Кондиционирование физиологического статуса альтернативного пути активации комплемента тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Плескова, Светлана Николаевна

• Плескова, Светлана Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Плескова, Светлана Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления о системе комплемента.

1.2. Альтернативный путь активации комплемента (АПАК).

1.2.1. Формирование СЗ-конвертазы альтернативного пути активации комплемента.

1.2.2. Регуляция альтернативного каскада.

1.2.2. Формирование С5-конвертазы и сборка мембраноатакующего комплекса (МАК).

1.3. Лектинозависимый путь активации комплемента.

1.4. Реактивность инфекционных агентов в системе АПАК.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Моделирование функциональной блокады АПАК.

3.2. Проявления функциональной блокады АПАК в реакциях с бактериями.

3.2.1. Доказательства избирательной активации АПАК в выбранном режиме исследования.

3.2.2. Характеристика АПАК-реактивности стафилококка (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis).

3.2.3. Характеристика АПАК-реактивности протея

Proteus mirabilis, Proteus vulgaris).

3.2.4. Природа факторов, определяющих штаммовые особенности АПАК-реактивности.

3.3. Реактивность апоптозных клеток в системе АПАК.

3.4. Антиопсонические эффекты на уровне СЗЬ-фактора.

3.4.1. Моделирование анти-СЗЬ эффекта в опытах с трипсином.

3.4.2. Влияние бактерий (S.aureus, S.epidermidis, Pseudomonas aeruginosa) на опсоническую функцию СЗЬ.

3.4.3. Нейтрофилзависимая модуляция функциональной активности СЗЬ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Кондиционирование физиологического статуса альтернативного пути активации комплемента»

Актуальность исследования

Комплемент принадлежит к числу центральных механизмов, поддерживающих физиологическую целостность организма. Это объясняется его активной позицией в общей системе гуморально-клеточной кооперации, обеспечивая подключение к многочисленным нарушениям гомеостатического баланса [48,128]. Неслучайно некоторые из факторов комплемента (СЗ, В и др.) принадлежат к белкам острой фазы, позитивно реагирующим на внезапные нарушения внутренней среды [12, 20, 47]. Все это заставляет внимательно относится к комплементу как к сложно устроенному механизму, расшифровка которого потребовала напряженного творчества нескольких поколений ученых. Но и сегодня, когда большинство факторов, входящих в систему комплемента, клонированы и могут быть получены в виде рекомбинантных молекул, а его активационные каскады конструируются in vitro, изучение комплемента нельзя считать завершенным. Напротив, последние годы ознаменовались всплеском интереса к данной проблеме в ее разнообразных проекциях на гомеостаз и патологию. Свидетельством являются многочисленные оригинальные и обзорные публикации, регулярные международные симпозиумы и, наконец, очередное интернациональное издание «The complement system» [132] обобщающее современное состояние проблемы. В одной из рецензий на этот коллективный труд остроумно замечено, что «иногда недооцениваемая профессионалами и нелюбимая студентами (из-за сложности!) Золушка превратилась в принцессу» [113].

Гомеостатические функции комплемента во многом опосредованы через «альтернативный каскад», или «альтернативный путь активации комплемента» (АПАК). Его универсальность определяется чувствительностью к нарушениям внутренней среды организма, которые возникают при различных воздействиях и не зависят от участия антител, т.е. высокоизбирательных (специфических) эффекторов иммунитета (в этом случае включается классический каскад). В связи с этим представляет интерес поведение АПАК в ситуациях, провоцирующих нарушение гомеостаза и требующих подключения компенсаторных (физиологических) реакций, нацеленных на его восстановление. К такого рода «стандартным» ситуациям принадлежит микробная инвазия, так как многие микроорганизмы (прежде всего бактерии) располагают факторами, дестабилизирующими АПАК. Масштаб подобной активности неизвестен, как и диапазон компенсаторных возможностей комплемента, позволяющий противостоять его функциональному истощению в условиях микробной агрессии.

Одним из традиционных, но до сих пор неисчерпанным сюжетом является физиология взаимоотношений комплемента с клетками иммунной системы, прежде всего с фагоцитами. Связываясь со специфическими рецепторами, производные комплемента оказывают мощное влияние на реализацию функционального потенциала фагоцитарных реакций [32]. Столь же важен, но менее изучен вопрос о влиянии фагоцитов на эффекторные молекулы комплемента, т.е. об условиях, поддерживающих рациональное взаимодействие этих двух базисных механизмов реактивной стабилизации гомеостаза. Это, в частности, относится к судьбе производных СЗ фактора, фиксируемых на объектах, активирующих комплемент. Имеются единичные работы, посвященные деградации свободных молекул СЗ протеазами нейтрофилов, не дающие полноценного представления о функциональных последствиях таких воздействий [152, 158, 161].

К числу новых проблем, связанных с комплементом, относится его возможное участие в элиминации апоптозных клеток, т.е. в реализации одной из ключевых физиологических функций: «бесконфликтном» освобождении внутренней среды от «отработанного» материала. Данные на этот счет достаточно противоречивы - от отрицания реактивности апоптозных клеток в системе комплемента [118] до признания за комплементом (классическим и альтернативным каскадом) участия в макрофагзависимом уничтожении апоптозных клеток [111]. Есть наблюдения и о том, что активация комплемента может содействовать апотозу и связанному с ним повреждению (вторичному некрозу) тканей [86, 160].

Указанные положения явились основанием для планирования наших исследований.

Цель исследования - функциональная характеристика АПАК в системах, моделирующих элементы типовых нарушений физиологии внутренней среды организма.

Задачи исследования

1. Разработать метод стандартизованной оценки функционального состояния АПАК.

2. Изучить масштаб изменений функциональной активности АПАК в реакциях с различными видами и штаммами бактерий и субкомпонентами их клеток.

3. Исследовать феноменологию и механизмы антиопсонических (анти-СЗЬ) эффектов бактериальных метаболитов.

4. Оценить возможность участия АПАК в элиминации апоптозных клеток.

5. Определить влияние продуктов нейтрофилов на эффекторные параметры производных СЗЬ-фактора комплемента.

Научная новизна исследования

На основании критерия, характеризующего функциональный резерв комплемента, изучен масштаб реактивности в системе АПАК различных штаммов стафилококка (S.aureus, S.epidermidis), протея (P.vulgaris, P.mirabilis) и синегнойной палочки (P.aeruginosa). Установлено, что АПАК-реактивность бактерий (в пересчете на сухую массу) значительно превосходит аналогичный показатель таких стандартных АПАК-активаторов, как зимозан и липополисахарид грамотрицательных бактерий. Неодинаковая способность инициировать реакцию АПАК связана с особенностями поверхностных структур бактерий, среди которых определенная (но не единственная), роль принадлежит сиаловым кислотам. Функциональная блокада СЗ-фактора в системе опсонической кооперации может быть связана с экранирующим эффектом бактериальных метаболитов - признак, неодинаково выраженный у разных видов бактерий. Получены данные о протеолитической инактивации СЗ-опсонинов продуктами нейтрофилов. В опытах с нейтрофилами, подвергнутыми индуцированному апоптозу, не удалось обнаружить АПАК-реактивных потенций у апоптозных клеток.

Теоретическая и практическая значимость исследования

Разработаны методы, позволяющие стандартизовать исследования по изучению АПАК-реактивности различных объектов и проводить оценку функционального состояния эффекторов опсонической кооперации. Создана коллекция бактериальных штаммов с известными параметрами АПАК-реактивности, в том числе с разной способностью к антиопсоническим (анти-СЗЬ) эффектам. Это создает возможность целенаправленного изучения микробных факторов, влияющих на взаимоотношения с комплементом и с системой гуморально-клеточной кооперации в целом. Бактериальные штаммы с высоким уровнем АПАК-реактивности могут быть использованы в качестве субстрата для расширения набора стандартных стимуляторов комплемента.

Положения, выносимые на защиту

1. Функциональная активность АПАК в реакциях с разными штаммами бактерий проявляется неодинаково. Одним из факторов, обуславливающих различия в АПАК-реактивности бактериальных клеток, может быть наличие на поверхности бактерий сиаловых кислот.

2. АПАК-реактивность бактериальных клеток практически полностью определяется клеточными стенками бактерий и превосходит стандартные активаторы АПАК - липополисахарид грамотрицательных бактерий и зимозан.

3. Одним из механизмов подавления функциональной (опсонической) активности комплемента является экранирование СЗЬ-фактора метаболитами бактериальных культур.

4. Апоптозные клетки (нейтрофилы) не вызывают функционального истощения АПАК.

5. Нейтрофилы содержат протеазы, вызывающие протеолитическую деградацию СЗЬ-фактора, фиксированного на комплементактивирующих объектах.

10

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 4 сессии молодых ученых (г. Дзержинск, 1999), на 5 сессии молодых ученых (г. Дзержинск, 2000), на 4 международной конференции по фундаментальным наукам «Ломоносов-2000» (г. Москва, 2000), на II Всероссийском симпозиуме «Хроническое воспаление» (г.Новосибирск, 2000).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 работ.

11

Список сокращений

АПАК - альтернативный путь активации комплемента

ЗФР - забуференный физиологический раствор (рН 7,2 - 7,4)

КПАК - классический путь активации комплемента

ЛПС - липополисахарид

МАК - мембраноатакующий комплекс

МВР - маннозо-связывающий протеин

ПМЛ - полиморфно-ядерные лейкоциты

ХЛ - хемилюминесценция

ЭГТА - этиленгликольтетраацетат

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Физиология», Плескова, Светлана Николаевна

выводы

1. На основе активации (истощения) альтернативного пути активации комплемента (АПАК) разработана тест-система, позволяющая проводить сравнительное изучение АПАК-реактивности различных объектов.

2. В опытах с СЗЬ-зависимой адгезией нейтрофилов на полисахаридном носителе исследовано функциональное состояние АПАК в трех инвитровых системах: (1) взаимодействие с бактериями и их продуктами (моделирование одного из механизмов пиогенной инвазии); (2) анти-СЗЬ эффекты производных нейтрофила (один из элементов гуморально-клеточной кооперации в системе воспаления); (3) АПАК-реактивность в системе элиминации апоптозных клеток (физиологический механизм удаления «отработанного» материала).

3. В опытах с различными штаммами Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis и Proteus vulgaris установлен масштаб внутривидовой и межвидовой вариабельности АПАК-реактивности бактерий. Установлено, что низкий уровень АПАК-реактивности определяется комплексом поверхностных факторов, среди которых определенную роль играют сиаловые кислоты.

4. По реактивности в системе АПАК бактериальные клетки значительно превосходят такие классические активаторы как зимозан и липополисахарид

110 грамотрицательных бактерий. Активность бактерий связана с клеточными стенками; цитоплазматическая фракция практически инертна.

5. В опытах с синегнойной палочкой (Pseudomonas aeruginosa) и стафилококками показано, что основным механизмом подавления функциональной кооперации в системе «комплемент—фагоциты» является нековалентное экранирование СЗЬ-фактора продуктами бактерий. Этот признак наиболее ярко выражен у P.aeruginosa и в значительно меньшей степени проявлялся у некоторых штаммов S.aureus; протеолитическое разрушение фиксированного СЗЬ фактора, которое проявлялось в опытах с P.aeruginosa, имело меньшее значение.

6. Обнаружена способность продуктов нейтрофила вызывать протеолитическую деградацию СЗЬ-фактора, фиксированного на АПАК-активирующих объектах.

7. Апоптозные клетки (нейтрофилы, полученные методом индуцированного апоптоза) не активировали АПАК.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Комплемент принадлежит к числу центральных механизмов, поддерживающих физиологическую целостность организма [20, 128]. Гомеостатические функции во многом опосредованы через альтернативный путь активации комплемента (АПАК). Его универсальность определяется чувствительностью к нарушениям внутренней среды организма, которые возникают при различных воздействиях, и независимостью от антител, т.е. высокоизбирательных эффекторов иммунитета [116]. В связи с этим в нашей работе исследовалось функциональное состояние АПАК в ряде ситуаций, имитирующих элементы типовых нарушений физиологии внутренней среды организма. Во-первых, оценивалось поведение АПАК при микробной инвазии, так как многие микроорганизмы (прежде всего бактерии) располагают факторами, дестабилизирующими систему комплемента. Во-вторых, определялась возможность подключения АПАК к элиминации апоптозных клеток, т.е. участие комплемента в реализации одной из ключевых физиологических функций - «бесконфликтном» освобождении внутренней среды от «отработанного» материала. В-третьих, изучался вопрос о влиянии фагоцитов на эффекторные молекулы комплемента, т.е. моделировалась ситуация, возникающая в очаге воспаления, и оценивались условия взаимодействия между двумя базисными механизмами реактивной защиты: фагоцитами и комплементом.

Реализация эффекторного потенциала АПАК требуется, прежде всего, при воздействии «экстремальных» факторов, способных вывести организм из состояния устойчивого равновесия. Примером является взаимодействие с инфекционными агентами, которое нередко выходит за пределы компенсаторных возможностей, что сопровождается нарастанием иммунологического конфликта [17, 39, 88]. Несмотря на интенсивное изучение активации альтернативного каскада бактериями и их продуктами, многие вопросы взаимодействия в системе «АПАК - бактерии» остаются не исследованными. В нашей работе затрагиваются три основных аспекта поведения АПАК в условиях имитирующих микробную инвазию: (1) функциональные нарушения в системе АПАК на этапе инициации каскада разными видами и штаммами бактерий; (2) масштаб данных изменений; (3) влияние бактерий на центральное эффекторное звено комплемента - СЗЬ фактор, фиксированный на АПАК-активирующих объектах.

О функциональном состоянии АПАК судили по снижению опсонической активности сыворотки, которое определяли в реакции СЗЬ-зависимой адгезии нейтрофилов на гранулах сефадекса. Метод основан на способности АПАК вступать во взаимодействие с полисахаридным носителем (сефадексом) и опсонизировать его к СЗЬ-опосредованной адгезии нейтрофилов [35]. Снижение количества позитивных гранул сефадекса (связавших 3 и более нейтрофилов) коррелировало со снижением опсонического потенциала АПАК после инкубации сыворотки с изучаемым объектом. Вероятность участия классического каскада исключали путем избирательного связывания Са2+ (хелатирование сыворотки ЭГТА), нековалентно связанные компоненты удаляли обработкой опсонизированного сефадекса раствором 2М NaCl при 100°С в течение 15 мин [146]. Систему контролировали по эффективности истощения опсонической активности сыворотки классическим активатором АПАК -зимозаном. Для оценки функционального истощения АПАК предложена формула, отражающая зависимость опсонической активности альтернативного каскада от концентрации зимозана.

Исследовано 15 штаммов бактерий, принадлежавших к видам Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis. Для доказательства избирательной активации АПАК определялся гемолитический индекс Cl - С5 компонентов комплемента в сыворотке, хелатированнои по Са2+, до и после инкубации с бактериями (один из штаммов S.epidermidis). Установлено значительное снижение содержания СЗ и С5 компонентов, задействованных в альтернативном каскаде, тогда как факторы классического (Cl, С2, С4) и лектинозависимого пути (С2, С4) не расходовались при инкубации хелатированной сыворотки с бактериальными клетками, что свидетельствовало об избирательной активации альтернативного каскада. Для исключения влияния агрегированных иммуноглобулинов на способность бактерий запускать альтернативный каскад (поскольку использовался пул сывороток, содержащий антитела), нами исследовалась опсоническая функция АПАК до и после обработки сыворотки бактериями в режиме, обеспечивающем полное удаление антибактериальных антител при сохранении активности комплемента [3]. Результаты контроля и опыта были практически одинаковы, что исключало влияние иммуноглобулинов на взаимоотношения бактерий с альтернативным каскадом. Прямым доказательством опсонизации бактериальных клеток в АПАК явились опыты с люминолзависимой хемилюминесценцией нейтрофилов. Все штаммы стафилококка после опсонизации вызывали увеличение пика хемилюминесценции и его сдвиг на более ранние сроки по сравнению с контролем (бактерии, необработанные сывороткой).

Доказав избирательную активацию АПАК, мы исследовали влияние бактерий на инициацию альтернативного каскада, ориентируясь на модельную систему с зимозаном. Опыты показали значительный разброс показателя АПАК-реактивности для S.aureus, S.epidermidis, P.vulgaris; все три штамма P.mirabilis отличались одинаково высокой активностью в системе АПАК. Штаммы способные «ускользать» от контроля системы комплемента обозначают как «сывороточно резистентные» (от англ. - serum resistance) [134, 141]. Природа резистентности может быть разной [150]. Нами исследованы некоторые из ее возможных механизмов. Прогревание, не вызывавшее изменения АПАК-реактивности штаммов с низкой активаторной способностью, говорило против белковой природы факторов, определявших штаммовую вариабельность в системе АПАК. Этот результат подтверждался исследованием реактивности белка А золотистого стафилококка в системе АПАК. Выбор его в качестве тест-объекта был обусловлен своеобразными иммунологическими свойствами (неспецифическим связыванием с Fc-фрагментом иммуноглобулинов - IgG). По способности снижать опсонический потенциал АПАК бактериальные клетки во много раз превосходили белок А, то есть он не мог существенно влиять на АПАК-реактивность штаммов. Обработка нейраминидазой (вызывающей расщепление сиаловых кислот) трех низкоактивных штаммов усиливала АПАК-реактивности двух из них (S.epidermidis 178М и P.vulgaris 1418-1). Тем самым было подтверждено, что определенную роль в «стратегии ухода от контроля» АПАК играют сиаловые кислоты, экранирующие структуры, способные запускать альтернативный каскад. Однако один из низкоактивных штаммов (S.aureus 1971ССМ) не изменял АПАК-реактивности после обработки нейраминидазой, а у чувствительных к ней S.epidermidis 178М и P.vulgaris 1418-1 не происходило увеличения способности активировать АПАК до уровня высокоактивных штаммов. Это свидетельствовало о том, что резистентность к АПАК не исчерпывается экранирующим влиянием сиаловых кислот, а может быть обусловлена различной степенью экспрессии на поверхности бактериальных клеток АПАК-активирующих структур, либо экранированием этих структур другими компонентами. В серии опытов изучена связь компонентов, вызывающих инициацию альтернативного каскада с различными структурами бактериальных клеток: АПАКреактивность была практически полностью сконцентрирована в клеточных стенках; цитозольная фракция лишена подобной активности. Сравнение со стандартными активаторами АПАК (зимозаном, липополисахаридом грамотрицательных бактерий) показало значительное превосходство АПАК-реактивности бактериальных клеток. Это может иметь определенный эволюционный смысл: АПАК легче активируется цельными структурами и использует большую часть своего эффекторного потенциала на поддержание гомеостаза при встрече с бактериальными клетками, которые в свою очередь, эволюционируя, выработали ряд приспособлений, позволяющих избегать активации АПАК, уходя от контроля со стороны одной из ведущих гомеостатических систем.

Ряд экспериментов был нацелен на изучение способности бактерий оказывать влияние на взаимодействие СЗЬ-опсонизированных объектов с фагоцитами (нейтрофилами), поскольку СЗЬ компонент является центральным звеном опсонической кооперациии и его инактивация может приводить к выключению (или ограничению) опсонофагоцитарного контроля за ходом развития бактериальной инвазии. С этой целью гранулы СЗЬ-сефадекса инкубировали в бактериальных культурах, после чего определяли изменения их способности адгезировать нейтрофилы. Исследовали различные штаммы S.aureus, S.epidermidis и Pseudomonas aeruginosa. Такой выбор был сделан на основании того, что в условиях наших опытов стафилококки не секретировали в среду протеолитических (желатиназных) ферментов, тогда как культуры синегнойной палочки были протеолитически активны. Это позволяло думать о возможности их разного поведения по отношению к опсонически активным СЗ-производным комплемента. Действительно, штаммы P.aeruginosa вызывали значительное снижение СЗЬ-опосредованной адгезии нейтрофилов, тогда как для S.aureus и S.epidermidis отмечена лишь тенденция к снижению опсонической активности СЗЬ-фактора. Исследование феномена показало, что анти-СЗЬ активность бактерий обусловлена главным образом нековалентным экранированием СЗЬ-фактора продуктами культур. У P.aeruginosa дополнительно к этому фактору определенный вклад вносило прямое протеолитическое расщепление СЗЬ. Используя экранирующие эффекты и протеолиз СЗЬ компонента, бактерии нарушают функциональную кооперацию в системе «комплемент—фагоциты».

Таким образом, можно говорить о двух механизмах, препятствующих реализации гомеостатической функции АПАК. Во-первых, бактерии могут пассивно ускользать от контроля альтернативного каскада, экранируя (например, сиаловыми кислотами) собственные структуры, инициирующие активацию альтернативного каскада. Во-вторых, они могут использовать «наступательную» стратегию, закрывая продуктами метаболизма и/или протеолитически инактивируя опсонины (в частности производные СЗ), что способствует разобщению опсонофагоцитарных контактов.

Следующим этапом работы было изучение поведения апоптозных клеток в системе АПАК. Данная задача была поставлена в связи с тем, что апоптоз принадлежит к числу универсальных механизмов гомеостаза, обеспечивающих «бесконфликтную» (физиологическую) элиминацию «отработанных» клеток [41, 50, 104]. Подключение сывороточных факторов, в том числе АПАК, к поглощению апоптозных клеток макрофагами остается дискуссионным вопросом [111, 118]. В качестве апоптозных клеток нами использовались нейтрофилы (полученные методом индуцированного (Н202-зависимого) апоптоза). Проведенные опыты показали, что в используемой нами системе не происходит активации (функционального истощения) АПАК апоптозными клетками: различия между контролем (сыворотка, не подвергшаяся действию апоптозных клеток) и опытом оказались недостоверными. Эти результаты не согласуются с данными Mevorach et al. (1998), согласно которым апоптозные клетки (нейтрофилы и Т-лимфоциты человека, тимоциты мыши, линии лимфоидных трансформированных клеток) активируют комплемент по классическому и альтернативному пути. Может быть несколько объяснений данного противоречия. В отличие от Mevorach et al. (1998) мы использовали принцип индуцированного апоптоза при продолжительном инкубировании клеток. Не исключено, что глубокие изменения нейтрофилов в результате длительной инкубации могли нивелировать АПАК-реактивность, проявляющуюся на ранних этапах апоптоза. Еще одним отличием было то, что культуры нейтрофилов, использованные нами, содержали сыворотку (5 % эмбриональная сыворотка телят), которая могла экранировать компоненты клеток, обладавшие АПАК-реактивностью. Наконец, возможно, что наш метод функциональной оценки АПАК менее чувствителен, чем техника, использованная D. Mevorach et al. (1998) (присутствие на клетках iC3b определялось в реакции с мечеными моноклональными античСЗЬ антителами). Если это так, можно допустить, что апоптозные клетки обладают низким уровнем АПАК-реактивности. Инертность апоптозных клеток в системе комплемента может иметь и гомеостатический смысл, содействуя бесконфликтной элиминации «отработанного материала». Именно в этом видится физиологическая сущность апоптозного процесса, который в норме (при сбалансированности апоптоза и механизмов ликвидации апоптозных клеток) протекает без патологически значимых последствий, так как в отличие от цитолиза (первичного некроза) не «успевает» возбудить воспалительной реакции [67, 106, 135]. Активация комплемента сопровождается образованием мощных флогогенных начал (анафилатоксинов, хематтрактантов), которые содействуют развитию воспаления. С этой точки зрения, ареактивность (или низкая реактивность) апоптозных клеток в системе АПАК логично вписывается в физиологию апоптозного процесса. Вопрос в том, компенсирует ли АПАК-ареактивность отсутствие опсонического эффекта со стороны комплемента? Рассуждая по этому поводу, следует учитывать, что для распознавания (и последующего уничтожения) апоптозных клеток макрофаги располагают специальными рецепторами и подключение СЗ-опсонинов вряд ли принципиально влияет на исход процесса [84]. В любом случае исследования в этом направлении требуют продолжения в условиях, максимально приближенных к естественным ситуациям.

Взаимодействие нейтрофилов с пиогенными бактериями во многом опосредовано одним из главных эффекторов опсонической кооперации -СЗЬ-фактором комплемента и его производными. После фиксации на бактериях они реагируют с рецепторами клеток (CRI, CR3, CR4), усиливая фагоцитоз [49]. Влияние продуктов нейтрофила на опсоническую активность фиксированного СЗЬ практически не исследовано. Нам известны лишь данные о способности эластазы нейтрофилов больных муковисцидозом расщеплять iC3b, связанный с P.aeruginosa; тот же фермент инактивировал CR1 (но не CR3) нейтрофилов [158]. По мнению авторов, такого рода "двухсторонний удар", нацеленный против лиганда и рецептора, снижает вероятность рекогносцировочных реакций в системе опсонической кооперации, провоцируя ослабление комплемент-опосредованного фагоцитоза - решающего механизма защиты против пиогенной инфекции. В связи с этим нами исследовалась активность продуктов нейтрофилов в отношении фиксированных (опсонически активных) производных СЗЬ фактора. Располагая мощным арсеналом протеолитических ферментов (эластаза, коллагеназа и т.д.), нейтрофилы способны экскретировать их и расщеплять различные биологические субстраты [32]. В сферу действия нейтрофильных протеаз входит и система комплемента. Нейтрофилы способны разрушать СЗ и С5 компоненты с образованием биологически активных фрагментов, соответствующих классическим СЗа- и С5а-пептидам [152, 161]. Это может быть одним из механизмов, поддерживающих воспалительный процесс, привнося в него элементы порочного круга.

Проведенные нами опыты показали, что экстракт нейтрофилов (полученный при инкубации с тритоном и стандартизованный по миелопероксидазной активности) снижает СЗЬ-опосредованные опсонические контакты в системе фагоцитоза. Обработка в режиме избирательного удаления нековалентно связанных компонентов не приводила к восстановлению активности СЗЬ-сефадекса, доказывая протеолитическую природу феномена. Таким образом, нейтрофилы способны ослаблять эффекторные свойства фиксированного СЗЬ, хотя даже увеличение времени инкубации с экстрактами нейтрофилов до 180 мин не вело к полному подавлению опсонической активности. По-видимому, такого рода «остаточная активность» обусловлена продуктами глубокого протеолиза СЗ-фактора (C3dg или C3d), которые сохраняют ковалентную связь с объектом и могут связываться с нейтрофилом за счет рецепторов СЫ4-типа [49]. Наши данные отражают вклад нейтрофилов в диалектику воспалительного процесса. Накопление в среде продуктов секреции и разрушения нейтрофилов вызывает расщепление фиксированного СЗЬ, прерывая активацию АПАК по типу обратной связи. Это может играть роль в

108 негативной регуляции АПАК, нацеленной на «физиологизацию» воспалительного процесса. Остаточная опсоническая активность у СЗЬ фактора после контакта с продуктами нейтрофилов выполняет иную функцию, способствуя поддержанию фонового уровня опсонической активности вплоть до полной элиминации агента, спровоцировавшего активацию АПАК.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Плескова, Светлана Николаевна, 2001 год

1. Акатов А.К., Зуева B.C. Стафилококки. М.: Медицина, 1983. - 256 с.

2. Альберте Б, Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки: В 3-х томах. Т.З. Пер. с англ. М.: Мир, 1994. - 504 с.

3. Астафьев Д.Г., Маянский А.Н. Количественная характеристика антител человека к пептидогликанам различных видов стафилококков //ЖМЭИ. -1987. №3. - С.55 - 57.

4. Багдасаров A.A., Чертков И.Л., Раушенбах М.О. Пропердиновая система организма. -М.: Медгиз, 1961.-216 с.

5. Барановский П.В., Рудык Б.И., Смищук Ю.М. Методика определения активности комплемента по альтернативному пути //Иммунология. -1987. -№6. С.75.

6. Бойд У. Основы иммунологии. Пер. с англ. М.: Мир, 1969. - 647 с.

7. Брудастов Ю.А., Дерябин Д.Г. Биологическое значение антикомплементарной активности бактерий //ЖМЭИ. 1994. -Приложение. - С.28 - 32.

8. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина, 1999. - 368 с.

9. Вавилова Л.М., Голосова Т.В. Система комплемента. Механизмы активации и регуляции, значение в биологии и медицине //Итоги науки и техники ВИНИТИ. Сер. Иммунология. 1990. - т.24. - С. 1 - 164.

10. Вавилова Л.М., Кузнецова Н.И., Голосова Т.В. Методы тестирования комплемента //Лаб. дело. -1991. №4. - С.6 -11.

11. П.Волянский Ю.Л., Телепнева Л.Г., Васильев Н.В. и др. О возможном влиянии компонентов альтернативного пути активации системы комплемента на исход ВИЧ инфицирования //ЖМЭИ. 1999. - №5. -С.117- 120.

12. Воспаление. Руководство для врачей /Под ред. В.В.Серова и B.C.л

13. Паукова. M.: Медицина, 1995. - 640 с.

14. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. Пер. с англ. М.: Мир, 1997. - 624 с.

15. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. М.: Высшая школа, 2000. - 479 с.

16. Дерябин Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность. Екатеринбург: УрО РАН, 2000.-240 с.

17. Дерябин Д.Г., Брудастов Ю.А., Ахунова Н.Р. и др. Различия в антиопсоническом действии внеклеточных продуктов S.aureus и N.gonorrhoeae //Бюл. эксперимент, биологии и медицины. 1998. -№12.-С.669 - 672.

18. Евсюкова И.И., Королева Л.И., Андреев C.B., Ищенко A.M. Активация СЗ компонента комплемента в сыворотке крови новорожденных детей и их матерей, перенесших во время беременности генитальный хламидиоз

19. Иммунология. 1997. - №4. - С.42 - 45.

20. Зимин Ю.Н., Редькин А.Л. Значение антител, комплемента и белка А для опсонизации фагоцитоза золотистого стафилококка //Иммунология. -1987. №3. - С.62 - 66.

21. Иммунология. В 3-х томах. Т.З.: Пер. с англ./Под ред. У. Пола. М.: Мир, 1989.-360 с.

22. Кашкин К.П., Дмитриева JI.H. Белки системы комплемента: свойства и биологическая активность //Клин. лаб. диагностика. 2000. - №7. - С.25 -32.

23. Клиническая иммунология и аллергология. В 3-х томах. Т.1.: Пер. с нем./Под ред. JI. Йегера. М.: Медицина, 1990. - 587 с.

24. Козлов JI.B. Белки системы комплемента: активация и регуляция //Иммунология. 1997. - №2. - С.8 - 13.

25. Конышкина Т.М. Влияние стафилококков на проявления опсонической кооперации в системе комплемента //ЖМЭИ. 1989. - № 1 1. - С.67 - 71.

26. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цибиков H.H. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. М.: Медицина, 1989. -319 с.

27. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия. Пер. с англ. -М.: Медицина, 1968. 683 с.

28. Марри Р., Гренер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: В 2-х томах. Т.1.: Пер. с англ. -М.: Мир, 1993. 384 с.

29. Мартынова В.А., Голосова Т.В., Абакумов E.H. Система комплемента при острых лейкозах //Иммунология. 1989. - №2. - С.57 - 59.

30. Мартынова В.А., Голосова Т.В. Состояние системы комплемента при инфекционных и неопластических процессах //Лаб. дело. 1989. - №2. -С.4-9.

31. Маянский А.Н. Микробиология для врачей. Нижний Новгород: Изд-во НГМА. - 1999. - 400 с.

32. Маянский А.Н., Галиуллин А.Н. Реактивность нейтрофила. Казань: Изд-во Казанского университета. - 1984. - 160 с.

33. Маянский А.Н., Коликова Т.В., Маянский H.A. и др. Феномен высокоизбирательного взаимодействия между нейтрофила ми человека и стафилококком //Иммунология. -1997. №3 - С.27 - 28.

34. Маянский А.Н. Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука, 1989. 256 с.

35. Маянский А.Н., Маянский H.A., Заславская М.И. и др. Апоптоз нейтрофилов //Иммунология. 1999. - №6. — С. 11 -20.

36. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. -Казань: Магариф, 1993.- 192 с.

37. Маянский А.Н., Чеботарь И.В., Конышкина Т.М. и др. Оценка альтернативного пути активации комплемента через СЗЬ- зависимую адгезию //Лаб. дело. 1991. - № 11. - С.41 - 43.

38. Маянский А.Н., Чеботарь И.В., Конышкина Т.М. Неоднородность нейтрофилов человека в реакциях специфической адгезии //Иммунология.- 1989. -№3. С.55 - 57.

39. Невмятуллин А.Л., Маянский А.Н., Чеботарь И.В. Реактивная хемилюминесценция в системе фагоцитоза //ЖМЭИ. 1987. - №7. - С. 109

40. Пахомова E.H., Быков B.J1. Взаимодействие макрофагов с Candida albicans при иммунодепрессии //ЖМЭИ. 1994. - №1. - С. 14 - 16.

41. Подосинников И.С., Березина Л.А., Турина О.П., Ищенко A.M. Содержание СЗ компонента комплемента в сыворотке крови больных детей //Лаб. дело. 1989. - №7. - С.57 - 58.

42. Подосинников И.В., Нилова Л.Г., Бабиченко И.В. и др. Метод определения хемотаксической активности лейкоцитов //Лаб. дело. -1981.- №8. С.68 - 70.

43. Программированная клеточная гибель. /Под ред. проф. В.С.Новикова. -СПб.: Наука, 1996.-276 с.

44. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова A.B. Аллергические заболевания. М.: Триада-Х, 1999. 470 с.

45. Редчиц Е.Г., Гузева В.О. Адгезия нейтрофилов: патог енетические и методологические аспекты //Лаб. дело. 1991. - №5. - С.4 8.

46. Резникова Л.С. Определение активности системы комплемента по 50% гемолизу. //Медицинские лабораторные технологии: Справочник /Под ред. проф. А.И. Карпищенко. СПб.: Интермедика, 1999. - С.290 - 293.

47. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир. 2000. - 582 с.

48. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е. Иммунология и иммунопатология детского возраста. М.: Медицина, 1996. - 384 с.

49. Теплова С.И., Звеняцковская Е.Р., Никушкина К.В. и др. Система комплемента и циркулирующие иммунные комплексы у больных с ожогами //ЖМЭИ. 1999. - №3. - С.61 - 65.

50. Физиология человека. В 3-х томах. Т.2.: Пер. с англ./Под ред. Р. Шмидта и Г. Тевса. М.: Мир, 1996. - 198 с.

51. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 607 с.

52. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и роль в целое i ном организме //Патолог, физиология и эксперим. терапия. 1998. - №2. С.38 - 48.,

53. Alaei S., Larcher С., Ebenbichler С. et al. Isolation and biochemical characterization of the iC3b receptor of Candida albicans //Infect. Immunol. -1993.-V.61.-P.1395- 1399.

54. Angel C.R., Ruzec M., Hostetter M.K. Degradation of C3 by Streptococcus pneumoniae //J. Infect. Dis. 1994. - V.l70. - P.600 - 608.

55. Betz S.J., Isliker H. Antibody independent interections between Escherichia coli J5 and human complement components //J. Immunol. - 1981. - V.l27. -P. 1748 - 1754.

56. Brooks G.F., Butel J.S., Morse S.A. Medical microbiology. 21 edition, Appleton & Lange: Stanford, 1998. 740 p.

57. Campbell J.R., Baker C.J., Edwards M.S. Deposition and degradation of C3 on type III group В streptococci //Infect. Immunol. 1991. - V.59. - P. 1978 -1983.

58. Cannon R.D., Chaffin W.L. Oral colonization by Candida albicans //Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1999. - V.10. - P.359 - 383.

59. Chitnis D., Dickerson C., Munster A.M., Winchurch R.A. Inhibition of apoptosis in polymorphonuclear neutrophils from burn patients //J. Leukoc. Biol. 1996.-V.59.-P.835-839.

60. Cotter P.A., DiRita V.J. Bacterial virulence gene regulation: an evolutionary perspective //Annu. Rev. Microbiol. 2000. - V.54. - P.519 - 565.

61. Davies S.F., Clifford D.P., Hoidal J.R., Repine J.E. Opsonic requirement forthe uptake of Cryptococcus neoformans by human polymorphonuclearleukocytes and monocytes //J. Infect. Dis. 1982. - V.145. - P.870 - 874.

62. De Graaf- Miltenburg L.A., Van Vliet K.E., Ten Hagen T.L. et al. The role of HSV-induced Fc and C3b(i) - receptors in bacterial adherence //J. Med. Microbiol. - 1994. - V.40. - P.48 - 54.

63. Di Ninno V.L., Chenier V.K. Activation of complement by Neisseria meningitidis //FEMS Microbiol. Lett. 1981. - V.12. - P.55 - 60.

64. Drapeau G.R., Boily J., Houmard J. Purification and properties of an extracellular protease of S.aureus //J. Biol. Chem. 1972. - V.247. - P.6720 -6726.

65. Edwards M.S., Kasper D.L., Jennings H.J. et al. Capsular sialic acid prevents activation of the alternative complement pathway by type III, group B streptocci //J. Immunol. 1982. - V.128. - P. 1278 - 1283.

66. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A. et al. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages //J. Immunol. 1992. - V.148. -P.2207 - 2216.

67. Fearon D.T. Regulation by membrane sialic acid of (31H dependent decay-association of amplification C3 convertase of the alternative complement pathway //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1978. - V.75. - P. 1971 - 1975.

68. Fijen C.A., Bredius R.G., Kuijper E.J. et al. The role of Fey receptor polymorphisms and C3 in the immune defence against Neisseria meningitidis in complement - deficient individuals //Clin. Exp. Immunol. - 2000. - V.120. -P.338 - 345.

69. Fishelson Z., Panburn M.K., Miiller-Eberhard H.J. Characterization of the initial C3 convertase of the alternative pathway of human complement //J. Immunol.- 1984.-V. 132- P.1430- 1434.

70. Frank M.M., Fries L.F. The role of complement in inflammation and phagocytosis //Imm. Today. 1991. - V.12. - P.322 - 326.

71. Gardner S.E., Anderson D.C., Webb B.J. et al. Evaluation of Streptococcus pneumoniae type XIV opsonins by phagocytosis asociated chemiluminescence and a bactericidal assay //Infect. Immunol. 1982. - V.35. - P.800 - 808.

72. Gotze O., Miiller-Eberhard HJ. The alternative pathway of complement activation //Adv.Immunol. 1976. - V.24. - P.l - 35.

73. Grossman N., Joiner K.A., Frank M.M., Leive L. C3b binding but not its breakdown is affected by the structure of the O-antigen polysaccharide in lipopolysaccharide from salmonellae //J. Immunol. 1986. - V.136. - P.2208 -2215.

74. Hart S.P., Ross J.A., Ross K. et al. Molecular characterization of the surface of apoptotic neutrophils-: implications for functional down regulation and recognition by phagocytes //Cell. Death. Differ. 2000. - V.7. - P.493 - 503.

75. Haslett Ch. Granulocyte apoptosis and its role in the resolution and control of lung inflammation //Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1999. - V.160. - P.53 -60.

76. Haunstetter A., Izumo S. Apoptosis. Basic mechanisms and implications for cardiovascular disease //Circ. Res. 1998. - V.82. - P.l 111 - 1129.

77. Heffernan E.J., Reed S., Hackett J. et al. Mechanism of resistance to complement-mediated killing of bacteria encoded by the Salmonella typhimurium virulence plasmid gene rck //J. Clin. Invest. 1992. - V.90. -P.953 - 964.

78. Hiemstra P.S., Gorter A., Stuurman M.E. et al. Activation of the alternative pathway of complement by human serum IgA //Eur. J. Immunol. 1987. -V.17 - P.321 - 326. '

79. Horstmann R.D., Pangburn M.K., Miiller Eberhard H.J. Species specificity of recognition by the alternative pathway of complement /J. Immunol. -1985.-V.134.- P.350-355.

80. Hostetter M.K. Adhesins and ligands involved in the interaction of Candida spp. with epithelial and endothelial surfaces //Clin. Microbiol. Rev. 1994. -V.7. - P.29 - 42.

81. Hou S.C., Ho S.T., Shaio M.F. Opsonizing effect of normal cerebrospinal fluid on Staphylococcus aureus //J. Formos. Med. Assoc. 1990. - V.89. -P.977 - 981.

82. Hughes J., Nagaku M., Alpers C.E. et al. C5b-9 membrane attack complex mediates endothelial cell apoptosis in experimental glomerulonephritis IIkm. J. Physiol. 2000. - V.278. - P.747 - 757.

83. Ielezarova E., Lutz H.U. Assembly and regulation of the complement amplification loop in blood: the role of C3b-C3b-IgG complexes //Mol. Immunol.- 1999. V.36. - P.837-842.

84. Inoue S. Therapeutic inplication of plasma C3 rich fraction against bacterial infection in surgical patients //Nippon Geka Gakkai Zasshi. 1989. - V.90. -P.988 - 998.

85. Jenkins J.A., Ourth D.D. Opsonic effect of alternative complement pathway on channel catfish peripheral blood phagocytes //Vet. Immunol. Immunopathol. 1993.-V.39.- P.447 - 459.

86. Johnsson E., Berggard K., Kotarsky H. et al. Role of the hypervariable region in streptococcal M proteins: binding of a human complement inhibitor //J. Immunol. 1998.-V. 161.- P.4894-4901.

87. Joiner K.A., Grossman N., Schmetz M., Leive L. C3 binds preferentially to long-chain lipopolysaccharide during alternative pathway activation by Salmonella montevideo//J. Immunol. 1986. - V.136. - P.710 - 715.

88. Kagaya K., Fucazawa Y. Murine defense mechanism against Candida albicans infection//Microbiol. Immunol. 1981.-V.25.- P.807-818.

89. Kania S.A., Reed S.L., Thomford J.W. et al. Degradation of bovine complement C3 by trichomonad extracellular proteinase //Vet. Immunol. Immunopathol. 2001. - V.78. - P.83 - 96.

90. Kazatchkine M.D., Fearon D.T., Austen K.F. Human alternative complement pathway: membrane-associated sialic acid regulates the competition between В and P1H for cell-bound C3b //J. Immunol. 1979. - V. 122. - P.75 - 81.

91. Kozel T.R., Brown R.R., Pfrommer G.S. Activation and binding of C3 by Candida albicans //Ingest, and Immun. 1987. - V.55. - P. 1890 - 1894.

92. Kusaba N., Kumashiro R., Ogata H. et al. In vitro study of neutrophil apoptosis in liver cirrhosis //Intern. Med. 1998. - V.37. - P. 11 - 17.

93. Lambre C., Thibon M. Ability to activate the alternative complement pathway acquired by human and guinea-pig erytrocytes after contact with influenza virus//Ann. Immunol. 1980.-V. 131. - P.213-221.

94. Law S.K., Lichtenberg N.A., Levine R.P. Evidence for an ester linkage between the labile binding site of C3b and receptive surfaces //J. Immunol. -1979. V.123. - P.1388 - 1394.

95. Law S.K., Minich T.M., Levine R.P. Binding reaction between the third human complement protein and small molecules //Biochem. 1981. - V.22. -P.7457 - 7463.

96. Leist-Welsh Ph., Bjonson B. Requirements for immunoglobulin and the classical and alternative complement pathway for phagocytosis and intracellular killing of multiple strains of gram-negative aerobic bacilli //Infect. Immunol. -1979.-V.26.-P.99.

97. Lesavre P.H., Müller Eberhard H.J. Mechanism of action of factor D of the alternative complement pathway //J. Exp. Med. - 1978. - V. 148. - P. 1498 -1509.

98. Loos M. Antibody independent activation of CI, the first component of complement //Ann. Immunol. - 1982. - V. 133. - P. 165 - 179.

99. Lutz H.U., Stammler P., Fasler S. How naturally occurring antiband 3 antibodies stimulate C3b deposition to senescent and oxidati\ ely stressed red blood cells //Biomed: Biochim. Acta. 1990. - V.49, - P.224 - 229.

100. Martin S.J., Green D.R., Cotter T.G. Dicing with death: dissecting the complements of the apoptosis machinery //Trend Biochem. Sei. 1994. -V.19. -P.26-30.

101. Matsushita M., Thiel S., Jensenius J.C. et al. Proteolytic activities of two types of mannose-binding lectin-associated serine protease /J. Immunol. -2000. V.165. - P.2637 - 2642.

102. Mecklenburgh K., Murray J., Brazil T. et al. Role of neutrophil apoptosis in the resolution of pulmonary inflammation //Monaldi. Arch. Chest. Dis. 1999. - V.54. - P.345-349.

103. Medzhitov R., Janeway C. Innate immuniti //The New England J. of Med. -2000.-V.343.- P.338 344.

104. Meri S., Jarva H. Complement regulation //Vox. Sang. 1998. - V.74. -P.291 -302.

105. Merino S., Camprubi S., Alberti S. et al. Mechanisms of Klebsiella pneumoniae resistance to complement-mediated killing //Infect. Immunol. -1992.-V.60.- P.2529 2535.

106. Mevorach D. Opsonization of apoptotic cells. Implications for uptake and autoimmunity //Ann. N.Y. Acad. Sci. 2000. - V.926. - P.226 - 235.

107. Mevorach D., Mascarenhas J.O., Gershov D., Elkon K.B. Complement-dependent clearence of apoptotic cells by human macrophages //J. Exp. Med. -1998.-V.188.— P.2313 -2320.

108. Moore F.D., Austen K.F., Fearon D.T. Antibody restores human alternative complement pathway activation by mouse erythrocytes rendered functionnaly deficient by pretreatment with pronase //J. Immunol. 1982. - V.128. -P.1302 - 1306.

109. Morgan B.P. Complement biology group //Imm. Today. 1999. - V.20. -P.55.

110. Mufti GJ. Ineffective haemopoiesis and apoptosis in myelodysplastic syndromes //British. J. Haemat. 1998. - V. 101. - P.220 - 230.

111. Miiller Eberhard H.J., Scheiber R.D. Molecular biology and chemistry of the alternative pathway of complement //Adv. Immunol. - 1980. - V.29. - P.2 -53.

112. Miiller Eberhard H.J. Complement: chemistry and pathways. In: Inflammation. Basic Principles and Clinical Corellates. (Eds. J.I.Gallin, I.M.Goldstein, R.Snyderman) Raven Press, N.Y. - 1988. - P.21 - 53.

113. Neth O., Jack D.L., Dodds A.W. et al. Mannose-binding lectin binds to a range of clinically relevant microorganisms and promotes complement deposition//Infect. Immun. 2000. - V.68. - P.688-693.

114. Newman S.L., Henson J.E., Henson P.M. Phagocytosis of senescent neutrophils by human monocyte derived macrophages and rabbit inflammatory macrophages //J. Exp. Med. - 1982. - V.156. - P.430 - 442.

115. Nicoletti I., Migliorati G., Pagliacci M.C. et al. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry //J. Immunol. Methods. 1991. - V. 139. - P.271 - 279.

116. Nishikava F., Yoshikava S., Harada H. et al. The full expression of the Ity phenotype in Ityr mice requires C3 activation by Salmonella lipopolysaccharide //Immunology. 1998. - V.95. - P.640 - 647.

117. Okada N., Shibuta H., Okada H. Activation of the alternative pathway of gvinea pig complement by Sendai virus treated cells //Microbiol. Immunol. -1979.-V.23.- P.689 - 692.

118. Onishi Y., Tanimoto Y., Kizaki H. Inflammation and apoptosis //Bull. Tokyo dent. Coll. 1997. - V.38. - P.65 - 76.

119. Ono Y., Kunii O., Ikeda H. et al. Opsonic activity of sera and blister fluid from severely burned patients evaluated by a chemiluminescence method //Microbiol. Immunol. 1994. - V.38. - P.373 - 377.

120. Paccaud J.P., Carpentier J.L., Schifferli J.A. Difference in the clustering of complement receptor type 1 (CR1) on polymorphonuclear leukocytes anderythrocytes: effect on immune adherence //Eur. J. Immunol. 1990. - V.20. -P.283 - 289.

121. Pangburn M.K., Müller Eberhard H.J. The C3 convertase of the alternative pathway of human complement. Enzymic properties of the bimolecular proteinase //Biochem. J. - 1986. - V.235. - P.723 - 730.

122. Pangburn M.K., Schreiber R.D., Müller Eberhard H.J. Deficiency of an erythrocyte membrane protein with complement regulatory activity in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria //Proc. Natl. Acad. Sei USA. - 1983. -V.80. - P.5430 - 5434.

123. Pangburn M.K., Schreiber R.D., Müller Eberhard H.J. СЗЬ deposition during activation of the alternative complement pathway and the effect of deposition on the activating surface //J. Immunol. - 1983. - V. 131. - P. 1930 -1935.

124. Pascual M., French L.E. Complement in human diseases: looking towards the 21 st century //Immunol. Today. 1995. - V.16. - P.58 - 61.

125. Peterson Ph.K., Wilkinson B.J., Kim J. et al. Influence of encapsulation on staphylococcal opsonization and phagocytosis by human polymorphonuclear leukocytes //Infect, and Immun. 1978. - V.19. - P.943 - 949.

126. Peterson Ph.K., Wilkinson B.J., Kim J. The key role of peptidoglycan in the opsonization of Staphylococcus aureus //J. Clin. Invest. 1978. - V.61. -P.597 - 609.

127. Rakitaa R.M., Quan V.C., Jacques-Palaz K. et al. Specific antibody promotes opsonization and PMN-mediated killing of phagocytosis-resistant

128. Enterococcus faecium //FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2000. - V.28. -P.291 -299.

129. Rother K., Till G.O., Hansch G.M. The complement system: Springer, 1998. 594 p.

130. Rudin C.M., Thompson C.B. Apoptosis and disease: regulation and clinical relevance of programmed cell death //Annu. Rev. Med. 1997. - V.48. -P.267 - 281.

131. Salyers A.A., Whitt D.D. Bacterial pathogenesis a molecular approach. -Washington: ASM Press, 1994. 418 p.

132. Savill J. Apoptosis in resolution of inflammation //J. Leuk. Biol. 1997. -V.61.- P.375 -380.

133. Savill J., Fadok V., Henson P., Haslett C. Phagocyte recognition of cells undergoing apoptosis//Immunol. Today. 1993.-V.14.- P.131 - 136.

134. Savill J., Hogg N., Ren Y., Haslett C. Thrombospondin cooperates with CD36 and the vitronectin receptor in macrophage recognition of neutrophils undergoing apoptosis //J. Clin. Invest. 1992. - V.90. - P. 1513 - 1522.

135. Schneider P.M., Wurzner R. Complement genetics: biological implications of polymorphisms and deficiencies //Immunol. Today. 1999. - V.20. - P.2 -5.

136. Schultz D.R., Arnold P.I. The first component of human complement: on the mechanism of activation by some carbohydrates //J. Immunol. 1981. -V.126. - P. 1994 - 1998.

137. Shaio M.F., Yang K.D., Bohnsack I.F., Hill H.R. Effect of immune globulin intravenous on opsonization of bacteria by classic and alternative complement pathway in premature serum //Pediatr. Res. 1989. - V.25. - P.634 - 640.

138. Sim R.B., Laich A. Serine proteases of the complement system //Biochem. Soc. Trans. 2000. - V.28. - P.545 - 550.

139. Simberkoff M.S., Moldover N.H., Rahal J.J. Absence of detectable bactericidal and opsonic activities in normal and infected human cerebrospinal fluids //J. Lab. Clin. Med. 1980. - V.95. - P.362 - 372.

140. Smith C.A., Pangburn M.K., Vogel C.W., Müller Eberhard H.J. Molecular architecture of human properdin, a positive regulator of the alternative pathway of complement //J. Biol. Chem. - 1984. - V.259. - P.4582 - 4588.

141. Snyderman R., Gewürz H., Merdenhagen S.E. Interection of the complement system with endotoxic lipopolysaccharide //J. Exp. Med. 1968. -V.128.-P. 259-275.

142. Soane L., Rus H., Niculescu F., Shin M.L. Inhibition of oligodendrocyte apoptosis by sublytic C5b 9 is associated with enhanced synthesis of Bel - 2 and mediated by inhibition of caspase - 3 activation //J. Immunol. - 1999. -V.163. -P.6132-6138.

143. Stossel T.R., Fieid R.I., Gitlin N.D. et al. The opsonic fragment of the third component of human complement (C3) //J. Exp. Med. 1975. - V.141. -P.1329- 1347.

144. Suzuki K. Ota H., Sasagawa S., Sakatani T., Fujikura T. Assay method for myeloperoxidase in human polymorphonuclear leucocytes //Anal. Biochem. -1983,- V.132. P.345 - 352.

145. Takizawa F., Tsuji S., Nagasawa S. Enhancement of macrophage phagocytosis upon iC3b deposition on apoptotic cells //FEBS Lett. 1996.1. V.18. P.269 - 272.

146. Taylor P.W. Non-immunoglobulin activators of the complement system. In: Activators and inhibitors of complement. (Eds. R.B.Sim). Kluwer Academic Publishing, Dordrecht. - 1993. - P.37 - 68.

147. Taylor P.W. Resistance of bacteria to complement. In: Virulence mechanisms of bacterial pathogens. (Eds. C.A.Bolin). American Society for Microbiology, N.W. Washington. - 1995. - P.49 - 64.

148. Taylor P.R., Carugati A., Fador V.A. et al. A hierarchical role for classical pathway complement proteins in clearance of apoptotic cells in vivo //J. Exp. Med. 2000.-V. 192. - P.359-366.

149. Taylor J.C., Crawford I.P., Hugli T.E. Limited degradation of the third component (C3) of human leukocite elastase (HLE): partial characterization of C3 fragments //Biochemistry. 1977. - V.16. - P.3390 - 3396.

150. Thakker M., Park J.S., Carey V., Lee J.C. Staphylococcus aureus serotype 5 capsular polysaccharide is antiphagocytic and enhances bacterial virulence in a murine bacteremia model //Infect. Immun. 1998. - V.66. - P.5183 - 5189.

151. Thomas M.L., Janatova J., Gray W.R., Tack B.F. Third component of human complement: localization of the internal thiolester bond //Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1982. - V.79. - P.1054 - 1058.

152. Thompson R.A., Winterborn M.H. Hypocomplementaemia due to a genetic deficiency of beta 1H globulin //Clin. Exp. Immunol. 1981. - V.46. - P. 110 — 119.

153. Tofte R.W., Peterson Ph.K., Kim Y., Quie P.G. Influence of serum concentration on opsonization by the classical and alternative complement pathway//Infect, and Immun. 1980.-V.27.- P.693-696.

154. Tofte R.W., Peterson Ph.K., Schmeling D. et al. Opsonization of four bacteroides species: role of the classical complement pathway and immunoglobulin//Infect, and Immun. 1980.-V.27. - P.784 - 792.

155. Tosi M.F., Zakem H., Berger M. Neutrophil elastase cleaves iC3b on opsonized pseudomonas as well as CR1 on neutrophils to create a functionally important opsonin receptor mismatch //J. Clin. Invest. 1990. - V.86. - P.300 -308.

156. Uwai M., Terui Y., Mishima Y. et al. A new apoptotic pathway for the complement factor B-derived fragment Bb //J. Cell. Physiol. 2000. - V. 185. - P.280-292.

157. Vakeva A.P., Agah A., Rollins S.A. et al. Myocardial infarction and apoptosis after myocardial ischemia and reperfusion: role of the terminal complement components and inhibition by anti-C5 therapy //Circulation. -1998.- V.97. P.2259 - 2267.131

158. Venge P., Olsson J. Cationic proteins of human granulocytes //J. Immunol. -1975. V.115- P.1505- 1508.

159. Weir D.M., Stewart J. Immunology.: Churchill Livingstone, 1997. 362 p.

160. Winkelstein J.A., Moxon E.R. The role of complement in the host's defense against Haemophilus influenzae //J. Infect. Dis. 1992. - V. 165. - P.62 - 65.

161. Xu S., Arbeit R.D., Lee J.C. Phagocytic killing of encapsulated and microencapsulated Staphylococcus aureus by human polymorphonuclear leukocytes //Infect. Immunol. 1992. - V.60. - P. 1358 - 1362.

162. Zhang M.X., Klein B. Activation, binding, and processing of complement component 3 (C3) by Blastomyces dermatitidis //Infect. Immun. 1997. -V.65. - P.1849 - 1855.