Клонирование и экспрессия генов структурных белков Р30 и Р72 вируса африканской чумы свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Копытов, Валерий Олегович

• Копытов, Валерий Олегович
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Копытов, Валерий Олегович

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Эпизоотическая ситуация по АЧС.

2.1.1. Пути распространения вируса АЧС.

2.2. Патогенез и клинические проявления болезни.

2.3. Характеристика вириона.

2.3.1. Химические и физические свойства.

2.3.2. Геном вируса АЧС.

2.3.3. Полипептидный состав.

2.3.4. Таксономическая принадлежность вируса АЧС.

2.4. Лабораторная диагностика АЧС.

2.4.1. Генотипирование вируса АЧС.

2.5. Системы экспрессии для получения рекомбинантных белков.

2.5.1. Экспрессирующие векторы, используемые в клетках Е. coli.

2.5.2. Экспрессирующие векторы, используемые в клетках дрожжей.

2.5.3. Эукариотические векторы, используемые в клетках животных.

2.5.4. Очистка и иммобилизация гибридных белков.

2.6. Применение рекомбинантных белков в диагностике АЧС.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клонирование и экспрессия генов структурных белков Р30 и Р72 вируса африканской чумы свиней»

Вирус африканской чумы свиней (АЧС) - крупный икосаэдрический оболочечный ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Asfarviridae [87]. По структуре и механизму репликации генома вирус АЧС имеет сходство с поксвирусами [223].

АЧС является особо опасной болезнью домашних свиней, характеризующейся сильной лихорадкой, геморрагиями, слабостью, цианозом кожи ушных раковин, подгрудка, живота, пятачка и конечностей. Высоковирулентные штаммы вируса вызывают смертность, близкую к 100%. Болезнь протекает сверхостро, остро, подостро и хронически [1, 10, 22, 80, 83, 139, 150]. При сверхострой форме первым признаком болезни является внезапная гибель животных. При остром и подостром течении животные обычно гибнут через 2-14 суток после появления первых клинических признаков. Выжившие животные остаются в течение всей жизни вирусоносителями или хронически больными АЧС. Хроническая форма длится от 2 до 10 месяцев и сопровождается исхуданием, признаками пневмонии, артрита, обострениями болезни и гибелью [11, 80, 83, 150]. Вирус АЧС поражает клетки системы мононуклеарных фагоцитов, включая тканевые макрофаги и ретикулярные клетки селезёнки, лимфатических узлов, лёгких, почек и печени.

Средства специфической профилактики при АЧС не разработаны. Во многом это объясняется биологическими свойствами вируса. Полевые штаммы вируса АЧС обычно являются гетерогенными поликлональными популяциями, различающимися по вирулентности, гемадсорбирующим, антигенным и иммунобиологическим свойствам, что свидетельствует о его многотиповой вариабельности. Выделение вируса с использованием чувствительных животных и культур клеток требует длительного времени и специально оборудованных помещений, имеющих определенный уровень защиты для работы с возбудителями особо опасных инфекций. Всё это обусловливает трудность борьбы с АЧС и необходимость совершенствования противоэпизоотических мероприятий на основе новейших научных достижений [20].

Выявление умеренно вирулентных изолятов АЧС, вызывающих невысокий уровень смертности, но высокий уровень заболеваемости, часто основывается на обнаружении специфических антител [92, 160]. Однако, стандартизация диагностикумов на основе поликлональных антител, выделенных из сывороток крови гипериммунных свиней, часто бывает затруднительной, вследствие различия в физиологическом статусе доноров иммуноглобулинов, появления у них аутоантител. Производство таких препаратов требует больших затрат и сопряжено с необходимостью создания жёстких санитарных условий при содержании инфицированных животных.

В связи с этим одним из основных путей оперативной и ретроспективной диагностики АЧС, эпизоотологического мониторинга, изучения антигенной структуры и вариабельности вируса является разработка современных высоко специфических методов лабораторной диагностики, способных составить одно из определяющих звеньев комплексной программы по профилактике и контролю АЧС. Возможным решением этой задачи может стать технология получения рекомбинантных белков вируса АЧС, предоставляющая следующие преимущества по сравнению с методами, базирующимися на получении антигена из экстракта инфицированных клеток:

1) исключается использование живого вируса для получения антигена (безопасность);

2) компоненты культур клеток не контаминируют антиген;

3) отпадает необходимость инактивации вируса, что сохраняет нативными конформационные эпитопы антигена;

4) позволяет стандартизировать антиген.

Цели и задачи исследования

В связи с выше сказанным основной целью исследований являлось клонирование и экспрессия рекомбинантных антигенов рЗО и р72 вируса АЧС, являющихся облигатными индукторами антителогенеза, пригодных для использования в ИФА.

Для этого необходимо было решить следующие задачи:

1) Определить участки генов, кодирующих иммунореактивные последовательности мажорных антигенов рЗО и р72 вируса АЧС;

2) Рассчитать праймеры и оптимизировать полимеразную цепную реакцию для получения ПЦР-продуктов, содержащих нуклеотидные последовательности генов рЗО и р72 вируса АЧС;

3) Создать генно-инженерные конструкции, экспрессирующие белки рЗО и р72;

4) Оптимизировать условия наращивания, выделения и очистки рекомбинантных белков рЗО и р72 в прокариотическом векторе;

5) Оценить пригодность рекомбинантных белков для использования их в качестве антигена для постановки серологических реакций.

6) Определить возможность использования праймеров, комплементарных гену рЗО, для выявления ДНК вируса АЧС в различных вируссодержащих материалах.

Научная новизна

Получены рекомбинантные белки рЗО и р72 вируса АЧС в составе плазмидного вектора рТТ9, содержащего целлюлозосвязывающий домен, который позволяет быстро выделить и очистить белок из клеток Е. coli с помощью сорбции на целлюлозной матрице.

Рекомбинантный антиген рЗО пригоден для выявления антител к вирусу АЧС в непрямом варианте ТФ ИФА и не реагирует с сыворотками, специфичными к гетерологичным вирусам.

Показана возможность использования полимеразной цепной реакции, целевым геном которой является рЗО, для выявления ДНК вируса АЧС в различных вируссодержащих материалах.

Практическая значимость работы

Разработанная методика получения рекомбинантного антигена рЗО вируса АЧС в прокариотическом векторе исключает использование для этой цели живого вируса и позволяет выявлять антитела против вируса АЧС в непрямом варианте ТФ ИФА. Антигенная активность и специфичность рекомбинантного белка рЗО была подтверждена комиссионно (акт № 18 от 24.10.03).

Оптимизация условий постановки ПЦР на основе амплификации последовательностей гена рЗО позволяет обнаруживать ДНК вируса АЧС у животных с хроническим и латентным течениями болезни, что свидетельствует о пригодности данного метода для экспресс-диагностики АЧС.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Методика получения рекомбинантного антигена рЗО вируса АЧС.

2. Результаты использования непрямого варианта твёрдофазного иммуноферментного анализа на основе рекомбинантного белка рЗО для выявления антител к вирусу АЧС.

3. Оптимизация условий постановки полимеразной цепной реакции на основе амплификации последовательности гена рЗО для выявления ДНК вируса АЧС в вируссодержащих материалах.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ (2002-2004 гг.).

Материалы диссертации доложены на IV Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (г. Москва, 2002 г.), Международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию института 24-26 сентября 2003 г. «Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов» (г. Покров, 2003 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Личный вклад

Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором в основном самостоятельно. В выполнении работы по разделам 4.2.3., 4.2.4., 4.2.5., 4.2.11., 4.2.13., 4.2.14. и 4.2.15. оказывали практическую и консультативную помощь сотрудники ГНУ ВНИИВВиМ: Власова Н.Н., Цыбанова Л.Я., а также сотрудники ВНИИСБ: Лунин В.Г. и Колобова О.С.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Копытов, Валерий Олегович

6. ВЫВОДЫ

1. Осуществлено клонирование и получена экспрессия рекомбинантных антигенов рЗО и р72 вируса АЧС в прокариотическом векторе.

2. На основе анализа профилей гидрофильности определены участки генов, кодирующие иммунореактивные последовательности мажорных антигенов рЗО и р72 вируса АЧС и отработаны оптимальные условия постановки полимеразной цепной реакции, фланкирующих конформационные эпитопы генов рЗО и р72, размерами 374 и 483 п.о.

3. Получены три рекомбинантные плазмиды на основе вектора рТТ9, содержащие фрагменты генов структурных белков рЗО и р72 штамма «НВЛ-1» вируса АЧС, обеспечивающие экспрессию в клетках E.coli Ml5.

4. Оптимизированы условия наращивания, выделения и очистки рекомбинантных белков рЗО и р72 в Е. coli Ml 5. Наличие целлюлозосвязывающего домена в структуре рекомбинантных белков позволяет выделять их с помощью целлюлозного сорбента марки MN-300 (Serva) с выходом продукта 80-100 мкг/мл.

5. Оптимизированы условия постановки непрямого варианта ТФ ИФА с использованием в качестве антигена рекомбинантного белка рЗО с активностью 1:200. Рекомбинантный антиген позволяет выявлять специфические антитела к вирусу АЧС в сыворотках крови животных и не реагирует с сыворотками, специфичными к гетерологичным вирусам.

6. Праймеры, комплементарные гену рЗО при температуре отжига

55°С, пригодны для выявления методом ПЦР ДНК вирулентных и « авирулентных штаммов вируса АЧС в пробах патматериала и заражённых культур клеток.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований разработаны и предложены:

- «Методические указания по выявлению ДНК вируса АЧС методом полимеразной цепной реакции» и «Методические указания по выявлению антител к вирусу АЧС методом ИФА с использованием рекомбинантного белка рЗО», утвержденные директором ВНИИВВиМ, могут быть использованы для обнаружения ДНК возбудителя в клинических образцах и специфических антител к вирусу АЧС в сыворотках крови при проведении лабораторных исследований;

- рекомбинантные плазмиды рТТ9рЗО-2, рТТ9рЗО-9 и рТТ9р72-10, содержащие фрагменты генов рЗО и р72 вируса АЧС, и экспрессирующие рекомбинантные белки могут быть использованы для получения специфических антигенов вируса АЧС;

- методика индуцибельной экспрессии рекомбинантного белка рЗО и его очистки для использования в качестве антигена при постановке ТФ ИФА с целью выявления антител к вирусу АЧС;

Полученные результаты использованы при подготовке 2 методик, которые комиссионно испытаны, одобрены Учёным советом и утверждены директором института.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Копытов, Валерий Олегович, 2004 год

1. Бакулов И.А. Африканская чума свиней // Эпизоотология / Под ред. Р.Ф. Сосова М.: Колос, 1969. - С. 287-290.

2. Бакулов И.А., Макаров В.В. Проблемы современной эволюции африканской чумы свиней // Вестник с/х науки. 1990. - № 12. — С. 122-128.

3. Балышев В.М., Книзе В.А., Цыбанов С.Ж и др. География АЧС и типовая гетерогенность возбудителя болезни // Проблемы инфекционных и инвазионных болезней в животноводстве на современном этапе: Тезисы докладов / МВА им. К.И. Скрябина. М., 1999. - С.92-94.

4. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. М., Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

5. Вишняков И.Ф., Цыбанова Л.Я., Карпов Г.М. Диагностика африканской чумы свиней. IV. Метод иммуноферментного анализа //

6. Тезисы докладов научной конференции ВНИИВВиМ по вопросам ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. РАСХН Покров, 1992. - С. 68-70.

7. Гловер Д. Клонирование ДНК. Методы / Пер. с англ. П.Л. Иванова, Л.Г. Николаева. М.: Мир,- 1988. - 538 с.

8. Ю.Коваленко Я.Р. Африканская чума свиней. М., «Колос», 1972. -200 с.

9. П.Козлова Д.И., Бесхлебнов В. А. Современные проблемы африканской чумы свиней. М.: ВНИИТЭИСХ, 1980.- 60 с.

10. Колонцов А.А. Вирус африканской чумы свиней: достижения последнего десятилетия 20 века // Молекул, генетика, микробиология и вирусология.- 2001.- № 2.- С. 3-8.

11. Колонцов А.А. Локализация мажорных полипептидов вируса АЧС и вирусассоциированных ферментов в структуре вирионов // Молекул, генетика, микробиология и вирусология.- 1995.-№ 3.- С. 34-38.

12. С.Херрингтон, Дж. Макги. Молекулярная клиническая диагностика. Методы / Пер. с англ. А.А. Лушниковой, Л.И. Новиковой, П.А. Сломинского М.: Мир, 1999. - 558 с.

13. Селянинов Ю.О., Балышев В.М., Цыбанов С.Ж. Вирус африканской чумы свиней: физическое картирование генома штаммов // Вестн. РАСХН.- 2000.- № 5.- С.75-76.

14. Селянинов Ю.О., Сенечкина Е.К. Физическое картирование генома вируса африканской чумы свиней // Доклады РАСХН.- 1995.- № 2.-С.37-39.

15. Семенихин А.Л., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А. и др. Совершенствование противоэпизоотических мероприятий при АЧС // Тезисы докладов научной конференции ВНИИВВиМ по вопросам ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. РАСХН-Покров, 1992.-С.71.

16. Сингер М., Берг П. Гены и геномы / Пер. с англ. Т.С. Ильиной, Ю.М. Романовой: В 2 т. М.: Мир, 1998. - Т. 1. - 373 с.

17. Сюрин В.Н. Африканская чума свиней // Лабораторная диагностика вирусных болезней животных / М., Колос. 1972. - с. 416.

18. Чумак P.M. Таксономическая принадлежность вируса АЧС // Тезисы докладов научной конференции ВНИИВВиМ по вопросам ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. РАСХН Покров, 1992. - С. 32-34.

19. Щелкунов С.Н. Клонирование генов. — Новосибирск: Наука, 1986. -228 с.

20. Afonso C.L, Zsak L., Carrillo С. et al. African swine fever virus NL \ gene is not required for virus virulence // J. Gen. Virol., 1998. - №79.1. P. 2543-2547.

21. Afonso C.L., Alcaraz C., Brun A. et al. Characterization of рЗО, a highly antigenic membrane and secreted protein of african swine fever virus // Virology. 1992. - № 189 (1). - P. 368-373.

22. Aguero M., Fernandez J., Romero L. et al. Highly sensitive PCR assay for routine diagnosis of african swine fever virus in clinical samples // J. Clin. Microbiol. 2003. - № 41 (9). - P. 4431 - 4434.

23. Alcami A., Angulo A., Lopez-Otin G. et al. Amino acid sequence and structural properties of protein pi2, an african swine fever virus attachment protein // J. Virol. 1992. - № 66. - P. 3860 - 3868.

24. Alcaraz C.I, Brun A., Ruiz-Gonzalvo F. et al. Cell culture propagation modifies the african swine fever virus replication phenotype in macrophages and generates viral subpopulations differing in protein p54 // Virus Res. 1992. - №23. - P. 173-182.

25. Alcaraz C.I, Rodriguez F., Oviedo J.M. et al. Highly specific confirmatory western blot test of african swine fever virus antibody detection using the recombinant virus protein p54 // J. Virol. Methods. -1995.-№52.-P. 111-119.

26. Alcaraz C.I., De Diego M., Pastor M.J. et al. Comparison of a radioimmunoprecipitation assay to immunoblotting and ELISA for detection of antibody to an african swine fever virus // J. Vet. Diagn.• Invest. 1990. - № 2. - P. 191-196.

27. Alejo A., Andres G., Salas M.L. African swine fever virus proteinase is essential for core maturation and infectivity // J. Virol. 2003. - № 77(10).-P. 5571-5577.

28. Alejo A., Andres G., Vinuela E. et al. The african swine fever virus prenyltransferase is an integral membrane trans-geranylgeranyl-diphosphate synthase // J. Biol. Chem. 1999. - № 274(25). - P. 1803318039.

29. Almazan F., Rodriguez J.M., Andres G. et al. Transcriptional analysis of multigene family 110 of african swine fever virus // J. Virol. 1992. - № 66.-P. 6655-6667.

30. Almazan F., Rodriguez, J.M., Angulo A. et al. Transcriptional mappingof a late gene coding for the pi 2 attachment protein of african swine fever virus // J. Virol. 1993. - № 67. - P. 553-556.

31. Almendral J.M., Almazan P., Blasco R. et al. Multigene families in african swine fever virus: Family 110 // J. Virol. 1990. - № 64. - P. 2064-2072.

32. Alonso C., Miskin J., Hernaez B. et al. African swine fever virus protein p54 interacts with the microtubular motor complex through direct binding to light-chain dynein //J. Virol. 2001. - №75 (20). - P. 9819-9827.

33. Altschul S.F., Gish W., Miner W. et al. Basic local alignment search tool // J. Mol. Biol. 1990. - № 215. - P. 403-410.

34. Anderson E.C, Hutchings G.H, Mukarati N. et al. African swine fever virus infection of the bushpig (Potamochoerus porcus) and its significance in the epidemiology of the disease // Vet. Microbiol. 1998. - № 62 (1). -P. 1-15.

35. Andres G., Alejo A., Salas J. et al. African swine fever virus polyproteins pp220 and pp62 assemble into the core shell // J. Virol. -2002. № 76 (24). - P. 12473-12482.

36. Andres G., Alejo A., Simon-Mateo C. et al. African swine fever virus protease, a new viral member of the SUMO-1-specific protease family // J. Biol. Chem. -2001. № 276 (1). - P. 780-787.

37. Andres G., Garcia-Escudero R., Salas M.L. et al. Repression of african swine fever virus polyprotein pp220-encoding gene leads to the assembly of icosahedral core-less particles // J. Virol. 2002. - № 76 (6). - P. 26542666.

38. Andres G., Simon-Mateo C., Vinuela E. Assembly of african swine fever virus: role of polyprotein pp220 // J. Virol. 1997. - № 71 (3). - P. 2331-2341.

39. Andres G., Simon-Mateo C., Vinuela, E. Characterization of two african swine fever virus 220-kDa proteins: a precursor of the major structural protein pi50 and an oligomer of phosphoprotein p32 // Virology. 1993.194.-P. 284-293.

40. Angulo A., Vinuela E. Alcami A. Comparison of the sequence of the gene encoding African swine fever virus attachment protein pl2 from field virus isolates and viruses passaged in cell culture // J. Virol. 1992. -№66.-P. 3869-3872.

41. Anon. Rapport sur la peste porcine africaine en Espagne, n. 1904 // Bull, off. internat. epizoot. 1977. - № 88. - P. 605-607.

42. Arias M., Pastor M., Escribano J.M. et al. African swine fever diagnosis. Role of the new tests // Proc. Workshop Coordinat. Agricult. Res.- Lisbon. 1993.- P.185-189.

43. Barderas M.G, Rodriguez F., Gomez-Puertas P. et al. Antigenic and immunogenic properties of a chimera of two immunodominant african swine fever virus proteins // Arch. Virol. 2001. - № 146 (9). - P. 16811691.

44. Barderas M.G, Wigdorovitz A., Merelo F. et al. Serodiagnosis of african swine fever using the recombinant protein p30 expressed in insect larvae // J. Virol. Methods. 2000. - № 89. - P. 129-136.

45. Bastos A.D., Penrith M.L., Cruciere C. et al. Genotyping field strains of african swine fever virus by partial p72 gene characterisation // Arch Virol. 2003. - № 148(4). - P. 693-706.

46. Baylis S.A, Dixon L.K., Vydelingum S. et al. African swine fever virus encodes a gene with extensive homology to type II DNA topoisomerases // J. Mol. Biol. 1992. - № 228(3). - P. 1003-1010.

47. Baylis S.A., Banham A.H., Vydelingum S. et al. African swine fever virus encodes a serine protein kinase which is packaged into virions // J. Virol. 1993. - № 67 (8). - P. 4549-4556.

48. Baylis S.A., Twigg S.R.F., Vydelingum S. et al. Three african swine fever virus genes encoding proteins with homology to putative helicases of vaccinia virus // J. Gen. Virol. 1993a. - №74. - P. 1969-1974.

49. Bech-Nielsen S., Arias M.L., Panadero J. et al. Laboratory diagnosisand disease occurrence in the current african swine fever eradication program in Spain 1989-1991 // Prevent Vet. Med. 1993. - № 17. - 225234.

50. Birnboim H.C. A rapid alkaline extraction method for the isolation of plasmid DNA // Methods Enzymol. 1983. - № 100. - P. 243 - 255.

51. Black D.N., Brown F. Purification and physicochemical characteristics of african swine fever virus // J. Gen. Virol. 1976. - № 32. - P. 509-518.

52. Blasco R., Aguero M., Almendral J.M. et al. Variable and constant regions in african swine fever virus DNA // Virology. 1989. - № 168. -P. 330-338.

53. Blasco R., Lopez-Otin C., Munoz M. et al. Sequence and evolutionary relationships of african swine fever virus thymidine kinase // Virology. -1995.-№ 178.-P. 301-304.

54. Boinas F.S., Hutchings G.H., Dixon L.K. et al. Characterization of pathogenic and non-pathogenic african swine fever virus isolates from Ornithodoros erraticus inhabiting pig premises in Portugal // J. Gen. Virol. 2004. - № 85. - P. 2177-2187.

55. Boinas F.S., Wilkinson P.J. Transmission of african swine fever virus // African swine fever / Galo A. (Ed.), Proc. Workshop Coordinat. Agricult. Res. 1993.-P.211-222.

56. Borca M.V., Carrillo C., Zsak L. et al. Deletion of a CD2-like gene, 8-DR, from african swine fever virus affects viral infection in domestic swine // J. Virol. 1998. -№ 72 (4). - P. 2881-2889.

57. Borca M.V., Irusta P., Carrillo C. et al. African swine fever virus structural protein p72 contains a conformational neutralizing epitope // Virology. 1994. - № 201 (2). - P. 413-418.

58. Вогса M.V., Irusta P.M., Kutish G.F. et al. A structural DNA binding protein of african swine fever virus with similarity to bacterial histone-like proteins //Arch. Virol. 1996. - № 141 (2). - P. 301-313.

59. Borca M.V., Kutish G.F., Afonso C.L. et al. An african swine fevervirus gene with similarity to the T-lymphocyte surface antigen CD2 mediates hemadsorption // Virology. 1994. - № 199 (2). - P. 463-468.

60. Brookes S.M., Sun H., Dixon L.K. et al. Characterization of african swine fever virion proteins j5R and jl3L: immuno-localization in virus particles and assembly sites // J. Gen. Virol. 1998. - № 79 (Pt 5). - P. 1179-1188.

61. Brown J.P., Twardzik D.R., Marquardt H. et al. Vaccinia virus encodes a polypeptide homologous to epidermal growth factor and transforming growth factor // Nature. 1985. - № 313. - P. 491-492.

62. Brun A., Rivas C., Esteban M. et al. African swine fever virus gene A179L, a viral homologue of bcl-2, protects cells from programmed cell death // Virology. 1996. - № 225 (1). - P.227-230.

63. Caballero R.G., Tabares E. Application of pRPEL2 plasmid to detect african swine fever virus by DNA-DNA hybridization // Arch. Virol. -1986. -№87. -P. 119-125.

64. Camacho A., Vinuela E. Protein p22 of african swine fever virus: an early structural protein that is incorporated into the membrane of infected cells // Virology. 1991. - № 181. - P. 251 -257.

65. Campbell A. Bacteriophage X // Shapiro J.A. (Ed.), Mobile Genetic Elements. 1983. - P. 65-103.

66. Carrascosa A.L, Del Val M., Santaren J.F. et al. Purification and properties of african swine fever virus // J. Virol. 1985. - № 54. — P. 337-344.

67. Carrascosa A.L, Sastre I., Gonzalez P. et al. Localization of the african swine fever virus attachment protein pl2 in the virus particle by immunoelectron microscopy // Virology. 1993. - № 193. - P. 460-465.

68. Carrascosa A.L., Bustos M.J., Nogal M.L. et al. Apoptosis induced in an early step of african swine fever virus entry into Vero cells does not require virus replication // Virology. 2002. -№ 294 (2). - 372-382.

69. Carrascosa J.L, Carazo J.M., Carrascosa A.L. et al. General morphologyand capsid fine structure of african swine fever virus particles // Virology. 1984. - № 132.-P. 160-172.

70. Chacon M.R., Almazan F., Nogal M. et al. The african swine fever virus IAP homolog is a late structural polypeptide // J. Virol. 1995.- № 214 (2). - P.670-674.

71. Cistue C., Tabares E. Expression in vivo and in vitro of the major structural protein (VP73) of african swine fever virus // Arch. Virol. -1992.-№ 123.-P.l 11-124.

72. Cobbold C., Windsor M., Wileman T.A. Virally encoded chaperone specialized for folding of the major capsid protein of african swine fever virus // J. Virol. 2001. - № 75 (16). - P. 7221-7229.

73. Collins J., Hohn B. Cosmids: a type of plasmid gene-cloning vector that is packageable in vitro in bacteriophage X heads // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1978. - № 75. - P. 4242-4246.

74. De Boer С J, Pan J.C., Hess W.R. Immunology of african swine fever // J. Amer. Vet. Med. Ass. 1972. - v. 160, № 4. - p. 528-532.

75. De Tray D.E. African swine fever // Advances in Veterinary Science. -1963.-№8.-P. 299-333.

76. De Tray D.E., Scott G.R. Blood changes in swine with african swine fever//Amer. J. Vet. Res. 1957. - v. 18, № 68. - P. 484-490.

77. De Tray D.E., Zaphiro D., Hay D. Incidence of african swine fever in warthogs in Kenya. A preliminary report // J. Amer. Vet. Med. Ass. -1961.-v. 138, №2.-P. 78-80.

78. Dixon L.K. The structure and function of the african swine fever genome // Rev. Sci., tech. Off. int. Epiz. 1986. - v.5, № 2. - P. 469-475.

79. Dixon L.K., Baylis S.A., Vydeingum S., et al. African swine fever virus genome content and variability // Arch. Virol. 1993. - № 7. - P. 185199.

80. Dixon L.K., Twigg S.R.F., Baylis S.A. et al. Nucleotide sequence of a 55 kbp region from the right end of the genome of a pathogenic african swine fever isolate (Malawi LIL20/1) // J. Gen. Virol. 1994. - № 75. - P. 1655-1684.

81. Dixon L.K., Wilkinson P.J. Genetic diversity of african swine fever isolates from soft ticks (Ornithodoros moubata) inhabiting warthog burrows in Zambia // J. Gen. Virol. 1988. - № 69. - P. 2981-2993.

82. Enjuanes L., Carrascosa A.L., Vinuela E. Isolation and properties of the DNA of african swine fever virus // J. Gen. Virol. 1976. - № 32. - P. 479-492.

83. Escribano J.M., Pastor M.J., Sanchez-Vizcaino J.M. Antibodies to bovine serum albumin in swine sera: implication for false-positive reactions in the serodiagnosis of african swine fever // Am. J. Vet. Res. — 1989.-№50.-P. 1118-1122.

84. Fishman A., Levy I., Cogan U. et al. Stabilization of horseradish peroxidase in aqueous-organic media by immobilization onto cellulose using a cellulose-binding-domain 11 J. Mol. Catal. B-Enzym. 2002. - № 18. — P. 121-131.

85. Foord O.S., Rose E.A. Long-distance PCR // PCR Methods Applic. -1994. v.3, № 6. - P. 149-161.

86. Freije J.M.P., Munoz M., Vinuela E. et al. High-level expression in Escherichia coli of the gene coding for the major structural protein (p72) of african swine fever virus // Gene. 1993. - № 123 (2). - P. 259-262.

87. Galindo I., Vinuela E., Carrascosa A.L. Protein cell receptors mediate the saturable interaction of african swine fever virus attachment protein pl2 with the surface of permissive cells // Virus Res. 1997. - № 49(2). -P. 193-204.

88. Gayot G. African swine fever: isolation and identification in metropolitan France of epidemiological, clinical, anatomophato // Bull. Acad. vet. Fr. 1974. - v. 57, № 57. - P. 91-97.

89. Gilbert W., Villa-Komaroff L. Useful proteins from recombinant bacteria // Sci. American. 1980. - № 243. - P. 74-95.

90. Gomez-Puertas P., Rodriguez F., Oviedo J.M. et al. Neutralizing antibodies to different proteins of african swine fever virus inhibit both virus attachment and internalization // J. Virol. 1996. - № 70. - P. 56895694.

91. Gonzague M., Roger F., Bastos A. et al. Isolation of a non-haemadsorbing, non-cytopathic strain of african swine fever in Madagascar // Epidemiol. Infect. 2001. - № 126. - P. 453-459.

92. Gonzalez A., Talavera A., Almendral J.M. et al. Hairpin loop structure of african swine fever virus DNA // Nucleic Acids Res. 1986 - № 14. -P. 6835-6844.

93. Greig A. The localization of african swine fever virus in the tick Ornithodoros moubata porcinus // Arch. ges. Virusforsch. 1972. - v. 39, № 1-3.-P. 240-247.

94. Hess W.R. African swine fever virus // Virology monographs. 1971. -v. 9.-P. 1-33.

95. Hingamp P.M., Arnold J.E., Mayer R.J. et al. A ubiquitin conjugating enzyme encoded by african swine fever virus // EMBO J. 1992. - № 11(1).-P. 361-366.

96. Holland P., Abramson R., Watson R. et al. Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5' to 3' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - № 88. - P. 7276-7280.

97. Hopp T.P., Woods K.R. Prediction of protein antigenic determinants from amino acid sequences // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1981. - № 78 (6). - 3824-3828.

98. Hulst M.M., Westra D.F., Wensvoort G. et al. Glycoprotein El of hog cholera virus expressed in insect cells protects swine from hog cholera // J. Virol. 1993. - Vol. 67, № 9. p. 5435-5442.

99. King D.P., Reid S.M., Hutchings G.H., et al. Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of african swine fever virus // J. Virol. Methods. 2003. - № 107 (1). - P. 53-61.

100. Kleiboeker S.B., Burrage T.G., Scoles G.A. et al. African swine fever virus infection in the argasid host, Ornithodoros porcinus porcinus // J. Virol. 1998. - № 72 (3). - P. 1711-1724.

101. Kleiboeker S.B., Kutish G.F., Neilan J.G. et al. A conserved african swine fever virus right variable region gene, I11L, is non-essential for growth in vitro and virulence in domestic swine // J. Gen. Virol. 1998. -№ 79 (Pt 5). - P. 1189-1195.

102. Kleiboeker S.B., Scoles G.A. Pathogenesis of african swine fever virus in Ornithodoros ticks // Anim. Health Res. Rev. 2001. - № 2. - P. 121128.

103. Kleiboeker S.B., Scoles G.A., Burrage T.G. et al. African swine fever virus replication in the midgut epithelium is required for infection of

104. Ornithodoros ticks // J. Virol. 1999. - № 73 (10). - P. 8587-8598.

105. Klein P., Kanehisi M., De Lisi C. The detection and classification of membrane-spanning proteins // Biochim. Biophys. Acta. 1985. - № 815. -P. 468-476.

106. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. - № 227. - P. 680-685.

107. Larenaudie В., Haag J., Carnero B. La purification du virus de la peste porcine africaine par le fluorocarbone // Bull. off. internat. epiz. 1965. -v. 63, №5-6.-P. 711-716.

108. Lewis Т., Zsak L., Burrage T.G. et al. An african swine fever virus ERV1-ALR homologue, 9GL, affects virion maturation and viral growth in macrophages and viral virulence in swine // J. Virol. 2000. - № 74 (3).-P. 1275-1285.

109. Livak K.J., Flood S.J., Marmaro J. et al. Oligonucleotides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization // PCR Methods Appl. 1995. - № 4. - P. 357-362.

110. Lopez-Otin C., Freije J.M.P., Parra F. et al. Mapping and sequence of the gene coding for protein p72, the major capsid protein of african swine fever virus // Virology. 1990. - № 175. - P. 477-484.

111. Lucas A., Carnero R., Bresso M. Classification of african swine fever virus // C. R. Acad. Sci. 1968. - v. 266, № 17. - P. 1800-1801.

112. Maciejewski M.W., Shin R., Pan B. et al. Solution structure of a viral DNA repair polymerase // Nat. Struct. Biol. 2001. - № 8 (11). - P. 936941.

113. Mackett M., Smith G. L., Moss B. General method for production and selection of infectious vaccinia virus recombinants expressing foreign genes // J. Virol. 1984. - № 49. - P. 857-864.

114. Mackett M., Smith G. L., Moss B. Vaccinia virus: A selectable eukaryotic cloning and expression vectors // Proc. Natl. Acad. Sci. 1982.-№79.-P. 7415-7419.

115. Manso Ribeiro J. Reappearance of african swine fever in Portugal // Bull. off. internat. epizoot. 1961. - v. 55, № 1-2. - P. 88-106.

116. Manual of standards for diagnostic tests and vaccines, 4th edition, 2000.

117. Martinez-Pomares L., Simon-Mateo C., Lopez-Otin C., Vinuela E. Characterization of the african swine fever virus structural protein pi 4.5: a DNA binding protein // Virology. 1997. - № 229 (1). - P. 201-211.

118. Maurer F.D., Griesemer R.A., Jones T.C. The pathology of african swine fever. A comparison with hog cholera // Am. J. Vet. Res. 1958. -№ 19.-P. 517-539.

119. Maurice S., Dekel M., Shoseyov O. et al. Cellulose beads bound to cellulose binding domain-fused recombinant proteins; an adjuvant system for parenteral vaccination of fish // Vaccine. 2003. - № 21. - P. 32003207.

120. Medin J.A., Gathy K., Coleman M.S. Expression of foreign proteins in Trichoplusia ni larvae // Methods Mol. Biol. 1995. - № 39. - P. 265275.

121. Messing J., Vieira J. A new pair of M13 vectors for selecting either DNA strand of double-digest restriction fragments // Gene. 1982. - № 19.-P. 269-276.

122. Michaelis S., Beckwith J. Mechanism of incorporation of cell envelope proteins in Escherichia coli // Annu. Rev. Microbiol. 1982. - № 36. — P. 435-465.

123. Montgomery R.E. On a form of swine fever occurring in British East Africa (Kenya Colony) // J. Сотр. Pathol. 1921. - № 34. - P. 159-191.

124. Moore D.M., Zsak L., Neilan J.G. et al. The african swine fever virus thymidine kinase gene is required for efficient replication in swine macrophages and for virulence in swine // J. Virol. 1998. - № 72 (12). -P. 10310-10315.

125. Morrison T.B., Weis J.J., Wittwer C.T. Quantification of low-copy transcripts by continuous SYBR Green I monitoring during amplification // BioTechniques. 1998. - № 24. - P. 954-958.

126. Moss В., Flexner C. Vaccinia virus expression vectors // Annual Review of Immunology. 1987. - № 5. - P. 305-324.

127. Mullis K., Faloona F., Scharf S. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro. The polymerase chain reaction // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1986. - № 51. - P. 263-273.

128. Munoz M., Freije J.M.P., Salas M.L. et al. Structure and expression in E. coli of the gene coding for protein plO of african swine fever virus // Arch. Virol. 1993. - № 130. - P. 93-107.

129. Neilan J.G, Lu Z., Kutish G.F. et al. A BIR motif containing gene of african swine fever virus, 4CL, is nonessential for growth in vitro and viral virulence // Virology. 1997. - № 230 (2). - P. 252-264.

130. Neilan J.G., Lu Z., Afonso C.L. et al. An african swine fever virus gene with similarity to the proto-oncogene bcl-2 and the Epstein-Barr virus gene BHRF1 // J. Virol. 1993. - № 67. - P. 4391-4394.

131. Neilan J.G., Lu Z., Kutish G.F. et al. A conserved african swine fever virus I kappa В homolog, 5EL, is nonessential for growth in vitro and virulence in domestic swine // Virology. 1997. - № 235 (2). - P. 377385.

132. Neilan J.G., Zsak L., Lu Z. et al. Novel swine virulence determinant in the left variable region of the african swine fever virus genome // J. Virol. 2002. - № 76 (7). - P. 3095-3104.

133. Neitz W.O. African swine fever // Emerging disease of animal. -Rome, 1963.-P. 1-70.

134. Nickoloff J.A. Electroporation Protocols for Microorganisms // Methods in Molecular Biology. Totowa, New Jersey, 1995.

135. Pan I.C., De Boer C.J., Hess W.R. African swine fever: application of immunoelectroosmophoresis for the detection of antibody // Can. J. Сотр. Med. 1972. - № 36. - P. 309-316.

136. Pastey M.K., Samal S.K. Baculovirus expression of the fusion protein gene of bovine respiratory syncytial virus and utility of the recombinant protein in a diagnostic enzyme immunoassay // J. Clin. Microbiol. 1998. -№36.-P. 1105-1108.

137. Pastor M.J., Arias M., Alcaraz C. et al. A sensitive dot immunobindingassay for serodiagnosis of african swine fever virus with application in field conditions // J. Vet. Diagn. Invest. 1992. -№ 4 (3). - P. 254-257.

138. Pennock G.D., Shoemaker C., Miller L.K. Strong and regulated expression of Escherichia coli J3 galactosidase in insect cells with a baculovirus vector // Mol. Cell. Biol. - 1984. - № 4. - P. 399-406.

139. Pini A., Hurter D. African swine fever: an epizootological review with special reference to the South African situation //J. S. Afr. vet. Assn. -1975. v. 46, № 3. - P. 227-232.

140. Plowright W. Vector transmission of african swine fever virus // Hog «cholera, classical swine fever and african swine fever / Commission of the European Communities. EUR 5904 EN. 1977. - P. 575-587.

141. Plowright W., Brown F., Parker J. Evidence for the type of nucleic acid in african swine fever virus // Arch. ges. Virusforsch. 1966. - v. 19, № 3,-P. 289-304.

142. Plowright W., Parker J. The stability of african swine fever virus with particular reference to heat and pH inactivation // Arch. ges. Virusforsch. 1967. - v. 21, № 3/4, - P. 382-402.

143. Plowright W., Parker J., Pierce M.A. The epizootiology of african swine fever in Africa // Vet. Rec. 1969. - № 85. - P. 668-674.

144. Powell P.P., Dixon L.K., Parkhouse R.M. An I kappa В homolog encoded by african swine fever virus provides a novel mechanism for downregulation of proinflammatory cytokine responses in host macrophages // J. Virol. 1996. - № 70 (12). - P. 8527-8533.

145. Prados F.J., Vinuela E., Alcami A. Sequence and characterization ofthe major early phosphoprotein p32 of african swine fever virus // J. Virol. 1993. - № 67. - P. 2475-2485.

146. Ramiro-Ibanez F., Ortega A., Brun A. et al. Apoptosis: a mechanism of cell killing and lymphoid organ impairment during acute african swine fever virus infection // J. Gen. Virol. 1996. - № 77 (Pt 9). - P. 22092219.

147. Read S.J., Mitchell J.L., Fink C.G. Lightcycler multiplex PCR for the laboratory diagnosis of common viral infections of the central nervous system // J. Clin. Microbiol. 2001. - № 39. - P. 3056-3059.

148. Rennie L., Wilkinson P.J., Mellor P.S. Effects of infection of the tick Ornithodoros moubata with african swine fever virus // Med. Vet. Entomol. 2000. -№ 14 (4). - P. 355-360.

149. Rennie L., Wilkinson P.J., Mellor P.S. Transovarial transmission of african swine fever virus in the argasid tick Ornithodoros moubata // Med. Vet. Entomol. 2001. - № 15 (2). - P. 140-146.

150. Revilla Y., Cebrian A., Baixeras E. et al. Inhibition of apoptosis by the african swine fever virus bcl-2 homologue: role of the BH1 domain // Virology. 1997. - № 228 (2). - P. 400-404.

151. Rodriguez C.I., Nogal M.L., Carrascosa A.L. et al. African swine fever virus IAP-like protein induces the activation of nuclear factor kappa В // J. Virol. 2002. - № 76 (8). - P. 3936-3942.

152. Rodriguez F., Alcaraz C., Eiras A. et al. Characterization and molecular basis of heterogeneity of the african swine fever virus envelope protein p54 // J. Virol. 1994. - № 68. - P. 7244-7252.

153. Rodriguez J.M., Salas M.L., Vinuela E. Intermediate class of mRNAs in african swine fever virus // J. Virol. 1996. - № 70. - P. 8584-8589.

154. Rodriguez J.M., Salas M.L., Santaren J.F. African swine fever virus-induced polypeptides in porcine alveolar macrophages and in Vero cells: two-dimensional gel analysis // Proteomics. 2001. - Nov; 1(11). - 14471456.

155. Rojo G., Chamorro M., Salas M.L. Migration of mitochondria to viral assembly sites in african swine fever virus-infected cells // J.Virol. -1998.-Vol.72, № 9. P.7583-7588.

156. Rychlik W. Selection of primers for polymerase chain reaction // White B.A. (Ed.), PCR protocols: current methods and applications. -1993.-P. 31-40.

157. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual // 2nd edn. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory. 1989.

158. Sanchez-Vizcaino J.M. African swine fever diagnosis // African Swine Fever / Becker Y. (ed.). Martinus Nijhoff, Boston, USA, 1987. - P. 6371.

159. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitirs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - № 74. - P. 5463-5467.

160. Schlafer D.H., Mebus C.A. Abortion in sows experimentally infected with african swine fever virus // Amer. J. Vet. Res. 1987. - vol. 48, № 2. -P. 246-254.

161. Schnitzler P., Darai G. Identification of the gene encoding the majorcapsid protein of fish lymphocystis disease virus // J. Gen. Virol. 1993. -№74.-P. 2143-2150.

162. Sela M. Antigens // Encyclopedia of Immunology / Roitt I.M., Delves P.J. (Eds.). Academic Press, London, 1992. - P. 128-133.

163. Showalter A.K., Byeon I.J., Su M.I. et al. Solution structure of a viral DNA polymerase X and evidence for a mutagenic function // Nat. Struct. Biol. 2001. - № 8 (11). - P. 942-946.

164. Shpigel E., Goldlust A., Eshel A. et al. Expression, purification and applications of staphylococcal protein A fused to cellulose-binding domain // Biotechnol. Appl. Biochem. 2000. - № 31. - P. 197-203.

165. Simon-Mateo C., Andres G., Almazan F. et al. Proteolytic processing in african swine fever virus: evidence for a new structural polyprotein, pp62 // J. Virol. 1997. - № 71 (8). - P. 5799-5804.

166. Simon-Mateo C., Andres G., Vinuela E. Polyprotein processing in African swine fever virus: a novel gene expression strategy for a DNA virus // EMBO J. 1993. - № 12 (7). - P. 2977-2987.

167. Simon-Mateo C., Freije J.M.P., Andres G. et al. Mapping and sequence of the gene encoding protein pi7, a major african swine fever virus structural protein // Virology. 1995. - № 206. - P. 1140-1144.

168. Smith G.E., Summers M.D., Fraser M.J. Production of human beta interferon in insect cells infected with a baculovirus expression vector // Mol. Cell. Biol. 1983. - № 3. - P. 2156-2165.

169. Smith G.L., Mackett M., Moss B. Infectious vaccinia virus recombinants that express hepatitis В virus surface antigen // Nature. -1983.-№25.-P. 21-28.

170. Sogo J.M., Almendral J.M., Talavera A. et al. Terminal and internal inverted repetitions in african swine fever virus DNA // Virology. 1984. - № 133.-P. 271-275.

171. Stassi D.L., Lacks S.A. Effect of promoters on the cloning in Escherichia coli of DNA fragments from Streptococcus pneumoniae //

172. Gene. 1982. - Vol. 18. - P. 319-328.

173. Steiger Y., Ackermann M., Mettraux C. et al. Rapid and biologically safe diagnosis of african swine fever vims infection by using polymerase chain reaction // J. Clin. Microbiol. 1992. - № 30 (1). - P. 1-8.

174. Stennicke H.R., Jurgensmeier J.M., Shin H. et al. Pro-caspase-3 is a major physiologic target of caspase-8 // J. Biol. Chem. 1998. - № 273. -P. 27084-27090.

175. Stennicke H.R., Salvesen G.S. Biochemical characteristics of caspase-3, -6, -7, and -8 // J. Biol. Chem. 1997. - № 272. - P. 25719-25723.

176. Studier W.F., Moffat B.A. Use a bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes // J. Mol. Biol. -1986. -№ 189.-P. 113-130.

177. Summers M.D., Smith G.E. A manual of methods for baculovirus vectors and insect cell culture procedures // Texas Agricultural Experiment Station Bulletin no. 1555. 1987.

178. Sun H., Jacobs S.C., Smith G.L. et al. African swine fever virus gene jl3L encodes a 25-27 kDa virion protein with variable numbers of amino acid repeats // J. Gen. Virol. 1995. - № 76 (Pt 5). - P.l 117-1127.

179. Sun H., Jenson J., Dixon L.K. et al. Characterization of the african swine fever virion protein j 18L // J. Gen. Virol. 1996. - № 77 (Pt 5). - P. 941-946.

180. Tabares E., Fernandez M., Salvador-Temprano E. et al. A reliable enzyme linked immunosorbent assay for african swine fever using the major structural protein as antigenic reagent // Arch. Virol. 1981. - № 70.-P. 297-300.

181. Tabares E., Martinez J., Martin E. et al. Proteins specified by africanswine fever virus. II. Analysis of proteins in infected cells and antigenic properties // Arch. Virol. 1980. - № 66. - P. 119-132.

182. Takamatsu H., Denyer M.S., Oura C. et al. African swine fever virus: a В cell-mitogenic virus in vivo and in vitro // J. Gen. Virol. 1999. - № 80 (Pt6).-P. 1453-1461.

183. Taylor W.P., Best J.R., Couquhoun I.R. Absence of african swine fever virus from Nigerian warthogs // Bull. Anim. Health Prod. Afr. 1977. -№25.-P. 196-197.

184. Terpstra C. Differential diagnosis between african swine fever and hog cholera // African Swine Fever / Becker Y. (Ed.). Martinus Nijhoff Publ., Boston / Dordrecht, 1987. - P. 73-80.

185. Terpstra C. Laboratory diagnostics of african swine fever in ASF-free and ASF-endemic countries // African swine fever / Galo A. (Ed.), Proc. Workshop for coordination of agricultural research. Lisbon, 1993: - P. 161-167.

186. The EMPRES transboundary animal disease bulletin. Update on african swine fever (ASF) in West Africa.

187. Thomson G.R. The epidemiology of african swine fever: the role of free-living hosts in Africa // Onderstepoort J. Vet. Res. 1985. - № 52. -P. 201-209.

188. Thomson G.R., Gainaru M.D., Van Dellen A.F. Experimental infection of warthog (Phacochoerus aethiopicus) with african swine fever virus // Onderstepoort J. Vet. Res. 1980. - № 47. - P. 19-22.

189. Tomme P., Boraston A., McLean B. et al. Characterization and affinity applications of cellulose-binding domains // J. Chromatogr. 1998. - № 715.-P. 283-296.

190. Vallee I., Tait S.W., Powell P.P. African swine fever virus infection of porcine aortic endothelial cells leads to inhibition of inflammatory responses, activation of the thrombotic state, and apoptosis // J. Virol. -2001.-№75 (21).-P. 10372-10382.

191. Vinuela E. African swine fever virus // African swine fever / Becker Y. (Ed.). 1987. -p. 31-49.

192. Von Heijne G. A new method for predicting signal sequence cleavage sites // Nucleic Acids Res. 1986. - № 14. - P. 4683-4690.

193. Wesley R.D., Tuthill A.E. Genome relatedness among african swine fever virus isolates by restriction endonuclease analysis // Prev. Vet. Med. 1984.-№2.-P. 53-62.

194. Whittall J.T, Parkhouse R.M. Changes in swine macrophage phenotype after infection with african swine fever virus: cytokine production and responsiveness to interferon-gamma and lipopolysaccharide // Immunology. 1997. - № 91 (3). - P. 444-449.

195. Wilkinson P.J. Transmission of the african swine fever virus // Prev. Vet. Med. 1984. - № 2. - P. 71.

196. Wu R., Grossman L. Expression vectors // Methods in Enzymology. -1987.-№ 153.-P. 385-563.

197. Yanez R.J., Boursnell M., Nogal M.L. et al. African swine fever virus encodes two genes which share significant homology with the two largest subunits of DNA-dependent RNA polymerases // Nucleic Acids Res. -1993. № 21 (10). - P. 2423-2427.

198. Yanez R.J., Rodriguez J.M., Boursnell M. et al. Two putative africanswine fever virus helicases similar to yeast 'DEAH' pre-mRNA processing proteins and vaccinia virus ATPases D11L and D6R // Gene. 1993. - № • 134 (2).-P. 161-174.

199. Yanez R.J., Rodriguez J.M., Nogal M.L. et al. Analysis of the complete nucleotide sequence of african swine fever virus // Virology. — 1995. № 208 (1). - P. 249-278.

200. Yanez R.J., Vinuela E. African swine fever virus encodes a DNA ligase // Virology. 1993. - № 193 (1). - P. 531-536.

201. Young J.F., Hockmeyer W.T., Gross M. et al. Expression of Plasmodium falciparum circumsporozoite proteins in E. coli for potential use in a human malaria vaccine // Science. 1985. - № 228. - P. 958-962.

202. Yozawa Т., Kutish G.F., Afonso C.L. et al. Two novel multigene families, 530 and 300, in the terminal variable regions of african swine fever virus genome // Virology. 1994. - № 202 (2). - P. 997-1002.

203. Yu M., Morrissy С .J., Westbury H.A. Strong sequence conservation of african swine fever virus p72 protein provides the molecular basis for its antigenic stability // Arch. Virol. 1996. - № 141. - P. 1795-1802.

204. Zsak L., Caler E., Lu Z. et al. A nonessential african swine fever virus gene UK is a significant virulence determinant in domestic swine // J. Virol. 1998. - № 72 (2). - P. 1028-1035.

205. Zsak L., Lu Z., Burrage T.G. et al. African swine fever virus multigene family 360 and 530 genes are novel macrophage host range determinants // J. Virol. 2001. - № 75 (7). - P. 3066-3076.

206. Zsak L., Lu Z., Kutish G.F. et al. An african swine fever virus virulence-associated gene NL-S with similarity to the herpes simplex virus ICP34.5 gene // J. Virol. 1996. - № 70 (12). - P. 8865-8871.

207. Zsak L., Neilan J.G. Regulation of apoptosis in african swine fever virus-infected macrophages // Scientific World Journal. 2002. - № 2 (5). -P. 1186-1195.