Клинико-лабораторная оценка ароматазной активности яичников женщин репродуктивного возраста тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.10, кандидат наук Тимофеева, Екатерина Михайловна

• Тимофеева, Екатерина Михайловна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Тимофеева, Екатерина Михайловна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структура и биологические свойства ароматазы

1.2. Дефицит ароматазы

1.3. Методы определения ароматазы

1.3.1. Радиометрический метод

1.3.2. Определение активности ароматазы по соотношению эстрогенов к андрогенам в сыворотке крови

1.3.3. Иммуногистохимический метод

1.3.4. Полимеразная цепная реакция

1.4. Определение мутаций гена СУР 19

1.5. Применение ингибиторов ароматазы в клинике

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика обследованных групп женщин

2.2 Иммуноферментный метод определения гормонов в сыворотке крови

2.3. Эхография органов малого таза

2.4. Статистические методы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты гормонального обследования здоровых женщин, не получавших

»

летрозол

3.2. Результаты пробы с летрозолом у здоровых женщин

3.2.1. Реакция половых стероидных гормонов на летрозол

3.2.2. Реакция гонадотропинов и пролактина на летрозол

3.2.3. Реакция ССГ и АМГ на летрозол

3.3. Результаты пробы с летрозолом у больных НГЭ на фоне применения аГРГ и у

больных с первичной овариальной недостаточностью

3.4. Определение ароматазной активности антральных фолликулов яичников

3.5. Результаты пробы с летрозолом у больных НГЭ и СПЯ

ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-лабораторная оценка ароматазной активности яичников женщин репродуктивного возраста»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Нормогонадотропная недостаточность яичников - наиболее частая причина гормонального бесплодия. Распространена точка зрения, согласно которой нормогонадотропная ановуляция является следствием центральных регуляторных нарушений [7, 9]. Однако еще в 90-х годах прошлого века было установлено, что у значительной части больных с нормогонадотропной ановуляцией механизм положительной обратной связи между яичниками и гипофизом интактен [5, 20]. Эти данные указывают на роль первично-овариальных факторов в развитии нормогонадотропной недостаточности яичников. К ним следует отнести хронический аднексит, аутоиммунное поражение яичников или повреждение ферментативной системы, ответственной за синтез эстрогенов доминантным фолликулом. Ключевым ферментом в конверсии андрогенов в эстрогены является ароматаза.

Ароматаза - уникальный ферментный комплекс, который необходим в организме для завершения синтеза эстрогенов гранулезными клетками яичников. Ароматазная активность в яичниках проявляется в антральных фолликулах 5 класса, когда начинается третья стадия фолликулогенеза — селекция и созревание доминантного фолликула. В эту стадию фолликулы достигают размеров 2 мм и более в диаметре, и их рост полностью становится зависимым от фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), который стимулирует ароматазу через аденилатциклазную систему [69].

Активность ароматазы определяется также в других тканях и органах, участвующих в периферической продукции эстрогенов, таких как жировая ткань, фибробласты кожи, печень, строма и паренхима молочных желез, эндометрий, плацента, мышечная и костная ткань и др. [38, 46, 48, 122, 149]. Следовательно, имеются достаточные основания полагать, что реакция ароматизации является одним из существенных механизмов поддержания эстроген-андрогенового баланса в соответствующих органах и может влиять на формирование как эстрогендефицитных состояний при ановуляции, так и локального избытка эстрогенов в соответствующих органах-мишенях.

*

Можно думать, что частичный дефицит ароматазы является одной из причин нормогонадотропной недостаточности яичников. С другой стороны, существует большая группа так называемых эстрогензависимых заболеваний (эндометриоз, миома матки, рак тела матки, рак молочной железы), развитие которых связано с гиперпродукцией эстрогенов. Антиэстрогены, в частности ингибиторы ароматазы, используют как для индукции овуляции при нормогонадотропной ановуляции [17], так и в комплексной терапии эстрогензависимых заболеваний, например, эндометриоза [12]. Информация об эндогенной овариальной активности ароматазы может быть крайне важной при лечебном использовании ее ингибиторов при этих формах патологии. На сегодняшний день клиническая лабораторная диагностика не имеет в своем арсенале доступных методов определения ароматазной активности яичников.

В настоящее время активность ароматазы в различных тканях определяют радиометрическим методом, основанным на превращении меченого тритием андростендиона в «тяжелую воду» ( Н-Н20) [13, 52, 141] и меченый тритием эстрон [92, 94, 118]. Существует также косвенный метод определения активности ароматазы по соотношению эстрогенов к андрогенам в сыворотке крови [16]. Экспрессию ароматазы в тканях можно определить с помощью иммуногистохимического анализа [26, 140]. Мутации гена, кодирующего ароматазу (CYP 19), определяют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим секвенированием [41, 144]. Практически отсутствуют методы определения ароматазной активности неинвазивными методами. Поиск неинвазивных методов определения активности ароматазы остается одним из перспективных направлений эндокринологии репродукции и клинической лабораторной диагностики.

Степень разработанности темы. На сегодняшний день доказана важнейшая роль интракршшого эффекта эстрогенов, который заключается в биологическом ответе на гормон в том же органе или ткани, где он образуется [4]. Этот механизм играет роль в патогенезе эстрогензависимых заболеваний. Определена и доминирующая роль ароматазы в конверсии андрогенов в

эстрогены [114]. Существующие в настоящее время косвенные и инвазивные методы определения ароматазной активности не дают информации о ее количественной оценке. Определение экспрессии ароматазы, приходящейся на одну клетку гранулезы антрального фолликула яичников, с помощью иммуногистохимического метода обладает невысокой воспроизводимостью результатов [26].

Цель исследования: изучить реакцию половых стероидных гормонов и гонадотропинов на прием ингибитора ароматазы летрозола для разработки метода определения активности овариальной ароматазы при различных формах недостаточности яичников.

Задачи исследования:

1. Определить реакцию эстрадирла и эстрона в сыворотке крови в ответ на пероральный прием 10 мг ингибитора ароматазы летрозола.

2. Оценить изменения андрогенов (общего тестостерона, свободного тестостерона, андростендиона), 17-гидроксипрогестерона и индекса свободных андрогенов в сыворотке крови на прием 10 мг летрозола.

3. Выяснить реакцию фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона и пролактина в сыворотке крови в ответ на прием летрозола.

4. Оценить изменения половых стероидных гормонов и гонадотропинов в сыворотке крови в ответ на прием летрозола у женщин с наружным генитальным эндометриозом на фоне применения агониста гонадотропин-рилизинг гормона и женщин с первичной овариальной недостаточностью.

5. Разработать метод определения ароматазной активности антральных фолликулов яичников.

6. Оценить вариабельность ароматазной активности яичников женщин с нормогонадотропной овариальной недостаточностью, обусловленной эндометриозом и синдромом поликистозных яичников.

Научная новизна исследования

Впервые охарактеризованы критерии, позволяющие на основании определения иммуноферментным методом в сыворотке крови половых стероидных гормонов и гонадотропинов в ответ на прием 10 мг ингибитора ароматазы - летрозола оценить ароматазную активность.

Разработан способ определения активности общей овариальной ароматазы и ароматазной активности антральных фолликулов яичников (Заявка на патент № 2013147216 от 22.10.2013 г., решение о выдаче патента на изобретение Ф. № 01ИЗ -2013 от 05. 12. 2014г.).

Определены границы референтного интервала овариальной ароматазной активности у женщин репродуктивного возраста.

Теоретическая и практическая значимость

Разработанный тест с ингибитором ароматазы летрозолом позволяет определять общую ароматазную активность яичников и ароматазную активность овариальных фолликулов для изучения роли ароматазы в патогенезе различных форм ановуляторного бесплодия и эстрогензависимых заболеваний. Метод может быть внедрен для лабораторной оценки овариальной ароматазной активности при различной гинекологической патологии. Результаты предложенного теста могут быть использованы для оптимизации терапии указанных заболеваний.

Методология и методы исследования. Для реализации цели исследования были использованы иммуноферментные методы. Проведена проба с летрозолом, УЗИ органов малого таза, статистический анализ результатов исследования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Пероральный прием 10 мг ингибитора ароматазы летрозола вызывает у здоровых женщин достоверное снижение эстрадиола и эстрона в сыворотке крови. Максимальное снижение эстрогенов приходится на 48 часов после приема препарата и составляет для эстрадиола 30%, для эстрона 17,4%. Отношение реакции эстрадиола на летрозол к уровню антимюллерова гормона в сыворотке крови (аэ2/АМГ) отражает ароматазную активность антральных фолликулов.

2. Изменение уровня эстрадиола после приема летрозола отражает активность овариалыюй ароматазы, так как у больных эндометриозом на фоне применения аГРГ и у больных с первичной недостаточностью яичников, реакция на ингибитор ароматазы практически отсутствует.

3. Ароматазная активность антральных фолликулов при нормогонадотропной ановуляции, обусловленной наружным генитальным эндометриозом и синдромом поликистозных яичников, находится в широких пределах. Определение ароматазной активности антральных фолликулов может являться основанием для выбора патогенетически обоснованной терапии, например, ингибиторов ароматазы у больных наружным генитальным эндометриозом и синдромом поликистозных яичников.

Личный вклад автора

Автором самостоятельно выполнены иммуноферментные исследования, проведен анализ полученных результатов. Совместно со специалистами отдела эндокринологии репродукции ФГБУ «НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта» СЗО РАМН автор принимал участие в клиническом обследовании больных. В ходе выполнения работы проведен аналитический обзор современной отечественной и зарубежной литературы. Автором самостоятельно проведена

статистическая обработка и анализ полученных результатов, сформулированы выводы.

Степень достоверности и апробация результатов исследования.

Достоверность полученных результатов подтверждается достаточным объемом материала, использованием современных методов исследования и оборудования, а также адекватных методов статистической обработки результатов.

Материалы диссертационной работы представлены на VIII междисциплинарной конференции по акушерству, перинатологии, неонатологии «Здоровая женщина - здоровый новорожденный», (Санкт-Петербург, 2013), IV ежегодной научной конференции молодых ученых и специалистов «Репродуктивная медицина: взгляд молодых», (Санкт-Петербург, 2013), LXXV научно-практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины», (Санкт-Петербург, 2014), VI Российско-Германском конгрессе по акушерству и гинекологии «Современные технологии акушерства и гинекологии в решении проблем демографической безопасности», (Калининград, 2014), VII региональном научном форуме «Мать и дитя» и Пленуме Российского общества акушеров-гинекологов, (Геленджик, 2014).

Разработанный метод определения активности ароматазы внедрен в диагностическую работу отделения гинекологической эндокринологии, лаборатории эндокринологии и научно-консультативного отделения ФГБУ «НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта» СЗО РАМН.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, 3 из которых в изданиях, определенных перечнем рецензируемых российских научных журналов для опубликования основных научных результатов диссертации.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 26 рисунками. Указатель литературы содержит 149 наименований, из которых 30 отечественные и 119 зарубежные.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Структура и биологические свойства ароматазы

Ароматаза является членом суперсемейства цитохромов Р450 и относится к подгруппе стероидных гидроксилаз, необходимым в организме для завершения синтеза эстрогенов путем уникальной реакции ароматизации С^-стероидов, а именно, биосинтеза эстрона из андростендиона, эстрадиола из тестостерона [58]. Ароматаза Р450 человека - это белок, состоящий из 503 аминокислотных остатков. КГ-концевой участок молекулы, особенно аминокислотные остатки с 10 по 20 важны для сохранения активной конформации фермента, так как если отщепление первых 10 аминокислот не влияет на активность ароматазы, то отщепление 20 аминокислот уже приводит к снижению ее активности более чем на 95 % [40]. Ароматаза относится к группе ферментов Р450 микросомалыюго типа, локализованных в эндоплазматической сети, получающих электроны от никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ-Н) через Р450 оксидоредуктазу [99]. Ферментный комплекс ароматазы представлен монооксигеназной системой, которая состоит из двух компонентов, локализованных на внутренней митохондриалыюй мембране на границе с матриксом: флавопротеина, входящего в состав Р45о оксидоредуктазы, который переносит электроны от НАДФ к конечному ферменту и гемопротеина, входящего в состав цитохрома Р450, известного как ароматазный цитохром Р450 [19]. Схема переноса электронов представлена на рисунке 1.

Кофермент НАДФ-Н взаимодействует с Р450 оксидоредуктазои в эндоплазматической сети, и отдает пару электронов флавинадениндинуклеотиду (ФАД), который является акцептором электронов. Переход электронов вызывает конформационные изменения белка, способствуя изоаллоксазиновым кольцам ФАД и флавинмононуклеотида (ФМН) приблизиться друг к другу так, чтобы электроны перешли от ФАД к ФМН. После очередного изменения конформации, возвращающего белок в исходное положение, ФМН взаимодействует с окислительно-восстановительной парой, находящейся на цитохроме Р450.

Электроны из ФМН оксидоредуктазы достигают гема цитохрома Р450 и, таким образом гемовое железо опосредует каталитические реакции с субстратом. Взаимодействие оксидоредуктазы и цитохрома Р450 координируется посредством отрицательно заряженных кислотных остатков на поверхности молекулы ФМН и положительно заряженных основных остатков окислительно-восстановительной пары цитохрома Р450.

Рисунок 1. Схема переноса электронов микросомальными ферментами, где POR - Р450 оксидоредуктаза, Р450 - ароматазный цитохром Р450, FAD - ФАД, FMN - ФМН, NADP+, NADP-H - НАДФ в окисленной и восстановленной формах [цитирование по Miller W.L., 2005].

Конверсия андрогенов в эстрогены является последней стадией в мультиферментной трансформации холестерина в женские половые гормоны. Хотя детали этого механизма все еще являются предметом обсуждения, известно, что ароматаза осуществляет три последовательные стадии окисления андрогенов с использованием трех молекул кислорода и НАДФ-Н [141]. Первые две молекулы кислорода участвуют в окислении метальной группы С19 с помощью стандартных реакций гидроксилирования. Использование третьей молекулы кислорода в реакции обуславливает перекисную атаку на метальной группе С19 в

NADPH

сочетании с устранением 1р водорода, и получением фенольного кольца и муравьиной кислоты (рисунок 2) [114].

Рисунок 2. Схема синтеза эстрона из андростендиона [цитирование по Payne А.Н., 2004].

В 1980-х годах М. Pasanen, C.R. Mendelson, J.T. Kellis, Y. Osawa, P.F. Hall и N. Muto выделили белок человека - ароматазу цитохрома Р45о от плацентарных микросом и продемонстрировали преобразования андростендиона в эстрон с помощью очищенного фермента [79, 84, 86, 106, 113, 120, 122]. Эти исследования представили четкие доказательства того, что в "процессе ароматизации" участвует один фермент, а не несколько, как предполагалось первоначально.

Цитохром Р45о кодируется геном CYP19. Ген ароматазы Р450 CYP19 человека расположен на коротком плече 15q21.2 хромосомы и состоит из 10 экзонов, причем, только 9 из них являются кодирующими (II-X). Некодирующий I экзон, который экспрессируется в зависимости от типа ткани, определяет гистоспецифичность. Благодаря механизму альтернативного

тканеспецифического сплайсинга в различных тканях используются свои собственные промотеры, от которых зависит усиление или ослабление тканеспецифической регуляции синтеза эстрогенов. Таким образом, несмотря на то, что транскрипты ароматазы имеют различные 5'- концы в различных тканях, сплайсинг I экзона происходит в общем 3-акцепторном участке. В нем происходит сшивка отдельных вариантов экзона I с экзоном II, расположенном непосредственно перед началом стартового участка трансляции в кодирующей

области [40, 142]. В результате синтезируются идентичные белки. Поэтому использование различных промотеров не влияет на структуру белка, а влияет на

т

уровень его экспрессии [40].

У большинства млекопитающих, экспрессия ароматазы находится под контролем специфических промотеров половых желез и мозга. В организме человека существуют еще восемь дополнительных промотеров, которые используются в различных типах тканей. Возможно, они были включены в работу • в процессе эволюции через изменения в дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК). Каждый промотер регулируется индивидуальным набором регулирующих последовательностей в ДНК и факторами транскрипции, которые связывают эти специфические последовательности. Одним из ключевых механизмов, благодаря которому существует такое количество промотеров, является смешанная природа З'-акцепторного участка, поскольку активация каждого промотера вызывает сплайсинг нетранслируемого первого экзона именно в нем. Тканеспецифические промотеры используются в половых железах, костях, головном мозге, сосудистой ткани, жировой ткани, коже, печени плода и плаценте для физиологического * биосинтеза эстрадиола [105, 127, 138]. В различных тканях ароматаза экспрессируется со следующими промотерами: яичники — II, жировая ткань - 1.3, 1.4, II, костная ткань -1.4,1.6, мозг -кожа -1.4, ткани плода -1.4,1.5, плацента -1.1,1.2,2а, опухолевая ткань молочной железы -1.3, II (рисунок 3).

У человека ароматаза Р450 обнаружена во многих тканях и органах, таких как гонады, головной мозг, жировая ткань, плацента, печень, фибробласты кожи, костная ткань, мышечная ткань, кровеносные сосуды, эндометрий, а также в эндометриоидных гетеротопиях, в тканях лейомиомы, при раке эндометрия и раке молочных желез [43, 45, 46, 47, 48, 53, 104, 111, 132, 133, 149].

centromere 5'-

15q 21.2

-123 kb

telomere

зш1 P450arom TRANSCRIPTS DETECTED

SM/TR

Ovary

ftul— '

Adipoie m«ue IЫ;

Up«]— ■

Bona

Brain Skin

^ t ld,>,rtlc>l Coding Region^ ^-yAATAA

II 111 IV V VI VII VI« DC *1

31 I II I I IB

Mf

EB~'

s-

ra.

Fetal Uttum TÍT4¡

Placenta—^ [Щ—

БЛ

Рисунок 3. Схематическое изображение структуры гена ароматазы Р450 -CYP19, определяющее местоположение каждого тканеспецифического промотера [цитирование по Sebastian S., 2001].

Клинические и экспериментальные исследования ясно показывают, что активность ароматазы и эстрогенов необходимы для продольного роста костей, достижения пика костной массы, пубертатного скачка роста, закрытия эпифизов и нормального костного ремоделирования у молодых людей [38].

Кроме того, с возрастом индивидуальные различия в активности ароматазы могут существенно повлиять на потерю костной массы и риск переломов [38]. Известно также, что половая дифференциация структуры и функционирования мозга зависит от гормонального фона внутриутробно. В последнее время некоторые исследования показали наибольшую активность ароматазы в областях мозга, связанных с половой дифференцировкой и половым поведением, а именно в гипоталамусе и лимбических структурах. Y. Takahashi и группа ученых в исследованиях на крысах продемонстрировали существенные изменения активности ароматазы в головном мозге с возрастом [133]. По их данным, активность ароматазы у крыс обоих полов достигала пиковых значений в гипоталамо-преоптической области за три дня до рождения. У новорожденных крыс активность снижалась в течение трех недель. Выявлено, что наибольшую активность ароматаза проявляет в гипоталамо-преоптической области и миндалине мозжечка у обоих полов. Причем было установлено, что у новорожденных самцов крыс активность ароматазы в этих областях выше, чем у взрослых самцов крыс [133]. Небольшая активность ароматазы проявляется в гиппокампе, таламусе, гипофизе, коре головного мозга и мозжечке. Также при подробном изучении гипоталамо-преоптической области активность ароматазы в передней части гипоталамуса оказалась в два раза выше, чем в задней.

Экспрессия ароматазы в ткани надпочечников изучена недостаточно в отличие от экспрессии в эстрогенпродуцирующих опухолях коры надпочечников [34, 108]. В исследованиях F. Moreau была обнаружена небольшая ароматазная активность в неизмененной ткани надпочечников [104]. Методом иммунофлюоресценции было подтверждено наличие ароматазы в цитоплазме стероидогенных клеток в разных зонах надпочечников. Более сильная экспрессия отмечалась в сетчатой зоне, чем в пучковой и клубочковой зонах [104]. В отличие от исследований M.S. Baquedano [83], F. Moreau не обнаружил ароматазу в мозговом веществе надпочечников. У женщин с возрастом конверсия андростендиона в эстрон увеличивается в 2-4 раза, и надпочечники могут играть важную компенсаторную роль в синтезе эстрогенов, как один из вариантов

защитных свойств организма в менопаузальном возрасте [118]. С другой стороны, локальный синтез эстрогенов в опухолях коры надпочечников может привести к усилению пролиферативного эффекта. В стероид-секретирующих опухолях надпочечников были выявлены р - рецепторы эстрогенов, которые тоже могут быть причастны к эстроген-индуцированной пролиферации [39].

Экспрессия ароматазы в яичниках играет важную роль в регуляции репродуктивного цикла у женщин. Согласно двухклеточной теории, синтез стероидных гормонов яичников функционально разобщен внутри фолликула [130]. В начале менструального цикла в растущих фолликулах из холестерина в клетках теки под влиянием стимулирующего действия лютеинизирующего гормона (ЛГ) происходит синтез андрогенов. Параллельно в клетках гранулезы с помощью реакции ароматизации происходит конверсия тестостерона в эстрадиол и андростендиона в эстрон. Активность ароматазы гранулезных клеток значительно выше, чем клеток теки, несмотря на общую способность секретировать прогестины, андрогены и эстрогены как клетками теки, так и гранулезными клетками. Считается, что в преантральных и антральных фолликулах человека рецепторы ЛГ присутствуют только на клетках теки, а рецепторы ФСГ только на гранулезных клетках [21]. Хотя, по мнению других авторов, на клетках гранулезы и теки присутствуют рецепторы как к ФСГ, так и к ЛГ [14].

По мере созревания фолликула продукция эстрадиола повышается и, тем самым, по механизму отрицательной обратной связи, приводит к угнетению синтеза ФСГ гипофизом. Повышение эстрадиола стимулирует секрецию ЛГ. В ответ на повышение ЛГ, клетки теки увеличивают продукцию андрогенов, которые, в свою очередь, являются субстратом для дальнейшего синтеза эстрогенов [87]. Высокая экспрессия ароматазы в преовуляторном фолликуле приводит к генерации пика ЛГ, который вызывает овуляцию [70]. Повышение содержания андрогенов в недоминантных фолликулах приводит к их превращению в более сильные 5а-редуцированные андрогены, которые не конвертируются в эстрогены и к тому же подавляют активность ароматазы.

Повышение локального содержания андрогенов выше критического уровня приводит к фолликулярной атрезии. В нормальном менструальном цикле такое явление необходимо для созревания и овуляции единственного фолликула, так как повышенное содержание андрогенов может приводить к нарушению нормального циклического процесса и вызывать хроническую ановуляцию [21].

Индуктором синтеза ароматазы является ФСГ, который действует через свой аденилатциклазный рецептор [69]. В настоящее время установлено, что -на регуляцию синтеза ФСГ гипофизом оказывают влияние гликопротеины, вырабатываемые, главным образом, в гранулезных клетках и желтом теле яичников (ингибины А и В, активин А). Ингибины и активины принадлежат к лигандам суперсемейства трансформирующего фактора роста Ь [115] и образуются из белков-предшественников, которые после перестройки образуют димеры с общим цистеиновым звеном [112]. Ингибин имеет две активные изоформы, которые образуются путем соединения субъединицы димера (3 с субъединицей а. В результате образуются гетеродимеры: ингибин А (сфА) и ингибин В (сфВ). Активин также состоит из двух субъединиц. Две 0А-субъединицы образуют гомодимеры - активин А фА-рА), или гетеродимеры с рв субъединицами - активин В (рВ-рВ), активин АВ (рА-рВ). Органами-мишенями для ингибинов и активинов являются гипофиз и яичники [147]. Ингибины секретируются в фолликулярную жидкость, в которой отмечено повышение содержания ингибинов по мере созревания фолликула. Клетки гранулезы антральных фолликулов продуцируют ингибин В, который регулирует продукцию ФСГ в начале менструального цикла. Доминантный фолликул и желтое тело синтезируют ингибин А и эстрадиол, которые благодаря механизму отрицательной обратной связи ингибируют выделение ФСГ гипофизом [1]. Отмечено, что в регуляции синтеза ФСГ гипофизом, а также в селекции и созревании доминантного фолликула ингибин В играет более значимую роль, чем ингибин А [95]. Повышение уровня ингибина В, в отличие от ингибина А, четко коррелирует со снижением уровня ФСГ в крови [117]. Также было показано, что при однократном введении ингибина А уровень ФСГ в крови у

экспериментальных животных не менялся [74]. Ингибины обладают аутокринным и паракринным эффектами в пределах яичников. Одним из основных паракринных эффектов ингибинов, влияющих на стероидогенез, является увеличение продукции андрогенов [67]. Гонадотропин-рилизинг гормон (ГРГ) и эпидермальный фактор роста (ЭФР) уменьшают секрецию ингибина, в то время как инсулиноподобный фактор роста-1 (ИПФР) способствует ее увеличению. Подавляющее влияние ГРГ и ЭФР обусловлено их способностью снижать ФСГ-зависимую продукцию эстрогенов и участием в формировании ЛГ-рецепторов. Стимуляция ФСГ осуществляется гликопротеином, близким по строению к ингибину, активином [73]. В опытах на животных было показано, что активин опосредовано через экспрессию рецепторов ФСГ увеличивает активность ароматазы и секрецию стероидов, а также продукцию стероидов на ранних стадиях развития фолликулов [123]. Активин синтезируется в различных тканях, включая клетки гранулезы яичников и гипофиз, однако большая часть активина связана с фоллистатином и поэтому находится в неактивном состоянии. Известно, что активин, синтезируемый в передней доле гипофиза, вместе с ГРГ осуществляет аутокринную стимуляцию секреции ФСГ [77]. Наименьшее содержание активина А в крови отмечено в середине фолликулярной фазы, затем постепенно начинает расти вплоть до начала фолликулярной фазы следующего цикла, когда уровни ингибинов А и В находятся на минимальном уровне, тогда как уровень ФСГ начинает повышаться. В фолликулярной жидкости уровень активина А на протяжении всего цикла изменяется мало, но на каждой последующей стадии развития фолликула его содержание отличается в 2 раза от содержания на предыдущей стадии. Таким образом, синтез и секреция ФСГ стимулируются активином в гипофизе и блокируются ингибином и фоллистатином яичников.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тимофеева, Екатерина Михайловна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Александрова, Н.В. Современные подходы к оценке овариального резерва у женщин с преждевременной недостаточностью яичников / Н.В. Александрова, Л.А. Марченко // Проблемы репродукции. - 2007. - № 2. - С. 2229.

2. Антоненкова, H.H. Инактивация эстроген-синтетазы аромазином с целью необратимой блокады синтеза эстрогенов у операбельных больных раком молочной железы / H.H. Антоненкова // Вестник ВГМУ. - 2007. - Т. 6, № 3. - С. 1-11.

3. Аромазин: клиническая эффективность и безопасность гормонотерапии у больных раком молочной железы / О.И. Балашова, Н.Г. Звонарева, И.В. Литвин [и др.] // Онкология. - 2008. - Т. 10, № 4. - С.452^454.

4. Ароматазы (роль в патогенезе заболеваний репродуктивной системы и возможности терапии ингибиторами ароматаз): инф. материал, 2005 г. URL: http://gyn-endo.ru/?page_id=461. - (дата обращения 27.05.2014).

5. Айламазян, Э.К. Патогенез нормогонадотропной ановуляции / Э.К. Айламазян [и др.] // Вестн. Росс, ассоц. акушеров и гинекологов. - 1994. — №1. — С. 46-55.

6. Вышинская, Г.В. Аримидекс в терапии больных раком молочной железы / Г.В. Вышинская // РМЖ. - 2005. - Т. 13, № 10. - С. 660-663.

7. Гивенс, Д. Нарушение половой функции у женщин / Д. Гивенс // Эндокринология / Под ред. Н. Ловина. - М.: Практика. -1995. - С.323-340.

8. Гинекологическая эндокринология / В.Н. Серов [и др.]; ред. Серов В.Н. - М.: Медицина «МЕДпресс-информ», 2004. - 528 с.

9. Дедов, И.И. Эндокринология / И.И. Дедов, Г.А. Мельниченко, В.В. Фадеев. - М.: Медицина, 2000. - 632 с.

10. Зеленина, H.B. Синдром поликистозных яичников — проявление социально-адаптационного напряжения / Н.В. Зеленина, C.B. Бескровный, O.JI. Молчанов // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2012. - № 3. - С. 67-74.

11. Иванцов, А.О. Возможности иммуногистохимического исследования в диагностике опухолей / А.О. Иванцов, Д.Е. Мацко // Практическая онкология. -2011.-Т. 12, № 4. - С. 185-193.

12. Комбинированная терапия распространенных форм генитального эндометриоза с применением ингибиторов ароматазы / М.И. Ярмолинская, А. С. Молотков, В.Ф. Беженарь[ и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. -2013.-вып. 1.-С. 64-70.

13. Ларионов, A.A. Конверсия андростендиона в опухолевой и экстрагонадных тканях и ее связь с гормонально-метаболическими факторами у больных раком молочной железы: автореф. дис. ... канд. мед. наук / A.A. Ларионов.-СПб., 1997.

14. Линде, В.А. Фолликулогенез: от примордиальной зародышевой клетки до белого тела / В.А. Линде, A.B. Иванов // Проблемы репродукции. — 2007.-№4.-С. 21-24.

15. Лисянская, A.C. Применение ингибиторов ароматазы третьего поколения в лечении рака эндометрия / A.C. Лисянская, Н.И. Тапильская, Г.М. Манихас // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. -2007. - Т. 5, № 2. - С. 34-42.

16. Мишарина, Е.В. Содержание эстрона, андростендиона и ß-эндорфина в крови женщин с ожирением и нарушением репродуктивной функции: автореф. дис.... канд. мед. наук/Е.В. Мишарина. - СПб., 1993.-21 с.

17. Морчиладзе, А. Применение ингибитора ароматазы летрозола при нормогонадотропной недостаточности яичников: автореф. дис. ... канд. мед. наук. -СПб., 2011.-24 с.

18. Назаренко, Т.А. Ингибиторы ароматазы в репродуктивной медицине / Т.А. Назаренко, Д.В. Дмитриев // Проблемы репродукции. - 2007. - № 1. - С. 1420.

19. Новикова, Л.А. От структуры и функции ферментов биосинтеза стероидов к новым генно-инженерным технологиям / Л.А. Новикова // Успехи биологической химии. - 2009. - Т.49. - С. 159-210.

20. Нормогонадотропная первично-яичниковая недостаточность / Потин В.В. [и др.] // Пробл. эндокринол. - 1990. - Т. 36, N 4. - С. 83-87.

21. Овсянникова, Т.В. Андрогены в физиологии и патофизиологии женского организма / Т.В. Овсянникова, Н.В. Сперанская, О.И. Глазкова // Гинекология. - 2000. - Т. 2, № 2. - С. 42-44.

22. Основы полимеразной цепной реакции (ПЦР): методическое пособие / сост. В.В. Зорина. - М.,2012. - 76 с.

23. Петров, C.B. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / C.B. Петров, Н.Т. Райхлин. - Казань: Изд-во «Титул», 2004 -456 с.

24. ПЦР в реальном времени / Д.В. Ребриков [и др.]; ред. Ребриков Д.В. -3-е изд. - М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2011. - 223 с.

25. Сравнительный анализ экспрессии генов ERct и ароматазы в опухолевых тканях молочной железы и эндометрия / Е.П. Хвостова, В.О. Пустыльняк, О.З. Гольдинштейн [и др.] // Сибирский онкологический журнал. -2007. - Т. 24, № 4. - С. 89-95.

26. Савина, В.А. Роль ароматазы Р450 в патогенезе синдрома поликистозных яичников: автореф. дис. ... канд. мед. наук / В.А. Савина. - СПб., 2012.-9 с.

27. Теппермен, Дж. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / Дж. Теппермен, X. Теппермен. - М.: Мир, 1989. - 653 с.

28. Ферменты метаболизма эстрогенов при гиперплазии и раке эндометрия в сочетании с миомой матки / Н.В. Бочкарева, Л.А. Коломиец, И.В. Кондакова [и др.] // Сибирский онкологический журнал. - 2005. - Т. 15, №3. - С. 32-38.

29. Чемерис, A.B. Секвенирование ДНК / A.B. Чемерис, Э.Д. Ахунов, В.А. Вахитов. - М.: Наука, 1999. - 428 с.

30. Шаргородская, A.B. Синдром овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза / A.B. Шаргородская // Эндокринология. - 2006. - № 1. - С. 15.

*

31. A new cause of female pseudohermaphroditism: placental aromatase deficiency / M. Shozu, K. Akasofu, T. Harada [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. -1991. -Vol. 72. - P. 560-566.

32. A syndrome of female pseudohermaphrodism, hypergonadotropic hypogonadism, and multicystic ovaries associated with missense mutations in the gene encoding aromatase (P450arom) / F.A. Conte, M.M. Grumbach, Y. Ito [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1994. - Vol. 78. - P. 1287-1292.

33. Absolute bioavailability of letrozole in healthy postmenopausal women / A. Sioufi, N. Gauducheau, V. Pineau [et al.] // Biopharm. Drug Dispos. - 1997. - Vol. 18, N. 9. - P. 779-789.

34. Adrenal contribution to circulating estrogens in woman / T. Wasada , Y. Akamine, K. Kato [et al.] // Endocrinolog. Jpn. -1978. - Vol. 25. - P. 123-128.

35. Akhtar, M. Mechanistic studies on aromatase and related C-C bond cleaving P-450 enzymes / M. Akhtar, V.C. Njar, J.N Wright // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. - 1993. - Vol. 44. - P. 375-387.

36. Albrecht, E.D. Estrogen regulation of placental angiogenesis and fetal ovarian development during primate pregnancy / E.D. Albrecht, G.J. Pepe // Int. J. Dev. Biol. - 2010. - Vol. 54. - P. 397-408.

37. Anti-Miillerian hormone: an ovarian reserve marker in primary ovarian insufficiency / J.A. Visser, I. Schipper, J.S. Laven [et al.] // Nat. Rev. Endocrinol. -2012.- Vol. 8.-P. 331-341.

38. Aromatase activity and bone loss in men / D. Merlotti, L. Gennari, K. Stolakis [et al.] // J. Osteoporos. - 2011. - Vol. 2011. - P. 1-11.

39. Aromatase activity in an estrogen-producing adrenocortical carcinoma in a young man / M. Kimura, N. Itoh, T. Tsukamoto [et al.] // Journal of Urology. - 1995. -Vol. 153.-P. 1039-1040.

40. Aromatase cytochrome P450, the enzyme responsible for estrogen biosynthesis / E.R. Simpson, M.S. Mahendroo, G.D. Mean [et al.] // Endocr. Rev. -1994. - Vol. 15. -P. 342-355.

41. Aromatase deficiency in a female who is compound heterozygote for two new point mutations in the P450arom gene: impact of estrogens on hypergonadotropic hypogonadism, multicystic ovaries, and bone densitometry in childhood / P.E. Mullis, N. Yoshimura, B. Kuhlmann [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1997. - Vol. 82. -P. 1739-1745.

42. Aromatase deficiency in male and female siblings caused by a novel mutation and the physiological role of estrogens / A. Morishima, M.M. Grumbach, E.R. Simpson [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1995. - Vol. 80. - P. 3689-3698.

43. Aromatase expression in stromal cells of endometrioid endometrial cancer correlates with poor survival / T. Segawa, M. Shozu, K. Murakami [et al.] // Clin. Cancer. Res. - 2005. - Vol.11, № 6. - P. 2188-2194.

44. Aromatase inhibitors in ovarian stimulation for IVF/ICSI: a pilot study / W.M. Verpoest, E. Koübianakis, E. Papanikolaou [et al.] // Reprod. Biomed. Online. -2006.-Vol. 13,N. 2.-P. 166-172.

45. Aromatase in human bone tissue / H. Sasano, M. Uzuki, T. Sawai [et al.] // J. Bone Miner. Res.-1997.-Vol. 12, N9.-P. 1416-1423.

46. Aromatization by skeletal muscle / H. Matsumine, K. Hirato, T. Yanaihara [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1986. - Vol. 63, N 3. - P. 717-720.

47. Aromatization of androgens by muscle and adipose tissue in vivo / C. Longcope, J.H. Pratt, S.H. Schneider [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1978. -Vol. 46.-P. 146-152.

48. Aromatization of androstenedione by human adipose tissue stromal cells in monolayer culture / G.E. Ackerman, M.E. Smith, C.R. Mendelson [et al.] // J. Clin. Endocnnol. Metab. - 1981. - Vol.53. - P. 412-417.

49. Behringer, R.R. Müllerian-inhibiting substance function during mammalian sexual development / R.R. Behringer, M.J. Finegold, R.L. Cate // Cell. - 1994. - Vol. 79, N3.-P. 415-425.

50. Biochemical and molecular genetic analyses on placental aromatase (P450arom) deficiency / N. Harada, H. Ogawa, M. Shozu [et al.] // J. Biol. Chem. -

1992. - Vol. 267, N 4. - P. 4781-4785.

51. Biological activity of anastrozole in postmenopausal patients with advanced breast cancer: effects on estrogens and bone metabolism / E. Bajetta, A. Martinetti, N. Zilembo [et al.] // Ann. Oncol. - 2002. - Vol. 13. - P. 1059-1066.

52. Biological significance of aromatase activity in human breast tumors / N. Tilson-Mallett, S.J. Santner, P.D. Feil [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1983. -Vol. 57.-P. 1125-1128.

53. Bulun, S.E. Aromatase cytochrome P450 gene expression in human malignant endometrial tumors / S.E. Bulun, K. Economos, D. Miller // J. Glin. Endocrinol. Metab. - 1994. - Vol. 79, № 6. - P. 1831-1834.

54. Bulun, S.E. Competitive reverse transcription-polymerase chain reaction analysis indicates that levels of aromatase cytochrome P450 transcripts in adipose tissue of buttocks, thighs, and abdomen of women increase with advancing age / S.E. Bulun, E.R. Simpson // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1994. - Vol. 78. - P. 428^32.

55. Burger, H.G. Androgen production in women / H.G. Burger // Fertil. Steril. - 2002. - Vol. 77, suppl. 4. - P. 3-5.

56. Bustin, S.A. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT-PCR): trends and problems / S.A. Bustin // Mol. Endocrinol. - 2002. - Vol. 29.-P. 23-39.

57. Casper, R.F. Aromatase Inhibitors for Ovulation Induction / R.F. Casper, M.F. Mitwally // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2006. - Vol. 91, N. 3. - P. 760-771.

58. Conley, A. Mammalian aromatases / A. Conley, M. Hinshelwood // Reproduction. - 2001. - Vol. 121, N 5. - P. 685-695.

59. Conversion of androstendione in blood lymphocytes of breast carcinoma patients / L.M. Berstein, A.L. Larionov, O.G. Krjukova [et al.] // J. Endocrinolog. -

1993. - Vol. 139. - P.17. - (184th Meeting of the Society for Endocrinology, London)

60. Conversion of testosterone to estrogens in castrated, adrenalectomized human females / C.D.West, B.L. Damast, S.D. Sarro [et al.] // J. Biol. Chem. - 1956. -Vol. 218.-P. 409.

61. Conversion of testosterone to estrogens in human / J.A. Braun-Cantilo, G. La Roche, M. Novitsky [et al.] // Acta Isot. - 1962. - Vol. 1. - P. 351-376.

62. Coons, A.H. Immunological properties of an antibody containing a fluorescence group / A.H. Coons, H.J. Creech, R.N. Jones // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1941. - Vol. 47. - P. 200-202.

63. Correlation between protein and mRNA abundance in yeast / S.P. Gygi, Y. Rochon, B.R. Franza [et al.] // Mol. Cell. Biology. - 1999. - Vol. 19. - P. 1720-1730.

64. Detection of aromatase cytochrome P-450 in endometrial biopsy specimens as a diagnostic test for endometriosis / J. Kitawaki, I. Kusuki, H. Koshiba [et al.] // Fertil. Steril. - 1999. - Vol. 72, N 6. - P. 1100-1106.

65. Double-blind, randomised, multicentre endocrine trial comparing two letrozole doses, in postmenopausal breast cancer patients / E. Bajetta, N. Zilembo, M. Dowsett [et al.] // Eur. J. Cancer. - 1999. - Vol. 35. - P. 208-213.

66. Effects of Aging and Obesity on Aromatase Activity of Human Adipose Cells / W. H. Cleland, C.R. Mendelson, E.R. Simpson // J. Clin. Endocrinol. Metab. -1985.-Vol. 60, N 11. - P. 174-177.

67. Effect of recombinant activin on androgen synthesis in cultured human thecal cells / S.G. Hillier, E.L. Yong, P.J. Illingworth [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1991. - Vol. 72, N.6. - P. 1206-1211.

68. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia / R.K. Saiki, S. Scharf, F. Faloona [et al.] // Science. - 1985. - Vol. 230. - P. 1350-1354.

69. Erickson, G. Follicle growth and development / G. Erickson // Gynecol. Obstet. - 2001 - Vol. 5, N 12. - P. 2061-2071.

70. Estrogen-induced hypothalamic synaptic plasticity and pituitary sensitization in the control of the estrogen-induced gonadotrophin surge / F. Naftolin,

L.M. Garcia-Segura, T.L. Horvath [et al.] // Reprod. Sei. - 2007. - Vol. 14. - P. 101— 116.

71. Female pseudohermaphroditism associated with a novel homozygous G-to-A (V370-to-M) substitution in the P-450 aromatase gene / M. Ludwig, A. Beck, L. Wickert [et al.] // J. Pediatr. Endocrinol. Metab. - 1998. - Vol. 11. - P. 657-664.

72. Female pseudohermaphortidism resulting from aromatase (P450arom) deficiency associated with a novel mutation (R457X) in the CYP19 gene / S. Portrait-Doyen, M.G. Forest, M. Nicolino [et al.] // Horm. Res. - 1996. - Vol. 46. - P. 14-20.

73. Follistatin and activin: a potential intrinsic regulatory system within diverse tissues / L.V. De Paolo, T.A. Ricsak, G.F. Erickson [et al.] // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1991.-Vol. 198.-P. 500-512.

74. Fraser, H.M. Manipulation of inhibin during the luteal-follicular phase transition of the primate menstrual cycle fails to affect FSH secretion / H.M Fraser, C.G. Tsonis // J. Endocrinol. - 1994. - Vol. 142, N 1. - P. 181-186.

75. Genetic and Clinical Spectrum of Aromatase Deficiency in Infancy, Childhood and Adolescence / A. Belgorosky, G. Guercio, C. Pepe [et al.] // Horm. Res. - 2009. - Vol. 72. - P. 321-330.

76. Genetic studies to characterize the origin of the mutation in placental aromatase deficiency / N. Harada, H. Ogawa, M. Shozu [et al.] // Am. J. Hum. Genet. -1992. - Vol. 51. - P. 666-672.

77. Gonadotropin-releasing hormone regulates follicle-stimulating hormonebeta gene expression through an activin/follistatin autocrine or paracrine loop / L.M. Besecke, M.J. Guendner, A.L. Schneyer [et al.] // J. Endocrinol. - 1996. - Vol. 137, N 9.-P. 3667-3673.

78. Grumbach, M.M. Disorders of sex differentiation / M.M. Grumbach, F.A.

ili

Conte. - 8 edn. - Philadelphia: Williams Textbook of Endocrinology, 1992.

79. History of aromatase: saga of an important biological mediator and therapeutic target / R.J. Santen, H. Brodie, E.R. Simpson [et al.] // Endocr. Rev. - 2009. -Vol. 30, N4.-P. 343-375.

80. Holzer, H. A new era in ovulation induction / H. Holzer, R. Casper, T. Tulandi // Fértil. Steril. - 2006. - Vol. 85, N 2. - P. 277-284.

81. Houten, E.L. Anti-Müllerian hormone (AMH): regulator and marker of ovarian function / E.L. Houten, A.P. Themmen, J.A. Visser // Ann. endocrinol. - 2010. - Vol. 71, №3.- P. 191-197.

82. Hypothalamic-pituitary-ovarian axis during infancy, early and late prepuberty in an aromatase-deficient girl who is a compound heterocygote for two new point mutations of the CYP19 gene / A. Belgorosky, C. Pepe, R. Marino [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab.-2003.-Vol. 88.-P. 5127-5131.

83. Identification and developmental changes of aromatase and estrogen receptor expression in prepubertal and pubertal human adrenal tissues / M.S. Baquedano, N. Saraco, E. Berensztein [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2007. -Vol. 92.-P. 2215-2222.

84. Immunoaffinity purification of aromatase cytochrome P-450 from human placental microsomes, metabolic switching from aromatization to 1 and 2 -monohydroxylation, and recognition of aromatase isozymes / Y. Osawa, N. Yoshida, M. Fronckowiak [et al.] // Steroids. - 1987. - Vol. 50. - P. 11-28.

85. Impact of Estrogen Replacement Therapy in a Male with Congenital Aromatase Deficiency Caused by a Novel Mutation in the CYP19 Gene / L.H. Burkhard, B. Sailer, O. E. Janssen [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2002. - Vol. 87, N 12. - P. 5476-5484.

86. Kellis, J.T. Purification and characterization of human placental aromatase cytochrome P-450 / J.T. Kellis, L.E. Vickeiy // J. Biol. Chem. - 1987. - Vol. 262. - P. 4413-4420.

87. Kettel, L.M. Basic and clinical concepts in ovulation induction / L.M. Kettel, G.F. Erickson // Advances in Obstetrics and Gynecology / eds. J. Rock [et al.]. -St. Louis, 1994, N 1. - P. 211 -229.

88. Koeberle, D. Letrozole as upfront endocrine therapy for postmenopausal women with hormone-sensitive breast cancer: BIG 1-98 / D. Koeberle, B. Thuerlimann // Breast Cancer. Res. Treat. - 2007. - Vol. 105. - P. 55-66.

89. Kuhler, G. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity / G. Kuhler, C. Milstein // Nature. - 1975. - Vol. 256. - P. 495497.

90. Letrozole vs. clomiphene citrate in patients with ovulatory infertility / U. Bayar, H.A. Tanriverdi, A. Barut [et al.] // Fertil. Steril. - 2006. - Vol. 85, N 4. - P. 1045-1048.

91. Longcope, C. Adrenal and gonadal androgen secretion in normal females / C. Longcope // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1986. - Vol. 15, N. 2. - P. 213-228.

92. Longcope, C. Conversion of blood androgens to estrogens in normal adult men and women / C. Longcope, T. Kato, R. Horton // J. Clin. Investigat. - 1969. - Vol. 48.-P. 2191-2201.

93. Longcope, C. Methods and results of aromatization studies in vivo / C. Longcope // J. Cancer Res. - 1982. - Vol. 42. - P. 3307-3311.

94. MacDonald, P.C. Plasma precursors of estrogen. I. Extent of conversion of plasma A4-androstenedione to estrone in normal males and nonpregnant normal, castrate and adrenalectomized females / P.C. MacDonald, R.P. Rombaut, P.K. Siiteri, // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1967. - Vol. 27. - P. 1103-1 111.

95. Magoffin, D.A. Inhibin A, inhibin B and activin A in the follicular fluid of regularly cycling women / D.A. Magoffin, A.J. Jakimiuk // Hum. Reprod. - 1997. -Vol. 12.-P. 1714-1719.

96. Maia, H. Correlation between aromatase expression in the eutopic endometrium of symptomatic patients and the presence of endometriosis / H. Maia, C. Haddad, J. Casoy // Int. J. Women's Health. - 2012. - Vol. 4. - P. 61-65.

97. Medical adrenalectomy with aminoglutethimide. Clinical studies in postmenopausal patients with metastatic breast carcinoma / S.A. Wells, R.J. Santen, A. Lipton [et al.] // Ann. Surg. - 1978. - Vol. 187. - P. 475^184.

98. Mendelson, C.R. Mechanisms in the regulation of aromatase in developing ovaiy and placenta / C.R. Mendelson, A. Kamat // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. -2007. - Vol. 106. - P. 62-70.

99. Miller, W.L. Minireview: regulation of steroidogenesis by electron transfer / W. L. Miller // Endocrinology. - 2005. - Vol. 146, N 6. - P. 2544-2550.

100. Mitwally, M.F. Aromatase inhibition reduces gonadotrophin dose required for controlled ovarian stimulation in women with unexplained infertility / M.F. Mitwally, R.F. Casper // Hum. Reprod. - 2003. - Vol. 188. - P. 1588-1597.

101. Mitwally, M.F. Aromatase inhibition reduces the dose of gonadotropin required for controlled ovarian hyperstimulation / M.F. Mitwally, R.F. Casper // J. Soc. Gynecol. Investig. -2004. - Vol. 11,N 6. - P. 406-415.

102. Mitwally, M.F. Use of an aromatase inhibitor for induction of ovulation in patients with an inadequate response to clomiphene citrate / M.F. Mitwally, R.F. Casper // Fertil. Steril. - 2001. - Vol. 75, N 2. - P. 305-309.

103. Molecular basis of aromatase deficiency in an adult female with sexual infantilism and polycystic ovaries / Y. Ito, C.R. Fisher, F.A. Conte [et al.] // PNAS USA. - 1993. - Vol. 90. - P.l 1673-11677.

104. Moreau, F. Aromatase expression in the normal human adult adrenal and in adrenocortical tumors: biochemical, immunohistochemical, and molecular studies / F. Moreau, H. Mittre // Eur. J. Endocrinol. - 2009. - Vol. 160. - P. 93-99.

105. Multiple splicing events involved in regulation of human aromatase expression by a novel promoter, 1.6 / M. Shozu, Y. Zhao, S.E. Bulun [et al.] // Endocrinology.- 1998.-Vol. 139.-P. 1610-1617

106. Muto, N. Purification of oestrogen synthetase by high-performance liquid chromatography. Two membrane-bound enzymes from the human placenta / N. Muto, L. Tan // J. Chromatogr. - 1985. - Vol. 326. - P. 137-146.

107. Nabholtz, J.M. Cardiovascular safety profiles of aromatase inhibitors : a comparative review / J.M. Nabholtz, J. Gligorov // Drug Saf. - 2006. - Vol. 29, N 9. -P. 785-801.

108. Oestrogen dynamics in adrenal venous effluents in congenital virilizing adrenal hyperplasia / B.L. Wajchenberg, J. Goldman, T.S. Kyan [et al.] // Clin. Endocrinol. - 1980. - Vol. 13. - P. 401-404.

109. Other medical management of uterine fibroids / T. Eldar-Geva, D.L. Healy // Bailliere's clinical obstetrics and gynaecology. - 1998. - Vol. 12, N. 2. - P. 269-285.

110. Ovarian influence on adrenal androgen secretion in polycystic ovary syndrome / F. Fruzzetti, D. De Lorenzo, C. Ricci [et al.] // Fert. Ster. - 1995. - Vol. 63, N.4-P. 734-741.

111. Overexpression of aromatase P450 in leiomyoma tissue is driven primarily through promoter 14 of the aromatase P450 gene (CYP19) / M. Shozu, H. Sumitani, T. Segawa [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2002. - Vol. 87. - P. 2540-2548.

112. Pangas, S.A. Activin signal transduction pathways / S.A. Pangas, T.K. Woodruff// Trends Endocrinol. Methab. - 2000. - Vol. 11. - P. 309-314.

113. Pasanen, M. Solubilization and partial purification of human placental cytochromes P-450 / M. Pasanen, O. Pelkonen // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1981.-Vol. 103.-P. 1310-1317.

114. Payne, A.H. Overview of steroidogenic enzymes in the pathway from cholesterol to active steroid hormones/ A.H. Payne, D.B. Hales // Endocr. Rev. — 2004. -Vol. 25, N6.-P. 947-970.

115. Piek, E. Specificity diversity, and regulation in TGF-beta superfamily signaling / E. Piek, C.H. Heldin, D.P. Ten // FASEB J. - 1999. - Vol. 13. - P. 21052124.

116. Phase I study of the oral nonsteroidal aromatase inhibitor CGS 20267 in healthy postmenopausal women / T.J. Iveson, I.E. Smith, J. Ahern [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1993. - Vol. 77, N 2. - P. 324-331.

117. Pituitary FSH is released by a heterodimer of the beta-subunits from the two forms of inhibin/N. Ling, S.Y. Ying, N. Ueno [et al.] //Nature. - 1986. - Vol. 321. -P. 779-782.

118. Plasma precursors of estrogen II. Correlation of the extent of conversion of plasma androstenedione to estrone with age / D.L. Hemsell, J.M. Grodin, P.F. Brenner [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1974. - Vol. 38. - P. 476-479.

119. Preclinical studies using the intratumoral aromatase model for postmenopausal breast cancer / A. Brodie, Q. Lu, Y. Liu [et al.] // Oncology. - 1998. -Vol. 12.-P. 36-40.

120. Preparation and characterization of polyclonal and monoclonal antibodies against human aromatase cytochrome P-450 (P-450AROM), and their use in its purification / C.R. Mendelson, E.E. Wright, C.T. Evans [et al.] // Arch. Biochem. Biophys. - 1985. - Vol. 243. - P. 480-491.

121. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase / R.K. Saiki, D.H. Gelfand, S. Stoffel [et al.] // Science. - 1988. -Vol. 239, N2.-P. 487.

122. Purification and characterization of aromatase from human placenta / P.F. Hall, S. Chen, S. Nakajin [et al.] // Steroids. - 1987. - Vol. 50. - P. 37-50.

123. Regulation of 3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase delta 5/delta 4-isomerase and cholesterol side-chain cleavage cytochrome P450 by activin in rat granulosa cells / F. Miro, C.D. Smyth, P.F. Whitelaw [et al.] // J. Endocrinol. - 1995. -Vol. 136, N 8. - P. 3247-3252.

124. Role of aromatase inhibitor in ovulation induction in patients with poor response to clomiphene citrate / M.R. Begum, E. Quadir, A. Begum [et al.] // J. Obstet. Gynaecol. Res. - 2006. - Vol. 32, N 5. - P. 502-526.

125. Ryan, K.J. Biological aromatization of steroids / K.J. Ryan // J. Biol. Chem. - 1959. - Vol. 234. - P. 268-272.

126. Sasano, H. Intratumoral aromatase in human breast endometrial and ovarian malignancies / H. Sasano, N. Harada // Endocr. Rev. - 1998. - Vol. 19. - P. 593-607.

127. Sebastian, S. A highly complex organization of the regulatory region of the human CYP19 (aromatase) gene revealed by the human genome project / S. Sebastian, S.E. Bulun // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2001. - Vol. 86, N 10. - P. 4600^1602.

128. Serum anti-Müllerian hormone is more strongly related to ovarian follicular status than serum inhibin B, estradiol, FSH and LH on day 3 / R. Fanchin, L.M. Schönauer, C. Righini [et al.] // Hum. Reprod. - 2003. - Vol. 18, N 2. - P. 323-327.

129. Simpson, E.R. Aromatase: biologic relevance of tissue-specific expression / E.R. Sympson // Semin. Reprod. Med. - 2004. - Vol. 22. - P. 11-23.

130. Speroff, L. Clinical Gynecologic Endocrinology and Infertility / Speroff L., Glass R.H., Kase N.G. - 5th edn. - London: Lippincott Williams & Wilkins, 1994. - 188 " P-

131. Steinach, E. Transformation of male sex hormones into a substance with the action of a female hormone / E. Steinach, H. Kun // Lancet. - 1937. - Vol. 133. - P. 845.

132. Stocco, C. Tissue physiology and pathology of aromatase / C. Stocco // Steroids. - 2012. - Vol. 77, N 1-2. - P. 27-35.

133. Takahashi, Y. The regulation system of brain aromatase activity; distribution and changes with age of the aromatase activity of the rat brain / Y. Takahashi, H. Yamanaka, S. Honma // Nihon Naibunpi Gakkai Zasshi. - 1987 - Vol. 63,N7.-P. 862-869.

134. te Velde, E.R. The variability of female reproductive ageing / E.R. te Velde, P.L. Pearson // Hum. Reprod. Update. - 2002. - Vol. 8, N 2. - P. 141-154.

135. The conversion of testosterone-3-C14 to C14-estradiol-17p by human ovarian tissue / B. Baggett, R.I. Dorfman, L.L. Engel [et al.] // J. Biol. Chem. - 1956. -Vol. 221.-P. 931-941.

136. The cytochrome P450 aromatase lacking exon 5 is associated with a phenotype of non-classic aromatase deficiency, and it is also present in normal human steroidogenic tissues / C.M. Pepe, N.I. Saraco, M.S. Baquedano [et al.] // Clin. Endocrinol. - 2007. - Vol. 67. - P. 698-705.

137. The effect of combining aromatase inhibitors with antiestrogens on tumor growth in a nude mouse model for breast cancer / Q. Lu, Y. Liu, B.J. Long [et al.] // Breast. Cancer. Res. Treat. - 1999. - Vol. 57. - P. 183-192.

138. The human CYP19 (aromatase P450) gene: update on physiologic roles and genomic organization of promoters / S.E. Bulun, S. Sebastian, K.Takayama [et al.] // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. - 2003. - Vol. 86, N 3-5. - P. 219-224.

139. The intermediate steps in the biosynthesis of estrogens from androgens / T. Morat, M. Hayano, R.I. Dorfman [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1961. -Vol. 6.-P. 334-338.

140. The unlabeled antibody enzyme method of immunohistochemistry: preparation and properties of soluble antigen-antibody complex (horseradish peroxidase-antihorseradish peroxidase) and its use in identification of spirochetes / L.A. Sternberger, P.H. Hardy, J.J. Cuculis [et al.] // J. Histochem. Cytochem. - 1970. - Vol.

«

18.-P.315-333.

141. Thompson, E.A. Utilization of oxygen and reduced nicotinamide adenine dinucltide phosphate by human placental microsomes during aromatization of androstenedione / E.A. Thompson, P.K. Siiteri // J. Biol. Chem. -1974. -Vol. 249. - P. 5364-5372.

142. Toda, K. Transcriptional regulation of the human aromatase cytochrome P450 gene expression in human placental cells / K. Toda, L.X. Yang, S.J. Shizuta // Steroid. Biochem. Mol. Biol. - 1995. - Vol. 53. P. 181-190.

143. VanGuilder, H.D. Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis / H.D. VanGuilder, K.E. Vrana, W.M. Freeman // BioTechniques. -2008. - Vol. 44, N 5. - P. 619-626.

144. Variable phenotypes associated with aromatase (CYP19) insufficiency in humans / L. Lin, O. Ercan, J. Raza [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2007. - Vol. 92.-P. 982-990.

145. Vosberg, H.P. The polymerase chain reaction: an improved method for the analysis of nucleic acids / H.P. Vosberg // Hum. Genet. - 1989. - Vol. 83, N 1. - P. 115.

146. Wiseman, L.R. Formestane. A review of its pharmacological properties and clinical efficacy in the treatment of postmenopausal breast cancer / L.R. Wiseman, K.L. Goa // Drugs aging. - 1996. - Vol. 9, N 4 - P. 292-306.

147. Woodruff, T.K. Inhibin, activin and the female reproductive axis / T.K Woodruff, J.P. Mather // Ann. Rev. Physiol. - 1995. - Vol. 57. - P. 219-244.

148. Zondek, B. Oestrogenic hormone in the urine of the stallion / B. Zondek // Nature. - 1934.-Vol. 133, N3361.-P. 494.

149. Zouboulis, C.C. The human skin as a hormone target and an endocrine gland / C.C. Zouboulis // Hormones. - 2004. - Vol. 3, N 1. - P. 9-26.