Количественная оценка гликопротеина в вакцинах против бешенства методом иммуноферментного анализа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Дяченко Сергей Александрович

• Дяченко Сергей Александрович
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Дяченко Сергей Александрович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация, структура и свойства вируса бешенства

1.1.1. Классификация лиссавирусов

1.1.2. Морфология и структура вируса бешенства

1.1.3. Репродукция вируса

1.2. Эпизоотологические особенности

1.3. Диагностика бешенства

1.3.1. Метод флюоресцирующих антител

1.3.2. Выделение вируса бешенства как метод диагностики

1.3.3. Серологические методы диагностики

1.4. Профилактика бешенства

1.4.1. Вакцины против бешенства

1.4.2. Типы вакцин против бешенства, используемые в ветеринарии

1.4.3. Адъюванты для вакцин против бешенства

Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1. Материалы

2.1.1.1. Вирусы

2.1.1.2. Культуры клеток

2.1.1.3. Референтные сыворотки и вакцины

2.1.1.4. Экспериментальные животные

2.1.1.5. Адъюванты

2.1.1.6. Среды и растворы

2.1.1.7. Реагенты

2.1.1.8. Оборудование

2.1.2. Методы

2.1.2.1. Культивирование вируса бешенства

2.1.2.2. Титрование в культуре клеток

2.1.2.3. Определение инфекционной активности

2.1.2.4. Титрование вируса на белых беспородных мышах

2.1.2.5. Инактивация вируса

2.1.2.6. Определение контаминации бактериальной и грибной микрофлорой

2.1.2.7. Определение контаминации вакцины микоплазмами

2.1.2.8. Антигенные свойства

2.1.2.9. Определение титра антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотках крови животных методом БЛУК

2.1.2.10. Считывание и интерпретация результатов опытов

2.1.2.11. Определение иммуногенной активности вакцины методом МЫ

2.1.2.12. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка тест-системы на основе «сэндвич»-варианта ИФА с использованием моноклональных антител для определения гликопротеина вируса в различных биологических системах

3.1.1.Конструирование оптимальной композиции тест-системы

3.1.2.Оценка качества ИФА тест-системы по основным валидационным

характеристикам

3.1.3.Интервал иммуноферментной тест-системы для определения

количества гликопротеина

3.2. Оценка метода построения калибровочной кривой для количественного определения гликопротеина вируса бешенства в «сэндвич»-варианте иммуноферментного анализа

3.2.1. Анализ результатов тестирования опытно-промышленных

образцов вакцин против бешенства методом ИФА и методом ЖН

3.3. Изготовление экспериментальных серий инактивированной вакцины против бешенств, оценка их активности и специфичности

3.3.1. Апробация метода ИФА при разработке технологии изготовления инактивированной вакцины против бешенства

3.3.2. Апробация метода ИФА при отработке технологических параметров культивирования вакцинного вируса бешенства с целью получения наибольшего выхода целевого белка-гликопротеин

3.3.3. Апробация метода ИФА при отработке технологических режимов концентрирования вируссодержащей жидкости

3.3.4.Разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против бешенства с новым иммуностимулирующим комплексом

3.4. Эффективность применения тест-системы на основе «сэндвич»-варианта ИФА для оценки иммуногенности вакцин против бешенства

3.4.1.Применение метода ИФА для контроля сохранности вакцины

против бешенства

3.4.2.Определение количества гликопротеина в опытно-промышленных

образцах вакцин против бешенства с гидроксидом алюминия

3.4.3.Определение количества гликопротеина в зарубежной вакцине

против бешенства

3.4.4.Определение гликопротеина в опытно-промышленных образцах

вакцин против бешенства

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Количественная оценка гликопротеина в вакцинах против бешенства методом иммуноферментного анализа»

ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность темы. Повышение эффективности производства биопрепаратов, в том числе вакцин против бешенства, является актуальной задачей XXI века (Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., 2000). Напряжённая эпизоотическая ситуация по бешенству в РФ требует разработки вакцин нового поколения, обладающих высокой иммуногенной активностью. В связи с этим весьма актуальными представляются исследования, направленные на разработку и применение экспресс-метода оценки активности вакцин против бешенства на основе иммуноферментного анализа.

Производство вакцин это сложный и длительный технологический процесс, требующий постоянного контроля на различных его этапах. В настоящее время нормативные документы предусматривают оценку подлинности и специфичности биопрепаратов в опытах на животных, что требует длительного времени, позволяя проводить дифференцировку серий вакцины с низким ТЦД50 (50%-тканевая цитопатическая доза) до проведения заключительных этапов производства - лиофильной сушки и упаковки вакцины. Установление низкой биологической активности вакцинного препарата исключает его из применения. Повышение качества биологических препаратов, эффективности их производства и экологическая безопасность является актуальной задачей.

Производству биопрепаратов против бешенства и оценке их эффективности посвящены научные работы многих отечественных исследователей (Вагабов Р.М.,1969; Селимов М.А., 1978; Сафаров Р.К., Кузнецов П.П. и Иванов В.С.,1972-2009; Бучнев К.Н.,1985; Сафонов Г.А.,1991; Грибенча С.В., 1993; Никишин И.В., Жестерев В.И. и др.,1997; Недосеков В.В.,1998; Луницин А.В,2001; Красуткин С.Н., 2002; Сливко И.А., 2003; Ковалёв Н.А. и др., 2009; Гулюкин А.М., Рахманин П.П., 2010; Грибова И.Ю., Верховская Л.В. и др., 2011; Самуйленко А.Я., 2014).

Степень разработанности проблемы. По данным многих исследователей содержание гликопротеина вируса бешенства коррелирует с иммуногенностью антирабических вакцин (8-й доклад ВОЗ, 1994; Недосеков В.В., 1998; QiquetF.,2006-2008; Лосич М.А,2011, HervijnenV.R.,2011).

Для оценки иммуногенной активности испытуемых инактивированных антирабических вакцин использовали «сэндвич»-вариант ИФА, результаты которого выражали в международных единицах (ME). Титром испытуемых вакцин считали конечные положительные разведения, с оптической плотностью выше 0,2 и контроля в > 2,1 раза. При сенсибилизации твёрдой фазы смесью моноклональных антител и использовании для выявления связавшегося антигена пероксидазного конъюгата на основе поликлональных антител метод позволял обнаружить гликопротеин вируса бешенства в инактивированных вакцинах в титре до 1:160-320, что соответствовало 0,0063-0,0031 МЕ. Коэффициент корреляции результатов, полученных при тестировании вакцин методом ИФА и тестом ЖН, составлял 0,95 (Недосеков В.В.,1998).

Имеются сообщения о разработке иммуноферментной тест-системы на основе пары моноклональных антител (МкА) для оценки содержания гликопротеина (О-белка) вируса бешенства в нг/мл (Грибенча С.В.,2012). Установлено, что препараты с титром в ИФА > 1:160 обладали иммуногенной активностью > 1 МЕ/см (Лосич М.,2014).

Предложен способ определения иммуногенной активности инактивированных антирабических вакцин с использованием калибровочной кривой, отличающийся тем, что определение иммуногенной активности осуществляют путём сравнения поствакцинального титра антирабических антител, полученного после введения мышам пяти разведений референс-вакцины и исследуемой вакцины с использованием разработанного шаблона [Шкггова А. П., 2015 (Украина)].

Наши исследования и полученные результаты расширяют возможности практического использования «сэндвич»-варианта ИФА для количественного определения гликопротеина вируса в вакцинах против бешенства.

1.2. Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась разработка метода иммуноферментного анализа для оценки активности вакцин против бешенства с применением компьютерного обеспечения.

Для достижения указанной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать тест-систему на основе «сэндвич»-варианта ИФА для определения гликопротеина вируса в различных биологических системах с использованием компьютерной программы статистической обработки результатов;

- оценить методы построения калибровочной кривой для количественной оценки гликопротеина вируса бешенства в «сэндвич»-варианте иммуноферментного анализа;

- приготовить экспериментальные серии инактивированной вакцины против бешенства на основе штамма «Щёлково-51» и иммуностимулирующего комплекса, оценить их активность и специфичность;

- изучить эффективность практического применения тест-системы на основе «сэндвич»-варианта ИФА для оценки иммуногенности вакцин против бешенства, в том числе в процессе хранения.

1.3. Научная новизна. Впервые показана принципиальная возможность применения «сэндвич»-варианта ИФА для оценки подлинности, полноты сорбции и экспрессного слежения за целевым продуктом на этапах технологического процесса при производстве вакцины против бешенства.

Впервые в экспериментальных исследованиях с использованием образцов вакцины против бешенства для животных, на основе штамма «Щёлково-51» отработан метод определения иммуногенности, отличающийся тем, что количественная оценка гликопротеина вируса выражается в МЕ/см3 на основании регистрации сигнала оптической плотности разведения

исследуемого образца вакцины и проекции его показателей в калибровочную кривую, построенную по результатам оценки разведений стандартной эталонной референс-вакцины против бешенства с известным показателем

индекса иммуногенности.

Впервые для количественной статистической обработки результатов

иммуноферментного анализа и расчёта концентрации гликопротеина вируса бешенства в вакцинном сырье и готовых препаратах адаптирована современная компьютерная программа, которая по данным ИФА (значения оптической плотности в зависимости от концентрации титруемых биопрепаратов) в автоматическом режиме определяет активность испытуемого вакцинного материала относительно стандарта, доверительные интервалы этой активности, критерий линейности для графиков логарифмической зависимости оптической плотности от концентрации сравниваемых биопрепаратов. Показано, что наиболее точно природе существующих в ИФА зависимостей сигнал-концентрация соответствуют методы построения калибровочной кривой: преобразование «logit-log» и 4-параметрический логарифмический логистический метод («4РЬ»). Результаты, полученные с их помощью, имеют наименьшую вариабельность и высокую воспроизводимость. Учёт результатов ИФА стандартизован таким образом, что позволяет оценить содержание важного компонента в вакцинных биопрепаратах в МЕ/см . 1.4. Практическая значимость работы. Предложена иммуноферментная тест-система для контроля качества вакцинных препаратов в технологическом процессе изготовления инактивированной вакцины против бешенства животных и её хранения. Создание иммуноферментной тест-системы для количественной оценки специфической активности антирабической вакцины является важным звеном в разработке системы контроля вакцинных препаратов.

Компьютерная программа на основе преобразования «4РЬ» или «^й-^» рекомендуется для построения калибровочной кривой с целью

количественного определения гликопротеина вируса бешенства в «сэндвич»-варианте ИФА в «живом» и инактивированном, в сорбированном и несорбированном антигене, в материале органо-тканевого и культурального происхождения. Метод контроля субстанции вакцины по показателю «специфическая активность» с помощью разработанной ИФА тест-системы включён в проект «Опытно-промышленного регламента на производство инактивированной вакцины против бешенства из штамма «Щёлково-51», утверждённый директором ВНИТИБП 21.09.2015 г.

1.5 Методология и методы исследования. Методология проведённых исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно восприимчивых животных. В работе использовали культуральный и мозговой вирус бешенства, перевиваемые культуры клеток, стволовые клетки жировой ткани лошади, растворы и питательные среды, бактериологические среды, сыворотки, вирусологические (титрование, культивирование вируса) и серологические (ИФА, РН, РИФ, «^АУЖ», РДП) методы исследований.

1.6. Основные положения, выносимые на защиту.

- иммуноферментная тест-система для оценки содержания гликопротеина вируса в вакцинном сырье и её валидация;

- обработка результатов «сэндвич»-варианта ИФА с помощью элементов компьютерного обеспечения;

- практическое применение метода ИФА для оценки содержания гликопротеина в вакцинах против бешенства на различных этапах технологического процесса и хранения.

1.7. Апробация работы. Материалы диссертации доложены:

- на заседаниях Учёного совета ВНИТИБП, Щёлково, 2012-2015 гг.;

- на конференции, посвящённой 95-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина "Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии и биотехнологии",

Москва, 2014;

- на Международной научно-практической конференции, посвященной 55-летию ВНИИВВиМ «Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных»,01-02 октября, Покров, 2014 г.;

- на Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щёлково, 2014 г.;

- на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биотехнологии в аграрно-промышленном комплексе» 26-27 ноября 2015 г, Минск;

- на У Международном съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов ЕАЭС «Актуальные проблемы и инновации в современной ветеринарной фармакологии и токсикологии», 26-30 мая, Витебск, 2015 г.

- на выставке «Золотая осень-2015» получена серебряная медаль и диплом «За разработку и производство «Иммуноферментная тест-система для определения гликопротеина вируса бешенства в вирусвакцине, в культуральной жидкости и головном мозге животных»».

1.8. Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 3 работы в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов диссертаций.

1.9. Структура и объём диссертации. Материалы диссертации изложены на 127 страницах компьютерного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и данные о практическом использовании научных выводов, список использованной литературы включает 136 источников, в том числе 74 отечественных и 61 зарубежных. Работа содержит 9 таблиц, 25 рисунков, 4 страницы приложений.

1.10. Достоверность результатов исследований подтверждается соответствием теоретических данных с полученными результатами

экспериментов и лабораторных испытаний. Экспериментальные данные, выводы и рекомендации основаны на общепринятых теоретических закономерностях, не противоречат и с достаточной степенью точности согласуются с общеизвестными данными, апробированы и подтверждены эффективным применением.

1.11. Личный вклад. Основная часть диссертационной работы выполнена автором самостоятельно. Отдельные опыты проведены с участием сотрудников отдела молекулярной биологии и вирусологии, за что автор выражает им искреннюю благодарность. Диссертант выражает благодарность за консультативную помощь сотрудникам института д.б.н., профессору Клюкиной В.И. и д.б.н., профессору Кузнецовой С.В., а также руководителю ООО «Файзеркрафт» А.Б. Майборода (г. Москва) и сотрудникам сторонних организаций, причастных к настоящей работе.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Классификация, структура и свойства вируса бешенства

Вирус бешенства - единственный из царства Vira поражает млекопитающих, человека, в глобальном масштабе с летальностью 100% [10,11,15].

По оценке Всемирной Организации Здравоохранения, бешенство входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший социальный и экономический ущерб [7].

Репродукция вируса бешенства в центральной нервной системе -свидетельство высшей специализации не только среди рабдовирусов [1,2]. Глобальный характер распространения и многогастальность рабической инфекции привели к формированию большого разнообразия вариантов вируса бешенства (ВБ): бешенство лис, собак, арктическое бешенство, бешенство скунсов, енотов, мангуст, летучих мышей и другие, а также их биологических субвариантов [11].

По классификации Международного Комитета по таксономии вирусов, вирус бешенства (ВБ), относится к порядку Mononegavirales, семейства Rhabdoviridae, роду Lyssavirus [80,129]. 1.1.1 Классификация лиссавирусов

Недавно род Lyssavirus охватывал 7 генотипов [77]. Первый генотип включает вирусы классического бешенства (ВБ), обозначенные как штаммы уличного (дикого) ВБ (в т. ч. вирусы «дикования», или «арктического бешенства»), выделенные от наземных млекопитающих, насекомоядных, плодоядных и кровососущих летучих мышей, а также фиксированные (вакцинные) ВБ [30]. Эти вирусы широко распространены в Европе, Азии, Северной и Южной Америке, а также Африке. 2-й генотип - Лагос-Бат -включает вирусы, выделенные от плодоядных летучих мышей, собак и кошек в Центральной и Южной Африке [92, 94]. Пока нет информации о патогенности этих вирусов для человека. 3-й генотип - Мокола - выделен от землероек, человека, собак и кошек в Центральной и Южной Африке. У вируса Мокола основной хозяин неизвестен. 4-й генотип - Дувенхейдж - выделен от человека, укушенного летучей мышью, и летучих мышей в ЮАР и Зимбабве. 5-й генотип - лиссавирус европейских летучих мышей 1-го типа циркулирует в Европе, в т. ч. в европейской части России. В России вирус был выделен от 11-летней девочки, укушенной в губу летучей мышью [80]. 6-й генотип - лиссавирус европейских летучих мышей 2-го типа циркулирует в Европе, выделен также от человека в Финляндии и Шотландии. 7-й генотип - лиссавирус австралийских летучих мышей выделен также от 2 человек [11].

Кузьмин И.В., Ботвинкин А.Д., Полещук Е.М., внесли изменения в привычную таксономическую картину рода Lyssavirus [59,60,80]. Ими открыты 4 новых лиссавируса (Араван, Иркут, Худжанд и Западно-Кавказский лиссавирус летучих мышей (ЗКЛМ)), на территории бывшего СССР, а Кузьминым И.В. и др. [104,105,106] выявлен в Кении новый представитель рода лиссавирусов Shimoni bat virus. Показано, что эти вирусы, выделенные от

летучих мышей, отличаются друг от друга и от известных 7 генотипов, что привело в 2009 году к пересмотру таксономии рода Lyssavirus Международным Комитетом по Таксономии Вирусов (МКТВ) [43,95,131].

Согласно последнему решению международного комитета по таксономии вирусов (МКТВ), род Lyssavirus представлен видами (МКТВ признает только виды): Aravan virus, Australian bat lyssavirus, Duvenhage virus (DUVV), European bat lyssavirus, type 1 and 2, Irkut virus, Khujand virus, Lagos bat virus (LBV), Mokola virus (MOKV), Rabies virus (RABV), Shimoni bat virus (ShiBV) and West Caucazian bat virus (WCBV).

Филогенетические исследования - секвенирование G-белка и перекрёстные серологические реакции позволили разделить лиссавирусы на три филогенетические группы [114]. К первой филогруппе относятся следующие виды вирусов: вирус бешенства, Дувенхейдж, лиссавирус европейских летучих мышей 1 и 2 типа, лиссавирус австралийских летучих мышей, Араван, Иркут и Худжанг. Ко второй филогруппе - виды вирусов: Лагос бат, Мокола и Шимони бат вирус. К третьей филогруппе, относят Западно-Кавказский лиссавирус летучих мышей (ЗКЛМ). Для ЗКЛМ не обнаружено перекрёстных по G-белку антигенных (серологических) связей ни с представителями первой, ни со второй филогруппой [30].

Среди лиссавирусов существует перекрёстная антигенная связь на уровне нуклеопротеина. Уровень гомологии последовательности аминокислот достигает 78-93%. Это позволяет создавать общий диагностикум для всех лиссавирусов -метод флюоресцирующих антител.

Из 12 видов рода Lyssavirus экология 11 связана с летучими мышами. Только экология ВБ (1-й генотип) связана как с наземными млекопитающими (главным образом плотоядными), так и с летучими мышами.

В настоящее время нет доказательств циркуляции вируса бешенства среди летучих мышей на территории Европы [130]. Летучие мыши «Старого Света» активно обеспечивают циркуляцию других видов лиссавирусов. Например, в

Европе летучие мыши обеспечивают циркуляцию лиссавирусов европейских летучих мышей 1 и 2 типа и Западно-Кавказского лиссавируса летучих мышей [30, 42]. В Азии - лиссавирусы Араван, Худжанг и Иркут [12,13,85,86,87,97].

В ходе исследований в Кении, в четырех из пяти точек у нескольких видов летучих мышей рода Miniopterus в 17-26% обнаружены вируснейтрализующие антитела к лиссавирусу Западно-Кавказских летучих мышей (ЛЗКЛМ) [30]. Это свидетельствуют о распространённости и широкой циркуляции ЛЗКЛМ (или серологически связанного с ним лиссавируса), так как летучие мыши рода Miniopterus широко распространены в тропиках и субтропиках Старого Света [87,88]. Единственный изолят ЛЗКЛМ на территории РФ позволяет предположить возможность трансконтинентального заноса этого лиссавируса во время сезонных миграций летучих мышей [11,30].

1.1.2 Морфология и структура вируса бешенства Вирионы имеют пулевидную форму, а их длина составляет в среднем 180 нм, а диаметр 75 нм.

Рис. 1 Схема строения вириона вируса бешенства, семейства Rhabdoviridae,Viral Taxonomy,1995

Вирион состоит из несегментированного генома, представленного одной молекулой спиралеобразно скрученной негативной РНК и 5 структурных

белков (см. рисунок 1): нуклеопротеин (N), фосфопротеин (P), матричным белком (М), гликопротеин (G) и РНК -зависимая РНК полимераза или большой белок (L- large protein) [29].

Инфекционностью обладает нуклеокапсид или рибонуклеопротеид (РНП), состоящий из геномной РНК, тесно скрученной с 3-мя внутренними белками (L,N, P). Нуклеокапсид «одет» мембранными белками (M, G) и бислойной липидной оболочкой, через которую проступают гликопротеиновые шипы длиной 8,3 нм [130,134].

1.1.3 Репродукция вируса

Жизненный цикл вириона разделяют на 3 фазы. Первая или ранняя фаза включает адсорбцию вириона на рецепторы чувствительных клеток, проникновение в клетку и раздевание. Во второй фазе происходит транскрипция и репликация вирусного генома, а также синтез вирусных белков. В третьей или поздней фазе - сборка и почкование вируса.

Один из наиболее важных клеточных рецепторов, к которым адсорбируются вирионы - это никотинацетилхолиновые рецепторы, которые расположены, главным образом, в нейромышечной бляшке на поверхности мышечных клеток и нейронов. Другие два рецептора - это нейрон-адгезивные молекулы CD56, которые также расположены на поверхности чувствительной клетки, и нейротропин (Р75). Эти данные позволили научно обосновать рекомендованные ВОЗ критерии определения категории тяжести укусов и показали, почему так опасны трансдермальные укусы - дерма состоит из 3-х слоев: мышечный слой, слой кровеносных капилляров и слой сплетения нервных окончаний. Поэтому, независимо от локализации трансдермального укуса, критерием которого является появление капли крови, данное повреждение рассматривается как опасное и для гарантированного спасения укушенного назначается антирабический иммуноглобулин и вакцина [11,113].

Проникновение вириона в клетку происходит путём слияния вирусной оболочки и мембраны чувствительных клеток, затем освобождается РНП.

Во второй фазе сначала идёт так называемая «первичная транскрипция». Далее идет транскрипция с геномной РНК антигеномных (+) РНК. Они служат матрицей для синтеза новых генераций (-) геномных РНК [11,95].

Фаза транскрипции и репликации плавно переходит в финальную, третью фазу жизненного цикла вириона - фазу сборки и почкования.

На финальной стадии сборки нуклеокапсиды «одевают» вирусную оболочку, представленную М и О структурными белками, при этом более 80% молекул О-протеина расположены на поверхности вириона и представлены пронизывающими бислойную липидную оболочку гликопротеидными шипами, которые возвышаются над поверхностью вириона на 8,3 нм. Гликопротеин, как главный поверхностный белок вириона, детерминирует нейровирулентность, нейроинвазивность вируса, а также исход вирусной инфекции [4]. Так, замена одной аминокислоты аргинина в позиции 333 эктодомена О- белка вируса бешенства (1 генотип) значительно снижает патогенность вируса для взрослых мышей. Установлено, что степень патогенности вируса бешенства коррелирует со степенью экспрессии О-белка - самого мощного иммуногена и индуктора аппоптоза. Так, высокопатогенные штаммы вируса экспрессируют низкий уровень О- белка, низкий уровень МНС второго класса и не индуцируют аппоптоз нейронов, тогда как авирулентные штаммы вируса бешенства -наоборот (6). В первом случае экспериментальные животные гибнут, а во втором выживают и выздоравливают [4, 11, 30].

1.2 Эпизоотологические особенности бешенства

Ежегодно в мире после укусов животными, больными бешенством, погибает от 55 000 до 70 000 людей, половина из которых дети [4, 13,70]. В 2011г. в РФ от бешенства погибло 13 человек, в т. ч. девятилетняя девочка из Подольского района Московской области, укушенная бездомной кошкой, больной бешенством [20].

Россия по классификации ВОЗ и МЭБ является неблагополучной по бешенству страной [6,11,71].

В Российской Федерации за многолетний период эпидемиологического наблюдения бешенство среди людей можно охарактеризовать как инфекцию с циклическими колебаниями с промежутками в 2-3 года. С начала 70-х годов в нашей стране ежегодно регистрируется от 4-х до 22-х случаев заболевания.

Ежегодно в России антирабическую помощь получают от 250 до 450 тысяч человек, пострадавших от укусов животных, из которых каждый четвертый -ребёнок.

Друг за другом циклы в РФ наблюдают подъём и спад эпизоотии. В морфологической структуре отдельно взятого очага выделяют ядро, зоны выноса инфекции и постоянно свободные от возбудителя участки. На территории ядра имеются наиболее благоприятные условия для циркуляции возбудителя, обеспечивающие относительно стойкое его сохранение. Иногда при обширном природном очаге может быть несколько ядер. В пределах очага выделяют участки выноса. В них возбудитель обнаруживается у носителей в период подъёмов энзоотии. Третий элемент отдельного очага -это территории свободные от возбудителя в связи с непригодностью их для обитания хозяев вируса бешенства [31,33].

В природном очаге бешенства самостоятельная циркуляция вируса осуществляется в популяции диких плотоядных животных или в популяции кровососущих и насекомоядных летучих мышей.

По данным Россельхознадзора, за три квартала 2012 г. на территории РФ было выявлено 493 очага бешенства: заболело и пало диких животных — 52%, домашних — 35 %, (из них 12 % кошки), сельскохозяйственных — 13 % [9].Только за январь 2012 г. было зарегистрировано 23 случая бешенства в крупных городах в РФ, из них 6 — у кошек (по данным лаборатории эпизоотологии ВИЭВ ФГУ «Центр Ветеринарии»).

За последние 10 лет число субъектов Российской Федерации, неблагополучных по бешенству животных, возросло на 25% (с 49 в 2000 году

до 61 в 2010 году). В 2007- 2010 годах болезнь регистрировали на территории 64-х субъектов страны. При этом в Центральном, Южном и приволжском федеральных округах были неблагополучны по бешенству все 100% субъектов РФ, входящих в указанные округа [20].

Интенсивность эпизоотии весьма высока - на территории 50% неблагополучных субъектов страны ежегодно выявляется свыше 50 случаев бешенства животных. В одной трети субъектов этот показатель превышает 100 случаев в год.

Ежегодно регистрируется свыше 4,4 тысяч случаев бешенства. Заражённые и больные животные представляют смертельную угрозу для человека. По данным Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в Росси ежегодно за медицинской помощью в связи с укусами диких и домашних животных обращаются около 440 - 450 тысяч человек, из них более 200 тысяч получают назначение на курс антирабических прививок [11,14].

За 2000- 2010 гг. в России зарегистрированы 152 случая гибели людей от бешенства. Заражение и гибель людей происходили в наиболее неблагополучных субъектах России и в полном соответствии с расширением географии бешенства животных.

С 2000 года число случаев бешенства в России неуклонно росло. При этом отмечается цикличность эпизоотического процесса, связанная с природно -климатическими условиями и вымиранием части популяции переносчиков возбудителя болезни в дикой природе. Почти во всех регионах страны периодически отмечается активизация природных очагов бешенства, растёт число случаев заболевания среди диких плотоядных животных, вовлекаются в эпизоотический процесс домашние животные (собаки, кошки) и сельскохозяйственные животные.

Ухудшение эпизоотической обстановки в РФ за прошедшие годы связано, прежде всего, с распространением болезни среди диких плотоядных. Удельный

вес случаев бешенства среди диких плотоядных за последние 11 лет вырос в полтора раза. На их долю приходится более 50% от общего числа зарегистрированных случаев (в 2010 году - 52,2%). При этом установлена прямая корреляция между динамикой развития эпизоотического процесса среди диких плотоядных в природных экосистемах и распространением болезни среди домашних и сельскохозяйственных животных [9].

Серьёзную угрозу в плане распространения бешенства среди людей и животных представляют также безнадзорные животные (преимущественно собаки и кошки).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дяченко Сергей Александрович, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аксенова Т.А., Культивирование вакцинного вируса бешенства в линиях перевиваемых клеток зелёной мартышки /Аксенова Т.А., Хапчаев Ю.Х., Миронова Л.Л., Сошенко Ю.В., Селимов М.А., Хазинский В. В. //Вопросы вирусологии.- 1991, №5. -С.432.

2. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях/ И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. - Л.: Медицина, 1962. -179 с.

3. Бабак В. А. Технология суспензионного культивирования вируса бешенства и изготовление приманок вакциносодержащих антирабических для пероральной иммунизации диких плотоядных животных: автореф. дис. канд. вет. наук: спец. 16.00.03 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» / Виктор Бабак. - Минск, 2010. - 20 с.

4. Баньковский Д. О. /Имммунобиологические свойства штамма ERA G 333 вируса бешенства для изготовления антирабической вакцины: дисс. ...канд. вет. наук 06.02.02: Баньковский Денис Олегович. - Щёлково, 2010. -123 С. 5. Баркова И.П., Быстрый культуральный метод для индикации антигенов вируса бешенства в инфицированных клеточных культурах/ И.П. Баркова, Ф.Г.

Нагиева, В.Г. Никулина, А.Н. Лисаков //Инфекция и иммунитет 2013, Т. 3, № 4, с. 323-326

6. Воробьев, А.А. Адъюванты / А.А. Воробьев, Н.Н. Васильев. — М.: Медицина, 1969. — 206 с.

7. Глава 2.2.5. Бешенство. Руководство по диагностическим тестам и вакцинам для сухопутных животных (млекопитающих, птиц и пчел). Международная организация по здоровью животных (пятое издание). Лабораторная диагностика 2004 г.

8. ГОСТ Р 55283-2012 Вакцины против бешенства животных инактивированные. Технические условия

9. ГОСТ 26075-84 Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики бешенства.-М.-1984

10. Грибенча С.В. Современные аспекты биологии и профилактики лиссавирусных инфекций: дисс... доктора медиц. наук, 03.02.02: / Грибенча Сергей Васильевич. - Москва, 1993.

11. Грибенча С. В., Львов Д.К. Рабдовирусы /Руководство по вирусологии// под ред. Академика РАМН Д.К. Львова, М.: «МИА», 2008 .- С.586-588.

12. Грибенча С.В., Получение моноклональных антител к нуклеопротеину вируса бешенства/ Грибенча С.В., Козлов А.Ю., Костина Л.В., Елаков А.Л., Лосич М.А., Цибезов В.В., Забережный А.Д., Алипер Т.И.//Вопросы Вирусологии.-2013,№5- с.38-43.

13. Грибенча С.В., Новый принцип селекции вакцинного вируса на основе количественного уровня экспрессии О-белка - главного иммуногена вируса бешенства/ Грибенча С.В., Лосич М.А., Грибенча Л.Ф., Непоклонова И.В.//Вопросы Вирусологии.-2012г.-№2-С.44-47.

14. Груздев Л.К., Уласов В.И., Груздев К.Н. Экология вируса бешенства и проблемы контроля заболевания «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных». Троицк, 2000, 155.

15. Груздев К.Н., Недосеков В.В. Бешенство животных. Москва «Аквариум», 2001, 303.

16. Гулюкин, А.М. Оценка эффективности вакцинопрофилактики бешенства с помощью иммуноферментной тест-системы /А.М. Гулюкин, Н.А., Хисматуллина, А.Н. Чернов, Н.И. Ермакова, В.В. Сабирова // Биотехнология: экология крупных городов: материалы Московской междунар. научно-практ. конф. - М., 2010. - С.465-466.

17. Давлетбаева Л. Р. Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов: дисс... канд. биол. наук : 14.00.36 / Давлетбаева Ляйсан Раисовна; [Место защиты: науч.-производ. объединение по мед. иммунобиологическим препаратам "Микроген"].- Уфа, 2007.- 111 с.

18. Дрожже Ж.М. Валщащя методу ELISA для визначення вiруснейтралiзуючих антитш до вiрусу сказу / Ж.М. Дрожже // Ветеринарна медицина. - 2011. - № 95. - С. 45-47.

19. Жилин, Е. С., Кошеметов, Ж. К., Матвеева, В М., А. Т. Татыбаева Разработка и оптимизация условий постановки тест-системы для диагностики бешенства сэндвич методом твёрдофазного иммуноферментного анализа.-интернет-ресурс.

20. Иванов А.В., Диагностика и профилактика бешенства животных/ Иванов А.В., Хисматуллина Н.А., Юсупов Р.Х., Чернов А.Н.- Москва. 2007.-100 C.

21. Иванов В.С., Бешенство животных: экспериментально - теоретическое обоснование разработки, производства, применения культуральных инактивированных вакцин и новые подходы к проблеме экстренной защиты ЦНС от возбудителя бешенства: диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук: /Иванов Виктор Серафимович.- Щелково, 2001, С. 3-60.

22. Иванов В.С., Иванов И.В., Самуйленко А.Я. Вакцина антирабическая для животных. (УНИРЭВ). Патент на изобретение № 2366457, 2008.

23. Иванов, А.В. Эпизоотическая ситуация по инфекционным заболеваниям в Республике Татарстан /А.В. Иванов, А.Н. Чернов // Ветеринарный врач. - 2000.

- № 3. - С.21-26.

24. Калашникова Е.А. Совершенствование системы обеспечения контроля качества комбинированных вакцин для профилактики дифтерии столбняка и коклюша на основе экспрессных методов анализа: автореф. дисс. .канд. фарм. наук,14.04.01: Калашникова Елена Александровна.- Пермь.- 2014 .-22 С.

25. Клюев, М.А. Лекарственные средства: справочник./ М.А. Клюев. — М.: Локус, 2004. — 765 с.

26. Крупальник В.Л., Нагасингхе Сампат. Бешенство животных. Лекция, Москва, 2005, 40.

27. Лосич М.А., Непоклонова И.В., Верховский О.А., Грибенча С.В., Мухин А.Н., Раев С.А., Разработка и иммунологические свойства новой антирабической вакцины «РАБИКС». -РВЖ-МДЖ.- 2012.- №2 .-с.11-13

28. Лосич М.А. Иммунобиологические свойства новой вакцины «РАБИКС» /Лосич М.А., Непоклонова И.В., Верховский О.А., Грибенча С.В., Мухин А.Н., Раев С.А., Селиверстов А.С., Алипер Т.И., Van Hervinjen R. //Ветеринария.-2011.-№ 12.-с.17—20.

29. Лосич М.А. Иммунобиологические свойства штамма ERA-СВ 20М вируса бешенства и разработка на его основе антирабической вакцины: дисс. канд. биол. наук,03.02.02: Лосич Милена Анатольевна. - М., 2014.-146 С.

30. Львов Д.К., Медицинская вирусология/ Львов Д.К., Грибенча С.В.. —М.: МИА, 2008.

31. Медуницин, Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницин. — М.: ТриадаХ, 2004.

— 448 с.

32. Метлин, А.Е. Меры борьбы с бешенством животных/ А.Е. Метлин // Ветеринария Кубани. - 2008. - №1. - С. 4-7

33. Методические указания по лабораторной диагностике бешенства животных / Н.А. Хисматуллина, Р.Х. Юсупов, С.Р. Янбарисова и др. (ВНИВИ,

г. Казань); М.А. Селимов, А.Г. Татаров, В.Я. Кармышева и др. (ИПВЭ РАМН, г. Москва): утв. ДВ МСХ и П РФ 14.05.1997 г.

34. Методы лабораторных исследований по бешенству ВОЗ (третье издание). 1975.

35. Метлин, А.Е. Методы диагностики и борьбы с бешенством в РФ на примере работы в Калининградской области / А.Е. Метлин // Первый Международный конгр. «ЕвразияБИ0-2008». - М., 2008. - С. 9. 15.

36. Метлин, А.Е. Меры борьбы с бешенством животных/ А.Е. Метлин // Ветеринария Кубани. - 2008. - №1. - С. 4-7

37. «Методические указания по определению вируснейтрализующих антител в сыворотке крови животных в культуре клеток ВНК-21 (методом ЕАУЫ)», руководство ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» под редакцией Непоклонова Е.А., Грубого В.А. и Власова Н.А., 2015,Владимир.

38. Молодкин А.В., Моноклональные антитела к вирусу бешенства /Молодкин А.В., Аббасова С.Г., Назаров Н.А., Болохина Н.Б., Васильева В.С., Бозиев Х.М. и др.// Ветеринарная патология.- 2006.- №4.- С.152-159

39. Недосеков В.В., Получение и характеристика моноклональных антител к структурным белкам вируса бешенства штамм «ТС-80» /В .В. Недосеков, А. А. Стрижаков, А.Д. Середа, Т.Р. Кирюхина //Доклады РАСХН. -1999.- № 4.- С. 3840.

40. Недосеков В. В. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики бешенства животных и контроля эффективности антирабических вакцин / В. В. Недосеков, И. Ю. Хухоров // Тез. докл. матер. Междунар. научно-практ. конф. Ветеринарные и медицинские аспекты зооантронанозов. - Покров, 2003. - С. 47-49.

41. Недосеков В.В. Сравнительная оценка методов лабораторной диагностики бешенства // Ветеринарная патология. - 2002. - №1. - С. 41-47.

42. Нестеров А.А.Усовершенствование технологии изготовления против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота: дисс. канд. вет. наук 06.02.02: Нестеров Александр Александрович.- Владимир -2015.-150 С.

43. Н1К1ТОВА А. П. Формування антираб1чного 1ммуштету та вдосконалення метод1в контролю 1ммуногенност1 шактивированних антираб1чных вакцин: дисс. канд. веет. наук 16.00.03 - ветеринарна мшробюлопя, ешзоотолопя, iнфекцiйнi хвороби та iмунологiя Н1К1ТОВА АЛ1НА ПЕТР1ВНА.2015. Кшв -133 с.

44. Онищенко Г.Г. О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году: Государственный доклад. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2010. 334-336 с.

45. Патент РФ на изобретение №2420309 от 10.06.2011 г. Препарат против бешенства. Иванов А.В., Хисматуллина Н.А., Чернов А.Н., Юсупов Р.Х., Миронов А.Н., Гулюкин А.М., Филимонова М.Н.

46. Петров, Р.В. Искусственные антигены и вакцины / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов // Иммунология. — 1986. — № 1. — С. 5-24.

47. Пономарев А.П., Назаров Н.А., Рыбаков С.С. Совершенствование метода очистки и концентрирования вируса бешенства// Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия КРС, Крейтцфельдта-Якоба и др. прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезньТешена: матер. междунар. конф. Покров.-2001. -С. 49-51.

48. Пришедько Д.В., Количественное определение гликопротеина Е в стандартном образце предприятия вакцины клещевого энцефалита Энцевир»/ Пришедько Д.В., Шкуратова О.В., Учуватова Е.В., Шарова О.И. //Сибирский медицинский журнал- 2011 .-Том 26, Вып.2

49. Пухова Н.М. Создание национального отраслевого стандарта имуногенности антирабических вакцин / Н.М. Пухова, А.Я. Самуйленко, И.В. Иванов [и др.] // Ветеринарна медицина. - 2011. - № 95. - С. 178.

50. Романенко О. А. Система стандартизаци та контролю методiв лабораторно! дiагностики i засобiв специфiчноl профiлактики сказу: автореф. дис. на здобуття наук. ступеня канд. вет. наук : спец. 16.00.03 «Ветеринарна мжробюлопя, етзоотолопя, iнфекцiйнi хвороби та iмунологiя» / О.А. Романенко. - К., 2014. - 22 с.

51. Сахаров В. Л. Методы и средства анализа медико-биологической информации: Учебно-методическое пособие. Таганрог. Изд-во ТРТУ. 2001.- с. 9-15.

52. Свежова Н.В., Методы математической обработки данных в иммуноферментном анализе/ Свежова Н.В., Шаркова В.Е., Громов Д.Б., Головаченко В.А., Полынцев Д.Г. // Часть I. Клиническая лабораторная диагностика.-2008.-№1.

53. Селимов М.А., Современная эпизоотологическая ситуация и перспективы элиминации бешенства/ Селимов М.А. //Вопросы вирусологии.- 1998, №5.- С. 195-198.

54. Селимов, М.А. Бешенство/ Селимов М.А.- Москва: Медицина, 1978.-200 С.

55. Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И. Вирусы и вирусные вакцины. — М.: Библионика, 2007.

56. Сливко И.А. Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов ТС-80 и 71БелНИИЭВ-ВГНКИ вируса бешенства дис... к. вет. наук 16.00.03.-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология: Сливко Игорь Александрович.-2003.-Покров.- С.139

57. Стариков В.А., Лозовой, Лёзова Т.М., Михалишин Д.В. Патент № 2521513 Применение этония в качестве адъюванта сорбированной противоящурной вакцины.- Бюл. №18.

58. Сухарьков А.Ю. Разработка методов оценки оральной антирабической вакцинации животных: дисс. канд. биол. наук, 03.02.02 / Сухарьков Андрей Юрьевич.- Владимир.-2014.-141 с.

59. Таршис, М.Г. Бешенство животных / М.Г. Таршис, Н.А. Ковалев, П.П. Кузнецов. - Минск: Урожай, 1990. - 174 с.

60. Теория и практика иммуноферментного анализа.- Москва: Высшая школа .-1991.- с. 256-260

61. Тимиргалиев Р.В. Усовершенствование методов идентификации вируса бешенства и выявления антирабических антител: дисс. канд. вет. наук: Тимиргалиев Р. В.- Казань.- 2006

62. Хисматуллина Н.А., Разработка и внедрение экспресс методов иммунологического мониторинга при бешенстве/ Хисматуллина Н.А., Юсупов Р.Х., Селимов М.А., Янбарисова С.Р. // Вопросы вирусологии. -2001. -№ 5. -С. 45-48.

63. Хисматуллина Н.А., Иммунологический мониторинг бешенства/ Хисматуллина Н.А., Юсупов Р.Х., Янбарисова С.Р. // Ветеринарный врач.-2004. № 1(17). С. 45-53.

64. Хисматуллина Н.А., Эпизоотологическая ситуация и профилактика бешенства лисиц на территории Татарстана/ Хисматуллина Н.А., Чернов А.Н., Юсупов Р.Х., Равилов А.З., Иванов А.В., Зайдуллин М.Ш. // Ветеринарный врач - 2005, №1, 53-58.

65. Хрипунов Е. М, Бешенство диких плотоядных животных/ Хрипунов Е. М, Евсеева С. Д., Окрошидзе М. Г. и др. // Ветеринария. - 2002. - №2. - С. 6-8.

66. Чернов, А.Н. Особенности эпизоотической ситуации и оценка эффективности вакцинопрофилактики при болезни Ауески / А.Н. Чернов // Учёные записки: Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана. - 2013. - Т.213. - С.314-317.

67. Чернов А.Н. Особенности проявления и территориальная приуроченность бешенства в Республике Татарстан /А.Н. Чернов // Ветеринарный врач. - 2013. -№1. - С.31-34 .

68. Шахов А.Г., Эпизоотология, эпидемиология и меры борьбы с бешенством на территории Воронежской области/Шахов А.Г., Ануфриев А.И., Вислогузов А.М., Ануфриев П.А. Ветеринарная патология 2002 .- №1.-101-104 С.

69. Шикин Е.В., Плис А.И. Кривые и поверхности на экране компьютера. Руководство по сплайнам для пользователей.- М.; ДИАЛОГ-МИФИ, 1996.— 240

70. Эпизоотическая ситуация в РФ (2010 год). ФГУ ВНИИЗЖ ИАЦ Управления Ветнадзора г. Владимир/ Официальный сайт Россельхознадзора. http://www.fsvps.ru/fsvps/iac.

71. Эпизоотическая ситуация в РФ (2011). //http://www.fsvps.ru/fsvps/iac.

72. Янбарисова С.Р. Сравнение традиционных и экспресс-методов лабораторной диагностики бешенства //Ветеринарная медицина - 2005. - №. -С. 90-91.

73. Янбарисова С.Р. Краевые особенности заболевания бешенством животных в республике Башкартостан/ Янбарисова С. Р. //Ветеринарный врач.-2005.-№ 1- 69-71 С.

74. Яровая И.И., Колотвина П.В., Кохнович М.А., Грибенча С.В. Вирус бешенства. «Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство». - Москва, Изд. Группа «ГЭОТАР МЕДИА», 2012, с. 645-649

75. ABCD Guidlenes on: Rabies in cats// European Advisory Board on Cat Diseases, 2008; June: 1/17—1/22.

76. Arya S.A. Therapeutic failures with rabies vaccine and RIG. Clin. Infect.Dis.-1999 - 29 - №6.- P.1605.

77. Badrane, H. and Tordo, N. Host switching in lyssavirus history from the chiroptera to States during 2008. JAm. Vet. Med. Assoc. 2010, 237, 646-657.

78. Bergman P.J. Etiology of feline vaccine-associated sarcomas: history and update // J. Am Vet Med Assoc, 1998; 213: 1424—1425.

79. Bruckner L. Three Rs Approaches in the Quality Control of Inactivated Rabies Vaccines / L. Bruckner, K. Cussler, M. Halder [et al.] // ATLA. - 2003. - Vol. 31. -P. 429-454.

80. Botvinkin A. D., Poleschuk E. M., Kuzmin I. V. et al. Novel lyssaviruses isolated from bats in Russia// Emerg. Infect. Dis. — 2003. — Vol. 9 — P. 1623.

81. Bourhy H., Cowley J.A., Larrous F. et al Phylogenetic relationships among rhabdoviruses inferred using the L-palymerase gene. J. Gen. Virol. 2005.- V86, 28492858.

82. J.D. Beatty, B.G. Beatty, W.G. Vlahos. Measurement of monoclonal antibody affinity by non-competitive enzyme immunoassay // J. Immunol. Methods. 1987. V. 100. P. 173-179.

83. Bruckner L. Three Rs Approaches in the Quality Control of Inactivated Rabies Vaccines / L. Bruckner, K. Cussler, M. Halder [et al.] // ATLA. - 2003. - Vol. 31. -P. 429-454. ,

84. Cawley R., Heaton P.R. Isolation of European bat lissavirus in the U.K// International Rabies Meeting: Abstrcts. - Paris, 1997, 403.

85. F. Cliquet Oral vaccines used for rabies control programmes: types, storage, quality control and performance in different species F. Cliquet AFSSA Nancy -Laboratory of Research

86. Cliquet F, Aubert M (2004) Elimination of terrestrial rabies in Western European countries. In: Schudel A, Lombard M, editors. Control of infectious animal diseases by vaccination. Basel: Karger. pp. 185-204.

87. Cliquet F, Guiot AL, Munier M, Bailly J, Rupprecht CE, et al. (2006) Safety and efficacy of the oral rabies vaccine SAG2 in raccoon dogs. Vaccine 24: 43864392.

88. Cliquet F, Combes B, Barrat J. (2006) Means used for terrestrial rabies elimination in France and policy for rabies surveillance in case of re-emergence. In:

Dodet B SA, Pastoret PP, Lombard M, editors. Rabies in Europe. 2006/08/02 ed. Basel: Karger. pp. 119-126.

89. Cooper N.R., Nemerow G.R., The role of antibodu and complement in the control of viral infections// Invest. Dermatol.-1984, V. 83, 121-127.

90. De Moura W.C. Potency evaluation of rabies vaccine for human use: The impact of the reductionin the number of animals per dilution / W.C. de Moura, H.P. de Araujo, P.H. Cabello [et al.] // Journal of virological methods. - 2009. - Vol. 158. - P. 84-92.

91. Deschaux P. // Neuro - immunologie: Le systeme immunitaire est-il orrgane sensorial? // Arch. Int. physoil. et biochim., 1988, 96,3, 78-89.

92. Durr, S., Naissengar, S., Mindekem, R. et al. Rabies diagnosis for developing countries. Plos Negl. Trop. Dis. 2008, 2, p. 206.

93. P.L. Ey, S.J. Prowse, C.R. Leukin. Isolation of pure IgG1, IgG2a and IgG2b immunoglobulins from mouse serum using protein A-Sepharose // Mol. Immunol. 1978. V. 15. P. 429-436.

94. Fayaz, A., Simani, S., Janani, A. et al. Antybody persistence, 32 years after post-exposure prophilaxis with human diploid cell rabies vaccine (HDCV). Vaccine, 2011, 29, 3742-3745.

95. Finke S., Conzelmann K. K. Replication strategies of rabies virus // Vir. Res. — 2005 — Vol. 111. — P.120-131.

96. Fernandez A.A., Stevenson G.W., Abraham G.E., Chiamori N.Y. Interrelations of the Various Mathematical Approaches to Radioimmunoassay. Clin. Chem. 1983, 29 (2), 284-289

97. Hanlon, C.A., Kuzmin, I.V., Blanton, J.D. et al. Efficacy of Rabies biologics against new lissaviruses from Eurasia. Virus. Res.- 2005, 111, 44-54.

98. Hervijnen V.R. Бешенство животных // Ветеринарная жизнь, 2011; 7: 1—2.

99. Hooper D.G. The rade of immyne responses in the patologenesis of rabies. J. Neurovirol. 2005. Vol. 11, 88-92.

100. Karin Lovgren Bengtsson, Bror Morein and Albert DME Osterhaus. Iscom technology-based Matrix M adjuvant; success in future vaccines relies on formulation. April 2011. Vol. 10. № 4. P. 401 - 401

101. Kramer B. The rapid fluorescent focus inhibition test is a suitable method for batch potency testing of inactivated rabies vaccines / B. Kramer, H. Schildger, H. A. Behrensdorf-Nicol // Biologicals. - 2009. - Vol. 37. - №2. - P. 119-126.

102. Kulpa-Eddya J. Non-animal replacement methods for veterinary vaccine potency testing: state of the science and future directions /J. Kulpa-Eddya, G. Srinivasb, M. Halderc [et al.] // Procedia in Vaccinology. - 2011. - Vol.5. - P. 6083.

103. Kumar M. Development of alternative approaches for in-process quality control of rabies vaccine / M. Kumar, R.P. Singh, B. Mishra [et al.] // Advances in animal and veterinary sciences. - 2014. -Vol. 2 (3). - P. 164-170.

104. Kuzmin I. V.,Mayer A.E., Niezgoda M. et al. Shimoni bat virus - a new representative of the lissavirus genus//Virus Res., 2010. -V.149.-p.197-210.

105. Kuzmin I. V.,Orciari L.A., Aray Y.T. et al. Bat lyssavirus (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences. Virus Res. 2003, 97, 65-79.

106. Kuzmin I. V. and Tordo N. Genus Lyssavirus in Rhabdoviruses. Molecular taxonomy, Evolution, Genomics, Ecology, Host-vector interactions, Cytopatology and Control. Edited by Ralf G. Dietzgen and Ivan Kuzmin. 24 May 2012, pp.37-58.

107. G. Khler, C. Milstein. Continuos cultures of fused cell secreting antibody of predefined specificity // Nature. 1975.- V. 256. P. 495-497.

108. U. K. Laemlii. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970.- V. 227, N 5259. P. 680-685.

109. Lewis C.E. Potency testing of veterinary rabies vaccines: replacement of challenge by in vitro testing / C.E. Lewis, A.M. Fry, J.R. Hermann [et al.] // Potency testing of veterinary vaccines for animals: the way from in vivo to in vitro. - 2011. -Vol. 134. - P. 29-33.

110. Lovgren Karen Bengtsson, Bror Morein and Albert DME Oster-haus. Iscom technology-based Matrix M adjuvant; success in future vaccines relies on formulation // Arch Dermatol, 2011; 10 (4): 401.

111. Mengesha A. Safety and Potency Test for PV and ERA Based Cell Culture Anti-Rabies Vaccines Produced in Ethiopia [Электронный ресурс] / A. Mengesha, B. Hurisa, B. Newayesilasie [et al.] // J. Vaccines Vaccin. - 2014. - Vol. 5(4). -Режим доступа7: http://dx.doi.org/10.4172/2157-7560.1000

112. A.E. Metlin, J. Cox, S.S. Rybacov et al. Monoclonal antibody characterization of rabies virus isolates from Russia, Finland and Estonia //J. Vet. Med.- 2004.- V. 51. P. 94-96.

113. Nedosekov V. Critical review of the NIH-method for testing potency of inactivated rabies vaccines / V. Nedosekov // Ветеринарна медициш Украши. -2013. - № 10. - С. 26-29.

114. Neri P., Bracci L., Rustici M. et al. Sequence homology between HIV-1 gp120, rabies virus glycoprotein and snake venom neurotoxins. Is the nicotinic acetylcholine receptor an HIV receptor? //Arch.Virol. — 1990.—Vol. 190 —Vol. 114. — P. 265269

115. Nix B., Wild D. Part 9. Data processing In book: Immunoassays. Practical approach. Gosling J.P. (Ed.), Oxford University press. 2000. p. 239-260

116. OIE Terrestrial Manual 2011, Chapter 2.1.13. - Rabies (www. oie. int)

117. Rupprecht CE, Blass L, Smith K, et al. Human infection due to a recombinant vaccinia-rabies glycoprotein virus//N Engl J. Med.-2001;345:582.

118. Pizza A.T. Effect of the Contents and Form of Rabies Glycoprotein on the Potency of Rabies Vaccination in Cattle / A.T. Piza, K.M.S. Pieri, G.M. Lusa [et al.] // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. - 2002. - Vol. 97. - P. 265-268.

119. Plikaytis B. D., Turner S. H., Gheesling L. L., Carlone G. M. Comparisons of Standard Curve-Fitting Methods To Quantitate Neisseria meningitidis Group A Polysaccharide Antibody Levels by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay J. Clin. Microbiol., Vol. 29, No. 7 July 1991, p. 1439-1446

120. Rodbard, D., and Lewald, J. E., Computer analysis of radioligand assay and radioimmunoassay data. Acta Endocrinol. (Copenhagen) 64, Suppl. 147, 79 (1970).

121. Romberg J. Potency testing of veterinary vaccines: The way from in vivo to in vitro / J. Romberg, S. Lang, E. Balks [et al.] // Biologicals. - 2012. - Vol. 40. - P. 100-106

122. Rooijakker E.J.M. Rabies vaccine potency control: comparison of ELISA systems for antigenicity testing / E.J.M. Rooijakker, JP. Uittenbogaard, J. Groerf // Journal of Virological Methods. - 1996. - Vol. 58. - P. 111-119.

123. Rosatte RC, Lawson KF (2001) Acceptance of baits for delivery of oral rabies vaccine to raccoons. Journal of Wildlife Diseases 37: 730-739.

124. Rupprecht, C.E. and Slate, D. Rabies prevention and Control: Advances and Challenges. In Rhabdoviruses. Molecular taxonomy, Evolution, Genomics, Ecology, Host-vector interactions, Cytopathology and Control. Edited by Ralf G. Dietzgen and Ivan Kuzmin. 24 May 2012, p.215-252.

125. Sasaki D. and Mitchell R.A.2002 How to obtain reproducible quantitative ELISA results (Oxford Biomedical Research, Inc. http://www.oxfordbiomed.com/artqelis.html)

126. Schiffelers M.-J. Replacing the NIH test for rabies vaccine potency testing: A synopsis of drivers and barriers / M.-J. Schiffelers, B. Blaauboer, W. Bakker, C. Hendriksen // Biologicals. - 2014. - Vol. 35. - P. 1-13.

127. Schiffelers M.-J. W.A. Regulatory acceptance and use of serology for inactivated veterinary rabies vaccines / M.-J. Schiffelers, B.J. Blaauboer, W.E. Bakker, C.F.M. Hendriksen // ALTEX. - 2015. - Vol. 32(3). - P. 211-221.

128. Srinivasan A., Burton E.C., Kuehnert M. et al Transmission of rabies from on organ to four transplantant recipient//N. Engl. J. Med, 2005, V. 352 - p. 1103-1111.

129. Virus Taxonomy: Sixth Report of the International committee on Taxonomy of Viruses. - 1995. - 458 p.

130. Wandeler A. Oral immunization against rabies: afterthoughts and foresight. Schweizer Archiv fur Tierheilkunde.-2000.- V. 142. -P. 455-462.

131. Wiktor T.J., Doherty P.C. & Koprowski H. (1977). In vitro evidence of cellmediated immunity after exposure of mice to both live and inactivated rabies virus. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 74, 334-338.

132. Wiktor T., Koprowski H. Monoclonal antibodies against rabies virus produced by somatic cele hybridization: detection of antigenic Variants. //Proc.Natl.Acad.Shi, 1978-N78.- P.39-48

133. WHO Expert Consultation on Rabies: first resport. WHO technical report serier.-2004-№ 931-18 p.

134. Wunner W.H. Structure of rabies viruses. //World's debt to Pasteur. 1985. -P.171-186.

135. Wunderli P.S. The rabies peripheral challenge test: more accuratedetermination of vaccine potency / P.S. Wunderli, D.W. Dreesen, T.J. Miller, G.M. Baer // Vaccine. - 2006. - Vol. 24. - P. 7115-7123.

136. Zinkernagel R.M., La Marre A., Ciurea A. et al// Neutralizing antiviral antibody responses// Abv. Immunol. - 2001, Vol. 79, p. 53.

Приложение

№

«УТВЕРЖДАЮ» Директор

ФГЪНУ^НИТИБП»

т., | Самуйлснко Л.Я «21 » сентября 5015 г.

У

«Методические положен», по обработке рч»™» ИФА дл» определен», гликопротеина вируса . вакцинном сырье и а готовь, биопрепаратах пре«иие и 4-пара«етр,,еск„и

логарифмический логистический метод («4а») иостроеии» калибровочной

кривой».

Щелково 2015

ФГЫ ГУ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНОИССЛЕДОВ АТЕЛЬСКИЙ и ТЕХ1ЮЛОГИЧЕСКИЙ № КЛЖУТ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

«УТВЕРЖДАЮ» «ВНИТИБП»

; I Самуйленко Л.Я. нтября 2015г.

Инструкции но применению

Антирабическая вакцина из иггамма «Щёлково-51» и наши «про ванная, культу рал ьная, жидкая с иммуностимулирующим комплексом

Щёлково 2015

1 Л: .1

V /

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ (М-Л^ЛЦИИ

ЗОЛОТАЯ ОСЕНЬ

■ VII МШМ А641СШ«»»! 1«»1*ИО»

©ОЮЕЫ

литил/ш

/

ДИПЛОМ

НАГРАЖДАЕТСЯ СЕРЕБРЯНОЙ МЕДАЛЬЮ

ФГБНУ "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности ", Московская область, Щелковский район, п.Биокомбината

л

Г

"За разработку и производство набора реагентов "Иммунная тест-система для определения гликопротеипа вируса бешенства в вирусвакцине, культуралыюй жидкости или в

головном МОГ" шттпшки" -

МИНИСТР. ССЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

российскомфеякра!дои1 ь ' лнтелчкв,.ц