Комплексное решение проблем пробоподготовки при разработке методик ВЭЖХ анализа объектов со сложной матрицей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат наук Захарова, Анна Михайловна

• Захарова, Анна Михайловна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Захарова, Анна Михайловна

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

Физико-химические методы определения важнейших аналитов

1.1. Определение углеводов различными физико-химическими методами

1.2. Хроматографическое определение органических

кислот

1.3. Методы ВЭЖХ определения неорганических анионов

1.3.1. Количественный анализ неорганических анионов в

питьевой, природной и сточной водах

1.3.2 Количественный анализ анионов в нефти

1.4. Определение полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) в воздухе

1.5. Способы определения этилендиаминтетрауксусной кислоты

1.6. Способы определения аминокислот в сложных матрицах

1.6.1. Предколоночная дериватизация в ВЭЖХ

1.6.2. Постколоночная дериватизация в ВЭЖХ

Глава II. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ

ИССЛЕДОВАНИЯ

П.1. Аппаратура

П.2. Вспомогательные устройства

11.3. Реагенты

Ш.3.1. Подготовка посуды при определении анионов

П.4. Приготовление градуировочных растворов определяемых

веществ, отбор и подготовка проб

П.4.1. Градуировочные растворы углеводов

П.4.2. Стандартные растворы, кислотный гидролиз проб и дериватизация апиозы антраниловой кислотой

45

11.4.3. Приготовление градуировочных растворов органических

кислот

И.4.4. Градуировочные растворы анионов для определения их в

сточной воде

П.4.5. Градуировочные растворы анионов для определения их в

нефти

И.4.6. Приготовление градуировочных растворов

полициклических ароматических углеводородов

И.4.7. Подготовка трубок для отбора проб ПАУ

П.4.8. Отбор проб промышленных выбросов для определения

ПАУ

П.4.9. Экстракция ПАУ с фильтра и сорбционной трубки без

очистки экстракта

П.4.10. Экстракция ПАУ и очистка экстракта на сорбенте

8ире1рак 20

11.4.11. Экстракция ПАУ и очистка экстракта на сверхсшитом

полистироле РигоБер 200

Н.4.12. Определение коэффициентов извлечения ПАУ

П.4.13. Экстракция ПАУ и очистка экстракта на сверхсшитом

полистироле РигоБер 200

П.4.14. Подготовка пробы и экстракция при определении

полиароматических углеводородов в почве

Н.4.15. Градуировочные растворы для определения аминокислот

П.4.16. Гидролиз проб

И.4.16. Модификация аминокислот фенилизотиоцианатом

11.4.17. Подготовка образца для определения триптофана

И.4.17. Определение степени извлечения свободных

аминокислот из мяса

П.4.20. Приготовление градуировочных растворов

ТрилонаБ

П.4.21. Экстракция из майонеза буфером (20 мМ раствор КН2РО4 (рН=7,5) с одновременным комплексообразованием

П.5. Метрологическая обработка полученных результатов

Ш.5.1. Построение градуировочной характеристики

11.6. Приготовление подвижной фазы, условия анализа

П.6.1. Приготовление подвижной фазы, условия анализа при

определении анионов в нефти

П.6.2. Определение анионов в сточной воде

И.6.3. Условия ВЭЖХ определения углеводов и органических

кислот

И.6.4. Хроматографические условия при ВЭЖХ-определении

ПАУ

П.6.5.0бработка результатов определения ПАУ в атмосферном

воздухе и промышленных выбросах

II.7 Контроль правильности измерений

11.7.1. Контроль правильности измерений анионов в сточной воде

11.7.2. Проверка правильности при определении неорганических анионов в нефти, углеводов, органических кислот, аминокислот ЭДТА и апиозы

ГЛАВА III. СОЧЕТАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТОВ ИЗВЛЕЧЕНИЯ АНАЛИТОВ ИЗ СЛОЖНЫХ МАТРИЦ С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ОЧИСТКОЙ ЭКСТРАКТОВ

III.1. Определение анионов в водных вытяжках из нефти и сточных водах нефтеперерабатывающего предприятия

111.2. Определение углеводов и карбоновых кислот в пищевых продуктах, напитках, биологически активных добавках

111.2.1. Выбор процедуры пробоподготовки

111.2.2. Подготовка твердых проб к хроматографическому

анализу

111.2.3. Подготовка жидких проб к анализу

111.3. Определение углевода апиозы в биологически активной добавке «Зостерин-ультра» после кислотного гидролиза и дериватизации антраниловой кислотой

ГЛАВА IV. РАЗРАБОТКА ПРОЦЕДУРЫ ПРОБООТБОРА И ОЧИСТКИ ОБРАЗЦОВ АТМОСФЕРНОГО ВОЗДУХА, ПРОМЫШЛЕННЫХ ВЫБРОСОВ И ПОЧВЫ ПРИ ВЭЖХ ОПРЕДЕЛЕНИИ ПАУ

IV. 1. Характеристика аналитов

IV.2. Подготовка проб воздуха к анализу

IV.3. Отбор проб атмосферного воздуха

IV.4. Отбор проб для анализа газовых выбросов промышленных

предприятий

IV.5. Экстракция целевых компонентов

IV.6. Хроматографический анализ экстрактов

IV.7. Определение полиароматических углеводородов в почве «Красны Бор» (Ленинградская обл.)

IV.8. Использование сверхсшитого полистирола Purosep 200 для

очистки экстрактов при определении ПАУ

ГЛАВА V. ГИДРОЛИТИЧЕСКОЕ РАСЩЕПЛЕНИЕ КОМПОНЕНТОВ СЛОЖНЫХ МАТРИЦ (БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ, МАЙОНЕЗА) С ПРОВЕДЕНИЕМ ДЕРИВАТИЗАЦИИ

V.l. Групповое и покомпонентное определение аминокислот

экстрактах растительного и животного происхождения

У.1.2.0пределение общего содержания аминокислот в объектах

животного происхождения

V.I.2. Определение свободных аминокислот в пробах мяса, сухих растительных экстрактов, спортивного питания

V.I.3. Результаты определения аминокислотного состава объектов животного происхождения (пробы мяса и сухого

экстракта мозга коров)

V.l.4. Определение содержания аминокислот в витаминном

комплексе для спортсменов

V.l. 5. Определение свободных аминокислот в экстрактах

герани

V.2. Пробоподготовка с использованием процессов комплексообразования при определении

этилендиаминтетрауксусной кислоты в майонезе

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. СОПОСТАВЛЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ РАЗРАБОТАННЫХ МЕТОДИК С БЛИЖАЙШИМИ АНАЛОГАМИ

Приложение 2. Определение анионов в нефти, определение анионов в

сточной воде

Приложение 3. Определение органических кислот и углеводов

Приложение 4. Определение ЭДТА

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ОФ ВЭЖХ - обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная

хроматография

Б АД - биологически активные добавки

ISO - International Organization for Standardization (Интернациональный стандарт)

EC - European Commission (Европейская комиссия)

УФ -ультрафиолетовое детектирование

ГХ - газовая хроматография

КЭ - капиллярный электрофорез

ГОСТ - государственный стандарт

САНПиН - санитарные правила и нормы

ASTM - American Society for Testing and Materials - стандарт от

американской международной добровольной организации, разрабатывающей

и издающей стандарты материалов, продуктов, систем и услуг

ПАУ - полициклические ароматические углеводороды

MC - масс-спектрометрия

ПДК - предельно-допустимая концентрация

ОБУВ - ориентировочно-безопасный уровень воздействия

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

СО - стандартный образец

ГСО - государственный стандартный образец

ФЛ детектор — флуориметрический детектор

ДДМ - детектор на диодной матрице

ФИТЦ - фенилизотиоцианат

ДАБС - дабсилхлорид

НБД - нитробензоксадиазол

FMOC-C1 - 9-флуоренилметилхлорформиат

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Комплексное решение проблем пробоподготовки при разработке методик ВЭЖХ анализа объектов со сложной матрицей»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность Пробоподготовка является важнейшей стадией химического анализа, лимитирующей реализацию возможностей современных приборов, а, следовательно, и качество результатов анализа. Надежность способа пробоподготовки может оказать решающее влияние на выбор аналитического метода. Это особенно принципиально при анализе сложных матриц, таких как пищевые продукты, биологические объекты, сточные воды, промышленные выбросы, нефть и т.д. Основные проблемы анализа таких объектов заключаются в их непредсказуемом составе, низком содержании определяемых аналитов и значительном количестве сопутствующих. Решение достигается грамотной стратегией при подготовке проб сложного состав, обеспечивающей селективное выделение целевых компонентов с требуемыми пределами обнаружения.

Работа посвящена поиску максимально простых, надежных и дешевых подходов к пробоподготовке при ВЭЖХ анализе пищевых продуктов, биологически активных добавок, фармацевтических препаратов, нефти, сточных вод нефтяных перерабатывающих предприятий, промышленных выбросов, биологических матриц.

Изучению способов определения важнейших компонентов в перечисленных образцах посвящено немало работ. Однако в рекомендуемых методиках имеется и ряд ограничений: содержание солей в нефти определяют по хлоридам или рассчитывают по суммарной электропроводности; при анализе сточной воды методом ионной хроматографии фосфат и нитрит-ионы не определяются на уровне ПДК вод рыбохозяйственного назначения. Методики анализа углеводов и органических кислот в пищевых продуктах регламентируют определение конкретных компонентов в узком круге продуктов. Определение апиозы в

биологически активных добавках и этилендиаминтетрауксусной кислоты в майонезе методом ВЭЖХ не описано вообще.

Сочетание оптимизированной пробоподготовки, включающей гидролиз, экстракцию (жидкостную и твердофазную), дериватизацию с очисткой экстрактов и последующим разделением компонентов методом ВЭЖХ с использованием селективных, высокочувствительных детекторов обеспечивает надежность и высокую воспроизводимость получаемых результатов.

В работе выявлены особенности процедуры пробоподготовки при ВЭЖХ определении:

- углеводов и карбоновых кислот - в напитках алкогольных и безалкогольных, соках, мёде, молочных продуктах, продуктах переработки плодов (варенье, джем), печенье, кондитерских изделиях (конфеты, мармелад, пастила); апиозы в биологически активной добавке «Зостерин-Ультра».

? "У

- неорганических анионов (Т7", СГ, N02, N03', Вг~, РО4 ', 304 ') в сточной воде и нефти;

- полицикличеких органических углеводородов (ПАУ) в атмосферном воздухе, промышленных выбросах и почвах;

- свободных и общих аминокислот в биологических матрицах, спортивном питании и сухих растительных экстрактах;

- этилендиаминтетрауксусной кислоты в майонезе/

Цель работы: Разработка методик анализа сложных матриц {пищевых продуктов, биологически активных добавок, фармацевтических препаратов, сточной воды, нефти, промышленных выбросов, почвы, биологических объектов и растительных экстрактов) с применением простой и надежной процедуры пробоподготовки для каждого типа аналитов при ВЭЖХ определении углеводов, карбоновых и аминокислот, полиароматических

углеводородов, неорганических анионов, этилендиаминтетрауксусной кислоты.

В связи с поставленной целью решались задачи:

1. Оптимизация условий пробоподготовки при анализе нефти и пищевых продуктов, основанной на методах сорбционного выделения сопутствующих примесей.

2. Разработка общей схемы пробоподготовки жидкофазных и твердофазных объектов при ВЭЖХ-определении углеводов и карбоновых кислот в продуктах питания.

3. Определение углевода апиоза в БАД «Зостерин-ультра» с использованием гидролитического расщепления пектина и получением флуоресцирующего производного.

4. Выявление возможностей сочетания мембранной фильтрации и сорбции в процессе пробоподготовки при определении ПАУ в промышленных выбросах, атмосферном воздухе и почве методом ОФ ВЭЖХ и получение оценочных характеристик эффективности использования различных собционных материалов: сверхсшитого полистирола и сополимера стирол-дивенилбензол 8ире1рак 20.

5. Выбор условий гидролитического расщепления компонентов матрицы в сочетании с получением производных при определении свободных и связанных аминокислот в различных объектах.

Поиск условий пробоподготовки селективного ВЭЖХ определения ЭДТА в майонезе.

7. Разработки ВЭЖХ методик анализа объектов со сложной матрицей (пищевые продукты, растительные экстракты, атмосферный воздух, промышленные выбросы, нефть) на основе предлагаемых способов пробоподготовки.

Научная новизна

Предложены общие подходы к подготовке проб при ВЭЖХ определении с УФ-детектированием свободных и связанных аминокислот в пищевых продуктах, биологических матрицах и растительных экстрактах, включающие гидролитическое расщепление (6М HCl) компонентов матрицы в сочетании с получением фенилизотиоцианатных производных аналитов. Для определения серосодержащих аминокислот адаптирован вариант кислотного гидролиза с предварительным окислением этих аналитов надмуравьиной кислотой с последующей дериватизацией, а для определения триптофана, неустойчивого в кислой среде, - щелочной гидролиз насыщенным раствором гидроксида бария.

Предложена схема пробоподготовки при ВЭЖХ определении анионов (F", СГ, Br, N03", NO2', РО43", SO42") в водных вытяжках из нефти (3 последовательные экстракции горячей водой при температуре 80-90 °С с последующим добавлением бензола) в сочетании с очисткой на сорбенте С18 от сопутствующих органических примесей методом ионной хроматографии с косвенным спектрофотометрическим детектированием.

Предложена единая схема пробоподготовки для ВЭЖХ определения углеводов (глюкозы, лактозы, мальтозы, маннозы, сахарозы, фруктозы, ксилита и сорбита) и карбоновых кислот {щавелевой, винной, муравьиной, яблочной, молочной, уксусной, лимонной, янтарной, фумаровой, пропионовой) в жидкофазных и твердофазных пищевых продуктах, включающая гомогенизацию, водную вытяжку при 40-50 °С с её очисткой от неполярных примесей на обращенно-фазовом сорбенте и концентрирование в случае карбоновых кислот на анионите.

Предложен способ определения этилендиаминтетрауксусной кислоты в майонезе методом ион-парной ВЭЖХ в форме комплексов с ионами Fe3+ или Си2+, извлекаемых из матрицы фосфатным буферным раствором.

Предложен способ определения углевода апиоза в БАД «Зостерин-Ультра», включающий гидролитическое расщепление компонентов матрицы с использованием 2М раствора трифторуксусной кислоты в сочетании с получением флуоресцирующего производного (Кюгп =360 нм, Хизл =435 нм) с антраниловой кислотой.

Предложена комбинированная схема выделения и концентрирования всех 16 приоритетных загрязнителей группы ПАУ, включающая фильтрацию воздушной пробы через пористый тетрафторэтилен и концентрирование на обращенно-фазовом сорбенте с их последующей десорбцией органическими растворителями (гексан и диэтиловый эфир) и очисткой экстрактов на сверхсшитом полистироле РигоБер или сополимере стирол-дивенилбензол 8ире1рак.

Практическая значимость работы

По результатам исследований разработано и аттестовано во ВНИИМ им. Менделеева, Санкт-Петербург пять методик: определения углеводов в напитках, пищевых продуктах, биологически активных добавках; неорганических анионов (Р', СГ, Вг', N03", N02*, Р043", 8042") в питьевой, природной, сточной водах, и в нефти; полициклических ароматических углеводородов в атмосферном воздухе и промышленных выбросах, бенз(а)пирена в воздухе рабочей зоны.

Две методики определения органических кислот:

- в напитках, винах, соках и жидких биологически добавках и

- пищевых продуктах и твердых биологически активных добавках находятся в настоящий момент на аттестации во ВНИИМ им. Менделеева.

Положения, выносимые на защиту: 1. Обоснования общих схем пробоподготовки для ВЭЖХ определения:

- углеводов и органических кислот в жидкофазных и твердофазных пищевых продуктах с сорбционной очисткой экстрактов;

ПАУ в атмосферном воздухе и промышленных выбросах с использованием мембранной фильтрации и сорбции на сверхсшитом полистироле РигоБер 200 или сополимере стирол-дивинилбензол 8ире1рак 20;

- свободных аминокислот (АК) и их суммарного содержания в объектах растительного и животного происхождения с гидролитическим расщеплением компонентов матрицы, предварительным окислением надмуравьиной кислотой в случае серосодержащих АК и получением фенилизотиоцианатных производных;

- неорганических анионов (нитрит, нитрат, хлорид, фторид, бромид, сульфат и фосфат) в природных сточных водах и горячих водных вытяжках из нефти в сочетании с сорбционной очисткой;

3+ 2+

- ЭДТА в майонезе в форме комплексов с ионами Ре или Си 5

- апиозы в БАД с использованием гидролитического расщепления компонентов матрицы и получением флуоресцирующего производного с антраниловой кислотой.

2. Методики анализа различных объектов со сложной матрицей, основанные на разработанных способах пробоподготовки.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

Физико-химические методы определения важнейших аналитов

1.1. Определение углеводов различными физико-химическими

методами

Углеводы - важные компоненты пищевых продуктов, влияющие на сладость, внешний вид и текстурные характеристики.

Существуют различные способы определения содержания углеводов: весовые [1], спектрофотометрические [2] титриметрические (метод Бертрана) [3]. Результат зависит от времени реакции, температуры и концентрации реагентов, которые должны тщательно контролироваться; при этом компонентный состав Сахаров в анализируемом объекте не должен заметно различаться; возможно мешающее влияние других присутствующих восстановителей.

В условиях газовой хроматографии определение углеводов проводили после силилирования #,<9-бис(триметил)трифторацетамидом (BSTFA) [4].

сн,

I

СНз—Si—СНз

I

О СНз CF3C=N $¡{C H3)3OS¡(CH3 )3

cf3 c-n si ch3 Д 0-бис(триметил)трифторацетамид

СНз

Схема реакции силилирования представлена на рис. 1.

О

о—TMS ||

| + н—Y—R -»► TMS—Y—R + F3c—с—ы—TMS

F3C—C=N—TMS I

н

Рис. 1. Схема реакции силилирования моно- и дисахаридов Лг,0-бис(триметил)трифторацетамидом. TMS = Si(CH3)3, Y = О, R = Alk

Наиболее распространенным вариантом определения моно- и дисахаридов является высокоэффективная жидкостная хроматография

(ВЭЖХ). При определении низких концентраций углеводов (10-100 пмоль) методом ВЭЖХ используют высокочувствительные детекторы, такие как электрохимический, и масс-спектрометрический [5-7].

Увеличения чувствительности при определении Сахаров можно достичь проведением анализа в нормально-фазовом режиме разделения с использованием детектора светорассеяния [8-11] или реализацией анионообменной ВЭЖХ с амперометрическим детектором [12]. Включение в анализ стадии получения производных, молекулы которых содержат хромофорные или флуорофорные группы, с последующим ОФ ВЭЖХ анализом с УФ- или флуориметрическим детектированием [13-15] также позволяет обеспечить высокую чувствительность при определении Сахаров.

В [16] предложен способ электрофоретического определения Сахаров в форме их комплексов с катионами меди (И) с использованием принципа лигандного обмена.

Немаловажной является проблема очистки образцов от мешающих компонентов. Так, в [17] предложен способ очистки сока на карбоксилированных однослойных углеродных нанотрубках с последующим электрофоретическим разделением мальтозы, фруктозы, глюкозы со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 195 нм.

Информация о покомпонентном углеводном составе и соотношении их концентраций может быть использована для выявления нарушения технологии при изготовлении продуктов. Например, наличие в пчелином меде повышенного содержания сахарозы свидетельствует о том, что пчел подкармливали сахаром, а превышение относительно нормы этого же дисахарида в соках и виноградных винах - о нарушении технологии при их изготовлении [18,19].

Состав и концентрация углеводов в винах, соках, молочных продуктах для детского питания являясь важным показателем качества, нормируется в документах ГОСТ и САНПиН [20, 21]. Имеющиеся методики весьма

трудоемки и длительны и не дают информации о полном покомпонентном углеводном составе пробы, которая особенно важна при контроле диабетических продуктов.

В диетических и диабетических продуктах сахарозу и глюкозу заменяют различными сахароспиртами - ксилитом и сорбитом (Рис. 2).

он он

он он

Ш

он он

ксилит сорбит

Рис. 2. Структурные формулы ксилита и сорбита

В Российской базе нормативных документов для контроля содержания общего сахара и сахарозаменителей в продуктах используются ГОСТ 5903-89 «Изделия кондитерские. Методы определения сахара», описывающий йодометрический, перманганатный, ферроцианидный,

фотоколориметрический и поляриметрический методы определения общего сахара, и ГОСТ 25268-82 «Изделия кондитерские. Методы определения ксилита и сорбита», основанный на колориметрическом определении суммы сорбита, ксилита и общего сахара. Сорбит определяют по разнице между оптической активностью исследуемого раствора с добавлением молибденовокислого аммония в кислой среде и без добавления. Ксилит определяют по разности между суммой сорбита, ксилита и общего сахара и суммой сорбита и общего сахара [22, 23].

В [24] обсуждается определение сорбита в диетическом шоколаде ионообменной хроматографией с рефрактометрическим детектированием. Подобно моносахаридам, ксилит и сорбит определяют методом газовой хроматографии (ГХ) с предварительной дериватизацией. ВЭЖХ анализ этих аналитов выполняют на аминопропильных колонках. Для регистрации

используют рефрактометрический, электрохимический детекторы или детектор по светорассеянию [25].

Высокочувствительное определение состава моносахаридов в пищевом солоде после гидролиза полисахаридов 4 М раствором трифторуксусной кислоты и дериватизации 1-фенил-3-метил-5-пиразолоном описано в [26]. Разделение проводили в ОФ ВЭЖХ режиме с флуориметрическим детектированием. Достигнутые пределы обнаружения 0,001-0,002 мМ. Аналогичным способом изучен моносахаридный состав гликопротеинов. Производные получали и с антраниловой кислотой [27].

Имеющиеся методики позволяют проводить определение конкретных углеводов в определенных объектах. При этом создание единой методики определения широкого перечня углеводов в разнообразных пищевых продуктах весьма перспективно.

Остается актуальным поиск вариантов селективного и высокочувствительного определения в сложных матрицах минорных концентраций Сахаров, в молекулах которых нет хромофорных групп.

1.2. Хроматографическое определение органических кислот

Важные вкусовые компоненты пищевых продуктов - органические кислоты - могут выступать в качестве индикаторов их качества. Данные о составе органических кислот являются важнейшим показателем подлинности винодельческой продукции. Они определяют бактерицидные, вкусовые и ароматические свойства различных сортов вин. В виноделии информация о качественном и количественном составе органических кислот, а также их соотношении свидетельствует и об особенностях технологических процессов {использование невызревшего винограда, применение яблочно—молочнокислого брожения, искусственное изменение кислотности).

В виноградных винах преобладает винная кислота. Высокие концентрации лимонной кислоты, низкие концентрации винной, яблочной и молочной свидетельствуют о фальсификации вина и виноматериалов [28, 29]. Содержание органических кислот также нормируется ГОСТами.

Стандартным методом определения летучих кислот в алкогольной продукции является их отгонка из пробы с водяным паром с последующим кислотно-щелочным титрованием дистиллята [30, 31]. Это требует больших затрат времени в расчете на один анализ и определяется лишь суммарное содержание кислот.

Определение органических кислот методом ВЭЖХ на уровне низких концентраций (ррЬ) обычно проводят с использованием анионообменных колонок с системой подавления фоновой электропроводности и кондуктометрического детектирования [32]. Высокая чувствительность обеспечивается дериватизацией фенацилбромидом [33] (Рис. 3) или 9-(2-гидроксиэтил)-карбазолом [34] (Рис. 4) с ОФ ВЭЖХ разделением и спектрофотометрическим или флуориметрическим детектированием продуктов реакции.

о

и

// У-С- СН2Вг о --V

\=/ II //

р-соон -р-соо-сн2с-<' 7

Е^Х \=/

Рис. 3. Схема дериватизации карбоновых кислот фенацилбромидом в присутствии триэтиламина (Е1зЫ)

СН2СН2ОН СН2СН2ООСЯ

о

N

Рис. 4. Схема дериватизации карбоновых кислот 9-(2-гидроксиэтил)-карбазолом

Одновременное определение ряда карбоновых кислот и углеводов проводят с разделением и по ион-эксклюзионному механизму [35-41].

ОФ ВЭЖХ обеспечивает лучшую эффективность по сравнению с ионообменной хроматографией и дает возможность разделения большего количества компонентов, поэтому создание методики, предлагающей единую пробоподготовку для Сахаров и органических кислот весьма перспективно.

1.3. Методы ВЭЖХ определения неорганических анионов

1.3.1. Количественный анализ неорганических анионов в питьевой, природной и сточной водах

Многие неорганические анионы (нитриты, нитраты, хлориды, фториды, бромиды, сульфаты и фосфаты) являются экотоксикантами, загрязняющими окружающую среду, поэтому их содержание нормируется и контролируется в водах различного типа: питьевой, природной, сточной.

В соответствии с ГОСТ Р 52964-2008 [42], определение содержания сульфат-ионов основано на их количественном выделении в форме малорастворимого сульфата бария с последующим растворением осадка в растворе трилона Б в аммиачной среде и титровании избытка трилона Б раствором, содержащим ионы магния .

Определение хлоридов в питьевой воде проводят при содержании их от 10 мг/дм и выше титрованием нитратом серебра в присутствии хромата калия в качестве индикатора; при концентрации хлорид-ионов менее

'У

10 мг/дм - титрованием нитратом ртути (индикатор - дифенилкарбазон) [43].

Измерение массовой концентрации бромид-ионов в воде основано на их концентрировании с использованием ионообменников с последующей десорбцией и окислением до брома хлорамином-Т (рН 4,6; ацетатный буфер) в присутствии красителя фенолового красного. Элементный бром взаимодействует с образованием тетрабромпроизводного красителя [44]. Определение нитрит-ионов в сточной и природной воде проводят фотометрически с реактивом Грисса [45] (Рис. 5), а нитрат-ионов —

взаимодействием с дифениламином (Рис. 6), либо — потенциометрическим тритрованием [46].

HZN <Р

сг^

•fj,

H2N 'Р H2N -Р

N

nh2 ^ vN2+ H

Рис. 5. Схема реакции нитрит-иона с реактивом Грисса в присутствии а-нафтиламина

2 т, 1 3

ди|енипактн дифекипбензвдик

no;,H+ N=

хинэидюе сое дине нзе

Рис. 6. Схема реакции нитрат-иона с дифениламином

Определение ортофосфатов основано на их взаимодействии с молибдатом аммония в кислой среде с образованием молибдофосфорной кислоты, её последующим восстановлением аскорбиновой кислотой в присутствии хлорида сурьмы и фотометрическим измерением окрашенной в синий цвет восстановленной формы молибдофосфорной кислоты (молибденовой сини) при длине волны 880 - 890 нм (рис. 7) [47].

Комплексообраэование: РО+ 12МоО| -+- 27111 — 1ЬРО4{МоОз)12+ \т2о

Восстановление: Н3 РС>4(МоО?), 2

Аскорбхмовая кислота Из1>о4(Мо03)„ " Катализатор

Рис. 7. Схема образования молебденовой сини

Определение сульфат-иона традиционно проводят

турбодиметрическим методом. Регистрируют оптическую плотность раствора и определяют концентрацию сульфат-иона по калибровочной

зависимости [48]. Сульфат-ионы можно определять также весовым методом [49].

Для анализа неорганических анионов используется ионная

хроматография с кондуктометрическим детектированием. В зависимости от их концентрации и условий анализа применяют безсуппрессорный или суппрессионный вариант ионной хроматографии. Первый - позволяет определять анионы на уровне десятых долей ррш [50]. Предел обнаружения однозарядных анионов (0,1 мг/л) ниже, чем двух- и трехзарядных (0,5 мг/л). В качестве подвижных фаз при безсуппрессионном разделении используют растворы, содержащие соли фталевой, салициловой, бензойной кислот. Лабораторный хроматограф с суппрессором позволяет обеспечить максимальную чувствительность, на уровне ррЬ [51, 52].

В суппрессионном варианте в качестве элюентов используют растворы гидроксида, карбоната, гидрокарбоната натрия или их смесей.

В настоящее время большое распространение получили мембранные суппресоры [53], состоящие из внутреннего контура, ограниченного проницаемой для катионов мембраной, и внешнего контура, по которому подается с помощью специального насоса сульфокислота, связывающая катионы подвижной фазы. В систему включается накопительный картридж, заполненный ионообменной смолой, на котором катионы обмениваются на ионы водорода, и происходит регенерация сульфокислоты (Рис. 8).

Линия регенерации

Линия регенерации

Рис. 8. Мембранный суппрессор и регенерирующий картридж

Разработаны методики определения фосфатов методом ГХ с масс-спектрометрическим детектированием [54].

Описано разделение неорганических анионов безсуппрессионным методом со спектрофотометрическим детектированием [55]. Нитриты, бромиды, нитраты обнаруживаются при длине волны ~ 210 нм; хлориды и некоторые другие ионы - при 190 нм.

Нормы содержания ряда экотоксикантов в воде рыбохозяйственного назначения ниже, чем в питьевой воде (табл. 1) [56, 57]. Очищенные сточные воды предприятий поступают в водоемы, и поэтому на них распространяются нормы для вод рыбохозяйственного назначения.

Таблица 1. ПДК анионов в воде рыбохозяйственного назначения

№ п/п Анион ПДК вода рыбохозяйственного назначения, мг/л ПДК вода питьевая в соответствии с СанПин 2.1.4.1074-01, мг/л

1 Бромид-анион (Вг) 1,35 0,2

2 Нитрат-анион (N03*) 40,0 45

3 Нитрит-анион (N02*) 0,08 3,0

4 Сульфат-анион (по Б04 ") 100 500

5 Хлорид-анион (по СГ) 300 350

6 Фосфат-анионы (НгРО", НРОЧ Р043') 0,2 3,5

7 Фторид-анион Р* 0,05 (в дополнение к фоновому содержанию фторидов, но не выше их суммарного содержания 0,75 мг/л) 1,5

Сложность анализа сточной воды заключается в следующем:

реальные образцы могут содержать анионы в концентрациях, отличающихся друг от друга на несколько порядков. Так, концентрация хлорид и сульфат-ионов, может составлять сотни ррш, в то время как другие - присутствуют в следовых количествах ррЬ).

Анализ сточной воды часто проводится на фоне непредсказуемой матрицы. Сопутствующие органические вещества могут влиять на результаты измерений и накапливаться на хроматографической колонке;

требуется их предварительное удаление. Для этой цели применяют картриджи для твердофазной экстракции, например, с сорбентом С18 [58].

Катионообменные картриджи в Ag+ и Ва2+ форме используют для селективного удаления галогенидов и сульфатов. Картриджи в Ag+ форме широко применяют для селективного удаления хлоридов при следовом анализе анионов, например, бромидов в озонированной воде [59-63].

Имеющиеся методики контроля содержания неорганических анионов в сточной воде методом ионной хроматографии позволяют измерять концентрации на уровне от 1 мг/л. Но, поскольку нормы для воды рыбохозяйственного назначения для ряда анионов значительно ниже (табл. 1), создание методики, позволяющей определять семь анионов одновременно в питьевой и в сточной водах — важная задача.

1.3.2. Количественный анализ анионов в нефти

Другая актуальная практическая задача - определение анионов в водных вытяжках из нефти. При добыче нефти ее почти всегда сопровождает пластовая (буровая) вода. В буровых водах растворены различные соли, чаще всего хлориды натрия, кальция, магния, реже - карбонаты и сульфаты. Содержание солей в этих водах колеблется в широких пределах - до 30%.

Наибольшее отрицательное воздействие на аппаратуру при переработке нефти оказывают хлориды. Они накапливаются в трубах теплообменников и печей, что приводит к необходимости частой очистки труб и снижению коэффициента теплопередачи. Хлориды гидролизуются с образованием соляной кислоты даже при низких температурах; результат -коррозия аппаратуры технологических установок. Другие соли также оказывают отрицательное воздействие на аппаратуру. Кроме того, накапливаясь в остаточных нефтепродуктах (мазуте и гудроне), они ухудшают их качество.

При обессоливании обезвоженную нефть смешивают с пресной водой, создавая искусственную эмульсию, которая затем разрушается. Обессоливание нефти проводится на промыслах и нефтеперерабатывающих заводах [64].

Содержание солей оценивают по концентрации анионов. В России ГОСТ 21534-76 регламентирует процедуру экстракции хлоридов из нефти водой и потенциометрического титрования нитратом серебра их водной вытяжки [65]. Кроме хлоридов, актуально определение содержания и других анионов в нефти (сульфатов, бромидов), поскольку они также оказывают коррозионное воздействие на аппаратуру.

Определение суммарного содержания солей в сырой нефти проводят кондуктометрическим методом по АБТМ Б 3230 «Определение солей в сырой нефти» по электропроводности раствора сырой нефти в полярном растворителе при пропускании переменного тока через анализируемый раствор [66]. Определение ряда анионов в растительных маслах методом ионной хроматографии с суппрессионным подавлением обсуждается в [67].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Захарова, Анна Михайловна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Nielssen S. Food Analysis. Laboratory manual. Chepter 6. Phenol-sulfuric acid method for total carbohydrates.// 2007. USA. New York. P. 47-55.

2. Elba Rojas-Escudero, Ana Luisa Alarcón-Jiménez, Patricia Elizalde-Galván, Francisco Rojo-Callejas. Optimization of carbohydrate silylation for gas chromatography// Journal of Chromatography, 2004, V. 1027, P. 117-120.

3. Вешняков В.А., Хабаров Ю.Г., Камакина Н.Д. Сравнение методов определения редуцирующих веществ: метод Бертрана, эбулиостатический и фотометрический методы.// Химия растительного сырья 2008. №4. С47-50.

4. Фертман Г.И. Химико-технологический контроль спиртового и ликеро-водочного производства//1975 М.: Пищевая промышленность. 440 С.

5. Ikegami Т, Horie К., Saad N., Hosoya К., Fiehn о., Tanaka N. Highly efficient analysis of underivatized carbohydrates using monolithic-silica-based capillary hydrophilic interaction (HILIC) HPLC// Analytical and Bioanalytical Chemistry 2008. 391(7). P. 2533-2542.

6. Sancho, M. Т., Muniategui, S., López, J., Simal, J., Huidobro, J. F. Comparison of high performance liquid chromatography and enzymic methods for estimating fructose and glucose in honey and rapid analysis of other sugars. Anales de Bromatologia. 1990. Vol. 42, No. 1. P. 71-81.

7. Claudio Corradini, Antonella Cavazza, Chiara Bignardi. High-Performance Anion-Exchange Chromatography Coupled with Pulsed Electrochemical Detection as a Powerful Tool to Evaluate Carbohydrates of Food Interest: Principles and Applications// International Journal of Carbohydrate Chemistry. 2012. V. 2012. P. 13-26.

8. T. Masuda, K. Kitahara, Y. Aikawa, S. Arai/ High-Performace Liquid Chromatographic Determination of Mono- and Oligosaccharides in Vegetables with Evaporative Light-Scattering Detection and Refractive

Index Detection//Journal of Chromatographic Science. 1998. V. 36. P. 895898.

9. Guenu S., Seigneuret J.M., Dreux M. Analysis of carbohydrates in plant extracts by LC using evaporative light scattering detection. Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies. 2000. Vol. 23, Issue 18. P. 28832896.

10. Herbreteau B., Villette V., Lafosse M., Dreux M. Analysis of oligosaccharides using aminobonded silica gel and a ternary eluent with evaporative light scattering detection. Fresenius' Journal of Analytical Chemistry. 1995. January II/February I, Vol. 351, Issue 2-3, P. 246-250.

11. Yue J., Narine S.S. Separation and Quantification of Vegetable Oil Based Polyols by High Performance Liquid Chromatography with Evaporative Light Scattering Detection. Journal of the American Oil Chemists' Society. 2007. Vol. 84, Issue 9, P. 803-807.

12. R.Tommaso, I. Cataldi, G.Margiotta, L. Iasi, B. Di Chio. Determination of Sugar Compounds in Olive Plant Extracts by Anion-Exchange Chromatography with Pulsed Amperometric Detection // Anal. Chem. 2000, V. 72, P. 3902-3907.

13. Hanko V.P., Rohrer J.S., Determination of carbohydrates, sugar alcohols, and glycols in cell cultures and fermentation broths using high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection. Anal. Biochem. 283 (2000). P. 192-199.

14. W. Wu, K. Hamase, M. Kiguchi, K. Yamamoto, K. Zaitsu. Reversed-Phase HPLC of Monosaccharides in Glycoproteins Derivatized with Aminopyrazine with Fluorescence Detection //Analytical Sciences 2000. V. 16, No. 9. P. 919.

15. A. Nakamura, C. Hatanaka, Y. Nagamatsu. Ultraviolet Spectrometric Determination of Neutral Monosaccharides by HPLC with Ethanolamine//

Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 2000. V. 64, No. 1. P. 178180.

16. S. Cortacero-Ramireza, A. Segura-Carretero, С. Cruces-Blanco, M. Hernainz-Bermudez de Castro, A. Fernandez-Gutierrez. Analysis of carbohydrates in beverages by capillary electrophoresis with precolumn derivatization and UV detection// Food Chemistry 2004. V. 87. P. 471-476.

17. A.B. Алексеева, JI. А. Карцова, H. В. Казачищева// Определение Сахаров методом лигандообменного капиллярного электрофореза. Журнал аналитической химии, 2010, том 65, № 2, с. 205-211.

18. G. Morales-Cid, В. m. Simonet, S. Cardenas, М. Valcarcel. On-capilary sample cleanup method for the electrophotometric determination of carbohydrates in juice samples//Electrophoresis 2007. V. 28. P.1557-1563.

19. А.В.Романов, О.Г.Ларионов. Определение углеводного состава меда// Журнал «Сорбционные и хроматографические процессы», 2007, Т.7, Вып.5, стр. 719-723.

20. О. Кларк. Вино. Полное руководство для знатоков и не только. М. Эксимо. 2004. 144 с.

21. ГОСТ 8756.13-87 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения Сахаров// 1987. М. Росстандарт. 9 с.

22. Методические указания МУ 4.1./4.2. 2486 -09. Методические указания по идентификации, в том числе в целях выявления фальсификации, соковой продукции из фруктов и овощей// М. 56 с.

23. ГОСТ 5903-89. Изделия кондитерские. Методы определения сахара.//М. Росстандарт 23 с.

24. ГОСТ 25268-82. Изделия кондитерские. Методы определения ксилита и сорбита.//М. Росстандарт 9 с.

25. Papesa S., Jezek D., Kujund D. Determination of Sorbitol Concentration in Diet Chocolate by High-Performance Liquid Chromatography. 2001. Food technol. biotechnol. V. 39. N 2. P. 129-133.

26. Chen X., Jiang Z-H., Chen S., Qin W. Microbial and Bioconversion Production of D-xylitol and Its Detection and Application. 2010. Int. J. Biol Sci. V 6. N 7. P. 834-844.

27. Jianke Z., Kang H., Li Z., Zhihong S. Analysis of monosaccharide composition in coking malt by precolumn derivatization-high performance liquid chromatography. Chemical Journal on Internet. 2007 Vol.9 . No.8 P. 37.

28. Du P., Anumula K. R. Quantitative Analysis of Monosaccharides from Glycoproteins by Fast HPLC with Highly Sensitive Fluorescence Detection/ 1994. Anal. Bichem. V. 220 P. 275-277.

29. Кишковский 3. H., Скурихин И. M. Химия вина. Москва, 1996. АгроПРОМИЗДАТ, 254 с.

30. ГОСТ Р 51621-2000 Алкогольная продукция и сырье для ее производства. Методы определения массовой концентрации титруемых кислот. М. 2000. 6 с.

31. ГОСТ Р 51654-2000 Алкогольная продукция и сырье для ее производства. Метод определения массовой концентрации летучих кислот. М. 2000. 8 с.

32. Determination of organic acids in the presence of inorganic anions by ion chromatography with suppressed conductivity detection/ Geng X. et [al.] // J. of Chromatography A. 2008. V.l 192. P. 187-190.

33. Golden K.D. and Williams O.J. Amino Acid, Fatty Acid, and Carbohydrate Content of Artocarpus altilis (Breadfruit) // Journal of Chromatographic Science. 2001. Vol. 39, P. 243-250.

34. Youl J., Zhang W., Zhang Y. Simple derivatization method for sensitive determination of fatty acids with fluorescence detection by highperformance liquid chromatography using 9-(2-hydroxyethyl)-carbazole as derivatization reagent// Analytica Chimica Acta. 2001. V. 436. P. 163-172.

35. Determination of Organic Acids, Sugars, Diacetyl, and Acetoin in Cheese by High-Performance Liquid Chromatography/ Ding J. et [al.]// J. Agric. Food Chem. 2001, V. 49, P. 272-276.

36. Ergonul P.G., Nergiz C. Determination of organic acids in olive fruit by HPLC// Czech J. Food Sci. 2010. V. 28. P. 202-205.

37. M. Kordi-Krape. Determination of Organic Acids in White Wines by RP-HPLC// Food technol. biotechnol. 2001. V. 39 (2) . P. 93-99.

38. Zeppa G., Conterno L., Gerbi V. Rapid determination of main constituents of packed juices by reverse phase-high performance liquid chromatography: an insight in to commercial fruit drinks // J. Agric. Food Chem. 2001, V. 49, P. 272-276.

39. Kelebek H., Selli S., Canbas A., Cabaroglu T. HPLC determination of organic acids, sugars, phenolic compositions and antioxidant capacity of orange juice and orange wine made from a Turkish cv. Kozan. Microchemical Journal. 2009. Vol. 91, Issue 2. P. 187-192.

40. Guash J., Busto O. Wine: gas and liquid chromatography. Encyclopedia of Separation Science. 2000. P. 4490-4498.

41. HPLC Organic Acid Analysis in Different Citrus Juices under Reversed Phase Conditions. Nour V. et [al.] //Not. Bot. Hort. Agrobot. Cluj. 2010. V. 38 (1). P. 44-48.

42. ГОСТ P 52964-2008. Вода питьевая. Методы определения содержания сульфатов. 2009. М. Стандартинформ. 16 с.

43. ГОСТ 4245-72 Вода питьевая. Методы определения содержания хлоридов М.: ИПК Издательство стандартов, 1997. 6 с.

44. МУК 4.1.2587-10. Определение бромид-ионов в питьевой воде спектрофотометрическим методом. Методические указания. 2010. М. Роспотребнадзор. 12 с.

45. ПНД Ф 14.1:2.3-95. Количественный химический анализ вод. Методика выполнения измерений массовой концентрации нитрит-ионов в

155

природных и сточных водах фотометрическим методом с реактивом Грисса. 2004. М.18 с.

46. ГОСТ 23268.9-78 Воды минеральные питьевые лечебные, лечебно-столовые и природные столовые. Методы определения нитрат-ионов. 1979. М.: ИГПС Издательство стандартов, 7 с.

47. ПНД Ф 14.1;4.248-07. Количественный химический анализ вод. Методика выполнения измерений массовых концентраций ортофосфатов, полифосфатов и фосфора общего в питьевых, природных и сточных водах фотометрическим методом. 2007. М. 19 с.

48. ГОСТ Р 52964-2008. Вода питьевая. Методы определения содержания сульфатов. 2009. М. ИПК Издательство стандартов. 16 с.

49. ГОСТ 26426-85 Почвы Методы определения иона сульфата в водной вытяжке//М. 1985. 7 с.

50. Amin М., Lim L.W., Takeuchi Т. Determination of common inorganic anions and cations by non-suppressed ion chromatography with column switching 2008. J. Chromatogr A. V. 1182. N. 2. P. 169-175.

51. Zarkovi D., Todorovi G, Krgovi M., Rajakovi L. Determination of inorganic an ions in papermaking waters by ion chromatography. 2009. J. Serb. Chem. Soc. 2009. V. 74. N. 3. P. 301-310.

52. Dionex. Application Note 133. Determination of Inorganic Anions in Drinking Water by Ion Chromatography. 7 p.

53. Peter E. Jackson. Ion Chromatography in Environmental Analysis. Encyclopedia of Analytical Chemistry. R.A. Meyers (Ed.). John Wiley & Sons Ltd, Chichester, 2000. pp. 2779-2801.

54. Smillie R. H. and Grant B. Determination of phosphate and phosphite in plant material by gas chromatography-mass spectrometry and ion chromatography. J. of Chromatography, 1988. V. 455. P. 253-261.

55. Lopez-Ruiz B. Advances in the determination of inorganic anions by ion chromatography. J. of Chromatography A, 2000. V. 881. P. 607-627.

56. Федеральное агентство по рыболовству. Приказ от 18 января 2010 г. № 20 «Об утверждении нормативов качества воды водных объектов рыбохозяйственного значения, в том числе нормативов предельно допустимых концентраций вредных веществ в водах водных объектов рыбохозяйственного значения».

57. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы СанПиН 2.1.4.1074-01. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. Минздрав России. Москва 2002. 56 с.

58. Dionex. Application Note 135. Determination of Inorganic Anions in wastewater by Ion Chromatograph. lip.

59. Jackson P.E. Ion Chromatography in Environmental Analysis. Encyclopedia of Analytical Chemistry. Meyers R.A. Edition. Ramtech Inc. Larkspur, CA, USA. 2000. P. 2779-2801.

60. Nagashima H., Okamoto T. Determination of inorganic anions by ion chromatography using a graphitized carbon column dynamically coated with cetyltrimethylammonium ions. Journal of Chromatography A. 1999. Vol. 855, Issue l.P. 261-266.

61. Dolenc J., Gorenc D. Ion chromatographic determination of inorganic anions in vinegar samples. J. Molecular nutritions. 1994. Vol. 38, Issue 4. P. 434438.

62. Michalski R. Sample Preparation for Ion Chromatography, Encyclopedia of Chromatography. 2010. Vol. III. P. 2106-2110.

63. Zarkovic d., Todorovic z., Krgovic m., Rajakovic 1. Determination of inorganic anions in papermaking waters by ion chromatography. J. of the Serbian Chemical Society. 2009. Vol. 74, P. 301-310.

64. Левченко Д.И. и др. Технология обессоливания нефтей на нефтеперерабатывающих предприятиях. М.: Химия, 1985, 168 с.

65. ГОСТ 21534-76 Нефть. Методы определения содержания хлористых солей. М. 11 с.

66. ASTM D 3230 - 89 (Reapproved 1997) Standard Test Method for Salts in Crude Oil (Electrometric Method). American society for testing and materials. 5 P.

67. Dugo G., Pellicano Т. M., Pera L. L., Turco V., Tamborrino A., Clodoveo M. L. Determination of inorganic anions in commercial seed oils and in virgin olive oils produced from de-stoned olives and traditional extraction methods, using suppressed ion exchange chromatography (IEC). Food Chemistry 2007. V.102. P. 599-605.

68. ГОСТ P ИСО 11338-2-2008 Выбросы стационарных источников. Определение содержания полициклических ароматических углеводородов в газообразном состоянии и в виде твердых взвешенных частиц. Часть 2. Подготовка, очистка и анализ проб. Москва, автономная некоммерческая организация «Научно-исследовательский центр контроля и диагностики технических систем» (АНО «НИЦ КД») на основе собственного аутентичного перевода стандарта ИСО 113382:2003. 27 с.

69. Vari§ S., Turker L. A review of polycyclic aromatic energetic materials. 2009. Polycyclic Aromatic Compounds. V. 29, ц.4. P. 228-266.

70. Delgado-Saborit J. M., Baker S., Harrad S., Meddings C., Harrison R. Determination of atmospheric particulate-phase polycyclic aromatic hydrocarbons from low volume air samples. 2010. Anal.Methods, V. 2, P. 231-242.

71. Peltonen K. Kuljukka T. Air sampling and analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons. Journal of Chromatography A. 1995. V. 710.№ 1. P. 93-108.

72. Fabbri D., Adamiano A., Torr C. GC-MS determination of polycyclic aromatic hydrocarbons evolved from pyrolysis of biomass. Anal.Bioanal. Chem. 2010. V. 397. № 1. P. 309-317.

73. Cheng-Di Dong, Chih-Feng Chen, Chiu-Wen Chen. Determination of Poly cyclic Aromatic Hydrocarbons in Industrial Harbor Sediments by GC-MS. Int. J. Environ. Res. Public Health. 2012. V. 9. P. 2175-2188.

74. Moret S., Piani В., Bortolomeazzi R., Contel L.S. HPLC determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in olive oils. European Food Research and Technology. 1997. V. 205, № 2. P. 116-120.

75. SOP MLD 028. Standard operating procedure for the determination of selected polyaromatic hydrocarbons (pah) in ambient air. California air resources. Board monitoring and laboratory division.

76. Triantafyllaki S., Dassenakis M., PsaroudakisN. Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in seawater by high performance liquid hromatography with photo diode array and fluorescence detection. Proceedings of the 9th International Conference on Environmental Science and Technology. 2005. Greece, 1-3 September.

77. Oliferova L., Statkus M., Tsysin G., Shpigun O., Zolotov Y. On-line solidphase extraction and HPLC determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in water using fluorocarbon polymer sorbents. Analytica Chimica Acta. 2005. V. 538. P. 35-40.

78. Kanchanamayoon W., Tatrahun N. Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Water Samples by Solid Phase Extraction and Gas Chromatography. World Journal of Chemistry 3 (2): 51-54, 2008.

79. Другов Ю.С. Родин A.A. Пробоподготовка в экологическом анализе. СПб: Анатолия, 2002. - 755 с.

80. Marce R.M., Borrull F. Review. Solid-phase extraction of polycyclic aromatic compounds. Journal of Chromatography A. 2000. V. 885. P. 273290.

81. M.Charalabaki, E. Psillakis, D. Mantzavinos, N. Kalogerakis. Analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons in wastewater treatment plant effluents

using hollow fibre liquid-phase microextraction// Chemosphere 2005. V. 60. P. 690-698.

82. Проскурина H.A., Даванков В. А., Ильин M.M., Сычев К. С. Определение полиядерных ароматических углеводородов в жиросодержащих продуктах питания с использованием селективной твердофазной экстракции. Сорбционные и хроматографические процессы. 2009. Т. 9. Вып. 2. С. 167-176.

83. Davankov V.A., Tsyurupa М.Р. Structure and properties of hypercross-linked polystyrene the first representive of a new class of polymer networks React. Polymer. 1990. V. 13. P. 27-42.

84. Pastukhov A.V., Tsyurupa M.P., Davankov V.A. Hypercrosslinked olystyrene: A Polymer in a Non-Classical Physical State. // J. Polymer Science: Part B: Polymer Physics. 1999. V. 37. P. 2324 - 2333.

85. A Validated Reverse Phase HPLC Method for the Determination of Disodium EDTA in Meropenem Drug Substance with UV-Detection using Precolumn Derivatization Technique/ Bhavil N. et [al.]// 2011. Anal Chem Insights.V. 6. P. 7-14.

86. Determination of EDTA in Dairy Wastewater and Adjacent Surface Water/ Xie C. Z. et [al]// International Journal of Civil and Environmental Engineering. 2010. V. 2. N 1. P. 44-48.

87. Development and validation of a method for the determination of EDTA in non-alcoholic drinks by HPLC/ D Cagnasso С. E. et [al.]// Journal of Food Composition and Analysis 2007. V. 20. P. 248-251.

88. Determination of EDTA species in water by square-wave voltammetry using a chitosan-coated glassy carbon electrode/ Zhao C. et [al.]// Water Research 2003. V. 37. P. 4270-4274.

89. The analysis of EDTA in dried bloodstains by electrospray LC-MS-MS and ion chromatography/ Miller M. L. et al./Journal of analytical toxicology// 1997. V. 21. P. 521-528.

90. Katata L., Nagaraju V., Crouch A.M. Determination of ethylenediaminetetraacetic acid, ethylenediaminedisuccinic acid and iminodisuccinic acid in cosmetic products by capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography// Analytica Chimica Acta. 2006.V. 579. P. 177-184.

91. Kvasnicka F., Mikova K., Determination of EDTA in Mayonnaise by OnLine Coupled Capillary Isotachophoresis-Capillary Zone Electrophoresis with UV Detection. J. of Food Composition and Analysis. 1996. V. 9. N 3. P. 231-242.

92. A. P. Adebiyi, Dong-Hao Jin, T. Ogawa, K.. Muramoto. Acid Hydrolysis of protein in a micricapillary tubes// Biosci. Biotechnol. Biochem. 69(1), 255257 (2005).

93. V. Barkholt, A. L. Jensen. Amino acid analysis: determination of cysteine plus half-cystine in proteins after hydrochloric acid hydrolysis with a disulfide compound as additive// Analytical Biochemistry. 1989. V. 177 (2), P. 318-322.

94. L.S Bates and W. Deyoe. An evaluation of microwave heating for the vapor phase hydrolysis of proteins// J. Protein Chemistry. 2000. V. 12. № 4. P. 234-241.

95. R Bischoff, H V Kolbe. Deamidation of asparagine and glutamine residues in proteins and peptides: structural determinants and analytical methodology// J. Chromatography and Biomedical applications. 1994. V. 662 (2), P. 261-278.

96. L. Brent, W. Frederick. A Method for Quantitative Amino Acid Analysis Using Precolumn o-Phthalaldehyde Derivatization and High Performance Liquid Chromatography// J. Chromatographic Science 1981. 19 (5), P. 259265.

97. C. Bueno-Solano, J. Lopez-Cervantes. HPLC Determination of Histamine, Tyramine and Amino Acids in Shrimp By-Products// J. Braz.Chem. Soc. 2012. V.23, No 1,P. 96-102.

98. Fountoulakis, Hans-Werner Lahm. Hydrolysis and amino acid composition analysis of proteins// J. Chromatography. 1998. A 826. P. 109-134

99. M. Friedman, J. Protein Chemistry. Application of the S-Pyridylethylation Reaction to the Elucidation of the Structures and Functions of Proteins// Department of Grain Scince and Industry 2001. V. 20, N. 6 , P. 431-453.

100. J. Fontaine, M. Eudaimon. Liquid Chromatographic Determination of Lysine, Methionine and Threonine in Pure Amino acids (Feed Grade) and Premixes: Collaborative Study// J. AOAC International. 2000. V. 83, No. 4, P. 123-135.

101. Japanese Pharmacopea, Fifteenth Edition, 2002 Amino Acid Analysis

102. Adebiyi A. P. Jin D-H., Ogawa T., Muramoto K. Acid hydrolysis of protein in microcapillary tube for the recovery of tryptophan// Biosci. Biotechnol. Biochem. 2005. V. 69. N 1. P 255-257.

103. F. Hoffmann. Oxidation of Cysteine and Methionine Residues During Acid Hydrolysis of Proteins in the Presence of SodiumAzide// J. Chromatography 2004. A 1025, P. 201-209.

104. X. Kang, J. Xiao, X. Huang, Z. Gu. Optimization of dansyl derivatization and chromatographic conditions in the determination of neuroactive amino acids of biological samples// Clinica Chimica Acta 2006. V. 366, P. 352 -356.

105. Materials of Hewlett Packard Company. An evaluation of microwave heating for vapor phase hydrolysis of proteins// USA (1989).

106. M. V. Pickering, M. Ofítserova. Persistence of Cation-exchange Chromatography for Analysis of Free Amino Acids// Materials of Pickering Laboratories Incorporated

107. G. Pohn, J. Csapo, E. Varga-Vis. Determination of the Enantiomers of Methionine and Cyst(e)ine in the Form of Methionine-sulphon and Cysteic Acid After Performic Acid Oxidation by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography//Food Chem. 2004. V. 87, P. 543-551.

108. D.J. Strydom, T.Andersenb, I. Apostols et al., Cysteine and Tryptofan Amino Acid Analysis of ABRF92-AA// Techniques in Protein Chemistry, Academic press.

109. A. Tsugita, J-J. Scheffler. A Rapid Method for Acid Hydrolysis of Protein with a Mixture of Trifluoroacetic Acid and Hydrochloric Acid// Eur . J. Biochem. 1982. V. 124, P. 585-588.

110. W. Zhou, X.-Y. Zhang and G.-L. Duan. Liquid-Chromatography Quantitative Analysis of 20 Amino after Derivatization with FMOC-C1 and Its Application to Different Origin Radixids isatidis// J. Chinese Chemical Society, 58, 509-515(2011).

111. A. Fabiani, A. Versari, G.P. Parpinello, M. Castellari, and S. Galassi. HighPerformance Liquid Chromatographic Analysis of Free Amino Acids in Fruit Juices Using Derivatization with 9-Fluorenylmethyl-Chloroformate// Journal of Chromatographic Science, 2002. V. 40, January P. 14-18.

112. A. Fir, W. Ci, R. Littell, M. Marshall. HPLC method for analysis of free amino acids in fish using o-phthaldialdehyde precolumn derivatization// J. Agric. Food. Chem. 1999. Dec. 47(12). P. 61-70.

113. H. Bruckner and T. Westhauser Chromatographic determination of L- and D-amino acids in plants// Amino Acids. 2003. V. 24. P. 43-55.

114. P. Herbert, P. Barros, N. Ratola, and A. Alves. HPLC Determination of Amino Acids in Musts and Port Wine Using OPA/FMOC Derivatives// Journal of food science 2000. V. 65, No. 7, P. 1130-1133.

115. C. Thiele, M.G. Ganzle, and R.F. Vogel Sample preparation for amino acid determination by integrated pulsed amperometric detection in foods// Analytical Biochemistry 2002. V. 310. P. 171-178.

116. Fountoulakis Michael, Lahm Hans-Werner Hydrolysis and amino acid composition analysis of proteins Journal of Chromatography A, 826 (1998) 109-134.

117. Thiele C., Ganzle M.G., Vogel R.F. Sample preparation for amino acid determination by integrated pulsed amperometric detection in foods Analytical Biochemistry 310 (2002) 171-178.

118. Herbert P., Barros N., Alves A. HPLC Determination of Amino Acids in Musts and Port Wine Using OPA/FMOC Derivatives. J. of food science. 2000. V. 65. N. 7. P. 1130-1133.

119. Bartolomeo M. P., Maisano F. Validation of a Reversed-Phase HPLC Method for Quantitative Amino Acid Analysis. J Biomol Tech. 2006. Vol. 17, №2. P. 131-137.

120. Mengerink Y, Kutlan D, Toth F, Csampai A, Molnar-Perl I. Advances in the evaluation of the stability and characteristics of the amino acid and amine derivatives obtained with the o-phthaldialdehyde/3-mercaptopropionic acid and o-phthaldialdehyde/N-acetyl-l-cysteine reagents: High-performance liquid chromatography-mass spectrometiy study. J Chromatogr A. 2002. Vol. 949. P. 99-124.

121. Vatanavicharm N, Ratanarak P, Liammongkolkul S, Sathienkijkanchai A, Wasant P. Amino acid disorders detected by quantitative amino acid HPLC analysis in Thailand: An eight-year experience. Clinica Chimica Acta. 2012. Vol. 413. Issues 13-14. P. 1141-1144.

122. Li Y, Tang A, Mu S. HPLC-FLD determination of serum aromatic amino acids: Application in chronic kidney disease patients. Clinica Chimica Acta. 2011. Vol.412. Issues 11-12.P. 1032-1035.

123. Schwarz E. L., Roberts W. L., Pasquali M. Analysis of plasma amino acids by HPLC with photodiode array and fluorescence detection. Clinica Chimica Acta. 2005. Vol. 354. Issues 1-2. P. 83-90.

124. Peace RW, Gilani GS. Chromatographic determination of amino acids in foods. J. of AOAC International. 2005. Vol 88(3). P 877-887.

125. Gokmen V., Serpen A., Mogol B. Rapid determination of amino acids in foods by hydrophilic interaction liquid chromatography coupled to highresolution mass spectrometry. J. Analytical and bioanalytical chemistry. 2012. Vol.403(10). P 2915-2922.

126. Callejón R., Tesfaye W., Torija M. HPLC determination of amino acids with AQC derivatization in vinegars along submerged and surface acetifications and its relation to the microbiota. J. European food research and technologies. 2008. Vol. 227(1). P. 93-102.

127. Csapo J., Albert C., Lokil K., Csapo-Kissl Z. Separation and determination of the amino acids by ion exchange column chromatography applying postcolumn derivatization. Acta Univ. Sapientiae, Alimentaria, 2008. V. 1. P. 5-29.

128. Hanczko R., Jambor a., Perl a., Molnar-Perl I. Advances in the o-phthalaldehyde derivatizations. Comeback to the o-phthalaldehyde-ethanethiol reagent. J. chromatography. 2007. V. 7. 1163(1-2). P 25-42.

129. Koros A., Varga Z., Molnar-Perl I. Simultaneous analysis of amino acids and amines as their o-phthalaldehyde-ethanethiol-9-fluorenylmethyl chloroformate derivatives in cheese by high-performance liquid chromatography. J. Chromatography. V. 5 1203 (2). P. 146-152.

130. Rombouts I., Lagrain B., Lamberts L., Bris K., Delcour J.A. Wheat gluten amino acid analysis by high-performance anion-exchange chromatography with integrated pulsed amperometric detection. Methods Mol. Biol. 2012. V. 828. P. 329-337.

131. Yu H., Ding Y.S., Mou S.F., Jandik P., Cheng J. Simultaneous determination of amino acids and carbohydrates by anion-exchange chromatography with integrated pulsed amperometric detection. J. Chromatography. 2002. V. 9. 966 (1-2). P. 89-97.

132. ГОСТ 17.2.3.02-78 Охрана природы и атмосфера. Правила установления допустимых выбросов вредных веществ промышленными предприятиями

133. ГОСТ 17.2.4.06-90 Охрана природы. Атмосфера. Методы определения скорости и расхода газопылевых потоков, отходящих от стационарных источников загрязнения

134. Flores Р., НеШп P., Fenoll J. Determination of organic acids in fruits and vegetables by liquid chromatography with tandem-mass spectrometry. J. Food Chemistry. 2012. Vol. 132, Issue 2. P 1049-1054.

135. Eyeghe-Bickong H., Alexandersson E., Gouws L., Young P., Vivier M. Optimisation of an HPLC method for the simultaneous quantification of the major sugars and organic acids in grapevine berries. Journal of Chromatography B. 2012. Vol. 885-886. P. 43-49.

136. Rodrigues C., Marta L., Maia R., Miranda M., Ribeirinho M., Maguas C. Application of solid-phase extraction to brewed coffee caffeine and organic acid determination by UV/HPLC. Journal of Food Composition and Analysis. 2007. Vol. 20, Issue 5. P. 440-448.

137. Cardoso V. V., Rodrigues A., Correia J. Application of SPME in the Analysis of Polynuclear Aromatic Hydrocarbons in Water by HPLC with DAD Detection. J. Poly cyclic Aromatic Compounds. 2001. Vol. 19, Issue 14. P. 227-239.

138. ГОСТ P ИСО 16362-2009 Воздух атмосферный определение содержания полициклических ароматических углеводородов в виде твердых частиц методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. М. Стандартинформ. 29 с.

139. Zhang D., Sun С., Wang Т. Simultaneous determination of 13 polycyclic aromatic hydrocarbons in indoor air by HPLC. J. of West China University of Medical Sciences. 2002. Vol. 33, Issue 1. P. 140-154.

140. Toriba A., Hayakawa K. Biomarkers of exposure to polycyclic aromatic hydrocarbons and related compounds. J. of health science. 2007. Vol. 53, Issue 6. P. 631-638.

141. Watabe Y., Kubo Т., Tanigawa T. Trace level determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in river water with automated pretreatment HPLC. Journal of Separation Science. 2013. Volume 36, Issue 6. P. 1128-1134.

142. Gilgenast E., Boczkaj G., Przyjazny A., Kaminski M. Sample preparation procedure for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in petroleum vacuum residue and bitumen. Anal Bioanal Chem. 2011. Vol. 401, №3. P. 1059-1069.

143. Tsugita A., Scheffler J. A Rapid Method for Acid Hydrolysis of Protein with a Mixture of Trifluoroacetic Acid and Hydrochloric Acid. 1982. Eur. J. Biochem. V. 124. P. 585-588.

144. Maleki R., Nezhad N. M., Samadi N., Farhadi K. Trace determination of EDTA from water samples using dispersive liquid microextraction coupled with HPLC-DAD. Microchimica Acta. 2009. Vol. 165 Issue V2. P. 97.

145. Nowack В., Gulnter Kari F., U. Hilger S. Determination of dissolved and adsorbed EDTA species in water and sediments by HPLC. J. Analytical Chemistry. 1996. Vol. 68. P 561-566.

146. Shi XX, Chen XM. Determination of EDTA residue in canned food products by RP-HPLC. J. Se Pu. 2000. Vol. 18, №5. p 445-447.

147. Методика выполнения измерений массовой концентрации анионов в нефти методом высокоэффективной жидкостной хроматографии М-02-505-104-02. ООО "ВНЕДРЕНЧЕСКАЯ ФИРМА "АНАЛИТ" (ООО "АНАЛИТ")

148. КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ Методика выполнения измерений массовой доли аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. М-02-902-142-07

ООО "ВНЕДРЕНЧЕНСКАЯ ФИРМА "АНАЛИТ" (ООО "АНАЛИТ") -генеральный дистрибьютор Шимадзу

149. Методика выполнения измерений массовой концентрации полициклических ароматических углеводородов в атмосферном воздухе и промышленных выбросах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии М-02-902-150-07. ООО "ВНЕДРЕНЧЕНСКАЯ ФИРМА "АНАЛИТ" (ООО "АНАЛИТ") -генеральный дистрибьютор Шимадзу

150. Методика выполнения измерений массовой концентрации ионов MV,

NO3", СГ, F", Br", SO42", Р043' в пробах природной, питьевой и сточной воды методом ионной хроматографии М-02-1805-09. ООО «АНАЛИТ ПРОДАКТС» (ООО "АНАЛИТ") - генеральный дистрибьютор Шимадзу

151. Методика выполнения измерений массовой доли углеводов в пробах пищевых продуктов и биологически активных добавок методом высокоэффективной жидкостной хроматографии М-02-2107-09 ООО «АНАЛИТ ПРОДАКТС» (ООО "АНАЛИТ") - генеральный дистрибьютор Шимадзу

152. Карцова Л.А., Бессонова Е.А., Объедкова Е.В., Даванков В.А. Использование сверхсшитого полистирола как сорбента для твердофазной экстракции при анализе лекарств в биологических объектах методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ). Сорбционные и хроматографические процессы. 2010. Т. 10. Вып. 1 с. 5-14.

153. Лисицин А.Б. и соавт. Теория и практика переработки мяса. Под общей редакцией академика РАСХН Лисицина A.B. // М.: ВНИИМП, 2004. 391 с.

154. Э. Люк, M. Ягер. Консерванты в пищевой промышленности// Санкт-Петербург, «Гиорд», 1998. - 254 с.

155. Неудачина JI.K., Лебедева Е.Л. Определение ионов меди (И) методом капиллярного зонного электрофореза в виде комплекса с этилендиаминтетрауксусной кислотой. Аналитика и контроль. 2012. Т. 16. №2. С.162-168.

156. ГОСТ 21534-76 Нефть. Методы определения содержания хлористых солей.

157. ASTM D3230. Определение солей в сырой нефти.

158. ПНД Ф 14.2:4.176-2000 Количественный химический анализ вод. Методика выполнения измерений массовых концентраций анионов (хлоридов, сульфатов, нитратов, бромидов и йодидов) в природных и питьевых водах методом ионной хроматографии.

159. ПНД Ф 14.1:2:4.169-2000. Методика выполнения измерений массовых концентраций анионов: фторидов, хлоридов, фосфатов, нитратов, сульфатов в поверхностных, питьевых и сточных водах методом ионной хроматографии.

160. ПНД Ф 14.1.175-2000. (издание 2007 г.) Методика выполнения измерения массовых концентраций анионов (хлоридов, сульфатов, нитратов, бромидов и йодидов) в сточных водах методом ионной хроматографии.

161. Методика выполнения измерений массовой концентрации углеводов в напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии . Аквилон. ФР. 1.31.2004.01035.

162. Руководство по методам контроля качества и безопасности Б АД к пище Р4.1.1672-03.

163. ГОСТ Р 53766-2009 определение сахарозы, глюкозы, фруктозы и сорбита в соках.

164. ГОСТ 5903-89 Изделия кондитерские. Методы определения общего

сахара (йодометрический, перманганатный, феррицианидный и фотоколориметрический методы).

165. ГОСТ 3628-78 Молочные продукты. Методы определения общего сахара (йодометрический, Бертрана, ускоренный феррицианидный и поляриметрический методы).

166. ГОСТ 29206-91 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения ксилита и сорбита в диетических консервах.

167. ГОСТ 13193-73 Вина, виноматериалы и коньячные спирты. Соки плодово-ягодные спиртованные. Методы определения летучих кислот

168. ГОСТ Р 54760-2011 Продукты молочные и продукты детского питания на молочной основе.

169. ГОСТ Р 54685-2011 Продукция соковая. Определение фумаровой кислоты методом ВЭЖХ.

170. ГОСТ Р 54684-2011 Соки. Определение органических кислот методом ВЭЖХ.

171. ГОСТ Р 51434-99 Соки фруктовые и овощные. Метод определения титруемой кислотности.

172. ГОСТ Р 51428-99 Соки фруктовые. Определение винной кислоты (ВЭЖХ).

173. ГОСТ Р ИСО 12884-2007 Воздух атмосферный. Определение общего содержания полициклических ароматических углеводородов методом хромато-масс-спектрометрии.

174. ГОСТ Р ИСО 11338-2-2008. Выбросы стационарных источников. Определение содержания полициклических ароматических углеводородов в газообразном состоянии и в виде твердых взвешенных частиц. Часть 2. Подготовка, очистка и анализ проб.

175. М-МВИ-52-99. Методика выполнения измерений массовой концентрации полиароматических углеводородов в воздухе рабочей

зоны и промышленных выбросах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

176. Аквилон - Методика выполнения измерений массовой доли лизина, триптофана, метионина, суммы цистина и цистеина в комбикормах, премиксах и комбикормовом сырье методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

177. Люмекс - «Методика определения протеиногенных аминокислот в комбикормах и сырье методом капиллярного электрофореза.