Конструирование вирусоподобных частиц на основе корового белка вируса гепатита B и M2 белка вируса гриппа как основы новых противогриппозных вакцин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Блохина, Елена Александровна

• Блохина, Елена Александровна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Блохина, Елена Александровна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Основы создания противогриппозных вакцин

2. Использование вирусоподобных частиц в качестве высокоиммуногенных ^ носителей вакцинных белков

3. Пептидные аптамеры - новый инструмент молекулярной медицины 40 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 46 РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Конструирование вирусоподобных НВс частиц на основе генетически слитых ^ последовательностей М2е и НВс антигена

2. Новый способ презентации чужеродных пептидов на поверхности НВс частиц, ^ основанный на нековалентном связывании пептидов с НВс частицами in vitro

3. Получение вирусоподобных НВс частиц в результате сборки in vitro 90 ОБСУЖДЕНИЕ

1. Вирусоподобные НВс частицы на основе генетически слитых ^ последовательностей М2е и НВс антигена

2. Метод нековалентного связывания целевых пептидов с вирусоподобными НВс ^g частицами in vitro

ВЫВОДЫ юз

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

GFP - зеленый флуоресцентный белок НА - гемагглютинин

НВс - ядерный антиген (коровый белок) вируса гепатита В HBs - поверхностный антиген вируса гепатита В IgG - иммуноглобулин G

М2е - внеклеточный домен М2 белка вируса гриппа

MIR - иммунодоминантная петля (major immunodominant region)

NA - нейраминидаза

a.o. - аминокислотный остаток

ВПЧ - вирусоподобная частица

ЖГВ - живая гриппозная вакцина

ИГВ - инактивированная гриппозная вакцина

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конструирование вирусоподобных частиц на основе корового белка вируса гепатита B и M2 белка вируса гриппа как основы новых противогриппозных вакцин»

ВВЕДЕНИЕ

Вакцинация является одним из наиболее эффективных способов профилактики инфекционных заболеваний человека и животных. «Классические» живые вакцины предполагали использование для иммунизации ослабленной формы возбудителя заболевания. Позднее были разработаны способы физической и/или химической инактивации патогенных микроорганизмов, которые позволяли их обезвредить, но сохранить основные иммуногенные свойства. Преимуществами живых и инактивированных вакцин, основанных на «целом» патогене, является высокая иммуногенность, поскольку такие вакцины представляют патоген иммунной системе в его естественной форме. Однако, недостатками таких вакцин является возможность реверсии к высокопатогенной форме или неполной инактивации возбудителя. Кроме того, возможны аллергические реакции и нежелательные побочные эффекты, обусловленные сложным составом препарата, содержащего полный набор белков патогена (а не только основные иммуногенные белки), особенно у людей с ослабленным иммунитетом. Наконец, основанные на целом патогене вакцины содержат генетический материал возбудителя заболевания, что создает возможность рекомбинации при инфекции, которая может привести к образованию новых форм патогена.

Поэтому следующим этапом в разработке вакцин стало создание белковых вакцин, использующих только один или несколько основных высокоиммуногенных белков патогена (антигенов), как правило, поверхностных, или даже их коротких участков (эпитопов), распознающихся антителами. Такие вакцины полностью безопасны, поскольку не содержат ни патогенный организм, ни его генетический материал. Белковые вакцины могут быть получены на основе патогена в результате выделения из него отдельного белка(ов), альтернативой является получение рекомбинантного белка в стандартных организмах-продуцентах с помощью методов генетической инженерии. Однако вследствие значительных отличий в генерации иммунного ответа против целого структурированного патогена и против отдельных белков, подобные вакцины в большинстве случаев вызывают более слабый иммунный ответ, чем основанные на цельных аттенуированных или инактивированных патогенах.

Решением этой проблемы может являться направленное конструирование наноструктур, имитирующих структуру патогена и содержащих отдельные высокоиммуногенные белки патогена на своей поверхности («нановакцины»). Такой подход позволяет использовать преимущества белковых вакцин и нивелировать их недостатки, имитируя структуру патогена и, следовательно, его взаимодействие с иммунной системой. Наиболее эффективным этот подход оказывается при создании

вакцин против вирусных патогенов, поскольку вирусы являются природными наноструктурами, которые можно достаточно хорошо имитировать.

В качестве наночастиц-носителей антигенов могут быть использованы как искусственные структуры, так и наноструктры природного происхождения. Способность биологических макромолекул к самосборке и самоорганизации является одной из отличительных характеристик живых систем и дает возможность их использования для направленного создания новых наноструктур с заданными пространственными и функциональными свойствами. Одним из ярких примеров таких наноразмерных структур, обладающих пространственной симметрией и возможностями направленной модификации являются вирусы и вирусоподобные частицы (ВПЧ), образуемые в результате самосборки капсидных белков вирусов. Вирусоподобные частицы не содержат генетического материала вируса, на основе которого они созданы, и являются полностью безопасными.

Направленная модификация поверхности ВПЧ для презентации на ней антигенов может проводиться как путем «химической» пришивки, так и методами генетической инженерии. С использованием методов генетической инженерии можно получить «химерные» капсидные белки, к которым присоединен целевой антиген. В результате самосборки таких гибридных белков могут быть получены рекомбинантные ВПЧ, на поверхности которых представлен целевой антиген. Представление антигенов на поверхности ВПЧ обеспечивает их высокую иммуногенность. Такие химерные капсидные белки могут быть получены в стандартных организмах-продуцентах (бактерии, дрожжи и др.) с высоким выходом и легко очищены благодаря своему размеру. Эффективность такого подхода иллюстрируется примерами создания на основе ВПЧ вакцин против таких инфекционных заболеваний как малярия, бешенство, вирусные гепатиты и т.д.

Предметом настоящей работы является дизайн и получение рекомбинантных вирусоподобных частиц — носителей антигенов вируса гриппа. В качестве основы для создания рекомбинантных ВПЧ был использован ядерный (коровый) антиген вируса гепатита В (НВс антиген), мономеры которого собираются в наноразмерные вирусоподобные НВс частицы. Мы сконструировали рекомбинантные НВс частицы, представляющие на своей поверхности антигены вируса гриппа, разработали методы их получения и очистки. Иммунологические характеристики и протективность рекомбинантных НВс частиц были определены в экспериментах на лабораторных животных в ФГБУ «НИИгриппа» Минздрава России.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Целью работы является конструирование вирусоподобных наноразмерных частиц на основе НВс антигена вируса гепатита В и М2 белка вируса гриппа, разработка методов их получения и очистки.

При этом были поставлены следующие основные задачи:

1. Конструирование рекомбинантных вирусоподобных частиц на основе НВс антигена вируса гепатита В, содержащих вставку нескольких копий внеклеточного домена М2 белка вируса гриппа (М2е) в район иммунодоминантной петли НВс антигена.

2. Разработка нового способа презентации чужеродных пептидов на поверхности НВс-частиц, основанного на специфическом нековалентном связывании чужеродных пептидов с НВс частицами in vitro, и получение белковых комплексов на основе НВс частиц, представляющих М2е пептиды двух различных штаммов вируса гриппа.

3. Оптимизация метода получения вирусоподобных НВс частиц в результате сборки из мономеров НВс белка in vitro.

4. Характеристика иммуногенности и протективного действия препаратов вирусоподобных частиц, содержащих М2е, на лабораторных животных.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Основы создания противогриппозных вакцин

Грипп является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний и продолжает представлять значительную угрозу для здоровья населения. Сезонные эпидемии являются причиной ежегодного заражения миллионов людей во всем мире, а также связаны со значительными экономическими потерями (Molinari et al., 2007). Пандемии же гриппа могут носить разрушительные глобальные последствия, приводя к миллионам смертей (Johnson et al., 2002). При этом основная тяжесть и опасность смертельного исхода во время сезонных инфекций связаны в большей степени с осложнениями (бактериальная суперинфекция, обострения имеющихся заболеваний), а не с первичной гриппозной инфекцией (Thompson et al., 2003).

1.1. Общее представление и классификация вирусов гриппа

Вирусы гриппа принадлежат к группе Myxoviruses, семейства Orthomyxoviridae и являются оболочечными, однонитевыми (-) РНК вирусами. В основе подразделения на типы (А, В и С) лежат антигенность, видоспецифичность, патогенность, трансмиссия и сезонность. Стандартная номенклатура вирусов гриппа человека включает такие параметры как тип, географическая локализация, номер и год выделения. Например, вирус гриппа А, изолированный в Панаме в 1999 под номером 2002 должен называться как A/Panama/2002/1999.

Наиболее распространенными среди всех типов вирусов гриппа являются вирусы гриппа А, способные заражать не только человека, но и птиц, свиней, лошадей и многих других животных, хотя тропизм каждого отдельного штамма вируса гриппа главным образом высоко адаптирован к конкретному хозяину. Клинические проявления включают системные и респираторные заболевания, редко сопряженные с нарушениями центральной нервной системы, токсикологическим шоком или множественным повреждением органов (Studahl 2003, Sion et al., 2001). Именно штаммы вируса гриппа А являются основными мишенями для ежегодных вакцинаций. В основе подразделения вирусов гриппа А на субтипы лежит тип гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA), которые являются основными поверхностными иммунологическими антигенами. На сегодняшний день выделяют 16 типов НА и 9 типов NA.

Вирусы гриппа В главным образом циркулируют среди людей, хотя и известны редкие случаи заражения тюленей (Osterhaus et al., 2000), и могут являться существенной причиной ежегодных эпидемий гриппа. Клинические симптомы заболеваний гриппом В менее тяжелые по сравнению с заболеваниями, вызванными вирусами гриппа А. В

настоящий момент два основных типа вируса гриппа В представлены штаммами B/Yamagata/16/1988 и B/Victoriа/2/1987 (Chen et al, 2007). Повторное появление последнего после десяти лет «молчания» вызвало вспышки заболевания сезона 2001-2002 гг., при этом основному риску подвергались иммунологически нативные дети (Hite et al. 2007). По этой причине вирусы гриппа В также включены в состав инактивированных и живых аттенуированных сезонных вакцин.

Грипп С, который заражает человека и свиней, редко считается причиной инфекций и эпидемий у человека. В отличие от гриппа А и В, вирусы гриппа С не содержат нейраминидазы и характеризуются единственньм поверхностным антигеном гемагглютинин-эстеразо-слитым гликопротеином (HEF, hemagglutinin-esterase-fusion). Этот вирус не показывает явной сезонности и не включен в состав ежегодных противогриппозных вакцин, хотя и может быть причиной случающихся время от времени вспышек заболевания, главным образом, у детей (Matsuzaki et al., 2007). Заболевание проходит без острой фазы и заключается в инфекции верхних дыхательных путей.

1.2. Структурная и геномная организация вирусов гриппа А

Вирусы гриппа А являются плеоморфными по природе и могут быть как сферическими, так и образовывать филаментные структуры, достигая размеров от 100 до 300 нм и более. Вирусные частицы покрыты липидным бислоем, представляющим собой участок клеточной мембраны, захваченный при выходе вируса из зараженной клетки путем почкования. В вирусную оболочку встроены гликопротеины гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (NA), образующие выступы на поверхности вириона в соотношении приблизительно 4:1. Здесь же расположены тетрамерные ионные каналы, сформированные матриксным белком М2 (matrix protein 2). Под липидным бислоем находятся белковые структуры, окружающие генетический материал вируса. Матриксный белок Ml непосредственно связывает внутренние компоненты вируса (нуклеокапсид) с мембранной оболочкой вируса (Рис. 1) (Harris et al., 2006).

Геном вируса гриппа А состоит из восьми одноцепочечных (-) РНК фрагментов, которые кодируют 11 белков. Ядерный экспортный белок NEP (nuclear export protein), также известный как NS2, и антагонист антивирусного ответа хозяина неструктурный белок NS1 (non-structural protein 1) кодируются сегментом NS. Матриксный белок Ml и белок М2 ионного канала кодируются сегментом М. Рецептор связывающий белок гемагглютинин (НА), нейраминидаза (NA), нуклеопротеин (NP), и компоненты РНК-зависимого РНК полимеразного комплекса (РВ1, РВ2 и РА) экспрессируются с соответствующих сегментов генома. Позднее была открыта вторая рамка считывания

фрагмента РВ1, кодирующая про-апоптический фактор вирулентности PB1-F2. Однако по последним данным, сегмент РВ1 кодирует еще один белок N40 с неизвестными функциями (Wise et al., 2009).

В вирионе каждый из восьми вирусных сегментов формирует рибонуклеопротеиновый комплекс RNP (ribonucleoprotein). Вирусная РНК закручена вокруг нуклеопротеина NP, и такая структура в свою очередь связана с полимеразным комплексом вируса. Вирусные гены, генные продукты и первичные функции представлены в таблице 1.

Липидный бислой

Неструктурные белки

Полимеразный комплекс

Рисунок 1. Структурная организация вируса гриппа A (Medina and Garcia-Sastre, 2011).

Таблица 1. Генные сегменты вируса гриппа А и первичные функции кодируемых ими белков.

Генный сегмент Длина в нуклеотидах Кодируе мые белки Размер белков, а.о. Функция

1 2341 РВ2 759 Полимеразная субъединица, отвечающая за распознавание 5'-концевого кэпа мРНК

2 2341 РВ1 757 Полимеразная субъединица, обладающая эндонуклеазной активностью и обеспечивающая элонгацию РНК

PB1-F2 87 Виропорин - вызывает образование пор в митохондриях и индуцирует апоптоз.

3 2233 РА 716 Полимеразная субъединица, обладающая протеазной активностью

4 1778 НА 550 Гемагглютинин - поверхностный гликопротеин, связывающийся с клеточными рецепторами, основной

вирусный антиген

5 1565 NP 498 Нуклеопротеин - РНК связывающий компонент 1ШР комплекса, необходим для репликации, участвует в контроле транспорта РНК в ядро

6 1413 NA 454 Нейраминидаза - поверхностный гликопротеин, отщепляет остатки сиаловых кислот, обеспечивая освобождение от мембранных рецепторов и выход вирусов из зараженной клетки

7 1027 Ml 252 Матриксный белок, взаимодействующий с КИР комплексами и гликопротеинами, обеспечивает контроль экспорта РНК из ядра и почкование вируса

М2 97 Интегральный мембранный белок, формирующий ионный канал, обеспечивающий закисление эндосомы и раздевание вируса

8 890 NS1 230 Неструктурный белок регулирует экспрессию генов хозяина, контрллирует сплайсинг и полиаденилирование

NEP/NS2 121 Ядерный экспортный белок контролирует ядерно-цитоплазматический транспорт мРНК

1.3. Жизненный цикл вируса гриппа

На первой стадии инфекции находящиеся на поверхности вируса молекулы НА прикрепляются к мембранным рецепторам инфицируемой клетки (Рис. 2), содержащим на терминальных участках сиаловые кислоты. Специфичность НА к рецепторам, содержащим а-2,6- или а-2,3-сиаловые кислоты, определяет тропизм вируса к хозяину и путь распространения. Так, у человека основным является воздушно-капельный путь распространения вирусов гриппа, характеризующийся связыванием с а-2,6-сиаловыми кислотами клеточных рецепторов, распространенных на поверхности эпителиальных клеток респираторного тракта человека. Тогда как поражаемые птицы, включающие водоплавающих и домашних птиц, содержат рецепторы с а-2,3 сиаловыми кислотами, распространенными в желудочно-кишечном тракте, что подтверждает модель орально-фекального распространения штаммов вируса гриппа птиц (Medina and Garcia-Sastre, 2011). Таким образом, за связывание вируса с мембранными рецепторами отвечает молекула НА, состоящая из трех субъединиц.

После проникновения в клетку за счет рецептор-опосредованного эндоцитоза, вирусная частица оказывается включенной в состав эндосомы. Затем через ионные каналы, образованные М2 белком, внутрь вирусной частицы проникают протоны и понижается рН среды. Молекула НА изменяет свою конформацию, при этом становится

доступным пептид НА, ответственный за слияние вирусной оболочки и эндосомальной мембраны. Затем происходит «раздевание» вирусной частицы и высвобождение генетического материала в цитоплазму (Schroeder et al., 2005, Schnell and Chou, 2008).

Рецептор, содержащий

а-2,6- или а-2.3-сиаловыекислоты

IFN-mediated antiviral response

Post-iiaiwiational processing

Packaging

• Translation

Apoptosis

Fusion and uncoating

Рисунок 2. Цикл репликации вируса гриппа A (Medina and Garcia-Sastre, 2011).

Синтез вирусной РНК (vRNA) происходит в ядре, куда и должны попасть вирусные RNP комплексы. Этот процесс опосредован вирусным белком NP, который ассоциирован с вирусной РНК и содержит сигналы ядерной локализации NLS (nuclear localization signal) (Wang et al., 1997, Cros et al., 2005). В ядре РНК-зависимая РНК полимераза транскрибирует и реплицирует отрицательную вирусную РНК ((-)vRNA). При этом возникает три типа РНК молекул: комплиментарная положительная РНК ((+)cRNA), которая служит в качестве матрицы для увеличения количества вирусной РНК; отрицательная маленькая вирусная РНК (svRNA), которая, по-видимому, контролирует переключение транскрипция/репликация (Perez et al., 2010, Umbach et al., 2010) и матричные РНК (mRNA), которые транспортируются в цитоплазму для трансляции. Вирусные белки, необходимые для репликации и транскрипции, перемещаются обратно в ядро. На заключительном этапе РНК-продукты перемещаются в цитоплазму для сборки и упаковки новых вирусов, за что ответственны белки Ml и NEP. Вирусные НА, NA и М2 транспортируются через аппарат Гольджи, где происходят посттрансляционные модификации (Gallagher et al., 1992), и встраиваются в плазматическую мембрану на апикальной поверхности клеток, где происходит почкование и отделение дочерних

вирусов. Гликопротеин NA функционирует как сиалидаза и отщепляет сиаловые кислоты, входящие в состав клеточных рецепторов, тем самым предотвращая повторную сорбцию вирусных частиц, в противном случае они будут удерживаться на клеточной поверхности (Samji, 2009). Таким образом, требуется определенное соотношение НА и NA для оптимального связывания/отщепления рецептора (Schmitt and Lamb, 2005, Mitnaul et al., 2000). После формирования большей части вирусных частиц в клетке активируется процесс программируемой клеточной гибели - апоптоз.

1.4. Антигенная изменчивость вирусов гриппа, вызывающая сезонные эпидемии и пандемии

Среди трех типов вирусов гриппа вирусы гриппа А отличаются наибольшей генетической изменчивостью и способностью инфицировать многие виды млекопитающих и птиц, чем объясняется основная роль этих вирусов в сезонных вспышках и пандемиях гриппа. Антигенная изменчивость, позволяющая вирусу избежать иммунологических барьеров хозяина, затрагивает в основном субъединицы НА и NA; остальные белки вируса (нуклеопротеиновый антиген и матриксный или мембранный М-белок) в значительной степени консервативны.

У вирусов гриппа выделяют два пути возникновения антигенной изменчивости: антигенный дрейф (antigenic drift) и антигенный сдвиг (shift). Для антигенного дрейфа характерны относительно небольшие изменения, возникающие внутри семейства штаммов, каждый из которых слабо отличается от своего предшественника. Такие изменения характеризуются спонтанными точечными мутациями, обусловленными низкой точностью вирусной РНК полимеразы (Fitch et al., 1991), что является нормой для РНК вирусов. Отбор аминокислотных изменений происходит в пяти главных областях антигенной изменчивости НА, что обеспечивает «выживание» вирусного штамма (Plotkin and Dushoff, 2003). Антигенный дрейф является причиной сезонных эпидемий и свойствен вирусам гриппа не только А типа, но и В.

Второй вид антигенной изменчивости, который был описан только для вирусов гриппа А, включает более радикальные изменения, которые приводят к гораздо более тяжелым последствиям, вызывая глобальные пандемии с миллионами человеческих жертв. Антигенные сдвиги возникают с интервалом в 10 - 15 лет и характеризуются появлением антигенно «новых» вирусов, с которыми популяция еще не сталкивалась. Значительные антигенные изменения могут произойти в результате мутаций вирусов зоонозного гриппа, обеспечивающих их трансмиссию к человеку. Вероятно, такая мутация произошла при пандемии «испанского гриппа» 1918-го года, самого

опустошительного в истории. Данные Taubenberger J.K., 2006 предполагают, что вирус высоко патогенного птичьего гриппа H1N1 1918 приобрел мутации, которые обеспечили способность вируса инфицировать людей. Однако основной причиной антигенного сдвига считается пересортировка генов (реассортация), которая может происходить при инфицировании общего хозяина вирусами с различной видоспецифичностью, что приводит к появлению вируса гриппа с антигенными детерминантами одного вируса и тропизмом и патогенностью другого. Таким примером является «гонконгский грипп» 1968-го года, в котором вирус человеческого гриппа H3N2 появился после реассортации генных сегментов вируса гриппа человека H2N2 и вируса гриппа птиц H3N2, вероятно, в общем хозяине - свинье (Bean et al., 1992, Kawaoka et al., 1989).

Другим ярким примером реассортации вирусов гриппа является недавняя пандемия «свиного» гриппа H1N1 2009 года, генные сегменты которого представляют комбинацию сегментов вирусов гриппа человека, свиней и птиц (Рис. 3). Этот штамм, вероятно, произошел от вирусов H1N1 «испанского» гриппа 1918 года, которые приобрели способность инфицировать свиней и долгое время циркулировали в этой популяции. В 1979 году в Европе появился особый евроазиатский вирус гриппа свиней H1N1, схожий с вирусами гриппа птиц, который с этого момента стал совместно циркулировать с классическими свиными H1N1 вирусами. В 1990-е появились и стали доминирующими в популяции Северо-Американских свиней вирусы гриппа свиного происхождения разных штаммов и субтипов (H3N2 и HIN2), являющиеся тройными реассортантами. Все из этих вирусов обеспечили генетический пул для появления пандемичного вируса свиного происхождения в 2009 году, возможно, вследствие дополнительных случаев реассортации в свиньях. Таким образом, вирус H1N1, ставший причиной пандемии 2009 года, содержит РВ2 и РА сегменты от северо-американских вирусов птиц, РВ1 сегмент человеческих вирусов H3N2, гемагглютинин (HI субтипа), нуклеопротеин (NP) и NS сегменты от классических вирусов свиней H1N1, нейраминидазу (N1 субтипа) и М сегменты евразийских «подобных птичьим» вирусов свиней (Garten et al., 2009, Smith et al., 2009).

таврят

K.iisa

■кза

Классический свиной H1N1

Вирус Северо-Американских птиц

Человеческий H3N2

Вирус H1N2 Северо Американских свиней

Северо-Американский свиной вирус H3N2

2009 Н INI НА

Евроазиатский «подобный птичьему» вирус свиней MINI

Появившийся новый H1N1

Рисунок 3. Происхождение пандемичного «свиного» вируса гриппа H1N1 2009 (Medina and Garcia-Sastre, 2011).

1.5. Современные отечественные и зарубежные противогриппозные вакцины

Вакцинация является основным способом профилактики многих, угрожающих здоровью людей, инфекционных заболеваний, а также, в случае эффективной массовой вакцинации, обеспечивает популяционный иммунитет и предотвращает распространение вирусов. Вакцинация стимулирует адаптивный иммунный ответ путем образования плазматическими клетками антиген специфичных антител и формированием В-клеток памяти, обеспечивающих долговременную защиту. В качестве основных иммунологических антигенов при вакцинации используют живые ослабленные (аттенуированные) и инактивированные бактерии, вирусы, анатоксины, а также синтетические антигены и антигены, полученные с помощью генной инженерии.

Разработка противогриппозных вакцин началась в конце 1930-х годов, вскоре после выделения вируса гриппа. Иммунизация современными гриппозными вакцинами является единственным научно обоснованным и безопасным способом массовой профилактики гриппа. Установлено, что при своевременной вакцинации можно предотвратить заболевание гриппом у 80-90% детей и взрослых. При этом болезнь если и развивается, то протекает, как правило, легче и без каких-либо осложнений (Киселев и др., 2012).

В настоящее время применяется два вида противогриппозных вакцин - живые и инактивированные (см. обзор Киселев, 2010) (Рис. 4). Большая часть коммерческих вакцин используют вирусы, выращенные в аллантоисной жидкости 9-12 дневных куриных эмбрионов и лишь незначительная часть - на культуре тканей.

Живая гриппозная вакцина, впервые предложенная А.А. Смородинцевым в 1938 г., успешно применяется в России с 1954г. В США живая вакцина разрешена для использования лишь с 2003г. (Ве^Ье е1 а1., 2004; Яиёепко ег а1., 1996). Благодаря многократным пассажам на куриных эмбрионах в условиях пониженной температуры был отобран ослабленный вирус, который не реплицируется при температуре 37°С, характерной для легких человека, но способен вызывать локальную инфекцию в носоглотке при температуре 34°С, приводящую к выработке секреторного и генерализованного иммунного ответа (Гендон, 2001; Покровский и Киселев, 2005). Однако, помимо недостатков, присущих живым вакцинам, ее применение в эпидемический период может создать дополнительные возможности появления высокопатогенных штаммов путем реассортации инфицирующего и вакцинного штаммов в организме человека. Живые гриппозные вакцины применяют только интраназально.

Инактивированные гриппозные вакцины, впервые ставшие применяться в армии США, содержат вирус гриппа, предварительно подвергнутый ультрафиолетовой или химической инактивации и фрагментации с последующим выделением отдельных белковых компонентов. По технологии изготовления инактивированные вакцины принято делить на три группы: цельновирионные, расщепленные (сплит-) и субъединичные (Рис.

4).

Живая вирусная частица

Живая вакцина Инактивированная вакцина

Расщепленная (сплит! вакцина Субъединичная вакцина

Рисунок 4. Типы противогриппозных вакцин (Киселев и др., 2012).

Цельновирионные вакцины состоят из цельных полученных в куриных эмбрионах вирусов гриппа, инактивированных химически или с помощью ультрафиолета. Такие вакцины содержат поверхностные антигены, конформационно максимально приближенные к нативным, а так же балластные белки вирусного нуклеокапсида, что вызывает повышенную реактогенность и негативные побочные эффекты (А1-Маггои ег. а1., 1991). Расщепленные вакцины получают в результате обработки вирионов детергентами, что позволяет удалить компоненты нуклеопротеинового комплекса. Такие вакцины представляют собой очищенные мембраны вирионов и содержат в основном поверхностные белки вируса, но также и внутренние антигены, например белок М1. В некоторых расщепленных вакцинах антигены представлены в виде виросом (вирусных

частиц лишенных нуклеиновых кислот). Такие вакцины называют виросомальными. Субъединичные вакцины состоят только из поверхностных протективных антигенов -гемагглютинина и нейраминидазы, обладают наибольшей степенью очистки от вирусных компонентов и соответственно наименее реактогенны. Инактивированные сплит-, виросомальные и субъединичные вакцины вводят подкожно либо внутримышечно (Киселев и др., 2012).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Блохина, Елена Александровна, 2013 год

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гендон Ю.З. Живые холодоадаптированные реассортантные гриппозные вакцины // Вопр. вирусологии. 2001. Т.З. С. 5-12.

2. Грипп: эпидемиология, диагностика, лечение, профилактика // Под редакцией Киселева О.И., Цыбаловой Л.М., Покровского В.И. - М.: ООО «Издательство «Медицинское информационное агенство» 2012 - 496 с.

3. Карпенко Л.И., Иванисенко В.А., Пика И.А., Чикаев H.A., Ерошкин A.M., Меламед Н.В., Веремейко Т.А., Ильичев A.A. Анализ чужеродных эпитопов, встроенных в HBcAg. Возможные пути решения проблемы самоорганизации химерных коровых частиц // Молекулярная биология 2000. Т.34. №2. С.223-229.

4. Киселев О.И. Прогресс в создании пандемических противогриппозных вакцин и технологии их производства // Биотехнология. 2010. №2. С.8-24.

5. Котляров Р. Ю., Куприянов В. В., Мигунов А. И., Степанова Л. А., Цыбалова Л. М., Киселев О. И., Равин Н. В., Скрябин К. Г. Разработка рекомбинантной вакцины против гриппа A(H1N1) 2009 на основе вирусоподобных наночастиц - носителей внеклеточного домена М2 белка // Acta naturae. 2010. Т.2(5). С. 75-80.

6. Макеева И.В., Калинина Т.И., Худяков Ю.Е., Самошин В.В., Смирнова Е.А., Семилетов Ю.А., Павлюченкова Р.П., Кадошников Ю.П., Смирнов В.Д. Гетерологичные эпитопы в центральной части соге-белка вируса гепатита В // Мол. биология. 1995. Т.29. С.211-224.

7. Некрасова О.В., Бойченко В.Е., Болдырева Е.Ф., Борисова Г.П., Пумпен П., Перевозчикова H.A., Коробко В.Г. Бактериальный синтез иммуногенных эпитопов вируса ящура в составе гибридов с фактором некроза опухолей и кор-антигеном вируса гепатита В // Биоорг. химия. 1997. Т.23 (2). С. 118-126.

8. Покровский В.И., Киселев О.И. Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф // СПб., Изд-во «Росток». 2005. с. 376.

9. Равин Н.В., Котляров Р.Ю., Марданова Е.С., Куприянов В.В., Мигунов А.И., Степанова Л.А., Цыбалова Л.М., Киселев О.И., Скрябин К.Г. Продукция в растениях рекомбинантной противогриппозной вакцины на основе вирусоподобных НВс-частиц, несущих внеклеточный домен М2-белка // Биохимия. 2012. Т.77(1). С. 43-52.

10. Al-Mazrou A., Scheifele D.W., Soong T., Bjornson G. Comparison of adverse reactions to whole-virion and split-virion influenza vaccines in hospital personnel // CMAJ. 1991. V.145(3). P.213—218.

11. Bean W.J., Schell M., Katz J., Kawaoka Y., Naeve C., Gorman O., Webster R.G. Evolution of the H3 influenza virus hemagglutinin from human and nonhuman hosts // J Virol. 1992. V.66(2). P. 1129-1138.

12. Beesley K.M., Francis M.J., Clarke B.E., Beesley J.E., Dopping-Hepenstal P.J., Clare J.J., Brown F., Romanos M.A. Expression in yeast of amino-terminal peptide fusions to hepatitis B core antigen and their immunological properties // Biotechnology (NY). 1990. V.8(7). P. 644—649.

13. Belshe R., Lee M.S., Walker R.E., Stoddard J., Mendelman P.M. Safety, immunogenicity and efficacy of intranasal, live attenuated influenza vaccine // Expert Rev. Vaccines. 2004. V.3(6). P. 643-654.

14. Bertoletti A., Chisari F.V., Penna A., Guilhot S„ Galati L., Missale G., Fowler P., Schlicht HJ., Vitiello A., Chesnut R.C., Fiaccadori F., Ferrari C. Definition of a minimal optimal cytotoxic T-cell epitope within the hepatitis B virus nucleocapsid protein // J Virol. 1993. V.67(4). P. 2376-2380.

15. Beterams G., Böttcher B., Nassal M. Packaging of up to 240 subunits of a 17kDa nuclease into the interior of recombinant hepatitis B virus capsids // FEBS Lett. 2000. V.481(2). P. 169-176.

16. Blond-Elguindi S., Cwirla S.E., Dower W.J., Lipshutz R.J., Sprang S.R., Sambrook J.F., Gething M.J. Affinity panning of a library of peptides displayed on bacteriophages reveals the binding specificity of BiP // Cell. 1993. V.75(4). P. 717-728.

17. Borisova G., Arya B., Dislers A., Borschukova O., Tsibinogin V., Skrastina D., Eldarov M.A., Pumpens P., Skryabin K.G., Grens E. Hybrid hepatitis B virus nucleocapsid bearing an immunodominant region from hepatitis B virus surface antigen // J Virol. 1993. V.67(6). P. 3696-3701.

18. Borisova G., Borschukova O., Skrastina D., Dislers A., Ose V., Pumpens P., Grens E. Behavior of a short preSl epitope on the surface of hepatitis B core particles // Biol Chem. 1999. V.380(3). P. 315-324.

19. Borisova G., Borschukova Wanst O., Mezule G., Skrastina D., Petrovskis I., Dislers A., Pumpens P., Grens E. Spatial structure and insertion capacity of immunodominant region of hepatitis B core antigen // Intervirology. 1996. V.39(l-2). P. 16-22.

20. Borisova G., Bundule M., Grinstein E., Dreilina D., Dreimane A., Kalis J., Kozlovskaya T., Loseva V., Ose V., Pumpen P., Pushko P., Snikere D., Stankevica E., Tsibinogin V., Gren E.J. Recombinant capsid structures for exposure of protein antigenic epitopes // Mol Gen (Life Sei Adv) 1987. V.6. P. 169-174.

21. Borisova G.P., Berzins I., Pushko P.M., Pumpen P., Gren E.J., Tsibinogin V.V., Loseva V., Ose V., Ulrich R., Siakkou H., Rosenthal H.A. Recombinant core particles of hepatitis B virus exposing foreign antigenic determinants on their surface // FEBS Lett. 1989. V.259(l). P. 121-124.

22. Böttcher B., Tsuji N., Takahashi H., Dyson M.R., Zhao S., Crowther R.A., Murray K. Peptides that block hepatitis B virus assembly: Analysis by cryomicroscopy, mutagenesis and transfection // EMBO J. 1998. V. 17(23). P. 6839-6845.

23. Boulter N.R., Glass E.J., Knight P.A., Bell-Sakyi L., Brown C.G., Hall R. Theileria annulata sporozoite antigen fused to hepatitis B core antigen used in a vaccination trial // Vaccine. 1995. V.13(13). P. 1152-1160.

24. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding //Anal Biochem. 1976. V.72. P. 248254.

25. Brown A.L., Francis M.J., Hastings G.Z., Parry N.R., Barnett P.V., Rowlands D.J., Clarke B.E. Foreign epitopes in immunodominant regions of hepatitis B core particles are highly immunogenic and conformationally restricted // Vaccine. 1991. V.9(8). P. 595-601.

26. Brass V., Ganem D. The role of envelope proteins in hepatitis B virus assembly // Proc Natl Acad Sei USA. 1991. V.88(3). P. 1059-1063.

27. Burrell C.J., Mackay P., Greenaway P.J., Hofschneider P.H., Murray K. Expression in Escherichia coli of hepatitis B virus DNA sequences cloned in plasmid pBR322 // Nature. 1979. V.279(5708). P. 43-47.

28. Cattaneo A., Biocca S. The selection of intracellular antibodies // Trends Biotechnol. 1991. V. 17(3). P. 115-121.

29. Chambers M.A., Dougan G., Newman J., Brown F., Crowther J., Mould A.P., Humphries M.J., Francis M.J., Clarke B., Brown A.L., Rowlands D. Chimeric hepatitis B virus core particles as probes for studying peptide-integrin interactions // J Virol. 1996. V.70(8). P. 4045—4052.

30. Charles I.G., Li J.L., Roberts M., Beesley K., Romanos M., Pickard D.J., Francis M., Campbell D., Dougan G., Brennan M.J., Manclark C.R., Jensen M.A., Heron I., Chubb A., Novotny P., Fairweather N.F. Identification and characterization of a protective immunodominant B cell epitope of pertactin (P.69) from Bordetella pertussis // Eur J Immunol. 1991. V.21(5). P. 1147-1153.

31. Chen J.M., Guo Y.J., Wu K.Y., Guo J.F., Wang M., Dong J., Zhang Y., Li Z., Shu Y.L. Exploration of the emergence of the Victoria lineage of influenza B virus // Arch Virol. 2007. V. 152(2). P. 415-422.

32. Chisari F.V., Ferrari C. Hepatitis B virus immunopathogenesis // Annu Rev Immunol. 1995. V.13. P. 29-60.

33. Claeys H., Volckaerts A., De Beenhouwer H., Vermylen C. Association of hepatitis C virus carrier state with the occurrence of hepatitis C virus core antibodies // J Med Virol. 1992. V.36(4). P. 259-264.

34. Claeys H., Volckaerts A., Mertens W., Liang Z., Fiten P., Opdenakker G. Localization and reactivity of an immunodominant domain in the NS3 region of hepatitis C virus // J Med Virol. 1995. V.45(3). P. 273-281.

35. Clarke B.E., Brown A.L., Grace K.G., Hastings G.Z., Brown F., Rowlands D.J., Francis M.J. Presentation and immunogenicity of viral epitopes on the surface of hybrid hepatitis Bvirus core particles produced in bacteria // J Gen Virol. 1990. V.71(Pt 5). P. 1109-1117.

36. Clarke B.E., Newton S.E., Carroll A.R., Francis M.J., Appleyard G., Syred A.D., Highfield P.E., Rowlands D.J., Brown F. Improved immunogenicity of a peptide epitope after fusion to hepatitis B core protein //Nature. 1987. V.330(6146). P. 381-384.

37. Cohen B.J., Richmond J.E. Electron microscopy of hepatitis B core antigen synthesized in E.coli //Nature. 1982. V.296(5858). P. 677-679.

38. Conway J.F., Cheng N., Zlotnick A., Wingfield P.T., Stahl S.J., Steven A.C. Visualization of a 4-helix bundle in the hepatitis B virus capsid by cryo-electron microscopy // Nature. 1997. V.386(6620). P. 91-94.

39. Cox N.J., Brammer T.L., Regnery H.L. Influenza: global surveillance for epidemic and pandemic variants // Eur J Epidemiol. 1994. V.10(4). P. 467-^70.

40. Cros J.F., Garcia-Sastre A., Palese P. An unconventional NLS is critical for the nuclear import of the influenza A virus nucleoprotein and ribonucleoprotein // Traffic. 2005. V.6(3). P. 205-213.

41. Cwirla S.E., Peters E.A., Barrett R.W., Dower W.J. Peptides on phage: a vast library of peptides for identifying ligands // Proc Natl Acad Sci USA. 1990. V.87(16). P. 6378-6382.

42. De Filette M., Fiers W., Martens W., Birkett A., Ramne A., Lowenadler B., Lycke N., Jou W.M., Saelens X. Improved design and intranasal delivery of an M2e-based human influenza A vaccine // Vaccine. 2006. V.24(44-46). P. 6597-6601.

43. De Filette M., Min Jou W., Birkett A., Lyons K., Schultz B., Tonkyro A., Resch S., Fiers W. Universal influenza A vaccine: optimization of M2-based constructs // Virology. 2005. V.337(l). P. 149-161.

44. Del Val M., Schlicht H.J., Volkmer H., Messerle M., Reddehase M.J., Koszinowski U.H. Protection against lethal cytomegalovirus infection by a recombinant vaccine containing a single nonameric T-cell epitope // J Virol. 1991. V.65(7). P. 3641-3646.

45. Delchambre M., Gheysen D., Thines D., Thiriart C., Jacobs E., Verdin E., Horth M., Burny A., Bex F. The GAG precursor of simian immunodeficiency virus assembles into virus-like particles // EMBO J. 1989. V.8(9). P. 2653-2660.

46. Delius H., GoughN.M., Cameron C.H., Murray K. Structure of the hepatitis B virus genome //J Virol. 1983. V.47(2). P. 337-343.

47. Dyson M.R., Murray K. Selection of peptide inhibitors of interactions involved in complex protein assemblies: Association of the core and surface antigens of hepatitis B virus // Proc Natl Acad Sci USA. 1995. V.92(6). P. 2194-2198.

48. Edman J.C., Hallewell R.A., Valenzuela P., Goodman H.M., Rutter W.J. Synthesis of hepatitis B surface and core antigens in E. coli // Nature. 1981. V.291(5815). P. 503-506.

49. Ernst W.A., Kim H.J., Tumpey T.M., Jansen A.D., Tai W., Cramer D.V., Adler-Moore J.P., Fujii G. Protection against HI, H5, H6 and H9 influenza A infection with liposomal matrix 2 epitope vaccines // Vaccine. 2006. V.24(24). P. 5158-5168.

50. Eustance R.J., Schleif R.F. The linker region of AraC protein //J Bacteriol. 1996. V. 178(24). P. 7025-7030.

51. Fan J., Liang X., Horton M.S., Perry H.C., Citron M.P., Heidecker G.J., Fu T.M., Joyce J., Przysiecki C.T., Keller P.M., Garsky V.M., Ionescu R., Rippeon Y., Shi L., Chastain M.A., Condra J.H., Davies M.E., Liao J., Emini E.A., Shiver J.W. Preclinical study of influenza virus A M2 peptide conjugate vaccines in mice, ferrets, and rhesus monkeys // Vaccine. 2004. V.22(23-24). P. 2993-3003.

52. Fehr T., Skrastina D., Pumpens P., Zinkernagel R.M. T cell-independent type I antibody response against B cell epitopes expressed repetitively on recombinant virus particles // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. V.95(16). P. 9477-9481.

53. Feng J., Zhang M., Mozdzanowska K., Zharikova D., Hoff H., Wunner W., Couch R.B., Gerhard W. Influenza A virus infection engenders a poor antibody response against the ectodomain of matrix protein 2 // Virol J. 2006. V.3. P. 102.

54. Ferrari C., Bertoletti A., Penna A., Cavalli A., Valli A., Missale G., Pilli M., Fowler P., Giuberti T., Chisari F. V., Fiaccadori F. Identification of immunodominant T cell epitopes of the hepatitis B virus nucleocapsid antigen // J Clin Invest. 1991. V.88(l). P. 214-222.

55. Fields S., Sternglanz R. The two-hybrid system: an assay for protein-protein interactions // Trends Genet. 1994. V.10(8). P. 286-292.

56. Fiers W., De Filette M., Birkett A., Neirynck S., Min Jou W. A "universal" human influenza A vaccine // Virus Res. 2004. V.103(l-2). P. 173-176.

57. Fitch W.M., Leiter J.M., Li X.Q., Palese P. Positive Darwinian evolution in human influenza A viruses // Proc Natl Acad Sci USA. 1991. V.88(10). P. 4270-1274.

58. French T.J., Marshall J.J., Roy P. Assembly of double-shelled, virus-like particles of blue-tongue virus by the simultaneous expression of four structural proteins // J. Virol. 1990. V.64(12). P. 5695-5700.

59. Gallagher P.J., Henneberry J.M., Sambrook J. F., Gething M.J. Glycosylation requirements for intracellular transport and function of the hemagglutinin of influenza virus // J. Virol. 1992. V.66(12). P. 7136-7145.

60. Gallina A., Bonelli F., Zentilin L., Rindi G., Muttini M., Milanesi G. A recombinant hepatitis B core antigen polypeptide with the protaminelike domain deleted self-assembles into capsid particles but fails to bind nucleic acids // J Virol. 1989. V.63(l 1). P. 4645^1652.

61. Garten R.J., Davis C.T., Russell C.A., Shu B., Lindstrom S., Balish A., Sessions W.M., Xu X., Skepner E., Deyde V., Okomo-Adhiambo M., Gubareva L., Barnes J., Smith C.B., Emery S.L., Hillman M.J., Rivailler P., Smagala J., de Graaf M., Burke D.F., Fouchier R.A., Pappas C., Alpuche-Aranda C.M., Lopez-Gatell H., Olivera H., Lopez I., Myers C.A., Faix D., Blair P.J., Yu C., Keene K.M., Dotson P.D. Jr, Boxrud D., Sambol A.R., Abid S.H., St George K., Bannerman T., Moore A.L., Stringer D.J., Blevins P., Demmler-Harrison G.J., Ginsberg M., Kriner P., Waterman S., Smole S., Guevara H.F., Belongia E.A., Clark P.A., Beatrice S.T., Donis R., Katz J., Finelli L., Bridges C.B., Shaw M., Jernigan D.B., Uyeki T.M., Smith D.J., Klimov A.I., Cox N.J. Antigenic and genetic characteristics of swine-origin 2009 A(H1N1) influenza viruses circulating in humans // Science. 2009. V.325(5937). P. 197-201.

62. Gerhard W., Mozdzanowska K., Zharikova D. Prospects for universal influenza virus vaccine // Emerg Infect Dis. 2006. V.12(4). P. 569-574.

63. Gheysen D., Jacobs E., de Foresta F., Thiriart C., Francotte M., Thines D., De Wilde M. Assembly and release of HIV-1 precursor Pr55gag virus-like particles from recombinant baculovirus-infected insect cells // Cell. 1989. V.59(l). P. 103-112.

64. Grant S.G., Jessee J., Bloom F.R., Hanahan D. Differential plasmid rescue from transgenic mouse DNAs into Escherichia coli methylation-restriction mutants // Proc Natl Acad Sci U S A. 1990. V.87(12). P. 4645^1649.

65. Grene E., Mezule G., Borisova G., Pumpens P., Bentwich Z., Arnon R. Relationship between antigenicity and immunogenicity of chimeric hepatitis B virus core particles carrying HIV type 1 epitopes // AIDS Res Hum Retroviruses. 1997. V.13(l). P. 41-51.

66. Hardy K., Stahl S., Kupper H. Production in B. subtilis of hepatitis B core antigen and of major antigen of foot and mouth disease virus // Nature. 1981, V.293(5832). P. 481-483.

67. Harris A., Cardone G., Winkler D.C., Heymann J.B., Brecher M., White J.M., Steven A.C. Influenza virus pleiomorphy characterized by cryoelectron tomography // Proc Natl Acad Sei USA. 2006. V.103(50). P. 19123-19127.

68. Heermann K.H., Goldmann U., Schwartz W., Seyffarth T., Baumgarten H., Gerlich W.H. Large surface proteins of hepatitis B virus containing the Pre-S sequence // J. Virol. 1984. V.52(2). P. 396-402.

69. Hite L.K., Glezen W.P., Demmler G.J., Munoz F.M. Medically attended pediatric influenza during the resurgence of the Victoria lineage of influenza B virus. // Int J Infect Dis. 2007. V.ll(l). P. 40^17.

70. Holsinger L.J., Lamb R.A. Influenza virus M2 integral membrane protein is a homotetramer stabilized by formation of disulfide bonds // Virology. 1991. V.183(l). P. 32^13.

71. Hoppe-Seyler F., Butz K. Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine // J Mol Med. 2000. V.78. P. 426-130.

72. Huleatt J.W., Nakaar V., Desai P., Huang Y., Hewitt D., Jacobs A., Tang J., McDonald W., Song L., Evans R.K., Umlauf S., Tussey L., Powell T.J. Potent immunogenicity and efficacy of a universal influenza vaccine candidate comprising a recombinant fusion protein linking influenza M2e to the TLR5 ligand flagellin // Vaccine. 2008. V.26(2). P. 201-214.

73. Isaguliants M.G., Nordlund S., Sallberg M., Smirnov V.D., Rüden U., Wahren B. HIV-1 epitopes exposed by hybrid hepatitis B core particles affect proliferation of peripheral blood mononuclear cells from HIV-1 positive donors // Immunol Lett. 1996. V.52(l). P. 37-44.

74. Jean-Jean O., Levrero M., Will H., Perricaudet M., Rossignol J.M. Expression mechanism of the hepatitis B virus (HBV) C gene and biosynthesis of HBe antigen // Virology. 1989. V.170(l). P. 99-106.

75. Jegerlehner A., Tissot A., Lechner F., Sebbel P., Erdmann I., Kündig T., Bächi T., Storni T., Jennings G., Pumpens P., Renner W.A., Bachmann M.F. A molecular assembly system that renders antigens of choice highly repetitive for induction of protective B cell responses // Vaccine. 2002. V.20(25-26). P. 3104-3112.

76. Johnson N. P., Mueller J. Updating the accounts: global mortality of the 1918-1920 "Spanish" influenza pandemic // Bull. Hist. Med. 2002. V. 76(1). P. 105-115.

77. Kann M., Sodeik B., Vlachou A., Gerlich W.H., Helenius A. Phosphorylation-dependent binding of hepatitis B virus core particles to the nuclear pore complex // J Cell Biol. 1999. V.145(l). P. 45-55.

78. Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. Avian-to-human transmission of the PB1 gene of influenza A viruses in the 1957 and 1968 pandemics // J Virol. 1989. V.63(ll). P. 46034608.

79. Kidd-Ljunggren K., Miyakawa Y., Kidd A.H. Genetic variability in hepatitis B viruses // J Gen Virol., V.83(Pt 6). P. 1267-1280.

80. Koletzki D., Biel S.S., Meisel H., Nugel E., Gelderblom H.R., Kruger D.H., Ulrich R. (1999) HBV core particles allow the insertion and surface exposure of the entire potentially protective region of Puumala hantavirus nucleocapsid protein // Biol Chem. 2002. V.380(3). P. 325-333.

81. Koletzki D., Zankl A., Gelderblom H.R., Meisel H., Dislers A., Borisova G., Pumpens P., Kruger D.H., Ulrich R. Mosaic hepatitis B virus core particles allow insertion of extended foreign protein segments // J Gen Virol. 1997. V.78(Pt 8). P. 2049-2053.

82. Kortt A.A., Lah M„ Oddie G.W., Gruen C.L., Burns J.E., Pearce L.A., Atwell J.L., McCoy A.J., Howlett G.J., Metzger D.W., Webster R.G., Hudson P.J. Single-chain Fv fragments of anti-neuraminidase antibody NC10 containing five- and ten-residue linkers form dimers and with zero-residue linker a trimer // Protein Eng. 1997. V.10(4). P. 423-33.

83. Kratz P.A., Bottcher B., Nassal M. Native display of complete foreign protein domains on the surface of hepatitis B virus capsids // Proc Natl Acad Sci USA. 1999. V.96(5). P. 19151920.

84. Kuhober A., Wild J., Pudollek H.P., Chisari F.V., Reimann J. DNA vaccination with plasmids encoding the intracellular (HBcAg) or secreted (HBeAg) form of the core protein of hepatitis B virus primes T cell responses to two overlapping Kb- and Kd-restricted epitopes // Int Immunol. 1997. V.9(8). P. 1203-1212.

85. Kunke D., Broucek J., Kutinova L., Nemeckova S., Ludvikova V., Strnad I., Kramosil J., Nemcova J., Schramlova J., Simonova V. Vaccinia virus recombinants co-expressing hepatitis B virus surface and core antigens. Virology. 1993. V.195(1). P. 132-139.

86. Lachmann S., Meisel H., Muselmann C., Koletzki D., Gelderblom H.R., Borisova G., Kruger D.H., Pumpens P., Ulrich R. Characterization of potential insertion sites in the core antigen of hepatitis B virus by the use of a short-sized model epitope // Intervirology. 1999. V.42(l). P. 51-56.

87. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. V.227(5259). P. 680-685.

88. Lamb R.A., Choppin P.W. Identification of a second protein (M2) encoded by RNA segment 7 of influenza virus // Virology. 1981. V.l 12(2). P. 729-737.

89. Lane L.C. A simple method for stabilizing protein-sulfhydryl groups during SDS-gel electrophoresis //Anal. Biochem. 1978. V.86(2). P. 655-664.

90. Lanford R.E., Notvall L. Expression of hepatitis B virus core and precore antigens in insect cells and characterization of a core-associated kinase activity // Virology. 1990. V.176(1). P. 222-233.

91.Lieschke G.J., Rao P.K., Gately M.K., Mulligan R.C. Bioactive murine and human interleukin-12 fusion proteins which retain antitumor activity in vivo // Nat Biotechnol. 1997. V.15(l). P. 35-40.

92. Liu W., Peng Z., Liu Z., Lu Y., Ding J., Chen Y.H. High epitope density in a single recombinant protein molecule of the extracellular domain of influenza A virus M2 protein significantly enhances protective immunity // Vaccine. 2004. V.23(3), 366-371.

93. Loktev V.B., Ilyichev A.A., Eroshkin A.M., Karpenko L.I., Pokrovsky A.G., Pereboev A.V., Svyatchenko V.A., Ignat'ev G.M., Smolina M.I., Melamed N.V., Lebedeva C.D., Sandakhchiev L.S. Design of immunogens as components of a new generation of molecular vaccines // J Biotechnol. 1996. V.44(l-3). P. 129-137.

94. Maassen A., Rehfeldt A., Kiessig S., Ladhoff A., Hohne W.E., Meisel H. Comparison of three different recombinant hepatitis B virus core particles expressed in Escherichia coli // Arch Virol. 1994. V.135(l-2). P. 131-142.

95. Mallender W.D., Voss E.W. Jr. Construction, expression, and activity of a bivalent bispecific single-chain antibody // J Biol Chem. 1994. V.269(l). P. 199-206.

96. Matsuzaki Y., Abiko C., Mizuta K., Sugawara K., Takashita E., Muraki Y., Suzuki H., Mikawa M., Shimada S., Sato K., Kuzuya M., Takao S., Wakatsuki K., Itagaki T., Hongo S., Nishimura H. A nationwide epidemic of influenza C virus infection in Japan in 2004 // J Clin Microbiol. 2007. V.45(3). P. 783-788.

97. McLachlan A., Milich D.R., Raney A.K., Riggs M.G., Hughes J.L., Sorge J., Chisari F.V. Expression of hepatitis B virus surface and core antigens: Influences of pre-S and precore sequences // J Virol. 1987. V.61(3). P. 683-692.

98. Medina R.A., Garcia-Sastre A. Influenza A viruses: new research developments // Nat Rev Microbiol. 2011. V.9(8). P. 590-603.

99. Milich D.R., McLachlan A. The nucleocapsid of hepatitis B virus is both a T-cell-independent and aT-cell-dependent antigen// Science. 1986. V.234(4782). P. 1398-1401.

100. Milich D.R., McLachlan A., Thornton G.B., Hughes J.L. Antibody production to the nucleocapsid and envelope of the hepatitis B virus primed by a single synthetic T cell site // Nature. 1987. V.329(6139). P. 547-549.

101. Milich D.R., Peterson D.L., Zheng J., Hughes J.L.,Wirtz R., Schodel F. The hepatitis nucleocapsid as a vaccine carrier moiety // Ann NY Acad Sci. 1995. V.754. P. 187-201.

102. Mitnaul L.J., Matrosovich M.N., Castrucci M.R., Tuzikov A.B., Bovin N.V., Kobasa D., Kawaoka Y. Balanced hemagglutinin and neuraminidase activities are critical for efficient replication of influenza A virus // J Virol. 2000. V.74(13). P. 6015-6020.

103. MIV Study Group. The macro-epidemiology of influenza vaccination in 56 countries, 1997-2003 // Vaccine. 2005. V.23(44). P. 5133-5143.

104. Miyanohara A., Imamura T., Araki M., Sugawara K., Ohtomo N., Matsubara K. Expression of hepatitis B virus core antigen gene in Saccharomyces cerevisiae: Synthesis of two polypeptides translated from different initiation codons // J Virol. 1986. V.59(l). P. 176-180.

105. Molinari N.A., Ortega-Sanchez I.R., Messonnier M.L., Thompson W.W., Wortley P.M., Weintraub E., Bridges C.B. The annual impact of seasonal influenza in the US: measuring disease burden and costs // Vaccine. 2007. V.25(27). P. 5086-5096.

106. Mondelli M., Vergani G.M., Alberti A., Vergani D., Portmann B., Eddleston A.L., Williams R. Specificity of T lymphocyte cytotoxicity to autologous hepatocytes in chronic hepatitis B virus infection: Evidence that T cells are directed against HBV core antigen expressed on hepatocytes // J Immunol. 1982. V. 129(6). P. 2773-2778.

107. Murray K., Shiau A.L. The core antigen of hepatitis B virus as a carrier for immunogenic peptides // Biol Chem. 1999. V.380(3). P. 277-283.

108. Neirynck S., Deroo T., Saelens X., Vanlandschoot P., Jou W.M., Fiers W. A universal influenza A vaccine based on the extracellular domain of the M2 protein // Nat Med. 1999. V.5(10). P. 1157-1163.

109. Ostapchuk P., Hearing P., Ganem D. A dramatic shift in the transmembrane topology of a viral envelope glycoprotein accompanies hepatitis B viral morphogenesis // EMBO J. 1994, V.13(5). P. 1048-1057.

110. Osterhaus A.D., Rimmelzwaan G.F., Martina B.E., Bestebroer T.M., Fouchier R.A. Influenza B virus in seals // Science. 2000. V.288(5468). P. 1051-1053.

111. Palese P., García-Sastre A. Influenza vaccines: present and future // J Clin Invest. 2002. V.110(l). P. 9-13.

112. Perez J.T., Varble A., Sachidanandam R., Zlatev I., Manoharan M., Garcia-Sastre A., tenOever B.R. Influenza A virus-generated small RNAs regulate the switch from transcription to replication // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2010. V. 107(25). P. 11525-11530.

113. Phizicky E.M., Fields S. Protein-protein interactions: methods for detection and analysis // Microbiol Rev. 1995. V.59(l). P. 94-123

114. Plotkin J.B., Dushoff J. Codon bias and frequency-dependent selection on the hemagglutinin epitopes of influenza A virus // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2003. V. 100(12). P.7152-7157.

115. Poisson F., Severac A., Hourioux C., Goudeau A., Roingeard P. Both pre-Sl and S domains of hepatitis B virus envelope proteins interact with the core particle // Virology. 1997. V.228(l). P. 115-120.

116. Preikschat P., Borisova G., Borschukova O., Dislers A., Mezule G., Grens E., Kruger D.H., Pumpens P., Meisel H. Expression, assembly competence and antigenic properties of hepatitis B virus core gene deletion variants from infected liver cells // J Gen Virol. 1999. V.80(Rt 7). P. 1777-1788.

117. Pumpens P., Grens E. HBV Core Particles as a Carrier for B Cell/T Cell Epitopes // Intervirology. 2001. V.44(2-3). P. 98-114.

118. Robinson C.R., Sauer R.T. Optimizing the stability of single-chain proteins by linker length and composition mutagenesis // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. V.95(l 1). P. 592934.

119. Roossinck M.J., Jameel S., Loukin S.H., Siddiqui A. Expression of hepatitis B viral core region in mammalian cells // Mol Cell Biol. 1986. V.6(5). P. 1393-1400.

120. Rudenko L.G., Lonskaya N.I, Klimov A.I., Vasilieva R.I., Ramirez A. Clinical and epidemiological evaluation of a live, cold-adapted influenza vaccine for 3-14-year-olds // Bull. WHO. 1996. V.74(l). P. 77-74.

121. Rumbley C.A., Denzin L.K., Yantz L., Tetin S.Y., Voss E.W. Jr. Construction, characterization, and selected site-specific mutagenesis of an anti-single-stranded DNA single-chain autoantibody // J Biol Chem. 1993. V.268(18). P. 13667-13674.

122. Salfeld J., Pfaff E., Noah M., Schaller H. Antigenic determinants and functional domains in core antigen and e antigen from hepatitis B virus // J Virol. 1989. V.63(2). P. 798-808.

123. Sallberg M., Pushko P., Berzinsh I., Bichko V., Sillekens P., Noah M., Pumpens P., Grens E., Wahren B., Magnius L.O. Immunochemical structure of the carboxy-terminal part of hepatitis B e antigen: Identification of internal and surface-exposed sequences // J Gen Virol. 1993. V.74(Pt 7). P. 1335-1340.

124. Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Second edition // Cold Spring Harbor Laboratory Press New York USA. 1989.

125. Samji T. Influenza A: Understanding the Viral Life Cycle // Yale J Biol Med. 2009. V.82(4). P. 153-159.

126. Scaglioni P.P., Melegari M., Wands J.R. Posttranscriptional regulation of hepatitis B virus replication by the precore protein // J Virol. 1997. V.71(l). P. 345-353.

127. Schmitt A.P., Lamb R.A. Influenza virus assembly and budding at the viral budozone // Adv Virus Res. 2005. V.64. P. 383-416.

128. Schnell J.R., Chou J.J. Structure and mechanism of the M2 proton channel of influenza A virus //Nature. 2008. V.451(7178). P. 591-595.

129. Schodel F., Kelly S., Tinge S., Hopkins S., Peterson D., Milich D., Curtiss R. 3rd Hybrid hepatitis B virus core antigen as a vaccine carrier moiety. II. Expression in avirulent Salmonella spp. for mucosal immunization// Adv Exp Med Biol. 1996. V.397. P. 15-21.

130. Schodel F., Milich D.R., Will H. Hepatitis B virus nucleocapsid/pre-S2 fusion proteins expressed in attenuated Salmonella for oral vaccination // J Immunol. 1990. V.145(12). P. 4317—4321.

131. Schodel F., Moriarty A.M., Peterson D.L., Zheng J.A., Hughes J.L., Will H., Leturcq D.J., McGee J.S., Milich D.R. The position of heterologous epitopes inserted in hepatitis B virus core particles determines their immunogenicity // J Virol. 1992. V.66(l). P. 106-114.

132. Schodel F., Wirtz R., Peterson D., Hughes J., Warren R., Sadoff J., Milich D. Immunity to malaria elicited by hybrid hepatitis B virus core particles carrying circumsporozoite protein epitopes // J Exp Med. 1994. V.80(3). P. 1037-1046.

133. Schroder R., Maassen A., Lippoldt A., Borner T., von Baehr R., Dobrowolski P. Expression of the core antigen gene of hepatitis B virus (HBV) in Acetobacter methanolicus using broad hostrange vectors // Appl Microbiol Biotechnol. 1991. V.35(5). P. 631-637.

134. Schroeder C., Heider H., Moncke-Buchner E., Lin T.I. The influenza virus ion channel and maturation cofactor M2 is a cholesterol-binding protein // Eur Biophys J. 2005. V.34(l). P. 52-66.

135. Scott J.K., Smith G.P. Searching for peptide ligands with an epitope library // Science. 1990. V.249(4967). P. 386-390.

136. Seifer M., Standring D.N. Assembly and antigenicity of hepatitis B virus core particles // Intervirology. 1995. V.38(l-2). P. 47-62.

137. Sion M.L., Hatzitolios A.I. Toulis E.N., Mikoudi K.D. Ziakas G.N. Toxic shock syndrome complicating influenza A infection: a two case of bacteremia and endocarditis // Intensive Care Med. 2001. V.27(2). P. 443.

138. Skowronski D.M., Masaro C., Kwindt T.L., Mak A., Petric M., Li Y., Sebastian R., Chong M., Tam T., De Serres G. Estimating vaccine effectiveness against laboratoryconfirmed influenza using a sentinel physician network: results from the 20052006 season of dual A and B vaccine mismatch in Canada // Vaccine. 2007. V.25(15). P. 2842-2851.

139. Smith G.J., Vijaykrishna D., Bahl J., Lycett S.J., Worobey M., Pybus O.G., Ma S.K., Cheung C.L., Raghwani J., Bhatt S., Peiris J.S., Guan Y., Rambaut A. Origins and evolutionary genomics of the 2009 swine-origin H1N1 influenza A epidemic // Nature. 2009. V.459(7250). P. 1122-1125.

140. Stahl S.J., Murray K. Immunogenicity of peptide fusions to hepatitis B virus core antigen // Proc Natl Acad Sci USA. 1989. V.86(16). P. 6283-6287.

141. Standring D.N., Ou J.H., Masiarz F.R., Rutter W.J. A signal peptide encoded within the precore region of hepatitis B virus directs the secretion of a heterogeneous population of e antigens in Xenopus oocytes // Proc Natl Acad Sci USA. 1988. V.85(22). P. 8405-8409.

142. Street M., Herd K., Londono P., Doan T., Dougan G., Kast W.M., Tindle R.W. Differences in the effectiveness of delivery of B- and CTLepitopes incorporated into the hepatitis B core antigen (HBcAg) c/el-region // Arch Virol. 1999. V.144(7). P. 1323-1343.

143. Studahl M. Influenza virus and CNS manifestations.// J Clin Virol. 2003. V.28(23). P. 225-32.

144. Sugrue R.J., Hay A.J. Structural characteristics of the M2 protein of influenza A viruses: evidence that it forms a tetrameric channel // Virology. 1991. V. 180(2). P. 617-24.

145. Tan W.S. Inhibition of hepatitis B virus assembly with synthetic peptides derived from the viral surface and core antigens // J Gen Appl Microbiol. 2002. V.48(2). P. 103-107.

146. Tang Y., Jiang N., Parakh C., Hilvert D. Selection of linkers for a catalytic single-chain antibody using phage display technology // J Biol Chem. 1996. V.271(26). P. 15682 -15686.

147. Tarar M.R., Emery V.C., Harrison T.J. Expression of a human cytomegalovirus gp58 antigenic domain fused to the hepatitis B virus nucleocapsid protein // FEMS Immunol Med Microbiol. 1996. V. 16(3-4). P. 183-192.

148. Taubenberger J.K. The origin and virulence of the 1918 "Spanish" influenza virus // Proc Am Philos Soc. 2006. V.150(l). P. 86-112.

149. Thompson W.W., Shay D.K., Weintraub E., Brammer L., Cox N., Anderson L.J., Fukuda K. Mortality associated with influenza and respiratory syncytial virus in the United States // JAMA. 2003. V.289(2). P. 179-186.

150. Tindle R.W., Herd K., Londono P., Fernando G.J., Chatfield S.N., Malcolm K., Dougan G. Chimeric hepatitis B core antigen particles containing B- and Th-epitopes of human papillomavirus type 16 E7 protein induce specific antibody and T-helper responses in immunized mice // Virology. 1994. V.200(2). P. 547-557.

151. Touze A., Enogat N., Buisson Y., Coursaget P. Baculovirus expression of chimeric hepatitis B virus core particles with hepatitis E virus epitopes and their use in a hepatitis E immunoassay // J Clin Microbiol. 1999. V.37(2). P. 438-441.

152. Townsend K., Sallberg M., O'Dea J., Banks T., Driver D„ Sauter S., Chang S.M., Jolly D.J., Mento S.J., Milich D.R., Lee W.T. Characterization of CD8+ cytotoxic T-lymphocyte responses after genetic immunization with retrovirus vectors expressing different forms of the hepatitis B virus core and e antigens // J Virol. 1997. V.71(5). P. 3365-3374.

153. Tsai S.L., Chen M.H., Yeh C.T., Chu C.M., Lin A.N., Chiou F.H., Chang T.H., Liaw Y.F. Purification and characterization of a naturally processed hepatitis B virus peptide recognized by CD8+ cytotoxic T lymphocytes // J Clin Invest. 1996. V.97(2). P. 577-584.

154. Tsuda S., Yoshioka K., Tanaka T., Iwata A., Yoshikawa A., Watanabe Y., Okada Y. Application of the human hepatitis B virus core antigen from transgenic tobacco plants for serological diagnosis // Vox Sang. 1998. V. 74(3). P. 148-155.

155. Ulrich R., Koletzki D., Lachmann S., Lundkvist A., Zankl A., Kazaks A., Kurth A., Gelderblom H.R., Borisova G., Meisel H., Krüger D.H. New chimaeric hepatitis B virus core particles carrying hantavirus (serotype Puumala) epitopes: Immunogenicity and protection against virus challenge // J Biotechnol. 1999. V.73(2-3). P. 141-153.

156. Ulrich R., Lundkvist A., Meisel H., Koletzki D., Sjolander K.B., Gelderblom H.R., Borisova G., Schnitzler P., Darai G., Kruger D.H. Chimaeric HBV core particles carrying a defined segment of Puumala hantavirus nucleocapsid protein evoke protective immunity in an animal model // Vaccine. 1998. V. 16(2-3). P. 272-280.

157. Umbach J. L., Yen H. L., Poon L. L., Cullen B. R. Influenza a virus expresses high levels of an unusual class of small viral leader RNAs in infected cells // MBio. 2010. V.l(4). P. 204-210.

158. Vogel M., Diez M., Eisfeld J., Nassal M. In vitro assembly of mosaic hepatitis B virus capsid-like particles (CLPs): rescue into CLPs of assembly-deficient core protein fusions and FRET-suited CLPs // FEBS Lett. 2005. V.579(23). P. 5211 - 5216.

159. Wang P., Palese P., O'Neill R.E. The NPI-l/NPI-3 (karyopherin alpha) binding site on the influenza a virus nucleoprotein NP is a nonconventional nuclear localization signal. //J Virol. 1997. V.71(3). P. 1850-1856.

160. Whitlow M., Bell B.A., Feng S.L., Filpula D., Hardman K.D., Hubert S.L., Rollence M.L., Wood J.F., Schott M.E., Milenic D.E., Yokota T., Schlom J. An improved linker for single-chain Fv with reduced aggregation and enhanced proteolytic stability // Protein Eng. 1993. V.6(8). P. 989-995.

161. Wingfield P.T., Stahl S.J., Williams R.W., Steven A.C. Hepatitis core antigen produced in Escherichia coli: subunit composition, conformational analysis, and in vitro capsid assembly//Biochemistry. 1995. V.34(15). P. 4919-4932.

162. Wise, H. M., Foeglein A., Sun J., Dalton R.M., Patel S„ Howard W., Anderson E.C., Barclay W.S., Digard P. A complicated message: identification of a novel PB1-related protein translated from influenza A virus segment 2 mRNA // J. Virol. 2009. V.83(16). P. 8021-8031.

163. Wizemann H., von Brunn A. Purification of E. coli-expressed HIS-tagged hepatitis B core antigen by Ni2+-chelate affinity chromatography // J Virol Methods. 1999. V.77(2). P. 189-197.

164. Wu C.L., Leu T.S., Chang T.T., Shiau A.L. Hepatitis C virus core protein fused to hepatitis B virus core antigen for serological diagnosis of both hepatitis C and hepatitis B infections by ELISA // J Med Virol. 1999. V.57(2). P. 104-110.

165. Wynne S.A., Crowther R.A., Leslie A.G. The crystal structure of the human hepatitis B virus capsid. Mol Cell. 1999. V.3(6). P. 771-780.

166. Yamaguchi M., Hirano T., Sugahara K., Mizokami H., Araki M., Matsubara K. Electron microscopy of hepatitis B virus core antigen expressing yeast cells by freeze-substitution fixation // Eur J Cell Biol. 1988. V.47(l). P.138-143.

167. Yanisch-Perron C., Vieira J., Messing J. Improved M13 phage cloning vectors and host strains: nucleotide sequences of the M13mpl8 and pUC19 vectors // Gene. 1985. V.33(l). P. 103-19.

168. Yayon A., Aviezer D., Safran M., Gross J.L., Heldman Y., Cabilly S., Givol D., Katchalski-Katzir E. Isolation of peptides that inhibit binding of basic fibroblast growth factor to its receptor from a random phage-epitope library // Proc Natl Acad Sci USA. 1993. V.90(22). P. 10643-10647.

169. Yon J., Rud E., Corcoran T., Kent K., Rowlands D., Clarke B. Stimulation of specific immune responses to simian immunodeficiency virus using chimeric hepatitis B core antigen particles // J Gen Virol. 1992. V.73 (Pt 10). P. 2569-2575.

170. Yoshikawa A., Tanaka T., Hoshi Y., Kato N., Tachibana K., Iizuka H., Machida A., Okamoto H., Yamasaki M., Miyakawa Y., Miyakawa Y., Mayumi M. Chimeric hepatitis B virus core particles with parts or copies of the hepatitis C virus core protein // J Virol. 1993. V.67(10). P. 6064-6070.

171. Zheng J., Schodel F., Peterson D.L. The structure of hepadnaviral core antigens. Identification of free thiols and determination of the disulfide bonding pattern // J Biol Chem. 1992. V.267(13). P. 9422-9429.

172. Zlotnick A., Cheng N.. Conway J.F., Booy F.P., Steven A.C., Stahl S.J., Wingfield P.T. Dimorphism of hepatitis B virus capsids is strongly influenced by the C-terminus of the capsid protein // Biochemistry 1996. V.35(23). P. 7412-7421.