Конструирование нового многокомпонентного пробиотика и использование его в комплексной терапии хеликобактер-ассоциированных заболеваний тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Белова, Ирина Викторовна

• Белова, Ирина Викторовна
• кандидат биологических наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Белова, Ирина Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Пробиотики.

1.1.1. Современное представление о составе, свойствах и оздоравливающем эффекте пробиотиков.

1.1.2. Принципы конструирования бактерийных препаратов.

1.2. Хеликобактер-ассоциированные заболевания и место бактерийных препаратов в их лечении.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2Л. Штаммы бактерий и их характеристика.

2.2. Питательные среды и препараты, использованные в работе.

2.3. Методы, использованные для характеристики биологических свойств штаммов.

2.3.1. Изучение уровней и спектра антибиотикорезистентности методом серийных разведений на твердой и жидкой среде.

2.3.2. Изучение антагонистической активности методом отсроченного антагонизма.

2.4. Изучение биологических свойств готового препарата.

2.5. Характеристика групп наблюдения при проведении клинических испытаний созданного препарата.

2.6. Методы оценки клинической эффективности.

2.6.1. Методы клинических исследований.

2.6.2. Бактериологическое исследование фекалий.

2.6.3. Анкетирование.

2.7. Статистическая обработка полученных результатов.

ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ НОВОГО ПРОБИОТИКА.

3.1. Результаты изучения антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий.

3.2. Результаты изучения спектров и уровней антибиотикорезистентности штаммов-продуцентов.

3.3. Подбор композиции штаммов для нового многокомпонентного пробиотика.

3.4. Совершенствование состава питательной среды для выращивания штаммов-продуцентов.

3.4.1. Сравнительная характеристика питательных сред по ростовым свойствам штаммов-продуцентов.

3.4.2. Подбор оптимальной концентрации витамина С в среде.

3.5. Изучение сроков годности готового препарата.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКОЙ АПРОБАЦИИ ПРЕПАРАТА.

4.1 Оценка эффективности включения пробиотика в схему лечения язвенной болезни в стадии обострения.

4.2 Оценка эффективности включения пробиотика в схемы реабилитационной терапии больных после ушивания перфоративных язв двенадцатиперстной кишки и желудка.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конструирование нового многокомпонентного пробиотика и использование его в комплексной терапии хеликобактер-ассоциированных заболеваний»

Актуальность проблемы.

Для современного периода характерно чрезвычайное многообразие неблагоприятных факторов, воздействующих на организм человека: нерациональное, неполноценное питание, постоянные психоэмоциональные нагрузки, экзогенные повреждающие вещества химической и физической природы (токсичные соединения в воде, воздухе, пище, канцерогены, электромагнитные излучения и т.д.). Это приводит к значительным нарушениям в состоянии здоровья людей: к истощению адаптационных и компенсаторных механизмов, нарушению обмена веществ, развитию различных форм заболеваний и сокращению продолжительности жизни. Множество клинических синдромов и патологических состояний могут быть связаны с изменениями состава и функций микрофлоры, которая является мишенью воздействия многих факторов окружающей среды (И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук, 1979; В.Н. Красноголовец, 1989; Г.И.Гончарова, 1991). Поскольку частота распространения дисбактериозов в России достигает 90%, необходимо применение средств, восстанавливающих нормальную микрофлору (В.М. Бондаренко, А.А.Воробьев, 2004; Е.М. Горская, 1994; В.И. Покровский, O.K. Поздеев, 1999).

В настоящее время во многих странах мира, в том числе и в России, разрабатываются и все более широко внедряются в медицинскую практику пробиотики на основе живых микроорганизмов (в монокультуре или в комбинации). Они являются наиболее используемыми средствами коррекции нарушений микробной экологии человека. Хотя первоначально эти препараты и продукты разрабатывались преимущественно с целью повышения колонизационной резистентности хозяина для профилактики и лечения традиционных инфекционных заболеваний кишечника, в последнее время перечень показаний к их применению в клинической практике существенно расширился (К.Я. Соколова, И.В. Соловьева, 1999; Б.А. Шендеров, 2001; Н.М. Грачева, В.М. Бондаренко, 2004).

В литературе имеются данные об антагонистической активности лактобацилл по отношению к хеликобактериям. Использование различных штаммов лактобацилл и бифидобактерий как в схемах с антибиотиками, так и без них приводит к элиминации хеликобактерий из организма и выраженной клинической эффективности «экологической» терапии гастритов и дуоденитов (В.М. Бондаренко, А.А. Воробьев, M.JI. Гершанович и др., 2004; М.-Н. Coconnier, Y. Lievin, M.-F. Bernet-Camarad, et al., 1997). Интерес к данной проблеме не случаен, так как хеликобактериоз является наиболее распространенной хронической бактериальной инфекцией человека, колонизируя 50-60% всего населения земли. У большинства людей заражение происходит в молодом возрасте, до 20 лет.

H.pylori - это необычный патоген. У большинства зараженных лиц клинические проявления болезни не развиваются в течение всей жизни, хотя при исследовании слизистой оболочки желудка выявляется хронический гастрит. Число пациентов с язвенной болезнью и раком желудка составляет менее 1% от общего числа инфицированных. Нормальное состояние слизистой оболочки желудка у людей, зараженных H.pylori встречается еще реже. Таким образом, в абсолютном большинстве случаев инфицирование H.pylori ограничивается развитием хронического активного гастрита, который относительно редко переходит в другие заболевания (В.В. Чернин, В.М. Червинец, В.М. Бондаренко и др.,2004). При язвенной болезни H.pylori обнаруживается в 70-80% случаев язвы двенадцатиперстной кишки и 50-60% случаев язвы желудка (Е.С. Рысс, Э.Э. Звартау, 1998; В.А. Исаков, И.В. Домарадский, 2003; L.A. Noach, G.N. Tytgat, 1994).

Признание этиологической роли H.pylori в развитии язвенной болезни, широкая распространенность хеликобактериозов привело к использованию в их терапии комплекса антибактериальных препаратов широкого спектра действия, что, без сомнения, является показанием к применению пробиотиков в схемах лечения этих заболеваний. Расширение сферы применения пробиотиков связано как с выявлением новых позитивных эффектов у известных пробиотиков, так и с разработкой новых препаратов со специфическими лечебно-профилактическими характеристиками (А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров, 2002). Потребность в дальнейших исследованиях фундаментального характера для создания пробиотиков связана с тем, что остается еще много неясного в механизмах их действия: несмотря на многочисленные исследования, механизмы иммуномодулирующего действия микроорганизмов раскрыты не полностью, по-прежнему актуальны вопросы «приживляемости» пробиотических штаммов в организме человека и многие другие. В целях повышения эффективности пробиотиков ведутся исследования прикладного характера, направленные, в основном, на поиск новых штаммов, обладающих более выраженной антагонистической активностью к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам (с учетом выраженной изменчивости последних); на создание композиций из вновь отобранных штаммов, обладающих синергетическим действием; на изучение устойчивости выбранных штаммов к антибактериальным препаратам (H.A. Глушанова, 2003; В.М. Лахтин, В.В. Поспелова и др., 2004), поскольку назрела необходимость одновременного назначения антимикробных средств с бактериотерапией (данные литературы последних лет свидетельствуют о том, что старая тактика лечения дисбактериоза — сначала антибиотик, потом препараты нормофлоры малоэффективна); наряду с усовершенствованием способов и технологий лиофильного высушивания пробиотических препаратов ведутся работы по конструированию и производству жидких форм, обладающих большей биологической активностью. Однако, проблема создания жидкого пробиотика с достаточно большим количеством живых микробных клеток и длительным сроком хранения, который можно применять параллельно с антибактериальными средствами, по-прежнему актуальна.

Цель работы:

Конструирование нового многокомпонентного пробиотика на основе лакто- и бифидобактерий и изучение его эффективности в комплексной терапии хеликобактер-ассоциированных заболеваний (на примере язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и язвенной болезни желудка).

Задачи исследования:

1. Изучить антагонистические свойства штаммов лакто- и бифидобактерий в отношении тест-культур и свежевыделенных патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

2. Определить антибиотикорезистентность штаммов лакто- и бифидобактерий к наиболее часто используемым антибиотикам (в том числе к средствам эрадикационной терапии Н.ру1оп-инфекции).

3. На основе изученных свойств подобрать штаммы-продуценты для создания комплексного бактерийного препарата, отвечающего всем требованиям, предъявляемым к препаратам-пробиотикам.

4. Разработать схему приема нового пробиотика "ЬВ-комплекс." параллельно с антибиотиками с учетом антибиотикорезистентности штаммов, входящих в препарат и фармакокинетики противомикробных средств базисной терапии.

5. Изучить эффективность предложенной схемы на примере хеликобактер-ассоциированных заболеваний.

Научная новизна.

1. На модифицированной гидролизатно-молочной основе сконструирован многокомпонентный жидкий пробиотик «ЬВ-комплекс» из штаммов лакто- и бифидобактерий с высокими антагонистическими свойствами.

2. Штаммы, входящие в «ЬВ-комплекс» обладают устойчивостью к широкому кругу антибактериальных средств, в том числе к препаратам с антихеликобактерной активностью. Композиция подобранных штаммов позволяет использовать препарат с большим числом антибиотиков по сравнению с отдельными штаммами.

3. Обоснована целесообразность включения «ЬВ-комплекс» в схемы лечения язвенной болезни. Положения, выносимые на защиту

1. Многокомпонентный пробиотик «ЬВ-комплекс» обладает устойчивостью к широкому кругу антибактериальных средств за счет свойств штаммов-продуцентов, входящих в состав препарата.

2. Применение «ЬВ-комплекса» совместно с антихеликобактерной терапией необходимо проводить с учетом фармакокинетики отдельных антибиотиков.

3. Включение «ЬВ-комплекса» в схемы антихеликобактерной терапии позволяет повысить эффективность эрадикации Н.ру1оп, снизить активность и выраженность гастрита, восстановить эубиоз толстого кишечника при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Научно-практическая значимость работы

Результаты исследования позволили сконструировать новый многокомпонентный жидкий пробиотик, зарегистрированный как биологически активная добавка к пище (регистрационное удостоверение №003452.Р.643.04.2002)

Разработана и утверждена документация ТУ 9291 - 002 - 01966979-02 и ТИ к ТУ 9291 - 002 - 01966979-02 на него.

Получено разрешение на производство препарата. Налажен лабораторно-производственный выпуск «ЬВ-комплекса». Препарат широко апробирован при разных нозологических формах заболеваний, в том числе и при язвенной болезни.

Отработана оптимальная схема использования "ЬВ-комплекса" в курсе антихеликобактерной терапии.

Внедрение результатов работы в практику.

Разработана и утверждена в Министерстве здравоохранения РФ нормативно-техническая документация на препарат. Налажен лабораторно-производственный выпуск препарата. «ЬВ-комплекс» широко применяется в лечебно-профилактических учреждениях Нижнего Новгорода и области: в Городской клинической больнице №5, в Гастроэнтерологическом центре отделенческой больницы ст. Горький-Сортировочный, в санатории им. ВЦСПС, в детской городской больнице №27 «Айболит», в детской городской больнице №1, в областном противотуберкулезном диспансере и др. Общие принципы конструирования пробиотиков, перспективы их совершенствования, показания к применению и эффективность использования пробиотиков в клинической практике представлены в книге для практического врача «Диагностика и биокоррекция нарушений антиинфекционного гомеостаза в системе «Мать-дитя»» (2004).

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Белова, Ирина Викторовна

выводы

1. Сконструирован новый многокомпонентный пробиотик «ЬВ-комплекс» из бифидобактерий В.ЫМит 1, В.Ы;Г1с1ит 791 и лактобацилл Ь.р1агйагит 8Б1А-3, Ь^егтепШт 39, обладающий высокими антагонистическими свойствами по отношению к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам.

2. «ЬВ-комплекс», в качестве жидкой составляющей которго используется модифицированная гидролизатно-молочная среда ГМС, обладает хорошими органолептическими свойствами, не оказывает аллергизирующего действия и содержит высокое число живых микробных клеток в 1 мл.

3. Терапевтическая доза «ЬВ-комплекса» составляет 3-5 мл и не меняет органолептических свойств пищевых продуктов (сока, каши, кефира, творога, молока и др.)

4. Штаммы-продуценты обладают резистентностью к антимикробным средствам, наиболее часто используемым при антихеликобактерной терапии, что позволяет назначать изготовленный из них препарат параллельно с базисной терапией при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

5. Использование "ЬВ-комплекса" в схеме антихеликобактерной терапии повышает эффективность эрадикации Н.ру1оп, снижает активность и выраженность воспалительных изменений в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки, восстанавливает эубиоз толстой кишки при язвенной болезни.

6. Включение «ЬВ-комплекса» в программу реабилитационных мероприятий повышает эффективность эрадикации Н.ру1оп, улучшает качество жизни больных и сокращает восстановительный период лечения после ушивания перфоративных гастродуоденальных язв.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Многочисленные исследования по изучению структуры микробиоценозов, частоты и причин возникновения нарушений микрофлоры в различных биотопах человека подтвердили чрезвычайно высокую распространенность дисбактериозов среди населения от 70 до 90%, что диктует необходимость разработки и широкого внедрения новых медицинских технологий при проведении лечебных и оздоровительных мероприятий, как среди взрослых, так и среди детей. Установлено, что дисбактериоз редко протекает как самостоятельное заболевание, чаще всего он отягощает течение других патологических процессов, и для восстановления нормального микробного пейзажа требуется комплексный подход при составлении лечебных и реабилитационных программ. Очень важным является использование многокомпонентной целостной программы, включающей воздействие на основной патологический процесс, на фоне которого развился дисбактериоз кишечника, организацию правильного питания, детоксицирующую терапию, коррекцию ферментной недостаточности, общеукрепляющую и иммуномодулирующую терапию, а также восстановление микробиоценоза с помощью препаратов нормофлоры.

В настоящее время признано, что основным средством восстановления облигатной микрофлоры являются эу-, про- и пребиотики, т.е. непосредственно живые микроорганизмы, представители постоянной микрофлоры, а также вещества, оказывающие влияние на их размножение в кишечнике, адгезию и восстановление общей среды содержимого кишечника.

Современный российский рынок наполнен разнообразными пробиотиками как отечественного, так и импортного производства, содержащие самые разнообразные штаммы бактерий. Наиболее часто такие препараты сконструированы на основе микробов молочнокислого брожения: лакто- и бифидобактерий, стрептококков и других.

Анализируя литературу, посвященную этой проблеме, мы видим, что исследователи придерживаются разнообразных, иногда крайне противоположных взглядов на целесообразность использования тех или иных пробиотических препаратов. Одни отдают предпочтения препаратам, содержащим один штамм, другие - поликомпонентным. В последние годы наряду с монопрепаратами все шире используются многокомпонентные препараты, содержащие штаммы бактерий, относящиеся к разным таксономическим группам. Создание таких пробиотиков направлено на преодоление бионесовместимости предлагаемого средства с индигенной микрофлорой человека, увеличение спектра антагонистической активности, в первую очередь в отношении условно-патогенных микроорганизмов, а также расширение сферы применения бактериальной терапии.

Нужно отметить, что с целью повышения эффективности бактериотерапии в медицинской практике стали шире использовать жидкие пробиотики («Бифидумбактерин нативный жидкий», «Биовестин», «Биовестин лакто», «Эуфлорин»), которые выгодно отличаются от сухих форм тем, что клетки микроорганизмов, находясь в жидком субстрате, пребывают в активном состоянии. В лиофильно же высушенных препаратах бактерии пребывают в глубоком анабиозе и имеют сниженную биологическую активность, и им требуется 8-10 часов для перехода к активному физиологическому состоянию, но к этому времени большая их часть уже может естественным образом элиминироваться из кишечника. Этот факт подтвержден нами при исследованиях in vitro. Другие исследователи также подтверждают снижение антагонистической активности лиофилизированных пробиотиков по сравнению с жидкими формами. Так в работе Глушановой H.A. (2004) также на моделях in vitro продемонстрировано, что лиофилизированные микроорганизмы подавляют тест-штаммы в 9% случаев, тогда как жидкие пробиотики в 70%. Кроме того, при исследованиях in vivo отмечается слабая колонизирующая способность дегидратированных бактерий.

И это понятно, так как кроме живых бактерий, жидкие пробиотики содержат продукты их жизнедеятельности, полезные для организма человека: незаменимые аминокислоты, витамины, ферменты, органические кислоты, антибиотикоподобные субстанции, иммуномодулирующие (в том числе интерферонстимулирующие) и другие биологически активные вещества.

Эти два фактора - живые бактерии и продукты их метаболизма, оказывающие регуляторное действие на эукариотические клетки всех тканей и органов хозяина, - обеспечивают высокий терапевтический эффект и делают жидкие пробиотики весьма привлекательными для использования в медицине, несмотря на некоторые сложности при хранении и транспортировке.

Из жидких форм наибольшее распространение получили кисломолочные продукты, обогащенные в качестве защитных факторов живыми лакто- и бифидобактериями.

В предыдущие годы в нашей лаборатории сконструирован лечебный продукт - «Бифилакт кисломолочный» на основе этих микроорганизмов. На территории Нижнего Новгорода и Нижегородской области этот кисломолочный продукт выпускался на базе молочных кухонь. Он хорошо зарекомендовал себя, однако его использование требовало ежедневного получения на пунктах раздатки. Как правило, назначали «Бифилакт кисломолочный» только детям первых лет жизни, получающим питание на молочных кухнях. Но потребности в нем были значительно шире. В настоящее время острота проблемы обеспечения кисломолочными продуктами, обогащенными защитными факторами снята, так как и врачи и население восприняли идею их благотворного влияния на здоровье. Однако, несмотря на всеобщее признание пользы и оздоравливающее действие продуктов, содержащих лакто- и бифидобактерии, и широкое распространение большого количества видов кисломолочной продукции различных фирм «Вимм-билль-данн», «Данон» и др. остается проблема обеспечения населения пробиотическими препаратами. Современные пробиотические препараты в отличие от кисломолочных продуктов имеют более жесткие требования к стерильности, не содержат других кисломолочных микроорганизмов кроме штаммов-продуцентов, не содержат белка молока и лактозы, к которым нередко наблюдаются аллергические реакции. Как правило, в одной дозе бактерийного препарата содержится не менее 1x109 КОЕ/мл, что чрезвычайно важно для активной и более полной коррекции микробиоценоза, поскольку известно, что сформировавшийся дисбактериоз трудно поддается лечению. Для полного выздоровления с восстановлением эубиоза требуется достаточно длительное время заместительной терапии. Принимая во внимание, что в последние годы на фоне экологического неблагополучия возрастает число детей и взрослых с различными аллергическими заболеваниями, обусловленными и непереносимостью белка коровьего молока, и другими ферментопатиями, среди которых наибольшее распространение имеет лактозная недостаточность, мы решили сконструировать комплексный препарат на безмолочной основе. В качестве основы пробиотика использована гидролизатно-молочная среда, в которой белок молока расщеплен до пептидов и аминокислот. В процессе конструирования пробиотика мы модифицировали стандартную среду ГМС: увеличили содержание аминного азота и заменили химический компонент L-цистин солянокислый на фармакопейный препарат - аскорбиновую кислоту. За счет модификации среды в готовом комплексе имеется большое число живых пробиотических

11 и микроорганизмов (10 -1(Г КОЕ/мл). Это позволило установить объем суточной терапевтической дозы для взрослого человека 5 мл в день, а для новорожденных - 2 мл. Малый объем «LB-комплекса» делает возможным внесение его в разнообразные пищевые продукты (молоко, соки, творог и др.) без изменения их органолептических свойств, что очень удобно для потребителей и, в частности, для больных в послеоперационном периоде. Замена химического реактива L-цистина на разрешенную фармкомитетом к приему per os аскорбиновую кислоту в основе пробиотика не только сохраняет ростовые свойства среды, но и позволяет принимать препарат в «чистом» виде. При этом была получена питательная основа с хорошими ростовыми свойствами, безаллергенная и пригодная для приготовления пробиотика, предназначенного к применению с первых дней жизни.

В состав препарата «ЬВ-комплекс» были отобраны два штамма лактобацилл (Ь.р1ап1агит 811А-3 и Ь.ГегтепШт 39) из коллекции лаборатории и включены два имеющихся в нашем распоряжении штамма бифидобактерий (В.ЫШшп 1 и В.Ыйс1ит 791).

Штаммы-продуценты показали высокую антагонистическую активность к свежевыделенным штаммам патогенных и условно-патогенных бактерий, в том числе из кишечника больных язвенной болезнью, осложненной дисбактериозом кишечника. Зона задержки роста испытуемых культур была больше, чем 5 см (не было роста тест-штаммов, хотя в контроле УПМ и ПМ росли прекрасно). Комплекс на основе выбранных лакто- и бифидобактерий обладает высокой антагонистической активностью по отношению к большому числу патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, циркулирующих в настоящее время на территории г.Нижнего Новгорода и Нижегородского региона. Несомненным преимуществом является и то, что пробиотик сконструирован в жидкой форме и обладает способностью немедленно после приема оказывать антагонистическое действие по отношению к возбудителям заболеваний.

Другим критерием отбора штаммов-продуцентов была их устойчивость к антибиотикам. Выбранные штаммы обладают широким спектром антибактериальной резистентности, не связанной с внехромосомными элементами. Комплексный пробиотик на основе отобранных микроорганизмов можно применять одновременно с налидиксовой кислотой, гентамицином, сульфаниламидами, тетрациклином, фуразолидоном, метронидазолом, де-нолом.

В отношении рифампицина, ампициллина и эритромицина штаммы, входящие в состав нового пробиотика обладают различной степенью чувствительности. Но комплексный препарат можно применять и на фоне приема указанных антибиотиков, поскольку в его составе всегда имеется хотя бы один штамм, устойчивый к действию данных лекарственных средств.

При изучении устойчивости штаммов-продуцентов к антихеликобактерным средствам мы сравнивали минимальные подавляющие концентрации для Н.ру1оп по литературным данным и результаты собственных исследований по МПК для лакто- и бифидобактерий с максимальными концентрациями антибиотиков в плазме крови (Стах). В итоге проведенного исследования мы установили, что максимальная концентрация некоторых антибиотиков, применяемых для лечения хеликобактер-ассоциированных заболеваний в плазме крови выше, чем МПК для некоторых штаммов-продуцентов, тем не менее, в «ЬВ-комплексе» всегда имеется штамм, устойчивый к действию данного антибиотика. Проанализировав полученные данные, мы обнаружили, что использование пробиотика, состоящего из изученных штаммов-продуцентов параллельно с антибиотиками возможно, но не одномоментно с приемом эрадикационных средств, а с учетом их фармакокинетики, например, в промежутке между приемами ампициллина (5-6 часов), то есть в 13-14 часов (антибиотики утром и вечером).

Таким образом нами сконструирован многокомпонентный жидкий пробиотик из лакто- и бифидобактерий, названный «ЬВ-комплекс» (регистрационное удостоверение №003452.Р.643.04.2002). Преимущество нового пробиотика заключается в сбалансированном химико-микробиологическом составе (оптимальная питательная среда, элитные производственные штаммы лакто- и бифидобактерий, биологически активные вещества микробного происхождения), и в отсутствии каких-либо синтетических компонентов (загустителей, стабилизаторов, ароматизаторов, подсластителей, биогенных стимуляторов и т.д.), способных оказывать побочное действие на организм (аллергические реакции, повреждающее действие на печень, почки и т.д.). При производстве «ЬВ-комплекса» культивирование штаммов-продуцентов лакто- и бифидобактерий осуществляют по единому способу - каждый штамм выращивается отдельно в три этапа. В конечный препарат идет третья генерация штаммов. По окончании культивирования биомассы отдельных штаммов смешивают предпочтительно в соотношении 1:1:1:1. Способ приготовления препарата и методы контроля качества подробно отражены в нормативно-технической документации (технические условия ТУ 9291 - 002 - 01966979-02 и технологическая инструкция производства биологически активной добавки к пище к ТУ 9291 - 002 - 01966979-01) (см. приложение).

Следует отметить, что замена дорогостоящего компонента питательной среды-основы на витамин С (1 кг витамина С стоит - 595р, тогда как 1кг солянокислого Ь-цистина - 7 953р) и исключение также недешевого этапа производства пробиотических препаратов и биологически активных добавок к пище - лиофильного высушивания - позволило значительно снизить стоимость «ЬВ-комплекса», а, следовательно, и минимального курсового лечения, рассчитанного на 25 дней (см. таблицу сравнительной стоимости ЬВ-комплекса и сухих пробиотиков в приложении).

Следующим этапом работы была клиническая апробация сконструированного пробиотика «ЬВ-комплекс» в специализированных гастроэнтерологических стационарах у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в стадии обострения, имеющих хронический антральный гастрит (тип «В»), бульбит и в отделении реабилитации санатория у больных в ранний период после ушивания перфоративной язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

У всех больных в период обострения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки до лечения был выявлен Н.ру1оп со слабой степенью контаминации слизистой оболочки желудка. У большинства больных определялся антральный гастрит слабой или умеренной активности, а выраженность воспалительных изменений соответствовала умеренной или выраженной степени. В слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки преобладал диффузный дуоденит 3-й степени в обеих группах. Дисбиоз микрофлоры кишечника был выявлен у 71% пациентов, из них у 29% были компенсированные нарушения микробиоценоза и у 42% субкомпенсированные; эубиоз выявлялся в 29% случаев. Через 6 недель после окончания лечения максимальная эрадикация Н.ру1оп у пациентов основной группы, получавших "ЬВ-комплекс" составила 96,8%, тогда как в контрольной группе всего 56,4%. Активность антрум-гастрита снизилась у 96,6% пациентов основной группы против 65,6% контрольной. Выраженность гастрита снизилась у 93,5% против 71,9% группы сравнения. У больных, получавших «ЬВ-комплекс» дуоденит 3-й степени не был выявлен, тогда как у пациентов, находящихся на базисной терапии он был обнаружен у 12,5% пациентов. После лечения эубиоз у пациентов основной группы отмечался в 83,3% случаев, дисбактериоз 3-й степени отсутствовал. В группе сравнения эубиоз диагносцировался у 43,3% и у 10% больных был выявлен дисбактериоз 3-й степени, характеризующийся резким снижением количества лакто- и бифидобактерий, ростом содержания УПМ.

Эффективность санаторно-курортной реабилитации в ранний период после ушивания перфоративных язв желудка и двенадцатиперстной кишки проанализирована у 182 больных, поступивших в отделение реабилитации санатория им. ВЦСПС. У большинства прооперированных больных (74,1%) в анамнезе имелись хронические заболевания желудочно-кишечного тракта и только 25,9% пациентов были прооперированы по поводу «острых» гастродуоденальных язв. До лечения в отделении реабилитации 75% пациентов предъявляли жалобы, характеризующие различную степень дисфункции пищеварительного тракта. Длительно текущее хроническое заболевание, обусловливающее прием медикаментозных препаратов, послужило причиной более частого обнаружения субкомпенсированных дисбиозов кишечника - у 89,5% всех пациентов. В оздоровительную программу входили: физическая реабилитация, включающая дифференцированный двигательный режим, дыхательную гимнастику, дозированные пешеходные прогулки; лечебное сбалансированное питание; бальнеофизиотерапия с использованием местных природных факторов — лечебной грязи и сульфатно-кальциево-магниевой воды; общепринятая медикаментозная терапия с включением пробиотика в основной группе. Все используемые при реабилитации факторы проявляют положительный синергизм и способствуют восстановлению организма как единого целого. Улучшение общего состояния, уменьшение явлений астенизации, возросшие адаптационные способности организма, улучшение деятельности желудочно-кишечного тракта (повышение аппетита, исчезновение диспептических явлений, уменьшение /исчезновение рефлюкс-синдрома, восстановление моторики желчевыводящих путей и кишечника) позволяют сделать вывод об эффективности предложенной программы реабилитационных мероприятий. Этот вывод подтверждают и данные объективных исследований: в процессе лечения улучшились (нормализовались) биохимические показатели деятельности гепато-панкреатической системы и желудка. По данным бактериологического исследования, проведенного после лечения эубиоз выявлен у 36,8% пациентов основной группы, дисбактериоз I степени — у 36,8%, дисбактериоз III степени не выявлен. В контрольной группе эубиоз выявлен у 39,7% больных, у 22,4% дисбактериоз II степени, и у 20% обследованных выявлен дисбактериоз III степени. Произошло заживление язв в основной группе (с пробиотиком) у 89%, эрозий у 100%, в первой контрольной (базис + бальнеофизиотерапия) группе у 80% пациентов, а во второй группе заживление язв произошло у 75% больных, эрозий у 85,7% и 63,3% соответственно. В двух контрольных группах после лечения были выявлены новые дефекты слизистых: во второй контрольной группе у 5% язвы и у 4,8% эрозии, в первой контрольной группе 3,9% язвы и 3,9% эрозии. В основной группе пациентов, получавших пробиотик, новые дефекты не были обнаружены.

Таким образом, включение пробиотика в стандартные схемы лечения хеликобактер-ассоциированных заболеваний позволило в значительной степени восстановить микрофлору желудочно-кишечного тракта пациентов с язвенной болезнью в стадии обострения, а у больных в послеоперационном периоде уменьшить негативное влияние антибактериальной терапии и улучшить состояние микрофлоры. Кроме того, использование «ЬВ-комплекса» в терапевтических схемах лечения язвенной болезни позволило повысить процент эрадикации Н.ру1оп.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Белова, Ирина Викторовна, 0 год

1. Ануфриева Р.Г., Заславская П.Л., Шендеров Б.А. Изменение в экологии и морфологии биопленки толстой кишки белых крыс под влиянием рифампицина. // Антибиотики. 1989. - Т.34.

2. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. -М.: «Триада-Х», 1998, 496 с.

3. Бакумов П.А. Современные антацидные средства: метод, рекоменд. / под ред. В.И. Петрова. Волгоград, 1997. - 15с.

4. Бережной В.В., Крамарев С.А., Мартынюк В.Ю., Отт В.Д., Шунько Е.Е., Янковский Д.С., Дымент Г.С. Микроэкологические нарушения у детей и современные возможности повышения эффективности их коррекции. // Здоровье женщины. 2002. - Т. 12, №4. - С.79-92.

5. Билибин А.Ф. Дисбактериоз, аутоинфекция и их значение в патологии // Клин. мед. 1970. - №2. - С. 7-9.

6. Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы М.: Медицина, 1979. - 175с.

7. Блюгер А.Ф., Паберза Р.Я., Новицкий И.Н. Клиническое значение количественного состава анаэробной и аэробной флоры микрофлоры кишечника при кишечных заболеваниях. // Метод, рекоменд. Рига, 1981. -9с.

8. Бондаренко В.М., Боев Б.В., Лыкова Е.А., Воробьев А. А. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998. - №1. - С. 6670.

9. Бондаренко В.М., Грачева Н.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов // Фарматека. -2003. №07. - С.56-63.

10. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериозы кишечника у взрослых // КМК Scientific Press. М., 2003. - 224с.

11. Бондаренко В.М., Воробьев А.А. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией // Журн. микробиол. 2004. - №1. - С. 84-92.

12. Бренц М.Я. Основные направления исследований по созданию сухих молочных смесей для детского и диетического питания // Консервная и овощесушильная промышленность. 1983. - № 12. - С. 7-9.

13. Васильев Ю.В. Нестероидная гастропатия // Лечащий врач. 2004. - №7. -С.6-10.

14. Верткин А.Л., Венгеров Ю.Я., Машарова A.A., Артамонов В.Е., Багатурия И.Ф. Дисбактериоз кишечника // Методические рекомендации. М., 1998. - 32с.

15. Веселов А.Я. Современные представления о нормальной микрофлоре пищеварительного тракта взрослого человека и изменениях ее в норме и при некоторых заболеваниях органов пищеварения. // Лаб. дело 1998.-N4.- С.3-11.

16. Вихирева З.Н. Клинические проявления дисбактериоза у новорожденных и грудных детей. М.: Медицина, 1983.

17. Воробьев A.A., Абрамов H.A., Бондаренко В.М. и др. Дисбактериозы -актуальные проблемы медицины // Вестн. Росс. АМН. 1997. - №3. - С. 4-7.

18. Воробьев A.A., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Журн. Микробиол. -1999. -№6. -С. 102-105.

19. Воробьев A.A., Бондаренко В.М., Лыкова Е.А., Григорьев A.B., Мацулевич Т.В. Микроэкологические нарушения при клинической патологии и их коррекция бифидосодержащими пробиотиками // Вестн. РАМН. 2004. - №2. - С. 13-17.

20. Глушанова H.A. Биологические свойства лактобацилл // Бюллетень сибирской медицины. 2003. №4. - С.50-58.

21. Голосова Т.В., Толкачева Т.В. и др. Диагностика дисбактериоза кишечника и его коррекция биологическими препаратами у взрослых больных острыми лейкозами // Метод, рекоменд. М., 1984. - 16с.

22. Гончарова Г.И., Козлова Э.П., Чистякова В.И. // «Проблемы микробиологии и иммунологии инфекционных болезней» сб. науч. трудов МНИИЭМ. М.; 1979. - Т. 22. - С.181.

23. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции: Дис. . д-ра. мед. наук. -М., 1994. 53с.

24. Грачева Н.М., Гончарова Г.И. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника // Метод, рекоменд. -М., 1986. 24 с.

25. Грачева Н.М., Ющук Н.Д., Чупринина Р.П. и др. Дисбактериозы кишечника, причины возникновения, диагностика, применение бактерийных биологических препаратов // Пособие для врачей и студентов. М., 1999. - 44 с.

26. Грачева Н.М., Бондаренко В.М. Пробиотические препарты в терапии и профилактике дисбактериоза кишечника // Инфекц. болезни. 2004. - №2, прил.2. - С. 53-58.

27. Григорьев A.B., Бондаренко В.М., Абрамов H.A. и др. Разработка и клиническая оценка пробиотика «Бифидумбактерин Форте» // Журн. микробиол. 1997. - №3. - С.92-96.

28. Гуськова Т.А., Пушкина Т.В. Дисбиотические состояния как побочные эффекты лекарственных средств неантибиотической группы. // Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции «Дисбактериозы и эубиотики». М., 1996. — С.11.

29. Диагностика и биокоррекция нарушений антиинфекционного гомеостаза в системе «мать-дитя»: Книга для практического врача / Под ред Е.И. Ефимова, К.Я. Соколовой. Н.Новгород: Изд-во НГМА, 2004. -376 с.

30. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональное питание. М.: ГРАНТЪ, 2002. - 296 с.

31. Дорофейчук В.Г. Определение удельного веса отдельных представителей кишечной микрофлоры с выделением ориентировочных (ключевых) тестов для выявления кишечного дисбактериоза и патологии кишечной стенки // Метод, рекоменд. Горький, 1980. - 17с.

32. Егоров A.M., Сазыкин Ю.О. Микроэволюция патогена в течение инфекционного процесса // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т.45, №1. - С.3-4.

33. Ерзинкян J1.A. Биологические особенности некоторых рас молочнокислых бактерий. Ереван: Изд. Арм. ССР, 1981. - 234 с.

34. Зайцева Л.Г., Васильева Е.И., Горская Е.М. и др. Функциональная активность макрофагов при экспериментальных дисбактериозах кишечника крыс // Ж. Микробиология. 1991. - № 8. - С. 68-71.

35. Ивашкин В.Т. Эрадикация инфекции Helicobacter pylori и ремиссия язвенной болезни: однозначны ли эти состояния? // Росс. Ж. гастороэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. - T.IX, №3. - С. 71-74.

36. Инструкция по приготовлению кисломолочного бифилакта на молочных кухнях № 11-14/6-33, утвержденная МЗ СССР от 27.03.87.

37. Инструкция по приготовлению молочных смесей на молочных кухнях системы здравоохранения №4724-88, утвержденная МЗ СССР от 28.11.88.

38. Исаков В.А., Кудрявцева JI.B. Азитромицин (Сумамед) новый компонент антихеликобактерной терапии // клиническая фармакология и терапия. - 2000. -т.9, №1. - С.22-24.

39. Исаков В. А., Домарадский И.В. Хеликобактериоз. М.: ИД Медпрактика, 2003. - 412 с.

40. Каргальцева Н.М. «Хеликобактериоз» // Метод, пособие. СПБ, 1997. -12 с.

41. Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. М.: « Наука», 1975. - С. 392.

42. Коровина Н.А., Вихирева З.Н., Захарова И.Н., Заплатников A.JI. Профилактика и коррекция нарушений микробиоценоза кишечника у детей раннего возраста. М., 1995. - 32 с.

43. Королева Н.С., Семенихина В.Ф., Иванова JI.H. и др. // Молочн. пром-сть. 1982. -№6. - С. 17.

44. Коршунов В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника // Журн. Микробиол. 1995. - №3. - С. 48-55.

45. Красильников А.П. Основы клинической микробиологии // Мед. и микробиология, вирусология и иммунология. М.: Медицина, 1994. — С.483-496.

46. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника и его клиническое значение. -М.: Медицина, 1979. 192с.

47. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника . М.: Медицина, 1989.-с. 208.

48. Кременчуцкий Г.Н., Юргель Л.Г., Кулишенко С.Г., Кременчуцкий С.Г. «А-бактерин» новый пробиотик для наружного и внутреннего применения // Сб. материалов междунар. Научно-практ. конференции памяти Г.И.Гончаровой. - Москва, 2002 - с.52.

49. Куваева И.Б., Воробьева Т.В. О синтезе кишечной флорой некоторых витаминов группы В // Вопросы питания. 1965. - №6. - С. 62-67.

50. Куваева И.Б. Обмен веществ организма и кишечная флора. М.: Медицина, 1976. - 248 с.

51. Куваева И.Б., Кузнецова Г.Г. Антагонистичекая активность микробных популяций защитной флоры и ее связи с характеристикой микробиоценоза и факторами питания // Вопросы питания. 1993. - №3. -С.46-50.

52. Кузнецова Г.Г. О стадиях нарушения биоценоза кишечника при хронических колитах // Сов. медицина . 1972. -№11.- С.67.

53. Ладодо К.С. Лечебное питание в педиатрической практике // Вопросы питания. 1996. - №5. - С. 30-34.

54. Лапина Л.Т. Российские рекомендации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori // Росс. Ж. гастороэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. - т.1Х, №3. - С. 84-89.

55. Лащевский В.В., Коваленко Н.К. Поиск эндонуклеаз рестрикции, обнаруживающих гетерогенность 16S рРНК некоторых видов молочнокислых бактерий // Мшробюлопчний журнал. 2002. - Т.64, №2. - С.21-28.

56. Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А. и др. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни // Журн. микробиол. -2001. №4. - С.47-50.

57. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П. Актуальные проблемы микроэкологии человека // «Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция», ГМИ им. С.М. Кирова. Горький, 1988. - С. 10-14.

58. Лихачева А.Ю. Биологические свойства лактобацилл и тест-системы для их идентификации. Дисс, . кандидата мед.наук. Н.Новгород, 1992. - 199с.

59. Лобзин Ю.В., Макарова В.Г., Корвякова Е.Р., Захаренко С.М. Дисбактериоз кишечника (клиника, диагностика, лечение): Руководство для врачей. СПб: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2003. - 256 с.

60. Лянная A.M., Интизаров М.М., Донских Е.Е. Биологические и экологические особенности микробов рода Bifidobacterium // Сб. научн. тр. «Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве» М., 1986. - С.32-38.

61. Мальцева Н.Н., Шкарупета М.М., Пинегин Б.В., Коршунов В.М. Иммуномодулирующие свойства некоторых микробов представители нормальной микрофлоры кишечника // Антибиот. и химиотерапия. -1992.-Т. 37, №12.-с. 41-43.

62. Марко О.П, Кишечная микрофлора при неспецифическом язвенном колите // Сб.научн. тр. «Применение колибактерина для профилактики и лечения кишечных заболеваний и технология его производства» М., 1967. - С.53-62.

63. Материалы третьего международного симпозиума «Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori», 7 апреля 2000, Москва // Росс. Журн. Гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. -2000. Т.Х, №2. - Прил. №10.

64. Мегро Ф. Является ли проблемой резистентность Helicobacter pylori к антибиотикам? // Росс. Ж. гастороэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. - T.IX, №3. - С. 74-78.

65. Медицинская микробиология / гл. ред. В.И.Покровский, О.К.Поздеев. -М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999.- 1200 е.: ил.

66. Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов: Методические указания 4.2.577-96. М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1998. - 95 с.

67. Онищенко Г.Г., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Поспелова В.В. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии. М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2002. - 608 с.

68. Падейская E.H. Препараты группы 5-нитроимидазола для лечения анаэробных и протозойных инфекций // Инфекции и антимикробная терапия. 2000. - Т.2, №4.

69. Панчишина М.В., Олейник С.Ф. Дисбактериоз кишечника. Киев: Изд. Здоровье, 1977.- 190 с.

70. Панчишина М.В., Олейник С.Ф. Дисбактериоз кишечника 2-е изд., перераб. и доп. - К: здоров'я, 1983. - 120 с.

71. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека -М.: Медгиз 1955. 250 с.

72. Пинегин Б.В., Коршунов В.М., Иванова Н.П. и др. // Ж. Микробиол., -1983, №6.-С. 41.

73. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М. Дисбактериозы кишечника. -М.: Медицина, 1984. 144 с.

74. Планельес Х.Х. Влияние химиотерапевтических средств на защитные функции организма // Вестник АМН СССР. 1962. - №5. - С.47-52.

75. Подгорнова Г.П., Комбарова С.Ю., Шендеров Б.А. Риботипирование молочнокислых бактерий // Тез. конф. «Дисбактериозы и эубиотики», Москва, 26-28 марта 1996. -М., 1996. С.27.

76. Рахимова Н.Г. В кн.: «Эпидемиология, клиника, профилактика и лечение острых и хронических кишечных заболеваний». - М., 1975. -Т.15.-С.116.

77. Рахимова Н.Г., Саввин С.И., Ханина Г.И. и др. В кн. « Биологические препараты для профилактики, терапии и диагностики инфекционных заболеваний» // Труды МНИИЭМ. - М., 1983. - С. 83.

78. Рекомендации по диагностике Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью и методам их лечения. // Росс Журн Гастроэнтерол Гепатол Колопроктол. 1998. - Т.8, №1. - С. 105-107.

79. Рекомендации Российской группы по диагностике H.pylori у больных язвенной болезнью и методам их лечения // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол.,колопроктол. 1998. - Т.8, №1. - С. 107-108.

80. Румянцев В.Г. Дисбактериоз кишечника: клиническое значение и принципы лечения // Росс Журн Гастроэнтерол Гепатол Колопроктол. -1999.-№3.-С. 61-63.

81. Рысс Е.С., Звартау Э.Э. Фармакотерапия язвенной болезни. СПб., М.: «Невский Диалект» - «Издательство БИНОМ», 1998. - 253 е., ил.

82. Салливан А., Норд К. Место пробиотиков в терапии инфекций желудочно-кишечного тракта у человека // Журн. Клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2003. - Т.5, №3. - С.275-284.

83. Соколова К.Я., Соловьева И.В. Дисбактериозы: Теория и практика.- Н. Новгород, 1999. 199 с.

84. Соколова К.Я., Соловьева И.В. «Способ лечения дисбактериозов» патент на изобретение №2193398 от 27.11.2000.

85. Суворов А.Н., Захаренко С.М., Алехина Г.Г. Энтерококки как пробиотики выбора // Клиническое питание. 2003. - №1. - С.26-29.

86. Чахава О.В., Горская Е.М., Рубан С.З. Микробиологические ииммунологические основы гнотобиологии. М.: Медицина, 1982 - 200 с.

87. Чебуркин A.B. Дисбактериоз: патогенетический признак или заболевание // Ж. вопросы охраны материнства и детства. 1991. - №9. -С. 64-66.

88. Чернин В.В.,Червинец В.М., Бондаренко В.М., Базлов С.Н. Язвенная болезнь, хронический гастрит и эзофагит в аспекте дисбактериоза эзофагогастродуоденальной зоны. Тверь: Издательство "Триада"- 200 с.

89. Шарманов Т.Ш., Ладодо К.С. Актуальные вопросы питания детей раннего возраста // Вестник АМН СССР. 1982. - № 11. - С. 58-65.

90. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса // Вопросы питания. 1999. - Т.68, №2. -С.32-40.

91. Шевелева С.А., Куваева И.Б., Ефимочкина Н.Р. Пробиотические продукты: квалификация и регламентация требований к характеристикам // Сб. материалов междунар. Научно-практ. конференции памяти Г.И.Гончаровой. -М., 2002. С.13-14.

92. Шендеров Б.А., Ануфриева Р.Г., Навашин С.М. Колонизационная резистентность крыс, родившихся от животных с экспериментальным дисбактериозом // Антибиотики и мед. биотехнология. 1986. - №6.

93. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и некоторые вопросы микроэкологической технологии // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - Т.32, №3. - 164-170.

94. Шендеров Б.А. Колонизационная резистентность и антимикробные препараты // Сб. трудов "Успехи в области изучения и производства антибиотиков". М., 1990. - С. 5-15.

95. Шендеров Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б., Скиба Н.Э. Пробиотики и функциональное питание // Антибиотики и химиотерапия. 1997.-Т. 42, №7. - С. 30-34.

96. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. // Рос. Журн. Гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. -1998.-Т. 7, № 1.-С. 61-65.

97. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и ее функции. М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998. - 288 с.

98. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том И: Социально-экологические и клинические последствиядисбаланса микробной экологии человека и животных. М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998. - 416 с.

99. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том III: Пробиотики и функциональное питание. М.: Издательство ГРАНТЪ, 2001. - 288 с.

100. Шептулин А.А. Синдром избыточного роста бактерий и «дисбактериоз кишечника»: их место в современной гастроэнтерологии // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. - №3. — С.51-54.

101. Эпштейн-Литвак Р.В., Вилыпанская Ф.Л. К характеристике дисбактериоза кишечника. // Материалы III съезда эпидемиологов, микробиологов, инфекционистов АзССР. Баку, 1967. - С.81-82.

102. Эпштейн-Литвак Р.В., Вилыпанская Ф.Л. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника // Методические материалы. М., 1969. - 23с.

103. Эпштейн-Литвак Р.В. и др. Бактериологическая диагностика дисбактериоза. Методические рекомендации - М., 1977. - 20с.

104. Янковский Д.С. Состав и функции микробиоценозов различных биотопов человека // Здоровье женщины. 2003. - №4. - С.145-158.

105. Adamsson I., Edlund С., Nord С.Е. Microbial ecology and treatment of Helicobacter pylori infection // J. Chemother. 2000. - Vol.12. - P. 5-16.

106. Angotti, B. Femmes et tabac // Le concours medical. 1999. - Vol. 121, No. 7.-P. 467.

107. Bechi P., Romagnoli P., Bacci S., et al. Helicobacter pylori and duodenal ulcer: evidence for a histamine pathways-involving link // Am J Gastroenterol. 1996. - Vol. 91. - P. 2338-2343.

108. Berry V., Jennings K., Woodnutt G. Bactericidal and morphological effects of amoxicillin on Helicobacter pylori // Antimicrob. Agents Chemother. — 1995.-Vol. 39.-P. 1859-1861

109. Bhatia S. J., Kochar N., Abraham P., Nair N. G., Mehta A. P. Lactobacillus acidophilus inhibits growth of Campylobacter pylori in vitro // J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol. 27. - P. 2328-2330.

110. Blaser M. Ecology of Helicobacter pylori in Human stomach // J Clin Invest. -1997.-Vol.100.-P. 759-762.

111. Bode G., Mauch F., Malfertheiner P. The coccoid forms of Helicobacter pylori. Criteria for their viability // Epidemiol Infect. 1993. - Vol. 111. - P. 483-490.

112. Bogdert K., Crabtree J.E. Helicobacter pylori and gastric inflammation // Brit Med Bull. 1998. - Vol. 54. - P. 139-150.

113. Bollet C., Guignolle C., Micco de Ph. Lactobacillus // Lyon pharm. 1990. -Vol. 41, N4.-P. 327-334.

114. BorodyT.J., George L.L., Brandl S., Andrews P., Lenne J., Moore-Jones D., et al. Helicobacter pylori eradication with doxycyclin-metronidazole-bismuth subcitrate triple therapy // Scand J Gastroenterol. 1992. - Vol. 27. - P.281-284.

115. Byrd J.C., Yunker C.K., Xu Q.-S., Sternberg L.R., Bresalier R.S. Inhibition of Gastric mucine synthesis by Helicobacter pylori // Gastroenterology. 2000. -Vol. 118.-P. 1072-1079.

116. Caternich C.E., Makin K.M. Characterization of the morphological conversion of Helicobacter pylori from bacillary to coccoid forms // Scand. J. Gastroenterol. 1991. - Vol.26. - P. 58-64

117. Chaitov L. Probiotics. // Thorsons Publishing Group, Northamptonshire, Trenev, N. England, 1990

118. Coconnier M.-H., Lievin V., Bernet-Camarad M.-F., Hudault S., Servin A.L. Antibacterial Effects of Adhering Human Lactobacillus acidofilus Strain LB // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1997. - Vol.41, N5. - P. 10461052.

119. Cremonini F., Canducci F., Di Caro S., et al. Helicobacter pylori treatment: a role for probiotics // Digest Dis. 2001. - Vol. 19. - P. 144-147.

120. Current European concepts in the management of Helicobacter pylori infection. The Maastricht Consensus Report // Gut. 1997. - Vol.41, N1. - P. 813.

121. Dach S.K. Acidophilus: The Friendly Bacteria // In: Total Health. 1995. -Apr.: 27

122. De Koster E., Burette A., Nyst J.F., Glupczynski Y., Deprez C., Deltenre M. H.pylori treatment: the macrolide trial: one week erythromycin+CBS+omeprazole (Abstract) // Rev. Esp. Enferm. Dig. 1990. -Vol.78, Suppl. 1.-P. 118-119.

123. Dave R.I., Shan N.P. Viability of yughurt and probiotic bacteria in yoghyrts made from commercial starter cultures // Intern. Dairy J. 1997. - Vol. 7, N 1. -P. 31-41.

124. Dunn B.E., Cohen H., Blaser M.J. Helicobacter pylori. // Clinical Microbiology Reviews. 1997. - Vol.10, No.4. - P. 720-741.

125. Elmer G.W., Surawicz C.M., McFarland L.V. Treatment and prophylaxis of contagions of a intestine and vaginas // JAMA. 1996. - Vol. 275, N.l 1. - P. 780-786.

126. El-Omar E., Penman L., Dorrian C.A., et al. Eradicating Helicobacter pylori infection lowers gastrin mediated acid secretion by two thirds in patients with duodenal ulcer/// Gut. 1993. - Vol.34. - P. 1060-1065.

127. Feldman R.A., Eccersley A.J.P., Hardie J.M. Epidemiology of Helicobacter pylori: acquisition, transmission, population prevalence and disease-to-infection ratio // Brit Med Bull. 1998. - Vol.54. - P. 39-53.

128. Fuller R. Probiotics in man and animals // J. Appl Bacteriol. 1989. -Vol.66.-P. 365-378.

129. Fuller R. Probiotics their développement and use // In: Probiotics: prospects of the use in opportunistic infection. Old Herborn University Seminar Monograpg (eds. Fuller R. et al). Inst. Microbiol. Biochem. Hrborn-Dill, Germany. 1995.-P. 1-8.

130. George L.L., Borody T.J., Andrews P., Devine M., Moore-Jones D., Walton M., et al. Cure of duodenal ulcer after eradication oif Helicobacter pylori // Med JAust.-1990.-Vol. 153.-P. 145-149.

131. Gibson G.R., Roberfroid M.B. Dietary modulation of the human colonic microbiota: Introducing the concept of prebiotics. // J Nutr. 1995. - Vol. 125.• -P. 1401-1412.

132. Gismondo M.R., Lo Bue A.M., Chisari G. et al. Studio dell' attivita competitiva di un preparato batterico sulla colonizzazione e patogenicita di С .pylori. Studio clinico // Clin. Ter. 1990. - Vol.134, N1.

133. Gissen A.S. Off Probiotics, Prebiotics & Synbiotics Iss VRPs Inc. Vit Res Prod Newsletters, Sept, 1995, USA

134. Goodwin C.S., Armstrong J.A., Marshall B.J. Campylobacter pyloridis gastritis and peptic ulceration // J. Clin. Pathol. 1986. - Vol. 39. - P. 353-365.

135. Goodwin C.S., Mendall M.M., Northfield T.C. Helicobacter pylori infection //Lancet. 1997. - Vol.349. - P. 265-269.

136. Graham D., de Boer W.A., Tytgat G.N.J. Choosing the best anti-Helicobacter pylori therapy: effect of antimicrobial resistance // Am. J. Gastroenterol. -1996. Vol. 91. -P.1072-1076.

137. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии // Под редакцией акад. РАМН В.Т. Ивашкина, проф. Ф. Мегро, T.JI. Лапиной. М.: «Триада-Х», 1999. - 255 с.

138. Isolauri Е., Kaila М., Mykkanen Н., Ling W.H., Salminen S. Oral bacteriotherapy for viral gastroenteritis. // Digest Dis. Sci. 1994. - Vol. 39. -P. 2595- 2600.

139. Jack R.W., Tagg J.R., Ray B. Bacteriocins of gram-positive bacteria // Microbiol. Rev. 1995. - Vol. 59, N 2. - P. 171-200.

140. Kabir A.M., Aiba Y., Takagi A., Kamiya S., Miwa Т., Koga Y. Prevention of Helicobacter pylori infection by lactobacilli in a gnotobiotic murin model // Gut. 1997. - Vol. 41. - P.49-55.

141. Koga Y., Aiba Y., Sasaki S., Hashimoto K. Prevention of Helicobacter pylori infection by Lactobacilli // In: Germfree Life and its Ramifications (Eds. K. Hashimoto et al.), Shiozawa, Japan. 1996.

142. Labenz J., Gyenes E., Riihl G.H., Bôrrsch G. Efficiency of oral triple therapy (BSS/metronidazole/tetracycline) to eradicate HP in DU disease (abstract) // Ir. J. Med. Sci. 1992. - Vol.161, Suppl. 10. - P.90.

143. Lambert J.R., Lin S.K., Schembri M., Nicholson L., Korman M.G. Helicobacter pylori therapy randomized study of denol/antibiotic combination (Abstract) // Rev Esp Enferm Dig. 1990. - Vol. 78, Suppl. 1. - P. 115-116.

144. Laszewicz W., Gabryelewicz A., Zaremba-Woroniecka A. Helicobacter pylori infection and gastric secretion in duodenal and gastric ulcer patients the effect of eradication after one year // J Physiol Pharmacol. - 1997. - Vol.48. - P. 353-364.

145. Lee A., Fox J.G., Otto G., Murphy J. A small model of human Helicobacter pylori active chronic gastritis // Gastroenterology. 1990. - Vol. 99. - P. 13151323.

146. Lemaire V. Pas d'effet de l'éradication de Helicobacter pylori sur les manifestations digestives liées aux AINS // Le concours medical. 1999. -Vol. 121, N7. -P.467.

147. Ligue Suisse contre le cancer. Alimentation et cancer // Optima. 1991. -Vol. 209, N6. -P.29.

148. Lilly D.M., Stilwell R.H. Probiotics: Growth promoting factors produced by microorganisms // Science. 1965. - Vol. 147. - P. 747-748.

149. Maillard Ch. Les facteurs de la résistance bactérienne // Le concours medical. 1999. - Vol. 121, N11. - P. 788 - 790.

150. Malfertheiner P., Megraud F., O'Morain C., et al. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection. The Maastricht 2 consensus report // Aliment Pharmacol Ther. 2002. - Vol.16. - P. 167-180.

151. Mannick E.E., Bravo L.E., Zarama G., et al. Inducible nitric oxide synthase, nitrotyrosine, and apoptosis in Helicobacter pylori gastritis: effect of antibiotics and antioxidants // Cancer Res. 1996. - Vol.56 - P. 3238-3243.

152. Marschall B.J. Helicobacter pylori: the etiologic agent for peptic ulcer // JAMA. 1995. - Vol.274. - P. 1064-1066.

153. Marshall B.J., Armstrong J.A., Francis G.J., Nokes N.T., Wee S.H. Antibacterial action of bismuth in relation to Campylobacter pyloridis colonization and gastritis // Digestion. 1987. - Vol.37. - P. 16-30.

154. Marshall B.J., Armstrong J.A., McGechle D.B., Glancy R.J. Attempt to fulfill Koch's postulates for pyloric Campylobacter // Med. J. Aust. 1985. - Vol.142.- P. 436-439.

155. McKay L.L., Baldwin K.A. Applications for biothechnology: present and future improvements in lactic acid bacteria // FEMS Microbiol. Rev. 1990. -Vol.87.-P. 3-14.

156. McNulty C.A.M., Dent J., Wise R. Susceptibility of clinical isolates if Campylobacter pyloridis to 11 antimicrobial agents // Antimicrob. Chemother.- 1985. Vol.28, N6. - P.837-838.

157. Mégraud F., Trimoulet P., Lamouliatte H., Boyanova L. Bactericidal effect of amoxicillin on Helicobacter pylori in an in vitro model using epithelial cells // Antimicrob. Agents Chemother. 1991. - Vol.35. - P. 869-872.

158. Michetti P., Dorta G., Brassart D. et al. L.acidophilus supernatant as a adjuvant in the therapy of H.pylori in humans (Abstract) // Gastroenterology. -1995.-Vol.108.-A166.

159. Michetti P., Dorta G., Wiesel P.H., et al. Effect of wheybased culture supernatant of Lactobacillus acidophilus (johnsonii) Lai on Helicobacter pylori infection in humans // Digestion. 1999. - Vol.60. - P. 203-209.

160. Midolo P.D., Lambert J.R., Hull R., Luo F., Grayson M.L. In vitro inhibition of Helicobacter pylori NCTC 11637 by organic acids and lactic acid bacteria // J. Appl. Bacteriol. 1995. - Vol. 79. - P. 475-479.

161. Mikelsaar M., Kriisk E., Loivukene K. et al. Influence of immune colostrium in treatment of Helicobacter pylori gastritis in children // In: Abstr. World Congr. Asnaer. Bacter. Infect. San Juan, Puerto Rico, November 5-8, 1995.

162. Minagawa K. // Acta paediatr Jap. 1970. - N 12. - P. 55.

163. Mobley H.L.T. Helicobacter pylori factors associated with disease development // Gastroenterology. 1997. - Vol. 113. - P.21-28.

164. Moss S.F., Calam J., Aganval B., et al. Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori // Gut. 1996. - Vol.38. - P.498-501.

165. Moyen E.N., Bonneville F., Fauchere J.L. Modification of intestinal colonization and translocation of Campylobacter jejuni in gnotobiotic mice by erythromycin or heat-killed Lactobacillus // Ann. Inst. Pasteur. 1986. -Vol.137.-P.199-207.

166. Mulcai T., Asasaka T., Sato E., Mori K., Matsumoto M., Ohori H. Inhibition of binding of Helicobacter pylori to the glycolipid receptors by probiotic Lactobacillus reuteri // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2002. - Vol. 32. - P. 105-110.

167. Neu H.C. The development of macrolides: clarithromycin in perspective // J. Antimicrob. Chemother. 1991. - Vol.27, Suppl A. - P. 1-9.

168. Noach L.A., Bertola M.A., Schwartz M.P., Rauws E.A.J., Tytgat G.N.J. Treatment of Helicobacter pylori infection. An evaluation of varius therapeutic trials and review of the literature // Eur J Gastroenterol Hepatol. 1994. -Vol.6.-P.585-591.

169. Noach L.A., Tutgat G.N.J. Helicobacter pylori infection. Aspects of pathogenesis and therapy Second edition - Amsterdam, 1994. - 164p.

170. Parker R. // Anim Nutr. Health. 1974. - Vol. 29. - P. 4-8.

171. Pinchuk I.V., Bressollier P., Verneuil B., et al. In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics // Antimicrob. Agents Chemother. 2001. - Vol.45. - P. 3156-1361.

172. Poach S., Savage D.C., Tannock G.W. Lactobacilli isolated from the stomach of conventional mice // Appl. Environ. Microbiol. 1977. - Vol.33. - P. 11971203.

173. Quand la grippe s'attaque à l'estomac, pensez levure médicinale! // Pharmacie chez zoo. 2000. -NI.- P.60.

174. Rauws E.A.J., Tytgat G.N.J. Cure of duodenal ulcer associated with eradication of Helicobacter pylori // Lancet. 1990. - Vol.335. - P. 1233-1235.

175. Renner E. Antitumor Properties of cultured dairy products // 6th Intern. Symp. Lactic Acid Bacteria and Human Health. 1989, August 30, Seul Publ. R&D Center, Korea Yakult Co., Ltd, 1998, p.274-283.

176. Ruissant A., Cheikh J.-L. Trois nouvelles taxidermies médicamenteuses // Rev. Med.- 1970.-Vol. 11, N28.-P. 1633- 1934.

177. Sakamoto I., Igarashi M., Kimura K., Takagi A., Miwa T., Koga Y. Suppressive effect of Lactobacillus gasseri OLL 2716 (LG21) on Helicobacter pylori infection in humans // J. Antimicrob. Chemother. 2001. - Vol. 47. - P. 709-710.

178. Salminen S., Salminen E. Lactulose Lactic acid bacteria, intestinal microecology and mucosal protection // Scand J Gastroenterol. 1997. - Suppl 222. - P. 45-48.

179. Sarra P.G., Vescovo M., Morelli L., Cabras M. Antibiotic resistance in L.acidophilus and L.reuteri from animal gut // Ann. Microbial ed enzimol. -1982.-Vol. 32. P.71-76.

180. Shimoyama T., Crabtree J.E. Bacterial factors and immune pathogenesis in Helicobacter pylori infection // Gut. 1998. - Vol.43, Suppl 1. - P. 2-5.

181. Tatsura M., Ischikawa H., Iishi H., Okuda S., Yokota Y. Reduction of gastric ulcer recurrence after suppression of Helicobacter pylori by cefixime // Gut. -1990.-Vol. 31.-P. 973-976.

182. Telford J.L., Gensini P., Dell Oreo M. Gene structure of the Helicobacter pylori cytotoxin and evidence of its key role in gastric disease // J. Exp. Med. -1994.-Vol. 179.-P. 1653-1658.

183. Thompson J.P. Product Total Flora. Support Questions and Answers // Iss. Interchange Inc., 1997.

184. Torriani S., Sotilli U., Giorgi A., Vescovo M., Dellaglio F. Plasmid DNA and antibiotic susceptibility in lactobacillus strains from human vagina // Microbiol, alim. nutr. 1988. - Vol.6, N1. - P. 63-68.

185. Van der Waaij D. Evidence of immunoregulation of the composition of intestinal microflora and its practical consequences // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis.- 1988. -Vol. 7.

186. Van der Waaij D. The Immunoregulation of the Intestinal Flora: experimental investigations on the development and the composition of the microflora in normal and thymusless mice // Microecol. Therapy. 1984. -Vol. 14.

187. Van der Waaij D. The Immunoregulation of the Intestinal Flora; Consequences of Decreased Thymus Activity and Broad-Spectrum Antibiotic Treatment // Zbl. Bact. Suppl. 1985. - Suppl. 13.

188. Vandenplas Y. Helicobacter pylori infection // Clin Microbiol Infect. 1999. -Vol.5. -P.l-11.

189. Wagner S., Varrentrapp M., Haruma K., Lange P., Müller M.J., Schorn T., et al. The role of omeprazole in the treatment of gastric Helicobacter pylori infection // Z Gastroenterol. 1991. - Vol.29. - P.595-598.

190. Williams C.L. Helicobacter pylori: bacteriology and laboratory diagnosis // J Infect. 1997. - Vol. 34. - P. 1-5.

191. Yaeshima T. Benefits of Bnifidobacteria to human health // Bulletin FIL-IDF (Belgium). Intern. Dairy Federation. 1996. - N313. - P.36-42.

192. Yun J.W. et al. Fructooligosaccharides Occurence, Preparation and Applications // Enzyme a Microbiol. Technol.- 1996. - Vol. 19. - P. 107 -117

193. Zheng Z.T., Wang Z.Y., Chen Y.X., Li Y.N., Li Q.F., Lin S.R. et al. Doubleblind short-term trial of furazolidone in peptic ulcer // Lancet. 1985. - Vol. i. -P. 1048-1049.