Клинико-микробиологические критерии диагностики бактериального вагиноза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.10, кандидат наук Назарова Вероника Викторовна

• Назарова Вероника Викторовна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Назарова Вероника Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О БАКТЕРИАЛЬНОМ ВАГИНОЗЕ (обзор литературы)

1.1. Эпидемиология бактериального вагиноза

1.2. Патогенез и клинические проявления бактериального вагиноза

1.3. Микроэкосистема влагалища в норме и при бактериальном вагинозе

1.3.1. Физиологическая микроэкосистема влагалища

1.3.2. Роль лактобацилл в поддержании физиологической микроэкосистемы влагалища

1.3.3. Микроэкология влагалища в различные периоды жизни женщины

1.3.4. Микроэкосистема влагалища при бактериальном вагинозе

1.4. Диагностика бактериального вагиноза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Обследуемая группа пациентов

2.2. Образцы биологического материала

2.3. Методы исследования

2.3.1. Клиническая диагностика бактериального вагиноза (метод Амселя)

2.3.2. Микроскопическая диагностика бактериального вагиноза (метод Нуджента)

2.3.3. Исследование микробиоценоза влагалища методом количественной мультиплексной ПЦР в реальном времени (тест Фемофлор-16)

2.3.4. Диагностика бактериального вагиноза методом количественной мультиплексной ПЦР в реальном времени (тест Флороценоз/БВ)

2.3.5. Статистический анализ результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Бактериальные сообщества формирующие микроэкосистему влагалища в норме и при бактериальном вагинозе

3.2. Критерии диагностики бактериального вагиноза с использованием теста Фемофлор-16

3.3. Диагностические характеристики теста для выявления бактериального вагиноза Флороценоз /БВ

3.4. Оценка и модификация критериев Амселя

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ЛИТЕРАТУРА

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-микробиологические критерии диагностики бактериального вагиноза»

Актуальность исследования

Совершенствование методов клинической и лабораторной диагностики бактериального вагиноза (БВ) - преобладающего нарушения микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста, в настоящее время является актуальной проблемой клинической лабораторной диагностики. Значимость БВ (шифр по Международной Классификации Болезней МКБ-10 - N89.8 - другие невоспалительные болезни влагалища) обусловлена широкой распространенностью - от 7% до 68%, которая обусловлена регионом проживания, этнической/расовой принадлежностью и обследуемой популяцией [59]. Более того, исследования последних лет показывают, что это заболевание снижает качество жизни женщины, а также ассоциировано с рядом воспалительных заболеваний органов мочеполового тракта, и является одной из частых причин осложнений беременности [16, 54, 81, 89]. Кроме всего прочего, в течение 12 месяцев после лечения у 60% женщин наблюдаются рецидивы БВ [51]. Вследствие чего, модификация клинико-лабораторных критериев диагностики данного заболевания обеспечит своевременную диагностику и повысит эффективность лечения БВ, что обеспечит сохранение репродуктивного здоровья женщины.

Для диагностики БВ используется ряд клинических и лабораторных методов. Метод Амселя - основной метод клинико-лабораторной диагностики, включает в себя 4 критерия, которые отличаются друг от друга по чувствительности и специфичности: наличие специфических выделений из влагалища, рН вагинальных выделений выше 4,5, положительный аминный тест, а также обнаружение при микроскопическом исследовании нативного препарата отделяемого влагалища «ключевых» клеток [72]. Для установления диагноза БВ достаточно наличия 3 из этих 4 критериев. Преимуществом метода Амселя является возможность быстро установить диагноз БВ во время приема врача и

сразу назначить терапию, недостатками являются отсутствие возможности для микроскопического исследования нативного препарата у большинства врачей, а также субъективность метода.

Основным методом лабораторной диагностики БВ является метод Нуджента [73], основанный на подсчете 3 бактериальных морфотипов (морфотип лактобацилл, морфотип грамвариабельных палочек и морфотип изогнутых палочек), представленных в препаратах вагинального отделяемого, окрашенных по Граму [7]. Относительно высокая чувствительность и специфичность, высокая степень стандартизации, обеспечивающая хорошую воспроизводимость -преимущества метода Нуджента. Недостатками являются трудоемкость и наличие промежуточного варианта микробиоценоза влагалища.

Необходимо отметить, что в реальной клинической ситуации, например, в условиях женской консультации, метод Нуджента практически не используется, а диагностика БВ основана на применении только одного критерия - наличии выделений из влагалища, который обладает очень низкой чувствительностью и специфичностью. В связи с этим модификация метода Амселя, а именно, упрощение трудоемкой процедуры анализа с сохранением его диагностической точности, представляется очень актуальной задачей.

Таким образом, изучение бактериальных сообществ влагалища при БВ и совершенствование методов клинической и лабораторной диагностики данного заболевания будут способствовать пониманию механизмов его патогенеза и более эффективной его диагностике, сохранению репродуктивного здоровья женщины и улучшит качество ее жизни.

Степень разработанности темы исследования

Одним из методологических подходов к поиску общих закономерностей при изучении полимикробного заболевания, каким является БВ, представляется группирование всех бактериальных сообществ в кластеры - типы микробиоценоза, объединяющие схожие по определенным признакам бактериальные сообщества. В последние годы предпринимаются попытки

кластеризации микробных сообществ влагалища [25, 68, 82, 90], однако клинико-диагностическую значимость выделенных кластеров еще предстоит оценить.

Для диагностики БВ в последнее время разрабатываются тесты, основанные на методах амплификации нуклеиновых кислот (МАНК), прежде всего, количественной ПЦР в реальном времени. Преимуществами молекулярных тестов являются быстрота, объективность, высокий уровень стандартизации и возможность точной количественной оценки. Так, недавно был разработан отечественный тест АмплиСенс Флороценоз/Бактериальный вагиноз (Флороценоз/БВ, ФБУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, Москва), принцип которого заключается в определении соотношения концентраций лактобацилл и ключевых БВ-ассоциированных бактерий - Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae. Однако внедрение данного теста, как любого нового метода, в работу практических лабораторий требует оценки его диагностической точности в сравнении со стандартными методами диагностики БВ.

В нашей стране в последние годы для выявления дисбиотических состояний влагалища широко используется тест Фемофлор-16 (ООО «НПО ДНК-Технология», Москва). Тест основан на количественном выявлении ряда бактерий влагалища методом ПЦР в реальном времени. По соотношению этих бактерий определяется состояние микробиоценоза влагалища - нормоценоз или дисбиоз. Понятие «дисбиоз влагалища» описывает сдвиг от преобладания лактобациллярной микрофлоры к условно патогенной и может включать несколько нозологических форм, а также быть вариантом нормы у ряда женщин, что вызывает трудности у клиницистов при выборе тактики лечения. Разработка количественных критериев диагностики БВ с использованием теста Фемофлор-16 дала бы возможность клиницистам назначать лечение в соответствии со стандартами терапии этого заболевания.

Цель исследования

Охарактеризовать бактериальные сообщества, формирующие микроэкосистему влагалища при бактериальном вагинозе, оценить и

модифицировать клинико-лабораторные критерии диагностики данного заболевания.

Задачи исследования:

1. Определить бактериальные сообщества, формирующие микроэкосистему влагалища в норме и при бактериальном вагинозе, и провести их сравнительный анализ;

2. Модифицировать тест Фемофлор-16, предназначенный для описательной характеристики микробиоценоза влагалища, путем разработки количественных критериев диагностики бактериального вагиноза;

3. Оценить диагностические характеристики теста Флороценоз/БВ для молекулярно-биологической диагностики бактериального вагиноза в сравнении с критериями Нуджента;

4. Определить диагностические характеристики критериев Амселя и модифицировать их для использования в условиях женской консультации.

Научная новизна

Определены и охарактеризованы кластеры бактериальных сообществ при физиологическом и нарушенном микробиоценозе влагалища. Впервые показано, что бактериальные сообщества при бактериальном вагинозе группируются в два кластера - с доминированием факультативно-анаэробных бактерий (G. vaginalis и A. vaginae) и облигатно-анаэробных бактерий (фузобактерий, клостридий, вейлонелл). Кластеры значительно различаются по числу баллов по шкале Нуджента и значению рН вагинального отделяемого.

Впервые разработаны количественные критерии диагностики бактериального вагиноза с использованием теста Фемофлор-16. Установлено, что низкое содержание лактобацилл в совокупности с повышенным содержанием ряда анаэробных бактерий/групп бактерий определяют бактериальный вагиноз с чувствительностью 99% и специфичностью 93%.

Впервые проведена оптимизация критерия рН вагинального отделяемого, которая привела к существенному повышению его диагностической точности и

сделала возможным его применение в качестве самостоятельного критерия клинической диагностики бактериального вагиноза.

Теоретическая значимость

Теоретически обосновано разделение бактериальных сообществ, формирующих микроэкосистему влагалища, в четыре основных кластера: нормальная микрофлора, аэробная микрофлора, факультативно-анаэробная микрофлора и облигатно-анаэробная микрофлора. Кластер нормальной микрофлоры состоит преимущественно из лактобацилл. Кластер аэробной микрофлоры включает, главным образом, энтеробактерии, стрептококки и стафиллококки. Кластеры факультативно-анаэробной и облигатно-анаэробной микрофлоры отличаются доминированием факультативно-анаэробных и облигатно-анаэробных бактерий и ассоциированы с БВ.

Установлена этиологическая значимость повышения количества анаэробных микроорганизмов с одновременным снижением количества лактобацилл в генезе бактериального вагиноза.

Практическая значимость

Количественные критерии, разработанные в данной работе для диагностики бактериального вагиноза с применением теста Фемофлор-16, позволяют определять это заболевание с чувствительностью 99% и специфичностью 93%.

Проведена клиническая валидация молекулярно-биологического теста для выявления бактериального вагиноза Флороценоз/БВ, который может использоваться в качестве высокочувствительной и высокоспецифичной альтернативы клиническим и микроскопическим методам диагностики этого заболевания.

Разработана модификация метода Амселя, позволяющая существенно упростить трудоемкую процедуру анализа с сохранением его диагностической точности для использования в условиях женской консультации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Бактериальные сообщества влагалища при бактериальном вагинозе группируются в два кластера, которые значительно различаются между собой по типу доминирующей микрофлоры и значению рН влагалища.

2. Модификация теста Фемофлор-16 существенно расширяет его возможности, позволяя не только констатировать факт дисбиоза влагалища, но и с высокой точностью устанавливать диагноз бактериального вагиноза.

3. Оптимизация критерия вагинального рН (в сторону повышения) приводит к существенному увеличению его диагностической точности, что позволяет использовать его в качестве основного клинико-лабораторного критерия диагностики бактериального вагиноза.

Методология и методы исследования

Диссертационная работа проводилась выполнялась с соблюдением всех правил научных исследований и строилась на принципах биоэтики. Для реализации цели исследования и обоснования основных положений были использованы анализ литературы, лабораторные методы (микроскопический метод, метод количественной ПЦР в реальном времени) и методы статистической обработки данных.

Степень достоверности и апробация результатов исследования.

Достоверность полученных результатов обеспечена теоретическим анализом проблемы, репрезентативным объёмом выборок обследованных пациентов (280 обследованных женщин и 1120 клинических материалов), достаточным количеством выполненных наблюдений с использованием современных методов исследования (микроскопических, молекулярно-биологических, а также определения рН вагинальных выделений) и адекватным статистическим анализом данных.

Основные положения работы, а также содержание её отдельных этапов были представлены на Ежегодной научной конференции молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых - 2010» (Санкт-Петербург, 2010), Ежегодной научной конференции молодых ученых и

специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых - 2012» (Санкт-Петербург, 2012), XI Всероссийском научном форуме «Мать и дитя» (Москва, 2010), VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2014» (Москва, 2014), III Национальном конгрессе «Дискуссионные вопросы современного акушерства» (Санкт-Петербург, 2015) и на 14 Всемирном конгрессе по инфекциям, передающимся половым путем (Вена, Австрия, 2013).

Результаты исследования внедрены в клинико-диагностическую работу ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта», женской консультации №14 СПб ГБУЗ «Городская поликлиника№32» и отдела лабораторной диагностики ФГБУ «Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины имени А.М. Никифорова» МЧС России.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 17 работ, в их числе 7 статей в научных изданиях, входящих в перечень рецензируемых научных изданий, в журналах, рекомендованных ВАК для опубликования основных результатов диссертации.

Личное участие автора

Диссертант лично участвовала в планировании и организации работы, проведении лабораторных исследований, обработке, анализе, обобщении, подготовке научных публикаций, текста диссертации и автореферата.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 112 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 13 таблицами. Список литературы включает 94 публикации, из них 14 - отечественных авторов и 80 - зарубежных.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Эпидемиология бактериального вагиноза

Бактериальный вагиноз (БВ) - это клинический полимикробный синдром, без признаков воспаления, при котором нормальная микрофлора влагалища, представленная преимущественно лактобациллами, полностью или частично замещается высокими концентрациями другой, главным образом, анаэробной микрофлоры. БВ одно из самых распространенных нарушений микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста, а также является чрезвычайно актуальной проблемой в акушерско-гинекологической практике. Несмотря на серьезные достижения в медицинской науке, БВ до сих пор остается недостаточно изученной медико-социальной проблемой. Кроме того, несмотря на принятые международные стандарты диагностики и лечения, частота встречаемости этого заболевания не снижается.

По данным последних публикаций, частота обнаружения БВ во всем мире варьирует в широких пределах - от 7% до 68% [59]. Это патологическое состояние более распространено среди женщин негроидной расы (45-55%), по сравнению с европеоидной (5-15%) [37].

Из данных литературы известно, что БВ встречается не только у женщин детородного возраста. Результаты исследований С.В. Малышевой (2001) показали, что у девочек пубертатного возраста, при проведении профилактических осмотров БВ был диагностирован в 32,4% случаев [9].

Имеются данные А. Spinillo и соавт. (1997), изучивших распространенность БВ у женщин в постменопаузальном периоде. У обследованных 148 пациенток в постменопаузе и 1564 женщин репродуктивного возраста частота встречаемости БВ в этих группах составила 29,2% и 13,4%, соответственно [85].

В 1991году Е.Ф. Кира и группой исследователей было изучено влияние малых доз ионизирующего излучения на состояние микробиоценоза влагалища. При комплексной диспансеризации населения, проживающего на территории с повышенным радиационным фоном, БВ клинически и лабораторно

диагностировался у 637 из 1026 женщин, участвовавших в исследовании женщин. (62,1%) [4]. Конечно доказать влияние радиации на микробиоценоз влагалища не представляется возможным, потому что нельзя исключить действие некоторых других факторов: образ жизни и ее уклад, половое воспитание, гигиенические привычки, профессиональные вредности [4].

Частота БВ во многом определяется контингентом обследованных женщин и чаще диагностируется среди лесбиянок, а также среди женщин, которые имеют несколько половых партнеров мужчин, или нового полового партнера. Кроме того, частые спринцевания, использование внутриматочной спирали, курение и хронический стресс, также являются факторами риска [63].

БВ является одной из актуальных проблем здравоохранения во всем мире, так как вызывает серьезные осложнения, связанные с репродуктивным здоровьем женщин. В частности, БВ значительно ассоциирован с воспалительными заболеваниями органов малого таза, цервицитом, эндометритом, амнионитом, хориоамнионитом, преждевременными родами. Более того, значительно увеличивает риск инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), и ВИЧ [16, 54, 8, 89].

Микроорганизмы, ассоциированные с БВ, можно выделить из уретры мужчин, являющихся половыми партнерами пациенток с БВ; иногда они могут вызывать уретрит, проявляющийся жжением и болью при мочеиспускании. В этом случае необходимо лечение партнера, однако это не предотвращает рецидив заболевания у женщин [18].

1.2. Патогенез и клинические проявления бактериального вагиноза

Микроэкология влагалищного биотопа находится в постоянном динамическом равновесии и зависит от свойств макроорганизма и различных факторов внешней среды. Это динамическое равновесие регулируется путем взаимодействия эндокринной (главным образом прогестероном и эстрогенами) и иммунной систем. БВ-ассоциированные микроорганизмы довольно часто обнаруживаются во влагалище женщин без клинических проявлений этого

состояния. Объясняется это тем, что местом происхождения данных микроорганизмов является желудочно-кишечный тракт. Остается неясным, почему у некоторых женщин развивается БВ, в то время как у других нет. Основные клинические проявления БВ:

• Обильные, жидкие, гомогенные, беловато-серые, влагалищные выделения. Они образуются в процессе ферментации муцинового геля влагалища анаэробными, ассоциированными с БВ микроорганизмами. При длительно текущем, хроническом заболевании выделения становятся более густыми, с желтовато-зеленоватой окраской.

• Неприятный «рыбный запах» вагинальных выделений, который может появляться или усиливаться во время менструации, а также после полового акта [7]. Его появление обусловлено присутствием биогенных аминов - метиламина, диметиламина, триметиламина, путресцина и кадаверина, которые образуются в результате декарбоксилирования аминокислот анаэробными микроорганизмами.

• Для БВ не характерны признаки вульвовагинита - жжение, зуд, диспареуния и дизурия, в тех случаях, когда он не сопровождается трихомониазом или кандидозом. Также отсутствует воспалительная реакция со стороны слизистой оболочки влагалища, а при микроскопической картине -единичные лейкоциты в вагинальном мазке.

Несмотря на то, что БВ изучается уже несколько десятилетий, существует множество пробелов в понимании этиологии и патогенеза этого заболевания. Здоровая вагинальная среда, созданная лактобациллами путем выработки молочной кислоты, перекиси водорода и бактериоцинов, препятствует размножению ассоциированных с БВ анаэробов. Молочная кислота усиливает активность как бактериоцинов, так и перекиси водорода. Кроме того, лактобациллы конкурируют за связывание с рецепторами эпителиальных клеток влагалища, что фактически препятствует адгезии патологических микроорганизмов к этим клеткам. Основное, но не единственное звено патогенеза этого полимикробного клинического синдрома - снижение количества лактобацилл и рост анаэробных микроорганизмов. Известно, что уменьшение

содержания Н2О2-продуцирующих лактобацилл, ведет к повышению рН вагинальной среды, после чего влагалище массивно колонизируется комменсальной анаэробной микрофлорой. Темой для дискуссии остается какой из этих факторов является первичным [94]. В то время как большинство исследователей считает, что в индукции низкого рН вагинального отделяемого играют роль лактобациллы, существуют и другие мнения. Так, G.L. Gorodeski и соавт. (2005) предложили теорию, согласно которой рН влагалища регулируется секрецией протонов на поверхность эпителиальных клеток через апикальную мембрану под воздействием эстрогена [41].

Влияние эндогенных и экзогенных факторов нарушает равновесие микроэкосистемы влагалища, что проявляется рядом изменений. Повышение уровня прогестерона приводит к увеличению пролиферации клеток вагинального эпителия. Ассоциированные с БВ анаэробные микроорганизмы, адгезируются на рецепторах влагалищных эпителиоцитов. Таким образом происходит образование «ключевых» клеток, что ведет к увеличению количества влагалищных выделений.

Гликоген, содержащийся в эпителиальных клетках слизистой оболочки влагалища с помощью эндопептидаз расщепляется до моно- и дисахаридов. В процессе их утилизации доминирующие во влагалищной микрофлоре лактобациллы и молочнокислые стрептококки вырабатывают молочную кислоту. Эстрогены отвечают за созревание многослойного плоского эпителия, синтез гликогена и продукцию слизистого секрета шейки матки [11].

Один из клинических признаков БВ связан с повышением уровня биогенных аминов. Они представляют собой органические соединения с одной или несколькими аминогруппами и образуются путем декарбоксилирования аминокислот анаэробными бактериями. Наличием этих аминов и обусловлен неприятный специфический запах выделений при БВ.

Не менее важным звеном патогенеза является повышение активности протеолитических ферментов - сиалидазы и муциназы, которые нарушают функцию образования муцина. Вследствие этого повышается доступность клеток эпителия для адгезии анаэробных микроорганизмов [4].

В 1997 была предложена теория о том, что снижение количества лактобациллл во влагалище может быть вызвано бактериофагами выделенных из штаммов лактобацилл. Участие бактериофагов объясняет, почему это состояние эпидемиологически похоже на ИППП, но частота его рецидива у женщин не зависит от лечения антибиотиками у их партнеров-мужчин [75]. Очень похожее, но гораздо более масштабное исследование, проведенное в 2001 году, подтвердило предыдущий вывод: доля носителей фагов (лизогенов), чаще встречалась у женщин с БВ [31].

В настоящее время многие исследователи считают, что состояние иммунитета является решающим фактором в патогенезе БВ. Врожденный иммунный ответ запускается, когда патоген-ассоциированные молекулярные структуры, которые действуют как лиганды для толл-подобных рецепторов (tolllike receptor, TLR), распознаются клетками-хозяевами. TLR относятся к семейству трансмембранных белков и экспрессируются различными типами клеток, включая нейтрофилы, моноциты и дендритные клетки. Активация TLR вызывает экспрессию провоспалительных цитокинов. До настоящего времени у людей было выявлено 11 TLR [17, 65, 79]. Было высказано предположение, что путем индукции иммуносупрессивных противовоспалительных цитокинов, таких как IL-10 БВ-ассоциированные микроорганизмы, могут инактивировать TLR на цервико-вагинальном эпителии [17].

Еще одним компонентом врожденного иммунитета, участвующим в патогенезе БВ является маннозо-связывающий лектин (mannose-binding lectin, MBL). Этот протеин, локализующийся в слизистой оболочке влагалища, распознает фрагменты маннозы и фруктозы на поверхности микроорганизмов. MBL активирует систему комплемента, конечные компоненты распада которого приводят к повреждению мембраны и лизису микробной клетки [40]. Кроме того, он распознает поврежденные клетки собственного организма и активирует процесс их удаления [10].

1.3. Микроэкосистема влагалища в норме и при бактериальном вагинозе 1.3.1. Физиологическая микроэкосистема влагалища

Проект «Микробиом человека», запущенный в США в 2008 году, определил генетическую идентичность совокупности микроорганизмов, составляющих микрофлору человека. Пять лет около 200 ученых из 80 мультидисциплинарных научно-исследовательских институтов проводили исследования образцов, взятых у 242 здоровых мужчин и женщин. Ученые определили, что на одну клетку человека приходится около 10 клеток бактерий, и, собранные вместе, они составляют приблизительно 1-3% массы тела, а также добавляют к генам человека еще 8 миллионов бактериальных генов. Кроме того, были открыты новые, ранее неизвестные микроорганизмы.

Исследования предыдущих лет, как правило, были сосредоточены на изучении возбудителей инфекционных заболеваний. В последнее время наблюдается повышенный интерес к роли нормальной микрофлоры в поддержании здоровья человека. К нормальной микрофлоре относятся бактерии, более или менее часто выделяемые из организма здорового человека. Макроорганизм и микроорганизмы, составляющие его микрофлору находятся в динамическом равновесии, и образуют единую экологическую систему. Каждая область человеческого тела имеет уникальную коллекцию микроорганизмов. Микрофлора имеет чрезвычайно важное значение для нормальной физиологии человека: может снизить риск развития, диабета, ожирения, артритов, онкологических, сердечно-сосудистых и других серьезных заболеваний [38, 39, 50, 74]. Функциями нормальной микрофлоры являются: формирование колонизационной резистентности, иммуногенная функция, регуляция окислительно-восстановительного потенциала, образование биологически активных соединений, участие в водно-солевом обмене, обмене белков, углеводов, холестерина, жирных и нуклеиновых кислот. Кроме того, нормальная микрофлора защищает эпителий слизистых оболочек, образуя микробные биопленки [1].

Главное предназначение нормальной микрофлоры - поддержание колонизационной резистентности. Колонизационная резистентность объединяет комплекс механизмов, которые создают способность микробиоты и организма хозяина, взаимодействуя вместе, защищать экосистему от патогенных микроорганизмов.

К защитным механизмам влагалища относят:

• доминирование лактобацилл, образующих в процессе своей жизнедеятельности молочную кислоту, поддерживая рН менее чем 4,5, при котором подавляется рост анаэробной микрофлоры;

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Назарова Вероника Викторовна, 2020 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Биопленки при бактериальном вагинозе / Е.С. Березовская, И.О. Макаров, М.А. Гомберг [и др.] // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2013. -№2. - С. 34-36.

2. Все ли лактобациллы одинаково полезны? / А.М. Савичева, К.В. Шалепо, В.В. Назарова [и др.] // Status Praesens. - 2014. - №8. - C. 33-37.

3. Доброхотова, Ю.Э. Микроэкология и защитные механизмы влагалища / Ю.Э. Доброхотова, Н.Г. Затикян // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2007. - №2. - С. 10-12

4. Кира, Е.Ф. Бактериальный вагиноз / Е.Ф. Кира. - Москва: ООО «Медицинское информационное агенство», 2012. - 472с.

5. Клиническая лабораторная диагностика (методы и трактовка лабораторных исследований): учеб. пособие / под ред. проф. В.С. Камышникова. - Москва: МЕДпресс-информ, 2015. - 720с.

6. Критерии диагностики бактериального вагиноза с использованием теста Фемофлор-16 / В.В. Назарова, Е.В. Шипицына, Е.Н. Герасимова [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2017. - №4. - С.57-67.

7. Лабораторная диагностика бактериального вагиноза: методические рекомендации / А.М. Савичева, Т.В.Красносельских, Е.В.Соколовский [и др.] - Санкт-Петербург: Н-Л, 2011. - 28 с.

8. Липова, У.В. Урогенитальный кандидоз у женщин: проблемы и пути решения / У.В. Липова // Гинекология. - 2009. - Т. 10, №5. - С. 35-38.

9. Малышева, С.В. Вагинальный кандидоз и бактериальный вагиноз в пубертатном периоде: клиника и лечение: автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук: 14.00.01 / Малышева Светлана Владимировна. - Иркутск, 2001. - 20 с.

10.Менухова, Ю.Н. Бактериальный вагиноз: этиопатогенез, клинико-лабораторные особенности / Ю.Н. Менухова // Журнал акушерства и женских болезней. - 2013. - №4. - С. 79-87.

11. Свиридов, М.А. Морфо-функциональные особенности вагинальных эпителиоцитов женщин и роль нормальной микрофлоры в формировании микробиценоза и колонизационной резистентности влагалища / М.А. Свиридов, И.И. Долгушин // Вестник новых медицинских технологий. -2008. - Т. 15, №2. - С.48-50.

12. Симчера, И.А. Состояние микробиоценоза влагалища при беременности и в послеродовом периоде: автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук: 14.00.01 / Симчера Иван Андреевич. -Санкт-Петербург, 1999. - 21с.

13. Сравнение эффективности диагностики бактериального вагиноза по клиническим признакам с результатами лабораторных исследований / Е.В. Шипицына, Т.А. Хуснутдинова, О.С. Рыжкова [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2016. - Т. LXV, №4. - С. 76-82.

14.Уварова, Е.В. Комплексная система коррекции дисбиоза влагалища у пациенток с первичным дефицитом эстрогенов на фоне развивающей и поддерживающей гормональной терапии / Е.В. Уварова // Репродуктивное здоровье детей и подростков. - 2011. - №6. - С. 77-86.

15.A fruitful alliance: the synergy between Atopobium vaginae and Gardnerella vaginalis in bacterial vaginosis-associated biofilm / L. Hardy, V. Jespers, S. Abdellati [et al.] // Sex. Transm. Infect. - 2016. - Vol.92, N 7. - P.487-491.

16.Allsworth, J.E. Severity of bacterial vaginosis and the risk of sexually transmitted infection / J.E. Allsworth, J.F. Peipert // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2011. -Vol.205, N 2. -P.113.e1-6.

17. An altered immunity hypothesis for the development of symptomatic bacterial vaginosis / S.S Witkin, I.M. Linhares, P. Giraldo [et al.] // Clin. Infect. Dis. -2007. - Vol. 44. - P. 554-557.

18. An association between non-gonococcal urethritis and bacterial vaginosis and the implications for patients and their sexual partners / F.E. Keane, B.J. Thomas, L. Whitaker [et al.] // Genitourin. Med. - 1997. - Vol. 73, №5. - P. 373-377.

19.Analysis of adherence, biofilm formation and cytotoxicity suggests a greater virulence potential of Gardnerella vaginalis relative to other bacterial-vaginosis-associated anaerobes / J.L. Patterson, A. Stull-Lane, P.H. Girerd [et al.] // Microbiology. - 2010. - Vol. 156. - P. 392-399.

20.Anderson, M.R. How do clinicians manage vaginal complaints? An internet survey / M.R. Anderson, A. Karasz // Med. Gen. Med. - 2005. - Vol. 7, №2. - P. 61.

21. Antonio, M.A. The identification of vaginal Lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species / M.A. Antonio, S.E. Hawes, S.L. Hillier // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 180, №6. - P. 1950-1956.

22. Association of Atopobium vaginae, a recently described metronidazole resistant anaerobe, with bacterial vaginosis / M.J. Ferris, A. Masztal, K.E. Aldridge [et al.] // BMC Infect. Dis. - 2004. - Vol. 4. - P. 5.

23. At the crossroads of vaginal and disease, the genome sequence of Lactobacillus iners AB-1 / J.M. Macklaim, G.B. Gloor, K.C. Anukam [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2011. - Vol. 108, suppl.1. - P. 4688-4695

24. Bacterial vaginosis in relation to menstrual cycle, menstrual protection method, and sexual intercourse in rural Gambian women / L. Morison, G. Ekpo, B. West [et al.] // Sex. Transm. Infect. - 2005. - Vol. 81. - P. 242-247.

25.Bacterial communities in women with bacterial vaginosis: high resolution phylogenetic analyses reveal relationships of microbiota to clinical criteria / S. Srinivasan, N.G. Hoffman, V.T. Morgan [et al.] // PLoS One. - 2012. - Vol. 7, №6. - P. 7818.

26.Brizzolara, S. Vaginal pH and parabasal cells in postmenopausal women / S. Brizzolara, J. Killeen, R. Severino // Obstet. Gynecol. - 1999. - Vol. 94. - P. 700703.

27. Cervicovaginal fluid and semen block the microbicidal activity of hydrogen peroxide produced by vaginal lactobacilli / D.E. O'Hanlon, B.R. Lanier,T.R. Moench [et al.] // BMC Infect. Dis. - 2010. - Vol. 19, №10. - P.120.

28. Characterization of a novel Atopobium isolate from the human vagina: description of Atopobium vaginae sp. nov. / J. Rodriguez, M.D. Collins, B. Sjoden [et al.] // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1999. - Vol. 49. - P. 1573-1576.

29. Comparative genomic analyses of 17 clinical isolates of Gardnerella vaginalis provide evidence of multiple genetically isolated clades consistent with subspeciation into genovars / A. Ahmed, J. Earl, A. Retchless [et al.] // J. Bacteriol. - 2012. - Vol. 194, №15. - P. 3922-3937.

30. Comparative study between the pH test and of the KOH versus Nugent score for diagnosis of bacterial vaginosis in pregnant women / A.A. Campos, A.P. Leite, C.V. Lisboa [et al.] // Rev. Bras. Gynecol. Obstet. - 2012. - Vol. 34, №5. - P. 209-214.

31. Comparative study of vaginal Lactobacillus phages isolated from women in the United States and Turkey: prevalence, morphology, host range, and DNA homology / A.O. Kilic, S.I. Pavlova, S. Alpay [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2001. - Vol. 8. - P. 31-39.

32. Composition of the vaginal microbiota in women of reproductive age - sensitive and specific molecular diagnosis of bacterial vaginosis is possible?/ E. Shipitsyna, A Roos, R. Datcu [et al.] // PLoS One. - 2013. - Vol.8, N 4. - P.e60670

33. Curtis, A.H. A motile curved anaerobic bacillus in uterine discharges / A.H. Curtis // J. Infect. Dis. - 1913. - Vol. 12, №1. - P. 165-169.

34.Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis / G.G. Donders, A. Vereecken, E. Bosmans [et al.] // BJOG. - 2002. - Vol. 109, №1. - P. 34-43.

35.Development and validation of a semi-quantitative, multi-target, PCR assay for the diagnosis of bacterial vaginosis / C.P. Cartwright, B.D. Lembke, Ramachandran K [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2012. - Vol. 50. - P. 2321 - 2329.

36.Diagnosis and clinical manifestations of bacterial vaginosis / D.A. Eschenbach, S Hillier, C. Critchlow [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. - 1998. - Vol.158. - P. 819-828.

37. Differences in the composition of vaginal microbial communities found in healthy Caucasian and black women / X. Zhou, M.A. Hansmann, Z. Abdo [et al.] // ISME J. - 2007. - Vol.1. - P. 121-133.

38.Early enteral supply of fiber and lactobacilli versus convertional nutrition: acontrolled trialin patients with major abdominal surgery / N. Rayes, S.Hansen, D.Seehofer // Nutrition. - 2002. - Vol. 18. - P. 609-615.

39.Effect of Lactobacillus plantarum 299v on cardiovascular disease risk factors in smokers / Naruszewich M., Johansson M.L., Zapolska-Downar D.[et al.] // Am. J. Clin. Nutr. - 2002. - Vol. 76. - P. 1249-1255.

40.Eisen, D.P. Impact of mannose-binding lectin on susceptibility to infectious diseases / D.P. Eisen, R.M. Minchinton // Clin. Infect. Dis. - 2003. - Vol. 37. - P. 1496-1505.

41. Estrogen acidifies vaginal pH by upregulation of proton secretion via the apical membrane of vaginal-ectocervical epithelial cells / G.L. Gorodeski, U. Hopfer,

C.C. Liu [et al.] // Endocrinology. - 2005. - Vol. 146. - P. 816-824.

42. Evaluation of clinical methods for diagnosing bacterial vaginosis / R.E. Gutman, J.F. Peipert, S. Weitzen [et al.] // Obstet- Gynecol. - 2005. - Vol. - 105. - P. 551556.

43.Factors associated with acquisition of, or persistent colonization by, vaginal lactobacilli: role of hydrogen peroxide production / A.C. Vallor, M.A.D. Antonio, S.E. Hawes [et al.] // J. Infect. Dis. - 2001. - Vol. 184. - P. 1431- 1436.

44. Female genital-tract HIV load correlates inversely with Lactobacillus species but positively with bacterial vaginosis and Mycoplasma hominis / B.E. Sha, M.R.Zariffard, Q.J. Wang [et al.] // J. Infect. Dis. - 2005 - Vol. 191, №1. - P 25.

45.Ferris, M.J. Use of species-directed 16S rRNA Gene PCR primers for detection of Atopobium vaginae in patients with bacterial vaginosis / M.J. Ferris, A. Masztal,

D. Martin // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42,№12. - 5892-5894.

46. Functional and phylogenetic characterization of vaginolysin, the human-specific cytolysin from Gardnerella vaginalis / S.E. Gelber, J.L. Aguilar, K.L. Lewis // J. Bacteriol. - 2008. - Vol. 190. - P. 3896-3903.

47. Gardnerella vaginalis outcompetes 29 other bacterial species isolated from BV patients in an in vitro biofilm formation model / P. Alves, J. Castro, C. Sousa [et al.] // J. Infect. Dis. - 2014. - Vol. 210, №4. - P. 593-596.

48. Gardner, H.L. Haemophilus vaginalis vaginitis: a newly defined specific infection previously classified «nonspecific» vaginitis / H.L. Gardner, C.D. Dukes // Am. J. Obstet. Gynecol. - 1955. - Vol. 69, №5. - P. 962-976.

49. Greenwood, J.R. Transfer of Haemophilus vaginalis to a new genus, Gardnerella, G. vaginalis comb. nov. / J.R. Greenwood, M.J. Pickett // Int. J. Syst. Bacteriol. -1980. - Vol. 30. - P. 170-178.

50.Habitual intake of lactic acid bacteria and risk redaction of bladder cancer / Ohashi Y., Nakai S., Tsukamoto T. [et al.] // Urol. Int. - 2002. - Vol. 68. - P. 273-280.

51. High recurrence rates of bacterial vaginosis over the course of 12 months after oral metronidazole therapy and factors associated with recurrence /C.S. Bradshaw, A.N. Morton, J. Hocking [et al.] // J. Infect. Dis. - 2006. - Vol. 193. - P. 14781486.

52.Homogeneity of the vaginal microbiome at the cervix, posterior fornix, and vaginal canal in pregnant Chinese women / Y.E. Huang, Y. Wang, Y. He [et al.] // Microb. Ecol. - 2015. - Vol. 69, №2. - P. 407-414.

53. Identification and characterization of vaginal lactobacilli from South African women / S. Pendharkar, T. Magopane, P.G.Larsson [et al.] // BMC Infect. Dis. -2013. - Vol. 13. - P. 43.

54. Identification of novel microbes associated with pelvic inflammatory disease and infertility / C.L. Haggerty, P.A. Totten, G. Tang [et al.]// Sex. Transm. Infect. -2016. - Vol. 92, №6. - P. 441-446.

55.Inerolysin, a cholesterol-dependent cytolysin produced by Lactobacillus Iners / R. Rampersaud, P.J. Planet, T.M. Randis [et al.] // J. Bacteriol. - 2010. - Vol. 193. -P. 1034-1041.

56. Interplay between the temporal dynamics of the vaginal microbiota and human papillomavirus detection / R.M. Brotman, M.D. Shardell, P. Gajer [et al.] / J. Infect. Dis. - 2014. - Vol. 2010, №11. - P. 1723-1733.

57. In vaginal fluid, bacteria associated with bacterial can besuppressed with lactic acid but not hydrogen peroxide / D.E. O'Hanlon, T.R. Moench, R.A.Cone // BMC Infect. Dis. - 2011. - Vol.19, №11. - P.200.

58.Ison, C.A. Validation of a simplified grading of Gram stained vaginal smears for use in genitourinary medicine clinics / C.A. Ison, P.E. Hay // Sex. Transm. Infect. - 2002. - Vol. 78, №6. - P. 413-415.

59.Kenyon, C. The global epidemiology of bacterial vaginosis: a systematic review / C. Kenyon, R. Colebunders, T. Crucitti // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2013. - Vol. 209, №6. - P. 505-523.

60.Lactocin 160, a bacteriocin produced by vaginal Lactobacillus rhamnosus, targets cytoplasmic membranes of the vaginal pathogen, Gardnerella vaginalis / E. Turovskiy, R.D. Ludescher, A.A. Aroutcheva [et al.] // Probiotics Antimicrob. Proteins. - 2010. - Vol.1, №1. - P.67-74.

61.Machado, A. Influence of Biofilm Formation by Gardnerella vaginalis and other Anaerobes on Bacterial Vaginosis / A. Machado, N. Cerca // J. Infect. Dis. -2015. - Vol. 212, №12. - P. 1856-1861.

62.Makarova, K.S. Evolutionary genomics of lactic acid bacteria / K.S. Makarova, E.V. Koonin // J. Bacteriol. - 2007. - Vol. 189. - P. 1199-1208.

63.Marazzo, J.M. Interpreting the epidemiology and natural history of bacterial vaginosis: are we stiil confused? / J. M. Marazzo // Anaerobe. - 2011. - Vol. 17. -P. 186-190.

64.Metabolic signatures of bacterial vaginosis / S. Srinivasan, M.T. Morgan, T.L. Fiedler [et al.] // MBio. - 2015. - Vol. 6, №2. pii: e00204-15. doi: 10.1128/mBio.00204-15.

65.Misch, E.A. Toll-like receptor polymorphisms and susceptibility to human disease / E.A. Misch, T.R. Hawn // Clin. Sci. - 2008. - Vol. 114. - P. 347-360.

66.Mittal, V. Development of modified diagnostic criteria for bacterial vaginosis / V.Mittal, A.Jain, Y.Pradeep // J. Infectol. Develop. countries. - 2012. - Vol. 14. - P. 373-377.

67. Molecular analysis of the divercity of vaginal microbiota associated with bacterial vaginosis / Z. Ling, J. Kong, F. Liu [et al.] // BMC Genomics. - 2010. - Vol. 11. -P. 488.

68.Molecular assessment of bacterial vaginosis by Lactobacillus abundance and species diversity / J.A. Dols, D. Molenaar, J.J. van der Helm [et al.] // BMC Infect. Dis. - 2016. - Vol. 16. - P. 180.

69.Molecular definition of vaginal microbiota in East African commercial sex workers / J.J. Schellenberg, M.G. Link, J.E. Hill [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2011. - Vol. 77, №12. - P. 4066-4074.

70.Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis / D.N. Fredricks, T.L. Fiedler, J.M. Marrazzo [et al.] // N. Engl. J. Med. - 2005. - Vol. 353. - P. 1899-1911.

71. Molecular quantification of Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae loads to predict bacterial vaginosis / J.P. Menard, F. Fenollar , M. Henry [et al.] // Clin. Infect. Dis. - 2008. - Vol. 47. - P. 33-43.

72. Nonspecific vaginitis. Diagnostic criteria and microbial and epidemiologic associations / R. Amsel, P.A. Totten, C.A. Spiegel [et al.] // Am. J. Med. - 1983. -Vol. 74, №1. - P. 14-22.

73.Nugent, R.P. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation /P.R. Nugent, M.A.Krohn, S.L. Hillier // J. Clin. Microbiol. - 1991. - Vol. 29, №2. - P. 297-301.

74. Pathogenetic role of dysbacteriosis in the development of complications of type 1 diabetes mellitus in children / G.N. Rozanova, D.A.Voevodin, M.A. Stenina [et al.] // Bull. Exp. Biol. Med. - 2002. - Vol. 133. - P. 164-166.

75.Phage infection in vaginal lactobacilli: an in vitro study / S.I. Pavlova, A.O. Kilic, S.M. Mou [et al.] // Infect. Dis. Obstet. Gynecol. - 1997. - Vol. 5. - P. 36-44.

76.Presence of a polymicrobial endometrial biofilm in patients with bacterial Vaginosis / A. Swidsinski, H. Verstraelen, V. Loening-Baucke [et al.] // PLoS ONE. - 2013. - Vol.8, N1: e53997.

77. Quantitative PCR assessments of bacterial species in women with and without bacterial vaginosis / M. Zozaya-Hinchliffe, R. Lillis, D.H. Martin [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2010. - Vol. 48, №5. - P. 1812-1819.

78.Rapid fluctuation of the vaginal microbiota measured by Gram stain analysis / R.M. Brotman, J. Ravel, R.A. Cone [et al.] // Sex. Transm. Infect. - 2010. - Vol. 86. - P. 297-302.

79. St John, E. Bacterial vaginosis and host immunity / E. St John, D. Mares, G.T. Spear // Curr. HIV/AIDS Rep. - 2007. - Vol. 4, №1. - P. 22-28.

80. Schmidt, H. Validity of wet-mount bacterial morphotype identification of vaginal fluid by phase-contrast microscopy for diagnosis of bacterial vaginosis in family practice / H. Schmidt, J.G. Hansen // APMIS. - 2001. - Vol. 109, №9. - P. 589594.

81. Taylor, B.D. Does bacterial vaginosis cause pelvic inflammatory disease / B.D. Taylor, T. Darville, C.L.Haggerty // Sex. Transm. Dis. - 2013. - Vol. 40, №2. - P. 117-122.

82. Temporal dynamics of the human vaginal microbiota / P. Gajer, R.M. Brotman, G.Bai et al. //Sci. Transl. Med. - 2012. - Vol.4(132). - P.132ra52. doi: 10.1126/scitranslmed.3003605.

83.The vaginal microbiome during pregnancy and the postpartum period in a European population / D.A. Maclntyre, M. Chandiramani, Y.S. Lee. [et al.] // Sci. Rep. - 2015. - Vol. 5. - P. 8988.

84.The vaginal microbiome: new information about genital tract flora using Molecular based techniques / R.F. Lamont, J.D. Sobel, R.A. Akins [et al.] // BJOG. - 2011. - Vol. 118. - P. 533-549.

85.The relationship of bacterial vaginosis, Candida and Trichomonas infection to symptomatic vaginitis in postmenopausal women attending a vaginitis clinic / A.

Spinillo, A.M. Bernuzzi, C. Cevini [et al.] // Maturitas. - 1997. - Vol. 27, №3. -P. 253-260.

86. The relationship of hydrogen peroxidase-producing lactobacilli to bacterial vaginosis and genital microflora in pregnant women / S.L. Hillier, M.A. Krohn, S.J. Klebanoff [et al.] // Obstet. Gynecol. - 1992. - Vol.79. - P. 369-373.

87.Utility of Amsel criteria, Nugent score, and quantitayive PCR for Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis, and Lactobacillus spp. for diagnosis of bacterial vaginosis in human immunodeficiency virus-infected women / B.E. Sha, H.Y. Chen, Q.J. Wang [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2005. - Vol. 43, №9. - P. 46074612.

88. Vaginal Lactobacillus flora of healthy Swedish women / A. Vasquez, T. Jakobson, S. Ahrne [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40, N 8. - P. 2746-2749.

89. Vaginal microbial flora and outcome of pregnancy / L. Donati, A. Di Vico, M. Nucci [et al.] // Arch. Gynecol. Obstet. - 2010. - Vol. 281, №4. - P. 589-600.

90. Vaginal microbiome of reproductive-age women / J. Ravel, P. Gajer, Z. Abdo [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2011. - Vol. 108, suppl. 1. - P. 4680-4687.

91. Verstraelen, H. The biofilm in bacterial vaginosis: implications for epidemiology, diagnosis and treatment / H. Verstraelen, A. Swidsinski // Curr. Infect. Dis. -2013. - Vol. 26, №1. - P. 86-89.

92.Wade, W.G. The Genus Eubacterium and Related Genera / W.G. Wade // Procaryotes. - 2006. - Vol. 4. - P. 823-835.

93. WHO. Sexually transmitted and other reproductive tract infections. A guide to essential practice. Annex 3. Laboratory tests for STI. - Geneva, 2005. - 191 p.

94. Wilson, J. Managing recurrent bacterial vaginosis / J. Wilson // Sex. Transm. Infect. - 2004. - Vol. 80. - P. 8-11.