harada [et al.] // Brain. - 2006. - Vol. 129, No.10. - Pp. 2734-2745.

133. Neuroprotective Effects of Virally Delivered HSPs in Experimental Stroke / R. A. Badin, M. F. Lythgoe, L. van der Weerd [et al.] // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 2006. - Vol. 26, No. 3. - Pp. 371-381, doi: 10.1038/sj.jcbfm.9600190.

134. Non-viral gene delivery methods / W. Wang, W. Li, N. Ma, G. Steinhoff // Curr Pharm Biotechnol. - 2013. - Vol. 14, No. 1. - Pp. 46-60.

135. Non-Viral Gene Delivery to Mesenchymal Stem Cells: Methods, Strategies and Application in Bone Tissue Engineering and Regeneration / J. L. Santos, D. Pandita, J. Rodrigues [et al.] // Curr Gene Ther. - 2011. - Vol. 11, No. 1. - Pp. 46-57, doi: 10.2174/156652311794520102.

136. Ooboshi, H. Gene Therapy as a Novel Pharmaceutical Intervention for Stroke / H. Ooboshi // Curr Pharm Des. - 2011. - Vol. 17, No. 5. - Pp. 424-433.

137. Outcome of cord-blood transplantation from related and unrelated donors. Eurocord Transplant Group and the European Blood and Marrow Transplantation Group / E. Gluckman, V. Rocha, A. Boyer-Chammard [et al.] // N Engl J Med. - 1997. - Vol. 337, No. 6. - Pp. 373-381, doi: 10.1056/NEJM199708073370602.

138. Patterns of brain angiogenesis after vascular endothelial growth factor administration in vitro and in vivo / J. M. Rosenstein, N. Mani, W. F. Silverman, J. M. Krum // Proc Natl Acad Sci USA. - 1998. - Vol. 95, No. 12. - Pp. 7086-7091, doi: 10.1073/pnas.95.12.7086.

139. Pharmacologic Interventions for Stroke : looking beyond the thrombolysis time window into the penumbra with biomarkers, not a stopwatch / J. C. Chavez, O. Hurko, F. C. Barone, G. Z. Feuerstein // Stroke. - 2009. - Vol. 40, No. 10. - Pp. e558-563, doi: 10.1161/STROKEAHA.109.559914.

140. Phase I-II Clinical Trial Assessing Safety and Efficacy of Umbilical Cord Blood Mononuclear Cell Transplant Therapy of Chronic Complete Spinal Cord Injury / H. Zhu, W. Poon, Y. Liu [et al.] // Cell Transplant. - 2016. - Vol. 25, No.11. - Pp. 19251943.

141. Placental blood as a source of hematopoietic stem cells for transplantation into unrelated recipients / J. Kurtzberg, M. Laughlin, M. L. Graham [et al.] // N Engl J Med. - 1996. - Vol. 335, No. 3. - Pp. 157-166.

142. Polezhaev, L. V. Transplantation of embryonic brain tissue into the brain of adult rats after hypoxic hypoxia / L. V. Polezhaev, M. A. Alexandrova // J Hirnforsch. - 1984. - Vol. 25, No. 1. - Pp. 99-106.

143. Postischemic administration of Sendai virus vector carrying neurotrophic factor genes prevents delayed neuronal death in gerbils / M. Shirakura, M. Inoue, S. Fujikawa [et al.] // Gene Ther. - 2004. - Vol. 11, No. 9. - Pp. 784-790, doi: 10.1038/SJ.GT.3302224.

144. Preventive Triple Gene Therapy Reduces the Negative Consequences of Ischemia-Induced Brain Injury after Modelling Stroke in a Rat / V. Markosyan, Z. Safiullov, A. Izmailov [et al.] // Int J Mol Sci. - 2020. - Vol. 21, No. 18. - Pp. 1-26, doi: 10.3390/IJMS21186858.

145. Pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in acute ischemic stroke and their relation to early neurological deficit and stroke outcome / V. Basic Kes, A.-M. Simundic, N. Nikolac [et al.] // Clin Biochem. - 2008. - Vol. 41, No. 16-17. -Pp.1330-1334.

146. rAAV-mediated delivery of brain-derived neurotrophic factor promotes neurite outgrowth and protects neurodegeneration in focal ischemic model / J. Zhang, Z. Yu, Z. Yu [et al.] // Int J Clin Exp Pathol. - 2011. - Vol. 4, No. 5. - Pp. 496-504.

147. Rat bone marrow mesenchymal stem cells express glial markers and stimulate nerve regeneration / M. Tohill, C. Mantovani, M. Wiberg, G. Terenghi // Neurosci Lett. - 2004. - Vol. 362, No. 3. - Pp. 200-203, doi: 10.1016/j.neulet.2004.03.077.

148. Recirculation model following MCA occlusion in rats / T. Shigeno, G. M. Teasdale, J. Mc Culloch, D. I. Graham // J Neurosurg. - 1985. - Vol. 63, No. 2. - Pp. 272-277, doi: 10.3171/jns.1985.63.2.0272.

149. Reduction of neurite outgrowth in a model of glial scarring following CNS injury is correlated with the expression of inhibitory molecules on reactive astrocytes / R. Mc Keon, R. Schreiber, J. Rudge, J. Silver // The Journal of Neuroscience. - 1991. -Vol. 11, No. 11. - Pp. 3398-3411, doi: 10.1523/JNEUROSCI.11-11-03398.1991.

150. Reexposure of cord blood to noninherited maternal HLA antigens improves transplant outcome in hematological malignancies / J. J. van Rood, C. E. Stevens, J. Smits [et al.] // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2009. - Vol. 106, No. 47. - Pp. 19952-19957, doi: 10.1073/pnas.0910310106.

151. Regulation of naotai recipe on the expression of HIF-la/VEGF signaling pathway in cerebral ischemia/reperfusion rats / Y. Chen, H. Zhu, J. Liao, Y. Yi // Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. - 2014. - Vol. 34, No. 10. - Pp. 1225-1230.

152. Retinoic acid-mediated induction of neurons and glial cells from human umbilical cord-derived hematopoietic stem cells / Y. K. Jang, J. J. Park, M. C. Lee [et al.] // J Neurosci Res. - 2004. - Vol. 75, No. 4. - Pp. 573-584, doi: 10.1002/jnr.10789.

153. Rhim, T. Targeted delivery of growth factors in ischemic stroke animal models / T. Rhim, M. Lee // Expert Opin Drug Deliv. - 2016. - Vol. 13, No. 5. - Pp. 709-723.

154. Rosenstein, B. J. The diagnosis of cystic fibrosis: A consensus statement / B. J. Rosenstein, G. R. Cutting // J Pediatr. - 1998. - Vol. 132, No. 4. - Pp. 589-595, doi: 10.1016/S0022-3476(98)70344-0.

155. Safety and Therapeutic Potential of M2 Macrophages in Stroke Treatment / E. R. Chernykh, E. Y. Shevela, N. M. Starostina [et al.] // Cell Transplant. - 2016. -Vol. 25, No. 8. - Pp. 1461-1471.

156. Sakuma, T. Lentiviral vectors: basic to translational / T. Sakuma, M. A. Barry, Y. Ikeda // Biochemical Journal. - 2012. - Vol. 443, No. 3. - Pp. 603-618.

157. Sondell, M. Vascular endothelial growth factor stimulates Schwann cell invasion and neovascularization of acellular nerve grafts / M. Sondell, G. Lundborg, M. Kanje // Brain Research. - 1999. - Vol. 846. - Pp. 520-525.

158. SOX9 gene transfer via safe, stable, replication-defective recombinant adeno-associated virus vectors as a novel, powerful tool to enhance the chondrogenic potential of human mesenchymal stem cells / J. K. Venkatesan, M. Ekici, H. Madry [et al.] // Stem Cell Res Ther. - 2012. - Vol. 3, No. 3. - P. 22.

159. Spinal Cord Molecular and Cellular Changes Induced by Adenoviral Vector- and Cell-Mediated Triple Gene Therapy after Severe Contusion / A. A. Izmailov, T. V. Povysheva, F. V. Bashirov [et al.] // Front Pharmacol. - 2017. - Vol. 8. - Pp. 813, doi: 10.3389/fphar.2017.00813.

160. Stem cell therapy in stroke / F. Locatelli, A. Bersano, E. Ballabio [et al.] // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2009. - Vol. 66, No. 5. - Pp. 757-777, doi: 10.1007/s00018-008-8346-1.

161. Stoll, G. Inflammation and glial responses in ischemic brain lesions / G. Stoll, S. Jander, M. Schroeter // Prog Neurobiol. - 1998. - Vol. 56, No. 2. - Pp. 149171, doi: 10.1016/s0301-0082(98)00034-3.

162. Sun, T. Repairing Neural Injuries Using Human Umbilical Cord Blood / T. Sun, Q. Ma // Mol Neurobiol. - 2013. - Vol. 47, No. 3. - Pp. 938-945.

163. Sustained high level transgene expression in mammalian cells mediated by the optimized piggyBac transposon system / X. Chen, J. Cui, Z. Yan [et al.] // Genes Dis. - 2015. - Vol. 2, No. 1. - Pp. 96-105, doi: 10.1016/j.gendis.2014.12.001.

164. Syková, E. Glial diffusion barriers during aging and pathological states / E. Syková // Prog Brain Res. - 2001. - Vol. 132. - Pp. 339-363.

165. Symptomatic Improvement, Increased Life-Span and Sustained Cell Homing in Amyotrophic Lateral Sclerosis After Transplantation of Human Umbilical Cord Blood Cells Genetically Modified with Adeno-Viral Vectors Expressing a Neuro-Protective Factor and a Neural Cell Adhesion Molecule / R. Islamov, A. Rizvanov, M. A. Mukhamedyarov, I. Salafutdinov // Curr Gene Ther. - 2015. - Vol. 15, No. 3. - Pp. 266-276.

166. Synergistic Effects of GDNF and VEGF on Lifespan and Disease Progression in a Familial ALS Rat Model / D. Krakora, P. Mulcrone, M. Meyer [et al.] // Molecular Therapy. - 2013. - Vol. 21, No. 8. - Pp. 1602-1610.

167. Systemic transplantation of embryonic stem cells accelerates brain lesion decrease and angiogenesis / N. Nagai, N. Kawao, K. Okada [et al.] // Neuroreport. -2010. - Vol. 21, No. 8. - Pp. 575-579, doi: 10.1097/WNR.0b013e32833a7d2c.

168. Takahashi, K. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors / K. Takahashi, S. Yamanaka // Cell. -2006. - Vol. 126, No. 4. - Pp. 663-676, doi: 10.1016/j.cell.2006.07.024.

169. Taoufik, E. Ischemic neuronal damage / E. Taoufik, L. Probert // Curr Pharm Des. - 2008. - Vol. 14, No. 33. - Pp. 3565-3573, doi: 10.2174/138161208786848748.

170. The Dose of Intravenously Transplanted Bone Marrow Stromal Cells Determines the Therapeutic Effect on Vascular Remodeling in a Rat Model of Ischemic Stroke / B. He, Q. Yao, Z. Liang [et al.] // Cell Transplant. - 2016. - Vol. 25, No. 12. -Pp.2173-2185.

171. The potential of cord blood stem cells for use in regenerative medicine / D. T. Harris, M. Badowski, N. Ahmad, M. A. Gaballa // Expert Opin Biol Ther. - 2007. -Vol. 7, No. 9. - Pp. 1311-1322, doi: 10.1517/14712598.7.9.1311.

172. The role of heat shock proteins Hsp70 and Hsp27 in cellular protection of the central nervous system / G. Barreto, R. E. White, Y. Ouyang [et al.] // Cent Nerv Syst Agents Med Chem. - 2011. - Vol. 11, No. 2. - Pp. 164-173.

173. The role of heat shock proteins Hsp70 and Hsp27 in cellular protection of the central nervous system / T. B. Franklin, A. M. Krueger-Naug, D. B. Clarke [et al.] // International Journal of Hyperthermia. - 2005. - Vol. 21, No. 5. - Pp. 379-392.

174. Therapeutic Effect of BDNF-Overexpressing Human Neural Stem Cells (HB1.F3.BDNF) in a Rodent Model of Middle Cerebral Artery Occlusion / D.-J. Chang, N. Lee, C. Choi [et al.] // Cell Transplant. - 2013. - Vol. 22, No.8. - Pp. 1441-1452.

175. Thrombospondins 1 and 2 are Necessary for Synaptic Plasticity and Functional Recovery after Stroke / J. Liauw, S. Hoang, M. Choi [et al.] // Journal of

Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 2008. - Vol. 28, No. 10. - Pp. 1722-1732, doi: 10.1038/jcbfm.2008.65.

176. Tomko, R. P. HCAR and MCAR: the human and mouse cellular receptors for subgroup C adenoviruses and group B coxsackieviruses / R. P. Tomko, R. Xu, L. Philipson // Proc Natl Acad Sci USA. - 1997. - Vol. 94, No. 7. - Pp. 3352-3356, doi: 10.1073/pnas.94.7.3352.

177. Tournell, C. E. Progesterone-induced agrin expression in astrocytes modulates glia-neuron interactions leading to synapse formation / C. E. Tournell, R. A. Bergstrom, A. Ferreira // Neuroscience. - 2006. - Vol. 141, No. 3. - Pp. 1327-1338, doi: 10.1016/j.neuroscience.2006.05.004.

178. Transplantation and other uses of human umbilical cord blood and stem cells / G. Goldstein, A. Toren, A. Nagler // Curr Pharm Des. - 2007. - Vol. 13, No. 13. - Pp. 1363-1373, doi: 10.2174/138161207780618759.

179. Transplantation of differentiated bone marrow stromal cells promotes motor functional recovery in rats with stroke / W. Huang, X. Mo, C. Qin [et al.] // Neurol Res. - 2013. - Vol. 35, No. 3. - Pp. 320-328, doi: 10.1179/1743132812Y.0000000151.

180. Transplantation of Umbilical Cord Blood Stem Cells for Treating Spinal Cord Injury / D.-H. Park, J.-H. Lee, C. V. Borlongan [et al.] // Stem Cell Rev Rep. -2011. - Vol. 7, No. 1. - Pp. 181-194.

181. Triple-gene therapy for stroke: A proof-of-concept in vivo study in rats / M. E. Sokolov, F. V. Bashirov, V. A. Markosyan [et al.] // Front Pharmacol. - 2018. -Vol. 9. - Pp. 111, doi: 10.3389/fphar.2018.00111.

182. Upregulation of MAP1B and MAP2 in the Rat Brain after Middle Cerebral Artery Occlusion: Effect of Age / A. Popa-Wagner, E. Schröder, H. Schmoll [et al.] // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 1999. - Vol. 19, No. 4. - Pp. 425434, doi: 10.1097/00004647-199904000-00008.

183. Vangsness, C. T. Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites / C. T. Vangsness, H. Sternberg, L. Harris // Arthroscopy. - 2015. - Vol. 31, No. 9. - Pp. 1836-1843.

184. Variation in the safety of induced pluripotent stem cell lines / K. Miura, Y. Okada, T. Aoi [et al.] // Nat Biotechnol. - 2009. - Vol. 27, No. 8. - Pp. 743-745, doi: 10.1038/nbt.1554.

185. VEGF links hippocampal activity with neurogenesis, learning and memory / L. Cao, X. Jiao, D. S. Zuzga [et al.] // Nat Genet. - 2004. - Vol. 36, No. 8. - Pp. 827835.

186. Very Delayed Infarction after Mild Focal Cerebral Ischemia: A Role for Apoptosis? / C. Du, R. Hu, C. A. Csernansky [et al.] // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 1996. - Vol. 16, No. 2. - Pp. 195-201, doi: 10.1097/00004647199603000-00003.

187. Very Delayed Infarction after Mild Focal Cerebral Ischemia: A Role for Apoptosis? / C. Du, R. Hu, C. A. Csernansky [et al.] // Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. - 1996. - Vol. 16, No. 2. - Pp. 195-201.

188. Wu, D. Neuroprotection with noninvasive neurotrophin delivery to the brain / D. Wu, W. M. Pardridge // Proc Natl Acad Sci USA. - 1999. - Vol. 96, No. 1. -Pp. 254-9, doi: 10.1073/pnas.96.1.254.

189. Yamauchi, H. Significance of white matter high intensity lesions as a predictor of stroke from arteriolosclerosis / H. Yamauchi, H. Fukuda, C. Oyanagi // J Neurol Neurosurg Psychiatry. - 2002. - Vol. 72, No. 5. - Pp. 576-582, doi: 10.1136/jnnp.72.5.576.

190. Zhang, G.-L. Neural stem cell transplantation therapy for brain ischemic stroke: Review and perspectives / G.-L. Zhang, Z.-H. Zhu, Y.-Z. Wang // World J Stem Cells. - 2019. - Vol. 11, No. 10. - Pp. 817-830, doi: 10.4252/wjsc.v11.i10.817.

191. Zhang, X. Viral vectors for gene delivery in tissue engineering / X. Zhang, W. T. Godbey // Adv Drug Deliv Rev. - 2006. - Vol. 58, No. 4. - Pp. 515-534, doi: 10.1016/j.addr.2006.03.006.

Список сокращений

АТФ - аденозинтрифосфорная кислота ГМ - головно мозг

ГСК - гематопоэтическая стволовая клетка ГЭБ - гематоэнцефалитический барьер ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИИ - ишемический инсульт

ИПСК - индуцированная плюрипотентная стволовая клетка кДНК - комплиментарная дезоксирибонуклеиновая кислота МК - мозговое кровообращение

МКБ 11 - международная классификация болезней одиннадцатого пересмотра

МНКП - мононуклеарных клеток крови пуповины

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

МРТ - магнитно-резонасная томография

МСК - мезенхимальная стволовая клетка

НМГ - фракционированный (низкомолекулярный) гепарин

НСК - нейральная стволовая клетка

НФГ - нефракционированный гепарин

ОСА - общая сонная артерия

ОСМА - окклюзия средней мозговой артерии

ПК - пуповинная кровь

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РКТ - рентгеновская компьютерная томография

РНК - рибонуклеиновая кислота

РТПХ - реакция «трансплантат против хозяина»

СК - стволовая клетка

СМА - средняя мозговая артерия

ТИА - транзиторная ишемическая атака

ХС - холестерина

ЦНС - центральная нервная система ЧМТ - черепно-мозговая травма ЭСК - эмбриональная стволовая клетка AAV - аденоассоциированный вирус Ad - аденовирусный вектор

Ad-CNTF - аденовирусный вектор, кодирующий цилиарный нейротрофический фактор

Ad-GDNF - аденовирусный вектор, кодирующий нейротрофический фактор Ad-Syn-Bcl-xL - кодирующий антиапопотозный белок Bcl-xL Ad5 - аденовирус 5 серотипа

Ad5-GFP - аденовирусный вектор, кодирующий зелёный репортеры белок Ad5-NCAM - нейрональная молекула адгезии

Ad5-VEGF - аденовирусный вектор, кодирующий сосудистый эндотелиальный фактор роста

Bcl-2 - антиапоптотические мультидоменные белки BDNF - нейротрофический фактор мозга bFGF - основной фактор роста фибробластов CNTF - цилиарный нейротрофический фактор EPO - эритропоэтин

G-CSF - колониестимулирующий фактор гранулоцитов GDNF - глиальный нейротрофический фактор GFAP - глиальный фибриллярный кислый белок

GM-CSF - колониестимулирующий фактор гранулоцитов и моноцитов

HEK 293 - клетки почек эмбриона человека

HLA - человеческий лейкоцитарный антиген

HNA - ядерног антиген человека

Hsp - белки теплового шока

HSV - герпесвирус

Ig - иммуноглобулин

IGF-1 - инсулиноподобный фактор роста 1

IL - интерлейкин

IL-1RA - противовоспалительные молекулы

MOI - бляшкообразующая единица

NCAM - нейрональная молекула адгезии

NGF - фактор роста нервов

SDFla - Стромальный фактор 1а

SHR - спонтанные гипертензивные крысы

VEGF - сосудистый эндотелиальный фактор роста

Список иллюстративного материала

Рисунок 1 - Моделирование инсульта головного мозга путем окклюзии средней

мозговой артерии...............................................................................60

Рисунок 2 - Продукция GFP в МНКП человека через 72 часа после трансдукции с

помощью Ad5-GFP (M01=10)..................................................................69

Рисунок 3 - Количественный анализ уровня мРНК генов vegf165, gdnf и ncaml в генетически модифицированных МНКП человека (MHKn+Ad5-VEGF+Ad5-GDNF+Ad5-NCAM и MHKn+Ad5-GFP) через 72 часа после трансдукции с общим

показателем М01=10 и нативных МНКП...................................................70

Рисунок 4 - Сравнительная радиальная диаграмма цитокинов, хемокинов и факторов роста в супернатантах, полученных через 72 ч культивирования генетически модифицированных MНKП+Ad5 и MНKП+Ad5-VEGF+Ad5-

GDNF+Ad5 -NCAM и нативных МНКП....................................................72

Рисунок 5 - Экспрессия рекомбинантных молекул в мозге крысы на 21-й день после моделирования ИИ и преветивного (за 3 суток до операции) введения Ad5-

GFP и Ad5-VEGF+Ad5-GDNF+Ad5-NCAM...............................................73

Рисунок 6 - Экспрессия GFP (зеленое свечение) в HNA-позитивных МНКП (красное свечение) в головном мозге крысы на 21 -е сутки после моделирования

ИИ и превентивной (за 2 суток до операции) инъекции MНKП+Ad5-GFP........74

Рисунок 7 - Экспрессия VEGF (красное свечение) в HNA-позитивных МНКП (зеленое свечение) в зоне ишемического повреждения на 21 сутки после моделирования ИИ и превентивной (за 2 суток до операции) инъекции

MНKП+Ad5 -VEGF+Ad5 -GDNF+Ad5 -NCAM............................................75

Рисунок 8 - Экспрессия GDNF (красное свечение) в HNA-позитивных МНКП (зеленое свечение) в зоне ишемического повреждения на 21 сутки после моделирования ИИ и превентивной (за 2 суток до операции) инъекции

MНKП+Ad5 -VEGF+Ad5 -GDNF+Ad5 -NCAM............................................76

Рисунок 9 - Экспрессия NCAM (красное свечение) в HNA-позитивных МНКП (зеленое свечение) в зоне ишемического повреждения головного мозга крысы на

21 сутки после моделирования ИИ и превентивной (за 2 суток до операции)

инъекции МНКП+Ла5-УЕаЕ+Ла5-аВКЕ+Ла5-КСЛМ................................77

Рисунок 10 - Анализ результатов теста «Липкая лента» у экспериментальных крыс на ипсилатеральной (левой) и контралатеральной (правой) передних лапах

.......................................................................................................79

Рисунок 11 - Очаг ишемического инсульта у крыс через 3 недели после окклюзии СМА. Л, В - головной мозг экспериментальных животных из контрольной (№С1)

группы..............................................................................................81

Рисунок 12 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку №р70 через 21 день после окклюзии средней мозговой

артерии............................................................................................83

Рисунок 13 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку Caspase3 через 21 день после окклюзии средней мозговой

артерии............................................................................................84

Рисунок 14 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку 1Ьа1 через 21 день после окклюзии средней мозговой

артерии............................................................................................86

Рисунок 15 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку ОБЛР через 21 день после окклюзии средней мозговой

артерии............................................................................................87

Рисунок 16 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку 0^2 через 21 день после окклюзии средней мозговой

артерии............................................................................................89

Рисунок 17 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку синаптофизину (8упар1орЬуБт) через 21 день после

окклюзии средней мозговой артерии........................................................90

Рисунок 18 - Иммунофлуоресцентное окрашивание коры головного мозга крысы с применением АТ к белку PSD95 через 21 день после окклюзии средней мозговой артерии............................................................................................92

Рисунок 19 - Результаты анализа мультиплексного профилирования цитокинов, хемокинов и факторов роста в образцах сыворотки крови (верхняя панель) и спинномозговой жидкости (нижняя панель) интактных и экспериментальных животных..........................................................................................94