Конструирование и применение новых кремнеземных сорбентов для хроматографии биополимеров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, доктор биологических наук Офицеров, Вячеслав Иванович

• Офицеров, Вячеслав Иванович
• доктор биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации доктор биологических наук Офицеров, Вячеслав Иванович

Оглавление

Список использованных сокращений

Введение 6 Глава 1. Кремнеземные сорбенты в хроматографии биополимеров

(Обзор литературы)

1.1. Особенности хроматографии биополимеров

1.2. Методы модфикации кремнеземов, используемые для получения хроматографических сорбентов

1.3. Ионообменная хроматография

1.3.1. Анионообменная хроматография

1.3.2. Катионообменная хроматография

1.4. Гель-проникающая хроматография

1.5. Аффинная хроматография

1.6. Обращенно-фазовая хроматография

1.7. Гидрофобная хроматография

1.8. Заключение 48 Глава 2. Получение и исследование свойств новых кремнеземных сорбентов для ионообменной и аффинной хроматографии биополимеров

2.1. Анионообменные сорбенты

2.2. Катионообменные сорбенты

2.3. Сорбенты для аффинной хроматографии 78 Глава 3. Получение высокоочищенных гидрофобных белков

с помощью обращенно-фазовой хроматографии

Глава 4. Примеры использования разработанных сорбентов для

решения исследовательских и практических задач

4.1. Выделение гидрофобных белков с помощью ОФХ,

изучение их строения и свойств

4.2. Применение композиционных анионитов для

хроматографии протяженных олигодезоксирибонуклеотидов

4.3. Использование новых анионитов для очистки

иммуноглобулинов класса О

4.4. Анализ подклассов с помощью ИОХ на новых анионитах. Состав и свойства подклассов в сыворотках крови животных

4.5. Получение высокоочищенных препаратов лошадиных

иммуноглобулинов против вируса клещевого энцефалита

4.6. Применение композиционных аффинных сорбентов

для получения высокоочищенных антигенов и антител

Глава 5. Экспериментальная часть

5.1. Реактивы и материалы

5.2. Оборудование

5.3. Синтез и изучение свойств сорбентов

5.3.1 Анионо- и катионообменные сорбенты

5.3.2 Сорбенты для аффинной хроматографии

5.3.3 Сорбенты для обращенно-фазовой хроматографии гидрофобных белков и полипептидов

5.4. Выделение, структурная характеризация и изучение свойств белков

5.4.1. Общие методы анализа белков

5.4.2.Исследование структуры и свойств вирусных и рекомбинантных белков

5.4.3. Выделение фракции иммуноглобулина в, анализ и изучение свойств подклассов животных 159 Заключение 166 Выводы 169 Документы по внедрению результатов диссертационной работы. 172 Литература 183 От автора

Список использованных сокращений:

АФХ - аффинная хроматография;

БАВ - биологически активные вещества;

ВВЭЛ- вирус венесульского энцефаломиелита лошадей;

ВВсЭЛ- вирус восточного энцефаломиелита лошадей

ВКЭ - вирус клещевого энцефалита;

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;

ГПХ - гель-проникающая хроматография;

ГФХ - гидрофобная хроматография;

ДЭГ - диэтиленгликоль;

ИОХ - ионообменная хроматография;

ИФА - иммуноферментный анализ;

кДа - килодальтон

МПС - макропористое стекло;

ОФХ - обращенно-фазовая хроматография;

ОЕ260 - количество вещества с оптической плотностью при 260 нм, равной

единице. ПААГ - полиакриламидный гель; ПВП - поливинилпирролидон; ПВС - поливиниловый спирт; ПЭИ- полиэтиленимин; РИА - радиоиммуный анализ; РН - реакция нейтрализации; РТГА - реакция торможения гемагглютинации; ТФУ - трифторуксусная кислота; BSA - бычий сыворотояный альбумин; CPG - стекло с контролируемым размером пор; DEAE - диэтиламиноэтил; НА - гемагглютинин; НЬ - гемоглобин;

IgG - иммуноглобулин класса G; NP - нуклеопротеиновый белок; OVA - овальбумин; SDS - додецилсульфат натрия.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Конструирование и применение новых кремнеземных сорбентов для хроматографии биополимеров»

Введение

Одним из ключевых этапов в решении рада проблем биоорганической химии, молекулярной биологии и биотехнологии является получение высо-коочищенных биологически активных соединений. В начале 80-х годов интенсивное развитие медико-биологических наук привело к значительному расширению сферы использования олигонуклеотидов, пептидов и белков высокой степени очистки. Однако темпы совершенствования методов синтеза олигонуклеотидов и пептидов, а также темпы роста числа создаваемых методами генетической инженерии продуцентов рекомбинантных белков значительно опережали развитие методов получения этих биополимеров в индивидуальном виде. Таким образом, доступность их для научных исследований и практического применения, оказалась в прямой зависимости от дальнейшего прогресса в области методов разделения, очистки и анализа.

Основным способом разделения биологически активных веществ является жидкостная колоночная хроматография. Большие успехи в области их анализа были достигнуты с внедрением в практику высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), основанной на использовании монодисперсных сорбционных материалов с диаметром частиц 3—10 мкм. По разрешающей способности сравнимая с газо-жидкостной хроматографией, ВЭЖХ позволила успешно проводить разделение и анализ низкомолекулярных веществ. Однако в жидкостной хроматографии биополимеров успехи были значительно скромнее. Для разработки высокоскоростных методов анализа и производительных методов препаративной очистки биополимеров потребовались механически прочные макропористые сорбенты с хорошими гидродинамическими свойствами и длительным сроком эксплуатации без снижения разрешающей способности. При использовании в аналитической хроматографии они должны обеспечивать высокую эффективность разделения наибольшего числа компонентов за наименьшее время, а при препаративном применении -

максимальный выход целевого продукта с требуемой степенью чистоты и активности при наименьших затратах

Мягкие широкопористые сорбенты, полученные на основе полисахаридных гелей или синтетических полимеров, традиционно применяемые в лабораторной практике для анализа и очистки биополимеров, не удовлетворяли этим требованиям. Число коммерческих твердокаркасных сорбентов, разработанных специально для различных типов хроматографии высокомолекулярных биологически активных веществ было недостаточным.

Таким образом, актуальной стала задача целенаправленного получения новых макропористых жестких сорбентов для эффективного разделения биополимеров.

Как показал анализ литературы, одним из наиболее перспективных подходов к конструированию таких хроматографических материалов является использование пористых кремнезёмных матриц с химически модифицированной поверхностью. Однако исследования в этой области к началу выполнения настоящей работы были весьма фрагментарны, что было обусловлено недостаточным развитием теории и практики синтеза и применения хроматографических сорбентов.

Цель настоящей работы заключалась в проведении комплексного исследования кремнеземных сорбционных материалов, разработке новых высокоэффективных сорбентов для хроматографии биополимеров и применении синтезированных сорбентов для решения ряда научных и практических задач, связанных с использованием методов хроматографического анализа и препаративного получения в индивидуальном виде олигонуклео-тидов, пептидов и белков различных классов.

В задачи исследования входило:

- изучить методы химической модификации поверхности кремнезёмов и синтезировать матрицы, обладающие комплексом свойств, требуемых для получения на их основе рада новых хроматографических сорбентов;

- разработать высокоэффективные анионо- и катионообменной сорбенты, изучить их свойства в сравнении с лучшими коммерческими иони-тами, отработать оптимальные условия применения для хроматографии олигонуклеотидов, белков и пептидов как в аналитическом, так и в препаративном масштабах;

- изучить факторы, влияющие на обращенно-фазовую хроматографию малорастворимых гидрофобных белков, разработать стратегию их эффективного разделения;

- на основе синтезированных сорбентов разработать новые эффективные методы хроматографического анализа и получения высокоочи-щенных биомакромолекул, использовать их для проведения исследования структуры и свойств ряда вирусных, рекомбинантных белков и иммуноглобулинов;

- разработать подходы к получению новых высокоёмких твердокар-касных носителей для эффективной иммобилизации различных биоспецифических лигандов и использования полученных сорбентов в аффинной хроматографии, в том числе для препаративной очистки белков, применяемых в производстве ряда медицинских иммунодиагностикумов.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Офицеров, Вячеслав Иванович

Выводы

1. Изучена модификация ряда кремнеземов гидрофильными полимерами: декстраном, полиспиртами и полиэтилениминами различной молекулярной массы, сшитыми эпоксидными смолами и дигалогенидалканами; разработаны методы получения полимерных покрытий, обеспечивающие высокую сорбционную емкость, максимальное экранирование силанольных групп поверхности матрицы при незначительном уменьшении размера её пор. Отработаны методы введения в полимерные слои функциональных ионогенных групп, а также активных групп для иммобилизации биоспецифических лигандов. На основании проведенных исследований разработан универсальный подход к синтезу широкого круга новых кремнезёмных сорбентов для жидкостной хроматографии биомакромолекул различной природы.

2. Для решения ряда аналитических и технологических задач разработаны высоэффективные композиционные носители для анионообменной, катионообменной и аффинной хроматографии биополимеров. Полученные сорбенты по емкости, селективности и стабильности превосходят коммерческие сорбенты «щеточного типа». Оптимизированы условия практического применения новых композиционных сорбентов для разделения сложных смесей протяженных олигонуклеотидов, пептидов и белков в аналитическом и препаративном масштабах.

3. На основе использования полученных анионитов разработаны:

- эффективный способ очистки иммуноглобулинов класса С млекопитающих;

- метод количественного анализа подклассов ^О в сыворотках крови.

В результате исследований, проведенных с применением данных методов: а) изучены подклассы иммуноглобулина С кролика, козы, овцы, лошади; выявлены их различия в физико-химических свойствах и биологической активности; б) впервые установлены общие закономерности изменения состава подклассов в сыворотках крови животных в процессе их иммунизации различными антигенами; в) выделен и охарактеризован новый иммуноглобулин козы, представляющий неизвестный ранее подкласс 1^0; г) разработан метод препаративного получения высокоактивных иммуноглобулинов лошади против вируса клещевого энцефалита, не содержащих примесных белков, а также высокореактогенного подкласса

4. Разработан эффективный метод очистки гидрофобных белков об-ращенно-фазовой хроматографией на синтезированных новых широкопористых сорбентах. В экспериментах с его использованием: а) получены недоступные ранее индивидуальные белки вирусов гриппа, клещевого энцефалита, Марбург, венесуэльского энцефаломиелита лошадей. Проведено исследование и получены новые данные о свойствах, строении этих белков и их посттрансляционной модификации; б) подтверждена гипотеза об сходном расположении дисульфидных связей в гемагглютинанах вируса гриппа подтипов Н^ и Н31Ч2. Впервые локализован участок молекулы гемагглютинина Н1з формирующий его ре-цепторный сайт; в) выделены индивидуальные рекомбинантные интерферон а2 человека, ангиогенин и ряд других белков. На основании аминокислотного состава, строения К- и С-концевых фрагментов молекулы, пептидного картирования доказана идентичность структуры исследованных полипептидов соответствующим природным аналогам.

5. Получены новые аффинные сорбенты композиционного типа для препаративной очистки антивидовых антител, применяемых в производстве медицинских иммунодиагностикумов. Показано преимущество разработанных сорбентов в селективности и эксплутационных свойствах над традиционно используемыми в аффинной хроматографии носителями с полисаха-ридными матрицами.

6. На основе применения синтезированных аффинных сорбентов разработан подход к получению из поликлональной сыворотки двух фракций высокоочищенных антител, специфичных к разным антигенным детерминантам белка. При практической реализации такого подхода был создан новый иммунометрический способ определения хорионического гонадотро-пина человека, сконструированы и внедрены в производство два иммуно-ферментных набора для его качественного и количественного определения.

Документы по внедрению результатов диссертационной работы.

1. Справка об использовании иммуносорбента Полисил-АФ-1яС-человека в производстве ЗАО «Вектор-Бест».

2. Экспериментально-производственный регламент на набор реагентов для иммуноферментного качественного определения хорионического гона-дотропина в моче человека « Прегнатест-ИФА-ХГЧ» - 1 и последняя стр.

3. Технические условия (ТУ 9398-332-23548172-97) «Набор реагентов для иммуноферментного качественного определения хорионического гона-дотропина в моче человека « Прегнатест-ИФА-ХГЧ» - 1 и последняя стр.

4. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного качественного определения хорионического гонадотропина в моче человека « Прегнатест-ИФА-ХГЧ» (вариант 1 на планшетах) - 1 и последняя стр.

5. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного качественного определения хорионического гонадотропина в моче человека « Прегнатест-ИФА-ХГЧ» (вариант 1 на стрипах) - 1 и последняя стр.

6. Справка об использовании сорбента Полисил-СА-500 для выполнения научно-прикладных исследований в ГНЦ ВБ «Вектор»

ГНЦ ВБ "Вектор:

VECTOR

Закрытое акционерное общество fmmmm- ¿штттшг л bJMJSJT^

ИНН 5433104584, р/с 40702810608915399101 в Советском филиале АКБ «Сибирский банк»,

БИК 045003891, г. Новосибирск, корр.сч. 30101810900000000891

633159, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Кольцово, а/я 121, ЗАО «Вектор-Бест»

Тел./факс [phone]

Тел. [phone], 64-27-23 E-mail: [e-mail]

Код по ОКОНХ: 19310, 95120 Код по ОКПО: 23548172

ОТ на №

ОТ

Справка об использовании иммуносорбента Полисил-АФ-^в-человека в производстве ЗАО «Вектор-Бест»

Разработанный В.И. Офицеровым иммуносорбент Полисил-АФ-^в- человека, начиная с 1992 года, широко используется в технологии производства ЗАО «Вектор-Бест» для препаративной наработки аффинно-очищенных антител кроликов и коз против ^О человека. Антивидовой конъюгат с пероксидазой хрена, синтезированный из полученных антител, является одним из основных компонентов медицинских иммуноферментных тест-систем, серийно выпускаемых на нашем производстве, для диагностики ВИЧ-инфекции, гепатитов, хламидиоза, токсоплаз-моза, описторхоза, токсокароза, и ряда других заболеваний.

Применение препаративных колонок с сорбентом Полисил-АФ^О-чело-века позволило практически полностью обеспечить производство ЗАО «Вектор-Бест» необходимыми аффинно-очищенными антителами, и за период 1992-1997 годов они были использованы для изготовления более 250 тыс. иммуноферментных тест-систем различных наименований.

Колонки с вышеназванным сорбентом отличаются высокой производительностью и стабильностью и выдерживают без снижения эффективности разделения 200 и более циклов хроматографии. Это существенно снизило затраты ЗАО «Вектор-Бест» на приобретение необходимых иммуносорбентов, и, в целом, себестоимость иммунодиагностической продукции.

А.В. Масяго

ГНЦ В Б «Вектор» ЗАО «Вектор-Бест»

Заключение

В настоящей работе изучены некоторые подходы к конструированию новых сорбентов для высокоэффективной жидкостной хроматографии биополимеров природного и синтетического происхождения. В лабораторной практике для решения задач, связанных с разделением, очисткой и анализом этих веществ, как правило, использовали сорбенты, полученные на основе природных полисахаридов. Однако при переходе к широкому технологическому применению хроматографических носителей этого типа перед специалистами встали проблемы, обусловленные в основном их неудовлетворительными гидродинамическими свойствами, относительно низкой емкостью, стабильностью и т. п.

В связи с развитием биотехнологии и расширением использования в различных сферах высокоочищенных природных соединений, в частности белков и пептидов, нуклеиновых кислот и олигонуклеотидов возникла насущная потребность в способах высокоэффективного анализа и высокопроизводительной очистки целевых продуктов. Это, в свою очередь, выдвинуло задачи по конструированию новых более совершенных сорбентов, которые могли бы успешно использоваться в современных схемах разделения биополимеров. Такие сорбенты должны удовлетворять следующим основным требованиям:

1. Универсальность технологии их получения;

2. Доступность и невысокая стоимость в сочетании с хорошими эксплуатационными качествами и стабильностью;

3. Возможность при их получении регулирования в широком диапазоне основных параметров (емкости, селективности, гидрофильного или гидрофобного характера поверхности, размеров внутрикорпускулярных каналов).

При разработке сорбентов оказалось необходимым провести детальное исследование факторов, влияющих на их эффективность по фракционированию сложных смесей веществ, на емкость сорбентов и их специфичность. Подобного рода исследования и составили предмет одного из направлений настоящей работы.

В результате проведенных исследований были получены новые высокоэффективные хроматографические носители на основе кремнеземов, модифицированных гидрофильными полимерами. К достоинствам таких матриц относится возможность при получении сорбентов задавать необходимые размеры поверхности и внутренних каналов частиц. Используя универсальные приемы химической модификации к поверхности матриц можно присоединить разнообразные лиганды (анионо-, катионоионообменные, аффинные). Разработанные для хроматографии биополимеров композиционные сорбенты удовлетворяют сформулированным выше требованиям по эксплуатационным свойствам, доступности и относительно невысокой стоимости.

Другое важное направление настоящей работы - применение синтезированных сорбентов для создания высокоэффективных методов хромато-графического анализа и получения в индивидуальном виде олигонуклеоти-дов, белков и пептидов. Разработанные методы удалось успешно использовать для решения ряда конкретных научных, а также практических задач. В результате, например, были получены новые данные о структуре и свойствах недоступных ранее вирусных белков, впервые изучены подклассы иммуноглобулина О ряда животных, разработан эффективный метод получения вы-сокоочищенных и низкореактогенных лошадиных иммуноглобулинов, разработаны и внедрены в технологию производства иммунодиагностикумов новые сорбенты для получения разнообразных аффинно-очищенных антител.

Круг задач, для решения которых могут быть успешно использованы разработанные в настоящей работе методы хроматографической очистки и анализа биополимеров, очевидно, может быть значительно расширен. Несомненно также , что не ограничена приведенными выше примерами сфера использования разработанных новых высокоёмких, стабильных и совместимых с биополимерами сорбентов.

Дальнейшее развитие использованного нами подхода к конструированию сорбентов на основе кремнезёмов, модифицированных сшитыми гидрофильными полимерами, может привести к созданию новых высокоэффективных сорбционных материалов для гидрофобной, эксклюзионной, металлохеллатной, а возможно и других типов хроматографии. Необходимость к таких сорбентах в настоящее время испытывают как практические биотехнологи, так и исследователи, работающие в различных областях биомедицинских наук.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Офицеров, Вячеслав Иванович, 1998 год

Ü. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Braunstein G.D., Raser J., Adler D. , 9t.al. Serum human chorionic gonadotrocin levels throughout normal -pregnancy. ./..• Am. . J. Obset. GinecoT. 1976. V. 126.P. 678-681. 1 "

2. Carreiro-Lewandowski E. Pregnancy testing: Detection of human chorionic gonadotropin CHCG). //J. Med. Technol. 1Q86. V 3, N 9, P. 473-476.

3. Kreig A. , Wenk R. Pregnancy tests and evaluation of placental function, : Clinical Diagnosis and Management/Ed Henry J.B. . Philadelphia, W. B. Saunders Co. 1984. P. 493-499.

4. Warkentin D. L. From A to KCC in pregnancy testing. //Diagnostic Medicine. 1984. V. 7, N 4, P. 35-4$.

Директор по науке предприятия "Вектор-БиоПродукт" Научный сотрудник предприятия 'Вектор-БисПродукт" Старший научный сотрудник предприятия "Вектор-БиоПродукт"

В. И. Офицеров Э. А. Юркина Г. А. Мизенко

По вопросам, касающимся качества наборов, следует обращаться на предприятие "Вектор-БиоПродукт" по адресу:

633159 Новосибирская обл., Новосибирский р-н., п.Кольцово. а/я 65, "Вектор-БиоПродукт"

Телефакс: 8-38^-2-64-73-34 Телетайп: 2150 ЗЛИОН

Телекс: 133196 МРО £11 Телефоны: 64-39-50. 64-76-27, 64-73-34 и в Государственный научно-исследовательский институт по стандартизации и контролю лекарственных средств Минздрава Российской Федерации по адресу:

117246, Москва, В-246, Научный проезд 14а; телефон: [phone]

.. " _ ЛЦ-и-и^

. ^¿Ш^льнкк Госинспекции по /'.^яЧ^еР^^/^декарстБенкых сседств />, ^^е&цинской техники М Ш^^ша 5&р с с I ш с к о I! Федерации " В. А. СевеЬцев

И Н С Т Р У К Ц и я" "по применению набора реагентов для качественного иммунсферментного определения

хорионического гонадотропина в моче человека "ПРЕГНАТЕСТ-ИФА-ХГЧ-1" (вариант 2 - на стрипах)

Рекомендована комиссией по наборам реактивов для иммуноферментного анализа Снеинфекционных) и наборам реактивов для радиоиммунологического анализа Комитета по новой медицинской технике Минздрава Российской Федерации

(протокол N0 1 от 17 февраля 1992 г.)

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов "ПРЕГНАТЕСТ-ИФА-ХГЧ-Г1 предназначен для качественного определения хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) в моче в клинических, диагностических, научно-исследовательских и других лабораториях.

1.1. ХГЧ является специфическим гормоном беременности, он появляется в организме женщин' после имплантации оплодотворенной яйцеклетки в матке на 5-8-й' день после зачатия. Чувствительность набора - 100 МЕ ХГЧ /л, это соответствует концентрации ХГЧ на 8-12-й день после оплодотворения [1].

Набор реагентов "ПРЕГНАТЕСТ-ИФА-ХГЧ-1" может применяться для диагностики:

- беременности на ранних сроках,, за 5-7 дней до очередной менструации,

- нарушения цикла, не связанного с беременностью,

- задержки трофобластической ткани после аборта или родов.

1.2. ХГЧ также продуцируется трофобластйческими опухолями, такими, как хориокарцинома, хорионзпителиома, пузырный занос и др. , и некоторыми опухолями нетрофобластического происхождения: лимфома, опухоли желудка, печени и т.д. [2-4]. Поэтому набор реагентов "ПРЕГНАТЕСТ-ИФА-ХГЧ-1" может применяться в онкологии для раннего обнаружения определенных видов злокачественных опухолей.

2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Принцип метода. Используемый метод основан на двусайтовом твердофазном иммуноферментном анализе с применением 2 типов высоко специфичных антител к разным антигенным детерминантам молекулы ХГЧ: первые антитела сорбированы на поверхности лунок планшета, вторые - конъюгированы с ферментной меткой. ХГЧ из анализируемой пробы мочи одной антигенной детерминантов связывается с антителами, иммобилизованными на твердей * фазе, а другой - с антителами, конъюгированными с ферментной меткой.

^оставлена: :

Директором по науке В. И. Офицеровым, старшим научным сотрудником Г. А.Мизенко, научным сотрудником Э\ А. Юскикой сотрудниками предприятия "Вектор-БиоПродукт".

10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ

Набор хранят и транспортируют при температуре 2-8°С. Допускается хранение и транспортирование при температуре до 25 "С не более 3 суток. Замораживание не допускается. Срок годности набора реагентов - б месяцев со дня выпуска.

11. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Braunstein G. D. , Rasor J. , Adler D. , et.al. Serum human chorionic gonadotropin levels throughout normal pregnancy. //Am..J. Obset.Ginecol. 1976. V. 126, P. 678-681.

2. Carreiro-Lewandowski E. Pregnancy testing: Detection of human chorionic gonadotropin CHCG). //J. Med. Techno1. 1986. V 3, N 9, P. 473-476.

3. Kreig A. , Wenk R. Pregnancy tests and evaluation of placental function, : Clinical Diagnosis and Management/Ed Henry J. В.. Philadelphia, W. B. Saunders Co. 1984. P. 493-499.

4. Warkentin D. L. From A to HCG in pregnancy testing. //Diagnostic Medicine. 1984. V. 7, N 4, P. 35-4^.

Директор по науке предприятия "Вектор-БиоПродукт" В. И. Офицеров

Научный сотрудник / 'гиА1

предприятия "Вектор-БиоПродукт" у^У'/?^ Э. А. Юркина

Старший научный сотрудник г (/

предприятия "Вектор-БиоПродукт" Г.А. Мизенко

По вопросам, касающимся качества наборов, следует обращаться на предприятие "Вектор-БиоПродукт" по адресу:

633159 Новосибирская обл., Новосибирский р-н., п. Кольцове, а/я 65, "Вектор-БиоПродукт"

Телефакс: 8-383-2-64-73-34 Телетайп: 2150 ЭЛИОН

Телекс: 133196 МРО £11 Телефоны: 64-39-50, 64-76-27, 64-73-34 и в Государственный научно-исследовательский институт по стандартизации и контролю лекарственных средств Минздрава Российской Федерации по адресу:

117246, Москва, В-246, Научный проезд 14а; телефон: [phone]

Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии

«ВЕКТОР»

633159 Кольцове» Новосибирской области Тел. [phone] Факс [phone] E-mail [e-mail] Телетайп 133450 ELION RU

От_

На №

Г

№ ___________

«- Г П

Справка

об использовании сорбента Полисил-СА-500 для выполнения научно-прикладных исследований в ГНЦ ВБ «Вектор»

В рамках выполнения плана фундаментальных и поисковых работ и Программы прикладных НИР и ОКР Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» сорбент Полисил-СА-500 был использован в лаборатории иммунобиологических препаратов НИИ молекулярной биологии ГНЦ ВБ «Вектор» для проведения исследований по следующим темам:

1. ВЦ-36 - «Получение гамма-глобулина против вируса клещевого энцефалита из донорской плазмы с применением хроматографии на сорбенте Полисил-СА».

2. ВК-0194 - «Разработка технологии и организация производства противодифтерийных иммуноглобулинов».

3. ВФ-53- «Разработка методов получения высокоочищенных препаратов из донорской крови».

В результате выполнения исследований по данным темам разработан проект экспериментально-производственного регламента и программа проведения доклинических испытаний противодифтерийных иммуноглобулинов, лабораторные методики получения высокоочищенных препаратов: гамма-глобулина против ВКЭ, плазмино-гена и церулоплазмина.

В целом, сорбент Полисил-СА-500 хорошо зарекомендовал себя при использовании в препаративной хроматографии для получения высокоочищенных иммунобиологических препаратов. За счет большой сорбционной ёмкости, селективности и жесткой структуры он позволяет значительно сократить время получения целевых продуктов. Кроме того, сорбент допускает применение высоких удельных нагрузок исходной смеси компонентов на колонки без снижения качества очистки выделяемых белков. К достоинствам Полисил-СА-500 также следует отнести высокую стабильность. Препаративные колонки с сорбентом выдерживали более 100 циклов хроматографии и регенерациии в без снижения эффективности разделения.

Зам. генерального, ГНЦ ВБ «Вектор» член-корр. РАН

л»* .

1В. Нетесов

Зав. лаборатори! иммунобиологии препаратов, к.мл

та

»0.143 и" ^„.'weid"

А. Г. Куслий

Литература

1. Gail S. Preparative chromatography separation in pharmaceutical, diagnostic, and biotechnology industries: Current and future trends.// J. Chromatogr. 1995. V. 707. No 1. P. 23-28.

2. Santambien P., Bengio S., Boschetti. E. Validation et caracterisation de supports chromatographiques appliques a lapurification proteique.// Ann. Pharm. Fr. 1996. V. 54. No 3. P. 119-125.

3. Jungbauer A., Boschetti E. Manufacture of recombinant proteins with safe and validated chromatographic sorbents [Review].//J. Chromatogr. B: Biomed. Ap-plicat. 1994. V. 662. No. 2. P. 143-179.

4. Stevenson R.L. The world of separation science: Current topics in HPLC column technology.// International Lab. 1997. V. 27. № ЗА. P. 20J - 20 L.

5. Черкасов A.H., Пасечник B.A. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. Л.: Химия, 1991. 240 с.

6. Mikes О. High-performance liquid chromatography of biopolymers and biooli-gomers.// J. Chromatogr. Library V. 41 A Amsterdam—Oxford—New York —Tokyo: Elsevier, 1988. 380 p.

7. Kanda Т., Shirota O., Ohtsu Y., Yamaguchi M. Synthesis and characterization of polymer-coated mixed-functional stationary phases with several different hydrophobic groups for direct analysis of biological samples by liquid chromatography.// J. Chromatogr. 1996. V. 722. No 1-2. P. 115-121.

8. Janis L.J., Kovach P.M., Riggin R.M. Towns J.K. Protein liquid chromatographic analysis in biotechnology.// Methods Enzymol. 1996. V. 271. P. 86113.

9. Marchand D.H. Chromatography in analytical biotechnology.// Curr. Opin. Biotechnol. 1994. V. 5. No 1. P. 72-76.

10. Pearson J.D., Regnier F.E. Factors influencing chromatography of proteins on short alkyl-silane bonded large pore silicas.// J. Liquid Chromatogr. 1983. V. 6. P. 497-510.

11. Wilson K.J., Van Wieringen E., Klauser S., Berchtold M.W.S., Hughes G. Comparison of the high-performance liquid chromatography of peptides and proteins on 100- and 300-A° reversed-phase support.// J. Chromatogr. 1982. V. 237. P. 407-416.

12. Kalghatgi K. Micropellicular stationary phases for rapid protein analysis by high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr. 1990. V. 499. No 1. P. 267-278.

13. Regnier F.E. HPLC of Biological macromolecules: The first decade.// Chro-matographia. 1987. V. 27. P. 241-251.

14. Houghten R.A., DeGray S.T. Effect of positional environmental domains on the variation of high-performance liquid chromatographic peptide retention coefficients.//J. Chromatogr. 1987. V. 386. № 1. P. 223-228.

15. Hearn M.T.W. High-performance liquid chromatography of peptides.// Highperformance liquid chromatography: Advances and perspectives./ Ed. Sc. Hor-vath. N.Y.: Academic press, 1983 V. 3. P. 88-156.

16. Regnier F.E. Chromatography of complex protein mixture.// J. Chromatogr. 1987. V. 412. № l.P. 115-143.

17. Drager R., Regnier F.E. Application of the stoichiometric displacement model of retention to anion-exchange chromatography of nucleic acids.// J. Chromatogr. 1986. V. 359. № 1. P. 147-155.

18. Шульц Г., Ширляр P. Принципы структурной организации белков. М.: Мир, 1982. 354 с.

19. Ratafia М., Keenan J. Protein separation.// Amer. Biotechnol. Lab. 1986. V. 4. No 6. P. 40-47.

20. Janson J.-Ch. Recent application of high-performance liquid chromatography to biochemistry. I. Recent advances in high-performance liquid column technology.// Biochem. Soc. Transaction. 1985. V. 13. No 6. P. 1049-1052.

21. Coupek J., Vins I. Hydroxyethyl methacrylate-based sorbents for highperformance liquid chromatography of proteins.// J. Chromatog. 1994. V. 658. No 2. P. 391-398.

22. Anderson D.J. High-performance liquid chromatography (advances in packing materials) [Review]. //Analyt. Chem. 1995. V 67. No 12. P. 475R-486R.

23. Hammond P.M., Scawen M.D. High-resolution fractionation of proteins in downstream processing.// J. Biotechnol. 1989. V. 11. No 2-3. P. 119-134.

24. Коликов B.M., Мчедлишвили Б.В. Хроматография биополимеров на макропористых кремнезёмах. Д.: Наука, 1986. 200 с.

25. Модифицированные кремнезёмы в сорбции, катализе и хроматографии. / Ред. Г.В. Лисичкин, М.: Химия, 1986. 248 с.

26. Nawrocki J., Buszewski В. Influence of silica surface chemistry and coverage of alkylbonded phases for high-performance liquid chromatography. //J. Chroma-togr. 1988. V. 449. No 1. P. 1-24.

27. Kennedy J.F., Rivera Z.S., White C.A. The use of HPLC in biotechnology.// J. Biotechnol. 1989. V.9. No 2. P. 83-106.

28. Unger K.K. Porous silica, its properties and use as support in column liquid chromatography.// J. Chromatogr. Library. Amsterdam: Elservier, 1979. V. 16. 336 p.

29. Энгельгардт X. Жидкостная хроматография при высоких давлениях. М.: Мир, 1980. С. 83-216.

30. ХохловаЕ.Д., Никитин Ю.О., Ворошилова О.И., Макропористые кремнезёмы в иммобилизации и хроматографий биополимеров.// Журнал Всесоюз. хим. общ. 1989. Т. 34. № 3. С. 366-377.

31. Химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия, 1990. Т. 2. С. 443-444.

32. Petro М., Berek D. Polymers immobilized on silica gels as stationary phases for liquid chromatography [Review]. // Chromatographia. 1993. V. 37. No 9-10. P. 549-561.

33. Leonard. M. New packing materials for protein chromatography.// J. Chromatogr. B: Biomed. Applicat. 1997. V. 699. No 1-2. P. 3-27.

34. Hearn M.T.W., Hodder A.N., Aguilar M.I High-performance liquid chromatography of aminoacids, peptides and proteins. 86. The Influence of different displaser salts on the retention and bandwidth properties of proteins. Separated by isocratic anion-exchange chromatography.// J. Chromatogr. 1988. V. 443. No l.P. 97-118.

35. Meyer V.R. High-performance liquid chromatographic theory for the practitioner.//J. Chromatogr. 1985. V. 334. No 3. P. 197-209.

36. Цундель Г. Гидратация и межмолекулярное взаимодействие. М.: Мир, 1972. 404 с.

37. Rounds М.А., Kopaciewicz W., Regnier F.E. Factors contributing to intrinsic loading capacity in silica-based packing materials for preparative anion-exchange protein chromatography.// J. Chromatogr. 1986. V. 362. No 2. P. 187196.

38. Haff L.A. Biopolimer HPLC: Application and instrumentation.// Chromatography. 1987. V. 2. No 1. P. 25-44.

39. Kundu S.K., Roy S.K. A rapid and quantitative method for the isolation of gan-gliosides and neutral glycosphigolipids by DEAE-silica gel chromatography. // J. Lipid Res. 1978. V. 19. No 3. P. 390-395.

40. Horvath C.G., Preiss B.A., Lipsky S.R. Fast liquid chromatography: an investigation of operations parameters and the separation of nucleotides on pellicular ion exchanger.//Anal. Chem. 1967. V. 39. No 12. P. 1422-1428.

41. Alpert A.J., Regnier F.E. Preparation of a porous micropaticulate anion-exchange chromatography support for proteins.// J. Chromatogr. 1979. V. 185. No 3. P. 375-392.

42. Vanecek G., Regnier F.E. Variables in the high-performance anion-exchange chromatography of proteins.//Anal. Biochem. 1980. V. 109. No 2. P. 345-353.

43. Vanecek G., Regnier F.E. Macroporous high-performance anion-exchange supports for proteins.//Anal. Biochem. 1982. V. 121. № 1. P. 156-169.

44. Pearson J.D., Regnier F.E. High-performance anion-exchange chromatography of oligonucleotides.//J. Chromatogr. 1983. V. 255. No 1. P. 137-149.

45. Lawson T.G., Regnier F.E., Weith H.L. Separation of synthetic oligonucleotides on columns of micropaticulate silica coated with crosslinked polyethylene ¡mine.// Anal. Bioohem. 1983. V. 133. No 1. P. 85-93.

46. Kopaciewicz W., Rounds M.A., Fausnaugh J., Regnier F.E. Retention model for high-performance ion-exchange chromatography.// J. Chromatogr. 1983. V. 266. No 1. P. 3-21.

47. Fausnaugh J.L., Pfannkoch E., Gupta S.P., Regnier F.E. High-performance hydrophobic interaction chromatography of proteins.// Anal. Biochem. 1984. V. 137. No 2. P. 464-472.

48. Kopaciewicz W., Rounds M.A., Regnier F.E. Stationary phase contributions to retention in high-performance anion-exchange protein chromatography: ligand density and mixed mode effects.// J. Chromatogr. 1985. V. 318. No 1. P. 157— 172.

49. Drager R.R., Regnier F.E. High-performance anion-exchange chromatography of oligonucleotides.//Anal. Biochem. 1985. V. 145. No 1. P. 47-56.

50. Kopaciewicz W., Regnier F.E. A system to coupled multiple-column separation of proteins.//Anal. Biochem. 1983. V. 129. No 2. P. 372-382.

51. Tice P.A., Robinson G.W., Regnier F.E. Preparative HPIC of soybean trypsin inhibitor using large particle diameter supports.// J. Liquid Chromatogr. 1987. V. 10. No 7. P. 1439-1461.

52. Stringham R.W., Regnier F.E. Selective non-adsorption preparative chromatography of bovine immunoglobuline G. //J. Chromatogr. 1987. V. 409. No 2. P. 305-314.

53. Masaroff I., Regnier F.E. Phase ratio determination in an anion-exchange column having pores partially accessible to proteins.// J. Chromatogr. 1988. V. 442. No l.P. 15-28.

54. Chicz P.M., Shi Z., Regnier F.E. Preparation and evaluation of inorganic anion-exchange sorbents not based on silica.// J. Chromatogr. 1986. V. 359. No 1. P.121-130.

55. Kopaciewicz W., Fulton S., Lee S.Y. Influence of pore and particle size to the frontal uptake of proteins. Implications for preparative anion-exchange chromatography.//J. Chromatogr. 1987. V. 409. No 1. P. 111-124.

56. Schmuck M.N., Gooding D.L., Gooding K.M. Comparison of porous silica packing materials for preparative ion-exchange chromatography.// J. Chromatogr. 1986. V. 359. P. 193-197.

57. Rudollph F.B., Glark S.W. High-performance liquid chromatography of proteins. Purification of the acidic isozyme of adenylosuccinate synthetase from rat liver.//Anal. Biochem. 1982. V. 127. No 1. P. 193-197.

58. Kitagawa N. Ion-exchange chromatography of proteins on a polyethyle-neimine-rafted hydrophylic polymer for high-performance liquid chromatography.//J. Chromatog. 1988. V. 443. No 1. P. 133-141.

59. Gooding K.M., Schmuck M.N. Comparison of weak and strong highperformance anion-exchange chromatography.// J. Chromatogr. 1985. V. 327. No 1. P. 139-146.

60. Watanabe K., Ghow W. S., Royer G.P. Column chromatography of polyeth-ylenimine-silica rapid resolution of nucleotides and proteins with short columns and low pressures.//Anal. Biochem. 1982. V. 127. No 1. P. 155-158.

61. Flashner M. Purification of monoclonal antibodies: Pat. США No 4469630./ Б.И. И.З.Р. 1984. No 57. C. 97.

62. Flashner M., Ramsden H., Grane L.J. Separation of proteins by highperformance anion-exchange chromatography.// Anal. Bioohem. 1983. V. 135. No 2. P. 340-344.

63. Berkowitz S.A. Munipulation of the mobile phase to achieve multiple step protein (calmodulin) purification using the same chromatographic material (a weak anion exchanger).// J. Chromatogr. 1987. V. 398. No.2. P. 288-293.

64. Fernandez M.A., Carta G. Characterization of protein adsorption by composite silica-polyacrylamide gel anion exchangers. 1. Equilibrium and mass transfer in agitated contactors.//J. Chromatogr. 1996. V. 746. No 2. P. 169-183.

65. Boschetti E., Guerrier L., Girot P., Horvath J. Preparative high-performance liquid chromatographic separation of proteins with Hyper D ion-exchange supports.//J. Chromatogr. B: Biomed. Applicat. 1995. V. 664. No 1. P. 225-231.

66. Horvath J., Boschetti E., Guerrier L., Cooke N. High-performance protein separations with novel strong ion exchangers.// J. Chromatogr. 1994. V. 679. No 1. P. 11-22.

67. Tayot J.-L., Tardy M., Gattel P., Plan R., Roumiantzeff M. Industrial ion exchange chromatography of proteins on DEAE-dextran derivatives of porous silica beads.// Chromatography of synthetic and biological polimera. 1978. V. 2. P. 95-110.

68. Tayot J.-L. Development industriel de la chromatographie dans les productions biologiques.// Biofutur. 1986. No 51. P. 69-77.

69. Wirth H.J., Hearn M.T.W. High-performance liquid chromatography of amino acids, peptides and proteins. 141. Adsorbents for the removal of humic acid from surface water based on modified porous zirconia and silica.// J. Chromatogr. 1995. V. 711. No l.P. 223-233.

70. McNeff C. Carr P.W. High-performance anion-exchange chromatography of oligonucleotides and oligodeoxynucleotides on quaternized polyethylenimine-coated zirconia.//Analyt. Chem. 1995. V. 67. No 14. P. 2350-2353.

71. Gupta S., Pfannkoch E., Regnier F.E. High-performance cation-exchange chromatography of proteins.//Anal. Biochem. 1983. V. 128. No 1. P. 196-201.

72. Kopaciewicz W., Regnier F.E. Synthesis of cation-exchange stationary phases using an adsorbed polymeric coating.// J. Chromatogr. 1986. V. 358. No 1. P. 107-117.

73. Gupta S.P., Hanash S.M. Separation of hemoglobin types by cation-exchange high-performance liquid chromatography. //Anal. Biochem. 1983. V. 134. No 1. P.117-121.

74. Gooding K.M., Schmuck M.N. Purification trypsin and other basic proteins by high-performance cation-exchange chromatography.// J. Chromatogr. 1983. V. 266. P. 663-642.

75. Cachia P.J., Van Eyk J., Chong P.C.S., Taneja A., Hodges R.S. Separation of basic peptides by cation-exchange high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr. 1983. V. 266. P. 651-659.

76. Gooding K.M., Schmuck M.N. Ion selectivity in the high-performance cation-exchange chromatography of proteins.// J. Chromatogr. 1984. V. 296. No 1. P. 321-328.

77. Alpert A.J. Cation-exchange high-performance liquid chromatography of proteins on poly(aspartic acid)-silica.// J. Chromatogr. 1983. V. 266. No 1. P. 2337.

78. Alpert A.J., Andrews P.C. Cation-exchange chromatography of peptides on poly(2-sulfoethyl aspartamide)-silica.// J. Chromatogr. 1988. V. 443. No 1. P. 85-96.

79. Ou C.-N., Buffone G.J., Reimer G.L., Alpert A.J. High-performance liquid chromatography of human hemoglobins on a new cation exchanger.// J. Chromatogr. 1983. V. 266. P. 197-205.

80. Xie J., Aguilar M.I., Hearn M.T. High-performance liquid chromatography of amino acids, peptides and proteins. CXXXVIII. Adsorption of horse heart cytochrome C onto a tentacle-type cation exchanger.// J. Chromatogr. 1995. V. 691. No 1-2. P. 263-271.

81. Grimmis D.L., Gorka J., Thoma R.S., Schwartz D. Peptide characterization with a sulphoethyl-aspartamide column.// J. Chromatogr. 1983. V. 443. P. 6371.

82.Fisher L. An introduction to gel chromatography. In: Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology./ Eds. Work T.S, and Work E. Amsterdam—London: North Holland Publishing Co, 1996. V. 1. P. 151-396.

83. Ricker R.D., Sandoval L.A. Fast, reproducible size-exclusion chromatography of biological macromolecules.//J. Chromatogr. 1996. V. 743. No 1. P. 43-50.

84. Haller W. Chromatography on glass of controlled pore size.// Nature. 1965. V. 206. No 4985. P. 693-696.

85. Regnier F.E., Noel R. Glyceropropylsilane bonded phase in the steric exclusion chromatography of biological macromolecules.// J. Chromatogr. Sci. 1976. V. 14. No 7-9. P. 316-320.

86. Hiat C.W., Shelokov A., Rosenthal E.J., Galimore J.M. Treatment of controlled pore glass with poly(ethylene oxide) to prevent adsorbtion of rabies virus.// J. Chromatogr. 1971. V. 56. No 2. P. 362-364.

87. Szabo E., Offenmteller K., Csato E. High-performance liquid chromatography of proteins on stabilized polymer-diol-bonded silica gel stationary phase.// Anal. Chem. 1988. V. 60. No 3. P. 213-216.

88. Kelner D.N., Mayhew J.M., Hobbe J.S, Size-exclusion chromatography by HPLC: Effect of column matrix and mobile phase composition on enzyme recovery.//Amer. Biotechnol. Laboratory. 1989. No 2. P. 40-43.

89. Colpan M., Riesner D. High-performance liquid chromatography of nucleic acids.// Modern Physical Methods in Biochemistry. 1988. Part B. P. 85-105.

90. Pfannkoch E., Lu K.C., Regnier F.E., Barth H.G. Characterization of save commercial high-performance size-exiousion chromatography columns for water-soluble polymers.// J. Chrom. Sci. 1980. V. 18. No 5. P. 430-441.

91. Schimdt D.E., Giese R.W., Conron D., Karger L. High-performance liquid chromatography of proteins on a diol-bonded silica gel stationary phase.// Anal. Chem. 1980. V. 52. No 1 P. 177-182.

92. Unger K. High-performance size-exclusion chromatography.// Methods en-zymol. 1984. V. 104. Part C. P. 154-169.

93. Chang S.H., Noel R., Regnier F.E. High speed ion exchange chromatography of proteins.// Anal. Chem. 1976. V. 48. No 13. P. 1839-1845.

94. Иванов A.E., Жигис JI.С., Турчинский М,Ф., Копьёв В.П„ Решетов П.Д., Зубов В.П., Кастрикина Л.Н., Ленская Н.И. Полимерно-модифицированные кремнезёмные сорбенты для молекулярно-ситовой хроматографии биополимеров.// Молек. генетика, микробиол. и вирусология. 1987. No 11. С. 39-46.

95. Petro M., Gemeiner P., Berek D. Dextran-grafted silica gel for highperformance size-exclusion chromatography of proteins.// J. Chromatogr. 1994. V. 665. No 1. P. 37-45.

96. Santarelli X., Muller D., Jozefonvicz J. Dextran-coated silica packings for high-performance size-exclusion chromatography of proteins.// J. Chromatogr. 1988. V. 443. No l.P. 55-62.

97. Narayanan S.R., Knochs S., Crane LJ. Preparative affinity chromatography of proteins. Influence of the physical properties of the base matrix.// J. Chromatogr. 1990. V. 503. No 1. P. 93-102.

98. Chase H.A. Optimisation of adsorption techniques for purification of biomole-cules.//Adsorption: science and technology./ Ed. Rodrigues A.E. Kluver: Acad. Publichers, 1989. P. 539-560.

99. Larsson P.O., Glad L., Hansson M.O., Ohlson S., Mosbach K. Highperformance liquid chromatography.// Advances in chromatography. 1983. V. 21. No l.P. 41-85.

100. Wilcheck M., Miron T., Kohn J. Affinity chromatography.// Methods in en-zymol. 1984. V. 104. No 1. P. 3-55.

101. Narayanan S.R., Crane L.J. Affinity chromatography support: A look at performance requirements.//Trends in biotechnol. 1990. V. 8. No 1. P. 12 -16.

102. Jones C., Patel A., Griffin S., Martin J., YoungP., O'Donnell K., Silverman C. Current trends in molecular recognition and bioseparation.// J. Chromatogr. 1995. V. 707. No l.P. 3-22.

103. Mohr P., Pommtrening K. In: Affinity chromatography: Practical and Teo-retical aspects./ Ed. Cazes J. N.Y.: Marcel Dekker, 1985.

104. Mingalyov, P.G.; Fadeev, A.Y. Activated silica supports for preparation of chromatographic sorbents. A comparative study of silicas containing attached epoxy, tosyloxy and halogen groups.// J. Chromatogr. A 1996. V. 719. No 2. P. 291-297.

105. Ernst-Cabrera К., Wilchek M. Silica containing hydroxyl groups for Highperformance affinity chromatography.//Analyt. biochem. 1986. V. 159. No 2. P. 267-272.

106. Kinkel J.N., Anspach В., Unger K.K. Separation of plasma proteins of cultured human fibroplasts by affinity chromatography on bonded microparticulate silicas.//J. Chromatogr. 1984. V. 297. No 1. P. 167-177.

107. Jonsson U., Malmqvist M., Ronnberg I. Immobilization of immunoglobulins on silica surface.I. Stability. // Biochem. J. 1985. V. 227. No 2. P. 363-371.

108. Jarret H.W. Development of n-hydroxysuccinimide ester silica, novel support for high-performance affinity chromatography.// J. Chromatogr. 1987. V. 405. No 1. P. 179-189.

109. Tayot J.-L., Holgrem J., Svennerholm L., Lindblad M., Tardy M. Receptor specific large-scale purification of cholera toxin on silica beds derivatized with LysoGM1 ganglioside.// Eur. J. Bioohem. 1981. V. 113. No 2. P. 249-258.

110. Иванов A.E., Жигис JI.С., Чеховских Е.А., Решетов П.Д., Зубов В.П. Хлорангидрид содержащие композиционные носители для иммобилизации биоспецифических лигандов.// Биоорган химия. 1986. Т. 11. No 11. С. 1527-1532.

111. Козлов Л.В., Сизой М.Н., Зинченко А.А., Иванов А.Е., Зубов В.П. Связывание и активация первого компонента комплемента человека на искусственных матрицах.// Биоорган, химия. 1985. Т. 10. No 12. С. 16291639.

112. Иванов А.Е., Грин М.А., Жильцов В.В., Кизюн С.М., Афанасенко Г.А., Зубов В.П. Полимерно-модифицированные твердокаркасные носители для аффинной хроматографии.// Прикладн. биохим. и микробиол. 1990. Т. 26. Вып. 6. С. 840-847.

113. Royer G.P., Green G.M., Sinka D.K. Rigid support materials for immobilization of enzymes.// J. Macromol. Sci. Chem. 1976. V. A-10. No 1-2. P. 289-307.

114. Кадушявичюс В.А., Суджювене О.Ф., Песлякас И.-Г.И. Способ получения сорбентов для очистки белков. А.с. СССР № 1061828.// Б.И. 1983. № 47.С. 26.

115. Tardy М., Tayot J.-L., Roumyantzeff М., Plan R. Affinity chromatography on porouse inorganic supports.// Chromatography of synthetic and biological po-lymera. 1978. V. 2. P. 231-236.

116. Dawidowicz A.L. The influence of molecular weight of dextran forming a heparin-bonding polysaccharide layer on the chromatographic properties of sorbents for HPAC analysis of human antithrombin III.// Chromatographia. 1995. V. 41. No 1-2. P. 88-93.

117. Santarelli X., Zhon F.L., Muller D., Jozefonvicz J., Moroux Y., Boschetti E. Dextran-coated silica beards and their use as matrix for affinity chromatography.// Biol. Chem. Hoppe-Seyler. 1987. V. 368. No 7. P. 772-776.

118. Латич В.И., Варламов В.П., Семенова Н.Н., Рогожин С.В. Иммобилизация ДНК на модифицированных неорганических сорбентах.// Биохимия. 1980. Т. 45. No 9. С. 1597-1602.

119. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986. 288 с.

120. Belenkii B.G., Vilenchik L.Z. Modern liquid chromatography of macromole-cules. Amsterdam, N.Y., Oxford, Tokyo: Elsevier, 1983. P. 432.

121. Snyder L.R., Stadalius M.A. High-performance separation of large molecules: a general model.// High-performance liquid chromatography: Advances and perspectives./ Ed. Sc. Horvath. N.Y.: Academic press, 1986. Y. 4. P. 195-309.

122. Corradini D., Kalghatgi K., Horvath C. Effect of mobile phase additives on peptide retention in reversed-phase chromatography with pellicular and totally porous sorbents. // J. Chromatogr. 1996 Y. 728. No 1-2. P. 225-233.

123. Guo D., Mant C.T., Hodges R.S. Effects of ion-paring reagents on the prediction of peptide retention in reversed-phase high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr. 1987. V 386. № 1. P. 205-232.

124. Dong M.W., Gant J.R., Larsen B.R. Advances in fast reversed-phase chromatography of proteins.// BioChromatography. 1989. V. 4. № 1. P. 19-34.

125. Kirkland J.J., McCormick R.M. Liquid phase separation methods: HPLC, FFF, Electrophoresis.// Chromatograpia. 1987. V. 24. P. 56-76.

126. Snyder L.R , Moore C.F., Nylen E.S., Becker K.L. Prediction of peptide retention time on reversed-phase liquid chromatography: Prospectives and limitations.// BioChromatography. 1988. V. 3. No 1. P. 100-111.

127. Snyder L.R. and Kirkland J.J. Introduction to modern liquid chromatography. N.Y.: Wiley-Interscience, 1979. P. 863.

128. Cooke N.H.C, Archer B.G., O'Hare M.J., Nice E.C., Capp M. Effect of carbon length and carbon load on the performance of alkyl-bonded silica for protein separation.//J. Chromatogr. 1983. V. 255. № 1. P. 115-123.

129. Hodges R.S., Parker J.M.R., Mant C.T., Sharma R.R. Computer simulation of high-performance liquid chromatography of peptides and proteins digest for development of size-exclusion, ion-exchange and reversed-phase chromatographic methods.// J. Chromatogr. 1988. V. 458. № 1. P. 147-167.

130. Hearn M.T.W., Aguilar M.I Reversed phase high-performance liquid chromatography of peptides and proteins. In: Modern, physical methods in bio-chemictry Part B. / Ed. A. Neuberger and .L.M. Van Deenen. N.Y.: Elsevier, 1988. P.107-142.

131. Wilson K.J., van Wieringer E., Klauser S., Berchtold M.W., Hughes G.J. Comparison of the high-performance liquid chromatography of peptides and proteins on 100- and 300 A° reversed-phase support.// J. Chromatogr. 1982. V. 237. P. 407-416.

132. Burton E.G., Nugent K.D., Slattry T.K., Summers B.R., Snyder L.R. Sepa-ratin of proteins by reversed-phase high performance chromatography. 1. Optimizing the columns.// J. Chromatogr. 1988. V. 443. P. 363 - 379.

133. Tweeten K.A., Tweeten T.N. Reversed-phase high performance chromatography of proteins in resin-based wide-pore packing.// J. Chromatogr. 1986. V. 359. No l.P. 111-119.

134. Borman S. Analytical biotechnology of recombinant products.// Anal. Chem 1987. V. 59. P. 969-973A.

135. Iadarola P., Zapponi M.C., Meloni M.L., Minchiotti L., Galliano M., Ferri G. High-performance liquid chromatography of complex mixtures of cyanogen bromide-reduced peptides from different proteins.// J. Chromatogr. 1988. Y. 443. №2. P. 317-328.

136. Marston F.A.O. The purification of eucaryotic polypeptides synthesized in Escherichia coli.H Biochem. J. 1986. V. 240. № 1. P. 1-12.

137. Schein C.H. Production of soluble recombinant proteins in bacteria.// Biotechnology. 1989. V. 7. № 11. P. 1141-1149.

138. DePhillips P., Buckland B., Gbewonyo K., Yamazaki S., Sitrin R. Reversed-phase high-performance liquid chromatography assay for recombinant acidic fibroblast growth factor in E. coli cell suspensions and lysate samples.// J. Chromatogr. A. 1994. V. 663. No 1. P. 43-51.

139. Ebgelhardt H., Dreyer B., Schmidt H.// Chromatographia. 1982. V. 16. No 1. P. 11-17.

140. Schomburg G., Deege A., Kohler J., Bien-Vogelsang U. Immobilization of stationary liquids in reversed- and normal-phase liquid chromatography. Production and testing of materials for bonded-phase chromatography.// J. Chromatogr. 1983. V. 282. No 1. P. 27-39.

141. Bien-Vogelsan U., Deege A., Figge H., Kohler J., Schomburg G. Synthesis of stationary phases for reversed-phase LC using silanization and polymer coating.// Chromatographia. 1984. V. 19. No 3. P. 170-179.

142. Schomburg G., Kohler J., Figge H., Deege A., Bien-Vogeleang U. Immobilization of stationary liquids on silica particles by y-radiation.// Chromatographia, 1984. V. 18. No 5. P. 265-274.

143. Figge H., Deege A., Kohler J., Schomburg G. Stationary phase for reversed-phase liquid chromatography. Coating of silica by polymers of various polarities.// J. Chromatogr. 1986. V. 351. No 3. P. 393-408.

144. Xindu G., Carr P.D. Use of fluorinated bonded phases in reversed-phase high-performanoe liquid chromatography of proteins.// J. Chromatogr. 1983. V. 269. No 2. P. 96-102.

145. Kopaciewicz W., Regnier F.E. Synthesis of an adsorbed reversed-phase packing material for the separation of proteins and peptides.// J. Chromatogr. 1986. V. 358. No 1. P. 119-128.

146. Сабуров В.В., Туркин С.И., Мелков Ф.М., Зубов В.П. Перфторполимерсодержащие сорбенты для хроматографии нуклеиновых кислот. Методы выделения и анализа биохимических реактивов.// V Всесоюзная конференция по методам получения и анализа биохимических препаратов. Тез. докл. Рига: 1987. С. 331.

147. Kataev A.D., Saburov V.V., Reznikova О.А., Kapustin D.V., Zubov V.P. Polytrifluorostyrene-coated silica as a packing for column liquid chromatography.//J. Chromatog. 1994 V. 660. No 1-2. P. 131-136.

148. Danielson N.D., Wangsa J., Shamsi S.A. Synthesis and characterization of a polymeric fluorocarbon-diamine reversed phase weak anion exchange silica HPLC column packing.// J. Liquid Chromatogr. 1995. V. 18. No 13. P. 25792592.

149. Zhelev N.Z., Barratt M.J., Mahadevan L.C. Use of reversed-phase highperformance liquid chromatography on polystyrene-divinylbenzene columns for the rapid separation and purification of acid-soluble nuclear proteins.// J. Chromatogr. 1997. V. 763. No. 1-2. P. 65-70.

150. Carson K., Steury J. New therapeutic products drive the bioindustry's demand for HPLC systems.// Genet. Eng. News. 1995. No 9. P. 6-7.

151. Lork K.D., Rudolph M. A new stationary phase for HPLC: Reversed-phase alumina.// Internation. Lab. 1997. V. 27. № 4 A. P. 16E.

152. Sykora D., Tesarova E., Popl M. Interactions of basic compounds in reversed-phase high-performance liquid chromatography. Influence of sorbent character, mobile phase composition, and pH on retention of basic compounds.// J. Chromatogr. 1997. V. 758. No 1. P. 37-51.

153. Weber T.P. Jackson P.T. Carr P.D. Chromatographic evaluation of porous carbon clad zirconia microparticles.// Analyt. Chem. 1995. V. 67. No 17. P. 3042-3050.

154. Maity K.K., Chattaraj S.C., Das S.K. Liquid chromatography in biotechnology: An overview.// Indian Drags. 1989. V. 27. No 1. P. 1-11.

155. Oscarsson S. Influence of salts on protein interactions at interfaces of am-phiphilic polymers and adsorbents.// J. Chromatogr. B: Biomed. Applicat. 1995. Y. 666. No LP. 21-31.

156. Остерман JI.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М: Наука, 1985. 183 с.

157. Roetter B.F., Myers J.A., Ladisch M.R., Regnier F.E. Adsorption phenomena in hydrophobic interaction chromatography.// Biotechnol. Progress. 1989. V. 5. No 3. P. 79-88.

158. Hjerten S., Rosengren J., Pahiman S, Hydrophobic interaction chromatography. The Synthesis and the use of some alkyl and aryl derivatives of agarose.// J. Chromatogr. 1974. V. 101. No 2. P. 281-288.

159. Rosengren J., Pahiman S., Glad M., Hjerten S. Hydrophobic interaction chromatography on non-charged Sepharose derivatives. Binding of model protein, related to ionic strength, hydrophobicity of the substituent and degree of substitution (determinated by MMR).// BBA. 1975. V. 412. No 1. P. 51-61.

160. Jennissen H.P. Multivalent interaction chromatography as exemplified by adsorbtion and desorbtion of skeletal muscle enzymes on hydrophobic alkyl-agaroses.//J. Chromatogr. 1978. V. 159. No 1. P. 71-83.

161. Kato Y., Kitamura Т., Hashimoto T. New support for hydrophobic interaction chromatography of proteins.//J. Chromatogr. 1984. V. 292. No 2. P. 418-426.

162. Shin M., Sakihama N., Oshino R., Sasaki H. Butyl-Toyopearl 650 as new hydrophobic adsorbent for water-soluble enzyme-proteins.// Anal. Biochem. 1984. Y. 138. No 1. P. 259-261.

163. Cohen S., Westrop R. Protein separation by hydrophobic interaction HPLC.// International Biotechnol. Lab. 1987. V. 5. No 1. P. 30-33.

164. Josic D., Hoffmann W., Reutter W. Ion-exchange and hydrophobic interaction high-performance liquid chromatography of proteins. Practical study.// J. Chromatogr. 1986. V. 371. No 1. P. 43-54.

165. Ueda T., Yashui Y., Ishida Y. Study of optimal packing for high-performance hydrophobic-interaction chromatography of proteins.// Chromatographia. 1987. V. 24. P. 427-432.

166. Kurganov A., Puchkova Y., Davankov V., Eisenbeiss F. Polyvinylpyrrolidone-coated silica packings for chromatography of proteins and peptides.// J. Chromatogr. 1994. V. 663. No 2. P. 163-174.

167. Ivanov A.E. Zhigis L.S. Rapoport E.M. Lisyutina O.E. Zubov Y.P. Characterization of weak hydrophobic composite sorbents and their application to the isolation of bacterial lectin.// J. Chromatogr. B: Biomed. Applicat. 1995. V. 664. No 1. P. 219-223.

168. Kennedy L.A., Kopaciewicz W., Regnier F.E. Multimodal liquid chromatography columns for the separation of proteins in either the anion-exchanger or hydrophobic interaction mode.// J. Chromatogr. 1986. V. 359. No 1. P. 73-84.

169. Kopaciewicz W., Rounds M.A,, Regnier F.E. Stationary phase contributions on relation in high-performance anion-exchange protein chromatography: li-gand density and mixed mode effects.// J. Chromatogr. 1985. V. 318. No 2. P. 157-172.

170. Bisohoff R., McLaughlin L.W. Nucleic acid resolution by mixed-mode chromatography.// J. Chromatogr. 1984. V. 296. P. 329-327.

171. Heinitz M.L., Kennedy L., Kopaciewicz W., Regnier F.E. Chromatography of proteins on hydrophobic interaction and ion-exchange chromatographic matrices: mobile phase contributions to selectivity.// J. Chromatogr. 1988. V. 443. No l.P. 173-182.

172. Alpert A.J. High-performance hydrophobic-interaction chromatography of proteins on a series of poly(alkyl aspartamide)-silicas.// J. Chromatogr. 1986. V. No 1.359. P. 85-97.

173. Stevenson R. Weak affinity hromatography: A new tool for immunoassays.// Amer. Biotechnol. Laboratory. 1990. V. 8. No 4. P. 6-8.

174. Калашников В.В, Самуков В.В., Шубина Т.Н., Ямщиков В.Ф. Использование обращенно-фазовой хроматографии в нуклеотидном синтезе.// Биоорган, химия. 1983. Т. 9. № 5. С. 666-672.

175. Eveleigh J.W. Practical consideration in the use of immunosorbents and associated instrumentation.// Affinity chromatography and related techniques./Eds. Gribnau T.C., Yisser J., Nivard R.J.F. Amsterdam: Elsevier, 1982. P. 503.

176. Krasilnikov I., Borisova V. Adsorption and chromatographic properties of modified silica sorbents for the production of viral preparations.// J. Chroma-togr. 1988. V. 446. No 1. P. 211-219.

177. Cress M.C., Ngo T. Site specific immobilization of immunoglobulins.//Amer. Biotechnol. Laboratory. 1989. V. 7. № 2. P. 16-19.

178. Philips T.M., Queen W.D., More N.S., Thompson A.M. Protein A-coated glass beads. Universal support medium for high-performance immunoaffinity chromatography.// J. Chromatogr. 1985. V. 327. No 2. P. 213-219.

179. Практическая химия белка./ Ред. Дабре А. М.: Мир, 1989. С. 290-296.

180. Phelam М.А., Cohen К.A. Gradient optimization principles in reverse-phase liquid chromatography and the separation of influenza virus components.// J. Chromatogr. 1983. V. 266. № 1. P. 55-66.

181. Heukenshoven J., Dernick R. Reversed-phase liquid chromatography of virus proteins and other large hydrophobic proteins in formic acids containing solvents.//J. Chromatogr. 1982. V. 252. P. 241-254.

182. Boege U., Heinz F.X., Wengler G., Kunz C. Amino acid composition and amino-terminal sequences of the structural proteins of the flavivirus European tick-born encephalitis virus.//Virology. 1983. V. 126. № 2. P. 651-657.

183. Барам Г.И., Грачев M.A., Назимов И.В., Плетнев А.Г., Прессман Е.К., Рубин С.Г., и др. Последовательность аминокислот некоторых триптических пептидов белка оболочки вируса клещевого энцефалита.// Биоорган, химия. 1985. Т. 11. № 12. С. 1677-1680.

184. Pletnev A.G., Yamshcikov V.F., Blinov V.F. Tick-born encephalitis virus genome.// FEBS Lett. 1986. V. 200. P. 317-321.

185. Плетнев А.Г., Ямщиков В.Ф., Блинов B.M. Нуклеотидная последовательность генома и полная аминокислотная последовательность полипротеина вируса клещевого энцефалита.// Биоорган, химия. 1989. Т.15. № 11. С. 1509-1520.

186. Bell J.P., Kinney R.M., Trent D.W. An evolutionary tree relation eight al-phaviruses of their glycoproteins.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V. 81. P. 4704-4706.

187. Kinney R.M., Johnson B.B., Welch J.B., Tsuchiga K.R., Trent D.W. The full-length nucleotide sequences of the virulent Trinidad donkey strain of the Venezuelan eqeuine encephalitis virus and its attenuated vaccine derivative strain TC-83.//Virology. 1989. V. 170. No 1. P. 19-70.

188. Straus J.N., Bell J.B., Rice C.M., Huncapillar M.W. The N-terminus of pE2 in Sindbis virus-infected cells.// Virology. 1982. V. 119. № 2. P. 255-267.

189. Bell J.B., Bond M.W., Huncapillar M.W., Straus J.N., et al. Structural proteins of western equine encephalomielitis virus: amino acid composition and N-terminal sequence.// J. Virol. 1983. V. 45. No 2. P. 708-714.

190. Волчков В.E., Волчкова В.А., Нетесов С.В. Полная нуклеотидная последовательность генома вируса восточного енцефаломиелита лошадей.// Молекул, генетика микробиол. вирусол. 1991. № 5. С. 8-15.

191. Kozak М. Possible role of flanking nucleotides in recognition of the AUG in initiator codon by eucariotic ribosomes.// Nucl. Asid Res. 1981. V. 9. P. 52335252.

192. Boege U., Cygler M, Wengler G., Dumas P., Tsao J., Luo M. Sindbic virus core proteins.//J. Mol. Biol. 1989. V. 208. № 1. P. 79-82.

193. Kiley M.P., Cox N.J., Elliot L.H. Phisicochemical properties of Marburg virus: Evidence for three distinct viruses strains and their relationship to Ebola virus.//J. Gen. Virol. 1988. V. 69. P. 1957-1967.

194. Skechel J., Scrace G. Disulphide bonds of the haemagglutinin of asian influenza virus.// Nature. 1981. V. 289. № 5796. P. 422-424.

195. Both G.P., Sleigh M.J., Beudet V.I., Moss B.A. Structure and variation in influenza virus./ Ed. Lower G., Air G. N. Y.: 1981. P. 81-89.

196. Беклемишев А.Б., Блинов B.M., Василенко C.K. Синтез, клонирование и определение первичной структуры полноразмерной ДНК-копии гена белка NP вируса гриппа А.// Биоорган, хим. 1985. Т. 11. № 5. С. 636-640.

197. Самохвалов Е.И., Каргинов В.А., Чижиков В.Е. Первичная структура сегмента 7 РНК вируса гриппа A/USSA/90/77 (H,Nj).// Биоорган, хим. 1985, Т. 11. № 8. С. 1080-1085.

198. Raymond F.L., Caton A. J., Сох N.J., Kendal А.Р., Brownlee G.G. The antigenicity and evolution of influenza HI haemagglutinin from 1950—1957 and 1977—1983: Two pathways from one gene.// Virology. 1986. V. 148. № 2. P. 275-287.

199. Wilson I.A., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of haemagglutinin, membrane glycoprotein of influenza virus at 3 A0 resolution.// Nature. 1981. V. 289. P. 366-373.

200. Daniels R.S., Doyglas A.R., Skehel J.J. Antigenic analyses influenza virus haemagglutinin with different receptor-binding specificities.//Virology. 1984. V. 138. P. 174-177.

201. Arcus Y.M., Knight C.A. Antigenic peptides of the influenza virus haemagglutinin: reactivity with virus neutralizing antibodies.// Intervirology 1981. V. 15. P. 145-153.

202. Streuli M., Nagata S., Weissman C. At least three human type a interferons: structure a2.// Science. 1980. V. 209. P. 1343-1348.

203. Wetzel R. Assignment of the disulphide bonds of leukocyt interferon.// Nature. 1981. V. 289. No 5798. P. 606-607.

204. Weiner H.L., Weiner L.H., Swain J.L. Tissue distribution and developmental expression of messenger RNA encoding Angiogenin.// Science. 1987. V. 237. No 4812. P. 280-282.

205. Коваленко С.П., Лиеняк И.А., Мертвецов Н.П. Экспрессия синтетического гена ангиогенина человека в Е. Coli в составе слитого белка бета-галактозидаза-ангиогенин.// Биоорган, хим. 1989, Т. 14. № 4. Р. 492-498.

206. Corthier G., Boschetti Е., Charley-Poulan J. Improved method for IgG purification from various animal species by ion-exchange chromatography.// J. Immunol. Meth. 1984. V. 66. № 1. P. 75-79.

207. Edwards W.G., Wellington C.A. Method for improved protein separation in human and animal sera.// J. Chromatogr. 1977. V. 135. № 4. P. 463-469.

208. Брок Й. Иммунохимические методы: пер. с немецк./ Ред. Фримель Г., М.: Медицина, 1987. С. 390-413.

209. Temponi М., Kageshita Т., Perosa F., Ono R., Okada Н., Ferrone S. Purification of murine IgG monoclonal antibodies from by precipitation with caprilic acid: comparison with other methods purification.// Hibridoma. 1989. V. 8. No 1. P. 442-444.

210. Harrison E.T., Mage M.G. Sheep gamma-1 and gamma-2 immunoglobulins and them polypeptide chains.// Biochim. Biophis. Acta. 1967. V. 147. № 1. P. 52-59.

211. Morgan E.L., Wiegle W.O. Biological activities residing in the Fc region of immunoglobulin.// Advances in immunology. 1987. V. 40. No 1. P. 61-134.

212. Dobre M.A., Marx A., Ghetie V. Isolation of rabbit IgG fraction with cyto-philic properties.// J. Immunol. 1983, V. 59. No 2. P. 339-348.

213. Gray G.D., Mickelson M.M., Crim J.A. Demonstration of two gammaglobulin subclasses in the goat.// Immunuchrmistry. 1969. V. 6. No 2. P. 641644.

214. Schwarts W.E., Clark F.M., Sabran I.B. Process-scale isolation and purification of immunoglobulin.// LC and GC. 1986. V. 4. No 5. P. 442-444.

215. Melamed M.D. Classification of IgGl and IgG2 isotypes.// Immunochemis-try. 1976. V. 13. No 3. P. 281-283.

216. Холчев Н.В. // Современные препараты иммуноглобулинов для медицинского применения. 1976. Т. 18. С. 5-13.

217. Гавриленкова В.Ю., Каргина Т.М., Мовсесянц А.А., Сергеева Г.М. Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов. М.: Медицина , 1982. С. 28-33.

218. Анджапаридзе О.Г./ Серопрофилактика и серотерапия вирусных инфекций ив эксперименте и клинике. М.: Медицина, 1968. С. 149-170.

219. Reinmann F., Wittman-Liebold В. Polypeptide hormones./ Eds. Beers R.F., Bosselt E.F. Roven press, 1980. P. 87-120.

220. Matteucei M.D., Caruthers M.H. The synthesis of oligodeoxypyrimidines on polymer support.// Tetrahedron Lett. 1980. V. 21. No 8. P. 719-722.

221. Каргер Б. Связь теории и практики в высокоскоростной жидкостной хроматографии.// Современное состояние жидкостной хроматографии./ Ред. Киркленд Дж. М.: Мир, 1974. С. 170.

222. Данилюк Н.К., Ястребов С.И., Артамонова Т.П., Попов С.Г. Упрощенный метод Максама-Гилберта для определения первичной структуры олигонуклеотидов и фрагментов ДНК.// Биоорган, хим. 1986. Т. 12. №9. С. 1185-1188.

223. Карпышев Н.Н., Артамонова Т.П., Попов С.Г. Оптимизация загруженности силикатных носителей для твердофазного синтеза олигонуклеотидов.// Биоорган, хим. 1986. Т. 12. № 8. С. 1063-1069.

224. Peterson G.L. Determination of total protein.// Meth. Enzymol. 1983. V. 91. P. 95-119.

225. Laemly U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of heard of bacteriphage T4.// Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.

226. Johanson B.G. Agarose gel-electrophoresis. //Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1972. V.29. No 124. P. 7-19.

227. Девени Т., Геррей Я. Аминокислоты, пептиды и белки. М.: Мир, 1976. С. 166.

228. Crestfield A.M., Moore A.B. The preparation and enzymatic hydrolysis of re-dused and S-carboxymethylated proteins.// J. Biol. Chem. 1963. V. 238. P. 622627.

229. Towbin H., Stalhelin Т., Gordon J. Electophoretic transfer of protein from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some application.// PNAS USA. 1979. V. 76. P. 4350-4354.

230. Jackson D., Brown L., White D. Antigenic determinants of influenza vims haemagglutinin. VI. Antigenic characterization of oligosaccharide sidechaines from HA.//J. Gen. Virol. 1981. V. 52. No 1. P. 163-168.

231. Арутюнян A.A., Северин E.C., Варшавский Я.М. Исследование первичной структуры тирозинсодержащего пептида гистона F1 с использованием дансильного ультамикрометода.// Биохимия. 1975. Т. 40. № 4. С. 878-884.

232. Tarr G.E. Method in protein sequence analysis./ Ed. Elzigna M., Humana Press, 1980. P. 223-232.

233. Hawke D.H., Harris D.C., Shively J.E. Microsequence of peptides and proteins. V. Design and performance of a novel Gas-Liquid-solid phase instrument.//Analyt. Biochem. 1985. V. 147. P. 315-330.

234. Romani M., Vidali G., Tahourdin C.S.M., Bustin M. Solid phase radioimmunoassay for chromosomal components.// J. Biol. Chem. 1980. V. 255. No 2. P. 468-474.

235. Armstrong G.D., Paul R.W., Lee P.W.K. Studies on reovirus receptors of L cells: virus binding characteristics and comparison with reovirus receprors of erythrocytes.//Virology. 1984. V. 138. P. 37-47.

236. Чард Т. Радиоиммунологические методы. M.: Мир, 1981. 224 с.

237. Mancini G., Garbonara A.O., Haremans J.E. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion.// Immunochemistry, 1965. V. 2. No 3. P. 235-254.

238. Руководство по вакцинному и сывороточному делу./под ред. П.Н. Бургасова М.: Медицина, 1978. С. 315-321.

От автора

Автор выражает благодарность сотрудникам Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор», оказавших содействие и помощь в выполнении настоящей работы. На разных этапах работы в ней принимали активное участие С.И. Ястребов, З.А. Акименко, JI.M. Дедкова, Э.А Юркина, у которых автор являлся научным руководителем диссертационных работ на соискание ученой степени кандидата наук. Автор выражает искреннюю благодарность за поддержку в работе и ценные советы В.В. Са-мукову, за плодотворное сотрудничество В.Ф. Ямщикову, И.П. Гилевой, А.Г. Покровскому, В.Б. Локтеву, A.A. Ильичеву, С.Б. Фроловой, Г.А. Ми-зенко, А.Н. Сабирову, С.С. Решетникову, А.Ф. Шевалье, В.В. Калашникову, Т.В. Михайловой, Н.М. Кудояровой, Н.В. Мерзликину, A.A. Чепурнову; за квалифицированную техническую помощь в работе Н.Е. Арбузовой, H.A. Лазаревой, С.П. Петрущковой, Н.П. Хлопцевой, Б.А. Мищенко. Автор с особой признательностью благодарит профессора С.Н. Загребельного за интерес к настоящей работе, полезные консультации и неоценимую помощь в её завершении.