Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика и прогностические критерии плоскоклеточного рака гортани тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.15, кандидат медицинских наук Горбань, Нина Андреевна

• Горбань, Нина Андреевна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Горбань, Нина Андреевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Морфологические и иммуногистохимические подходы к изучению клинических особенностей и лечебного патоморфоза рака гортани (обзор литературы).

1.1. Общая характеристика некоторых иммуногистохимических и молекулярно-биологических маркеров опухолевого роста.

1.2. Клиническое значение иммуногистохимических и молекулярно-биологических маркеров в плоскоклеточном 17 раке гортани.

1.3. Морфологические критерии оценки лечебного патоморфоза.

1.4. Морфологические изменения «неопухолевого» покровного эпителия при плоскоклеточном раке гортани.

ГЛАВА II. Общая характеристика материала и методов исследования.

ГЛАВА III. Результаты исследования.

3.1. Изучение роли маркеров пролиферации опухолевых клеток в уточнении клинико-морфологических особенностей рака гортани.

3.2. Иммуногистохимический анализ экспрессии регуляторных белков р53 и bcl—2 клетками плоскоклеточного рака гортани.

3.3. Взаимосвязь коэкспрессии иммуногистохимических маркеров с клинико-морфологическими параметрами.

3.4. Изучение особенностей внутриопухолевого микроциркуляторного русла.

3.5. Анализ роли иммуногистохимических маркеров в прогнозировании степени лечебного патоморфоза плоскоклеточного рака гортани.

3.6. Иммуногистохимические особенности изменений прилежащего к опухоли покровного эпителия при раке гортани.

ГЛАВА IV. Обсуждение полученных результатов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика и прогностические критерии плоскоклеточного рака гортани»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Рак гортани составляет 4-6% злокачественных опухолей человека и имеет тенденцию возрастать вследствие принадлежности к опухолям, возникновение которых связано с загрязнением внешней среды промышленными канцерогенами [7]. По частоте встречаемости в Российской Федерации рак гортани вышел на 5-е место [34]. В 2004 г. радикальное лечение по поводу злокачественного новообразования гортани завершили 61% больных (в 2003 г. - 59,8%), от числа больных с I-III стадией заболевания - 74%. Из них получили только лучевое лечение - 38,4%, комбинированное - 39,4%, только хирургическое -15,8% больных [32]. В последние годы одним из наиболее признанных и эффективных методов лечения рака гортани является лучевая терапия, проводимая как самостоятельно, так и в комбинации с хирургическим и лекарственным лечением [2, 12, 29, 34]. Лучевой метод лечения, особенно распространенного рака гортани, привлекает возможностью избежать калечащих операций [2, 5, 29]. Эффективность метода зависит от радиочувствительности рака гортани, определить степень которой очень трудно даже при комплексном обследовании больного. Нередко опухоль оказывается радиорезистентной, или развиваются рецидивы.

В настоящее время еще нет достоверного способа определения радиочувствительности рака гортани, не разработаны критерии учета индивидуальных особенностей опухолевого процесса при раке гортани, которые могут служить основой прогнозирования клинического течения заболевания и планирования лечения, проведения активных профилактических мероприятий в прогностически неблагоприятной группе больных [5].

Последнее десятилетие проводят интенсивные исследования прогностического значения различных гистопатологических факторов при злокачественных опухолях. При плоскоклеточном раке гортани большое значение придают анатомической локализации опухоли, стадии (Т), степени дифференцировки опухоли (G), наличию метастазов в лимфатических узлах (N) [5,7]. В настоящее время активно изучают различные молекулярно-биологические тканевые маркеры, большинство из которых характеризует определенные биологические особенности опухоли, специфику ее «поведения» и регуляции [27]. Количество изучаемых потенциальных молекулярных маркеров увеличивается лавинообразно. В их число входят онкогены, протоонкогены, онкобелки, различные факторы роста и их рецепторы, супрессорные гены и продукты их экспрессии, протеазы, участвующие в прогрессировании опухолевого процесса. Результаты исследований порой носят достаточно противоречивый характер. Представляется логичным, что комплексное использование клинических данных и молекулярно-биологических признаков с большей вероятностью будет способствовать определению индивидуального прогноза у онкологических больных вообще и при плоскоклеточном раке гортани в частности.

К числу малоизученных, но очень актуальных относится вопрос о характере изменений слизистой оболочки вне основного узла опухоли. Не исключено, что именно очаги дисплазии (предрака) и карциномы in situ могут быть источниками рецидива опухоли [7, 37].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Оценить клинико-морфологическое значение ряда молекулярно-биологических маркеров (Ki-67, циклина Dl, р53, bcl-2 и FVIII) в плоскоклеточном раке гортани в их взаимосвязи друг с другом, особенностями лечебного патоморфоза опухоли, а также с молекулярно-биологическими характеристиками предраковых изменений прилежащего к опухолям покровного эпителия.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Определить связь между иммуноморфологическими особенностями рака гортани до лечения и клинико-морфологическими параметрами, имеющими прогностическое значение. (Определить пролиферативную активность по экспрессии Ki-67 и циклина D1, мутацию гена р53 по экспрессии мутантного белка р53, экспрессию bcl-2).

2. Изучить возможную связь между иммуноморфологическими характеристиками опухоли до лечения и результатами терапии.

3. Оценить характер кровоснабжения опухоли по таким показателям как микрососудистая плотность, суммарный периметр сосудов и суммарная площадь сосудов. Определить взаимосвязь васкуляризации опухоли с клинико-морфологическими параметрами и ее влияние на прогноз заболевания.

4. Установить степень лечебного патоморфоза опухолей после проведенной терапии и проанализировать взаимосвязь ее с экспрессией биологических маркеров и клиническим течением болезни.

5. Исследовать иммуногистохимические особенности предраковых изменений слизистой оболочки гортани, установить их прогностическое, значение.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА исследования заключается в определении значимости уровня пролиферации, р53 и bcl-2 для прогноза, что может быть использовано при планировании тактики лечения больных. Установлена связь между степенью васкуляризации опухоли и ее агрессивностью, прогнозом болезни. В работе показано значение маркера пролиферации Ki-67 и белка р53 для дифференциальной диагностики предраковых поражений гортани от доброкачественных гиперпластических процессов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ состоит в том, что для установления потенциала злокачественности плоскоклеточного рака гортани предлагается использовать комплекс молекулярных маркеров. В работе показано, что высокий уровень пролиферативной активности опухоли, выявляемый с помощью экспрессии Ki-67 и циклина D1, связан с наличием метастазов в лимфатических узлах и развитием в последующем рецидива заболевания. Обнаружена связь пролиферативной активности со специфической выживаемостью, что может свидетельствовать о неблагоприятном прогнозе для пациентов с высокой пролиферативной активностью опухоли.

Выявление экспрессии р53 статистически достоверно связано с развитием рецидива болезни и коротким безрецидивным периодом, что также указывает на плохой прогноз у данных пациентов. Напротив, выявление экспрессии bcl-2 в опухоли может служить благоприятным прогностическим признаком.

Характер развития кровеносного русла опухоли и степень ее васкуляризации влияют на возможность возникновения рецидива заболевания, на показатели специфической и безрецидивной выживаемости. Высокая степень васкуляризации опухоли служит благоприятным прогностическим признаком по сравнению с низкой, при которой высока вероятность развития рецидива и установлен более низкий уровень пятилетней выживаемости.

Наличие экспрессии р53 клетками пласта покровного многослойного плоского эпителия, высокий уровень Ki-67 свидетельствуют о необратимых предраковых изменениях эпителия, характерных для тяжелой дисплазии и карциномы in situ.

ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ: 1. Уровень пролиферации, экспрессия мутантного белка р53 и ингибитора апоптоза bcl-2, а таюке характер васкуляризации опухоли являются значимыми прогностическими факторами при плоскоклеточном раке гортани. Выделена группа пациентов с гиперэкспрессией р53, уровнем Ki-67 более 55% и низким уровнем васкуляризации (МСП менее 17 и СПСС менее 799цм), которые имеют потенциально неблагоприятный прогноз заболевания, связанный с высоким риском развития рецидивов и низкой специфической и безрецидивной выживаемостью, а также наличием метастазов в регионарных лимфатическим узлах.

2. Степень лечебного патоморфоза плоскоклеточного рака гортани не зависит от иммуноморфологического профиля опухоли. Низкая степень терапевтического патоморфоза является фактором риска развития рецидива заболевания.

3. Наличие экспрессии р53 и/или распространение Ki-67-позитивных клеток до уровня 2/3 толщины эпителиального пласта и выше характерны для тяжелых необратимых предраковых изменений (тяжелая дисплазия, карцинома in situ) покровного эпителия гортани, и могут быть использованы для разграничения предраковых и доброкачественных гиперпластических процессов.

СВЯЗЬ ТЕМЫ ДИССЕРТАЦИИ С ПЛАНОМ НАУЧНЫХ РАБОТ ГУ МРНЦ РАМН. Диссертационная работа выполнена в рамках плановой НИР ГУ МРНЦ РАМН на тему «Разработка технологии комбинированного лечения больных злокачественными опухолями и предраковыми заболеваниями верхних дыхательных путей», № государственной регистрации 01.2.007 02199.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения работы доложены на XI Российском онкологическом конгрессе, Москва, 2007 г. Основные результаты диссертационного исследования нашли отражение в 3 публикациях. Диссертационная работа апробирована на научной конференции клинического радиологического сектора ГУ-МРНЦ РАМН 2 июня 2008 года (протокол №8).

КОНКРЕТНОЕ ЛИЧНОЕ УЧАСТИЕ АВТОРА В ПОЛУЧЕНИИ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ. Автором диссертации обоснована актуальность темы, сформулированы цель, задачи исследования и выводы. Диссертант лично систематизировала и провела микроскопический анализ архивного гистологического материала, накопленного в лаборатории патологической анатомии ГУ МРНЦ РАМН за период с 1998 по 2005 гг., самостоятельно выполнила все иммуногистохимические исследования, провела статистический анализ полученных результатов.

Заключение диссертации по теме «Патологическая анатомия», Горбань, Нина Андреевна

ВЫВОДЫ

1. Высокий уровень пролиферации опухолевых клеток является фактором высокого риска наличия метастазов в регионарных лимфатических узлах и развития рецидива заболевания после комбинированного лечения плоскоклеточного рака гортани. Уровень экспрессии Ki-67 в ядрах более 55% опухолевых клеток связан с низкой специфической и безрецидивной выживаемостью, риском развития рецидива заболевания и наличием пораженных метастазами регионарных лимфатических узлов. Экспрессия циклина D1 наблюдается в 28,1% случаев и связана с низкой специфической выживаемостью.

2. Экспрессия белка р53 наблюдается в 56,3% случаев рака гортани. Наличие экспрессии р53 опухолевыми клетками является неблагоприятным прогностическим признаком, свидетельствующим о высокой вероятности развития рецидива заболевания и коротком безрецидивном периоде.

3. Коэкспрессия р53 и уровня Ki-67 более 55% наблюдается в 34,4% случаев и является фактором неблагоприятного прогноза, связанного с наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах, развитием рецидива заболевания, низкой специфической и безрецидивной выживаемостью.

4. Экспрессия раковыми клетками bcl-2 обнаружена в 29,7% случаев, и является фактором благоприятного прогноза, связанным с высокой специфической выживаемостью.

5. Степень васкуляризации и вариант строения кровеносного русла влияют на вероятность развития рецидива заболевания после терапии, на специфическую и безрецидивную выживаемость. Высокий уровень васкуляризации опухоли и разветвленный тип строения кровеносных сосудов являются благоприятными прогностическими признаками.

Показатели микрососудистой плотности (менее 17) и суммарного периметра сосудистой стенки (менее 779 jim) связаны с высоким риском развития рецидива заболевания, а также низкой специфической и безрецидивной выживаемостью. Суммарная площадь сосудов не влияет на биологическое и клиническое поведение опухоли (прогноз заболевания).

6. Степень лечебного патоморфоза не зависит от уровня пролиферации опухолевых клеток до терапии, экспрессии р53 и особенностей васкуляризации опухоли. Низкая степень лечебного патоморфоза является прогностическим фактором рецидива и короткого безрецидивного периода при раке гортани.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для прогностических целей при плоскоклеточном раке гортани рекомендуется использовать иммуногистохимические маркеры Ki-67 и р53, а также учитывать особенности ангиоархитектоники опухоли. Плоскоклеточные раки с высоким пролиферативным уровнем (Ki-67 более 55%) и наличием экспрессии белка р53 составляют прогностически неблагоприятную группу опухолей с высоким риском рецидива заболевания и низкими показателями выживаемости пациентов.

2. Для оценки характера микроциркуляторного кровеносного русла целесообразно учитывать такие показатели как микрососудистая плотность (МСП) и суммарный периметр сосудистой стенки (СПСС). Опухоли с МСП менее 17 и СПСС менее 779 являются прогностически неблагоприятными и имеют высокий риск развития рецидива, низкую выживаемость.

3. Экспрессия Ki-67 в ядрах эпителиальных клеток, расположенных на уровне 2/3 эпителиального пласта и выше, наличие экспрессии р53 отражают развитие тяжелой дисплазии и карциномы in situ покровного эпителия гортани и могут быть использованы для дифференциальной диагностики предраковых и доброкачественных гиперпластических процессов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Горбань, Нина Андреевна, 2008 год

1. Абраменко И. В., Фильченков А. А. Оценка параметров апоптоза в диагностике онкологических заболеваний, их прогнозе и оптимизации схем терапии// Вопросы онкологии. 2003. - Т. 49. - №1. - С. 21-30.

2. Андреев В. Г., Мардынский Ю. С. Лучевое и комбинированное лечение рака гортани. Москва, 1998. - 115 с.

3. Аничков Н. М. Новое в учении об инвазии опухолевых клеток// Архив патологии. 2004. - Т. 66.- №1. - С. 59 - 63.

4. Балмуханов С. В., Шарипова М А. Борисевич Н. В. и др. Васкуляризация — прогностический показатель радиочувствительности рака гортани//Мед. радиол. 1986.-Т.31.- №12. -С. 19-22.

5. Бойков В. П. Рак гортани (клинико-морфологические особенности, эффективность лечения и индивидуальный прогноз): Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Москва, 1989. - 33 с.

6. Боровиков В. П., Боровиков И. П. Статистический анализ и обработка данных в среде Windows. Москва, 1998. - 592 с.

7. Вержбицкий Г. В. Клинико-морфологическое обоснование тактики лечения и прогноза рака гортани: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Москва, 1983. - 37 с.

8. Галил-Оглы Г. А., Даценко В. С., Павлов В. С. и др. Лучевой патоморфоз рака молочной железы после комбинированного лечения с применением различных методик предоперационной лучевой терапии//Мед. радиол. 1986. -Т.31. - №10. - С. 28-33.

9. Демидов В. П., Лавникова Г. А., Ольшанский В. О. и др. Клинические и гистологические критерии оценки радиочувствительности раковой опухоли гортани// Вестник оторинолариногологии. 1978. - №5. - С. 8-13.

10. Загребин В. М., Соловьева JI. П., Гулидов И. А., Сысоев А. С. Патоморфоз рака гортани при нейтронной и гамма-нейтронной терапии с использованием быстрых нейтронов реактора//Арх. пат. — 1996. Т. 58.- №1. — С. 14-16.

11. Канаев С. В. Лучевая терапия злокачественных опухолей головы и шеи/ Практическая онкология. 2003. - Т.4, №3. - С. 15-24.

12. Канцерогенез / Под ред. Заридзе Д. Г. М.: Медицина, 2004.

13. Комарова Е. А., Гудков А. В. Супрессия р53: новый подход к преодолению побочных эффектов противоопухолевой терапии //Биохимия. -2000. Т. 65. -Вып. 1. -С. 48 - 56.

14. Копнин Б. П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза //Биохимия.- 2000. Т. 65.-Вып. 1.-С. 5-33.

15. Лавникова Г. А. Морфология злокачественных опухолей человека после лучевого и комбинированного лечения. Обнинск, 1974. - С. 11-16.

16. Лавникова Г. А. Индекс поражения как количественный критерий лучевого патоморфоза // Мед. радиол. 1979. - Т.24. - №12. - С. 14-18.

17. Ладнюк П. Б. Паренхиматозно-стромальные взаимоотношения при раке гортани и их клиническое значение: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Новосибирск, 1984. 17 с.

18. Лушников Е. Ф., Сенюков М. В. Клинико-анатомические параллели при лечении рака гортани// Мед. радиол. 1976. - Т.21. - №5. - С. 15-22.

19. Лушников Е. Ф., Андреев В. Г., Соловьева Л. П. Морфология рака гортани при лучевом лечении с применением метронидазола// Мед. радиол. 1985. -Т.30. - №4. - С. 25-32.

20. Лушников Е. Ф., Загребин В. М. Лучевой патоморфоз опухолей человека // Мед. радиол. 1986. - Т.31. - №7. - С. 73-78.

21. Лушников Е. Ф., Абросимов А. Ю. Гибель клетки (апоптоз). — М. Медицина, 2001.- 190 с.

22. Пантюшенко Т. А., Муравьев Г. Н., Фрадкин С. 3. и др. Патоморфоз рака молочной железы при терморадиотерапии // Мед. радиол. 1988. - Т.ЗЗ. -№19. -С. 46-49.

23. Пелевина И. И., Саенко А. С. Радиобиологические предпосылки прогнозирования реакции опухолей на радиационное воздействие// Мед. радиология. -1986. Т. 31. - №12. - С. 3-10.

24. Петровичев Н. Н. Основные направления в патологоанатомической диагностике опухолей человека //Вестник РАМН. М.: Медицина, 2001. -№9.- С. 33 - 38.

25. Пожарисский К. М., Леенман Е. Е. Значение иммуногистохимических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний //Архив патологии. 2000. - Т. 62.- №5. - С. 3 - 11.

26. Программированная клеточная гибель/ под ред. Новикова В. С. -СПб.: «Наука», 1996.

27. Рожнов В. А. Значение лучевой терапии при органосберегающем комбинированном лечении радиорезистентных форм рака гортани: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Обнинск, 2002. — 21 с.

28. Скоропад Ю. Д., Мардынский Ю. С., Сенюков М. В. и др. лучевой патоморфоз рака гортани// Мед. радиология. -1981. Т. 26. - №9. - С. 16-20.

29. Смирнова И. Н. К вопросу об оценке радиочувствительности рака гортани// Вестник оторинолариногологии. 1981. - №3. - С. 70-73.

30. Состояние онкологической помощи населению России в 2004 году/ под ред. Чиссова В. И., Старинского В. В., Петровой Г. В. — Москва, 2005.

31. Тюляндин С. А. Молекулярная патология рака легкого: новые терапевтические возможности// Практическая онкология. — 2000. №3. — С. 43-48.

32. Ушаков В. С., Иванов С. В. Рак гортани: современные возможности и перспективы/ Практическая онкология. 2003. - ТА, №3. - С. 56-60.

33. Франк Г. А., Червонная JI. В. Дарьялова С. JI. и др. Морфологические изменения рака гортани после предоперационного лучевого лечения в условиях различного кислородного режима//Вопросы онкологии. 1984. - Т. 30. -№7.-С. 54-60.

34. Чумаков П. М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью //Биохимия.- 2000. Т. 65. -Вып. 1. - С. 34 - 47.

35. Шарипова М. А. Морфологические критерии лучевого и химиотерапевтического патоморфоза плоскоклеточного рака гортани и пищевода. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Алма-Ата, 1990. - 27 с.

36. Шацева Т. А., Мухина М. С. Антиген Ki-67 в оценке опухолевой пролиферации. Его структура и функции //Вопросы онкологии. 2004. - Том 50.-№2.-С. 157- 164.

37. Acikalin М. F., Oner U., Tel N. et al. Prognostic significance of Ki-67 expression for patients with laryngeal squamous cell carcinoma primarily treated by total laryngectomy// Eur Arch Otorhinolaryngol.-2004.-Vol. 261.-№7.-P. 376-80.

38. Anghelina F., Ionita E., Popescu C. F., et al. Clinical, morphological and immunohistochemical aspects in laryngeal premalignant lesions// Rom J Morphol Embryol.-2006.-Vol. 47.-№2.-P. 169-74.

39. Arisi E., Pruneri G., Carboni N. et al. Prognostic significance of P27 and cyclin D1 co-expression in laryngeal squamous cell carcinoma: possible target for novel therapeutic strategies// J Chemother. -2004. -Vol. 16. -№5.-P. 3-6.

40. Ataman O. U., Bentzen S. M., Wilson G. D. et al. Molecular biomarkers and site of first recurrence after radiotherapy for head and neck cancer// Eur J Cancer.-2004,-Vol. 40.-№18.-P. 2734-41.

41. Bai Y., Hong S., Peng Z. Expression and significance of proliferation marker and apoptosis-related genes in benign and malignant epithelial lesions of the larynx// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. 2003 - Vol. 17(2). - P. 92-96.

42. Boran C., Yildiz L., Kandemir B. et al. Correlation of proliferating cell nuclear antigen and bcl-2 expression with tumor front grading and metastasis in laryngeal squamous cell carcinoma//Neoplasma. 2003. -Vol. 50. - №2.- P. 139-43.

43. Borre M., Offersen В. V., Nerstrom В., Overgaard J. Microvesel density predict survival in prostate cancer patients subjected to watchful waiting.// Br J Cancer. -1998.-Vol. 78.-P. 940-44.

44. Bosman F. T. Dysplasia classification: pathology in disgrace?// J Pathol.-2001.-Vol. 194.-№2.-P. 143-44.

45. Burian M., Quint C., Neuchrist C. Angiogenic factors in laryngeal carcinomas: do they have prognostic relevance?// Acta Otolaryngol. 1999. - Vol. 119. - №2. -P. 289 -92.

46. Capaccio P., Pruneri G., Carboni N. et al. Cyclin D1 protein expression is related to clinical progression in laryngeal squamous cell carcinomas// J Laryngol Otol. -1997. -Vol. 111. -№7. -P. 622-6.

47. Cardesa A., Nadal A., Jares P. et al. Hyperplastic lesions of the larynx. Experience of the Barcelona group.// Acta Otolaryngol Suppl. 1997. - Vol. 527. -P. 43-6.

48. Chatrath P., Scott I. S., Morris L. S. et al. Immunohistochemical estimation of cell cycle phase in laryngeal neoplasia.// Br J Cancer. 2006. - Vol. 95. -№7. - P. 314-21.

49. Chen J., Jin X., Zhou L. Study on the correlation between the cyclin D1 and laryngeal squamous cell carcinoma// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. -1999. -Vol.-13.-№6.-P. 268-70.

50. Chen G. G., Vlantis A. C., Chak E. C., et al. The expression of Bcl-2 family proteins and spontaneous apoptosis in laryngeal carcinomas//Oncol Res. -2006. -Vol. -16. -№6. -P. 273-80.

51. Cheng W., Li X., Quan C.5 Guo X. Role of P53, nm23 proteins and vascular endothelial growth factor in angiogenesis and metastasis of laryngeal cancer.//Zhonghua Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. -2000. -Vol. -35. -№2. -P. 147-9.

52. Chiesa F., Tradati N., Mauri S. et al. Prognostic factors in head and neck oncology: a critical appraisal for use in clinical practice//Anticancer Res.-1998.-Vol. 18.-№6B.-P. 4769-76.

53. Condon L. Т., Ashman J. N., Ell S. R. et al. Overexpression of Bcl-2 in squamous cell carcinoma of the larynx: a marker of radioresistance//Int J Cancer. -2002.- Vol. -100. -№4. -P. 472-5.

54. Dai S., Huang W., Gan X. The expression of P16, Rb and cyclin D1 and biological behavior of laryngeal cancer//Zhonghua Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. -1997. Vol. -32. -№5. -P. 299-301.

55. El-Naggar A. K., Lai S., Clayman G. L. et al. Expression of pi 6, Rb, and cyclin D1 gene products in oral and laryngeal squamous carcinoma: biological and clinical implications//Hum Pathol. -1999. Vol. -30. -№9. -P. 1013-8.

56. Folkman, J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications.//N. Engl.J.Med. -1971.-Vol. 285. P. 1182-86.

57. Folkman J. Angiogenesis in Cancer, vascular, rheumatoid and other disease.//Nat. Med. 1995. - № 1. - P. 27-31.

58. Friedman M., Lim J. W., Manders E. et al. Prognostic significance of Bcl-2 and p53 expression in advanced laryngeal squamous cell carcinoma//Head Neck. -2001. -Vol. -23. -№4.-P. 280-5.

59. Gallo О., Franchi A., Chiarelli I. et al. Potential biomarkers in predicting progression of epithelial hyperplastic lesions of the larynx//Acta Otolaryngol Suppl. -1997.-Vol. 527.-P.30-8.

60. Gallo O., Chiarelli I., Boddi V. et al. Cumulative prognostic value of p53 mutations and bcl-2 protein expression in head-and-neck cancer treated by radiotherapy//Int J Cancer. -1999. -Vol. -84. -№6. P 573-9.

61. Golusinski W, Olofsson J, Szmeja Z, Majewski P. p53, PCNA and Ki67 in laryngeal cancer//Pol J Pathol. 1996. - Vol. 47(4). - P. 175-82.

62. Georgiou A., Gomatos I. P., Ferekidis E. et al. Prognostic significance of p53, bax and bcl-2 gene expression in patients with laryngeal carcinoma//Eur J Surg Oncol. -2001. Vol. -27. - №6. - P. 574-80.

63. Georgiou A., Gomatos I. P., Pararas N. B. et al. Cell kinetics and apoptosis in laryngeal carcinoma patients//Ann Otol Rhinol Laryngol. 2003. - Vol. - 112. -№3. -P. 206-13.

64. Gomatos I. P., Georgiou A., Giotakis J. et al. The role of host immune response and apoptosis in patients with laryngeal squamous cell carcinoma//ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. -2007. -Vol. -69. -№3. -P. 159-66.

65. Gryczynski M., Kobos J., Niewiadomska H., Pietruszewska W. Assessment of cell proliferation antigen Ki-67, protein p53 related to apoptosis and angiogenesis in laryngeal cancer//Otolaryngol Pol. -2000. -Vol. -54. -№31. -P. 191-5.

66. Gryczynski M., Kobos J., Murlewska A., Pietruszewska W. Survival of patients with laryngeal cancer and some prognostic factors//Otolaryngol Pol. -2003. Vol. -57. -№3. -P. 329-40.

67. Hagedorn H. G., Nerlich A. G. Microvessel density and endothelial basement membrane composition in laryngeal squamous cell carcinomas//Acta Otolaryngol. -2000. -vol. -120. -№7. -P. 891-8.

68. Hirvikoski P., Kumpulainen E., Virtaniemi J. et al. p53 expression and cell proliferation as prognostic factors in laryngeal squamous cell carcinoma//J Clin Oncol.- 1997.-Vol. 15.-№9.-P. 3111-20.

69. Hirvikoski P., Kumpulainen E., Virtaniemi J. et al. Enhance apoptosis correlates with poor survival in patients with laryngeal cancer but not with cell proliferation, Bcl-2 or p53 expression// Europ. J. Cancer. 1999. - Vol. 35. - P. 231-237.

70. Itoi Т., Yamana K., Bilim V. et al. Impact of frequent Bcl-2 expression on better prognosis in renal cell carcinoma hftients// Br J Cancer. 2004. - Vol. 90 (1). - №12. - P. 200-2005.

71. Izawa H., Yonemitsu N., Shin Т., Sugihara H. Histopathological analysis of apoptosis, and expression of p53, bcl-2, bax, and Ki-67 in laryngeal squamous cell carcinomas and dysplasia// Auris Nasus Larynx.- 1999.-Vol. 26.-№3.-P. 317-30.

72. Jackel M. С., Sellmann L., Dorudian M. A. et al. Prognostic significance of p53/bcl-2 co-expression in patients with laryngeal squamous cell carcinoma//Laryngoscope. 2000. -Vol. -110. -№8. -P. 1339-45.

73. Jackel M. C., Sellmann L., Youssef S. et al. Prognostic significance of expression of p53, bcl-2 and bax in squamous epithelial carcinoma of the larynx—a multivariate analysis//HNO. -2001. -Vol. -49. -№3. -P. 204-11.

74. Kanijo Т., Yokose Т., Hasebe T. et al. Potential role of microvessel density in predicting radiosensitivity of T1 and T2 stage laryngeal squamous cell carcinoma treated with radiotherapy// Clin Cancer Res. 2000. - №6. - P. 3159-65.

75. Khademi В., Shirazi F. M., Vasei M. et al. The expression of p53, c-erbB-1 and c-erbB-2 molecules and their correlation with prognostic markers in patients with head and neck tumors.//Cancer Lett.-2002.-Vol. 28.-№184 (2).-P. 223-30.

76. Klatka J., Skomra D., Siwiec H. et al. Expression of Bcl-2 antigen in laryngeal carcinoma//Otolaryngol Pol. -2000. -Vol. 54. -№4. -P. 389-91.

77. Klatka J. Prognostic value of the expression of p53 and bcl-2 in patients with laryngeal carcinoma//Eur Arch Otorhinolaryngol. 2001. -Vol. -258. - №10. -P. 537-41.

78. Kleist В., Junghans D., Lorenz G. et al. The supplementary diagnostic power of selection immunohistochemical, molecular genetic and infective parameters in epithelial hyperplastic laryngeal lesions// Oncology. 2003. - Vol. 65. - P. 347-54.

79. Krecicki Т., Jelen M., Zalesska-Krecicka M., Szkudlarek T. Ki-67 immunostaining and prognosis in laryngeal cancer//Clin Otolaryngol Allied Sci.-1998.-Vol. 23.- №6.-P. 539-42.

80. Krecicki Т., Jelen M., Zalesska-Krecicka et al. Immunohistochemically stained markers (p53, PCNA, bcl-2) in dysplastic lesions of the larynx.//Cancer Lett.-1999.-Vol. 23.-№143 (1).- P. 23-8.

81. Krecicki Т., Dus D., Kozlak J. et al. Quantitative evaluation of angiogenesis in laryngeal cancer by digital image measurement of the vessel density//Auris Nasus Larynx. 2002. - Vol. 29. -№3. - P. 271-6.

82. Krecicki Т., Smigiel R., Fraczek M. et al. Studies of the cell cycle regulatory proteins PI6, cyclin D1 and retinoblastoma protein in laryngeal carcinoma tissue//J Laryngol Otol. -2004. Vol. 118. -№9. -P. 676-80.

83. Kropveld A., Slootweg P. J., Blankenstein M. A. et al. Ki-67 and p53 in T2 laryngeal cancer// Laryngoscope. 1998. - Vol. 108(10). - P. 1548-52.

84. Kupisz K., Chibowski D., Klatka J. et al. Tumor angiogenesis in patients with laryngeal cancer//Eur Arch Otorhinolaryngol. -1999. -Vol. 256. -№6. -P. 303-5.

85. Lei Z., Liu Q. Bcl-2 oncoprotein expression in head and neck malignant neoplasm//Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. -1998. -Vol. 12. -№4. -P. 171-3.

86. Lazaris A. Ch., Rigopoulou A., Tseleni-Balafouta S. et al. Immunodetection and clinico-pathological correlates of two tumour growth regulators in laryngeal carcinoma//Histol Histopathol. 2002. - Vol. 17(1).-P. 131-8.

87. Lera J., Lara P. C., Perez S. et al. Tumor proliferation Tumor proliferation, p53 expression, and apoptosis in laryngeal carcinoma: relation to the results of radiotherapy//Cancer. 1998. - Vol .83(12). - P. 2493-501.

88. Li J., Tang L., Ren Z., Pan Z. Distribution and prognostic significance of microvessel density in supraglottic laryngeal squamous cell carcinomas//Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. 2004. -Vol. 18. -№9. -P. 513-5.

89. Liu S., Tang S., Lin Y., Liang C. The protein expression of p53 and bcl-2 in laryngeal squamous cell carcinoma.// Hua Xi Yi Ke Da Xue Xue Bao. 2001. -Vol. 32(2).-P. 191-3.

90. Lu Y. Y., Shen P., Ding W. Study on the relationship between microvascular density and prognosis in laryngeal cancer.// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. -2000. Vol. 14(12). - P. 538-39.

91. Marioni G., Ottaviano G., Giacomelli L. et al. CD105-assessed micro-vessel density is associated with malignancy recurrence in laryngeal squamous cell carcinoma.// Eur J Surg Oncol. 2006. - Vol. 32(10). - P. 1149-53.

92. Mielcarek-Kuchta D., Olofsson J., Golusinski W. p53, Ki67 and cyclin D1 as prognosticators of lymph node metastases in laryngeal carcinoma.// Eur Arch Otorhinolaryngol. 2003. - Vol. 260(10). - P.549-54.

93. Morshed K., Skomra D., Korobowicz E. et al. An immunohistochemical study of cyclin D1 protein expression in laryngeal squamous cell carcinoma.// Acta Otolaryngol. 2007. - Vol. 127(7). - P. 760-9.

94. Motamed M., Banerjee A. R., Bradley P. J., Powe D. MIB-1 and p53 expression in radiotherapy-resistant TlaNOMO glottic squamous cell carcinoma//Clin Otolaryngol Allied Sci. 2001. - Vol. 26(3). - P. 227-30.

95. Murray J. D., Carlson G. W., McLaughlin K. et al. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in laryngeal cancer.// Am J Surg. 1997. - Vol. 174(5). - P. 5236.

96. Nadal A., Cardesa A. Molecular biology of laryngeal squamous cell carcinoma.// Virchows Arch. 2003. - Vol. 442(1). - P. 1-7.

97. Nikanishi H., Ohsawa M., Naka N. et al. Immunohistochemical detection of Bcl-2 and p53 proteins and apoptosis in soft tissue sarcoma: their correlation with prognosis// Oncology. 1997. -Vol. 54. - P. 238-244.

98. Nimeus E., Baldetorp В., Bendahl P. O. et al. Amplification of the cyclin D1 gene is associated with tumour subsite, DNA non-diploidy and high S-phase fraction in squamous cell carcinoma of the head and neck.// Oral Oncol. 2004. -Vol. 40(6).-P. 624-9.

99. Nix P., Cawkwell L., Patmore H. et al. Bcl-2 expression predicts radiotherapy failure in laryngeal cancer.// Br J Cancer. 2005. - Vol. 92(12). - P. 2185-9.

100. Ozdek A., Sarac S., Akyol M. U. et al. C-myc and bcl-2 Expression in supraglottic squamous cell carcinoma of the larynx.// Otolaryngol Head Neck Surg. -2004.-Vol. 131(1).-P. 77-83.

101. Pastuszewski W., Dziegiel P., Krecicki T. et al. Prognostic significance of metallothionein, p53 protein and Ki-67 antigen expression in laryngeal cancer//Anticancer Res.- 2007.-Vol. 27.-№lA.-P. 335-42.

102. Perez Carro Rios A., Garcia Caballero Т., Lozano Ramirez A. et al. The relationship between survival and cell proliferation index in squamous cell carcinoma of larynx//Rev Laryngol Otol Rhinol (Bord).-2000. Vol. 121.-№2.-P. 121-5.

103. Perez-Carro Rios A., Lozano Ramirez A., Garcia Caballero T. et al. An immunohistochemistry study of p53 protein in squamous cell carcinoma of the larynx//Acta Otorrinolaringol Esp. 2003.-Vol. 54.- №4.- P. 263-8.

104. Peschos D., Stefanou D., Vougiouklalis T. et al Cell cycle proteins in laryngeal cancer: role in proliferation and prognosis// J Exp Clin Cancer Res. 2005.-Vol. 24. -№3.-P. 431-7.

105. Pietruszewska W., Kobos J., Gryczynski M. Microvessel density and endothelial area in assessment of angiogenesis in patients with laryngeal cancer.// Otolaryngol Pol. 2003. - Vol. 57(1). - P. 5-15.

106. Pignataro L., Pruneri G., Carboni N. et al. Clinical relevance of cyclin D1 protein overexpression in laryngeal squamous cell carcinoma.// J Clin Oncol. -1998. Vol. 16(9). - P. 3069-77.

107. Pignataro L., Capaccio P., Pruneri G. et al. The predictive value of p53, MDM-2, cyclin Dl and Ki67 in the progression from low-grade dysplasia towards carcinoma of the larynx//J Laryngol Otol. 1998. - Vol. 112. - №5.- P. 455-9.

108. Pignataro L., Sambataro G., Pagani D., Pruneri G. Clinico-prognostic value of D-type cyclins and p27 in laryngeal cancer patients: a review.//Acta Otorhinolaryngol Ital. 2005. - Vol. 25(2). - P. 75-85.

109. Redondo M., Esteban F., Gonzalez-Moles M. A. et al. Expression of the antiapoptotic proteins clusterin and bcl-2 in laryngeal squamous cell carcinomas.// Tumour Biol. 2006. - Vol. 27(4). - P. 195-200.

110. Segas J. V., Lazaris A. C., Nikolopoulos T. P. et al. Cyclin Dl protein tissue detection in laryngeal cancer. //ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 2005. - Vol. 67(6).-P. 319-25.

111. Sengiz S., Pabuccuoglu U., Sarioglu S. Immunohistological comparison of the World Health Organization (WHO) and Ljubljana classifications on the grading of preneoplastic lesions of the larynx//Pathol Res Pract. 2004. - Vol. 200. - №3. - P. 181-88.

112. Serio G., Giardina C., Valente T. et al Quantitative morphometrical investigation of basal cell layer in laryngeal premalignant lesions.// J Exp Clin Cancer Res. 2002. - Vol. - 21(4). - P. - 495-502.

113. Sion-Vardy N., Fliss D. M., Prinsloo I. et al. Neoangiogenesis in squamous cell carcinoma of the larynx biological and prognostic associations.// Pathol Res Pract.-2001.-Vol. 197(1).-P. 1-5.

114. Sittel C., Eckel H. E., Damm M. et al. Ki-67 (MIB1), p53, and Lewis-X (LeuMl) as prognostic factors of recurrence in T1 and T2 laryngeal carcinoma//Laryngoscope. 2000. - Vol. 110. - №6. - P. 1012-7.

115. Spafford M. F., Koeppe J., Pan Z. et al.Correlation of tumor markers p53, bcl-2, CD34, CD44H, CD44v6, and Ki-67 with survival and metastasis in laryngeal squamous cell carcinoma.//Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 1996. - Vol. 122(6).-P. 627-32.

116. Takes R. P., Baatenburg de Jong R. J., Schuuring E. et al. Markers for assessment of nodal metastasis in laryngeal carcinoma.// Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 1997. - Vol. 123(4). - P. 412-9.

117. Takes R. P., Baatenburg De Jong R. J., Alles M. J. et al. Markers for nodal metastasis in head and neck squamous cell cancer.// Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 2002. - Vol. 128(5). - P. 512-8.

118. Teknos T. N., Cox C., Barrios M. A. et al. Tumor angiogenesis as a predictive marker for organ preservation in patients with advanced laryngeal carcinoma.// Laryngoscope. 2002. - Vol. 112(5). - P. 844-51.

119. Teppo H., Soini Y., Melkko J. et al. Prognostic factors in laryngeal carcinoma: the role of apoptosis, p53, proliferation (Ki-67) and angiogenesis//APMIS. 2003. -Vol. 111.-№4.-P. 451-57.

120. Trask D. K., Wolf G. Т., Bradford C. R. et al. Expression of Bcl-2 family proteins in advanced laryngeal squamous cell carcinoma: correlation with response to chemotherapy and organ preservation.// Laryngoscope. — 2002. Vol. 112(4). -P. 638-44.

121. Urpegui Garcia A., Morandeira Garcia M., Soria Navarro J. et al. Study of bcl-2 oncogene in squamous-cell carcinoma of the larynx.// Acta Otorrinolaringol Esp. 2000. - Vol. 51(3). - P. 228-34.

122. Vielba R., Bilbao J., Ispizua A. et al. p53 and cyclin D1 as prognostic factors in squamous cell carcinoma of the larynx//Laryngoscope. 2003. - Vol. 113. - №1. -P. 167-72.

123. Volavsek M., Bracko M., Gale N. Distribution and prognostic significance of cell cycle proteins in squamous carcinoma of the larynx, hypopharynx and adjacent epithelial hyperplastic lesions.// J Laryngol Otol. 2003. - Vol. 117(4). - P. 286-93.

124. Wang X. F., Nakashima Т., Masuda M. et al. Cyclin D1 overexpression in laryngeal carcinomas.// Nippon Jibiinkoka Gakkai Kaiho. 1998. - Vol. 101(2). — P. 212-5.

125. Watanabe H., Suzuki Т., Ito Y. et al. Prognostic significance of EGFR and p53 expression, and angiogenesis in laryngeal squamous cell carcinoma// Nippon Jibiinkoka Gakkai Kaiho. -1999. Vol. 102. - №2. - P. 243-53.

126. Weidner N., Semple J. P., Welch W. R., Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma.// N Engl Med. - 1991. - Vol. 324.-P. 1-8.

127. Weidner N., Folkman J., Pozza F. et al. Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early-stage breast carcinoma.// J Natl. Cancer Inst. 1992. - Vol. 84. - P. 1875-87.

128. Weidner N., Carroll P. R., Blumenfeld W., Folkman J. Tumor angiogenesis correlate with metastasis in invasive prostate carcinoma.// Am. J Pathol. 1993; Vol. 143.-P. 401-9.

129. Weidner N., Intratumoral micro vessel densite as prognostic factor in cancer// Am J Pathol 1995.-Vol. 147.-№ 1.-P. 9-19.

130. World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics. Head and Neck Tumours. / Barnes L., Eveson J. W., Reichart P., Sidranski D. Lyon.: IARC Press, 2005.

131. Yildirim S., Cermik H., I§itmangil T et al. Significance of p53 and bcl-2 immunoexpression in the prognosis of laryngeal squamous cell carcinoma.// . -2002. Vol. 30(6). - P. 597-600.

132. Yoo S. S., Carter D., Turner В. C. et al. Prognostic significance of cyclin D1 protein levels in early-stage larynx cancer treated with primary radiation.// Int J Cancer. 2000. - Vol. 90(1). - P. 22-8.

133. Yu Z., Wang W. The expressions of telomerase activity and cyclinDl protein in laryngeal squamous cell carcinoma.// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. -2002.-Vol. 16(6).-P. 286-8.

134. Yuen A. P., Lam K. Y., Choy J. T. et al. The clinicopathological significance of bcl-2 expression in the surgical treatment of laryngeal carcinoma.//Clin Otolaryngol Allied Sci. -2001. Vol. 26(2). P. 129-33.

135. Zhang L., Luan X., Pan X et al. Measurement of microvessel density in laryngeal carcinoma and its clinical significance.// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke ZaZhi.-2001. Vol. 15(3).-P. 115-7.

136. Zhang L, Xu Y, Ge Y, et al. Expression of p27 protein and cyclinDl in laryngeal carcinoma.// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. 2002. - Vol. 16(12).-P. 646-7.

137. Zhou W, Zhong R, Tan S. Overexpression of cyclin D1 in laryngeal carcinomas.// Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi. 1998. - Vol. 12(5). - P. 198201.

138. Ziolkowski A, Olszewski WP, Gabriel A, et al. DNA ploidy, cyclin Dl, bcl-2 and lymphocytic infiltration of the tumor microenvironment as prognostic factors in laryngeal cancer patients.// Pol J Pathol. 2005. - Vol. 56(4). - P. 171-8.