Конструирование пробиотиков на основе генетически модифицированных штаммов Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Кашперова, Тамара Артуровна

• Кашперова, Тамара Артуровна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кашперова, Тамара Артуровна

Список используемых сокращений.

Введение.

Обзор литературы.

1. Перспективы и современные подходы к разработке биопрепаратов на основе живых микроорганизмов.

1.1. Взаимосвязь нормальной микрофлоры и антиинфекционной резистентности организма.

1.2. Пробиотики: оценка возможности использования живых микроорганизмов для создания лечебно - профилактических препаратов.

1.3. Представители бактерий рода Bacillus как арсенал для конструирования эффективных биопрепаратов.

1.4. Эффективность применения пробиотиков в медицине и сельском хозяйстве: состояние и перспективы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конструирование пробиотиков на основе генетически модифицированных штаммов Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis»

Актуальность темы Основной проблемой последних лет является увеличение числа резистентных к антибиотикам инфекций и снижение эффективности ряда антибиотиков. Распространение бактерий, устойчивых к антибиотикам, влечет за собой массовую аллергизацию больных и развитие дисбактериозов, частота которых быстро растет /Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1997, 2000; Митрохин С.Д., 2004/.

В последние годы появились новые подходы к лечению дисбактериозов, связанные с восстановлением естественной экологии организма и основанные на использовании активных биологических продуктов. Одним из аспектов такого подхода является нормализация измененного микробного пейзажа организма при помощи бактерийных препаратов /Мирошник О.А., 1997; Бондаренко В.М. и др., 1998; Янковский Д.С. и др., 2004/.

В настоящее время в клинической практике в качестве средств лечения и профилактики острых кишечных инфекций, дисбактериозов различной этиологии и стресса широко используются биопрепараты из живых микробных культур - пробиотики. В отличие от антибиотиков, они не оказывают отрицательного воздействия на нормальную микрофлору, безвредны, экологически чисты и не имеют противопоказаний для применения. Основой пробиотиков являются либо микроорганизмы, представляющие нормальную микрофлору, либо не характерные для нормофлоры сапрофиты, способные вытеснять патогенные микроорганизмы из просвета кишечника. Пробиотические штаммы бацилл являются неадгезивными транзисторными представителями микрофлоры кишечника. Некоторые полезные свойства делают их важным арсеналом совершенствования биопрепаратов. Прежде всего, это высокая ферментативная активность, позволяющая им существенно регулировать и стимулировать' пищеварение, а также способность оказывать противоаллергенное, антитоксическое действие и повышать неспецифическую резистентность макроорганизма /Сорокулова И.Б., 1998;

Oggioni M.R. et al., 2003; Ouwehand AC. et al., 2003/. Антагонизм в отношении широкого круга патогенных и условнопатогенных микроорганизмов и самостоятельная элиминация из желудочно-кишечного тракта, делает конструирование лечебно-профилактических препаратов из пробиотических бацилл особенно перспективным.

Среди существующих в настоящее время пробиотиков нет высокоэффективных средств, характеризующихся выраженной антивирусной активностью. В то же время известно, что заболевания вирусной и вирусно-бактериальной этиологии составляют значительную часть инфекционной патологии человека и животных. Вирусные инфекции, как правило, осложняются бактериальными и наоборот. Поэтому представляется весьма актуальной проблема разработки средств, характеризующихся одновременно антибактериальными и антивирусными свойствами. Для ее решения пробиотики используют в сочетании с различными иммуностимуляторами, антивирусными веществами и цитокинами, среди которых наиболее широко представлены препараты интерферона. Однако этот подход усложняет технологию производства и повышает цену, что часто делает такие комплексные препараты нерентабельными, поэтому в реальной практике они имеют ограниченное применение.

Альтернативой такому подходу является одно из перспективных направлений разработки новых биопрепаратов - непосредственная модификация пробиотических штаммов путем клонирования генов антивирусных белков. Это направление в течение ряда лет широко разрабатывается в ГНЦ ВБ «Вектор», где были созданы штаммы микроорганизмов, продуцирующие цитокины, в частности Bacillus subtilis 2335/рВМВ 105, продуцирующий альфа 2 -интерферон /Патент РФ № 1839459/. Созданный на его основе пробиотик Субалин, наряду с высокой антибактериальной активностью обладает антивирусными свойствами /Чудновская Н.В. и др., 1995; Белявская В.А. и др., 2002/. Следует отметить, что штамм В.subtilis,составляющий основу препарата субалин, является строгим аэробом. А как известно, внутренние полости организма значительно различаются по уровню аэрации и имеют протяженные анаэробные участки. Эту проблему можно решить путем составления микробного консорциума из штаммов, дополняющих свойства друг друга. Поэтому разработка препаратов на основе генетически модифицированных микроорганизмов, способных осуществлять доставку в организм терапевтических белков при оральном введении является весьма перспективной и актуальной задачей.

Цель и задачи исследования Целью настоящей работы явилось конструирование генетически модифицированного штамма Bacillus licheniformis, продуцирующего альфа 2 - интерферон для потенциальной его доставки в организм при оральном введении и создание консорциума из рекомбинантных штаммов Bacillus для нового пробиотического препарата. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Сконструировать генетически модифицированный штамм Bacillus licheniformis, продуцирующий ИФН-а2 и изучить возможность его использования в качестве вектора доставки целевого белка в организм.

- Сконструировать на его основе микробный консорциум, включив дополнительно ранее созданный штамм B.subtilis для разработки пробиотического препарата с улучшенными свойствами.

- Разработать технологию изготовления препарата и получить опытные партии для проведения испытаний.

- Провести испытания эффективности опытных партий препарата в птицеводстве.

Научная новизна Впервые сконструирован и подробно исследован генетически модифицированный штамм Bacillus licheniformis 2336/рВМВ105, кодирующий ген интерферона. Исследован консорциум рекомбинантных штаммов Bacillus и показана перспективность его использования для разработки нового пробиотического препарата с улучшенными свойствами.

Разработан пробиотик субалин-форте и исследована его эффективность для повышения хозяйственно-экономических показателей при выращивании цыплят-бройлеров кросса «Сибиряк».

По результатам проведенных исследований получены патенты РФ: «Штамм бактерий Bacillus licheniformis, обладающий антивирусной и антибактериальной активностью» (№2172343, 1998) и «Пробиотический препарат комплексного действия» (№2159625, 1999).

Практическая значимость Предложен новый пробиотик субалин-форте для повышения хозяйственно-экономических показателей птицеводства. Сконструирован генетически модифицированный штамм Bacillus licheniformis 2336/рВМВ105, продуцирующий интерферон, который может быть использован для разработки новых пробиотических препаратов. На основе материалов диссертации разработаны технические условия получения препарата субалин-форте.

Основные положения, выносимые на защиту

- рекомбинантный штамм Bacillus licheniformis 2336/рВМВ 105, способный к стабильному поддержанию плазмиды, обеспечивающей экспрессию целевого белка с антивирусными свойствами (рекомбинантного интерферона) в условиях in vitro и in vivo;

- генетическая модификация - трансформация плазмидой рВМВ 105 с клонированным геном альфа 2 -интерферона не изменяет полезных свойств реципиентного штамма: антагонистичекой активности против широкого круга патогенных микроорганизмов и безвредности для теплокровных;

- разработана технология поверхностного культивирования рекомбинантных штаммов Bacillus licheniformis и Bacillus subtilis, которая обеспечивает получение опытных партий препарата субалин-форте со стабильными характеристиками; применение препарата субалин-форте повышает хозяйственно-экономические показатели птицеводства.

Апробация работы Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях: VIII международной конференции «Новые направления биотехнологии» (Москва, апрель 1998 г.); VIII международной конференции "Новые информационные технологии в медицине и экологии (Гурзуф, 2000); международной конференции «Проблемы биологической и экологической безопасности» (Оболенск, май 2000 г.); I международной конференции "Актуальные проблемы производства и переработки продуктов животноводства и птицеводства" (г.Уфа, 2000); международной научно-практической конференции «Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспективы» (Киров, 2001); международной научно-практической конференции «Пища. Экология. Качество» (Краснообск, февраль 2001 г.); 2-м московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2003 г.).

Публикация результатов исследований По теме диссертации опубликовано 3 статьи в научных журналах, 1 статья в международном сборнике, 11 работ в материалах российских и международных конференций.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 141 странице. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы и приложений. Иллюстрирована 16 таблицами и 10 рисунками. Список литературы включает 205 источников, в том числе 128 иностранной литературы.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Кашперова, Тамара Артуровна

ВЫВОДЫ t

1. Сконструирован пробиотический штамм В.licheniformis 2336/рВМВ 105, способный продуцировать рекомбинантный интерферон человека типа альфа 2.

2. Показано, что полученный рекомбинантный штамм стабильно сохраняет плазмиду, обеспечивая экспрессию целевого белка в условиях in vitro и in vivo.

3. Экспериментально показано, что генетическая модификация - наличие плазмиды рВМВ 105, кодирующей синтез интерферона альфа 2 человека, не изменила полезных антагонистических свойств реципиентного штамма и обеспечила рекомбинантному штамму способность к синтезу интерферона, что создает предпосылки для проявления антивирусной активности.

4. Экспериментально показано, что пробиотический штамм В.licheniformis 2336 является перспективным для составления микробного консорциума со штаммом B.subtilis 2335, так как дополняет свойства последнего. Сконструированный на его основе рекомбинантный Bacillus licheniformis

Ф 2336/рВМВ 105 способен к росту и продукции целевого белка в условиях недостатка кислорода. Это обеспечивает эффективность действия препарата субалин-форте в отделах ЖКТ с различным уровнем аэрации.

5. Разработаны технология и проект технических условий получения пробиотического препарата субалин-форте методом поверхностного культивирования с последующим лиофильным высушиванием.

6. Экспериментально показана эффективность применения препарата Ш субалин-форте при выращивании цыплят-бройлеров кросса «Сибиряк». Субалинфорте повышает сохранность птицы до 3%, прирост живой массы - до 9,6%, прибыль и уровень рентабельности - на 48,5% и 19,5% соответственно.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Подводя итоги анализа литературных данных, следует подчеркнуть, что пробиотики, в том числе и на основе Bacillus spp., становятся важной и неотъемлемой частью профилактики и терапии многих заболеваний. Применение пробиотиков в аграрной области - это естественная альтернатива антибиотикам, гормонам или каким-либо другим небезопасным стимуляторам роста и новый шаг в технологии современного сельского хозяйства. Пробиотические культуры содержат микроорганизмы, которые стабилизируют кишечный микробный баланс, уничтожают болезнетворные бактерии и секретируют различные ферменты, позволяющие животному лучше усваивать важные питательные вещества. В этой связи обоснованными и крайне актуальными являются усилия, направленные на расширение арсенала пробиотических штаммов и улучшение их свойств. Однако активно используемые для этой цели методы селекции и приемы создания микробных консорциумов не могут обеспечить появление принципиально новых необходимых свойств, таких как антивирусные. Огромные возможности для реализации этой цели открываются благодаря достижениям молекулярной генетики и биологии. Методы генной инженерии позволяют клонировать ген любой биологически активной молекулы в любом бактериальном хозяине. Следовательно, введение генов целевых белков в пробиотические штаммы бактерий может обеспечить появление у последних заданных полезных свойств. Итак, создание пробиотиков и их широкое применение являются сегодня стратегическим направлением в борьбе со многими инфекционными, а также некоторыми неинфекционными заболеваниями.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объекты и методы исследований. В исследованиях использовали следующие культуры микроорганизмов: пробиотические штаммы Bacillus subtilis BD170, В. subtilis 2335 ВКПМ 4579, В. licheniformis ВКПМ В 2336; тест-культуры Salmonella typhimurium 174, Shigella sonnei, Candida albicans, Staphylococcus aureus 209 из музея ГИСК им. Л.А. Тарасевича (г.Москва). А также генетически модифицированные штаммы, из музея ИККМ ГНЦ ВБ «Вектор» (пгт. Кольцово): В. licheniformis 2336/рВМВ105 (В-677); В. subtilis 2335/рВМВ105 (ВКПМ-4579 В-315); В. subtilis BD170/pBMB105 (В-319).

При создании модельных инфекций были использованы вирусы: герпеса 2-го типа (ВПГ2, гениталий), штамм MS (Государственная коллекция вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, г.Москва).

Всего в работе использовали 25 морских свинок, 40 мышей и 31984 цыплят-бройлеров кросса «Сибиряк». Все манипуляции с животными проводили с применением седативных средств в соответствии с ветеринарным законодательством.

Определение чувствительности к антибиотикам штаммов бацилл проводили диско-диффузным методом и оценивали по зоне подавления роста /Биргер М.О., 1982/.

Эксперименты по молекулярному клонированию в бациллах проводили согласно /Гловер Д., 1988/. Выделение плазмид из пробиотических штаммов бацилл проводили, используя стандартный метод щелочного лизиса /Гловер Д., 1988/ с собственными модификациями. Изменения были внесены в параметры (время, температура) инкубации с лизирующими агентами, связанные со структурными особенностями клеточной стенки пробиотических штаммов. На основании проведенных экспериментов была предложена следующая методика выделения плазмид из пробиотических штаммов бацилл:

- выращивали культуру в 5 мл L-бульона в течение 18-20 ч., центрифугировали для осаждения клеток при 5000 об/мин в течение 10 мин;

- осадок замораживали (при - 20°С) и оттаивали при комнатной температуре не менее трех раз, после чего ресуспендировали в 300 мкл буфера 1 (50 мМ глюкозы, 10 мМ ЭДТА, 25 мМ трис НС1, рН=8,0), содержащего 10 мкг/мл лизоцима и выдерживали во льду до появления вязкости 30-90 мин при периодическом плавном перемешивании;

- при появлении вязкости к раствору добавляли 600 мкл буфера 2 (0,2 М NaOH, 1% SDS) и оставляли при комнатной температуре на 5-10 мин;

- добавляли 450 мкл буфера 3 (3 М ацетат натрия, рН=4,8) и помещали на 10-20 мин в лед;

- после центрифугирования при 12000 об/мин в течение 5 мин супернатант переносили в чистые пробирки и прибавляли этанол в объемном соотношении 1 : 2,5 или равное количество изопропанола, выдерживали при - 20°С не менее 30 мин для формирования осадка;

- центрифугировали при 12000 об/мин в течение 10 мин, осадок растворяли в 50-100 мкл ТЕ-буфера (10 мМ трис НС1,1 мМ ЭДТА, рН=8,0);

- добавляли равный объем 5 М хлористого лития, выдерживали 10 мин во льду;

- центрифугировали при 12000 об/мин в течение 10 мин;

- супернатант переносили в чистые пробирки, добавляли 0,1 объема 3 М ацетата натрия (рН=4,8) и предварительно охлажденный этанол в объемном соотношении 1 : 2,5 и оставляли не менее, чем на 30 мин (или на ночь) при температуре -20°С;

- центрифугировали при 12000 об/мин в течение 10 мин, осадок подсушивали, промывали 70% этанолом, повторно центрифугировали, промывали 96% этанолом, центрифугировали, подсушивали и растворяли в ТЕ-буфере;

- анализировали с помощью электрофореза в 0,8% агарозном геле.

Определение уровня синтеза интерферона клетками трансформированных бацилл проводили двумя методами: по ингибированию цитопатического действия вируса энцефаломиокардита (ЕМК) с использованием культуры клеток диплоидных фибробластов человека (ДФЧ-ДК-58) и иммуноферментным анализом (ИФА) с использованием коммерческих наборов «РгоСоп IF2 plus», (г.Санкт-Петербург). Образцы лизатов культуральной жидкости для определения внеклеточного интерферона готовили по схемам, разработанным с учетом известных методик по изучению продукции интерферона и других рекомбинантных белков клетками бацилл /Palva I. et al, 1983/. Определение антивирусной активности интерферона по ингибированию цитопатического действия вируса проводили на монослое клеточной культуры. Суспензию клеточной культуры доводили до концентрации 2x10 кл/мл ростовой средой. В каждую лунку вносили по 100 мкл суспензии клеток и инкубировали в СОг - термостате до формирования монослоя клеток. Затем ростовую среду удаляли и в первую лунку вносили 20 мкл титруемого образца и 180 мкл поддерживающей среды. После осторожного перемешивания 100 мкл из первой лунки переносили во вторую, смешивали со 100 мкл поддерживающей среды и т.д. Клетки выдерживали при 37°С в течение 24 ч. В каждую лунку с обработанным монослоем вносили 100 ТЦПД (тканевых цитопатических доз, вызывающих поражение в половине проб вируса) и выдерживали при 37°С в течение 24-48 ч. Через 24 ч. Проводили первый учет результатов, через 48 ч. -второй. Расчет титра интерферона производили с поправкой на результаты стандартного препарата - реаферона.

Стабильность плазмид в клетках бацилл изучали в экспериментах in vitro (при пассировании на культуральных средах) и in vivo (путем пассирования через организм мышей) и оценивали по доле клеток, сохранивших исходную плазмиду. После пассажей проводили рассев культуры для получения изолированных клонов на агаризованной среде без антибиотиков. У 100-200 случайно отобранных клонов определяли сохранность фенотипа, детерминируемого наличием плазмиды (Kmr, INF+), для чего с помощью стерильной микробиологической иглы их переносили на агаризованную питательную среду с добавлением антибиотика. После культивирования в течение 24 ч определяли соотношение клонов, сохранивших и утративших устойчивость к антибиотику. Сохранность встройки гена интерферона (структурную стабильность) определяли рестрикционным (по появлению рестрикционного PstI -EcoRI фрагмента длиной 700 н.п.), гибридизационным и ПЦР анализами. Для определения структурной стабильности плазмиды после культивирования, пассирования в условиях in vitro и in vivo проводили гибридизационный анализ на сохранность гена интерферона. В качестве гибридизируемого меченного фрагмента был взят Slal - Hindlll фрагмент ДНК плазмиды рВМВ105, содержащий часть гена интерферона. Вся процедура гибридизации была стандартной /Маниатис Т. и др., 1984/. Стабильность рекомбинантных плазмид в трансформированных штаммах оценивали при пассировании на жидкой питательной среде LB без антибиотика. Для этого 5 мкл ночной культуры исследуемых штаммов вносили в 5 мл свежей питательной среды и оставляли при 37°С в термостате до утра. Одно суточное выращивание (пассаж) соответствует примерно 12-14 клеточным генерациям /Denich К. et al., 1993/. Операцию повторяли десятикратно. Через I, 3, 5, 10 пассажей проводили высевы культуры на твердую питательную среду и определяли процентное количество бактерий, сохранивших плазмиду.

Изучение антагонистических свойств у рекомбинантного штамма проводили методами отстроченного антогонизма - радиальных и перпендикулярных штрихов, и агаровых блочков /Егоров Н.С., 1979/. Для культивирования штамма-антагониста были использованы следующие среды: среда Громыко, сусло-агар и картофельный агар.

Патогенность, вирулентность и токсичность сконструированного штамма B.subtilis 2336/рВМВ105 изучали по методу Биргер М.О. (1982) на белых мышах при внутрибрюшинном, подкожном и пероральном введении 24 часовой культуры, выращенной на МПА или агаризованной среде Гаузе 2 с канамицином (10-20 мкг/мл). Токсичность (безвредность, согласно ТУ 9383-021-00479979-01) препарата субалин-форте определяли на самцах беспородных белых мышей, массой 18-20 г. Сформировали опытную и контрольную группы по 5 животных в каждой, содержащихся на стандартном рационе в условиях вивария. Опытная группа дополнительно к основному рациону получала препарат из расчета 1 доза на мышь в течение 10 дней. Ежедневно проводили взвешивание животных и по соотношению прироста живой массы в опытной и контрольной группах судили о безвредности препарата.

Антивирусную активность ре ком б инаитного штамма изучали совместно с лабораторией Игнатьева Г.М. (ГНЦ ВБ «Вектор», пгт. Кольцово) на модельной инфекции герпеса 2-го типа. Были использованы самцы морских свинок, массой 200-220 г. Животные были получены из питомника ГНЦ ВБ «Вектор» и содержались в стандартных условиях вивария на сбалансированной диете. Заражение вирусным материалом проводили согласно описанной ранее методике /Маренникова С.С. и др., 1986/. Были сформированы две опытных (по 10 животных) и одна контрольная (5 животных) группы. Первая опытная группа получала суспензию живых клеток рекомбинантного штамма В.licheniformis 2336/рВМВ105 в количестве по (1,0±0,5)х109 кое/мл с дополнительными аппликациями на пораженные участки в той же дозе. Вторая группа получала только аппликации. Третья группа не получала никакого лечения. Внутри каждой из опытных групп половина (5 животных) морских свинок получала суспензию рекомбинантного штамма, другая половина - культуру штамма-реципиента. Лечебный эффект оценивался по разности баллов с результатами третьей (контрольной) группы /Даниленко Е.Д. и др., 1998/.

Исследование эффективности субалина-форте в птицеводстве исследовали на цыплятах-бройлерах кросса «Сибиряк». Выращивание цыплят с суточного до 42-дневного возраста осуществлялось в клеточных батареях типа БКМ-ЗБ. Технологические параметры выращивания бройлеров по плотности посадки, фронту кормления и поения, температурному и световому режимам соответствовали нормам, принятым в хозяйстве. В схему кормления были включены антибиотики. Пробиотики давали с водой. Предварительно готовили препарат: 5 г сухого концентрата, содержащего (8,5±1,5) х 1011 к.о.е./г растворяли в 500 мл питьевой воды, тщательно перемешивая. Полученную гомогенную суспензию выливали в специальный бак, емкостью 80 л. Таким образом, на каждого цыпленка в среднем приходилось 0,02 дозы препарата (1 доза составляет 5,0 х 109 к.о.е.), что соответствует 5 х 107 к.о.е. на голову. При проведении второго курса подачи препарата дозу увеличивали в два раза. Клетки батареи БКМ-ЗМ оборудованы ниппельными поилками. На время выпаивания пробиотиков бак подключали к системе поилок. Цыплята выпивали воду в течение 2-3 часов, после чего поилки подключали к системе водоснабжения. Препараты давали двумя курсами по 5 дней: первый курс проводили в первую неделю жизни, второй - с 28-30 дня жизни цыплят.

Статистическую обработку результатов проводили методами вариационной статистики с использованием стандартного пакета компьютерных программ Microsoft Excel 97.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кашперова, Тамара Артуровна, 2005 год

1. Алмагамбетов К.Х. Транслокация кишечной микрофлоры и ее механизмы / К.Х. Алмагамбетов, Е.М. Горская, В.М. Бондаренко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. - № 10. - С.74-79.

2. Амбулос Н. Бациллы. Генетика и биотехнология / Н. Амбулос, Р. Арчибальд, Т. Аткинсон и др. // Под ред. К.Харвуда. М.: Мир, 1992. - 531 с.

3. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве // Ветеринария. -1991. № 4. - С.55-58.

4. Башкиров О.Г. Биоплюс в современном высокоэффективном птицеводстве // БИО. 2001. - №3.

5. Белобородова Н.В. О микрофлоре хозяина и ее участии в ответе на инфекцию // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т.43, № 9. - С.44-49.

6. Белявская В.А. Адьювантные свойства рекомбинантного пробиотика субалина, продуцирующего интерферон / В.А. Белявская, Г.М. Игнатьев, Н.В. Литвяков, Н.В. Чердынцева // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. 2001. - №6. - С. 77-82.

7. Белявская В.А. Конструирование лечебно-профилактических препаратов на основе живых генетически модифицированных микроорганизмов / Автореф. дисс. д.б.н. Кольцово. - 2002. - 48 с.

8. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., Медицина, 1982. - 464 с.

9. Бондаренко В.М. Новые подходы к моделированию, диагностике и лечению дисбактериозов кишечника / В.М. Бондаренко, Е.М. Горская // В сб.: Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1992, вып.6. - С. 23-25.

10. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская // Вестник РАМН. М.: Медицина. - 1997. - №3. - С.7-10.

11. Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, использованных в качестве основы препаратов пробиотиков / В.М. Бондаренко, Э.И. Рубакова, В.А. Лаврова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998. - №5. - С.107-112.

12. Воробьев А.А. Дисбактериозы — актуальная проблема медицины /А.А. Воробьев, Н.А. Абрамов, В.М. Бондаренко, Б.А. Шендеров // Вестник РАМН. М.: Медицина, №3, 1997. - С. 4-7.

13. Глушанова Н. А. Об антагонизме пробиотических лактобацилл /Н.А. Глушанова, А. И. Блинов, В.В. Бахаев //Эпидемиология и инфекционные болезни. 2004. - №6. - С.37-39.

14. Горская Е.М. Изменение кишечной микроэкологии при воздействии голодания / Е.М. Горская, А.А. Наумов, Н.Н. Лизько // Антибиотики и колонизационная резистентность: Сб. тр. / ВНИИ антибиотиков. Вып. 19. -М, 1990.-С.112-117.

15. Долгушина В.Ф. Изучение иммунокорригирующих свойств бактериальных препаратов (лактобактерина, бифидумбактерина) и бемитилау беременных с урогеннтальной инфекцией // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. - № 4. - С.56-58.

16. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Высшая школа. -1979. С.238-239.

17. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии.- М.: Медицина, 1996.

18. Ершов Ф.И. Возможна ли рациональная фармакотерапия гриппа и других ОРВИ? / Ф.И. Ершов, Н.В. Касьянова, В.О. Полонский // Инфекции и антимикробная терапия. 2003. - Т.5, №6. - С.

19. Змушко Е.И. Клиническая иммунология / Е.И. Змушко, Е.С. Белозеров, Ю.А. Митин // Спб: Питер, 2001. 576 с.

20. Иванова А.Б. Фармакологическая коррекция неспецифической резистентности и продуктивности цыплят-бройлеров с использованием Ветома 3 // Автореф. дисс. к.в.н. Троицк - 2002. - 12 с.

21. Исаков В.А. Терапия герпетической инфекции / В.А. Исаков, Д.К. Ермоленко, М.Д. Черных. Спб: Гиппократ. - 1993. - 40 с.

22. Кадагидзе З.Г. Цитокины // Журн. Практическая онкология. 2003. -Т.4, №3. - С. 131-139.

23. Камалова М.Н. Возможности применения некондиционного бифидум- и лактобактерина в птицеводстве / М.Н. Камалова, Н.Р.Азимов,

24. И.Р. Пулатов и др. // Профилактика и диагностика инфекционных заболеваний / Ред. Б.Х. Вакулов. Ташкент, 1990. - С.229.

25. Кафарская Л.И. Изучение влияния кисломолочного бифидумбактерина на микрофлору кишечника у летчиков испытателей /Л.И. Кафарская, И.А. Гладько, Б.А. Ефимов и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1992. - № 4. - С. 12-14.

26. Клонирование ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1988.

27. Колосов В.Н. Способ получения искусственного гена интерферона альфа-2 человека и способ получения полипептида с активностью интерферона микробиологическим синтезом / В.Н. Колосов, В.Г. Коробко,

28. B.Н. Добрынин и др. //А.С. 1092176 А, СССР, МКИ С 12 №.

29. Коробко В. Г. Плазмидные векторы с полусинтетическим геном б-галактозидазы E.coli / В. Г. Коробко, В.Н. Добрынин, Нгуем Куанг Винь и др. // Биоорган, химия. 1983. -Т. 9, № 9. - С. 1285-1289.

30. Красных В.Н. Исследование экспрессии искусственных генов лейкоцитарного интерферона человека в клетках Bacillus subtilis / В.Н. Красных, Н.К. Данилюк, А.И. Ломакин и др. // Гибридные плазмиды и экспрессия плазмидных генов. М., 1984. - С.45-46.

31. Лизько Н.Н. Проблемы микробной экологии у человека в космическом полете // Тез. докл. 6-го Всероссийского съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов. М., 1991. - С.107.

32. Лопатина Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов-эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николаенко и др. // Вестн. РАМН. 1997. - № 3. - С.30-34.

33. Максимова Е.Е. Изменение регуляции катаболитного Lux оперона, клонированного в рекомбинантной плазмиде, под воздействием факторов внешней среды / Е.Е. Максимова, В.В. Шпагина, Л.Ю. Попова и др. // Микробиология. - 1998. - 67. - №2. - С.170-175.

34. Малик Н.И. Ветеринарные пробиотические препараты / Н.И. Малик, А.Н. Панин // Ветеринария. 2001. - № 1. - С.46-49.

35. МаниатисТ. Методы генетической инженерии: Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Д. Сэмбрук . М., Мир, 1984.

36. Маренникова С.С. Разработка и практическое использование новых экспериментальных моделей разных форм герпетических инфекций / С.С. Маренникова, Г.Р. Мацевич, Э.В. Чекунова и др. // Вопр. вирусологии. -1986. Т.31, № 1. - С.59-65.

37. Мирошник О.А. Бактерийные биологические препараты для коррекции дисбиозов и их рациональное применение //Омская медицинская газета. 1997. - №8.

38. Митрохин С.Д. Дисбактериоз. Современные представления. Диагностика. Возможности лечения //Антибиотики и химиотерапия. 2004. -вып.49. - №7. - С. 22-33.

39. Осипова И.Г. Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых пробиотиков / И.Г. Осипова, И.Б. Сорокулова, Н.В. Терешкина, Л.В. Григорьева // Журн. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998. - №6. - С.68-70.

40. Панин А.Н. Иммунобиология и кишечная микрофлора / А.Н. Панин, Н.И. Малик, Е.В. Малик М., Аграрная наука, ИК «Родник», 1998. - 47 с.

41. Панин А.Н. Пробиотики: теоретические и практические аспекты //БИО. 2001. - №3.

42. Патент РФ № 1839459 Штамм бактерий Bacillus subtilis, обладающий антивирусной и антибактериальной активностью. 1994 /Смирнов В.В., Белявская В.А., Ильичев А.А., Петренко В.А., Тимофеев И.В., Нетесов А.Е., Резник С.Р., Сорокулова И.Б.

43. Патент РФ № 2035185 Профилактический биопрепарат Субалин. -1995 /Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б., Сандахчиев JI.C., Петренко В.А., Ильичев А.А., Белявская В.А., Тимофеев И.В.

44. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. -М., Мир, 1978.

45. Петровская В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии / В.Г. Петровская, О.П. Марко М., 1976.

46. Постникова Е.А. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл для разработки новых биопрепаратов / Е.А. Постникова, Б.А. Ефимов, Н.Н. Володин, Л.И. Кафарская // Журн. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2004. - №2. - С.64-69.

47. Ракитин А.Л. Характеристики гибридных плазмид, влияющие на их стабильность и экспрессию целевого продукта у Bacillus subtilis / А.Л. Ракитин, Б.К. Бумажкин, Е.О. Добржанская, А.И. Степанов // Биотехнология. 2000. - №6. - С. 16-26.

48. Сергеев В.А. Иммунная система слизистых: концепция общности и механизм функционирования / В.А. Сергеев, Т.И. Алипер, Г.Г. Рухадзе и др. // Вопр. вирусологии. 1988. - Т.ЗЗ, № 4. - С.393-402.

49. Сидоров М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками / М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская // Журн. Ветеринария. 2000. - № 11. - С. 17-21.

50. Сидорова JI.В. Микроэкологические подходы борьбы с заболеваемостью и гибелью цыплят-бройлеров / Л.В. Сидорова, М.А. Манвелова, B.C. Сидоров // Медицинские аспекты микробной экологии.-Вып.6. М., 1992. - С.48-53.

51. Смирнов В.В. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская // Киев, Наукова думка. - 1982. - 278 с.

52. Смирнов В.В. Современные представления о механизме лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus /В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова и др. / Микробиол. журн. 1993. -Т.55, № 4. - С.91-112.

53. Смолянская А.З. Комбинированная антибактериальная терапия инфекционных осложнений у онкологических больных //Антибиотики и •химиотерапия. 1989. - Т.34, № 9. - С.696-699.

54. Соловьева И.В. Использование биологических препаратов, нормализующих микрофлору, в комплексной терапии гинекологических больных // Антибиотики и микроэкология человека и животных / Тр. ин-та ВНИИ антибиотиков. М., 1988. - С.158-160.

55. Сорокин В.В. Изменение активности фосфотаз в сыворотке крови цыплят при скармливании молочнокислых и бифидобактерий / В.В. Сорокин, М.А. Тимошко, А.И. Ширшова и др. // Известия АН Молд ССР, сер. Биол. и хим. наук. 1975. - № 2. - С.37-39.

56. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов //Антибиотики и химиотерапия. -1996. Т.41, № 10. - С.13-15.

57. Сорокулова И.Б. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования в медицине и ветеринарии / И.Б. Сорокулова, В.А. Белявская, В.И. Масычева, В.В. Смирнов // Вестник РАМН.- М.: Медицина. 1997. - №3. - С.46-49.

58. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов // Антибиотики и химиотерапия. -1998. № 2. - С.20-23.

59. Тараканов Б.В. Механизмы действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных // Журн. Ветеринария. -2000. №1. - С.47-54.

60. Ташпулатов Р.Ю. Пути возникновения у людей инфекционных заболеваний, вызванных представителями нормальной микрофлоры //Весоюз. науч.-практич. конф. "Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике": Тез. докл. М, 1983. - С. 182-183.

61. Толкачева Т.В. Бактериотерапия дисбактериоза кишечника у больных острыми лейкозами / Т.В. Толкачева, Е.М. Абакумов, Т.В. Голосова, Н.И. Володина // Гематология и трансфузиология. 1989. - № 1. -С.11-14.

62. Хаитов P.M. Иммунная система желудочно-кишечного тракта: особенности строения и функционирования / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин //Иммунология. 1997. - № 5. - С.4-7.

63. Хаитов P.M. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - № 1. - С.61-64.

64. Чудновская Н.В. Антивирусная активность пробиотиков из бацилл / Н.В. Чудновская, С.Л. Рыбалко, И.Б. Сорокулова и др. // Докл. АН Украины. 1995. - №2. - С.124-126.

65. Шендеров Б.А. Микробиологические аспекты канцерогенеза // Антибиотики и химиотерапия. 1990. - Т.35, № 10. - С.7-12.

66. Шендеров Б. А. Справочно-информационное руководство по молочнокислым бактериям / Вып.1, МНИИЭМ им. Габричевского. М., 1991.

67. Шкарупета М.М. Влияние представителей нормальной микрофлоры и их компонентов на антиинфекционную резистентность / Автореф. дис. д.м.н.-М., 1990.

68. Щелкунов С. Н. Клонирование генов. Новосибирск: Наука, 1986.

69. Якушенко М.Н. Регуляция микроэкологических нарушений кишечника у новорожденных детей с перинатальной патологией новым пробиотиком бифидумбактерин-форте / М.Н. Якушенко, Ж.М. Тхагапсоева,

70. B.М. Бондаренко // Журн. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - №6. - С. 18-22.

71. Янковский Д.С. Настоящее и будущее пробиотиков как биокорректоров микроэкологических нарушений / Д.С. Янковский, В.В. Бережной, Е.Е. Шунько и др. // Современная педиатрия. 2004. - Вып.1, №2.1. C.111-118.

72. Adami A, Cavazzoni V. Occurrence of selected bacterial groups in the faeces of piglets fed with Bacillus coagulans as probiotic // J. Basic. Microbiol.-1999.-Vol.39, N.l. P.3-9.

73. Adams O. Inhibition of human herpes simplex virus type 2 by interferon у and tumor necrosis factor a is mediated by indoleamine 2,3-dioxygenase / O.Adams, K. Besken, C. Oberdorfer et al. // Microbes and infection. 2004. -Vol.6, Issue 9. - P.806-812.

74. Alvarez-Olmos MI. Probiotic Agents and Infectious Diseases: A Modern Perspective on a Traditional Therapy / MI. Alvarez-Olmos, R.A. Oberhelman // Clin. Infectious Diseases. 2001. - Vol.32. - P. 1567.

75. Barak I. From fundamental studies of sporulation to applied spore research /1. Barak, E. Ricca, SM. Cutting // Mol Microbiol. 2005. - Vol. 55, №2. - P.330-338.

76. Belyavskaya V.A. Prospects for constructing immune preparations based on recombinant bacilli / V.A. Belyavskaya, I.B. Soroculova, A.A. Iljchev // Intern.J.Immunorehabilitation. 1994. - №1. Suppl. - P.56.

77. Bevilacqua L. Screening of Bifidobacterium strains isolated from human faeces for antagonistic activities against potentially bacterial pathogens / L. Bevilacqua, M. Ovidi, E. Di Mattia et al. // Microbiol Res. 2003. - Vol.158, N2. - P.179-185.

78. Biourge V. The use of probiotics in the diet of dogs / V. Biourge, C. Vallet, A. Levesque et al. // J. Nutr. 1998. - Vol.128. - № 12 (Suppl). - P.2730S-2732S.

79. Bloksma N. Adjuvancity of Lactobacilli I. Differential effects of viable and killed bacteria / N. Bloksma, E. de Heer, M. Van Dijk, M. Willers // Clin. Exp. Immunol. 1979. - №37. . p.367-375.

80. Boiko N.V. Study of immunotropic activities of Bacillus subtilis as the basis of anti-scleroma probiotics / N.V. Boiko, M.V. Lysetska, V.G. Arkadiev et al. // Mikrobiol. Z. 2000. - Vol.62, № 6. - P.22-25.

81. Bron S. Instability of recombinant pUBllO plasmids in Bacillus subtilis: plasmid-encoded stability function and effects of DNA inserts / S. Bron, E. Luxen, P. Swart//Plasmid. 1988. - Vol.19, №3. - P.231-241.

82. Casula G. Bacillus probiotics: spore germination in the gastrointestinal tract / G. Casula, Cutting SM. // Appl. Environ. Microbiol. 2002. - Vol.68, N5. -P.2344-2352.

83. Cavazzoni V. Performance of broiler chickens supplemented with Bacillus coagulans as probiotic / V. Cavazzoni, A. Adami, C. Castrovilli // Br. Poult. Sci. -1998. Vol.39, № 4. - P.526-529.

84. Ciabattini A. Oral priming of mice by recombinant spores of Bacillus subtilis / A. Ciabattini, R. Parigi, R. Isticato et al. // Vaccine. 2004. - Vol.22, №31-32.-P.4139-4143.

85. Dalloul R.A. Enhanced mucosal immunity against Eimeria acervulina in broilers fed a Lactobacillus-based probiotic /RA. Dalloul, HS. Lellehoj, T.A. Shellem, J A. Doerr //Poult. Sci.- 2003.- T.82, №1.- P62-66.

86. Dalmin G. Effect of probiotics on bacterial population and health status of shrimp in culture pond ecosystem / G. Dalmin, K. Kathiresan , A. Purushothaman // Indian J. Exp. Biol. 2001. - Vol.39, № 9. - P.939-942.

87. Decroos K. Repression of Clostridium population in young broiler chickens after administration of a probiotic mixture / K. Decroos, T. Vercauteren, G. Werquin, W. Verstraete //Commun Agric Appl Biol Sci.- 2004.- T.69, №1.-P.5-13.

88. De Simone C. Effect of Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus acidophilus on gut mucosa and peripheral blood В lymphocytes / C. De Simone, Ciardi A., Grassi A. et al. // Immunopharmacol Immunotoxicol. 1992. - Vol.14, № 1-2.-P.331-340.

89. Due le H. Characterization of Bacillus probiotics available for human use / H. Due le, HA. Hong, TM. Barbosa et al. // Appl Environ Microbiol. 2004. -Vol.70, №4.-P.2161-2171.

90. Dunne C. In vitro selection criteria for probiotic bacteria of human origin: correlation with in vivo findings / C. Dunne, L. O'Mahony, L. Murphy et al. // AmJ.Clin.Nutr. 2001. - Vol.73, №2 Suppl. - P.386S-392S.

91. Elmer GW. Probiotics: "living drugs" // Am.J.Health Syst. Pharm. -2001. Vol.58, №12. - P.l 101-1109.

92. Endo T. Effects of a probiotic on the lipid metabolism of cocks fed on a cholesterol-enriched diet / T. Endo, M. Nakano, S. Shimizu et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1999. - Vol.63, № 9. - P.1569-1575.

93. Ferreira L.C.S. Bacillus subtilis as a tool for vaccine development: from antigen factories to delivery vectors / L.C.S. Ferreira, R.C.C.Ferreira, W. Schumann // An. Acad. Bras. Cienc. 2005. - Vol.77, №1

94. Fukushima Y. Effect of a probiotic formula on intestinal immunoglobulin A production in healthy children / Y. Fukushima, Y. Kawata, H. Hara et al. // Int. J. Food Microbiol. 1998. - Vol.42. - P.39-44.

95. Fuller R. Probiotics in man and animals //J. Appl. Bact. 1989. - Vol.66. - P.365-378.

96. Fuller R. Probiotics in human medicine // Gut. 1991. - Vol.32. - P.439442.

97. Gibson G.R. Aspects of In Vitro and In Vivo Research Approaches Directed Toward Identifying Probiotics and Prebiotics for Human Use / G.R. Gibson, R. Fuller // J.Nutrition. 2000. - Vol.130. - P.391S-395S.

98. Gionchetti P. Prophylaxis of pouchitis onset with probiotic therapy: a double-blind, placebo controlled trial / P. Gionchetti, F. Rizzello, A. Venturi et al. // Gastroenterology. №118. - P. 1214.

99. Green D.H. Characterization of Two Bacillus Probiotics / D.H. Green, Ph.R. Wakeley, A. Page et al. It Appl. and Environmen. Microbiol. 1999. - Vol. 65, № 9. - P.4288-4291.

100. Guarino A. Oral bacterial therapy reduces the duration of symptoms and of viral excretion in children with mild diarrhea / A. Guarino, R.B. Canani, M.L. Spanguolo et al. // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1997. - Vol.25, №5. - P.516-519.

101. Harms H.K. Enzyme-substitution therapy with the yeast Saccharomyces cerevisiae in congenital sucrase-isomaltase deficiency / Harms H.K., R.M. Bertele-Harms, D. Bruer-Kleis // N. Engl. J. Med. 1987. - Vol.316. - P.1306-1309.

102. Hart AL. The role of the gut flora in health and disease, and its modification as therapy / AL. Hart, AG. Stagg, M. Frame et al. //Aliment Pharmacol. Ther. 2002. - Vol.16, №8. -P.1383-1393.

103. Henderson B. Microbial/host interactions in health and disease: who controls the cytokine network / B. Henderson, S. Poole, M. Wilson // Immunopharmacology. 1996. - Vol.35. - P. 1-21.

104. Hilton E. Efficacy of Lactobacillus GG as a diarrheal preventive in travelers / E. Hilton, P. Kolakowski, C. Singer, M. Smith // J. Travel Med. 1997. -Vol.4.-P.41-43.

105. Hoa N.T. Characterization of Bacillus Species Used for Oral Bacteriotherapy and Bacterioprophylaxis of Gastrointestinal Disorders / N.T. Hoa, L. Baccigalupi, A. Huxham et al. // Appl. and Environment. Microbiol. 2000. -Vol.66, № 12. - P.5241-5247.

106. Hoa T.T. Fate and dissemination of Bacillus subtilis spores in a murine model / T.T. Hoa, L.H. Due, R. Isticato et al. // Appl. Environ. Microbiol. 2001. -Vol.67.-№ 9.-P.3819-3823.

107. Huang MK. Effects of Lactobacilli and an acidophilic fungus on the production performance and immune responses in broiler chickens / MK.Huang, YJ. Choi, R. Houde et al. //Poult Sci.- 2004.- T.83, №5.- P.788-795.

108. Isolauri E. Oral bacteriotherapy for viral gastroenteritis / E. Isolauri, M. Kaila, H. Mykkanen et al. // Dig. Dis. Sci. 1994. - Vol.39. - P.2595-2600.

109. Isolauri E. Probiotics in human disease // Am.J.Clin.Nutr. 2001. -Vol.73.-P. 1142-1146.

110. Isolauri E. Probiotics: a role in the treatment of intestinal infection and inflammation? /Е. Isolauri, PV. Kirjavainen, S. Salminen // Gut. 2002. - №50. -P.54-59.

111. Isolauri E. Microbial-gut interactions in health and disease. Probiotics. / E. Isolauri, S. Salminen, A.C. Ouwehand // Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. -2004. Vol.18, №2. - P.299-313.

112. Jadamus A. Growth behaviour of a spore forming probiotic strain in the gastrointestinal tract of broiler chicken and piglets / A. Jadamus, W. Vahjen, O. Simon // Arch. Tierernahr. 2001. - Vol.54, № 1. - P. 1-17.

113. Jin LZ. Digestive and bacterial enzyme activities in broilers fed diets supplemented with Lactobacillus cultures / LZ. Jin, YW. Ho, N. Abdullah, S. Jalaludin // Poult Sci. 2000. - Vol.79, №6. - 886-891.

114. Kabir A.M. Prevention of Helicobacter pylori infection by Lactobacilli in a gnotobiotic murine model / A.M. Kabir, Y. Aiba, A. Takagi et al. // Gut. -1997.- Vol.41. -P.49-55.

115. Kaila M. Enhancement of the circulating antibody secreting cell response in human diarrhea by a human lactobacillus strain / M. Kaila, E. Isolauri, E. Soppi et al. //Pediatr Res. 1992. - Vol.32. - P.141-144.

116. Kruis W. Double-blind comparison of an oral Escherichia coli preparation and mesalazine in maintaining remission of ulcerative colitis / W. Kruis, E. Schutz, P. Fric et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. 1997. - Vol.11. -P.853-858.

117. Kyriakis S.C. The effect of probiotic LSP 122 on the control of post-weaning diarrhoea syndrome of piglets / S.C. Kyriakis, V.K. Tsiloyiannis, J. Vlemmas et al. // Res.Vet.Sci. 1999. - Vol.67, № 3. - P.223-228.

118. Lee K.H. Partial characterization of polyfermenticin SCD, a newly identified bacteriocin of Bacillus polyfermenticus / K.H. Lee, K.D. Jun, W.S. Kim, H.D. Paik // Lett. Appl. Microbiol. 2001. - Vol.32, № 3. - P.146-151.

119. Leonhardt H. Parameters affecting plasmid stability in Bacillus subtilis / H. Leonhardt, JC. Alonso // Gene. 1991. - Vol. 103, № 1. - P. 107-111.

120. Lestradet H. Probiotiques: le Bacillus CIP 5832 chez l'homme et l'animal // Med. Chirur. Dig. 1995. - Vol.24. - P.37-39.

121. Majarmaa H. Probiotics: a novel approach in the management of food allergy / H. Majarmaa, Isolauri E. // J.Allergy Clin Immunol. 1997. - Vol.99. -P.179-186.

122. Marmur J. A Procedure for the Isolation of Deoxyribonucleic Acid from Micro-organisms II J. Mol. Biol. 1961. - Vol.3. - P.208-218.

123. Marsalkova S. Testing two Lactobacillus plantarum and Lactobacillus acidophilus strains for their suitability as a lipoid probiotic / S. Marsalkova, M. Cizek, M. Vasil et al. // Berl Munch Tierarztl Wochenschr. 2004. - Vol.l 17, №34. - P.145-147.

124. Marteau P. Probiotic and intestinal health effects: a clinical perspective / P. Martenau, P. Seksik, R. Jian // British Journal of Nutrition. 2002. - № Suppl. 1. - P.S51-S57.

125. Mazza P. Studies on the antibiotic resistance of Bacillus subtilis strains used in oral bacteriotherapy / P. Mazza, F. Zani, P. Martelli // Boll. Chim. Farm. -1992.-Vol.131.-P.401-408.

126. Mazza P. The use of Bacillus subtilis as ail antidiarrhoeal microorganism // Bull. Chim. Farm. 1994. - Vol.133. - P.3-18.

127. McFarland L.V. Prevention of beta-lactam-associated diarrhea by Saccharomyces boulardii compared with placebo / L.V. McFarland, C.M. Surawicz, R.N. Greenberg et al. // Am. J. Gastroenterol. -1995. -Vol.90. P.439-448.

128. McGilliard M.L. Increase in milk yield of commercial dairy herds fed a microbial and enzyme supplement / M.L. McGilliard, C.C. Stallings // J.Dairy.Sci. 1998. - Vol.81, № 5. - P.1353-1357.

129. Midolo P.D. In vitro inhibition of Helicobacter pylori NCTC 11637 by organic acids and lactic acid bacteria / P.D. Midolo, J.R. Lambert, R. Hull et al. // J. Appl. Bacteriol. 1995. - Vol.79. - P.475-479.

130. Nemcova R. Criteria for selection of lactobacilli for probiotic use // Vet. Med (Praha). 1997. - Vol.42, №1. - P.19-27.

131. Niedzielin K. Therapeutic usefulness of "ProViva" solution in the treatment of irritable bowel syndrome and hemorrhoids / K. Niedzielin, H.

132. Kordecki // Presented at the Symposium of Gastroenterology Heiligenstadt, Germany, 1996.

133. Nicholson WL. Roles of Bacillus endospores in the environment //Cell Mol. Life Sci. 2002. - Vol.59, №3. - P.410-416.

134. Nikoskelainen S. Characterization of the Properties of Human- and Dairy-Derived Probiotics for Prevention of Infectious Diseases in Fish / S. Nikoskelainen, S. Salminen, G. Bylund, A.C. Ouwehand // Appl. and Environ.

135. Microbiol. 2001. - Vol.67, № 6. - P.2430-2435.

136. Nord C.E. Antimicrobial induced alterations of the human oropharyngeal and intestinal microflora / C.E. Nord, A. Heimdal, L. Kager // Scand. J. Infect. Dis. 1986,-Vol.49.-P.64-72.

137. Ciabattini, A.M. Cuppone, G. Pozzi // Vaccine. 2003. - Vol.21, Suppl.2. - P.S96-S101.

138. Orrhage K. Binding of mutagenic heterocyclic amines by intestinal and lactic acid bacteria / K. Orrhage, E. Sillerstrom, J.A. Gustafsson et al. // Mutat.Res. 1994. - Vol.311. - P.239-248.

139. Orrhage K. Bifidobacteria and lactobacilli in human health / K. Orrhage, SE. Nord // Drugs Exp.Clin.Res. 2000. - Vol.26, №3. - P.95-111.

140. Ouwehand AC. Adhesion of inactivated probiotic strains to intestinal mucus / AC. Ouwehand, S. Tolkko, J. Kulmala, E. Salminen // Lett. Appl. Microbiol. 2000. - Vol.31, №1. - P.82-86.

141. Ouwehand AC. Probiotics: an overview of beneficial effects / AC. Ouwehand, S. Salminen, E. Isolauri // J. Microbiol. 2003. - Vol.41, №2. - P.63-72.

142. Palva I. Secretion of interferon by Bacillus subtilis / I. Palva, P. % Lenhtovaara, L. Kaariainen et al. If Gene. 1983. - Vol.22. - P.229-235.

143. Perdigon G. Systemic augmentation of the immune response in mice by feeding fermented milks with Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus / G. Perdigon, M.E. de Maci'as, S. Alvarez et al. // Immunology. 1998. - Vol.63. -P. 17-23.

144. Perdigon G. Lactic Acid Bacteria and their Effect on the Immune System / G. Perdigon, R. Fuller, R. Raya // Current Issues in Intestinal Microbiology. -2001.-Vol.2, №l.-P.27-42.

145. Pettoello M.M. Lactose malabsorption in children with symptomatic Giardia Iamblia infection: feasibility of yoghurt supplementation / M.M. Pettoello, S. Guandalini, P. Ecuba et al. // J.Pediatr.Gastroenterol. 1989. - Vol.9.- P.295-230.

146. Prokesova L. Immunostimulatory effect of Bacillus firmus on mouse lymphocytes / L. Prokesova, P. MIckova, I. Stankova et al. // Folia Microbiol (Praha) 2002. Vol.47, №2. - P.193-197.

147. Pinchuk IV. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis is due to secretion of antibiotics / IV. Pinchuk, P. Bressollier, B. Verneuil et al. // Antimicrob Agents Chemother. 2001. - Vol.45, №11. - P.3156-3161.

148. Rautava S. Probiotics during pregnancy and breast-feeding might confer immunomodulatory protection against atopic disease in the infant / S. Rautava, M, Kaalliomaki, E. Isolauri //J. Allergy Clin. Immunol. 2002. - Vol.109, №1. -P.l 199-1210.

149. Reid G. The Scientific Basis for Probiotic Strains of Lactobacillusш II Appl. and Environ. Microbiol. 1999. - Vol. 65, № 9. - P.3763-3766.

150. Reuter G. The Lactobacillus and Bifidobacterium microflora of the human intestine: composition and succession // Curr. Issues Intest.Microbiol. -2001.-Vol.2, №2.-P.43-53.

151. Rolfe R.D. The role of probiotic cultures in the control of gastrointestinal health // J.Nutr. 2000. - Vol.130, № 2 S (Suppl). - P.396S-402S.

152. Rowland I. Probiotics and benefits to human health the evidence infavour//Environ. Microbiol. 1999. - Vol.1. - P.375-382.

153. Ruseler M.V. Instability of the pouch flora: cause of pouchitis / M.V. Ruseler, J.G.H. Van Embden, M.P. Hazenberg et al. // Microecol. Ther. 1995. -Vol.23.-P.81-88.

154. Saavedra JM. Microbes to fight microbes: a not so novel approach to controlling diarrheal disease // J.Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1995. - №21.1. Щ. P.125-129.

155. Saavedra JM. Probiotics plus antibiotics: Regulating our bacterial environment //J.Pediatrics. 1999. - Vol.135, №5. - P.564-566.

156. Saavedra JM. Clinical studies of probiotic agents / JM. Saavedra, A. Abi-Hanna // In: Hanson L, Yolken RH, editors. Probiotics. Other nutrition factors, and intestinal microflora. Philadelphia: Lippinsott-Raven; 1999. P.271-286.

157. Saavedra JM. Clinical application of probiotic agents // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - Vol.73, №6. - P. 1147S-115IS.

158. Salminen S. Clinical uses of probiotics for stabilizing the gut mucosal barrier: successful strains and future challenges / S. Salminen, E. Isolauri, E. Salminen // Antonie Van Leeuwenhoek. 1996. - Vol.70. - P.347-358.

159. Sanders M.E. Sporeformers as Human Probiotics: Bacillus, Sporolactobacillus and Brevibacillus / M.E. Sanders, L. Morelli, T.A. Tompkins // Comprehensive reviews in food science and food safety. 2003. - Vol.2. - P. 101110.

160. Scevola D. Lactitol and neomycin: monotherapy or combined therapy in the prevention and treatment of hepatic encephalopathy / D. Scevola, A. Zambelli, E. Concia et al. // Clin. Ther. 1989. - Vol.129. - P. 105-111.

161. Schiffrin E.J. Immunomodulation of human blood cells following the ingestion of lactic acid bacteria / E.J. Schiffrin, F. Rochat, H. Link-Amster et al. // J. Dairy Sci. 1994. - Vol.78. - P.491-497.

162. Senesi S. Molecular Characterization and Identification of Bacillus clausii Strains Marketed for Use in Oral Bacteriotherapy / S. Senesi, F. Celandroni, A. Tavanti, E. Ghelardi // Appl. and Environmen. Microbiol. 2001. - Vol.67, №2. - P.834-839.

163. Seyler R.W. Stability of pUB 110 and pUB 110-derived plasmids in Bacillus sphaericus 2362 / R.W. Seyler, A.A. Yousten, T.S. Thai et al. //Appl.Microbiol.Biotechnol. 1993. - V.39. - P.520-525.

164. Shroff K.E. Commensal enteric bacteria engender a self limiting humoral mucosal immune response while permanently colonizing the gut / K.E. Shroff, K. Meslin, J.J. Cebra// Infect. Immun. 1995. - Vol.63. - P.3904-3913.

165. Simmering R. Pro- and prebiotics the tasty guardian angels? / R. Simmering, M. Blaut // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2001. - Vol.55, №1. - P. 1928.

166. Slepykh N1. Effectiveness of sporobacterin in the prevention and treatment (of postoperative wound infections) / N1. Slepykh, AA. Tret'iakov, AA. Stadnikov, SV. Petrov // Vestn. Khir. Im 11 Grek. 2003. Vol.162, №1. - P.65-69.

167. Smith M.A. Bacterial fitness and plasmid loss: the importance of culture conditions and plasmid size / M.A. Smith, M.J. Bidochka U Can. J. Microbiol. -1998.- Vol.44. -P.351-355.

168. Sorokulova I.B. Probiotics against Campylobacter Pathogens / I.B. Sorokulova, D.L. Kirik, I.V. Pinchuk // J. Travel. Med. 1997. - Vol.4, № 4. -P.167-170.

169. Spinosa M.R. On the fate of ingested Bacillus spores / M.R. Spinosa, T. Braccini, E. Ricca et al. // Res. Microbiol. 2000. - Vol.151, № 5. - P.361-368.

170. Steidler L. Neirynck S. In situ Delivery of Therapeutic Proteins by ^ Recombinant Lactococcus lactis / L. Steidler, S. Neirynck // J. Microbiology.2003. Vol.41, №2. - P.63-72.

171. Siitas Y. Downregulation of antiCD3 antibody-induced IL-4 productionby bovine caseins hydrolysed with Lactobacillus GG-derived enzymes / Y. Siitas, M. Hurme, E. Isolauri // Scand J. Immunol. 1996. - Vol.43. - P.687-689.

172. Tachikawa T. Estimation of probiotics by infection model of infant rabbit with enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7 / T. Tachikawa, G. Seo, M. Nakazawa et al. // Kansenshogaku Zasshi. 1998. - Vol.72. - № 12. - P.1300-1305.

173. Tarasenko VS. Experimental-clinical basis for using sporobacterin in the ф combined treatment of pancreonecrosis / VS. Tarasenko, VI. Nikitenko, AA.

174. Stadnikov // Vestn. Khir. Im 11 Grek. 2002. Vol.161, №1. - 72-75.

175. Tournot J. Applications of probiotics to animal husbandry // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. 1989. - Vol.8. - P.551-566.

176. Tuomola E. Quality assurance criteria for probiotic bacteria / E. Tuomola, R. Crittenden, M. Playne et al. // Am. J. Clin. Nutrition. 2001. - Vol.73, № 2. - P.393s-398s, Suppl.

177. Urao M. Does probiotic administration decrease serum endotoxin levelsmin infants? / M. Urao, T. Fujimoto, GJ. Lane et al. // J. Pediatr Surg. 1999. -Vol.34, №2. - P.273-276.

178. Vanbelle M. Probiotics in animal nutrition: a review / M. Vanbelle, E. Teller, M. Focant // Arch. Tierernahr. 1990. - Vol.40, №7. - P.543-567.

179. Van der Werf MJ. Bifidobacteria: genetic modification and the study of their role in the colon / MJ. Van der Werf, K. Venema // J. Agric. Food Chem. -2001. Vol.49, №1. - P.378-383.

180. Wagner R.D. Biotherapeutic effects of probiotic bacteria on candidiasis in immunodeficient mice / R.D. Wagner, C. Pierson, T. Warner et al. // Infect. Immun. 1997. - Vol.65. - P.4165-4172.

181. Williams JE. Portal to the Interior: Viral Pathogenesis and Natural Compounds that Restore Mucosal Immunity and Modulate Inflammation // Alternative Medicine Review. 2003. - Vol.8, №4. - P.395-409.

182. Whitley RJ. Herpes simplex virus infections / Whitley RJ., Roizman B. //The Lancet. 2001. - Vol.357, Issue 9267. - P.1513-1518.

183. Yasui H. Detection of Bifidobacterium strains that induce large quantities of IgA / H.Yasui, N. Nagaoka , A. Mike et al. // Microb. Ecol. Health Dis. 1992. - Vol.5.-P.155-162.

184. Zhao HY. Intestinal microflora in patients with liver cirrhosis / HY. Zhao, HJ. Wang, Z. Lu, SZ. Xu // Chin. J. Dig. Dis. 2004. - Vol. 5, №2. - P.64-67.

185. Zidek Z., et al. Stimulation of macrophages by Bacillus firmus: production of nitric oxide and cytokines // Int.J.Immunopharmacol. 1998. -Vol.20, № 7. - P.359-368.

186. Zoppi G. Probiotics, prebiotics, synbiotics and eubiotics //Pediatr.Med.Chir. 1998. - Vol.20, №1. - P. 13-17.