Комплексное исследование новой противогриппозной субстанции прямого действия тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Одноворов Артём Игоревич

• Одноворов Артём Игоревич
• кандидат наук
• 2021

Оглавление диссертации кандидат наук Одноворов Артём Игоревич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика вируса гриппа А

1.2. Специфическая профилактика гриппа

1.3. Современная терапия гриппа

1.3.1. Лекарственные препараты прямого действия

1.3.1.1. Ингибиторы нейраминидазы

1.3.1.2. Блокаторы М2-белка

1.3.1.3. Ингибитор гемагглютинина

1.3.1.4. Ингибитор кэп-зависимой эндонуклеазы

1.3.2. Препараты для неспецифического лечения

1.3.2.1. Препараты интерферона и его индукторы

1.3.2.2. Аскорбиновая кислота

1.3.3. Экспериментальные противовирусные препараты

1.4. Компьютерные технологии в фармации

1.4.1. Молекулярный докинг

1.4.2. РБДЯ-исследования

1.5. Исследование вируса гриппа методами обратной генетики

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Исследуемая субстанция и АФИ

2.2. Реактивы и растворители

2.3. Вирусы гриппа

2.4. Клеточные культуры

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.5. Пептидный синтез H-His-Rim^2HCbH2O

2.6. Физические и физико - химические методы анализа

2.6.1. Растворимость

2.6.2. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса

2.6.3. Масс - спектрометрия

2.6.4. Спектроскопия НПВО в инфракрасной области

2.6.5. Ультрафиолетовая спектроскопия

2.6.6. Тонкослойная хроматография

2.6.7. Автоматический элементный анализ

2.6.8. Поляриметрия

2.6.9. Метод малоуглового лазерного рассеяния света

2.6.10. Оптическая микроскопия

2.6.11. Определение pH

2.7. Метод количественных корреляций «структура-активность»

2.8. Метод Spirotox

2.9. Определение противовирусной активности

2.9.1. Молекулярный докинг

2.9.2. Получение мутантных штаммов вируса гриппа

2.9.3. ПЦР и секвенирование

2.9.4. Клеточный иммуноферментный анализ

2.10. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Разработка и применение методики определения механизма противовирусного действия H-His-Rim^2HCKH2O

3.1.1. Молекулярный докинг

3.1.2. Определение противовирусной активности in vitro

3.2. Стандартизация новой субстанции по показателям качества

3.2.1. Описание субстанции

3.2.2. Спектральные характеристики субстанции для показателя «подлинность»

3.2.3. Чистота

3.2.4. Количественный анализ

3.3. Применение методов QSAR для прогнозирования свойств противовирусных препаратов

3.4. Определение биологической активности H-His-Rim^2HCbH2O методом Spirotox

3.5. Сравнительная оценка противовирусной активности in vitro H-His-Rim^2HChH2O и субстанций с иными механизмами противовирусного действия

3.5.1. H-His-Rim^2HC№2O и умифеновира гидрохлорид

3.5.2. H-His-Rim^2HC№2O и L-аскорбиновая кислота

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Комплексное исследование новой противогриппозной субстанции прямого действия»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность и степень разработанности темы исследования. По

данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) респираторные инфекции являются одними из лидеров по заболеваемости и смертности по всему миру (ШЬ: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/). Наиболее тяжелые случаи заболеваний чаще всего вызваны вирусом гриппа. В данный момент существует множество способов специфической профилактики и терапии инфекции гриппа, однако их эффективность далека от идеала.

Вирус гриппа - РНК-содержащий вирус, который является причиной массовых эпидемий и пандемий. Специфическая профилактика гриппа включает вакцинирование. Однако антигенная изменчивость вируса способствует снижению эффективности вакцины, что требует постоянной затратной разработки её более совершенных модификаций. Специфическая терапия инфекции гриппа включает несколько классов лекарственных препаратов, одобренных ВОЗ. Это ингибиторы нейраминидазы (осельтамивир, занамивир) и ингибиторы М2-белка (амантадин, римантадин).

В настоящее время для лечения инфекции вируса гриппа чаще назначаются препараты класса ингибиторов нейраминидазы (КЛ) (Heneghan С.1 et а1., 2016). Однако имеется информация о появлении штаммов вируса гриппа А, устойчивых к препаратам этой группы (Lee N. et а1., 2018). Кроме того, данные препараты вызывают серьезные побочные эффекты: нарушения в работе желудочно-кишечного тракта, психоневрологические расстройства (галлюцинации, неврозы, нарушения сознания). В связи с этим их целесообразно применять в тяжелых случаях заболевания, когда существует угроза жизни и здоровью.

Экономическая доступность и простота химического синтеза производных адаманатана способствовали их широкому применению для борьбы с сезонными эпидемиями гриппа во всём мире. Однако это привело к возникновению мутаций в гене М2-белка вируса гриппа и практически полной потере противовирусной активности амантадина и римантадина. В связи с этим ведется активный поиск новых ингибиторов М2-канала вируса гриппа - преимущественно производных

адамантана (Hu Y. et al., 2017). Среди них - дейтерированные и энантиоселективные субстанции (Wright A. K. et al., 2016).

В результате поиска противогриппозных препаратов адамантанового ряда был синтезирован №гистидил-(1-адамантил)этанамин (рис. 1) в виде дигидрохлорида моногидрата (H-His-Rim^2HC№2O).

Рисунок 1. Структурные формулы 1-(1-адамантил)этанамина -римантадина (а) и его производного - №гистидил-(1-адамантил)этанамина (б).

Доклинические исследования in vitro (Шибнев В.А., 2012) и in vivo (Щелканов М.Ю., 2014) продемонстрировали выраженную активность новой субстанции в отношении устойчивых к амантадину и римантадину штаммов вируса гриппа А. Для проведения дальнейших исследований, в том числе клинических испытаний, представляется необходимым изучить физические, физико-химические свойства, биологическую активность и разработать методики контроля качества, обеспечивающие стандартизацию субстанции H-ffis-Rim^HC№O.

Цель работы: разработать комплексный подход к оценке свойств новой перспективной противовирусной субстанции методами фармацевтического и биофармацевтического анализа.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать комплекс физических, физико-химических, биологических методик контроля качества H-His-Rim^2HCbH2O в подготовке нормативной документации для стандартизации новой субстанции.

2. На основе компьютерного моделирования разработать методику определения механизма противовирусного действия H-His-Rim^2HCl^H2O.

а

б

н

3. Выявить корреляции «структура - биологическая активность» АФИ противогриппозных препаратов и определить позицию новой фармацевтической субстанции H-His-Rim•2HQ•H2O в этой группе лекарств.

4. Провести сравнительную оценку противовирусной активности H-His-Rim•2HQ•H2O и других субстанций с иными механизмами противовирусного действия - умифеновира гидрохлорида и Ь-аскорбиновой кислоты (АК).

Научная новизна работы. Впервые получены данные о механизме противовирусного действия Н-Н^-^т^2НСЬН20. Впервые детально охарактеризованы физические и физико-химические свойства новой противовирусной субстанции, необходимые для её стандартизации. Впервые методом количественной корреляции «структура-активность/свойство» (QSAR) охарактеризована позиция H-His-Rim•2HQ•H2O среди других противогриппозных лекарственных средств. Впервые проведен сравнительный анализ противовирусной активности H-His-Rim•2HQ•H2O и других субстанций с иными механизмами противовирусного действия (умифеновира гидрохлорид, АК).

Теоретическая и практическая значимость работы. Внесен вклад в библиотеку данных математического моделирования (молекулярный докинг) возможных механизмов противовирусного действия

H-His-Rim•2HQ•H2O. Результаты QSAR-расчетов могут быть использованы для прогнозирования свойств новых соединений-кандидатов исследуемого класса. Предложенная совокупность методик идентификации, оценки чистоты и количественного анализа H-His-Rim•2HQ•H20 будет использована для стандартизации новой субстанции и разработки пакета нормативной документации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты физических и физико-химических исследований (ЯМР-, масс-, ИК-, УФ-спектроскопии, растворимость, элементный анализ,

поляриметрия, гранулометрический анализ) субстанции H-His-Rim^2HCl^H2O, необходимые для ее стандартизации.

2. Возможный механизм субстанции H-His-Rim^2HC№2O с применением методов компьютерного моделирования.

3. Результаты QSAR-исследования H-His-Rim^2HCl^H2O и АФИ противогриппозных препаратов.

4. Результаты сравнительной оценки противовирусной активности H-His-Rim^2HCbH2O и других субстанций с иными механизмами противовирусного действия (умифеновира гидрохлорид, АК).

Степень достоверности полученных результатов. Достоверность полученных результатов подтверждается использованием современного высокотехнологичного оборудования для осуществления физического и физико-химического анализа исследуемых субстанций, а также оригинального программного обеспечения (ПО) исследований молекулярного докинга и метода QSAR. Все результаты обработаны с использованием ПО соответствующего оборудования, методами статистического анализа с помощью пакета программ «Origin» (OriginLab Corporation, США).

Апробация результатов диссертационной работы. Основные результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на конференциях: XI Ежегодный Всероссийский Конгресс по инфекционным болезням с международным участием «Инфекционные болезни в современном мире: эволюция, текущие и будущие угрозы» (Москва, 1-3 апреля 2019 г.); IX Всероссийская научная конференция студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 22-23 апреля 2019 г.); X Всероссийская научная конференция студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 20-21 апреля 2020 г.); научных семинарах кафедры фармацевтической и токсикологической химии РУДН совместно с лабораторией молекулярной диагностики ФГБУ «НИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» МЗ РФ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ: в журналах индексируемых в Scopus - 5, перечень РУДН - 2, а также тезисы конференций - 3.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 14.04.02 Фармацевтическая химия, фармакогнозия (фармацевтические науки) пунктам 1 и 3:

1 - Исследование и получение биологически активных веществ на основе направленного изменения структуры синтетического и природного происхождения и выявление связей и закономерностей между строением и свойствами веществ.

3 - Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства и потребления.

Личный вклад автора состоит в непосредственном участии в экспериментальных исследованиях, обработке и анализе результатов, подготовке публикаций в соавторстве с научными коллективами кафедры фармацевтической и токсикологической химии (КФиТХ) РУДН и лаборатории молекулярной диагностики ФГБУ «НИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» МЗ РФ.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы (124 источника) и приложения. Основная часть диссертации включает 12 таблиц и 27 рисунков.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Одноворов А.И. Молекулярная модель ингибитора ионного канала М2 вируса гриппа А / Одноворов А.И., Гараев Т.М., Гребенникова Т.В. // Материалы XI Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням с международным участием «Инфекционные болезни в современном

мире: эволюция, текущие и будущие угрозы», М.: Медицинское Маркетинговое Агентство, 2019. - С. 151.

2. Одноворов А.И. Разработка методов изучения механизма противовирусного действия новых соединений / Одноворов А.И. // Сборник материалов IX Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», СПб.: Изд-во СПХФУ, 2019. - С. 546-548.

3. Одноворов А.И. Изучение физико-химических свойств производного римантадина / Одноворов А.И. // Сборник материалов X Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», СПб.: Изд-во СПХФУ, 2020. - С. 198-200.

4. Одноворов А.И. Специфическая терапия гриппа: современное состояние и перспективы / Одноворов А.И., Гребенникова Т.В., Плетенева Т.В. // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2020. - Т. 9. - № 1. - С. 83-91. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2020-9-1-83-91

5. Одноворов А.И. Количественные корреляции «структура -свойство» противогриппозных лекарственных средств / Одноворов А.И., Плетенева Т.В., Морозова М.А. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2020. - Т. 23. - № 4. - С. 25-32. https://doi.org/10.29296/25877313-2020-04-04

6. Дерябин П.Г. Оценка противовирусной активности соединения 2HCl*H-His-Rim в сравнении с противогриппозным препаратом «Арбидол» в отношении высоковирулентного штамма вируса гриппа A/duck/Novosibirsk/56/05 (H5N1) (Influenza A virus, Alphainfluenzavirus, Orthomyxoviridae) / Дерябин П.Г., Гараев Т.М., Финогенова М.П., Одноворов А.И. // Вопросы вирусологии. - 2019. - Т. 64. - № 6. - С. 268-273. https://doi.org/10.36233/0507-4088-2019-64-6-268-273

7. Гараев Т.М. Производные адамантана, способные ингибировать репродукцию резистентного к римантадину штамма вируса гриппа A(H1N1)pdm09 (Influenza A virus, Alphainfluenzavirus, Orthomyxoviridae) /

Гараев Т.М., Одноворов А.И., Кириллова Е.С., Бурцева Е.И., Финогенова М.П., Мукашева Е.А., Гребенникова Т.В. // Вопросы вирусологии. - 2020. - Т. 65. - № 1. - С. 16-20. https://doi.org/10.36233/0507-4088-2020-65-1-16-20

8. A. Odnovorov. Prospects for Specific Influenza Treatment / A. Odnovorov, T. Garaev, T. Grebennikova, T. Pleteneva // Systematic Reviews in Pharmacy. - 2020. - V. 11. - № 2. - P. 242-248. http://dx.doi.org/10.5530/srp.2020.2.37

9. Uspenskaya, E.V. Role of stable hydrogen isotope variations in water for drug dissolution managing / E.V. Uspenskaya, T.V. Pleteneva, A.V. Syroeshkin, Ilaha V. Kazimova, T.E. Elizarova, A.I. Odnovorov // Current Issues in Pharmacy and Medical Sciences. - 2020. - V. 33. - № 2. - P. 94-101. https://doi.org/ 10.2478/cipms-2020-0017

10. Odnovorov, A.I. Physicochemical properties and biological activity of the new antiviral substance / A.I. Odnovorov, T.V. Grebennikova, T.V. Pleteneva, T.M. Garaev, E.V. Uspenskaya, N.A. Khodorovich, O.V. Levitskaya, A.M. Koldina // International Journal of Applied Pharmaceutics. - 2020. - V. 12. - № 4. - P. 237242. https://doi.org/10.22159/ijap.2020v12i4.38136

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика вируса гриппа

Грипп относится к группе ОРВИ (острых респираторных вирусных инфекций), которые являются самыми распространенными заболеваниями дыхательных путей. В основном прогноз гриппа благоприятный и инфекция проходит самостоятельно. Однако тяжелые формы гриппа могут приводить к серьезным осложнениям вплоть до летального исхода. Ежегодно, по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), по всему миру регистрируется от 3 до 5 млн. тяжёлых случаев заболевания и приблизительно 290 - 650 тыс. смертельных исходов [1]. При этом наиболее высокие показатели смертности преимущественно наблюдаются у лиц старше 65 лет и детей до 2 лет.

Вирус гриппа принадлежит к семейству Orthomyxoviridae и включает в себя 4 рода: А, В, С и D. Вирус гриппа D был выявлен достаточно недавно в США у крупного рогатого скота [2], В и С инфицируют только человека, вирус гриппа А - зооантропоноз. Наибольшее видовое разнообразие представлено у вируса гриппа А - около 18 серотипов, которые отличаются вариациями основных поверхностных антигенов вируса гриппа - гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (№А), в связи с чем именно вирус гриппа А является основным этиологическим фактором возникновения ежегодных эпидемий и пандемий гриппа [3]. Данные белки играют важную роль в жизненном цикле вируса гриппа. Благодаря НА происходит адгезия вируса с клеткой-хозяином и последующее проникновение внутрь клетки. Нейраминидаза - трансмембранный гликопротеин, благодаря которому происходит отделение вирионов от клетки-хозяина, способствуя последующему развитию инфекции [4]. НА и NA являются основными белками вируса гриппа, на которые направлен противовирусный иммунитет, поэтому в процессе эволюции, мутированию в основном подвергаются эти белки. В настоящее время у вируса гриппа А описаны 18 подтипов НА и 10 подтипов NA [5]. Также немаловажную роль в проникновении вируса внутрь клетки играет белок М2. Он представляет собой тетрамерный протон-селективный канал,

который, перекачивая ионы водорода внутрь вириона, способствует декапсидизации вируса и высвобождению РНК [6]. Перечисленные белки выступают в качестве мишеней лекарственных препаратов, широко используемых в медицине. Длительное применение одних и тех же препаратов приводит к возникновению устойчивости вируса гриппа к этим средствам. Для преодоления этой проблемы при разработке новых фармацевтических субстанций осуществляется поиск новых мишеней, а также химическая модификация ныне существующих молекул.

1.2. Специфическая профилактика гриппа

На сегодняшний момент не существует препаратов, защищающих от вируса гриппа на 100%. Наиболее эффективным методом специфической профилактики является вакцинация. Существует три основных типа противогриппозных вакцин [7]. Живые аттенуированные вакцины содержат ослабленные вирионы и вводятся интраназально. Хотя данный тип вакцинации наиболее приближен к естественной инфекции, эффективность не всегда оправдана, так как при введении через нос количество попавшего в организм вируса непостоянно. Кроме того, живые вакцины, как наиболее реактогенные, часто вызывают аллергические реакции и осложнения, поэтому не рекомендуются к использованию у детей до 2 лет и пожилых пациентов. Инактивированные вакцины содержат убитые цельные либо расщепленные вирионы, и вводятся подкожно, при этом дозировка вируса полностью попадает в организм, но процедура вакцинации малоприятна, в месте введения появляются боль, покраснение, припухлости. Субъединичные вакцины состоят из вирусных белков, а именно НА и NA, проявляющих выраженные антигенные свойства. Данные вакцины являются наиболее безопасными, так как очищены от посторонних белков, которые могут вызывать серьезные побочные эффекты. Однако реактогенность таких вакцин наименьшая, потому что вводятся не цельные вирионы, а только их составляющие.

Чаще всего сезонные эпидемии вызывают штаммы вируса гриппа А Н1Ш и ЮК2, а также в меньшей степени вирусы гриппа В. На их основе

разрабатываются ежегодные противогриппозные вакцины. Однако стремительная изменчивость вируса гриппа А, обусловленная антигенным дрейфом HA и NA, приводит к снижению эффективности вакцинации из-за отсутствия перекрестного иммунитета к разным штаммам вируса [8]. Это означает, что раз в 2-3 года или даже ежегодно должны разрабатываться новые вакцины на основе штаммов вируса, циркулирующих в это время. Исследования в США показали, что эффективность вакцинации в 2017-2018 гг. составляла 36%, из них 67% против вируса гриппа A (H1N1), 42% против вируса гриппа B и 25% против вируса гриппа A (H3N2) [9]. Сейчас интенсивно ведутся исследования по разработке инновационных противогриппозных вакцин. В 2017 г. в США была разработана вакцина на основе гемагглютинина вируса гриппа А H7N9, которая в данный момент проходит клинические испытания [10]. Также клинические испытания проходит разработанная в США в 2018 г. живая аттенуированная вакцина против штамма гриппа H3N2, которая показала свою эффективность и безопасность у взрослых, и на данный момент проходят исследования на детях [11].

1.3. Современная терапия гриппа

Лечение неосложненного заболевания у людей, не имеющих сопутствующих хронических заболеваний, патологий иммунной системы, является поддерживающим и включает в себя симптоматическую терапию (жаропонижающие, отхаркивающие, противокашлевые препараты), достаточное потребление жидкости, отдых, исключение тяжелых физических нагрузок, курения, алкоголя. Осложненный грипп требует незамедлительной специфической противовирусной терапии. При этом лечение наиболее эффективно, если оно начато в течение 48 часов после появления симптомов. В настоящее время противовирусные препараты, одобренные «Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов» (FDA) США для лечения гриппа, включают в себя ингибиторы нейраминидазы (осельтамивир, занамивир, перамивир), ингибитор кэп-зависимой эндонуклеазы (балоксавира марбоксил) и адамантаны (амантадин и римантадин).

1.3.1. Лекарственные препараты прямого действия 1.3.1.1. Ингибиторы нейраминидазы

Нейраминидаза - поверхностный белок вируса гриппа, играющий важную роль в распространении вируса между клетками-мишенями. Он проявляет ферментативную активность, расщепляя а-гликозидную связь между сиаловой (К-ацетилнейраминовой) кислотой на поверхности клетки и сахарным остатком НА вируса [12]. При этом образовавшиеся вирионы способны отщепляться от клеточной мембраны и заражать соседние клетки. Также ферментативная активность NA обеспечивает продвижение вируса через слизистую дыхательных путей, богатую сиаловыми кислотами [13].

В 1990-х годах были синтезированы препараты, ингибирующие функцию NA. Они являются аналогами сиаловой кислоты и конкурентно связываются с активным центром NA, нарушая высвобождение вирусного потомства из инфицированной клетки. В настоящее время ингибиторы NA - единственные препараты, рекомендованные для лечения инфекции вируса гриппа. Основными используемыми во всем мире препаратами ингибиторами NA являются осельтамивир и занамивир (рис.2). Ланинамивир одобрен для применения в Японии, а перамивир - в Китае, Японии, Южной Корее и США [14].

Осельтамивир Занамивир Перамивир Ланинамивир

Рисунок 2. Структурные формулы ингибиторов нейраминидазы.

По данным рандомизированных плацебо-контролируемых двойных слепых исследований эффективности осельтамивира, при применении данного препарата перорально в дозировке 75 мг отмечалось сокращение времени проявления

симптомов гриппа на 21% (с 122,7 ч. до 97,5 ч.) в сравнении с группой плацебо при условии приема препарата сразу после появления первых симптомов [15]. При этом эффективность остальных препаратов в целом была сопоставима с эффективностью осельтамивира. Ввиду низкой биодоступности занамивир и ланинамивир вводятся ингаляционно, а перамивир - внутримышечно, что вызывает некоторые ограничения при применении, в отличие от вводимого перорально осельтамивира.

Согласно информации, приведенной в обзоре относительно профилактики и лечения гриппа ингибиторами NA, данные препараты снижают длительность симптоматики гриппа менее чем на сутки [16]. Однако не было выявлено значительного уменьшения частоты осложнений гриппа, например, пневмонии, а также частоты госпитализаций и смертельных исходов. При использовании осельтамивира были зарегистрированы нежелательные явления, такие как тошнота, рвота, психоневрологические расстройства, нефротоксичность, гепатотоксичность, аритмии [16]. Профилактический эффект ингибиторов NA не оправдан, так как для этого необходим 8-недельный курс препарата, а возникновение побочных эффектов снижало бы качество жизни пациентов.

С 2007 по 2009 гг. были обнаружены вирусы гриппа, устойчивые к ингибиторам NA, при этом резистентность за этот период в некоторых случаях увеличилась с 1% до 90% [17, 18]. Было выявлено, что устойчивые к ингибиторам NA вирусы гриппа имели несколько мутаций в гене нейраминидазы, из которых наиболее распространенной являлась H274Y. Это приводило к конформационным изменениям в NA и нарушению связывания с ней лекарственного препарата. В настоящее время большинство вирусов гриппа все еще чувствительны к ингибиторам NA, однако эволюционирование вируса гриппа может все изменить в противоположную сторону. В связи с этим необходима разработка новых препаратов, которые не только позволят преодолеть резистентность, но и смогут повысить эффективность лечения инфекции гриппа на более поздних сроках заболевания.

1.3.1.2. Блокаторы М2-белка

Некоторые высокопатогенные вирусы человека, такие как вирус гриппа А, вирус иммунодефицита человека 1 типа, вирус гепатита С продуцируют белки, способные образовывать ионопроводящие поры в мембране - виропорины [19]. Они нарушают ионный гомеостаз клетки - мишени в пользу вируса для обеспечения правильной репликации и сборке вирусных частиц. М2-белок вируса гриппа А олигомеризуется и встраивается в вирусную оболочку, образуя протонселективный ионный канал. М2-канал играет важную роль в проникновении вируса гриппа в клетку, а также создает необходимые условия для сборки вирусных частиц [20]. Закисление содержимого эндосомы, образовавшейся после проникновения вируса в клетку, активирует М2-канал, при этом происходит перекачка протонов внутрь вируса. Кислая среда способствует диссоциации РНК и белкового комплекса, а также расщеплению вирусной мембраны и последующему выходу РНК в цитоплазму клетки для последующей репликации.

С 1966 г. единственными противовирусными препаратами, ингибирующими функцию М2-канала вируса гриппа и разрешенными к медицинскому применению, являются производные адамантана - амантадин и римантадин (рис.3).

Амантадин Римантадин

Рисунок 3. Структурные формулы ингибиторов М2 - канала.

В течение многих десятилетий производные адамантана применялись для профилактики и лечения гриппа. По данным исследований, амантадин уменьшал

частоту возникновения гриппа А в среднем на 61%, а длительность симптоматики гриппа сокращалась приблизительно на 1 день [21]. При этом римантадин имел сопоставимую с амантадином эффективность, но ввиду отсутствия достаточного количества испытаний, данные по профилактике не были статистически значимыми. Однако интенсивное применение ингибиторов М2 - канала привело к возникновению к ним устойчивости вирусов гриппа. По данным эпидемиологического надзора США по всему миру в период с 1995 по 2004 гг. произошел рост резистентности вирусов гриппа к амантадину и римантадину с 0,4% до 12,3% соответственно [22]. В США этот рост составлял от 1,9% до 14,5%. Проведение генотипирования, изолированных в 2005 г. вирусов гриппа А, показало, что более 90% всех изолятов, имеющих устойчивость к адамантанам, содержали точечные мутации в гене М2-белка. Это приводило к аминокислотным заменам в самом белке. Самой распространенной заменой являлась Б3Щ (замена серина в 31 положении на аспарагин) [23]. По информации центров по контролю и профилактике заболеваний США в настоящий момент практически 100% вирусов гриппа устойчивы к действию амантадина и римантадина [24], поэтому дальнейшее применение этих препаратов для профилактики и лечения инфекции гриппа является нецелесообразным. Введение дополнительных функциональных групп в молекулы адамантанов вероятно сможет реанимировать противовирусную активность этих препаратов при последующей разработке.

1.3.1.3. Ингибитор гемагглютинина

Немаловажное значение при заражении вирусом гриппа имеет гемагглютинин (НА), который представляет собой гомотримерный гликопротеин, обеспечивающий слияние и проникновение вируса гриппа в клетку-мишень [25]. Рецепторами к НА являются остатки сиаловых кислот на поверхности чувствительных клеток. При их взаимодействии с гемагглютинином происходит рецептор - опосредованный эндоцитоз и вирус в виде эндосомы проникает внутрь клетки. Снижение рН в эндосоме приводит к конформационным изменениям в НА, при этом вирусная и клеточная мембраны сливаются, после чего

генетический материал вируса транспортируется в ядро клетки для репликации. НА является наиболее перспективной мишенью для противовирусных средств, так как такие препараты ингибируют начальную стадию заражения, предотвращая проникновение вируса в клетку.

В настоящее время на фармацевтическом рынке в качестве ингибитора НА представлен препарат умифеновир (арбидол) (рис.4).

Рисунок 4. Структурная формула умифеновира (арбидола).

Уже более 20 лет умифеновир используется в России в качестве средства для лечения и профилактики гриппа. Проведенные исследования механизма действия показали, что умифеновир связывается с гемагглютинином вируса гриппа, стабилизирует его, предотвращая связывание НА с рецепторами клетки-мишени [26,27]. По данным клинических исследований умифеновира эффективность и безопасность, а также профилактическое действие умифеновира были выше, чем таковые у ингибиторов NA и М2-белка [28]. Применение умифеновира при гриппозной инфекции сокращало среднюю продолжительность заболевания приблизительно на 2 дня. При этом, по сравнению с римантадином, отсутствовали осложнения у пациентов с хроническими заболеваниями. При исследованиях умифеновира как профилактического средства против вируса гриппа было выявлено, что число заболевших сокращалось на 86% по сравнению с контрольной группой. Еще одним преимуществом умифеновира перед перечисленными ранее препаратами является высокая чувствительность к нему вирусов гриппа. Анализ изолятов, выделенных в период 2004 - 2005 гг., не выявил ни одного штамма, резистентного к умифеновиру [29].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Одноворов Артём Игоревич, 2021 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Influenza (Seasonal) [Электронный ресурс]. - World Health Organisation (WHO). - 2018. Режим доступа: https: //www. who. int/en/news-room/fact-sheets/detail/influenza-(seasonal)

2. Ferguson, L. Influenza D virus infection in Mississippi beef cattle / L. Ferguson, L. Eckard, W.B. Epperson, L.P. Long, D. Smith, C. Huston, S. Genova, R. Webby, X.F. Wan // Virology. - 2015. - № 486. - P. 28-34. doi: 10.1016/j.virol.2015.08.030.

3. Hutchinson, E.C. Influenza Virus / E.C. Hutchinson // Trends Microbiol. -2018. - V. 26 (9). - P. 809-810. doi: 10.1016/j.tim.2018.05.013.

4. Jagadesh, A. Influenza virus neuraminidase (NA): a target for antivirals and vaccines / A. Jagadesh, A.A. Salam, P.P. Mudgal, G. Arunkumar // Arch Virol. -2016. - V. 161(8). - P. 2087-2094. doi: 10.1007/s00705-016-2907-7.

5. Tong, S. New world bats harbor diverse influenza A viruses / S. Tong, X. Zhu, Y. Li, M. Shi, J. Zhang, M. Bourgeois [et al.] // PLoS Pathog. - 2013. - V. 9(10). - e1003657. doi: 10.1371/journal.ppat.1003657.

6. Pinto, L.H. Influenza virus M2 protein has ion channel activity / L.H. Pinto, L.J. Holsinger, R.A. Lamb // Cell. - 1992. - V. 69(3). - P. 517-528. doi: 10.1016/0092-8674(92)90452-i.

7. Голубовская, О.А. Вакцинопрофилактика гриппа в современных условиях / О.А. Голубовская, А.В. Шкурба // Клиническая инфектология и паразитология. - 2013. - № 3(06). - С. 145-154.

8. Gerdil, C. The annual production cycle for influenza vaccine / C. Gerdil // Vaccine. - 2003. - V. 21(16). - P. 1776-1779. doi: 10.1016/s0264-410x(03)00071-9.

9. Mossad, S.B. Influenza update 2018-2019: 100 years after the great pandemic / S.B. Mossad // Cleve Clin J Med. - 2018. - V. 85(11). - P. 861-869. doi: 10.3949/ccjm.85a.18095.

10. Safety/Efficacy Study of Seqirus A/H7N9 IIV With or Without MF59(R) Adjuvant to Prevent Avian Influenza [Электронный ресурс]. - U.S. National Library

of Medicine. - 2018. Режим доступа:

https://clinicaltrials.gov/ct2/keydates/NCT03682120.

11. Safety and Immunogenicity Study of an Influenza Vaccination Strategy Including a H3N2 M2SR Prime Followed by a Seasonal Quadrivalent Inactivated Vaccine Boost in a Pediatric Population 9-17 Years Old [Электронный ресурс]. - U.S. National Library of Medicine. - 2018. Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03553940.

12. Shtyrya, Y.A. Influenza virus neuraminidase: structure and function / Y.A. Shtyrya, L.V. Mochalova, N.V. Bovin // Acta Naturae. - 2009. - V. 1(2). - P. 26-32.

13. Cohen, M. Influenza A penetrates host mucus by cleaving sialic acids with neuraminidase / M. Cohen, X.Q. Zhang, H.P. Senaati, H.W. Chen, N.M. Varki, R.T. Schooley, P. Gagneux // Virol J. - 2013. - № 10. - P. 321. doi: 10.1186/1743-422X-10-321.

14. Ison, M.G. Antiviral Treatments / M.G. Ison // Clin Chest Med. - 2017. -V. 38(1). - P. 139-153. doi: 10.1016/j.ccm.2016.11.008.

15. Dobson, J. Oseltamivir treatment for influenza in adults: a meta-analysis of randomised controlled trials / J. Dobson, R.J. Whitley, S. Pocock, A.S. Monto // Lancet. - 2015. - V. 385(9979). - P. 1729-1737. doi: 10.1016/S0140-6736(14)62449-1.

16. Jefferson, T. Neuraminidase inhibitors for preventing and treating influenza in healthy adults and children / T. Jefferson, M.A. Jones, P. Doshi, C.B. Del Mar, R. Hama, M.J. Thompson [et al.] // Cochrane Database Syst Rev. - 2014. - № 4. -CD008965. doi: 10.1002/14651858.CD008965.pub4.

17. Dharan, N.J. Infections with oseltamivir-resistant influenza A(H1N1) virus in the United States / N.J. Dharan, L.V. Gubareva, J.J. Meyer, M. Okomo-Adhiambo, R.C. McClinton, S.A. Marshall [et al.] // JAMA. - 2009. - V. 301(10). - P. 1034-1041. doi: 10.1001/jama.2009.294.

18. Hurt, A.C. Oseltamivir resistance and the H274Y neuraminidase mutation in seasonal, pandemic and highly pathogenic influenza viruses / A.C. Hurt, J.K. Holien, M.W. Parker, I.G. Barr // Drugs. - 2009. - V. 69(18). - P. 2523-2531. doi: 10.2165/11531450-000000000-00000.

19. Nieva, J.L. Viroporins: structure and biological functions / J.L. Nieva, V. Madan, L. Carrasco // Nat Rev Microbiol. - 2012. - V. 10(8). - P. 563-574. doi: 10.1038/nrmicro2820.

20. Nieto-Torres, J.L. Relevance of Viroporin Ion Channel Activity on Viral Replication and Pathogenesis / J.L. Nieto-Torres, C. Verdia-Baguena, C. Castano-Rodriguez, V.M. Aguilella, L. Enjuanes // Viruses. - 2015. - V. 7(7). - P. 3552-3573. doi: 10.3390/v7072786.

21. Jefferson, T. Amantadine and rimantadine for influenza A in adults / T. Jefferson, V. Demicheli, C. Di Pietrantonj, D. Rivetti // Cochrane Database Syst Rev. -2006. - № 2. - CD001169. doi: 10.1002/14651858.CD001169. pub3.

22. Bright, R.A. Incidence of adamantane resistance among influenza A (H3N2) viruses isolated worldwide from 1994 to 2005: a cause for concern / R.A. Bright, M.J. Medina, X. Xu, G. Perez-Oronoz, T.R. Wallis, X.M. Davis, L. Povinelli, N.J. Cox, A.I. Klimov // Lancet. - 2005. - V. 366(9492). - P. 1175-1181. doi: 10.1016/S0140-6736(05)67338-2.

23. Bright, R.A. Adamantane resistance among influenza A viruses isolated early during the 2005-2006 influenza season in the United States / R.A. Bright, D.K. Shay, B. Shu, N.J. Cox, A.I. Klimov // JAMA. - 2006. - V. 295(8). - P. 891-894. doi: 10.1001/jama.295.8.joc60020.

24. Fiore, A.E. Antiviral agents for the treatment and chemoprophylaxis of influenza: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) / A.E. Fiore, A. Fry, D. Shay, L. Gubareva, J.S. Bresee, T.M. Uyeki // MMWR Recomm Rep. - 2011. - V. 60(1). - P. 1-24.

25. Jiang, S. Roles of the hemagglutinin of influenza A virus in viral entry and development of antiviral therapeutics and vaccines / S. Jiang, R. Li, L. Du, S. Liu // Protein Cell. - 2010. - V. 1(4). - P. 342-354. doi: 10.1007/s13238-010-0054-6.

26. Leneva, I.A. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol / I.A. Leneva, R.J. Russell, Y.S. Boriskin, A.J. Hay // Antiviral Res. - 2009. - V. 81(2). - P. 132-140. doi: 10.1016/j.antiviral .2008.10.009.

27. Nasser, Z.H. Inhibition of influenza hemagglutinin with the antiviral inhibitor arbidol using a proteomics based approach and mass spectrometry / Z.H. Nasser, K. Swaminathan, P. Müller, K.M. Downard // Antiviral Res. - 2013. - V. 100(2). - P. 399-406. doi: 10.1016/j.antiviral.2013.08.021.

28. Ленева, И.А. Арбидол - эффективный препарат для лечения и профилактики гриппа и ОРВИ: обзор результатов клинических исследований / И.А. Ленева, Т.А. Гуськова // Русский медицинский журнал. - 2008. - Т. 29(16). -C. 3-7.

29. Бурцева, Е.И. Чувствительность к ремантадину и Арбидолу вирусов гриппа, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в России в сезоне 2004-2005 г / Е.И. Бурцева, Е.С. Шевченко, И.А. Ленева, Л.Н. Меркулова, Т.А. Оскерко, О.В. Шляпникова [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2007. - Т. 52(2). - С. 24-29.

30. WHO guidelines for pharmacological management of pandemic influenza A(H1N1) 2009 and other influenza viruses. Part II: Review of evidence [Электронный ресурс]. - World Health Organisation (WHO). - 2010. Режим доступа: https://www.who.int/csr/resources/publications/swineflu/h1n1 guidelines pharmaceutic al mngt part2.pdf?ua=1

31. Liu, Q. Antiviral and anti-inflammatory activity of arbidol hydrochloride in influenza A (H1N1) virus infection / Q. Liu, H.R. Xiong, L. Lu, Y.Y. Liu, F. Luo, W. Hou, Z.Q. Yang // Acta Pharmacol Sin. - 2013. - V. 34(8). - P. 1075-1083. doi: 10.1038/aps.2013.54.

32. Wang, Y. Inhibition of the infectivity and inflammatory response of influenza virus by Arbidol hydrochloride in vitro and in vivo (mice and ferret) / Y. Wang, Y. Ding, C. Yang, R. Li, Q. Du, Y. Hao // Biomed Pharmacother. - 2017. - № 91. - P. 393-401. doi: 10.1016/j.biopha.2017.04.091.

33. A Study of Arbidol (Umifenovir) for Treatment and Prophylaxis of Influenza and Common Cold (ARBITR) [Электронный ресурс]. - U.S. National Library of Medicine. - 2012. Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01651663

34. Киселев, О.И. Клиническая эффективность препарата Арбидол (умифеновир) в терапии гриппа у взрослых: промежуточные результаты многоцентрового двойного слепого рандомизированного плацебоконтролируемого исследования АРБИТР / О.И. Киселев, В.В. Малеев, Э.Г. Деева, И.А. Ленева, Е.П. Селькова, Е.А. Осипова, А.А. Обухов, С.А. Надоров, Е.В. Куликова // Терапевтический архив. - 2015. - Т. 87(1). - С. 88-96. doi: 10.17116/terarkh201587188-96.

35. Kadam, R.U. Structural basis of influenza virus fusion inhibition by the antiviral drug Arbidol / R.U. Kadam, I.A. Wilson // Proc Natl Acad Sci USA. - 2017. -V. 114(2). - P. 206-214. doi: 10.1073/pnas.1617020114.

36. Hayden, F.G. Baloxavir Marboxil for Uncomplicated Influenza in Adults and Adolescents / F.G. Hayden, N. Sugaya, N. Hirotsu, N. Lee, M.D. de Jong, A.C. Hurt, [et al.] // N Engl J Med. - 2018. - V. 379(10). - P. 913-923. doi: 10.1056/NEJMoa1716197.

37. Takashita, E. Susceptibility of Influenza Viruses to the Novel Cap-Dependent Endonuclease Inhibitor Baloxavir Marboxil / E. Takashita, H. Morita, R. Ogawa, K. Nakamura, S. Fujisaki, M. Shirakura, T. Kuwahara, N. Kishida, S. Watanabe, T. Odagiri // Front Microbiol. - 2018. - № 9. - P. 3026. doi: 10.3389/fmicb.2018.03026.

38. De Andrea, M. The interferon system: an overview / M. De Andrea, R. Ravera, D. Gioia, M. Gariglio, S. Landolfo // Eur J Paediatr Neurol. - 2002. - № 6 (Suppl A). - P. 41-46. doi: 10.1053/ejpn.2002.0573.

39. Randall, R.E. Interferons and Viruses: An Interplay Between Induction, Signalling, Antiviral Responses and Virus Countermeasures / R.E. Randall, S. Goodbourn // J Gen Virol. - 2008. - V. 89(Pt 1). - P. 1-47. doi: 10.1099/vir.0.83391-0.

40. Schoenborn, J.R. Regulation of Interferon-Gamma During Innate and Adaptive Immune Responses / J.R. Schoenborn, C.B. Wilson // Adv Immunol. - 2007. - № 96. - P. 41-101. doi: 10.1016/S0065-2776(07)96002-2.

41. Mazzeo, L. Severe Urticaria Due to Recombinant Interferon beta-1a / L. Mazzeo, L. Ricciardi, M.C. Fazio, O. Fogliani, R. Fedele, E. Ferlazzo, S. Isola // Br J Dermatol. - 2003. - V. 148(1). - P. 172. doi: 10.1046/j.1365-2133.2003.50802.x.

42. Ershov, F.I. Cycloferon - a New Domestic Preparation for the Prophylaxis of Influenza and Other Acute Respiratory Viral Infections / F.I. Ershov, A.L. Kovalenko, T.I. Garashchenko, E.P. Sel'kova, V.V. Botvin'eva, A.N. Zhekalov, S.V. Petlenko, Iu.K. Bol'bot, M.G. Romantsov // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. -2004. - № 6. - P. 47-51.

43. Sel'kova, E.P. Effect of Amyxin - A Domestic Analog of Tilorone - On Characteristics of Interferon and Immune Status of Man / E.P. Sel'kova, T.A. Semenenko, N.N. Nosik, T.I. Iudina, M.P. Amarian, L.A. Lavrukhina, T.N. Pantiukhova, G.Iu. Tarasova // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. - 2001. - № 4. -P. 31-35.

44. Selkova, E.P. Evaluation of amixine reactivity and efficacy for prophylaxis of acute respiratory tract infections / E.P. Selkova, M.C. Tur'ianov, T.N. Pantiukhova, G.I. Nikitina, T.A. Semenenko // Antibiot Khimioter. - 2001. - V. 46(10). - P. 14-18.

45. Колобухина, Л.В. Оценка эффективности виферона и арбидола при гриппе у взрослых / Л.В. Колобухина, В.В. Малиновская, Р.З. Гатич, Л.Н. Меркулова, Е.И. Бурцева, Е.И. Исаева // Вопросы вирусологии. - 2008. - Т. 53(1). - С. 31-33.

46. Глушков, Р.Г. Механизмы иммуномодулирующего действия арбидола / Р.Г. Глушков, Т.А. Гуськова, Л.Ю. Крылова, И.С. Николаева // Вестник РАМН. -1999. - № 3. - С. 36-40.

47. Wang, M.Z. Efficacy and safety of arbidol in treatment of naturally acquired influenza / M.Z. Wang, B.Q. Cai, L.Y. Li, J.T. Lin, N. Su, H.X. Yu, [et al.] // Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao. - 2004. - № 26. - P. 289-293.

48. Arrigoni, O. Ascorbic acid: much more than just an antioxidant / O. Arrigoni, M.C. De Tullio // Biochim Biophys Acta. - 2002. - V. 1569(1-3). - P. 1-9. doi: 10.1016 / s0304-4165 (01) 00235-5.

49. Ryan, M.J. Vitamin E and C supplementation reduces oxidative stress, improves antioxidant enzymes and positive muscle work in chronically loaded muscles of aged rats / M.J. Ryan, H.J. Dudash, M. Docherty, K.B. Geronilla, B.A. Baker, G.G. Haff, R.G. Cutlip, S.E. Alway // Exp. Gerontol. - 2010. - № 45. - P. 882-895. doi: 10.1016/j.exger.2010.08.002.

50. Monacelli, F. Vitamin C, Aging and Alzheimer's Disease / F. Monacelli, E. Acquarone, C. Giannotti, R. Borghi, A. Nencioni // Nutrients. - 2017. - № 9. - P. 670. doi: 10.3390/nu9070670.

51. Fang, Y.Z. Free radicals, antioxidants, and nutrition / Y.Z. Fang, S. Yang, G. Wu // Nutrition. - 2002. - № 18. - P. 872-879. doi: 10.1016/S0899-9007(02)00916-4.

52. Ames, B.N. Oxidants, antioxidants, and the degenerative diseases of aging / B.N. Ames, M.K. Shigenaga, T.M. Hagen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1993. - № 90. - P. 7915-7922. doi: 10.1073/pnas.90.17.7915.

53. Pauling, L. Evolution and the need for ascorbic acid / L. Pauling // Proc Natl Acad Sci USA. - 1970. - V. 67(4). - P. 1643-1648. doi: 10.1073/pnas.67.4.1643.

54. Hemilä, H. Vitamin C for preventing and treating the common cold / H. Hemilä, E. Chalker // Cochrane Database Syst Rev. - 2013. - № 1. - CD000980. doi: 10.1002/14651858.CD000980.pub4.

55. Sasazuki, S. Effect of vitamin C on common cold: randomized controlled trial / S. Sasazuki, S. Sasaki, Y. Tsubono, S. Okubo, M. Hayashi, S. Tsugane // Eur J Clin Nutr. - 2006. - V. 60(1). - P. 9-17. doi: 10.1038/sj.ejcn.1602261.

56. Audera, C. Mega-dose vitamin C in treatment of the common cold: a randomised controlled trial / C. Audera, R.V. Patulny, B.H. Sander, R.M. Douglas // Med J Aust. - 2001. - V. 175(7). - P. 359-362.

57. Huijskens, M.J. Technical advance: ascorbic acid induces development of double-positive T cells from human hematopoietic stem cells in the absence of stromal cells / M.J. Huijskens, M. Walczak, N. Koller, J.J. Briede, B.L. Senden-Gijsbers, M.C. Schnijderberg, G.M. Bos, W.T. Germeraad // J leukoc biol. - 2014. - № 96. - P. 11651175. doi: 10.1189/jlb.1TA0214-121RR.

58. Huijskens, M.J. Ascorbic acid promotes proliferation of natural killer cell populations in culture systems applicable for natural killer cell therapy / M.J. Huijskens, M. Walczak, S. Sarkar, F. Atrafi, B.L. Senden-Gijsbers, M.G. Tilanus, G.M. Bos, L. Wieten, W.T. Germeraad // Cytotherapy. - 2015. - № 17. - P. 613-620. doi: 10.1016/j.jcyt.2015.01.004.

59. Van Gorkom, G.N.Y. Influence of Vitamin C on Lymphocytes: An Overview / G.N.Y. Van Gorkom, R.G.J. Klein Wolterink, C. Van Elssen, L. Wieten, W.T.V. Germeraad, G.M.J. Bos // Antioxidants. - 2018. - № 7. - P. 41. doi: 10.3390/antiox7030041.

60. Bonuccelli, G. NADH autofluorescence, a new metabolic biomarker for cancer stem cells: Identification of Vitamin C and CAPE as natural products targeting "sternness" / G. Bonuccelli, E.M. De Francesco, R. de Boer, H.B. Tanowitz, M.P. Lisanti // Oncotarget. - 2017. - V. 8(13). - P. 20667-20678. doi: 10.18632/oncotarget.15400.

61. Levine, M. Vitamin C: a concentration-function approach yields pharmacology and therapeutic discoveries / M. Levine, S.J. Padayatty, M.G. Espey // Adv Nutr. - 2011. - V. 2(2). - P. 78-88. doi: 10.3945/an.110.000109.

62. Nauman, G. Systematic Review of Intravenous Ascorbate in Cancer Clinical Trials / G. Nauman, J.C. Gray, R. Parkinson, M. Levine, C.J. Paller // Antioxidants (Basel). - 2018. - V. 7(7). - P. 89. doi: 10.3390/antiox7070089.

63. Zarubaev, V.V. Protective activity of ascorbic acid at influenza infection / V.V. Zarubaev, A.V. Slita, I.N. Lavrentyeva, V.S. Smirnov // Russian Journal of Infection and Immunity. - 2017. - V. 7(4). - P. 319-326. doi: 10.15789/2220-76192017-4-319-326.

64. Hayashi, T. Preventive effect of ascorbic acid against biological function of human immunodeficiency virus trans-activator of transcription / T. Hayashi // J Intercult Ethnopharmacol. - 2016. - V. 5(2). - P. 205-209. doi: 10.5455/jice.20160316010322.

65. Mlkirova, N. Effect of high dose vitamin C on Epstein-Barr viral infection / N. Mlkirova, R. Hunninghake // Med Sci Monit. - 2014. - V. 20. - P. 725-732. doi: 10.12659/msm. 890423.

66. Li, Z. Discovery of acylguanidine oseltamivir carboxylate derivatives as potent neuraminidase inhibitors / Z. Li, Y. Meng, S. Xu, W. Shen, Z. Meng, Z. Wang, [et al.] // Bioorg Med Chem. - 2017. - V. 25(10). - P. 2772-2781. doi: 10.1016 / j.bmc.2017.03.052.

67. Шибнев, В.А. Новые производные адамантана, способные преодолеть резистентность вирусов гриппа A(H1N1)pdm2009 и A(H3N2) к "ремантадину" / В.А. Шибнев, Т.М. Гараев, М.П. Финогенова, Е.С. Шевченко, Е.И. Бурцева // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2012. - Т. 153(2). - С. 200-202.

68. Щелканов, М.Ю. Противовирусная активность производных адамантана в отношении вируса гриппа A(H1N1)pdm09 на модели in vivo / М.Ю. Щелканов, В.А. Шибнев, М.П. Финогенова, И.Т. Федякина, Т.М. Гараев, Н.В. Маркова, И.М. Кириллов // Вопросы вирусологии. - 2014. - Т. 59(2). - С. 37-40.

69. Bright, R.A. Adamantane resistance among influenza A viruses isolated early during the 2005-2006 influenza season in the United States / R.A. Bright, D.K. Shay, B. Shu, N.J. Cox, A.I. Klimov // JAMA. - 2006. - V. 295(8). - P. 891-894. doi: 10.1001/jama.295.8.joc60020.

70. Dong, G. Adamantane-resistant influenza a viruses in the world (19022013): frequency and distribution of M2 gene mutations / G. Dong, C. Peng, J. Luo, C. Wang, L. Han, B. Wu, [et al.] // PLoS One. - 2015. - V. 10(3). - e0119115. doi: 10.1371 / journal.pone.0119115.

71. Hu, Y. An M2-V27A channel blocker demonstrates potent in vitro and in vivo antiviral activities against amantadine-sensitive and -resistant influenza A viruses / Y. Hu, R. Musharrafieh, C. Ma, J. Zhang, D.F. Smee, W.F. DeGrado, [et al.] // Antiviral Res. - 2017. - № 140. - P. 45-54. doi: 10.1016 / j.antiviral.2017.01.01.006.

72. Throsby, M. Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells / M. Throsby, E. van den Brink, M. Jongeneelen, L.L. Poon, P. Alard, L. Cornelissen, [et al.] // PLoS One. - 2008. - V. 3(12). - e3942. doi: 10.1371/journal.pone.0003942.

73. Ekiert, D.C. A highly conserved neutralizing epitope on group 2 influenza A viruses / D.C. Ekiert, R.H. Friesen, G. Bhabha, T. Kwaks, M. Jongeneelen, W. Yu, [et al.] // Science. - 2011. - V. 333(6044). - P. 843-850. doi: 10.1126/science.1204839.

74. Reich, S. Structural Insight into Cap-Snatching and RNA Synthesis by Influenza Polymerase / S. Reich, D. Guilligay, A. Pflug, H. Malet, I. Berger, T. Crepin, [et al.] // Nature. - 2014. - V. 516(7531). - P. 361-366. doi: 10.1038/nature14009.

75. Clark, M.P. Discovery of a Novel, First-in-Class, Orally Bioavailable Azaindole Inhibitor (VX-787) of Influenza PB2 / M.P. Clark, M.W. Ledeboer, I. Davies, R.A. Byrn, S.M. Jones, E. Perola, [et al.] // J Med Chem. - 2014. - V. 57(15). -P. 6668-6678. doi: 10.1021/jm5007275.

76. Trevejo, J.M. Pimodivir Treatment in Adult Volunteers Experimentally Inoculated with Live Influenza Virus: A Phase IIa, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Study / J.M. Trevejo, M. Asmal, J. Vingerhoets, R. Polo, S. Robertson, Y. Jiang, T.L. Kieffer, L. Leopold // Antivir Ther. - 2018. - V. 23(4). - P. 335-344. doi: 10.3851/IMP3212.

77. Morris, G.M. Molecular docking / G.M. Morris, M. Lim-Wilby // Methods Mol Biol. - 2008. - V. 443. - P. 365-382. doi: 10.1007/978-1-59745-177-2_19.

78. Kontoyianni, M. Docking and Virtual Screening in Drug Discovery / M. Kontoyianni // Methods Mol Biol. - 2017. - V. 1647. - P. 255-266. doi: 10.1007/978-1-4939-7201-2_18.

79. Forli, S. Computational protein - ligand docking and virtual drug screening with the AutoDocksuite / S. Forli, R. Huey, M.E. Pique, M.F. Sanner, D.S. Goodsell, A.J. Olson // Nat Protoc. - 2016. - V. 11(5). - P. 905-919. doi: 10.1038/nprot.2016.051.

80. Totrov, M. Flexible ligand docking to multiple receptor conformations: a practical alternative / M. Totrov, R. Abagyan // Curr Opin Struct Biol. - 2008. - V. 18(2). - P. 178-184. doi: 10.1016 / j.sbi.2008.01.004.

81. Kontoyianni, M. Evaluation of docking performance: comparative data on docking algorithms / M. Kontoyianni, L.M. McClellan, G.S. Sokol // J Med Chem. -2004. - V. 47(3). - P. 558-565. doi: 10.1021/jm0302997.

82. Verdonk, M.L. Improved protein - ligand docking using GOLD / M.L. Verdonk, J.C. Cole, M.J. Hartshorn, C.W. Murray, R.D. Taylor // Proteins. - 2003. - V. 52(4). - P. 609-623. doi: 10.1002/prot.10465.

83. Kramer, B. Evaluation of the FLEXX incremental construction algorithm for protein-ligand docking / B. Kramer, M. Rarey, T. Lengauer // Proteins. - 1999. - V. 37(2). - P. 228-241. doi: 10.1002/(sici)1097-0134(19991101)37:2<228::aid-prot8>3.0.co;2-8.

84. Michino, M. Community-wide assessment of GPCR structure modelling andligand docking: GPCR Dock 2008 / M. Michino, E. Abola, G.P.C.R. Dock, C.L. Brooks, J.S. Dixon, J. Moult, R.C. Stevens // Nat Rev Drug Discov. - 2009. - V. 8(6). -P. 455-463. doi: 10.1038/nrd2877.

85. Goodsell, D.S. Automated docking of flexible ligands: applications of AutoDock / D.S. Goodsell, G.M. Morris, A.J. Olson // J Mol Recognit. - 1996. - V. 9(1). - P. 1-5. doi: 10.1002/(sici)1099-1352(199601)9:1<1::aid-jmr241>3.0.co;2-6.

86. Gupta, M. Docking techniques in pharmacology: How much promising? M. Gupta, R. Sharma, A. Kumar // Comput Biol Chem. - 2018. - V. 76. - P. 210-217. doi: 10.1016/j.compbiolchem.2018.06.005.

87. Pinzi, L. Molecular Docking: Shifting Paradigms in Drug Discovery / L. Pinzi, G. Rastelli // Int J Mol Sci. - 2019. - V. 20(18). - P. 4331. doi: 10.3390/ijms20184331.

88. Hansch, C. Correlation of biological activity of phenoxyacetic acids with hammett substituent constants and partition coefficients / C. Hansch, P.P. Maloney, T. Fujita, R.M. Muir // Nature. - 1962. - № 194. - P. 178-180. doi: 10.1038/194178b0.

89. Hansch, C. p-a-n analysis. A method for the correlation of biological activity and chemical structure / C. Hansch, T. Fujita // J Am Chem Soc. - 1964. - № 86. - P. 1616-1626. doi: 10.1021/ja01062a035.

90. Hansch, C. Quantitative approach to biochemical structure-activity relationships / C. Hansch // Acc Chem Res. - 1969. - № 2. - P. 232-239. doi: 10.1021/ar50020a002.

91. Danishuddin. Descriptors and their selection methods in QSAR analysis: paradigm for drug design / Danishuddin, A.U. Khan // Drug Discov Today. - 2016. - V. 21(8). - P. 1291-1302. doi: 10.1016/j.drudis.2016.06.013.

92. Polanski, J. Receptor dependent multidimensional QSAR for modeling drug-receptor interactions / J. Polanski // Curr Med Chem. - 2009. - V. 16(25). - P. 3243-3257. doi: 10.2174/092986709788803286.

93. Sprous, D.G. QSAR in the Pharmaceutical Research Setting: QSAR Models for Broad, Large Problems / D.G. Sprous, R.K. Palmer, J.T. Swanson, M. Lawless // Current Topics in Medicinal Chemistry. - 2010. - V. 10(6). - P. 619-637. doi: 10.2174/156802610791111506.

94. Zanni, R. Latest advances in molecular topology applications for drug discovery / R. Zanni, M. Galvez-Llompart, R. Garda-Domenech, J. Galvez // Expert Opin Drug Discov. - 2015. - V. 10(9). - P. 945-957. doi: 10.1517/17460441.2015.1062751.

95. Harary, F. Graph Theory / F. Harary // Addison-Wesley. - 1969. - P. 8-23.

96. Wiener, H. Structural determination of paraffin boiling points / H. Wiener // J Am Chem Soc. - 1947. - V. 69(1). - P. 17-20. doi: 10.1021/ja01193a005.

97. Randic, M. On characterization of molecular branching / M. Randic // J Am Chem Soc. - 1975. - V. 97(23). - P. 6609-6614. doi: 10.1021/ja00856a001.

98. Balaban, A.T. Highly discriminating distance-based topological index / A.T. Balaban // Chem Phys Lett. - 1982. - V. 89. - P. 399-404. doi: 10.1016/0009-2614(82)80009-2.

99. Hosoya, H. Topological index. A newly proposed quantity characterizing the topological nature of structural isomers of saturated hydrocarbons / H. Hosoya // Bulletin of the Chemical Society of Japan. - 1971. - V. 44(9). - P. 2332-2339. doi: 10.1246/bcsj.44.2332.

100. Dudek, A.Z. Computational methods in developing quantitative structure-activity relationships (QSAR): a review / A.Z. Dudek, T. Arodz, J. Galvez // Comb Chem High Throughput Screen. - 2006. - V. 9(3). - P. 213-228. doi: 10.2174/138620706776055539.

101. Stanton, D.T. QSAR and QSPR model interpretation using partial least squares (PLS) analysis / D.T. Stanton // Curr Comput Aided Drug Des. - 2012. - V. 8(2). - P. 107-127. doi: 10.2174/157340912800492357.

102. Wesolowski, M. Artificial neural networks: theoretical background and pharmaceutical applications: a review / M. Wesolowski, B. Suchacz // J AOAC Int. -2012. - V. 95(3). - P. 652-668. doi: 10.5740/jaoacint.sge_wesolowski_ann.

103. Marill, K.A. Advanced statistics: linear regression, part II: multiple linear regression / K.A. Marill // Acad Emerg Med. - 2004. - V. 11(1). - P. 94-102. doi: 10.1197/j.aem.2003.09.006.

104. Giuliani, A. The application of principal component analysis to drug discovery and biomedical data / A. Giuliani // Drug Discov Today. - 2017. - V. 22(7). -P. 1069-1076. doi: 10.1016/j.drudis.2017.01.005.

105. Percival, A. Impact of chemical structure on quinolone potency, spectrum and side effects / A. Percival // J Antimicrob Chemother. - 1991. - 28 Suppl C. - P. 1-8. doi: 10.1093/jac/28.suppl_c.1.

106. Kunal, R. A Primer on QSAR/QSPR Modeling: Fundamental Concepts / R. Kunal, K. Supratik, N.D. Rudra // Springer. - 2015. - P. 23.

107. Львов, Д.К. Руководство по вирусологии: Вирусы и вирусные инфекции человека и животных / Д.К. Львов. - М.: Медицинское информационное агентство, 2013. - 468 с.

108. Martinez-Sobrido, L. Generation of recombinant influenza virus from plasmid DNA / L. Martinez-Sobrido, A. Garcia-Sastre // J Vis Exp. - 2010. - V. 42. -P. 2057 doi: 10.3791/2057.

109. Stobart, C.C. RNA virus reverse genetics and vaccine design / C.C. Stobart, M.L. Moore // Viruses. - 2014. - V. 6(7). - P. 2531-2550. doi: 10.3390/v6072531.

110. Ozawa, M. Taming influenza viruses / M. Ozawa, Y. Kawaoka // Virus Res. - 2011. - V. 162. - P. 8-11. doi: 10.1016/j.virusres.2011.09.035.

111. Isel, C. Experimental approaches to study genome packaging of influenza A viruses / C. Isel, S. Munier, N. Naffakh // Viruses. - 2016. - V. 8(8). - P. 218 doi: 10.3390/v8080218.

112. Nogales, A. Reverse genetics approaches for the development of influenza vaccines / A. Nogales, L. Martinez-Sobrido // Int J Mol Sci. - 2016. - V. 18(1). - P. 20. doi: 10.3390/ijms18010020.

113. Шибнев, В.А. Новые производные адамантана и пути преодоления лекарственной устойчивости вирусов гриппа А к ремантадину и амантадину / В.А. Шибнев, Т.М. Гараев, М.П. Финогенова, Е.С. Шевченко, Е.И. Бурцева // Вопросы вирусологии. - 2011. - Т. 56(2). - С. 36-39.

114. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание [Электронный ресурс]. - М.: Министерство здравоохранения Российской Федерации. - 2018. - Режим доступа: http: //www.femb .ru/femb/pharmacopea.php

115. Попов П.И. ChemicPen. Свидетельство об официальной регистрации программ для ЭВМ № 2005612073. РОСПАТЕНТ РФ, 2005.

116. Попов П.И. ChemicDescript. Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ № 2003612305. РОСПАТЕНТ РФ, 2003.

117. Nalecz-Jawecki, G. Spirotox-Spirostomum ambiguum acute toxicity test-10 years of experience / G. Nalecz-Jawecki // Environ Toxicol. - 2004. - V. 19(4). - P. 359-364. doi: 10.1002 / tox.20023.

118. Тимофеева, Т.А. Изменения фенотипических свойств высокопатогенного вируса гриппа А подтипа H5N1, индуцированные точечными мутациями N186I и N186T в молекуле гемагглютинина / Т.А. Тимофеева, Г.К. Садыкова, И.А. Руднева, Е.Ю. Боравлева, А.С. Гамбарян, Н.Ф. Ломакина, Л.В. Мочалова, Н.В. Бовин, Е.В. Усачев, А.Г. Прилипов // Молекулярная биология. -2016. - Т. 50(5). - С. 855-862. doi: 10.7868/S0026898416050177.

119. Hoffmann, E. A DNA transfection system for generation of influenza A virus from eight plasmids / E. Hoffmann, G. Neumann, Y. Kawaoka, G. Hobom, R.G. Webster // Proc Natl Acad Sci USA. - 2000. - V. 97(11). - P. 6108-6113. doi: 10.1073/pnas.100133697.

120. Бурцева, Е.И. Чувствительность к ремантадину и арбидолу вирусов гриппа, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в России в сезоне 2004-2005 гг / Е.И. Бурцева, Е.С. Шевченко, И.А. Ленева, Л.Н. Меркулова, Т.А.

Оскерко, О.В. Шляпникова, А.Л. Заплатников, А.М. Шустер, А.Н. Слепушкин // Вопросы вирусологии. - 2007. - Т. 52(2). - С. 24-29.

121. Saikia, S. Molecular docking: challenges, advances and its use in drug discovery perspective / S. Saikia, M. Bordoloi // Curr Drug Targets. - 2019. - V. 20(5).

- P. 501-521. doi: 10.2174/1389450119666181022153016.

122. Gini, G. QSAR: What Else? / G. Gini // Methods Mol Biol. - 2018. - № 1800. - P. 79-105. doi: 10.1007/978-1-4939-7899-1_3.

123. Gini, G. QSAR Methods / G. Gini // Methods Mol Biol. - 2016. - № 1425.

- P. 1-20. doi: 10.1007/978-1-4939-3609-0_1.

124. Хухо, Ф. Нейрохимия: Основы и принципы / Ф. Хухо. Пер. с англ. — М.: Мир, 1990. - 384 с.