Количественное определение антител к эпсилонтоксину Cl. perfringens Д методом иммуноферментного анализа при промышленном производстве поливалентной вакцины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Михеев, Виктор Евгеньевич

• Михеев, Виктор Евгеньевич
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Михеев, Виктор Евгеньевич

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Анаэробная энтеротоксемия

1.1.1. Возбудитель болезни

1.1.2. Эпизоотологические данные

1.1.3. Патогенез

1.1.4. Клинические признаки

1.1. 5. Патологоанатомические изменения

1.1.6. Диагностика

1.1.7. Иммунитет

1.2. Обзор методов количественной диагностики антител к токсинам бактерий

1.2.1. Реакция нейтрализации токсинов in vivo

1.2.2. Реакция нейтрализации токсинов in vitro

1.2.3. Иммуноферментный анализ

1.3. Система обеспечения качества биопрепаратов на предприятиях

биологической промышленности Россйской Федерации

Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1. Материалы

2.1.1.1. Штамм микроорганизма и вакцины

2.1.1.2. Оборудование и инструменты

2.1.1.3. Растворы

2.1.1.4. Питательные среды

2.1.1.5. Экспериментальные животные

2.1.1.6. Антитела диагностические

2.1.1.7. Сыворотки диагностические

2.1.2. Методы исследований

Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка тест-системы ИФА для количественного определения антител

к эпсилон токсину клостридий

3.1.1. Отработка условий получения очищенного и концентрированного эпсилон токсина

3.1.2. Получение и аттестация стандартного образца сыворотки антитоксической, калиброванной по содержанию специфического иммуноглобулина класса G в международных единицах активности к эпсилон токсину Clostridium perfringens Д

3.1.3. Характеристика разработанной иммуноферментной тест-системы

3.1.4. Оценка качества ИФА тест-системы по основным валидационным характеристикам

3.1.5. Интервал иммуноферментной тест-системы для определения количества антитоксических антител

3.2. Сравнение количественного содержания антитоксических антител, выявляемых с помощью разработанной тест-системой ИФА и классическим методом in vivo

3.3. Тестирование метода ИФА при отработке технологических режимов концентрирования культуральной жидкости клостридий

3.4. Определение количества антитоксина при контроле опытно-

промышленных образцов вакцины против клостридиозов жвачных

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Количественное определение антител к эпсилонтоксину Cl. perfringens Д методом иммуноферментного анализа при промышленном производстве поливалентной вакцины»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Широкое применение ветеринарных иммунобиологических препаратов, направленных на профилактику, лечение и диагностику инфекционных заболеваний, определяет повышенные требования к их эффективности и безопасности.

В современных условиях рынок иммунобиологических препаратов является международным, требования к их качеству регламентируются соответствующими международными правилами как на этапах лабораторных исследований - правила GLP (Good Laboratory Practice) и клинических испытаний - правила GCP (Good Clinical Practice), так и на этапе производства - правила GMP (Good Manufacturing Practice).

При организации серийного производства ветеринарных биопрепаратов согласно требованиям ГОСТ ИСО 9001-2011 особое внимание следует уделять разработке системного подхода «Системы обеспечения качества» и «Системы посевных материалов» (Seed Lot System) и методов обеспечения их качества. При реализации этих задач предусматривалось решение целого ряда научных и технологических проблем, в том числе повышение качества, эффективности и конкурентноспособности профилактических препаратов на отечественном и международном рынках. Внедрение в практику биопредприятий инновационных методов контроля при серийном производстве моно- и поливалентных иммунобиологических ветеринарных биопрепаратов является приоритетной задачей.

Контроль качества ветеринарных иммунобиологических биопрепаратов не может проводиться без стандартных образцов, которые используются и как мера сравнения, и для лабораторного контроля качества работы предприятия.

В связи с этим разработка методических основ контроля качества ветеринарных иммунобиологических биопрепаратов с использованием

современных иммунохимических, молекулярно-биологических методов является актуальным.

Поэтому исследования, направленные на стандартизацию технологии серийного производства и обеспечения качества биопрепаратов против клостридиоза животных являются весьма актуальным и востребованным практикой направлением исследований.

Степень разработанности проблемы. В РФ накоплен большой опыт по конструированию иммуноферментных тест-систем для определения бактерийных анатоксинов и специфических антител к ним. Разработаны тест-системы для индикации стафилококкового, дифтерийного и ботулинических токсинов на основе F(аб)2-фрагментов аффинноочищенных антител, проведена стандартизация и разработка принципов валидации иммунохимических методов контроля качества бактерийных и вирусных вакцин, определён порядок аттестации отраслевых стандартных образцов в условиях ограниченного числа квалифицированных лабораторий (Грязнова Д.В.,1999; Николаева А.М.,2003, Вязникова Т.В.,2007; Устинникова О.Б., 2007; Гальвидис И.А., 2008; Фирсова Т.Н.,2012; Храмцов П.В.,2016). Изучена иммуногенная активность столбнячного компонента в составе ассоциированной вакцины против клостридиозов крупного рогатого скота в реакции нейтрализации Cl. tetani на белых мышах, (Скляров О.Д., Капустин А.В., Лаишевцев А.И., Гулюкин А.М., Шемельков Е.В., 2016). Апробирована система контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов химическими и иммунохимическими методами (Волкова Р.А.,2009; Давлетбаева Л.Р., 2007; Калашникова Е.А.,201 4). Специфическую активность дифтерийного и столбнячного компонентов возможно оценивать по титру соответствующих антител в сыворотке крови иммунизированных животных в тестах с параллельным использованием стандартных образцов, калиброванных в МЕ (Фармакопейная статья «АКДС-вакцина»).

В мировой практике разработка, промышленное освоение и методы контроля современных ветеринарных иммунобиологических биопрепаратов носят наукоёмкий характер. Расширение номенклатуры, понимание механизмов иммунного ответа на молекулярном уровне, использование достижений генной инженерии требует разработки новых методов контроля или расширения области применения существующих, повышает требования к уровню их разработки, прежде всего, с учётом современных требований валидации. Данный подход широко используется в работе национальных органов контроля в странах с развитой экономикой - Великобритании, Германии, Голландии, США.

Контроль осуществляется в рамках нормативно-правовой базы, а также учитывая руководящие принципы для испытаний качества, которые закладываются межнациональными регулирующими органами FDA и USDA: например, для США и Европы Фармакопея для государств-членов Совета Европы, что направлено на обеспечение безопасности, эффективности или отсутствие токсичности биопрепаратов для животных. Минимальный уровень антител к эпсилон токсину в сыворотке крови вакцинированных кроликов, требуемого Европейской Фармакопеей 1998 г. (the European Pharmacopeia, 1998 ) 5 МЕ / мл и 2 МЕ / мл the Code of Federal Regulations (CFR, USA) - США Свод федеральных нормативных актов (параграф 113.111). Требования, предъявляемые к качеству, безопасности и эффективности этих вакцин изложены в Европейской фармакопее (Ph Eur.): Монография 0363:"Вакцина Clostridium рейт^еш для ветеринарного применения". Эффективность таких вакцин измеряется с точки зрения их способности вызывать специфические антитоксины против эпсилон токсина в сыворотке крови вакцинированных кроликов.

Для того, чтобы оценить уровень индукции антитоксических антител у животных после применения соответствующих вакцин, титры антител против Cl. perfringens эпсилон токсина измеряют в кроличьей сыворотке

крови, используя тест нейтрализации токсина у мышей (MNT) (Британская Фармакопея, 1993), Clostridium perfringens vaccine for veterinary use (0363): в Ph. Eur. 4th ed. Strasbourg: Council of Europe; 2002:2250-51), методы ELISA (Sojka и соавт, 1989, Wood, 1991, Uzal и др., 1997). Реакция нейтрализации токсина на лабораторных животных громоздка, требует много времени, большого количества животных, материальных затрат и может быть неточна, варьируя из-за разной чувствительности между животными (Британская Фармакопея, 1993). Тесты ИФА проводят значительно быстрее, занимают по времени всего несколько часов (Nielsen и др., 1992). Коэффициент корреляции между результатами, полученными методом ИФА и классическим методом определения антитоксических антител, равен 0,93 и более, что может гарантировать достоверность полученных данных (Sojka et al, 1989, Wood, 1991, Uzal et al, 1997; U. Rosskopf-Streicher, P. Volkers, E. Werner, 2003). Parreiras (2001) и др. использовали логарифмическое преобразование для количественного определения антитоксина для того, чтобы линеаризовать калибровочную кривую. Sojka et al. (1989) провели исследование, сравнивая конкурентный ELISA и тест нейтрализации токсина на мышах, используя в качестве калибратора стандартную сыворотку, содержащую 20 МЕ/мл, которую титровали. Чувствительность и специфичность ELISA 90,5% и 89,2% для бета-токсина и 97,4% и 94,6% для токсина эпсилон (El Idrissi; Ward, 1992). Цель и задачи исследований. Целью данного исследования была разработка иммуноферментной тест-системы для количественного определения специфических антител к эпсилон токсину в сыворотке крови животных при промышленном производстве поливалентной вакцины против клостридиоза жвачных. Для достижения указанной цели необходимо решить следующие задачи:

-отработать условия получения очищенного и концентрированного эпсилон токсина для использования в качестве антигена в иммуноферментной тест-

системе;

- получить контрольные сыворотки для иммуноферментной тест-системы,

- получить и аттестовать отраслевой стандартный образец сыворотки антитоксической, калиброванной по содержанию специфического иммуноглобулина класса G в международных единицах активности к эпсилон токсину Clostridium perfringens.

- разработать тест-систему на основе непрямого варианта ИФА для количественного определения специфических антител в сыворотке крови кроликов с использованием компьютерной программы статистической обработки результатов;

- продемонстрировать эффективность применения разработанной тест-систем ИФА для оценки иммуногенности вакцин на животных.

Научная новизна. Впервые разработана отечественная тест-система на основе ИФА для выявления количественного содержания антитоксических антител у вакцинированных животных в международных единицах (МЕ). Разработаны стандартные образцы как мера сравнения для определения активного компонента вакцины против клостридиозов жвачных (специфических антител к эпсилон токсину клостридий). Определено, что существует корреляционная связь между показателями антител, выявленных в одних и тех же сыворотках с помощью разработанной иммуноферментной тест-системы и метода нейтрализации токсина на мышах (показатели

Л

содержания в МЕ/см ).

Впервые в экспериментальных исследованиях с использованием образцов вакцины против клостридиозов животных, отработан метод определения иммуногенности, отличающийся тем, что количественная

-5

оценка антитоксических антител выражается в МЕ/см на основании регистрации сигнала оптической плотности разведения исследуемой сыворотки и проекции показателей в калибровочную кривую, построенную по результатам оценки разведений стандартной эталонной референс-

сыворотки к эпсилон токсину клостридий с известным показателем

-5

содержания антител (МЕ/см ).

Впервые для количественной статистической обработки результатов иммуноферментного анализа и расчёта концентрации специфических антител адаптирована современная компьютерная программа, которая по данным ИФА (значения оптической плотности в зависимости от концентрации антитоксинов в титруемых сыворотках крови) в автоматическом режиме определяет активность испытуемой сыворотки относительно стандарта, доверительные интервалы этой активности, критерий линейности для графиков логарифмической зависимости оптической плотности от концентрации сравниваемых антитоксинов. Учёт результатов ИФА стандартизован таким образом, что позволяет оценить содержание специфических антител к эпсилон токсину при контроле биопрепаратов

-5

против клостридиоза жвачных в М^м .

Теоретическая и практическая значимость исследований.

Практическая значимость работы определяется внедрением системы контроля качества иммунобиологических биопрепаратов на основе использования стандартных образцов и иммунохимических методик с установленными валидационными характеристиками на предприятии-изготовителе.

Предложен для практики стандартный образец сыворотки крови против клостридиоза животных, калиброванной по содержанию специфических антител к эпсилон-токсину.

Предложена иммуноферментная тест-система для контроля качества ветеринарных иммунобиологических препаратов в технологическом процессе изготовления вакцины против клостридиоза животных. Создание иммуноферментной тест-системы для количественной оценки специфической активности антитоксической сыворотки у вакцинированных кроликов является важным звеном в разработке системы контроля

профилактических биопрепаратов против клостридиоза животных, отвечающих по своим характеристикам международным требованиям.

Разработанная иммуноферментная тест-система используются в работе Научной группы биопредприятия для оценки напряженности антитоксического антибактериального иммунитета. Сконструированная серологическая тест-система может быть использована для оценки поствакцинального иммунитета в аспекте наличия защитного уровня антител.

Методология и методы исследования. Методология проведённых исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно восприимчивых животных, стандартное оборудование клинических лабораторий для взятия крови и проведения серологических реакций.

Объекты исследований - полученный из Федерального государственного бюджетного учреждения «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ "ВГНКИ") производственный штамм 213 С1. perfringens тип Д, и биопрепараты на его основе.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Анаэробная энтеротоксемия

Анаэробную энтеротоксемию вызывают бактерии Cl. perfringens, их подразделяют на шесть типов: А, В, С, D, Е и F, отличающихся друг от друга антигенной структурой и вырабатываемыми токсинами. У телят анаэробную энтеротоксемию вызывают возбудители серотипов А, С и D. Средство для специфической профилактики данной инфекции у телят в РФ не разработано [86].

Анаэробная энтеротоксемия (лат. - Enterotoxaemia infectiosa anaerobica; англ.- Struck, Pulpy kidney disease, dirt-eating disease, overeating disease) -остро протекающая, неконтагиозная токсико-инфекционная болезнь, характеризующаяся стационарностью, геморрагическим энтеритом, поражением почек, нарушением со стороны нервной системы, общей интоксикацией, значительным охватом поголовья и высокой летальностью (до 60-100%) [215]. У телят болезнь характеризуется геморрагическим энтеритом, часто кровоизлияниями на слизистых оболочках носовой и ротовой полостей, выраженной токсемией [10,186, 191,200].

Анаэробные микроорганизмы были открыты французским ученым Луи Пастером в 1861 году. Впервые инфекционная энтеротоксемия была описана в начале прошлого века в Австралии и Новой Зеландии и, благодаря характерной паталогоанатомической картине изменения почек, получила название «болезнь размягчения почек», Djilurt 1910 г. В 1926 г. Bennets высказал предположение, что эта болезнь, наиболее часто диагностируемая в период цветения трав, обусловлена абсорбцией токсинов из кишечника. В 1932 г. он же выделил из кишечника павших овец возбудителя, сходного по своим культуральным и биохимическим свойствам с Cl. perfringens тип D, и назвал его В. ovitoxicus. Другая форма энтеротоксемии «Struck» (удар) была обнаружена немного позже в Англии (Мак-Эвен, 1930), где от больных овец был выделен Cl. perfringens типа С. Cl. perfringens типа А открыли

американские патологи Уэлч и Нэталл (1892), чистую культуру получили Вейон и Жубер (1893), давшие ему название perfringens [15].

Энтеротоксемия крупного рогатого скота - «энтеротоксемическая желтуха» - впервые была описана в Австралии (Роуз, Эдгар, 1936). Болезнь широко распространена во многих странах мира. Она зарегистрирована почти во всех климатических зонах. В бывшем СССР болезнь впервые наблюдал П.Н. Андреев (1928), а подробно описал С.Н. Муромцев (1936) [8, 15, 100].

В бывшем СССР болезнь чаще всего встречалась на Северном Кавказе, в Закавказье, Среднеазиатских республиках и в Забайкалье. В 1964 г. эту болезнь начали изучать в Монголии, где были выделены штаммы С1. регАп^еш и затем исследованы в СССР в Государственном научно-контрольном институте [97,129].

В последние годы болезнь широко описана в Англии, Франции, Бельгии, Голландии, Дании, США, Бразилии, Аргентине, Уругвае и в других странах. Изучение энтеротоксемии новорожденных телят было начато В. И. Леньковым с сотрудниками в 1961 г. в Южно-Казахстанской НИВС, а затем продолжено в БелНИИЭВ им. С.Н. Вышелесского (1966-1969 г.) [38-40]. Термин «клостридии» ввёл Трекюль (1863). Род включает виды, обитающие в почве, на дне пресных и соленых водоемов, в кишечнике человека и животных; некоторые виды патогенны, а некоторые нашли применение в промышленности при производстве некоторых органических кислот и спиртов.

Современная систематика выделяет 5 групп микроорганизмов, разделяемых по расположению спор, способности гидролизовать желатин и особым требованиям для роста. По экологическим свойствам выделяют 3 группы клостридии: возбудители бродильных процессов (с преобладанием сахаролитических свойств); возбудители процессов гниения (с преобладанием протеолитических свойств); патогенные виды (могут быть протеолитическими и сахаролитическими). Последнюю группу составляют возбудители травматических

клостридиозов (газовой гангрены, столбняка), возбудители энтеральных клостридиозов и непатогенные виды, вызывающие патологические процессы в ассоциациях с другими патогенными клостридиями.

1.1.1. Возбудитель болезни Болезнь вызывают спорообразующие грамположительные

бактерии Cl. perfringens, по классификации Bergey (1957) они включены в класс шизомицетов, порядок истинных бактерий, семейство Bacillaceae, род Clostridia, включающему более 100 видов [8,13,14]. В этот род объединены патогенные и сапрофитные анаэробные спорообразующие палочковидные микроорганизмы, за исключением нескольких сульфатредуцирующих пигментообразующих видов. Родовое название дано на основании сходства этих микроорганизмов с веретеном (closter - лат. маленькое веретено), которое они приобретают в результате раздувания бактериальных клеток крупными спорами, располагающимися в центре или ближе к одному концу [9].

Бактерии Cl. perfringens - сравнительно короткие, толстые, неподвижные палочки размером 0,3...2 х 1,5...20 мкм с закругленными концами, часто располагающиеся попарно или в виде коротких цепочек, являются аэротолерантными анаэробами и могут размножаться на средах при давлении кислорода 40 мм. [9,10].

Вегетативные клетки - крупные, строго грамположительные, жгутиков не имеют, неподвижны (один из немногих неподвижных видов). In vivo образуют капсулы (единственный капсулообразующий вид среди патогенных клостридий). В течение некоторого времени капсулы сохраняются и при культивировании на средах, содержащих нативный белок. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, в старых культурах могут быть грамотрицательными [16].

Споры Cl. perfringens крупные, овальные, расположены центрально, клетка-спорангий практически не деформируется. Термоустойчивость спор

серотипов В и D относительно невысока (погибают при кипячении в течение 15-30 минут), споры типов А и С более устойчивы и выживают при кипячении и даже автоклавировании в течение 1-6 ч. Спорообразование обычно имеет место в почве и кишечнике, in vitro споры можно получить на щелочных средах, богатых белком и не содержащих утилизируемых углеводов (например, на свернувшейся лошадиной сыворотке). Спорообразование стимулирует прогревание при 75°С в течение 10-15 минут [16].

На плотных питательных средах бактерии Cl. perfringens обычно образуют S- и R-колонии. S-колонии круглые, сочные, куполообразные, с гладкими ровными краями, в начале роста прозрачные, напоминающие капли росы, позднее становятся мутными, серовато-белыми. R-колонии неправильной формы, бугристые, с неровными шероховатыми краями, в глубине агара напоминают комочки ваты. У некоторых штаммов отмечают слизистые М-колонии, особенно у слизистых вариантов Cl. perfringens типа А, образующих густую слизь на жидких средах, они напоминают S-колонии с более высоким куполом и слизистой консистенцией; представлены капсулированными клетками. Иногда можно наблюдать смешанные О колонии. На агаре Цейсслера через 12-18 ч бактерии Cl. perfringens образует гладкие сероватые колонии с ровными краями и плотным возвышением в центре. Колонии окружены зоной гемолиза, он может быть полным либо частичным. Зона гемолиза может быть двойной: вокруг колоний полный гемолиз (за счет действия гемолизинов), на отдалении — неполный (за счет действия лецитиназы). При контакте с кислородом колонии могут приобретать зеленоватую окраску. На желточном агаре Cl. perfringens образует колонии, окруженные зоной перламутрового преципитата (фосфорилхолин), образующегося из лецитина куриного желтка под действием лецитиназы. Колонии в толще питательной среды имеют вид чечевичных зерен, дисков или комочков ваты. Рост Cl. perfringens на жидких и полужидких средах, особенно

содержащих глюкозу, происходит очень бурно с образованием Н2 и СO2, и обычно заканчивается через 8-12 ч; при стоянии среда постепенно светлеет и образуется обильный осадок, культуры а. perfringens имеют характерный запах масляной кислоты. Оптимум рН 7,2-7,4, но могут расти в интервале 5,0-8,5. Первые признаки роста на среде Китта-Тароцци могут проявляться уже через 1-2 ч (особенно при 43 °С); последние проявляются появлением пузырьков газа из-под кусочков печени при встряхивании. Помутнение среды и активное газообразование можно наблюдать через 4-8 ч культивирования [16].

По морфологическим и культуральным свойствам все штаммы а. perfringens идентичны, а по экзотоксинам и реакции нейтрализации с типовыми антитоксическими сыворотками и по способности образовывать 4 главных токсина (а -, в-, е- и I -) микроорганизмы разделяют на 6 сероваров — А, В, С, D, Е и Р (Васильев Д.А. и соавт., 2004; Мельников В.Н. и соавт., 1971; Алешкевич В.Н., 1992) [1,16,68]. У телят анаэробную энтеротоксемию вызывают возбудители серотипов А, С и D [1-3,29, 98,103].

Главным фактором патогенности а. perfringens является экзотоксин. Они обладают также высокой инвазивностью и образуют как минимум 12 идентифицированных токсинов (ферментов) и энтеротоксин; у гиалуронидазы и дезоксирибонуклеазы (^ - и V - токсины) токсичность не доказана; (в -, у -, 0-, п-, 5 , е- и I -токсины обладают летальным свойством, но их биохимическая активность изучена недостаточно, и только а -, к - и X токсины - ферменты с выраженным токсическим действием. Мишени для действия основных токсинов — биологические мембраны в различных тканях, в основе поражения находятся ферментативные процессы, катализирующие гидролитическое расщепление и нарушение клеточной проницаемости с последующим отеком. Отёк сопровождается снижением окислительно-восстановительного потенциала в клетках,

активацией эндогенных протеаз, приводящих к аутолизу тканей, характерному для газовой гангрены [129].

Некоторые типы Cl. perfringens могут утрачивать свою способность продуцировать отдельные токсины после пересевов на искусственные питательные среды. Например, тип С может терять в -токсин, типы В и D -эпсилон токсин, при этом последний переходит в тип А [96].

a-токсин (лецитиназа С) Cl. perfringens проявляет дерматонекротизирующее, гемолитическое и летальное (убивает лабораторных животных при внутривенном введении) действие, опосредованное лецитиназной (фосфолипазной) активностью (разлагает лецитин на фосфорилхолин и глицериды), продуцируют все типы Cl. perfringens, но наиболее интенсивно тип А. 5 -токсин вызывает некроз тканей и оказывает летальное действие на морских свинок-альбиносов, гемолитического действия не оказывает, активность in vivo реализуется в развитии некротических энтеритов, основные продуценты — типы В и С.

в-токсин проявляет гемолитическую активность в отношении эритроцитов барана, но не в отношении эритроцитов кролика или лошади, оказывает летальное действие на лабораторных животных, основные продуценты — типы В и С.

0-токсин оказывает гемолитическое (кислород-чувствительное), дерматонекротизирующее и летальное действие, разрушает эритроциты барана и лошади, а также (незначительно) мыши, основной продуцент — Cl. perfringens типа С, типы А, В, D и Е образуют его в меньших количествах. s - и i -токсины оказывают летальное и дерматонекротизирующее действие, протоксины, выявляемые в фильтратах культур, активируются трипсином. s -токсин продуцируют типы В и D, i -токсин — штаммы типа Е. к-токсин (коллагеназа и желатиназа) разрушает ретикулярную ткань мышц и коллагеновые волокна соединительной ткани, активно усиливает

цистеин в присутствии Ре2+, оказывает летальное и некротизирующее действие, продуценты — типы А, С, Е и некоторые штаммы типа D.

Х-токсин (протеиназа) расщепляет денатурированный коллаген и желатин, во многом действует подобно фибринолизину, как и е -токсин, секретируется в форме протоксина, активируемого трипсином. Проявляет активность экзоэнзима, обусловливающего некротические свойства.

Х- и п - токсины оказывают летальное действие на лабораторных животных; их биохимическая природа остается неизвестной.

Л - и V -токсины по своей химической природе — гиалуронидаза и дезоксирибонуклеаза, ^ -токсин ответствен за повышение проницаемости тканей, V -токсин расщепляет нуклеиновые кислоты, тем самым нарушая реакции белкового синтеза. Фильтраты микробных культур С1. perfringens могут содержать также различные токсические вещества (например, фибринолизин и гиалуронидазу) [16, 60-61,106].

Как обладатель метаболитической активностью, С1. perfringens расщепляет с образованием кислоты и газа глюкозу, ксилозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, раффинозу, маннозу, крахмал, гликоген и инозит; глицерин разлагают не все штаммы, не сбраживает маннит, дульцит; редко ферментирует салицин и инсулин.

От прочих клостридий О. perfringens отличает способность восстанавливать нитраты, расщеплять лактозу, образовывать лецитиназу. Протеолитическая активность слабая; разжижает желатин, не разлагает казеин; только некоторые штаммы медленно разжижают свернувшуюся сыворотку. Интенсивно створаживают молоко с образованием крупноячеистого губчатого сгустка уже через 3 ч (феномен известен как «штормовая реакция») [67,105-107].

1.1.2. Эпизоотологические данные

В связи с широким распространением и способностью клостридий длительное время сохранять жизнеспособность в окружающей среде, микробы до

настоящего времени представляют серьезную проблему для скотоводства [15,106].

Исследования отечественных и зарубежных авторов указывают на широкое распространение анаэробной энтеротоксемии телят в различных странах и на территории нашей страны и значительный экономический ущерб, причиняемый этой болезнью животноводству [48-51,130].

Наиболее восприимчивы новорожденные телята. Возникновению болезни способствует нарушение условий содержания и кормления. Энтеротоксемия у телят, вызванная типом А, может возникать без заноса инфекции извне. Типы С и D обычно служат причиной болезни у телят более старшего возраста (6-24 мес), находящихся на пастбищном содержании или на

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Михеев, Виктор Евгеньевич, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алешкевич В.Н. Совершенствование специфической профилактики анаэробной энтеротоксемии телят/ В.Н. Алешкевич//Автореф. дис. канд. вет. наук. Витебск, 1992. -19с.

2. Алиев А.А. Справочник ветеринарного фельдшера / А.А. Алиев, Н.Л. Андреева, Н.Б. Баженова и др. - СПб.: Изд-во «Лань», 2007. - 896 с.

3. Андросик Н.Н., Москалев К.В. Этиологическая роль энтеротоксигенных штаммов Clostridium perfringens типа А в заболевании телят энтеротоксемией. // Известия Академии аграрных наук Республики Беларусия №2. 1999. с. 73-76.

4. Аффинная хроматография // Под ред. П. Дин, У. Джонсон, Ф. Мидл. - М.: Мир, 1988.

5. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

6. Бакулов И.А. Рекомендации по методике эпизоотического исследования / И.А. Бакулов, Г.Г. Юрков, А.П. Песковацков; под. ред. И.А.Бакулова. - Покров. - 1975. - С. 75.

7. Бархалева О.А., Синюгина А.А., Саркисян К.А., Ладыженская И.П., Воробьева М.С., Фадейкина О.В. и др. Аттестация новой серии отраслевого стандартного образца вакцины желтой лихорадки для контроля специфической активности. Биопрепараты.- 2013.- 4(40).C.41-47.

8. Беркли Р. Определитель бактерий Берджи / Р. Беркли, Э. Бок, Д. Бун и др. - Т. 1: Пер. с англ. - М.: Мир, 1997. - 432 с.

9. Бессарабов Б.Ф. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин и др. - М.: КолосС, 2007. -С. 92- 99.

10. Бехтерев С.И. К вопоросу о заявке на изобретение, относящееся к штаммам микроорганизмов / С.И. Бехтерев, А.Я. Самуйленко // Матер. межд. науч.-прак. конф. - Щелково. - 2005. - С. 405-407

11. Блинов Н.И. Метод выделения и идентификации Т- и Влимфоцитов / Н.И. Блинов // Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. - М. : Агропромиздат, 1985. - С. 215-222.

12. Борисович Ю.Ф Ветеринарные препараты: Справочник / Ю.Ф.Борисович, Л.В.Кириллов, Д.Ф. Осидзе. - М.: Колос, 1981. - С. 278283.

13. Борисевич И.В., Петухов В.Г., Волкова Р.А., Устинникова О.Б., Фадейкина О.В., Малкова В.И. Стандартные образцы как средство метрологического обеспечения аналитических методов контроля медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП). Биопрепараты .-2010.-4(40): 8-10.

14. Бургасов П.Н. Эволюция клостридиозов / П.Н. Бургасов, С.Н. Румянцев - М.: «Медицина», 1974. - С. 46-52.

15. Бурико Б.Ю. Этиологическое значение клостридий при инфекционных заболеваниях крупного рогатого скота / Б.Ю. Бурико, А.В. Капустин // Тезисы доклады международной научной конференции. -М, 2011.-С. 47-48.

16. Васильев Д.А. Щербаков А.А., Карпунин Л.В., Золотухин С.Н. Методы частной бактериологии // Ульяновск. - 2004. - С. 18-26.

17. Волков Г.К. Гигиена выращивания здорового молодняка / Г.К. Волков // Ветеринария. - 2003. - №1. - С. 3-6.

18. Волкова Р.А. Система контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов химическими и иммунохимическими методами: Автореф. дисс...доктора биологических наук/ Рауза Астаховна Волкова. -Москва,2009.-27 С.

19. Волков Г.К. Проблемы выращивания здорового молодняка / Г.К. Волков, В.Д. Баранников // Ветеринария. - 1997. - №2. - С. 7-10.

20. Вязникова, Т.В. Конструирование иммуноферментных тест-систем на основе авидин-биотинового взаимодействия для определения антител:

дифтерийных, столбнячных, коклюшных, анти-HBs: Дис. ... канд. мед. наук / Т.В. Вязникова. - Пермь, 2007. — 135 с.

21. Вязникова Т.В. Опыт использования иммуноферментного анализа для оценки противококлюшного иммунитета/ Т.В. Вязникова, Е.В. Гореликова// Современная вакцинопрофилактика: проблемы и перспективы развития: матер. науч.-практ. конф. - Пермь, 2005. - С. 18-23.

22. Гальвидис И. А. Изучение пассивного иммунитета у больных токсическими формами дифтерии: Автореф. дисс... канд. мед. наук. / Инна Александровна Гальвидис.-Москва.-2008.- 24 с.

23. Гаффаров Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов и др. - Казань: Изд-во «Фэн», 2002. - 592 с.

24. ГОСТ Р ИСО 9004-2010 Менеджмент для достижения устойчивого успеха организации. Подход на основе менеджмента качества. - М.: Стандартинформ, 2011. - 41 с.

25. ГОСТ Р ИСО 10014-2006 Менеджмент организации. Руководящие указания по достижению экономического эффекта в системе менеджмента качества. - М.: Медицина, 2007. - 440 с.

26. ГОСТ Р ИСО 14644.4-2002 Чистые помещения и связанные с ними контролируемые среды. Ч. 4. Проектирование, строительство и ввод в эксплуатацию. - М.: Стандартинформ, 2002. - 37 с.

27. ГОСТ Р ИСО 9001-2001 Системы менеджмента качества. Требования. - М.: Изд-во стандартов, 2001. -20 с.

28. ГОСТ Р 50779.42-99 Статистические методы. Контрольные карты Шухарта. -М.: Изд-во стандартов, 1999. - 65 с.

29. ГОСТ Р 52249-2009 Правила производства и контроля лекарственных средств. - М.: Стандартинформ, 2010.-139 с.

30. ГОСТ Р 52537-2006 Производство лекарственных средств. Система обеспечения качества. Общие требования. - М.: Стандартинформ, 2006.- 74с.

31. ГОСТ Р ИСО 15194-2013. Изделия медицинские для диагностики in vitro. Измерение величин в пробах биологического происхождения. Требования к стандартным аттестованным образцам и содержанию сопроводительной документации.— М.: Стандартинформ, 2014

32. Грапкова, А.А. Система управления качеством. Организационная схема системы управления качеством. Организация ведения документации : мат. совещания по вопросам Государственного регулирования в сфере обращения лекарственных средств и мед. изделий / А.А. Грапкова - М., 2005. - С.122-127.

33. Грязнова Д.В. Разработка комплексных препаратов для профилактики и диагностики газовой гангрены: Автореф. дисс... канд.биол. наук. / Д.В. Грязнова. -Пермь, 1999.-28С.

34. Гулюкин М.И. и др. Практическое пособие по мониторингу бруцеллеза, туберкулеза, паратуберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота: организационно-хозяйственные, ветеринарно-санитарные и зоогигиенические аспекты профилактики и ликвидации этих инфекций.// Москва, 2014.- 74 с.

35. Давлетбаева Л.Р. Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов: Автореф. дисс.канд.биол. наук. /Л.Р. Давлетбаева.- Уфа.-.2007.- 29С.

36. Дзантиев Б.Б., Егоров A.M. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа // Журн. Всес. хим. об-ва. - 1982. Т.27, №4. - С. 442449.

37. Дереза А.Ф. Анаэробная энтеротоксемия телят, обусловленная энтеротоксином Кл. перфрингенс типа А / А.Ф. Дереза, В.А. Ленькова // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987.- С. 154-155.

38. Дереза А.Ф. Совершенствование лабораторной диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных / А.Ф. Дереза,

В.А. Ленькова // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987. - с. 154.

39. Дереза А.Ф. Этиопатогенная роль Qosrtidium perfringens при желудочно-кишечных заболеваниях телят / А.Ф. Дереза, В.А. Ленькова // Микроорганизмы в сельском хозяйстве. - Минск, 1983. - с. 80.

40. Дереза А.Ф. О развитии иммунитета у крупного рогатого скота к токсинам Кл. перфрингенс типов А,В,С,Д / А.Ф. Дереза, В.Н. Алешкевич, А.А. Солоненко // Вет. наука. Минск, 1992 .Вып 30. - С. 77-84. Т

41. Дереза А.Ф. Совершенствование лабораторной диагностики анаэробной энтеротоксемии сельскохозяйственных животных / А.Ф. Дереза // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987.-С. 154.

42. Директива Совета о защите животных, используемых в экспериментальных и научных целях (86/609/ЕЭС), 24 ноября 1986г.-25с.

43. Дяченко С.А., Сэндвич-вариант ИФА для выявления вируса бешенства в головном мозге животных и птицы/Дяченко А.С., Матвеева И.Н., Попова В.М., Кузнецов Д.П. //Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии.-2015.-№8- С.150

44. Егоров A.M. Современный иммунохимический анализ и перспективы его развития // Журн. Всес. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. - 1988. - Т.33, №5.-С. 494-501.

45. Егоров A.M., Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев и др. - М., 1991. - 286с.

46. Егоров A.M. Новые методы иммуноанализа. - М.: Мир, 1991. - С. 78-79.

47. Ефимова Н.П. Разработка и экспериментальное обоснование производства препаратов против анаэробных инфекций: Дисс. ... докт. мед. наук. - Пермь, 1971.464 с.

48. Зароза В.Г. Энтеротоксемия крупного рогатого скота, вызываемая Cl. perfringens / В.Г. Зароза // Сельское хозяйство за рубежом. -1984.- Т.8.- С. 51-53.

49. Иммуноферментный анализ применительно к контролю иммунопрепаратов и технологических процессов / И.В. Москвичева, А.К. Барсуков, П.П. Хохлов и др. // В сб.: Актуальные проблемы прикладной иммунологии, биотехнологии и производства бактерийных препаратов. - Пермь, 1988. - С. 128-129.

49. Инфекционная патология животных в 2 томах / под ред. А.Я. Самуйленкова, В.Ф. Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина - М., ИКЦ «Академкнига», 2006. - Т. 1. - 1911 с.

50. Инфекционная патология животных : Т.3 / под ред.А.Я.Самуйленко.-М.: РАСХН, 2009.- 881 с.

51. Инфекционные болезни животных / Б.Ф Бессарабов, Ф.Ф.Вакушин, Е.С.Воронин [ и др.]- М.: Колос, 2007.- 671 с.

52. Инфекционные и инвазионные заболевания молодняка / П.А. Красочко, А.С. Ястребов, О.Г. Новиков и др. : под ред. П.А. Красочко. - Смоленск, 2001. - 380 с.

53. Перспективы биоспецифической хроматографии в иммунобиотехнологии / И.В. Москвичева, А.К. Барсуков, Л.Е. Селькина и др. / В сб.: Препаратив. хроматограф, физ. актив, веществ на полимер, сорбентах. - Л., 1988. -С. 19.

54. Казимир А.Н. Эпизоотология, этиология, фаготерапия и специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии телят в хозяйствах Ульяновской области: автореф. дис.канд.вет.наук / А.Н. Казимир. -Казань, 1997.-22 с.52.

55. Калашникова Е.А. Совершенствование системы контроля качества комбинированных вакцин для профилактики дифтерии, столбняка и коклюша на основе экспрессных методов анализа: Автореф. диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук/ Екатерина Александровна Калашникова. - Пермь,2014.-27С.

56. Каплунова О.П., Бочарова Н.Г. Обнаружение токсигенных штаммов Кл. перфрингенс при помощи иммуноферментного анализа (ИФА) и реакции с лецитовителлином // В сб.: Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов. - М. - 1982. - С. 134-138.

57. Применение пероксидазного метода иммуноферментного анализа для выявления клеток Clostridium perfringens / О.П. Каплунова, Д.С. Курдина,Л.Б. Григорьева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1987. - №8. - С. 62-64.

58. Ненашев В.П., Артеменко В.Д. Получение очищенных анатоксинов С. oedematiens из концентрированных токсинов с использованием казеиновых питательных сред // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1971. -№1. - С. 87-90.

59. Карбахш М., Перль X. Мембранные процессы в медицине и биотехнологии // Журн. Всес. хим. об-ва. - 1987. -Т. 32,№6. - С. 669-673.

60. Кириллов Л.В. Инфекционная анаэробная энтеротоксемия животных / Л.В. Кириллов, З.Х. Межиева // Российский ветеринарный журнал. - 2007 - №3. - с. 4-9.

61. Кириллов Л.В. Предупреждение инфекционных болезней анаэробной этиологии / Л.В. Кириллов // Ветеринария, 2001. - №1 - С. 16-19.

62. Кисленко В.Н. Возбудители инфекционной анаэробной энтеротоксемии / В.Н. Кисленко, Н.М. Колычев, О.С. Суворина// Ветеринарная микробиология и иммунология. - М.: Колос С, 2007. - С. 64-67

63. Козлов М.П., Дубяга В.П. Использование мембранной технологии для разделения компонентов жидких смесей // Пластмассы. - 1982. - №9. - С. 49.

64. Колычев Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: КолосС, 2003.-С. 289-294

65. Малахов Ю.А. Специфическая профилактика и диагностика бактериальных болезней животных / Ю.А. Малахов, Р.В. Душук // Ветеринария. - 2001. - №1. - С. 35-38.

66. Манасян A.B. Активность ферментов пищеварительной системы у телят при диспепсии / A.B. Манасян, Г.Р. Петоян, A.M. Шахбазян // Ветеринария. - 2003. -№7. - С. 39-40.

67. Мельников В.Н. Основы профилактики анаэробных инфекций. / В.Н. Мельников, Н.И. Мельников, У.С. Еникеева - Уфа, 1971. - С. 57-76

68. Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии и анаэробной дизентерии ягнят. Утверждены ГУВ МСХ СССР.-М.: 1984. - 4 с.

69. Методическое руководство по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов, Москва, Мин. Здравохранения СССР, ГКИ биопрепаратов им. Л.А. Тарасевича. 1972 г. Стр. 227-230.

70. Микробиология и иммунология / А.А. Воробьев и др.. -М.: Медицина, 1999. - 465 с.

71. Микробиология и иммунология: учебное пособие, Ч.1. Общая микробиология и иммунолгогия / А.А. Солонеко, А.А. Гласкович, П.А. Красочко, А.П. Лысенко, Н.Н. Андросик, В.Н. Алешкевич, В.С. Прудников, Ф.Е. Тимофеев, Ю.Г. Зелютков. - Минск, Издательство «Пион», 2002. - 248 с.

72. Мищенко В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят / В.А. Мищенко, H.A. Яременко, Д.К. Павлов, О.И. Гетманский, A.B. Савин // Ветеринария. - 2002. - №4. - С. 16-19.

73. Мусаева М.Н. Инфекционные диареи новорожденных телят в условиях Дагестана (эпизоотология, профилактика, лечение) / М.Н. Мусаева // Автореф. дис. ...кандид.вет. наук. - Краснодар. -2010.-24 с.

74. Нестеров И.А. Эмерджентная эволюция перфрингенза (инфекционной анаэробной энтеротоксемии) животных в зоне Северного Кавказа / И.А. Нестеров // Ветеринарная патология. - 2005. - №2.-с. 35- 41.

75. Нестеров И.А. Эмерджентные преобразования перфрингеоза животных на Северном Кавказе / И.А. Нестеров // Актуал. проб, инфек. патолог, и иммун. животных. - Москва, 2006. - С. 103-107.

76. Николаева A.M. Экспериментальное обоснование и разработка промышленного способа получения очищенного сорбированного стафилококкового анатоксина из очищенного токсина: Автореф. дисс. ... канд. биол. наук. - Алма-Ата, 1981. - 16 с.

77. Николаевна А.М. Конструирование комбинированных вакцин и иммуноферментных тест-систем для профилактики и диагностики управляемых инфекций Николаева Алевтина Максимовна: Дисс.. д. биол. наук. -Пермь.-2003.-120 с.

78. Новоселова Г.Н. Экспериментальные материалы к разработке реакторного метода получения токсинов Cl. perfringens типа А.: Дисс. ... канд. биол. наук. -Пермь, 1972.

79. Нго Т.Т. Иммуноферментный анализ: общий обзор // Иммунофермент- ный анализ / Под ред. Нго Т.Т., Ленхофра Г.: Пер. с англ. - М.: Мир, 1988.-С. 10-35.

80. Овод A.C. Профилактика диарей новорожденных телят пробиотиками /A.C. Овод, В.В. Мосейчук // Ветеринария. - 2007. - №2. - С. 6-7.

81. Отраслевой стандарт 42-510-98 «Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств (GMP)».

82. Отраслевой стандарт. Лекарственные средства. Испытания сроков годности. Проект (взамен ОСТа 42-2-72) // Фарматека.- 2000.- № 2. - С.34-38.

83. ОСТ 42-2-72. Лекарственные средства. Порядок установления сроков годности. Министерство здравоохранения СССР, министерство медицинской промышленности, 1972.

84. ОФС 42-0002-00. Бактериальные эндотоксины.

85. ОФС 42-0075-07. Общая фармакопейная статья «Сроки годности лекарственных средств». Государственная фармакопея РФ. XII издание.- М.,

2007.- ч.1. - С.488-493

86. Панин А.П. Основные требования к производственным и контрольным штаммам микроорганизмов / А.П. Панин, Н.Т. Татаринцев // Ветеринария. - 1993. - №4. - С. 28-29.

87. Папуниди К.Х. Болезни желудочно-кишечного тракта и печени у животных / К.Х. Папуниди, В.А. Игнаткина, В.А. Горшков // Учебное пособие. - Чебоксары,

2003. - 54 с.

88. Патент РФ №2428202. Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят / Г.Н. Спиридонов, A.A. Иванов, Х.Н. Макаев, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов, Э.Р. Галиуллина// Опубликовано 10.09.2011, Бюл. №25.

89. Петухов В.Г. Метод параллельных линий для количественной оценки качества стандартных образцов и других медицинских иммунобиологических препаратов в иммуноферментном анализе. Биопрепараты.

2004, № 1(13). С. 19-23

90. Петухов В.Г. Определение срока годности стандартных образцов ускоренным методом. Биопрепараты.- 2006.-4(24): 5-8.

91. Пирожков М.К. Вакцина против эшерихиоза сельскохозяйственных животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС- анатоксины) / М.К. Пирожков, Ю.А. Малахов, O.A. Тугаринов // Сб. науч. тр. - Т. 62. - М.: ВГНКИ, 2001. - С. 75-82.

92. Пирожков М.К. Диагностика, специфическая профилактика и лечение и бактериальных болезней животных / М.К. Пирожков, C.B. Ленев, Е.В. Викторова, С. А. Стрельченко, Л.И. Тихонов, О. Д. Скляров // Ветеринария. - 2011. - №1. - С. 24-28.

93. Пирожков, М.К. Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиозз животных: автореф. дис. ... доктора вет. наук: 16.00.03 / Пирожков Михаил Константинович. - Москва.- 2002.-48 с.

94. Производство лекарств по GMP: сб.статей. - М.: Мед.бизнес, 2005.-320с

95. Профилактика диспепсии новорожденных телят / М.Х. Шайхаманов и др. // Ветеринария. - 1994. - №5. - С. 21-25

96. Профилактика инфекционных болезней животных / Н.А. Ковалев, С.И. Музычин, Д.Д. Бутьянов и др.: Под ред. Н.А.Ковалева и С.И.Музычина.— Минск: Урожай, 1988.— 173 с.

97. Радионова К.П. Клостридиозы сельскохозяйственных животных / К.П. Радионова, О.В. Карабанова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. -2010 - №9. - с. 12-14.

98. Рубан, Е.А. Промышленная технология производства противобактерийных препаратов / Е.А. Рубан, Н.В. Мельник, Е.А. Непоклонов и др.: Под. Ред. А.Я. Самуйленко. - М.: ИКЦ «Академкнига, 2006. - 267с.

99. Салимов В. А. Патологоанатомическая и дифференциальная диагностика эшерихиозов, сальмонеллезов, пастереллезов, анаэробных энтеротоксемий, кандидамикоза, их ассоциаций и осложнений у молодняка сельскохозяйственных животных / В.А. Салимов - М.: Колос, 2001. - 75 с.

100. Самуйленко А.Я. Зависимость уровня специфического и гуморального иммунитета у вакцинированного крупного рогатого скота от компонентного состава инактивированных противоящурных вакцин / А.Я. Самуйленко // Акт. проблемы вет. вирусологии. - Владимир. - 1983. - С. 93-95.

101. Самуйленко А.Я. Избранные труды. М.-2013.- с.541

102. Сергеева Т.И. Перспективы разработки методов лабораторной диагностики и иммунопрофилактики кишечных клостридиозов сельскохозяйственных животных / Т.И. Сергеева, И.Н. Бакулин, В.П. Земляницкая, В.М. Алчинбаева // Соврем, пробл. профилактики зооноз. болезней и пути их решения. Минск, 1987. -с. 155-156.

103. Сидоров М.А. Иммунный статус и инфекционные болезни новорожденных телят и поросят /М.А. Сидоров, Ю.Н. Федоров, О.М. Савич // Ветеринария. - 2006. - №11. - С. 3-5.

104. Скляров О.Д., Капустин А.В., Лаишевцев А.И., Гулюкин А.М., Шемельков Е.В., Изучение иммуногенной активности столбнячного компонента в составе ассоциированной вакцины против клостридиозов крупного рогатого скота// Ветеринария Кубани. -2016. -№4. -с.

105. Спиридонов А.Г. Анаэробная энтеротоксемия телят в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / А.Г. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина // Лекарственные препараты для животных (разработка, производство, эффективность и качество): Тезисы докл. Междунар. науч. конф.-М., 2011.-С. 6263.

106. Спиридонов А.Г. Этиология желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят в хозяйствах Среднего Поволжья и Предуралья. / А.Г. Спиридонов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э. Баумана. - Т.206. - Казань, 2011. - С. 200 - 2004.

107. Спиридонов Г.Н. Желудочно-кишечные заболевания новорожденных телят в условиях промышленных комплексов и разработка лечебно-профилактических мероприятий / Г.Н.Спиридонов // Ветеринарный врач.-2007. -С. 26-29.

108. Спиридонов Г.Н. Инфекционная энтеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / Г.Н. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: Матер, науч. -практ. конф. - Краснообск, 2010. - С. 134-139.

109. Спиридонов Г.Н. Разработка и оценка эффективности вакцины ассоциированной против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят: Дисс... канд. биол. наук/ Г.Н. Спиридонов.- Казань.-2013.-с.

110. Стрельченко С.А. Тест-системы для выявления веротоксинов E.coli и антител к ним в сыворотке крови животных / С.А. Стрельченко, М.К. Пирожков // Ветеринария. - 2010. - №4. - С. 54-57.

111. Субботин В.В. Основные элементы профилактики желудочно-кишечной патологии новорожденных животных / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. - 2004. - №1. - С. 3-6.

112. Субботин В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомами диареи / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. - 2001. - №4. - С. 3-7.

113. Сусский Е.В. Совершенствование технологии промышленного производства и обеспечение качества поливалентных сывороток крови животных: Дисс. ...д.б.н./ Е.В.Сусский.- 2014.- Щелково.-350 С.

114. Сюрин В.Н. Состояние и проблемы ветеринарной микробиологии и биотехнологии / В.Н. Сюрин, Э.А. Шегидевич // Мат. Научной конференции. -Москва. - 1998. - №3. - С. 24.

115. Татаринцев Н.Т. Основные показатели качества оценки анатоксинов и инактивированных вакцин против бактериальных и вирусных болезней животных / Н.Т.Татаринцев, М.В. Нестифорова // Сб. науч. тр. ВГНКИ. - 1996. - Т. 59. - С. 13-18.

116. Ургуев K.P. Иммуногенез при вакцинации овец полианатоксином против клостридиозов / K.P. Ургуев // Пробл. ветеринарной иммунологии. - 1987.-С. 98101.

117. Устинникова О.Б. Стандартизация и валидация методов ракетного иммуноэлектрофореза и иммуноферментного анализа при контроле качества медицинских биологических препаратов, 14.00.36 - аллергология и иммунология: Автореф. Дисс. кандидата биологических наук/ О.Б. Устинникова. -Москва,2007.- 27 С.

118. Федеральный закон № 429 «О внесении изменений в ФЗ «Об обращении лекарственных средств», 2014.

119. Фирсова Т.Н. Противодифтерийные антитоксические и антибактериальные антитела в сыворотках крови людей 03.02.03 - микробиология— 03.01.06 биотехнология (в том числе бионанотехнологии): Автореф. дисс. канд. биологических наук.- Москва. - 2012.-с.24

120. Фирсова Т.Н. Использование ИФА для диагностики противодифтерийных антитоксических и антибактериальных антител / Фирсова Т.Н., Шмелева Е.А.,

Парамонова Ю.А., Булыгина Г.С., Новикова Л.И., Батурина И.Г. // Материалы юбилейной Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Академика И.Н. Блохиной, 15-17 июня 2009 г. (г. Нижний Новгород). - 2009. - С. 197-199.

121. Храмцов П. В. Иммунодиагностическая система для оценки напряженности поствакцинального иммунитета к коклюшу, дифтерии и столбняку 14.03.09 -Клиническая иммунология, аллергология: Дисс.... к.б.н./ Павел Викторович Храмцов.- Челябинск, 2016.-С.230

122. Хурамшина М.Т. Инфекционная энтеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных / М.Т. Хурамшина, Т.Н. Спиридонов, А.Ф. Махмутов // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность: Матер, междунар. науч.-практ. конф. - Казань, 2010.-С. 502-507.

123. Шахов А.Г. Энтеротоксемия телят и поросят/ А.Г. Шахов, А.И Ануфриев, Ю.Н. Бригадиров, П. Ануфриев // Животноводство России. - 2006.-С. 49-50.

124. Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. Межд. научн.-практ. конф. -Воронеж, 2002. - С. 3-8.

125. Шажко Л.Ф. Сравнительная оценка иммуногенности противояшурных формолвакцин, приготовленных с гидратом окиси алюминия и фосфатом кальция / Л.Ф. Шажко, М.Г. Удалых // Ящур: мат. науч. конф. - Владимир. - 1970. - С 5657.

126. А. А. Шевченко, О. Ю. Черных, Л.В. Шевченко, Г.А. Джаилиди, Д.Ю. Зеркалев, Е.А. Горпинченко Диагностика клостридиозов животных.-Краснодар. -2013.-120 с.

127. Шкиль H.A. Экология условно-патогенной микрофлоры, циркулирующей в популяции животных/ H.A. Шкиль, H.H. Шкиль, М.Н. Шадрина // Сиб. вестн. с.-х. науки. -2003.-№ З.-С. 163-164.

128. Шмелева Е.А. Содержание антитоксических противодифтерийных антител в сыворотках взрослых людей из разных регионов Европы. Сообщение 1 / Шмелева Е.А., Фирсова Т.Н., Булыгина Г.С. и др. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. -2009. - №4. - С. 49-56.

129. Шмелева Е.А. Антибактериальные противодифтерийные антитела в сыворотках крови взрослых людей. Сообщение 2 / Шмелева Е.А., Фирсова Т.Н., Булыгина Г.С. и др. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2009. - №5. - С. 66-75.

130. Юров, К.П. Профилактика инфекционных болезней телят / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк // Материалы науч. -практ. конф. - Новосибирск, 2001. - С.9-10.

131. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. - Москва: Медицина, 1999. - 608 с.

132. Яковлева И.В., Титова Н.Г., Селезнева Т.С., Буркин М.А., Смирнов В.Д., Гальвидис И.А., Свиридов В.В. Оценка напряженности антитоксического противодифтерийного иммунитета в различных тестах // Современная Вакцинология. Сборник докладов II Международной конференции, посвященной 100-летию Пермского НПО «Биомед». - июнь 1998.- С. 45.

133. Ashworth, L. Antigens in whooping cough vaccine and antibody levels induced by vaccination of children / L. Ashworth, A. Robinson, L. Irons et al. // Lancet. - 1983. - V.2. - P. 878-881.

134. Aybay, C. Development of a Diagnostic and Screening Elisa System for Measuring Tetanus Antitoxoid Levels / C. Aybay, R. Karakus, A. Gundogdu // Turkish Journal of Medical Sciences. - 2003. - V. 33. - P. 289-294.

135. Azevedo, E.O. et al. Avalia?ao de vacinas contra Clostridium perfringens tipos C e D. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinaria e Zootecnia.-1998.- v.50, n.3.- p.239-242.

136. Borrmann, E. et al. Development of a cell culture assay for the quantitative determination of vaccination-induced antibodies in rabbit

sera against Clostridium perfringens epsilon// Veterinary Microbiology.-2006.-v.114.- p.41-50.

137. British Pharmacopoeia // Veterinary Supplement. Strasburg: Council of Europe. 2010. - ISBN 9780113228287.

138. British Pharmacopoeia (Veterinary). HMSO.-1993.- London, 118 pp.

139. Brasil. Ministério da Agricultura. Portarían. 49 de 12 de maio de 1997. Diário Oficial da Uniao, Brasilia, 16 de maio de 1997.Se?äo 1, p.10168-10169

140. Brandi, V. B. Desenvolvimento e análises de valida?äo de metodologias para o controle de processo de purifica?äo e fabrica?äo de vacinas contra Clostridium perfringens tipo D. 2007. 160 f. Tese. (Doutorado em Biotecnologia) - Programa de P0s-Gradua?äo Interunidades em Biotecnologia USP/ Instituto Butantan/IPT, Universidade de Säo Paulo, Säo Paulo, 2007.

141. Blocker D. Cellular uptake of the Clostridium perfringens binary iota- toxin / D. Blocker, J. Behlke, K. Aktories, H. Barth // Infect. Immun. - 2001. - 69-P. 2980-2987.

142. Brandi, V. B. Desenvolvimento e análises de valida?äo de metodologias para o controle de processo de purifica?äo e fabrica?äo de vacinas contra Clostridium perfringens tipo D. 2007. 160 f. Tese. (Doutorado em Biotecnologia) - Programa de P0s-Gradua?äo Interunidades em Biotecnologia USP/ Instituto Butantan/IPT, Universidade de Säo Paulo, Säo Paulo, 2007.

143. Bradley G. Stiles 1,*, Gillian Barth 2, Holger Barth 3 and Michel R. Popoff Clostridium perfringens Epsilon Toxin: A Malevolent Molecule for Animals and Man? Toxins 2013, 5, 2138-2160; doi:10.3390/toxins5112138

144. Brasil. Ministério da Agricultura. Portaria n. 49, 12 de maio de 1997. Diário Oficial da Uniäo, Brasilia, 16 de maio de 1997. Se?äo 1:10168-10169.

145. Cole, A.R.; Gibert, M.; Popoff, M.R.; Moss, D.S.; Titball, R.W.; Basak, A.K. Clostridiumum perfringens epsilon-toxin shows structural similarity to the pore-forming toxin aerolysin. Nat. Struct. Mol. Biol. 2004, 11, 797-798

146. Ceci L. Haemorrhagic bowel syndrome in dairy cattle: possible role of Clostridium perfringens type A in the disease complex / L. Ceci, P. Paradies, M. Sasanelly, D. de Caprariis, F. Guarda // J. Vet. Med. - 2006. - 53 - P. 518-523.

147. Clarkson MJ, Faull W B and Kerry J B 1985 Vaccination of cows with clostridial antigen and passive transfer of clostridial antibodies from bovine clostrum to lambs. //Veterinary Record. 116: 467- 469.

148. Chen J. Epsilon-Toxin production by Clostridium perfringens type D strain CN3718 is dependent upon the age operon but not the VirS/VirR two- component regulatory system / J. Chen, J.I. Rood, B.A. McClane // mBio. - 2011. -2-6-P. 1-11.

149. Daube G. Typing Clostridium perfringens by in vitro amplification of toxin genes / G. Daube, B. China, P. Simon, K. Hvala, J. Mainil // J. Appl. Bacteriol. - 1994. - 77 -P. 650-655.

150. Dray T 2004 Clostridium perfringens type A and beta2 toxin associated with enterotoxaemia in a 5-week-old goat. //Canadian Veterinary Journal 45: 251-253.

151. Donelli, G.; Fiorentini, C.; Matarrese, P.; Falzano, L.; Cardines, R.; Mastrantonio, P.; Payne, D.W.; Titball, R.W. Evidence for cytoskeletal changes secondary to plasma membrane functional alterations in the in vitro cell response to Clostridium perfringens epsilon-toxin. //Comp. Immunol .Microbiol. Infect. Dis. 2003, 26, 145-156.

152. Duncan C L, Rokos E A, Christenson C M and J I Rood 1978 Multiple plasmids in different toxegenic types of Clostridium perfringes: possible control of beta- toxin production. D. Schlessinger (ed.), Microbiology - American Society for Microbiology, Washington, D. C. p. 246-248.

153. Duncan C L and Strong D H 1968 Improved medium for sporulation of Clostridium perfringens. //Applied Environmental Microbiolgy.16: 82-89.

154. Dutta G N and Devriese L A 1980 Susceptibility of Clostridium perfringens of animal origin to fifteen antimicrobial agents. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. 3:227-236.

155. Ebert E, Kusch M, Oppling VV, Werner E and Cussler 1996. An in vitro alternative to the mouse neutralization assay for potency testing of beta toxoid containing Clostridium perfringens type B and type C vaccines for veterinary use. //Altex, 13: 68-75.

156. Ebert E, Oeppling V, Werner E, et al. Development and prevalidation of two different ELISA systems for the potency testing of Clostridium perfringens ß- and -toxoid containing veterinary vaccines. FEMS Immunology and Medical Microbiology 1999; 24:299-311.

157. Ebert E. Gesetzlich vorgeschriebene Tierversuche zur Wirksamkeitsprüfung von Clostridium perfringens - Immunpräparaten: Entwicklung und Prävalidierung von Alternativmethoden [dissertation]. Frankfurt am Main: J.W. Goethe-Universität; 1998.-p.140.

158. El Idrissi, A.H., Ward, G.E.: Evaluation of enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of Clostridium perfringens enterotoxemias. Vet. Microbiol., 1992; v. 31, n. 4, p. 389-396

159. El Idrissi, AH.; Ward, GE. Development of double sandwich ELISA for Clostridium perfringens beta and epsilon toxins. Vet. Microbiol., v.31, p.89-99, 1992a.

160. EDQM (2007a). Procedure for Application of Article 82 for Official Control Authority Batch Release of Immunological Veterinary Medicinal Products in the European Community. http://www.edqm.eu/en/veterinary-biologicals-ocabrobpr-634.html

161. EDQM (2007b). Official Control Authority Batch Release for Immunological Veterinary Medicinal Products: Product Specific Guidelines. http://www.edqm.eu/en/veterinary-biologicals-ocabrobpr-634.html

162. European Pharmacopoeia, 1998: Monographs on clostridial vaccines and sera

163. European Pharmacopoeia. Vaccinum Clostridia perfringentis ad usum veterinarium. 3. ed. Sainte Ruffine: Maisonneuve, 1998. p.363

164. Canard B. Genomic diversity and organisation of virulence genes in the pathogenic anaerobe Clostridium perfringens / B. Canard, B. Saint-Joanis, S.T. Cole // Mol. Microbiol. - 1992. - 6 - P. 1421-1429.

165. Cussler, K. (1997) Development of alternative methods for the testing of clostridial vaccines in Germany. Pharmeuropa Bio 1, (Special Issue) 17-19.

166. Ewoldt J.M. Determination of the effect of single abomasal or jejunal inoculation of Clostridium perfringens type A in dairy cows / J.M. Ewoldt, D.E. Anderson // Can. Vet. J. - 2005. - 46 - P. 821-824.

167. Fernandez-Miyakawa M.E. Both Epsilon-Toxin and Beta-Toxin are important for the lethal properties of Clostridium perfringens type B isolates in the mouse intravenous injection model / M.E. Fernandez-Miyakawa, D.J. Fisher, R. Poon, S. Sayeed, V. Adams, J.I. Rood, B.A. McClane, F.A. Uzal // Infection and Immunity. - 2007. - V.75 , №3 - P. 1443-1452.

168. Fernandez-Miyakawa M.E. Development and application of an oral challenge mouse model for studying Clostridium perfringens type D infection / M.E. Fernandez-Miyakawa, S. Sayeed, D.J. Fisher, R. Poon, V. Adams, J.I. Rood, B.A. McClane, J. Saputo, F.A. Uzal // Infection and Immunity. - 2007. -V. 75, № 9 - P. 4282-4288.

169. Fernandez-Miyakawa M.E. Lethal effects of Clostridium perfringens epsilon toxin are potentiated by alpha and perfringolysin-O toxins in a mouse model / M.E. Fernandez-Miyakawa, B.H. Jost, S.J. Billington, F.A. Uzal // NIP-PA Author Manuscript. - 2009. - 127 - P. 379-385.

170. Ferrarezi M.C. Genotyping of Clostridium perfringens isolated from calves with neonatal diarrhea / M.C. Ferrarezi, T.C. Cardoso, I.S. Dutra // Anaerob. -2008.- 14-P. 328-331.

171. Fisher DJ. Association of beta2 toxin production with Clostridium perfringens type A human gastrointestinal disease isolates carrying a plasmid enterotoxin gene /

D.J. Fisher, K. Miyamoto, B. Harrison, S. Akimoto, M.R. Sarker // Mol. Mocrobiol.-2005. - 56 - P. 747-762.

172. Galen, J.E.; Ketley, J.M.; Fasano, A.; Richardson, S.H.; Wasserman, S.S.; Kaper, J.B. Role of Vibrio cholerae neuraminidase in the function of cholera toxin. // Infect. Immun.- 1992, 60.-p. 406-415.

173. Grabowska, K., Wang, X., Jacobsson, A. and Dillner, J. Evaluation of cost-precision rations of different strategies for ELISA measurement of serum antibody levels. // J. Immunol. Methods, 2002. - 271, 1-15.

174. Green, D. S., Green, M. J., Hillyer, M.H. and Morgan, K. L. Injection site reactions and antibody response in sheep and goats after the use of multivalent clostridial vaccine. // Vet. Rec. -1987. -120: 435-439.

175. Gregory, L., et al., Carbúnculo Sintomático: Ocorrencia, evolu?äo clínica e acompanhamento da recupera?äo de bovino acometido de "manqueira", Instituto Biológico, Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal, Säo Paulo, SP, Brasil, v.73, n.2, p.243-246,abr./jun., 2006 [On Line] Disponível em: < www.biologico.sp.gov.br >acesso em 29 de Agosto de 2007

176. Goldstein J. Clostridium perfringens Epsilon Toxin increases the small intestinal permeability in mice and rats / J. Goldstein, W.E. Morris, C.F. Loidl, C. Tironi-Farinatti, B.A. McClane, F.A. Uzal, M.E. Fernandez- Miyakawa // Plos ONE. - 2009. -4 - 9 - P. 1 -11.

177. Gurjar A. Characterization of Toxin Plasmids in Clostridium perfringens type C isolates / A. Gurjar, J. Li, B.A. McClane // Infection and Immunity. - 2010. - 78 - 11 - P. 4860-4869.

178. Gurjar A.A. Expression, crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of recombinant Clostridium perfringens ß2-toxin / A.A. Gurjar,N.H. Yennawar, H.P. Yennawar, K.R. Rajashankar, N.V. Hegde, B.M. Jayarao // Acta Cryst. - 2007. - 63 - P. 484-487.

179. Gurtner C. Rapid cytopathic effects of Clostridium perfringens Beta- Toxin on porcine endothelial cells / C. Gurtner, F. Popescu, M. Wyder, E. Sutter, F. Zeeh, J. Frey, C. von Schubert, H. Posthause // Infection and Immunity. - 2010. -78-7-P. 2966-2973.

180. Fennessey, C.M.; Sheng, J.; Rubin, D.H.; McClain, M.S. Oligomerization of Clostridium perfringens epsilon toxin is dependent upon caveolins 1 and 2. //PLoS One 2012, 7, e46866. Toxins 2013, 5 2157 Finney DJ. Statistical methods in biological assay 3rd ed. London: Charles Griffin; 1978.

181. Kirkwood TBL. Geometric means and measures of dispersion. // Biometrics 1979.-V. 35.-P.908-910

182. Frame, Nottingham. Iwaki, M.; Horiuchi, Y.; Komiya, T.; Fukuda, T.; Arakawa, Y.; Takahashi, M. Toxoid Floculatio Assay by Laser Light-Scattering. // Journal of Immunological Methods.-2007.- v. 10, № 318.- p. 138-146.

183. Harkness, J.M.; Li, J.; McClane, B.A. Identification of a lambda toxin-negative Clostridium perfringens strain that processes and activates epsilon prototoxin intracellularly. //Anaerobe.- 2012.-V.18.-P. 546-552.

184. Hatheway C.L. Toxigenic Clostridia / C.L. Hatheway // Clin. Microbiol. Rev. -1990. -V. 3 - P. 66-98.

185. Hunter S.E. Cloning and nucleotide sequence analysis of the Clostridium perfringens epsilon-toxin gene and its expression in Escherichia coli/ S.E. Hunter, I.N. Clarke, D.C. Kelly, R.W. Titball // Infect. Immun. - 1992. - V.60 -P. 102-110.

186. Ivany J. Determination of the role of Clostridium perfringens type A in intraluminal intestinal hemorrhage syndrom in dairy cows / J. Ivany, ^.E.Anderson, M.D. Miesner // Can. Vet. J. - 2001. - 14 - 3 - P. 2341-2348.

187. Jelinski M. The relationsgip between the presence of Helicobacter pylori, Clostridium perfringens type A, Campylobacter spp., or fungi and fatal abomasal ulcers in unweaned calves / M. Jelinski, R. Carl, M. Chirino-Trejo, M.Janzen // Can. Vet. J. -1995. - 36 - P. 379-382.

188. Jin, F.; Matsushita, O.; Katayama, S.; Jin, S.; Matsushita, C.; Minami, J.; Okabe, A. Purification, characterization, and primary structure of Clostridium perfringens

lambda-toxin, a thermolysin-like metalloprotease. // Infect. Immun. -1996.-V.64.-P. 230-237.

189. Lafont, F.; Abrami, L.; van der Goot, F.G. Bacterial subversion of lipid rafts. //Curr. Opin. Microbiol.- 2004.-V. 7.-P. 4-10.

190. Lebrun M. The expression of Clostridium perfringens consensus beta2-toxin is associated with bovine entrotoxaemia syndrome / M. Lebrun, P. Filee, B. Mousset, D. Desmecht, M. Galleni / Vet. Microbiol. - 2007. - V.120 - P. 151-157.

191. LEVINE, L.; WYMAN, L. The Flocculation Test and the Law of Mass Action. //The Journal of Immunology.-1965.- v. 94, №4.- p. 586-591.

192. Li J. Sialidases affect the host cell adherence and epsilon toxin- induced cytotoxicity of Clostridium perfringens type D strain CN3718 / J. Li, S. Sayeed, S. Robertson, // J. Chen, B.A. McClane // Plos ONE. - 2011. - 7 - 12 - P. 1-20.

193. Li, J.; Sayeed, S.; Robertson, S.; Chen, J.; McClane, B.A. Sialidases affect the host cell adherence and epsilon toxin-induced cytotoxicity of Clostridium perfringens type D strain CD3718. //PLoS Pathog.- 2011.-v. 7.- p. 1002429.

194. Lindstrom M. Novel insights into the epidemiology of Clostridium perfringens type A food poisoning / M. Lindstrom, A. Heikinheimo, P. Lahti, Korkeala // Food Microbiol. - 2011. - 28 - P. 192-198.

195. Lucken R, Daas A, Esposito-Farese ME. Collaborative study for the establishment of a European Pharmacopoeia Biological Reference Preparation for Clostridia antiserum for serological potency testing of clostridial vaccines for veterinary use. //Pharmeuropa Spec Issue Biol.- 2001.- Feb; 2000.-v.2.-p.65-87.

196. Makhareta, M. A. M. and Hammam, H. M. Application of enzyme linked immunosorbent assay for measuring the immunizing potential of Clostridium chauvoei antigens in multivalent clostridial vaccines. //6th Sci. Cong. Egypt. Soc. for cattle diseases.-2001. -p.1-10.

197. Mattar, M. A., Cortinas, T. I., and de Guzman, A. S. Immunogenic protein variations of Clostridium chauvoei cellular antigens associated with the culture growth phase. //FEMS Immunology and Medical Microbiology, 2002. -v. 33.-p. 9-14.

198. Miyamoto K, Li J, Sayeed S, Akimoto S, et al. Sequencing and diversity analyses reveal extensive similarities between some epsilon-toxin-encoding plasmids and the pCPF5603 Clostridium perfringens enterotoxin plasmid. //J.Bacteriol. -2008.-190.-p. 7178-7188

199. Miyata, S.; Matsushita, O.; Minami, J.; Katayama, S.; Shimamoto, S.; Okabe, A. Cleavage of a C-terminal peptide is essential for heptamerization of Clostridium perfringens epsilon-toxin in the synaptosomal membrane. // J. Biol. Chem.- 2001.-v. 276.-P. 13778-13783.

200. Miyata, S.; Minami, J.; Tamai, E.; Matsushita, O.; Shimamoto, S.; Okabe, A. Clostridium perfringens epsilon-toxin forms a heptameric pore within the detergent-insoluble microdomains of Madin-Darby canine kidney cells and rat synaptosomes. //J. Biol. Chem.- 2002.-V.277.-P. 39463-39468.

201. Nagahama, M.; Itohayashi, Y.; Hara, H.; Higashihara, M.; Fukatani, Y.; Takagishi, T.; Oda, M.;Kobayashi, K.; Nakagawa, I.; Sakurai, J. Cellular vacuolation induced by Clostridium perfringens epsilon-toxin. // FEBS J. -2011.-V. 278.-P. 33953407.

202. Petit, L.; Maier, E.; Gibert, M.; Popoff, M.R.; Benz, R. Clostridium perfringens epsilon toxin induces a rapid change of cell membrane permeability to ions and forms channels in artificial lipid bilayers. // J. Biol. Chem.- 2001.-V. 276.-P. 15736-15740

203. Petit L. Cl.perfringens toxinotype and genotype /L. Petit, M. Gibert, M.R. Popoff//Trends Microb.-1999.-7.-P. 104-110.

204. Petit L. Clostridium perfringens Epsilon-Toxin acts on MDCK cells by forming a large membrane complex / L. Petit, M. Gibert, D. Gillet, C. Laurent-Winter, P. Boquet, M.R. Popoff// Journal of Bacteriology. - 1997. - 179 - 20 - P. 6480-6487.

205. Petit, L.; Gibert, M.; Gourch, A.; Bens, M.; Vandewalle, A.; Popoff, M.R. Clostridium perfringens epsilon toxin rapidly decreases membrane barrier permeability of polarized MDCK cells. // Cell. Microbiol.- 2003.-V. 5.-P. 155-164.

206. Petit, L.; Gibert, M.; Henri, C.; Lorin, V.; Baraige, F.; Carlier, J.P.; Popoff, M.R. Molecular basis of the activity of Clostridium perfringens toxins. Curr. Topics Biochem. Res. -1999.-№1.-P. 19-35.

207. Nagahama M. Biological activities and pore formation of Clostridium perfringens beta toxin in HL 60 cells / M. Nagahama, S. Hayashi, S. Morimitsu, J. Sakurai // J. Biol. Chem. - 2003. - 278. - P. 36934-36941.

208. Nagahama M. Characterization of the enzymatic component of Clostridium perfringens Iota-Toxin / M. Nagahama, Y. Sakaguchi, K. Kobayashi, S. Ochi, J. Sakurai // Jour. Bacter. - 2000. - 182 - 8 - P. 2096-2103.

209. Nagahama M. Clostridium perfringens beta-toxin is sensitive to thiol- group modification but djes not require a thiol group for lethal activity / M. Nagahama, A. Kihara, T. Miyawaki, M. Mukai, Y. Sakaguchi // Biochim. Biophys. Acta. - 1999. -1454 - P. 97-105.

210. Nagahama M. Clostridium perfringens Iota-Toxin b induces rapid cell necrosis / M. Nagahama, M. Umezaka, M. Oda, K. Kobayashi, S. Tone, T. Suda, K. Ishidoh, J. Sakuria //Infect. Immun. - 2011. - 79 - 11 - P. 4353-4360.

211. Odendaal, M. W. Purification of the alpha toxin of Clostridium perfringens type A by ultra filtration and gel chromatography. Onderstepoort J. Vet. Res.-1987.-v.54.-p.39-43

212. Orlans, E. S.; Richards, C. B.; Jones, V. E. Clostridium welchii epsilontoxin and antitoxin. Immunology.-1960.- v. 3, p. 28-44.

213. Rahman M. S., B. K. Baek, S. T. Hong, J. H. Lee Antibody responses in buffalos immunized with Clostridium perfringens beta and epsilon toxoids Vet. Med. - Czech, 46, 2001.- №9-10.-P.241-243

214. RAMON, G. A. propos du titrage in vitro du sérum antidiphtérique par la flocculation. Compt Rend Soc Biol.-1922.- v. 86.- p. 813-815.

215. Revista Brasileira de Ciências Farmacéuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 40, n. 2, abr./jun., 2004 Large scale purification of Clostridium perfringens toxins: a review

216. Rosskopf-Streicher, U., P. Volkers, and E. Werner. 2004. Control of Clostridium perfringens vaccines using an indirect competitive ELISA for the epsilon toxin component—examination of the assay by a collaborative study. Pharmeuropa Biol. 2003:91-96.

217. Rosskopf-Streicher, U., Volkers, P., Noeske, K., Werner, E. (2004) Quality Assurance of C. perfringens Epsilon Toxoid Vaccines - ELISA Versus Mouse Neutralisation Test. // ALTEX, Suppl. Linz 03/2004: 65-69

218. PARREIRAS, P.M. et al. Production and purification of epsilon prototoxin produced by Clostridium perfringens type D. // Arquivos Brasileiros de Medicina Veterinária e Zootecnia.-2002.- v.54.- p.328-330

219. Payene, D.W. et al. Evaluation of a new cytotoxicity assay for Clostridium perfringens type D epsilon toxin. // FEMS Microbiology Letters.-1994.-v. 116.- p.161-168.

220. Percival D.A. Anti-Idiotypic antibody-induced protection against Clostridium perfringens type D / D.A. Percival, A.D. Shuttleworth, E.D. Williamson, D.C. Kelly // Infect. Immun. - 1990. - 58 - 8 - P. 2487-2492.

221. Sakurai J. Clostridium perfringens Iota-Toxin: structure and function / J. Sakurai, M. Nagahama, M. Oda, H. Tsuge, K. Kobayashi // MDPI. J. - 2009. - 1-P. 208-228.

222. Sakurai J. Purification of Beta-Toxin from Clostridium perfringens type C / J. Sakurai, C.L. Duncan // Infect. Immun. - 1977. - 18 - 3 - P. 741-745. Gardner, D.E. Pathology of Clostridium welchii type D enterotoxaemia. 3. Basis of the hyperglycaemic response. J. Comp. Pathol. 1973-V. 83.-P.525-529.

223. Sebald, M., J. C. Petit. 1997. Laboratory methods. Anaerobic bacteria and their identification. // Institut Pasteur, Paris.- pp. 161.

224. Sojka, M.G, V.J. White, C.J. Thorns, P.L. Roeder. The detection of Clostridium perfringens epsilon antitoxin in rabbit serum by monoclonal antibody based competition ELISA. // J. Biol. Stand. -1989.-V.17.-P. 117-124

225. Soler-Jover A., Dorca J, Popoff M.R., Gibert M., et al. Distribution of Clostridium perfringens epsilon toxin in the brains of acutely intoxicated mice and its effect upon glial cells. // Toxicon.-2007.-V.50.-P. 530-540

226. Smedly J.G. The enteric toxins of Clostridium perfringens / J.G. Smedly, D.J. Fisher, S. Sayeed, G. Chakrabarti, B.A. McClane // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. - 2004. - 152 - P. 183-204.

227. Songer J.G. Clostridial abomasitis in calves: Case report and review of the literature / J.G. Songer, D.W. Miskimins // Anaerob. - 2005. - 11 - P. 290-294.

228. Songer J.G. Clostridial enteric diseases of domestic animals / J.G. Songer // Clin. Microbiol. Rev. - 1996. - 9 - P. 216-234.

229. Songer J.G. Enteric Clostridia / J.G. Songer, C.L. Gyles, J.F. Prescott, C.O. Thoen // Pathogenesis of bacterial infection in animals. - 2010. - 4. - P. 211218.

230. Songer J.G. Histotoxic Clostridia / J.G. Songer, C.L. Gyles, J.F. Prescott, C.O. Thoen // Pathogenesis of bacterial infection in animals. - 2010. -4.-P. 203-204.

231. Stephen, J. The isolation of the alpha-toxin of C. welchii type A by zone electrophoresis in vertical columns. // Biochem. J.-1961.- v. 80.- p. 578-584.

232. Stiles B.G. Purification and characterization of Clostridium perfringens Iota toxin: Dependence on two nonlinked proteins for biological activity / B.G. Stiles, T.D. Wilkins // Infect. Immun. - 1986. - 54 - 3 - P. 683-688.

233. Spaun, J.; Lyng, J. Replacement of the international Standard for Tetanus Antitoxin and the use of Standard in the Flocculation Test. Bull. Organisation Mondiale de La Sante.-1970.- v. 42, №. 4.- p. 523-534.

234. Tamai, E.; Ishida, T.; Miyata, S.; Matsushita, O.; Suda, H.; Kobayashi, S.; Sonobe, H.; Okabe, A. Accumulation of Clostridium perfringens epsilon-toxin in the

mouse kidney and its possible biological significance. // Infect. Immun. -2003.-V. 71.-P. 5371-5375.

235. Titball R.W. The Clostridium perfringens alpha-toxin / R.W. Titball, C.E. Naylor, A.E. Basak // Anaerobe. - 1999. - 5 - P. 51-64.

236. USDA. United States Department of Agriculture). In: CODE of Federal Regulations Part 3. Washington: United States Department of Agriculture; 2006.- p. 618-748.

237. Uzal F.A., Glastonbury J.R.W., Kelly W.R. & Thomas R. 1997. Caprine enterotoxaemia associated with cerebral microangiopathy. // Vet. Rec. 141:224-226.

238. Uzal, F.A.; Songer, J.G. Diagnosis of Clostridium perfringens intestinal infections in sheep and goats. // J. Vet. Diagn. Invest. -2008, 20, 253-265.

239. Uzal, F.A.; Pasini, I.; Olaechea, F.V.; Robles, C.A.; Elizondo, A. An outbreak of enterotoxaemia caused by Clostridium perfringens type D in goats in Patagonia. // Vet. Rec. 1994, 135, 279-280.

240. Uzal F.A. Development and application of new mouse model to study the pathogenesis of Clostridium perfringens type C enterotoxemias / F.A. Uzal, J. Saputo, S. Sayeed, J.E. Vidal, D.J. Fisher, R. Poon, V. Adams, M.E. Feraandez- Miyakawa, J.I. Rood, B.A. McClane // Infection and Immunity. - 2009. - 77 - 12 -P. 5291-5299.

241. Uzal F.A. Recent progress in understending the pathogenesis of Clostridium perfringens type C infections / F.A. Uzal, B.A. McClane // Vet. Microbiol.-2011.- 153-P. 37-43.

242. Uzal, F.A., K. Nielsen, W.R. Kelly. Detection of Clostridium perfringens type D epsilon antitoxin in serum of goats by competitive and indirect ELISA. // Vet. Microbiol. 1997. -57.-P. 223-231.

243. Uzal F.A. and Kelly W.R. Enterotoxaemia in goats: a review. // Veterinary Research Communications. -1996.-P.1-100.

244. Van Kruiningen H.J. Clostridial abomasal disease in Connecticut dairy calves / H.J. Van Kruiningen, C.A. Nyaoke, I.F. Sidor, J.J. Fabis, L.S. Hinckley, K.A. Lindell // CVJ. - 2009. - 50 - P. 857-860.

245. Vance H.N. Clostridium perfringens as a pathogen of cattle: a literature review / H.N. Vance // Can. J. comp. Med. Vet. Sei. - 1967. - 31 - P. 248-250.

246. Vidal J.E. Effects of Clostridium perfringens Beta-Toxin on the rabbit small intestine and colon / J.E. Vidal, B.A. McClane, J. Saputo, J. Parker, F.A. Uzal // Infection and Immunity. - 2008. - 76 - 10 - P. 4396-4404.

247. Weiss, H. E.; WEISS, H. Nachweiss von Clostridium botulinum-Toxin mittels Mikro-Wärmekomplementbindungsreaktion. // Tierärztl.-1988.- v. 43.- p. 117-126.

248. Weisser K, Hechler U. Animal Welfare Aspects in the Quality control of Immunobiologicals - A critical evaluation of the animal tests in pharmacopoeial monographs. Frame; 1997.

249. WeiMer, K. and Hechler, U. (1997) Animal Welfare Aspects in the Quality Control of Immunobiologicals: A Critical Evaluation of the Animal Tests in Pharmacopoeia Monographs.

250. Wood, K. R. An alternative to the toxin neutralization assay in mice for the potency testing of the Clostridium tetani, Clostridium septicum, Clostridium novyi type B, and Clostridium perfringens type D epsilon components of multivalent sheep vaccines. // Biologicals.1991. - 19 (4): 281-286.

251. WORTHINGTON, R. W.; MÜLDERS, M.S.G.; VAN RENSBURG, J. J. Clostridium perfringens type D epsilon prototoxin. Some chemical, immunological and biological properties of a highly purified prototoxin. // Onderstepoort J. Vet. Res., v. 40, n. 4, p. 145- 152, 1973.

252. WORTHINGTON, R. W.; MÜLDERS, M. S. G. The partial purification of Clostridium perfringens beta toxin. Onderstepoort J. Vet. Res., v. 42, n. 3, p. 91-98, 1975.

253. Winsnes, R. and Hendriksen, C. (2001). Collaborative studies for the validation of serological methods for potency testing of tetanus toxoid vaccines for human use.

Pharmeur. Spec. Issue Biol. 2000-2, 1-92.

254. Wioland, L.; Dupont, J.L.; Bossu, J.L.; Popoff, M.R.; Poulain, B. Attack of the nervous system by Clostridium perfringens epsilon toxin: From disease to mode of action on neural cells.-Toxicon.- 2013, 75, 122-135.

255. Winsnes, R., Sesardic, D., Daas, A., and Behr-Gross, M.-E. (2003). Collaborative study for the validation of serological methods for potency testing of diphtheria toxoid vaccines - part 1. Pharmeur. Bio.- 2003-2.-P. 35-68.

256. Winsnes, R., Sesardic, D., Daas, A., and Behr-Gross, M.-E. Collaborative study for the validation of serological methods for potency testing of diphtheria toxoid vaccines - part 2. // Pharmeur. Bio .-2006-1.-P. 73-80.

257. Winsnes, R., Sesardic, D., Daas, A., et. al. (2009). Collaborative study on a guinea pig serological method for the assay of acellular pertussis vaccines. // Pharmeur. Bio Sci. Notes.- 2009-V.1.-P. 27-40.

258. Wood, D. and Heath, A. Collaborative study for the establishment of a rat bioassay for inactivated poliomyelitis vaccine. Pharmeur. // Spec. Issue Biol. 2000-V.1.-P. 23-49.