Клинико-генетическое исследование ряда кандидатных генов-маркеров костного ремоделирования при остеопорозе. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.39, кандидат медицинских наук Маслова, Карина Александровна

• Маслова, Карина Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Маслова, Карина Александровна

1. Список сокращений.

2. Введение.

3. Цель исследования.

4. Задачи исследования.

5. Научная новизна.

6. Практическая значимость.

7. Основные положения, выносимые на защиту.

8. Объем и структура диссертации.

9. Публикации по теме диссертации и сведения о внедрении в практику.

10. Апробация работы.

Глава 1. Литературный обзор.

Глава 2. Материалы и методы.

1. Общая характеристика больных.

2. Клинические методы исследования.

3. Лабораторные методы исследования.

4. Метод костной денситометрии.

5. Рентгенологический метод.

6. Молекулярно-генетический метод.

7. Методы статистической обработки.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

1. Изучение клинических и денситометрических показателей у больных ОП и в контроле.

2. Изучение полиморфных вариантов кандидатных генов ERa, ERp, LRP5, ВМР4 и OPG у больных ОП и в контроле.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-генетическое исследование ряда кандидатных генов-маркеров костного ремоделирования при остеопорозе.»

Остеопороз (ОП) - системное метаболическое заболевание скелета, характерными проявлениями которого являются снижение массы костной ткани и нарушение ее микроархитектоники, что обусловливает снижение прочности кости и повышенный риск переломов. Заболевание развивается постепенно и клинически нередко выявляется уже после перелома, что послужило основанием назвать его «скрытой эпидемией». Распространенность заболевания в популяции нарастает с увеличением возраста, женщины страдают ОП чаще мужчин. Распространенность сниженной минеральной плотности костной ткани (МПКТ) среди лиц старше 50 лет достигает 30% среди женщин и 20% среди мужчин [2]. Тяжесть заболевания обуславливается его исходами - переломами костей. Смертность при характерном для ОП переломе шейки бедра в течение первых 6 месяцев после перелома достигает 30%. Вероятность развития остеопоротического перелома любой локализации в пожилом возрасте очень высока. В европеоидных популяциях у 40% женщин и 13% мужчин в возрасте 50 лет и старше обнаруживается, по крайней мере, один клинически выраженный перелом [2]. Однако в условиях возрастающей продолжительности жизни ожидается значительное увеличение числа переломов. Лечение последствий переломов приводит к значительным экономическим потерям для общества.

Несмотря на большую социальную значимость болезни, патогенез ОП изучен недостаточно. В результате многочисленных исследований показателей МПКТ, остеопоротических переломов и их предикторов, проведенных на различных выборках, в разных популяциях и этнических группах, было показано, что формирование костной массы завершаетя к 20-30 годам, а на прочность костного скелета могут оказывать влияние как средовые (характер питания, физические нагрузки, курение, потребление алкоголя и др.), так и генетические факторы, к числу которых, в первую очередь, относятся половая и расовая принадлежность, а также системные гормоны и белки-регуляторы костного ремоделирования. Таким образом, ОП в настоящее время рассматривается в качестве мультифакториального заболевания, патогенез которого обусловлен взаимодействием генетических и средовых факторов [2]. В большом количестве семейных и близнецовых исследований, проведенных в последние десятилетия, было выявлено, что показатели размеров и структуры костей, включая рост, длину оси бедра, ширину запястья, структуру позвонков, а также МПКТ, являются высоконаследуемыми характеристиками [2,9-11]. Анализ вариабельности МПКТ показал, что среди взрослых индивидуумов она на 60-90% детерминируется генетическими факторами [2,12-15].

В последние годы большое число исследований было посвящено поиску генов предрасположенности к ОП. Наиболее часто в таких исследованиях используется метод изучения кандидатных генов, которые отбираются исходя из особенностей патогенеза заболевания. Следует напомнить о феномене генетического полиморфизма, представляющего собой наличие в геноме полиморфных вариантов генов (аллелей), не влияющих на жизнеспособность и репродуктивные свойства организма, но способных влиять на функциональную активность генов. Таким образом, изучение генетической предрасположенности к ОП представляет собой поиск полиморфизмов в кандидатных генах и установление достоверности ассоциации найденных полиморфизмов с заболеванием. В настоящее время предложено и активно изучается более 30 генов-кандидатов предрасположенности к ОП. Для изучения в нашем исследовании были отобраны гены эстрогеновых рецепторов аир (ERa, ER|3), которые реализуют эффект эстрогенов в костной ткани, а также гены белков-участников процесса костного ремоделирования: гены костного морфогенного белка 4 (ВМР4), белка 5, родственного семейству белков рецептора липопротеинов низкой плотности (LRP5), остеопротегерина (OPG).

Известно, что эстрогены играют исключительно важную роль в костном обмене и поддержании костной массы. В связи с этим одним из наиболее изученных генов предрасположенности к ОП является ген эстрогенового рецептора a (ER а). Исследования взаимосвязи этого гена с ОП проводятся на протяжении более 10 лет и охватывают азиатские и европеоидные популяции. Были показаны ассоциации определенных аллелей этого гена с МПКТ, маркерами костного ремоделирования и переломами [58-59,71-82,88,89]. Относительно недавно описанный эстрогеновый рецептор |3 (ER Р) также привлек внимание исследователей. Работы по изучению гена ER р немногочисленны, однако и в них показано наличие ассоциаций определенных полиморфизмов с ОП [97-102].

Ген LRP5 кодирует синтез белка 5, родственного семейству белков рецептора липопротеинов низкой плотности, участвующего в реализации сигнальной функции Wnt-пути в различных клетках. Примечательно, что разные мутации в этом гене приводят к противоположным фенотипам - остеопетроз и псевдоглиомный остеопороз [105-109]. Также было показано влияние этого гена на нормальные вариации МПКТ [115], и обнаружены ассоциации с МПКТ и переломами у больных ОП [116-120],

Белок ВМР4 относится к семейству костных морфогенных белков, * являющихся факторами роста и участвующими в процессах хряще- и костеобразования. Белок кодируется геном ВМР4, который является геном-мишенью Wnt-сигнального пути. Мутации в гене приводят к развитию прогрессирующей оссифицирующей дисплазии. В ограниченном числе исследований были обнаружены ассоциации с МПКТ [122-124].

Благодаря открытию белков RANK, RANKL и OPG, являющихся членами семейства лигандов и рецепторов фактора некроза опухоли а (ФНОа), был достигнут значительный прогресс в понимании механизмов ремоделирования костной ткани. Система RANK-RANKL-OPG рассматривается в настоящее время как один из ключевых механизмов регуляции формирования, дифференцировки и активности остеокластов и является посредником действия на костную ткань других медиаторов ремоделирования. Изучение генов белков этой системы также представляет интерес в отношении предрасположенности к ОП. В частности, мутация в гене OPG приводит к развитию ювенильной болезни Педжета [46]. Кроме того, для гена OPG показаны ассоциации с МПКТ и остеопоротическими переломами [125-136].

Анализ литературных данных показывает, что в настоящее время при изучении различных выборок больных ОП выявлены достоверные ассоциации с кандидатными генами, участвующими в процессах костного метаболизма. Однако исследования различаются по дизайну, проводились на различных популяциях, возможно поэтому полученные результаты неоднозначны и зачастую противоположны, что диктует необходимость дальнейших исследований. В связи • с этим представляло несомненный интерес изучить перечисленные кандидатные гены среди постменопаузальных женщин, проживающих в г. Москве, для определения вклада генетических факторов в формирование; предрасположенности к ОП.

ЦЕЛЬ

Изучить участие генов эстрогеновых рецепторов а и (5 (ERa, ER(3), костного морфогенного белка 4 (ВМР4), белка 5, родственного семейству белков рецептора липопротеинов низкой плотности (LRP5), остеопротегерина (OPG) в формировании генетической предрасположенности к ОП в московской выборке постменопаузальных женщин.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить корреляции клинических факторов с показателями МПКТ поясничного отдела позвоночника и проксимального отдела бедра у больных первичным ОП и в контрольной группе здоровых индивидуумов в, московской выборке постменопаузальных женщин.

2. Изучить распределение кандидатных генов-маркеров костного ремоделирования: генов эстрогеновых рецепторов а и (3 {ERa, ERfS), костного морфогенного белка 4 (ВМР4), белка 5, родственного семейству белков рецептора липопротеинов низкой плотности (LRP5), остеопротегерина (OPG) у больных первичным ОП и в контрольной группе.

3. Изучить ассоциации показателей МПКТ поясничного отдела позвоночника и проксимального отдела бедра с аллельными полиморфизмами кандидатных генов.

4. Изучить ассоциации показателей относительного риска переломов у больных ОП с аллельными полиморфизмами кандидатных генов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые на выборке постменопаузальных женщин, проживающих в г. Москве, был изучен вклад полиморфизмов генов ERa, ER|3, ВМР4, LRP5, OPG в формирование предрасположенности к ОП.

Выбранные для изучения генетические маркеры обнаружили ассоциации с ростом (Xbal полиморфизм гена ERa и ген LRP5), возрастом наступления менархе (сочетанный генотип Xbal/PvuII гена ERa), биохимическим показателями (PvuII полиморфизм гена ERa с уровнем фосфора, ген ERf3 с уровнем RANKL), что подтверждает значимую роль выбранных генов в процессах костеобразования и роста кости.

Впервые в России были изучены особенности частотного распределения генов ERa, ER|3, ВМР4, LRP5, OPG в популяции постменопаузальных женщин. Выявлены генотипы риска развития ОП; РР (PvuII полиморфизм гена ERa), РР/СТ (сочетанный генотип ERa (PvuII)/BMP4) и СТ/АА (сочетанный генотип LRP5/OPG), показатели относительного риска для указанных генотипов составили — 2,12, 2,3 и 13,1 соответственно. Таким образом, вероятность развития ОП у носителей генотипов РР и РР/СТ может увеличиваться в 2 раза, а у носителей генотипа СТ/АА - в 13 раз.

Обнаружены ассоциации генетических маркеров с МПКТ и переломами. Показано повышение МПКТ у носителей генотипов СС (ген LRP5), Рр/СТ (ERa (PvuII)/BMP4), СС/АА (LRP5/OPG), и понижение МПКТ у носителей генотипов ТТ (ген LRP5), РР/СС (ERa (PvuII)/BMP4), ТТ/АА (LRP5/OPG). Показана корреляция гена OPG с переломами поясничных позвонков (г=0,29, р=0,0036), носительство генотипа AG является фактором риска развития переломов указанной локализации (011=3,1).

В проведенном исследовании подтверждено, что формирование предрасположенности к ОП является результатом комплексного взаимодействия средовых и генетических факторов, при этом носительство определенных генотипов увеличивает риск развития заболевания.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Проведенное клинико-генетическое исследование дополнило представление о клинических и патогенетических механизмах развития ОП. Полученные данные позволили выделить генетические факторы риска, носительство которых может увеличить риск развития заболевания в 2-13 раз, а именно: генотипы РР (PvuII полиморфизм гена ERa), РР/СТ (сочетанный генотип ERa (PvuII)/BMP4) и СТ/АА (сочетанный генотип LRP5/OPG). Кроме того, были выявлены генотипы, ассоциированные с низкой МПКТ: генотип ТТ (ген LRP5), РР/СС (сочетанный генотип генов ERa (PvuII)/BMP4), ТТ/АА (сочетанный генотип генов LRP5/OPG), а также с остеопоротическими переломами: генотип AG гена OPG ассоциирован с переломами поясничных позвонков. Выявленные факторы риска могут использоваться для определения круга лиц с высокой генетической предрасположенностью к заболеванию ОП.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Наследственными факторами риска ОП являются генотипы РР (PvuII гена ERa), РР/СТ (сочетанный генотип ERa (PvuII)/BMP4) и СТ/АА (сочетанный генотип LRP5/OPG).

2. Генотипы Рр (PvuII гена ERa), ххРр (сочетанный генотип полиморфизмов Xbal и PvuII гена ERa), Рр/СТ (сочетанный генотип ERa (PvuII)/BMP4), хх/СС (сочетанный генотип ERa (Xbal)/LRP5), СС/АА (сочетанный генотип LRP5/OPG) можно рассматривать в качестве протективных.

3. Носительство генотипов СС (ген LRP5), Рр/СТ (ERa (PvuII)/BMP4), СС/АА (LRP5/OPG) ассоциировано с более высокими значениями МПКТ, а генотипов ТТ(ген LRP5), РР/СС (ERa (PvuII)/BMP4), ТТ/АА (LRP5/OPG) - с более низкими по сравнению с носителями других генотипов. 4. Носительство генотипа AG гена OPG может рассматриваться в качестве фактора риска развития переломов поясничных позвонков.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста, состоит из введения, глав «Литературный обзор», «Материалы и методы», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение полученных результатов», выводов, практических рекомендаций, списка литературы, приложения. Диссертация иллюстрирована 41 таблицей и 14 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Ревматология», Маслова, Карина Александровна

выводы

1. В результате изучения клинических и денситометрических параметров у 100 больных первичным остеопорозом и 100 здоровых постменопаузальных женщин показано снижение минеральной плотности костной ткани (МПКТ) с увеличением возраста, влияние возраста наступления менархе и менопаузы на показатели МПКТ; протективная роль массы тела и физических нагрузок на МПКТ, и отрицательная роль курения. Показано наличие взаимосвязи между наличием переломов костей и вариабельностью показателей МПКТ шейки бедра (г=-0,25, р=0,014). Установлено, что указание в анамнезе па наличие остеопоротических переломов у кого-либо из членов семьи повышает вероятность их возникновения у потомков.

2. Выявлена взаимосвязь концентрации OPG в сыворотке крови с возрастом (г=0,49 при р=0,000002), а также концентрации RANKL с содержанием кальция и фосфора в сыворотке крови (г=0,3, р=0,00069 и i=0,23, р=0,037 соответственно). Установлена корреляция между соотношением OPG/RANKL и вариабельностью показателей МПКТ области Варда по Z-критерию (г=0,25, р=0,03).

3. Анализ особенностей распределения полиморфизмов кандидатных генов выявил у больных ОП по сравнению с контролем более высокую частоту носительства генотипа РР гена ERa (OR=2,12), сочетанных генотипов РР/СТ (OR=2,3) и СТ/АА (OR=13,l) генов ERa/BMP4 и LRP5/OPG соответственно, что дает основание рассматривать их как генотипы риска развития ОП. Выявлено прогрессивное накопление генотипа RR Rsal полиморфизма гена ERp у больных ОП с увеличением возраста, что может свидетельствовать об опосредованном влиянии этого аллеля на продолжительность жизни.

4. Частота генотипов Рр (PvuII гена ERa), ххРр (сочетанный генотип полиморфизмов Xbal и PvuII гена ERa), Рр/СТ (сочетанный генотип ERa (PvuII)/BMP4), хх/СС (сочетанный генотип ERa(XbaI)/LRP5), СС/АА (сочетанный генотип LRP5/OPG) у больных ОП была снижеиа по сравнению с контрольной группой (OR - 0,48; 0,18; 0,5; 0,4; 0,4 соответственно), что позволяет рассматривать эти генотипы в качестве возможно протективных по отношению к ОП.

5. Установлены ассоциации полиморфизмов генов ERa, LRP5, OPG и ВМР4 с МПКТ. В выборке больных ОП более высокие значения МПКТ характерны для носителей генотипа СС по сравнению с обладателями генотипа СТ гена LRP5. В группе контроля более высокие показатели МПКТ выявлены у носителей сочетанного генотипа Рр/СТ и более низкие — у носителей генотипа РР/СС генов ERa/BMP4. В группе больных ОП такая зависимость не выявлена. Среди больных ОП в среднем более высокие значения МПКТ присущи носителям генотипа СС/АА комбинации генов LRP5/OPG, тогда как в группе контроля наблюдается инверсия этой закономерности. Подобного рода инверсии свидетельствуют о нарушении баланса между процессами костеобразования и костной резорбции у части постменопаузальных женщин, что может обуславливать возникновение ОП.

6. Обнаружена корреляция полиморфизма гена OPG с переломами поясничных позвонков (г=0,29, р=0,0036), при этом риск перелома указанной локализации был выше для носителей генотипа AG по сравнению с другими генотипами (OR=3,l).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные при клинико-генетическом исследовании данные рекомендуется использовать для оценки генетических факторов риска ОП среди постменопаузальных женщин, что позволит выделить лиц с высокой генетической предрасположенностью к ОП с дальнейшей своевременной организацией системы лечебно-профилактических мер у данной категории женщин.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Маслова, Карина Александровна, 2008 год

1. Беневоленская Л.И. Остеопороз актуальная проблема медицины. Остеопороз и остеопатии, 1998, 1, 4-7.

2. Руководство по остеопорозу под ред. д.м.н. Беневоленской Л.И. Москва, Бином, Лаборатория знаний, 2003.

3. Kanis J.A., Johnell О., Oden A. et al. Long-term risk of osteoporotic fracture in Malmo. Osteoporos. Int., 2000, 11, 669-674.

4. National Osteoporosis Foundation, USA, 2004.

5. Csermely Т., Halvax L., Schmidt E. et al. Occurrence of osteopenia among adolescent girls with oligo/amenorrhea. Gynecol. Endocrinol., 2002, 16(2):99-105.

6. Ho A.Y., Kung A.W. Determinants of peak bone mineral density and bone area in young women. J. Bone Miner. Metab., 2005, 23(6):470-475.

7. Galuska D.A., Sowers M.R. Menstrual history and bone density in young women. J. Womens Health Gend. Based Med., 1999, 8(5): 647-656.

8. Мутовин Г.Р. Основы клинической генетики. Москва, «Высшая школа», 1997.

9. Clark P.J. The heritability of certain anthropometric as ascertained from measurement of twins. Am. J. Hum. Gente., 1956, 2, 123 (3192), 373-374.

10. Jian W.X., Long J.R., Deng H.W. High heritability of bone size at the hip and spine in Chinese. J. Hum. Genet., 2004, 49(2), 87-91.

11. Cohen Z, Kalichman L., Kobyliansky E. ct al. Cortical index and size of hand bones: segregation analysis and linkage with the llql2-13 segment. Med. Sci. Moint., 2003, 9(3), MT13-20.

12. Peacock M., Turner C., Econs M. et al. Genetics of osteoporosis. Endocrine Reviews, 2002, 23(2), 303-326.

13. Jones G., Nguyen T.V. Associations between maternal peak bone mass and bone mass in prepubertal male and female children. J. Bone Miner. Res, 2000, 15(10), 1998-2004.

14. Nordstrom P, Lorentzon R. Influence of heredity and environment on bone density in adolescent boys: a parent-offspring study. Osteoporos. Int., 1999, 10(4), 271-277.

15. Jian W.X., Long J.R., Li M.X. et al. Genetic determination of variation and covariation of bone mineral density at the hip and spine in a Chinese population. J. Bone Miner. Metab. 2005, 23(2), 181-185.

16. Ferrari S, Rizzoli R, Slosman D. et al. Familial resemblance for bone mineral mass is expressed before puberty. J. Clin. Endocrinol. Metab, 1998, 83(2), 358-361.

17. Duncan E, Cardon L, Sinsheimer J. et al. Site and gender specificity of inheritance of bone mineral density. J. Bone Miner. Res, 2003, 18(8), 1531.

18. Mitchell B, Cole S, Bauer R. et al. Genes Influencing Variation in Serum Osteocalcin Concentrations Are Linked to Markers on Chromosomes 16qand 20q\ The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 85, 4, 13621366.

19. Yano K., Tsuda E., Washida N. Et al. Immunological characterization of circulating osteoprotegerin/osteoclastogenesis inhibitory factor: increased serum concentrations in postmenopausal women with osteoporosis. J. Bone Miner. Res., 1999; 14л518-527.

20. Mezquita-Raya P., De la Higuera M., Garcia D.F. et al. The contribution of serum osteoprotegerin to bone mass and vertebral fractures in postmenopausal women. Osteoporosis Int., 2005, Nov; 16 (11): 1368-1374.

21. Abrahamsen В., Hjelmborg J., Kostenuik P. et al. Circulating amounts of osteoprotegerin and RANK ligand: genetic influence and relationship with BMD assessed in female twins. Bone, 36 (2005), 727-735.

22. Snieder H., MacGregor A., Spector T. Genes control the cessation of a woman's reproductive life: a twin study of hysterectomy and age at menopause.

23. J. Clin. Endocrinol. Metab., 1998, 83(6), 1875-1880.

24. Kelly P.J., Eisman J.A. Osteoporosis: genetic effects on bone turnover and bone density. Ann. Med., 1993, 25(2), 99-101.

25. Riggs В., Melton L. Involutional osteoporosis. N. Engl. J. Med., 1986,314, 1676-1686.

26. Wark J.D. Osteoporosis: pathogenesis, diagnosis, prevention and management. Bailliere's Clinical Endocrinology and Metabolism, 1993, 7, 151181.

27. Hui S.L., Wiske P.S., Norton J.A. et al. A prospective study of change in bone mass with age in postmenopausal women. Journal of Chronic Diseases, 1982, 35, 715-725.

28. Christiansen C., Christensen M.S., Jensen J. et al. Prevention of early post-menopausal bone mineral loss. Controlled 2-year study of 315 women. Ugeskr Laeger, 1980, 142(44), 2896-2901.

29. Lindsay R., Hart D.M., Aitken J.M. et al. Long-term prevention of postmenopausal osteoporosis by oestrogen. Evidence for an increased bone mass after delayed onset of oestrogen treatment. Lancet, 1976, 15, 1(7968), 10381041.

30. Rizzoli R. Atlas of postmenopausal osteoporosis. 2004.

31. Delmas P.D., Hardy P., Garnero P. et al. Monitoring individual response to hormone replacement therapy with bone markers. Bone, 2000, 26(6), 553-560.

32. Quigley M.E., Martin P.L., Burnier A.M. et al. Estrogen therapy arrests bone loss in elderly women. Am. J. Obstet. Gynecol., 1987, 156(6), 1516-1523.

33. Pettersson K., Delaunay F., Gustafsson J.A. Estrogen receptor beta acts as a dominant regulator of estrogen signaling. Oncogene, 2000, 19, 49704978.

34. Lindberg M.K., Moverare S., Skrtic S. et al. Estrogen receptor (ER)-beta reduces ERalpha-regulated gene transcription, supporting a "ying yang" relationship between ERalpha and ERbeta in mice. Mol. Endocrinol., 2003, 17, 203-208.

35. Korach K.S. Estrogen receptor knock-out mice; molecular and endocrine phenotypes. J. Soc. Gynecol. Investig., 2000, 7, SI6-17.

36. Vidal O., Lindberg M.K., Hollberg K. et al. Estrogen receptor specificity in the regulation of skeletal growth and maturation in male mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97, 5474-5479.

37. Windahl S.H., Vidal O., Andersson G. et al. Increased cortical bone mineral content but unchanged trabecular bone mineral density in female ERbeta(-/-) mice. J. Clin. Invest., 1999, 104, 895-901.

38. Lindberg M.K., Alatalo S.L., Halleen J.M. et al. Estrogen receptor specificity in the regulation of the skeleton in female mice. J. Endocrinol. 2001, 171,229-236.

39. Chagin A.S., Lindberg M.K., Andersson N. et al. Estrogen receptor-beta inhibits skeletal growth and has the capacity to mediate growth plate fusion in female mice. J. Bone Miner. Res., 2004, 19, 72-77.

40. Li L., Mao J., Sun L. Et al. Second cysteine-rich domain of Dickkopf-2 activates canonical Wnt signaling pathway via LRP-6 independently of dishevelled. J. Biol. Chem., 2002, 22, 277(8), 5977-5981.

41. Kawano Y., Kypta R. Secreted antagonists of the Wnt signalling pathway. J. Cell. Sci., 2003, 1, 116 (Pt 13), 2627-2634.

42. Liu F. Smad3 phosphorylation by cyclin-dependent kinases. Cytokine Growth Factor Rev., 2006, 17(1-2), 9-17.

43. Chen Y., Cheung Km M.C., Kung H. Et al. In vivo new bone formation by direct transfer of adenoviral-mcdiated bone morphogenetic protein-4 gene. Biochem. Biophys. Res. Commun., 298, 121-127, 2002.

44. Cheng H., Jiang W., Phillips F.M. et al. Osteogenic activity of the fourteen types of human bone morphogenetic proteins (BMPs). J. Bone Joint Surg, 85-A, 1544-1552, 2003.

45. Online Mendelian Inheritance in Men (OMIM) Интернет-ресурс National Institute of Health, USA.

46. Krishnan V, Bryant H.U, Macdougald O.A. Regulation of bone mass by Wnt signaling. J. Clin. Invest, 2006, 116(5), 1202-1209.

47. Schubert E.L., Lee M.K., Newman B. et al. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the estrogen receptor gene and breast cancer susceptibility. J. Steroid. Biochem. Mol. Biol., 1999, 71, 21-27.

48. Massart F., Reginster J.Y., Brandi M.L. Genetics of menopause associated diseases. Maturitas, 2001, 40, 103-116.

49. Brandi M.L., Becherini L., Gennari L. et al. Association of the estrogen receptor alpha gene polymorphisms with sporadic Alzheimer's disease. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1999, 265, 335-338.

50. Dunning A.M., Healey C.S., Pharoah P.D. et al. A systematic review of genetic polymorphisms and breast cancer risk. Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 1999, 8, 843-854.

51. Yoo K.Y., Kang D. Current researches on breast cancer epidemiology in Korea. Breast Cancer, 2003, 10, 289-293.

52. Tempfer C.B., Schneeberger C., Huber J.C. Applications of polymorphisms and pharrnacogenomics in obstetrics and gynecology. Pharmacogenomics, 2004, 5, 57-65.

53. Tanaka Y., Sasaki M., Kaneuchi M. et al. Polymorphisms of estrogen receptor alpha in prostate cancer. Mol. Carcinog., 2003, 37, 202-208.

54. Gennari L., Merlotti D., De Paola V. et al. Estrogen Receptor Gene Polymorphisms and the Genetics of Osteoporosis: A HuGE Review. Am. J. Epidemiol., 2005, 161, 307-320.

55. Kobayashi S., Inoue S., Hosoi T. et al. Association of bone mineral density with polymorphism of the estrogen receptor gene. J. Bone Miner. Res., 1996, 11,306-311.

56. Yamada Y., Ando F., Niino N. et al. Association of polymorphisms of the estrogen receptor alpha gene with bone mineral density of the femoral neck in elderly Japanese women. J. Mol. Med., 2002, 80, 452-460.

57. Mizunuma H., Hosoi Т., Okano H. et al. Estrogen receptor gene polymorphism and bone mineral density at the lumbar spine of pre- and postmenopausal women. Bone, 1997, 21, 1379-1383.

58. Ongphiphadhanakul В., Rajatanavin R., Chanprasertyothin S. et al. Estrogen receptor gene polymorphism is associated with bone mineral density in pre-menopausal women but not in post-menopausal women. J. Endocrinol. Invest., 1998, 21, 487—493.

59. Huang Q., Wang Q., Zhang L. et al. Relationship between bone mineral density and polymorphism of the estrogen receptor gene in healthy postmenopausal women in China. Chin. Med. J. (Engl), 1999, 112, 832-835.

60. Ushiroyama Т., Heishi M., Higashio S. et al. The association between postmenopausal vertebral bone mineral density and estrogen receptor gene alleles in ethnic Japanese living in western Japan. Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol., 2001, 109, 15-24.

61. Kobayashi N., Fujino Т., Shirogane T. et al. Estrogen receptor alpha polymorphism as a genetic marker for bone loss, vertebral fractures and susceptibility to estrogen. Maturitas, 2002, 41, 193-201.

62. Matsushita H., Kurabayashi Т., Tomita M. et al. Effects of vitamin D and estrogen receptor gene polymorphisms on the changes in lumbar bone mineral density with multiple pregnancies in Japanese women. Hum. Reprod., 2004, 19, 59-64.

63. Ho A.Y., Yeung S.S., Kung A.W. PvuII polymorphisms of the estrogen receptor-a and bone mineral density in healthy southern Chinese women. Calcif. Tissue Int., 2000, 66, 405-408.

64. Zhang Y.Y., Long J.R., Liu P.Y. et al. Estrogen receptor alpha and vitamin D receptor gene polymorphisms and bone mineral density: association study of healthy pre- and postmenopausal Chinese women. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2003, 308, 777-783.

65. Kim J.G., Lim K.S., Kim E.K. et al. Association of vitamin D receptor and estrogen receptor gene polymorphisms with bone mass in postmenopausal Korean women. Menopause, 2001, 8, 222-228.

66. Brown M.A., Haughton M.A., Grant S.F. et al. Genetic control of bone density and turnover: role of the collagen lalphal, estrogen receptor, and vitamin D receptor genes. J. Bone Miner. Res., 2001, 16, 758-764.

67. Kurabayashi Т., Matsushita H., Kato N. et al. Effect of vitamin D receptor and estrogen receptor gene polymorphism on the relationship between dietary calcium and bone mineral density in Japanese women. J. Bone Miner. Metab., 2004, 22, 139-147.

68. Vandevyver C., Vanhoof J., Declerck K. et al. Lack of association between estrogen receptor genotypes and bone mineral density, fracture history or muscle strength in elderly women. J. Bone Miner. Res., 1999, 14, 1576-1582.

69. Aerssens J., Dequeker J., Peeters J. et al. Polymorphisms of the VDR, ER and COLIA1 genes and osteoporotic hip fracture in elderly postmenopausal women. Osteoporos. Int., 2000, 11, 583-591.

70. Bagger Y.Z., Jorgensen H.L., Heegaard A.M. et al. No major effect of estrogen receptor gene polymorphisms on bone mineral density or bone loss in post-menopausal Danish women. Bone, 2000, 26, 111-116.

71. Gennari L, Becherini L, Masi L, et al. Vitamin D and estrogen receptor allelic variants in post-menopausal women: evidence of multiple gene contribution on bone mineral density. J. Clin. Endocrinol. Me tab., 1998, 83, 939-944.

72. Silvestri S., Thomsen A.B., Gozzini A. et al. Estrogen receptor alpha and beta polymorphisms: is there an association with bone mineral density, plasma lipids, and response to postmenopausal hormone therapy? Menopause, 2006,13(3), 451-461.

73. Bandres E., Pombo I., Gonzalez-Huarriz M. et al. Association between bone mineral density and polymorphisms of the VDR, ERalpha, COL1A1 and CTR genes in Spanish postmenopausal women. J. Endocrinol. Invest., 2005, 28(4), 312-321.

74. Willing M., Sowers M., Aron D. et al. Bone mineral density and its change in white women: estrogen and vitamin D receptor genotypes and their interaction. J. Bone Miner. Res., 1998, 13(4), 695-705.

75. Sowers M., Jannausch M.L., Liang W. et al. Estrogen receptor genotypes and their association with the 10-year changes in bone mineral density and osteocalcin concentrations. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2004, 89(2),733-739.

76. Albagha O.M., McGuigan F.E., Reid D.M. et al. Estrogen receptor alpha gene polymorphisms and bone mineral density: haplotype analysis in women from the United Kingdom. J. Bone Miner. Res., 2001, 16(1),128-134.

77. Salmen Т., Heikkinen A.M., Mahonen A. et al. Early postmenopausal bone loss is associated with PvuII estrogen receptor gene polymorphism in Finnish women: effect of hormone replacement therapy. J. Bone Miner. Res., 2000, 15(2), 315-321.

78. Seremak-Mrozikiewicz A., Drews K., Bartkowiak-Wieczorek J. Et al. PvuII genetic polymorphism of estrogen receptor alpha in the group of postmenopausal women with osteopenia and osteoporosis. Ginekol, Pol., 2005, 76(9), 679-686.

79. Albagha O.M., Pettersson U., Stewart A. et al. Association of oestrogen receptor alpha gene polymorphisms with postmenopausal bone loss, bone mass, and quantitative ultrasound properties of bone. J. Med. Genet., 2005, 42(3), 240-246.

80. Rapuri P.B., Gallagher J.C., Knezetic J.A. et al. Estrogen receptor alpha gene polymorphisms are associated with changes in bone remodeling markers and treatment response to estrogen. Maturitas, 2006,20, 53(4), 371-379.

81. Han K., Choi J., Moon I. et al. Non-association of estrogen receptor genotypes with bone mineral density and bone turnover in Korean pre-, peri- and post-menopausal women. Osteoporos. Int., 1999, 9, 290-295.

82. Bagger Y.Z., Hassager C., Heegaard A.M. et al. Vitamin D receptor and estrogen receptor gene polymorphisms in postmenopausal Danish women: no relation to bone markers or serum lipoproteins. Climacteric, 2000, 3, 84-91.

83. Ioannidis J.P., Stavrou I., Trikalinos T. et al. Association of Polymorphisms of the Estrogen Receptor ctGene With Bone Mineral Density and Fracture Risk in Women: A Meta-Analysis. J. Bone Miner. Res., 2002, 17, 11, 2048.

84. Ioannidis J.P., Ralston S.H., Bennett S.T. et al. Differential genetic effects of ESR1 gene polymorphisms on osteoporosis outcomes. JAMA, 2004, 3,292(17), 2105-2114.

85. Тагиева A.H. Анализ ассоциации PvuII и Xbal полиморфизма гена эстрогенового рецептора А с риском развития остеопороза в московской выборке женщин, находящихся в менопаузе. «Проблемы репродукции», том 11, № 1, с. 64-67.

86. Willing М.С., Torner J.C., Bums T.L. et al. Gene polymorphisms, bone mineral density and bone mineral content in young children: The Iowa Bone Development Study. Osteoporos. Int., 2003, 14, 650-658.

87. Ongphiphadhanakul В., Chanprasertyothin S., Payattikul P. et al. Association of a G2014A transition in ex on 8 of the estrogen receptor-alpha gene with postmenopausal osteoporosis. Osteoporos. Int., 2001, 12(12), 10151019.

88. Hoshino S., Hosoi Т., Miyao M. et al. Identification of a novel polymorphism of estrogen receptor-alpha gene that is associated with calcium excretion in urine. J. Bone Miner. Metab., 2000, 18, 153-157.

89. Jurada S., Marc J., Prezelj J. et al. Codon 325 sequence polymorphism of the estrogen receptor alpha gene and bone mineral density in postmenopausal women. J. Steroid. Biochem. Mol. Biol., 2001, 78, 15-20.

90. Tsukamoto K., Inoue S., Hosoi T. et al. Isolation and radiation hybrid mapping of dinucleotide repeat polymorphism at the human estrogen receptor beta locus. J. Hum. Genet., 1998,43, 73-74.

91. Ogawa S., Hosoi Т., Shiraki M. et al. Association of estrogen receptor beta gene polymorphism with bone mineral density. Biochem. Biopliys. Res. Commun., 2000, 16, 69(2), 537-541.

92. Lau H.H., Ho A.Y., Luk K.D. et al. Estrogen receptor beta gene polymorphisms are associated with higher bone mineral density in premenopausal, but not postmenopausal southern Chinese women. Bone, 2002, 31(2), 276-281.

93. Scariano J.K., Simplicio S.G., Montoya G.D. et al. Estrogen receptor beta dinucleotide (CA) repeat polymorphism is significantly associated with bone mineral density in postmenopausal women. Calcif. Tissue Int., 2004, 74(6), 501-508.

94. Shearman A.M., Karasik D, Gruenthal K.M. et al. Estrogen receptor beta polymorphisms are associated with bone mass in women and men: the Framingham Study. J. Bone Miner. Res, 2004, 19(5), 773-781.

95. Kung A.W, Lai B.M, Ng M.Y. et al. T-1213C polymorphism of estrogen receptor beta is associated with low bone mineral density and osteoporotic fractures. Bone, 2006, 39(5), 1097-1106.

96. Arko B, Prezelj J, Komel R. et al. No major effect of estrogen receptor beta gene Rsal polymorphism on bone mineral density and response to alendronate therapy in postmenopausal osteoporosis. J. Steroid. Biochem. Mol. Biol, 2002,81, 147-152.

97. Efstathiadou Z, Koukoulis G, Stakias N. et al. Correlation of estrogen receptor beta gene polymorphisms with spinal bone mineral density in peri- and postmenopausal Greek women. Maturitas, 2006, 20, 53(4), 380-385.

98. Gong Y, Slee R, Fukai N. et al. LDL receptor-related protein 5 (LRP5) affects bone accrual and eye development. Cell, 107, 513-523, 2001.

99. Little R.D, Carulli J.P, Del Mastro R.G. et al. A mutation in the LDL receptor-related protein 5 gene results in the autosomal dominant high-bone-mass trait. Am. J. Hum. Genet, 70, 11-19, 2002.

100. Johnson M.L, Harnish K, Nusse R. et al. LRP5 and Wnt signaling: a union made for bone. J. Bone Miner. Res, 2004, 19(11), 1749-1757.

101. Levasseur R, Lacombe D, de Vernejoul M.C. LRP5 mutations in osteoporosis-pseudoglioma syndrome and higli-bone-mass disorders. Joint Bone Spine, 2005, 72(3), 207-214.

102. Koay M.A, Brown M.A. Genetic disorders of the LRP5-Wnt signalling pathway affecting the skeleton. Trends Mol. Med, 2005, 11(3), 129137.

103. Ai M, Heeger S, Bartels C.F. et al. Clinical and molecular findings in osteoporosis-pseudoglioma syndrome. Am. J. Hum. Genet, 2005, 77(5), 741753.

104. Cheung W.M, JinL.Y, Smith D.K. et al. A family with osteoporosis pseudoglioma syndrome due to compound heterozygosity of two novel mutations in the LRP5 gene. Bone, 2006, 39(3), 470-476.

105. Ferrari SL, Deutsch S, Baudoin С et al. LRP5 gene polymorphisms and idiopathic osteoporosis in men. Bone, 2005, 37(6), 770-775.

106. Crabbe P, Balemans W, Willaert A. et al. Missense mutations in LRP5 are not a common cause of idiopathic osteoporosis in adult men. J. Bone Miner. Res, 2005, 20(11), 1951-1959.

107. Ко ay M.A., Woon P.Y., Zhang Y. et al. Influence of LRP5 polymorphisms on normal variation in BMD. J. Bone Miner. Res., 2004, 19(10), 1619-1627.

108. Lau H.H., Ng M.Y., Cheung W.M. et al. Assessment of linkage and association of 13 genetic loci with bone mineral density. J. Bone Miner. Metab., 2006, 24(3), 226-234.

109. Mizuguchi Т., Furuta I., Watanabe Y. et al. LRP5, low-density-lipoprotein-receptor-related protein 5, is a determinant for bone mineral density. J. Hum. Genet., 2004, 49(2), 80-86.

110. Bollerslev J., Wilson S.G., Dick I.M. et al. LRP5 gene polymorphisms predict bone mass and incident fractures in elderly Australian women. Bone, 2005, 36(4), 599-606.

111. Zhang Z.L., Qin Y.J., He J.W. et al. Association of polymorphisms in low-density lipoprotein receptor-related protein 5 gene with bone mineral density in postmenopausal Chinese women. Acta Pharmacol. Sin., 2005, 26(9), 1111-1116.

112. Shafritz А. В., Shore E.M., Gannon F.H. et al. Overexpression of an osteogenic morphogen in fibrodysplasia ossificans progressiva. New Eng. J. Med., 335, 555-561, 1996.

113. Choi J.Y., Shin C.S., Hong Y.C. et al. Single-nucleotide polymorphisms and haplotypes of bone morphogenetic protein genes and peripheral bone mineral density in young Korean men and women. Calcif Tissue Int., 2006, 78(4), 203-211.

114. Ramesh Babu L., Wilson S.G., Dick I.M. et al. Bone mass effects of a BMP4 gene polymorphism in postmenopausal women. Bone, 2005, 36(3), 555-561.

115. Semprini S., Mango R., Brancati F. Et al. Absence of correlation between BMP-4 polymorphism and postmenopausal osteoporosis in Italian women. Calcif Tissue Int., 2000, 67(1), 93-94.

116. Wynne F., Drummond F., O'Sullivan K. et al. Investigation of the genetic influence of the OPG, VDR (Fokl), and COLIA1 Spl polymorphisms on BMD in the Irish population. Calcif. Tissue Int., 2002, 71(1), 26-35.

117. Arko В., Prezelj J., Kocijancic A. Et al. Association of the osteoprotegerin gene polymorphisms with bone mineral density in postmenopausal women. Maturitas, 2005, 16, 51(3), 270-279.

118. Choi J.Y., Shin A., Park S.K. et al. Genetic polymorphisms of OPG, RANK, and ESR1 and bone mineral density in Korean postmenopausal women. Calcif. Tissue Int., 2005, 77(3), 152-159.

119. Vidal С., Brincat M., Xuereb Anastasi A. NFRSF1 IB gene variants and bone mineral density in postmenopausal women in Malta. Maturitas, 2006, 20, 53(4), 386-395.

120. Cheng Q., Zhu H.M., Miao Y.X. et al. Effect of osteoprotegerin gene polymorphism on bone mass in postmenopausal women. Zhonghua Yi Xue Za Zhi, 2004, 17, 84(4), 274-277.

121. Yamada Y., Ando F., Niino N. Et al. Association of polymorphisms of the osteoprotegerin gene with bone mineral density in Japanese women but not men. Mol. Genet. Metab., 2003, 80(3), 344-349.

122. Ueland Т., Bollerslev J., Wilson S.G. et al. No associations between OPG gene polymorphisms or serum levels and measures of osteoporosis in elderly Australian women. Bone, 2007, 40(1), 175-181.

123. Brandstrom H., Gerdhem P., Stiger F. et al. Single nucleotide polymorphisms in the human gene for osteoprotegerin are not related to bone mineral density or fracture in elderly women. Calcif. Tissue Int., 2004, 74(1), 18-24.

124. Hsu Y.H., Niu Т., Terwedow H.A. et al. Variation in genes involved in the RANKL/RANK/OPG bone remodeling pathway are associated with bone mineral density at different skeletal sites in men. Hum. Genet., 2006, 118(5), 568-577.

125. Jergensen H.L., Kusk P., Madsen B. et al. Serum osteoprotegerin (OPG) and the A163G polymorphism in the OPG promoter region are related to peripheral measures of bone mass and fracture odds ratios. J. Bone Miner. Metab., 2004, 22(2), 132-138.

126. Zhao H.Y., Liu J.M., Ning G. et al. The influence of Lys3Asn polymorphism in the osteoprotegerin gene on bone mineral density in Chinese postmenopausal women. Osteoporos. Int., 2005, 16(12), 1519-1524.

127. Langdahl B.L., Carstens M., Stenkjaer L. et al. Polymorphisms in the osteoprotegerin gene are associated with osteoporotic fractures. J. Bone Miner. Res., 2002, 17(7), 1245-1255.

128. Arko В., Prezelj J., Komel R. et al. Sequence variations in the osteoprotegerin gene promoter in patients with postmenopausal osteoporosis. J. Clin. Endocrinol. Metab., 2002, 87(9), 4080-4084.

129. Eastell R., Cedel S., Wahner H. et al. Classification of vertebral fractures. J. Bone Miner. Res., 1991, 6(3), 207-215.

130. Genant H.K., Wu C., van Kuijk et al. Vertebral fracture assessment using semiquantitative technique. J. Bone Miner. Res., 1993, 8(9), 1137-1148.

131. McCloskey E.V., Spector T.D., Eyres K.S. et al. The assessment of vertebral deformity. A method for use in population studies and clinical trials. Osteoporosis Int., 1993, 3, 138-147.

132. Berezney R, Coffey DS. Identification of a nuclear protein matrix. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1974, 23, 60(4): 1410-1417.

133. Торопцова H.B. «Эпидемиология, первичная профилактика и лечение постменопаузального остеопороза в условиях поликлиники»,диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук, 2007г.