Клинико-генетический анализ бокового амиотрофического склероза в российской популяции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.11, кандидат медицинских наук Лысогорская, Елена Владимировна

• Лысогорская, Елена Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Лысогорская, Елена Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Основные теории патогенеза БАС

1.2. Роль гена SOD1 и описанные генетические локусы при БАС

1.3. Значение генов-регуляторов метаболизма РНК при БАС

1.4. Анализ генетических ассоциаций в спорадических случаях БАС 23 ГЛАВА 2. Общая характеристика материалов и методов исследования

2.1. Обследованные пациенты и семьи

2.2. Молекулярно-генетическое исследование

2.3. Молекулярное моделирование

2.4. Статистическая обработка данных 45 ГЛАВА 3. Результаты

3.1. Анализ клинических фенотипов БАС в обследованных спорадических и семейных случаях заболевания

3.2. Результаты молекулярно-генетического обследования

3.2.1. Мутационный скрининг гена SOD J 5

3.2.2. Анализ in silico мутаций гена SOD1

3.2.3. Исследование мутаций в гене TARDBP

3.2.4. Исследование мутаций в гене ANG

3.2.5. Исследование гена ATXN2

3.2.6. Анализ ассоциаций БАС с генами VEGF и АРОЕ 78 ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 82 ВЫВОДЫ 97 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 99 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 100 ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-генетический анализ бокового амиотрофического склероза в российской популяции»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования.

Боковой амиотрофический склероз (БАС) является неуклонно прогрессирующим нейродегенеративным заболеванием неустановленной этиологии. Данное заболевание связанно с поражением двигательных нейронов коры головного мозга, мозгового ствола и передних рогов спинного мозга и характеризуется развитием параличей и гибелью пациентов от нарушения дыхательных и бульбарных функций в течение 2-5 лет от момента дебюта симптомов болезни (Завалишин, 2009). Неуклонное прогрессирование заболевания, короткая продолжительность жизни от момента дебюта симптоматики, сложность диагностики БАС и рост заболеваемости в молодом возрасте (Васильев, 2008; Скворцова с соавт. 2009) обуславливают высокое внимание исследователей к вопросам этиологии и патогенеза данного заболевания. Выявление причин избирательной гибели двигательных нейронов при БАС является одной из приоритетных задач, стоящих перед исследователями. Ее решение позволит разработать новые современные патогенетические методы лечения данного заболевания.

К настоящему времени отсутствует однозначная концепция, объясняющая природу БАС. Однако, согласно современным представлением, данное заболевание можно отнести к группе мультифакторных болезней (Загоровская с соавт. 2003; Лимборская с соавт. 2005). Общая модель причин возникновения таких заболеваний включает взаимодействие генетических (гены предрасположенности и генетический фон), эпигенетических, средовых (семейных и популяционных) и стохастических (случайных) факторов. Среди факторов риска развития БАС к настоящему времени доказанными факторами являются мужской пол и возраст старше 50 лет (Завалишин, 2009). Кроме того, исследовалось действие таких внешнесредовых факторов, как контакт с пестицидами, тяжелыми и редкоземельными металлами, растворителями и пластмассами, электротравма, механическая травма и других (Brown et al. 2005; Скворцова с соавт. 2009).

В подавляющем большинстве случаев БАС является спорадическим заболеванием, и лишь 5-10% пациентов имеют семейный анамнез БАС (Иллариошкин, 2007). При этом развитие заболевания связывают с мутациями в одном из восемнадцати описанных к настоящему времени генетических локусов. Однако даже в случае спорадической формы заболевания велика роль совокупного или модифицирующего действия множества генов на риск развития заболевания, его клинические особенности и фенотипические проявления. В связи с этим генетические исследования БАС широко проводятся во всем мире и позволяют уточнить патогенетические механизмы развития заболевания и определить круг потенциальных объектов для разработки клеточной и генной терапии БАС (Mackenzie et al. 2010; Miller et al. 2007; Brown et al. 2012).

В российской популяции изучение генетических факторов при БАС было начато около 10 лет назад (Брусов с соавт. 2003; Скворцова с соавт. 2003): исследователями был оценен вклад генов SOD1 (Кондратьева с соавт. 2000), NEFH (Skvortsova et al., 2004) и генов системы детоксикации (Скворцова с соавт. 2006) в развитие БАС на небольшой выборке пациентов. В настоящее время в связи с открытием большого числа новых генов и совершенствованием технологий мутационного скрининга исследования молекулярных основ БАС вышли на качественно новый уровень, чему и посвящена данная диссертационная работа.

Цель исследования.

Клинический и молекулярно-генетический анализ семейных и спорадических случаев БАС в российской популяции, с выявлением мутаций и предрасполагающих полиморфизмов в кандидатных генах, установлением соотношения конкретных генетических вариантов БАС в России и проведением клинико-генетических сопоставлений.

I \

I

Задачи исследования.

1. Изучить частоту встречаемости и спектр клинических проявлений семейной формы БАС в сопоставлении со спорадической формой заболевания.

2. Провести мутационный скрининг генов SOD1, TARDBP, ANG в группе российских пациентов с семейными и спорадическими случаями БАС и оценить вариабельность неврологической картины отдельных молекулярных форм заболевания в российской популяции.

3. Исследовать взаимосвязь развития заболевания у российских пациентов с характеристиками тандемных тринуклеотидных (CAG)n повторов в ген QÁTXN2.

4. Провести анализ ассоциаций БАС у российских пациентов с генами VEGF и АРОЕ, оценить вклад полиморфных аллелей данных генов в формирование риска развития заболевания.

5. Изучить ассоциации генов ATXN2, VEGF и АРОЕ с клиническими особенностями заболевания (формой, возрастом дебюта, характером течения БАС), оценить прогностическое значение носительства конкретных аллелей генов риска.

6. На основании результатов молекулярного моделирования и анализа мутаций и полиморфизмов в ряде кандидатных генов уточнить роль генетических факторов в патогенезе БАС.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное клинико-генетическое исследование на обширной когорте российских пациентов с БАС. Проведена оценка частоты и спектра мутаций в генах SOD1, TARDBP, ANG при спорадической и семейной формах БАС, у российских пациентов установлено преимущественное вовлечение в патогенез БАС генов SOD1 и ANG. Определено прогностическое значение носительства конкретных аллелей генов ATXN2, VEGF и АРОЕ в формировании риска развития заболевания. Впервые для анализа молекулярных основ БАС в российской группе пациентов применен метод

молекулярного моделирования, показавший при выявленных мутациях в гене 8001 ведущую роль понижения энергии мутантного белка, что может служить дополнительным подтверждением принадлежности БАС к группе конформационных болезней.

Практическая значимость.

Установлена частота семейной формы БАС в российской популяции (4,3%) и ее фенотипические особенности по сравнению со спорадическими случаями (более раннее начало симптомов). Показан широкий полиморфизм клинических проявлений БАС в рамках конкретных генетических вариантов болезни, что необходимо учитывать в диагностике БАС и при проведении медико-генетического консультирования отягощенных семей. Установленные разнообразные клинико-генетические ассоциации позволяют предложить дополнительные прогностические критерии течения заболевания. Полученные результаты уточняют место генетического исследования в диагностическом алгоритме при БАС.

Положения, выносимые на защиту:

1. Впервые в ходе комплексного клинико-генетического исследования в группе из 199 пациентов со спорадической и 9 пациентов с семейной формами БАС проанализирован вклад генов БОО!, ТАЯОВР, АМО,АТХЫ2, УЕвР и А РОЕ в развитие данного заболевания в российской популяции.

2. Обследованная выборка пациентов с БАС характеризуется следующими особенностями: большой вариабельностью клинических проявлений болезни, дебютом семейного БАС в молодом возрасте с преобладанием спинального уровня поражения, преобладанием мутаций в гене 8001 при семейной форме заболевания и наличием мутаций в генах 5,OD7 и

при спорадической форме, отсутствием мутаций в гене ТА1ЮВР как при спорадическом, так и при семейном БАС.

)(I

)

V

'I

3. В российской популяции шанс развития БАС статистически значимо возрастает при носительстве определенных рисковых аллелей генов VEGF и ATXN2.

4. Метод молекулярного моделирования является важным исследовательским инструментом, позволяющим определить патогенетическую роль конформационных изменений мутантных белков в механизмах гибели мотонейронов при БАС.

Данное исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБУ «НЦН» РАМН. Протокол № 3/11 от 09.03.11г.

Апробация работы: диссертация апробирована и рекомендована к защите на совместном собрании научных сотрудников неврологических отделений, отделения реанимации и интенсивной терапии, научно-консультативного отделения, отделения лучевой диагностики, лаборатории ультразвуковых исследований, ДНК-лаборатории ФГБУ «Научный центр неврологии» РАМН 11 июня 2013 года.

Материалы диссертации были представлены на: 7th European ALS Congress -Research Workshop and Young Investigators Meeting (Turin, 2009); VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные нейродегенеративные заболевания XXI века» (Санкт-Петербург, 2010); X Всероссийском съезде неврологов (Нижний Новгород, 2012); 16th Congress of the EFNS (Stockholm, 2012); II Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2012); конференции общества специалистов по нервно-мышечным болезням «Актуальные вопросы диагностики и лечения нервно-мышечных болезней» (Москва, 2012); Всероссийской научной конференции молодых ученых-медиков «Инновационные технологии в медицине XXI века» (Москва, 2012); конференции молодых ученых ФГБУ «НЦН» РАМН (Москва, 2013); 5th Conference on Advances in Molecular Mechanisms Underlying Neurological Disorders (Bath, 2013).

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Боковой амиотрофический склероз является неуклонно прогрессирующим заболеванием, связанным с поражением мотонейронов коры головного мозга, мозгового ствола и передних рогов спинного мозга. Клинически заболевание проявляется развитием двигательных, бульбарных и дыхательных нарушений и неуклонным прогрессированием симптомов. При этом в различных комбинациях и в разной степени выраженности проявляются симптомы поражения верхнего и нижнего мотонейронов, формируя своеобразную клиническую картину. В зависимости от первичной локализации патологического процесса и преобладания в клинической картине пирамидных или сегментарно-ядерных симптомов можно выделить следующие формы БАС: шейно-грудную, пояснично-крестцовую, бульбарную, шейную, первично генерализованную и высокую.

С течением времени данные нарушения приводят к утрате способности к самостоятельному передвижению, самообслуживанию, изменению или утрате речи, невозможности самостоятельно глотать и дышать (Попова, 1998). При этом заболевание, как правило, не сопровождается развитием когнитивных нарушений и до самого последнего момента пациент не теряет способности критического отношения к себе и своей болезни. Все симптомы данного заболевания выражено ограничивают, приводят к изоляции и резко ухудшают качество жизни пациента. Эффективные методы лечения, предотвращающие прогрессирование болезни, отсутствуют. Таким образом, заболевание является фатальным для больного и приводит к его гибели обычно спустя 2-5 лет от момента манифестации симптомов. Вот почему вопросы этиологии и патогенеза БАС, разбирающие механизмы неуклонной гибели двигательных нейронов, являются предметом активного изучения.

Основные теории патогенеза БАС.

К настоящему времени общепринятыми являются две основные теории

патогенеза БАС - инфекционно-токсическая и эндогенно-абиотрофическая

.а'

(Smith, 1992; Лимборская с соавт. 2005; Завалишин, 2007; Скворцова с соавт. 2009). Первая подчеркивает значение внешних факторов в развитии заболевания - инфекционных агентов и токсических поражений. Вторая же акцентирует внимание на эндогенных дефектах, связанных с генетическими повреждениями, приводящими к изменению функций различных белков и «преждевременному старению».

Одной из первых была предложена токсическая теория развития БАС, базирующаяся на роли тяжелых металлов, таких как ртуть и свинец. Данные о содержании ртути, свинца и марганца у больных БАС в передних рогах спинного мозга противоречивы (Smith, 1992). Лечение хелатными соединениями, выводящими тяжелые металлы, оказалось неэффективным.

После выделения двух токсинов из семян и листьев сагового дерева, которые использовались в пищу племенами Чаморро на острове Гуам, подтвердилась их роль в патогенезе Западно-Тихооканской формы БАС (Reed and Brody, 1975; Smith, 1992). Один из этих токсинов, ß-N-methylamino L-alanine (ВМАА), инициирует экзайтотоксический механизм повреждения мотонейронов, другой - циказин - является сильным нейротоксином, химическим мутагеном и канцерогеном (Wilson and Shaw, 2007). Проникая через гемато-энцефалический барьер, продукты превращения циказина вызывают нарушение метилирования нуклеотидов и приводят к внутриклеточной продукции патологических соединений, которая влечет за собой дегенерацию нейронов (Wilson and Shaw, 2007). Изменение характера питания на острове Гуам значительно снизило показатели заболеваемости БАС (Reed and Brody, 1975).

Эпидемиологические исследования среди ветеранов I мировой войны выявили увеличение частоты встречаемости БАС в 2 раза по сравнению с общей популяцией (Smith, 1992). Это позволило предположить роль фосфороорганических соединений и других отравляющих веществ в этиологии БАС. Сходные результаты были получены при исследовании заболеваемости БАС среди солдат, воевавших во Вьетнаме и Корее (Haley, 2003).

Гипотеза о вирусной природе БАС основана на тропности ряда вирусов к двигательным нейронам и их способности длительно персистировать в нервных клетках без развития воспалительной реакции. Наиболее активно вирусологические исследования при БАС проводились в 50-е - 70-е годы XX столетия. В проводимых Н.В.Коноваловым и Л.А.Зильбером работах по воспроизведению БАС на грызунах и макаках-резус впервые была показана возможность воспроизведения БАС у животных при введении гомогената мозга больных БАС (Завалишин, 2009). Выявляемое у обезьян заболевание характеризовалось длительным инкубационным периодом - от года до 5 лет - и клинически было схожим с БАС у человека. Эти исследования подтвердили наличие инфекционного начала в природе БАС. Однако дальнейшие исследования не подтвердили возможность воспроизведения БАС у обезьян (Завалишин, 2009). Возможно, это было связано с менее продолжительным сроком наблюдения за животными, учитывая длительность инкубационного периода заболевания.

До настоящего времени возможными участниками патологического процесса при развитии БАС считают полиовирусы, что связано с их тропностью к нижнему мотонейрону, а также энтеровирусы и ретровирусы; кроме того, привлекают внимание прогредиентные амиотрофические формы клещевого и вилюйского энцефалита (Захарова, 2007).

Генетическая концепция БАС связана с первым описанием семейных случаев заболевания в работах F.A.Aran. Генетические факторы играют значительную роль в развитии БАС как в случае семейной, так и при спорадической формах заболевания. Семейный анамнез заболевания имеют 510% пациентов, страдающих БАС. В большинстве же случаев заболевание является спорадическим (Andersen and Al-Chalabi, 2011).

Революционным событием в определении роли генетических факторов при БАС явилось выявление мутаций в гене SOD1. Данный ген кодирует образование Cu/Zn-супероксиддисмутазы (SOD1). SOD1 имеет молекулярную

,,;„ массу 32,5 кДа, глобулярную структуру и состоит из двух субъединиц, в

v.,»

V '.

I

2+ 2+

активных центрах которых связываются ионы Zn и Cu . SOD1 преимущественно локализована в цитоплазме клеток, а около 2% ее обнаруживается в цитоплазматическом пространстве митохондрий (Ischiropoulos and Beckman 2003). SOD1 отвечает за детоксикацию супероксидных радикалов, превращая их в молекулы кислорода и перекись водорода (Rosen et al. 1993). При этом SOD1 является многофункциональным белком и важным участником межмолекулярных взаимоотношений практически во всех клетках организма (приложение 1), особенно в клетках печени, эритроцитах крови и нейронах. Роль гена SOD1 и описанные генетические локусы при БАС.

Ген SOD1 расположен на 21 хромосоме в локусе 21q22.1. К настоящему времени при БАС описано свыше 160 мутаций в гене SOD1 [http://alsod.iop.kcl.ac.uk/]. Данные мутации в основном представлены точковыми однонуклеотидными заменами, приводящими к изменению аминокислоты в белке SOD1. 35% кодирующих мутаций в гене SOD1 при БАС являются результатом замен нуклеотидов G>A или A>G (Cluskey and Ramsden, 2001). Существенно реже патогенетически значимыми являются делеции, приводящие к обрыву процесса трансляции белка (Иллариошкин, 2007). Подавляющее большинство мутаций является гетерозиготными и наследуется по аутосомно-доминантному типу. По данным зарубежных исследований, мутации в гене SOD1 обнаруживаются в 20-30% семейных случаев заболевания, а также в 5-7% спорадических случаев БАС (Rosen et al. 1993).

Некоторые из описанных при БАС мутаций в гене SOD1 обнаружены в отдельных семьях, другие - являются частой находкой в определенных популяциях. Для большинства мировых популяций описан характерный спектр мутаций в данном гене. При этом фенотипические проявления БАС у носителей определенных мутаций в SOD1 могут быть широко вариабельны как в пределах конкретной популяции, так и внутри одной семьи (Gilhus et al. 2012). Данный факт свидетельствует о модулирующем влиянии внешнесредовых факторов и других генов на развитие заболевания.

Описаны определенные ассоциации носительства некоторых мутаций в гене SOD1 с развитием нетипичных проявления БАС, таких как длительность течения свыше 20 лет (Aoki et al. 1995), отсутствие клинических признаков поражения корковых двигательных нейронов (Cudkowicz et al. 1997), наличия чувствительных и тазовых нарушений (Gilhus, 2012).

Описание мутации в гене SOD1 явилось большим прорывом в понимании патогенеза БАС не только в связи с накоплением знаний о наследственной природе заболевания и идентификацией белка-участника патологического каскада, но и в силу возможности использования данного гена для создания животных и культуральных моделей заболевания. До настоящих дней основными используемыми в лабораторной практике животными моделями БАС являются трансгенные мыши с мутациями в гене SOD1. Чаще всего они несут следующие мутации в гене SOD1 - A4V, G93A, G85R, G37R, D90A, L126Z, H46R/H48Q, H46R/H48Q/H63G/H120G, G127insTGGG (Kunst, 2004). Кроме того, используются крысы-носители мутаций G93A или H46R в гене SOD1 (Kunst, 2004). Несмотря на наличие определенного фенотипа БАС, характерного для каждой из упомянутых мутаций, возраст дебюта симптомов БАС, темп прогрессирования заболевания и особенности морфологической картины БАС у трансгенных животных могут варьировать, как и в случаях носительства мутаций в гене SOD1 у человека (Kunst, 2004). Создание трансгенных моделей БАС показало, что для развития симптомов заболевания недостаточно экспрессии мутантного белка только в нейронах. Развитие патологического процесса оказалось возможным только при условии экспрессии мутантной SOD1 в астроцитах (Clement et al. 2003). Этот факт обратил внимание на поражение клеток глии при БАС и заставил пересмотреть восприятие БАС как заболевания, связанного с избирательным страданием двигательных нейронов.

Таким образом, благодаря созданию животных моделей была доказана патогенетическая значимость многих мутаций в гене SOD1. Роль других мутаций исследовалась на культурах клеток, а также при сегрегационном

анализе в процессе обследования кровных родственников пациентов с семейной формой БАС (Aoki et al. 1995; Cova et al. 2010). В исследованиях на культуральных и животных моделях было показано, что ферментативная активность мутантного белка SOD1 не всегда изменяется. Поэтому в настоящее время основной гипотезой цитотоксичности при повреждении гена SOD1 является приобретение ферментом SOD1 новых патологических функций, привнесенных мутациями и реализуемых преимущественно в двигательных нейронах. Этот механизм получил название "gain-of-function" (Sahawneh et al. 2010). Данная гипотеза подтверждается наличием нормального фенотипа у мышей, нокаутированных по гену SOD1, а также отсутствием у пациентов, страдающих семейной формой БАС, полностью инактивирующих мутаций в гене SOD1 (Ischiropoulos and Beckman, 2003). Рассматривается две версии реализации патологической роли мутантной SOD1 при БАС - образование и накопление патологических белковых агрегатов в клетках и/или прямое цитотоксическое действие, связанное с нарушением субстратной специфичности белка и возможностями его некорректных взаимодействий (Иллариошкин, 2007).

С целью подтверждения токсичных свойств агрегированной SOD1 на моделях трансгенных мышей проводились эксперименты по использованию белков-шаперонов. Функция данных белков заключается в деградации аномальных конформационно-измененных молекул. В экспериментах на моделях мышей использование данных белков приводило к увеличению продолжительности жизни лабораторных животных на 22% (Phukan, 2010).

В связи с наличием SOD1 не только в цитоплазме клетки, но и в межмембранном пространстве митохондрий, было высказано предположение о ключевой роли именно этой фракции SOD1 в патогенезе БАС. Эта гипотеза подтверждается наличием у трансгенных животных ранних и даже доклинических изменений митохондриальных мембран в двигательных нейронах спинного мозга (Mattiazzi et al. 2002; Kidd 2005).

i

i > h-

Еще одним возможным механизмом патологической роли мутантной SOD1 при БАС может быть ее участие в индукции воспалительных реакций. В экспериментах на животных моделях БАС была выявлена активация микроглии, способствующая гибели двигательных нейронов по пути апоптоза (Meissner et al. 2010).

Кроме гена SOD J, описаны другие генетические локусы, мутации в которых приводят к развитию семейной формы БАС.

К настоящему времени известно 18 генетических локусов, связанных с БАС (таблица 1.1).

Таблица 1.1. Описанные генетические локусы при БАС.

Локус Ген Название гена Положение

ALS1 SOD1 Медь-цинксодержащая 21q22.ll

ALS2 ALS2 Алсин 2q33.2

ALS3 He Не идентифицирован 18q21

ALS4 SETX Сенатаксин 9q34.13

ALS5 SPAST Спастин 2р24

ALS6 FUS Химерный белок, ассоциированный со злокачественной липосаркомой 16pll.2

ALS7 He идентифицирован Не идентифицирован 20р13

ALS 8 VAPB Везикуло-ассоциированный 20ql3.33

ALS9 ANG Ангиогенин 14ql 1.1

ALS 10 TARDBP ТАЯ-ДИК-связывающий белок 1р36.22

ALS 11 FIG4 8АС-домен-содержащий белок 6q21

ALS12 OPTN Оптиневрин 10pl3

ALS 13 ATXN2 Атаксин-2 12q23-q24.1

ALS 14 VCP Валозин-8СЮержащий белок 9pl3

ALS 15 UBQLN2 Убиквилин-2 Xpll.21

ALS 16 SIGMAR 1 Неопиоидный внутриклеточный 9pl3

ALS 17 CHMP2B Хроматин модифицирующий белок 2В 3pll.2

ALS 18 PFN1 Профилин-1 17pl3.3

Мутации в данных генах встречаются с различной и, как правило, небольшой частотой в различных популяциях мира и могут обуславливать развитие как ювенильного БАС, так и БАС с поздним началом симптомов (Deng et al. 2012; Millecamps et al. 2010; Brown et al. 2012). Наследование данных локусов возможно по аутосомно-доминантному, аутосомно-рецессивному и Х-сцепленному механизмам (Kunst, 2004).

Кроме того, описано большое число генов, белковые продукты которых являются возможными участниками патогенеза при БАС. В связи с этим в последние годы сложился новый подход к обобщению представлений о роли генетических факторов при БАС. Он заключается в объединении заинтересованных при БАС генов в функциональные подгруппы (Andersen and Al-Chalabi, 2011). С этой точки зрения среди генов, заинтересованных в патогенезе БАС, можно выделить пять основных групп генов, отражающих современные представления о развитии БАС на молекулярном уровне. К данным генам относятся

1) связанные с процессингом РНК: FUS (fused in sarcoma), TARDBP (TAR DNA binding protein), ANG (angiogenin), SETX (senataxin), TAF15 (TATA box binding protein (TBP)-associated factor), ELP3 (elongation protein 3 homolog) и C90RF72 (chromosome 9 open reading frame 72);

2) связанные с аксональным транспортом: DCTN1 (dynactin 1) и NEFH (neurofilament, heavy polypeptide);

3) связанные с эндосомальным транспортом везикул: FIG4 (FIG4 homolog, SAC1 lipid phosphatase domain containing) и VAPB (VAMP (vesicle-associated membrane protein)-associated protein В and C);

4) связанные с убиквитинированием UBQLN2 (ubiquilin 2) и UNCI ЗА (unc-13 homolog A);

5) гены, связанные с другими процессами, включая окислительный стресс (SOD1 (superoxide dismutase 1)) (Andersen and Al-Chalabi, 2011).

К такому объединению генов по функции подтолкнула сложившаяся в последние годы гипотеза о ключевой роли нарушений метаболизма РНК в

патогенезе БАС. Именно она послужила причиной выделения ряда генов, участвующих в процессах синтеза, созревания, поддержания стабильности и деградации РНК, в особую группу (группа 1). Возникновение предположения о решающей роли нарушений метаболизма РНК при БАС явилось настолько же значительным для понимания природы развития БАС, как и обнаружение первых мутаций в гене SOD1.

Роль генов-регуляторов метаболизма РНК при БАС.

Нарушение синтеза и метаболизма РНК является причиной развития различных, в том числе неврологических, заболеваний. При этом вовлечение указанных выше генов в патологический процесс не ассоциировано исключительно с развитием БАС. Напротив, данные генетические факторы участвуют в патогенезе нейродегенеративных и нервно-мышечных заболеваний, а именно: при спинальной мышечной атрофии, дистальной наследственной моторной невропатии, прогрессирующей мышечной атрофии, наследственной спастической параплегии, первичного латерального склероза и бокового амиотрофического склероза (Andersen and Al-Chalabi, 2011).

Известно, что белковые продукты ряда генов могут быть участниками одного или нескольких этапов метаболизма РНК в клетке. Однако, понимание физиологической, действующей на уровне РНК, функции данных белков полностью не может объяснить патогенетических механизмов избирательной дегенерации двигательных нейронов. Морфологические особенности данных клеток (их крупный размер и наличие большой длины аксона), особенности энергетического обмена мотонейронов, величина структур цитоскелета и их способность образовывать агрегаты микротрубочек и нейрофиламентов, низкая экспрессия белков, связывающих внутриклеточный кальций, а также особенности экспрессии глутаматных рецепторов на поверхности клеток обуславливают высокую восприимчивость двигательных нейронов как к нарушениям метаболизма РНК, так и к другим ключевым патогенетическим процессам при развитии нейродегенерации - экзайтотоксичности, окислительному стрессу, митохондриальной дисфункции, конформационным

изменениям белков, в том числе, белков цитоскелета, дисбалансу протеолитической системы и активации микроглии (Захарова, 2007).

Все этапы генной экспрессии (транскрипция гяРНК, процессинг, в том числе, сплайсинг мРНК, транспорт мРНК в цитоплазму и последующая деградация мРНК) могут служить точкой приложения различных регуляторных факторов и белков. На рисунке 1.1 указаны гены-регуляторы транскрипции, белковые продукты которых вовлечены в патогенез БАС и этапы их действия.

Рисунок 1.1. Действие регуляторных факторов на этапах экспрессии гена при БАС.

Впервые нарушение метаболизма РНК как процесса, приводящего к деградации двигательных нейронов, привлекло внимание исследователей при описании мутаций в гене SMN (survival of motor neuron), связанном с развитием спинальной мышечной атрофии. До настоящего времени в исследованиях не продемонстрировано прямых доказательств роли SMN в развитии БАС, однако

показано, что больные БАС имеют значительно меньшее количество SMN белка, чем контрольные здоровые лица. Также было показано, что наличие гомозиготной делеции гена SMN увеличивает риск развития спорадического БАС в популяции датчан и французов, однако не подтверждена данная связь в исследованиях на испанской популяции (Ticozzi et al. 2010).

Белок, кодируемый геном SMN, локализован как в ядре, так и в цитоплазме. Среди функций данного белка - взаимодействие с РНК-связывающими белками и участие в формировании РНП-комплекса, кроме того, он взаимодействует с нуклеиновыми кислотами и другими белками (Friesen et al. 2001). Кроме этого было показано, что SMN играет ключевую роль в образовании структуры гяРНК и, следовательно, в биогенезе мРНК (Friesen et al. 2001).

В дальнейшем идентификация белка TDP43 - ДНК-РНК-связывающего белка и основного компонента убиквитиновых включений при БАС - упрочила представления о нарушении процессинга РНК при развитии нейродегенеративных заболеваний. TDP43 - широко экспрессируемый в различных тканях высоко консервативный среди дистантных биологических видов ядерный белок. Данный белок имеет в своем составе два РНК-связывающих участка (RRM1 и RRM2) и С-терминальный регион, обогащенный глицином, способный к взаимодействию с другими белками (Sreedharan et al. 2008). TDP43 осуществляет свою функцию в ядре клеток. Однако патологическая форма белка TDP43 частично выходит из ядра, подвергается убиквитинированию, гиперфосфорилированию и расщеплению на фрагменты и образует включения в цитоплазме нейронов и клеток глии (Van Deerlin et al. 2008). Идентификация TDP43 в убикивитинированных включениях при БАС является прорывом в представлениях о патогенезе данного заболевания и решает давнюю загадку относительно природы убиквитин-позитивных включений при БАС. Однако не отвечает на вопрос, является ли агрегация TDP43 основным событием в патогенезе БАС или же данные включения формируются вследствие течения заболевания.

Белок TDP43 кодируется геном TARDBP. Данный ген состоит из 6 экзонов и локализован на 1 хромосоме в участке 1р36.22. TARDBP относится к числу представленных в таблице 1.1. локусов, с мутациями в которых связан небольшой процент семейной формы БАС.

Учитывая высокую частоту мутаций в гене TARDBP в некоторых популяциях при БАС, возникло предположение о триггерной роли белка TDP43 в развитии БАС (Mackenzie et al. 2010). Однако причина его триггерной роли остается неясной. Выявлено, что при нейродегенеративных заболеваниях происходит частичный транспорт данного белка из ядра в цитоплазму нейронов. Возможно, само по себе образование мутантного TDP43 приводит к гибели мотонейронов вследствие проявления его токсических свойств по механизму «gain of function». Альтернативной гипотезой является снижение биологической функции данного белка в ядре, возникающее вследствие выхода его в цитоплазму клетки с последующим образованием белковых агрегатов, что приводит к нарушениям взаимодействия TDP43 с РНК и другими белками и это является причиной проявления заболевания (Lagier-Tourenne and Cleveland, 2009).

Сообщения о заинтересованности мутантного TDP43 в патогенезе нейродегенеративных заболеваний послужили толчком к поиску новых мутаций при БАС в другом гене, также кодирующем ДНК-РНК-связывающий белок. Им стал ген FUS, расположенный на 16 хромосоме в локусе 16р11, или ALS6 (таблица 1.1) (Arai et al. 2006). FUS кодирует одноименный белок - белок FUS (fused in sarcoma) или TLS (translocation in liposarcoma). Частота мутаций в данном гене совсем не велика и составляет 3,8% при семейном БАС и 0,4% спорадическом БАС (Lai et al. 2011). Абсолютное большинство мутаций, связанных с БАС, в данном гене локализуется в области высококонсервативного С-конца, где все 5 остатков аргинина подвержены мутациям. Большинство мутаций являются миссенс-мутациями, кроме двух, локализованных в домене, богатом глицином, приводящих к включению или делеции двух глициновых остатков (Aman et al. 1996; Lai et al. 2011).

-ч ,

Белок FUS преимущественно локализован в ядре, однако во многих типах клеток обнаружены цитоплазменные включения белка. При анализе головного и спинного мозга больных БАС, являвшихся носителями мутаций в гене FUS, белок был обнаружен в ядрах большинства нейронов и клеток глии, а также в составе белковых включений в цитоплазме. У носителей мутаций в гене FUS отсутствуют включения TDP43, что позволяет предположить независимость нейродегенеративного процесса, запускаемого мутацией в гене FUS, от формирования агрегатов TDP43. (Vance et al. 2009; Kwiatkowski et al. 2009 ).

Выявленная заинтересованность TDP43 и FUS в патогенезе БАС не специфична для этого заболевания. Белковые включения TDP43 часто наблюдаются при спорадической форме лобно-височной деменции, включая случаи, связанные с мутациями в гене програнулина и валозин-содержащего белка. Более того, сообщалось о наличии включений мутантного TDP43 при других нейродегенеративных заболеваниях. В том числе накопление данного белка встречается в 30% случаев болезни Альцгеймера (Banks et al. 2008). А дикий тип FUS выделен в качестве крупного компонента полиглутаминовых (поли-Q) агрегатов на моделях спиноцеребеллярной атаксии типа 3 и болезни Гентингтона. Позднее при болезни Гентингтона были обнаружены внутриядерные включения в нейронах, что позволило предположить связь белка FUS с поли-С^-агрегатами на ранних стадиях заболевания (Doi et al. 2008).

Важным поворотом в понимании патогенеза БАС и других нейродегенеративных заболеваний в свете гипотезы о нарушении метаболизма РНК явилась серия экспериментов, в которой было подтверждено взаимодействие и совместная локализация в стрессовых гранулах белка TDP43 с атаксином-2 (Eiden, Kim et al. 2010). Атаксин-2 - белковый продукт гена ATXN2, ассоциированного с развитием аутосомно-доминантной спиноцеребеллярной атаксии типа 2 (СЦА2). Кроме того, данный ген относится к генетическому локусу ALS 13 (таблица 1.1) и мутации в нем могут обуславливать предрасположенность в развитию БАС. В структуре данного гена определяется регион тринуклеотидных CAG-повторов. В норме число

i1

iv -Л

п

данных повторов варьирует в пределах 21-23. При их экспансии выше 34 развивается СЦА2 (Pulst et al. 1996; Sanpei et al. 1996; Imbert et al. 1996).

Атаксин-2, также как и TDP43, является РНК-связывающим белком и участвует в регуляции процессов транскрипции в клетке. В норме он расположен в цитоплазме, однако при БАС обнаруживается его локализация совместно с TDP43 в стрессовых гранулах, например, при развитии окислительного стресса (Colombrita et al. 2009) и регистрируется содержание поли-Q включений атаксина-2 в TDP-позитивных включениях (Buratti and Baralle, 2008). Предполагают, что поскольку оба белка вовлечены в регуляцию метаболизма РНК, то связывание с РНК является необходимым этапом взаимодействия данных белков и образования их агрегатов (Buratti and Baralle, 2008). Возможно, понимание этого процесса позволит использовать взаимодействие ТОР43-атаксин-2-РНК в качестве мишени для создания новых подходов к лечению БАС. В экспериментах на лабораторных животных и культуральных моделях было показано, что атаксин-2 оказывает дозозависимый эффект на проявление цитотоксических («gain of function») свойств TDP43 (Eiden et al. 2010).

Заинтересованность атаксина-2 в патогенезе БАС подтверждается наличием поли-Q включений в двигательных нейронах спинного мозга больных БАС (Eiden et al. 2010). Увеличение числа копий тринуклеотидных CAG-повторов в пределах 24-33 ассоциировано с развитием заболевания, как в европейских, так и азиатских популяциях мира (Eiden et al. 2010; Daoud et al. 2011; Van Damme et al. 2011). Приводятся также данные, что в некоторых случаях экспансия повторов более 30 ассоциируется с ранним возрастом дебюта БАС (Eiden et al. 2010). Из фенотипических особенностей БАС важно отметить, что при экспансии тандемных повторов в гене ATXN2 могут наблюдаться нетипичные клинические проявления БАС, такие как наличие чувствительных нарушений (Eiden et al. 2010; Van Damme et al. 2011). Более того, описаны семьи, члены которых страдали как БАС, так и СЦА2 - при

количестве повторов в пределах 30-33 развивался БАС, а в случае экспансии таковых более 34 - СЦА2 (Eiden et al. 2010).

Данные результаты позволяют предполагать некоторую общность развития основных патогенетических каскадов при развитии различных нейродегенеративных заболеваний. Данное предположение подтолкнуло к исследованию роли ATXN2 при развитии болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, лобно-височной дегенерации и прогрессирующего надъядерного паралича. Было выявлено, что увеличение числа повторов в гене ATXN2 определяется при БАС и прогрессирующем надъядерном параличе и отсутствует в случае остальных патологий (Ross et al. 2011).

Кроме описанных выше генов и их белковых продуктов, в регуляцию метаболизма РНК при нейродегенеративных заболеваниях вовлечен целый ряд других генов. Так, важным регулятором процессов транскрипции являются белковый продукт гена ANG - ангиогенин. Ангиогенин участвует в обеспечении стабильности мРНК в цитоплазме. Ангиогенин - член суперсемейства рибонуклеазы А. Благодаря наличию у белка рибонуклеазной активности, он участвует в процессе распада транспортной РНК (тРНК). Также ангиогенин является важным фактором нсоваскуляризации.

Ангиогенин широко экспрессируется в ЦНС. Также он был обнаружен во внеклеточном матриксе и соединительной ткани. Обнаружение ангиогенина в эндотелии подтвердило факт его заинтересованности в процессе неоваскуляризации. Эндогенная его экспрессия необходима для работы других задействованных в ангиогенезе белков, таких как сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF). Известно, что ангиогенин связывается с промотерной областью рибосомальной ДНК и стимулирует рибосомальную транскрипцию РНК. Именно этот процесс связывания и стимулирования транскрипции РНК является ключевым в реализации механизма VEGF-индуцированного ангиогенеза.

Рядом авторов была показана выраженная экспрессия гена ANG в ядрах нейронов, расположенных в передних рогах спинного мозга, в образцах

спинного мозга плода и взрослого человека (Wu et al. 2007). Было выяснено, что экспрессия ANG в мотонейронах вызывается гипоксией (Wu et al. 2007).

Вовлечение ангиогенина в патогенез БАС широко изучается. Мутации в локусе 14qll.2 (ALS9) (таблица 1.1) преимущественно встречаются в скандинавских популяциях (Greenway et al. 2006). При БАС обнаруживается снижение рибонуклеазной активности ангиогенина, что отражает снижение его биологической функции при данном нейродегенеративном заболевании (Ticozzi et al. 2010).

Описанные выше результаты проведенных исследований подтверждают роль нарушений образования и метаболизма РНК в развитии нейро дегенеративных заболеваний. Продолжающиеся исследования роли TDP43 и FUS, а также описание регуляторной функции ряда других белков могут помочь в разработке новых терапевтических подходов при БАС. В частности, уже проводятся эксперименты, исследующие возможности проведения генной терапии БАС на основе мРНК (Wu et al. 2009).

Таким образом, приведенные сведения подтверждают значение некоторых генетических локусов при БАС. При этом, чаще мутации в них обуславливают развитие семейной формы заболевания. Анализ генетических ассоциаций в спорадических случаях БАС.

Большинство случаев БАС является спорадическими и может быть не связано с наличием какой-либо мутации в одном из упомянутых генетических локусов. Однако при спорадической форме БАС имеют значение определенные модифицирующие гены, формирующие генетическую предрасположенность к развитию нейродегенерации. При оценке вклада этих генов в патогенез БАС используют метод генетических ассоциаций - исследование взаимосвязи генетических полиморфизмов с изучаемым заболеванием. Этот подход основан на предположении, что в качестве генетического маркера выступает аллельный вариант гена, белковый продукт которого участвует в патогенезе исследуемого заболевания. При этом выбор гена и его полиморфизмов определяют на основании представлений о развитии конкретно заболевания. Тогда

исследуемый ген называют геном-кандидатом. В настоящее время продолжается поиск новых генов-кандидатов, связанных с развитием БАС и модулирующих течение заболевания. Среди них уточняется роль полиморфизмов в генах VEGF (vascular endothelial growth factor), NF-H (neurofilament, heavy polypeptide), DNCT1 (dynactin la), LIF (leukemia inhibitory factor), APEX {APEX nuclease), ANG (angiogenin), HFE (hemochromatosis), PONI (paraoxonase 1), PON2 (paraoxonase 2), SMN1 (survival of motor neuron 1) и SMN2 (survival of motor neuron 2), APOE (apolipoprotein E), генетические полиморфизмы в которых выявлены у пациентов во многих европейских, американских и китайской популяциях (Valdmanis et al. 2009; Schymick et al. 2007).

Одним из изучаемых генов-кандидатов при БАС является ген сосудистого эндотелиального фактора роста - VEGF (vascular endothelial growth factor). Впервые он привлек внимание исследователей в 2001 году, когда была выведена линия мышей с симптомами болезни двигательного нейрона, гомозиготных по делеции гипоксия-чувствительного элемента (HRE) в промотерной области гена VEGF (Oosthuyse et al. 2001).

Ген VEGF расположен на 6-й хромосоме и имеет 8 экзонов (Tischer et al. 1991). Вследствие альтернативного сплайсинга синтезируются молекулы белка, состоящие из 121, 145, 165, 183, 189 и 206 аминокислот (Tischer et al. 1991). Синтез белка VEGF чрезвычайно важен на любом этапе онтогенеза. Он необходим для развития эндотелиальных, костных и хрящевых клеток, процессов ангиогенеза и гемопоэза (Martin et al. 2004; Matsumoto and Claesson-Welsh, 2001; Zelzer et al. 2002). Кроме этого, описаны нейротрофические свойства VEGF и его влияние на проницаемость гематоэнцефалического барьера (Rosenstein et al. 2003; Ay et al. 2008). Доказано, что свое влияние на нервные клетки VEGF осуществляет не только опосредованно - через изменение кровотока, но и непосредственно — путем увеличения экспрессии своих рецепторов на теле и аксоне двигательных нейронов (Van Den Bosch et al. 2004).

Недавние эксперименты на культурах двигательных нейронов продемонстрировали один из возможных механизмов защиты мотонейронов под действием VEGF. Увеличение представления VEGFR2 рецепторов на теле и аксоне двигательного нейрона в ответ на увеличение концентрации VEGF в среде стимулирует транскрипцию субъединицы GluR2 AMP А- рецептора. При наличии данной субъединицы AMP А- рецептор становится малочувствительным к потоку кальция (Bogaert et al. 2010). Кроме того, VEGF модулирует работу NMDA-рецепторов (Meissirel et al. 2011). Таким образом, VEGF предотвращает «кальциевую перегрузку» и препятствует механизмам экзайтотоксичности, губительным для двигательных нейронов. Обнаружение повышенной концентрации VEGF в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости пациентов, страдающих БАС, подтверждает наличие описанного выше механизма защиты от экзайтотоксичности у пациентов с БАС (Ilzecka, 2004; Gupta et al. 2011; Васильев, 2008 ).

Другой возможный механизм непосредственного действия VEGF при развитии БАС - препятствие снижению протеинкиназы В (Akt) в нейронах и предотвращение, таким образом, запуска гибели двигательных нейронов по пути апоптоза (Dewil et al. 2007).

Несмотря на развитие симптомов болезни двигательного нейрона у трансгенных животных в случае делеции HRE-промотерного сайта VEGF, спонтанные мутации в этой области гена при БАС не описаны (Brockington et al. 2005; Gros-Louis et al. 2003; Lambrechts et al. 2003). Также не было выявлено ассоциации между полиморфизмами в промотерной области гена и развитием БАС (Brockington et al. 2005). До настоящего времени отсутствуют подтвержденные данные о роли эпигенетических модификаций гена VEGF в развитии БАС (Oates and Pamphlett, 2007). Тем не менее, ассоциативная связь между геном VEGF и БАС установлена в ряде популяций мира.

Так, Lambrechts с соавторами (Lambrechts et al. 2003) и Terry с соавторами (Terry et al. 2004) независимо друг от друга выявили три значимых полиморфизма в гене VEGF: -2578С/А, -1154G/A и -634G/C. У носителей

минорных аллелей данных полиморфизмов в гомозиготном состоянии был установлен повышенный риск развития БАС. Данные полиморфизмы явились «рисковыми» для жителей региона Новая Англия на северо-востоке США. По данным крупного мета-анализа, проанализировавшего 11 исследований случай-контроль и включившего более семи тысяч пациентов из восьми европейских и трех североамериканских популяций, носительство генотипа -2578А/А достоверно повышает риск развития БАС у мужчин (Lambrechts et al. 2009). И хотя в некоторых европейских популяциях (у англичан, датчан, итальянцев, немцев) (Brockington et al. 2005; Del Bo et al. 2008; Fernandez-Santiago et al. 2006; Van Vught et al. 2005) и в китайской популяции (Zhang et al. 2006) аллельные частоты по указанному полиморфному сайту в группе больных БАС не отличались от контроля, в данных популяциях были отмечены некоторые клинические особенности заболевания, ассоциированные с носительством минорных аллелей. Так, в немецкой популяции было показано небольшое повышение риска развития БАС среди женщин-носительниц генотипа -2578А/А (Fernandez-Santiago et al. 2006), а в исследовании на китайской популяции была выявлена ассоциация данного генотипа с дебютом БАС в молодом возрасте (Chen et al. 2007).

Таким образом, приведенные выше данные подтверждают определенное вовлечение гена VEGF в патогенез БАС, но при этом значение тех или иных полиморфизмов и конкретная роль данного гена и его белкового продукта в поражении мотонейронов требуют уточнения. На сегодняшний день ген VEGF рассматривается в качестве одного их ключевых молекулярных факторов, определяющих развитие БАС, а также привлекает внимание исследователей в качестве возможного объекта для воздействия и модификаций при разработке патогенетической терапии БАС (Boillee and Cleveland, 2004; Greenberg and Jin, 2004; Lambrechts et al. 2004; Storkebaum et al. 2005). К настоящему времени разработаны различные генно-инженерные конструкции на основе аденовирусов и лентивирусов для адресной доставки векторов, содержащих VEGF, к двигательным нейронам (Azzouz et al. 2004; Tenenbaum et al. 2004;

Суслинас соавт. 2008). Эффективность применения подобной генной терапии активно изучается и доказывает свою эффективность в экспериментах на животных моделях (Azzouz et al. 2004).

Среди других генов-кандидатов до настоящего времени не уточнена роль гена АРОЕ, кодирующего белок - аполипопротеин Е (апоЕ). АпоЕ является одним из важнейших апобелков, регулирующих как обмен липидов в крови, так и обмен холестерина в мозге и некоторых других тканях. Ген АРОЕ расположен на хромосоме 19ql3.2. Существует три изоформы белкового продукта данного гена, кодируемые аллелями Е2, ЕЗ и Е4. Эти изоформы, различные по аминокислотному составу, отличаются выраженностью междоменного взаимодействия и стабильностью молекулы (Chang et al. 2005; Huang, 2006). Стабильность молекулы апоЕ увеличивается в ряду апоЕ-Е4<апоЕ-ЕЗ<апоЕ-Е2, а выраженность междоменных взаимодействий в ряду апоЕ-Е4>апоЕ-ЕЗ>апоЕ-Е2, напротив, уменьшается. Предполагается, что с взаимодействием концевых участков молекулы апоЕ-Е4 связано проявление ряда патологических эффектов данной изоформы в нервной системе: увеличение продукции (3-амилоида, потенцирование амилоидиндуцированного высвобождения лизосомальных ферментов, усиление протеолитических процессов в нейроне, запуск программы апоптоза (Tolar et al. 1997; Chang et al. 2005; Huang, 2006; Cedazo-Minguez, 2007). Обсуждается также роль апоЕ в качестве «патологического шаперона», который, связываясь с )3-амилоидом (основным компонентом амилоидных бляшек), переводит его в нерастворимую форму, склонную к избыточной агрегации (Иллариошкин, 2003; Huang, 2006; Cedazo-Minguez, 2007).

Следует добавить, что одной из главных функций аполипопротеина Е является участие в обеспечении нейропластичности, что реализуется за счет участия апоЕ в процессах спрутинга, синаптогенеза и регенерации нейрональных мембран (Mahley et al. 2006). Эффективнее всего указанные функции осуществляются изоформой апоЕ-Е2 как самой стабильной молекулой, а наименее эффективно — апоЕ-Е4 (Chang et al. 2005; Sporis (Sporis,

Sertie et al. 2005). Не случайно с аллелем апоЕ-Е2 связывают реализацию нейропротекторных механизмов, снижающих интенсивность процессов нейродегенерации (Beyer et al. 2002; Иллариошкин, 2003; Захарова, 2007).

Значение липидов и липопротеидов, в частности, аполипопротеина Е в патогенезе БАС исследуется уже в течение нескольких десятилетий (Maciejek et al. 1988). Предпосылками для продолжения исследований аполипопротеина Е при БАС послужили сообщения о развитии заболевания у лиц, принимающих высокие дозы противолипидемической терапии (Golomb et al. 2009), а также сообщения об ухудшении течения и уменьшении выживаемости у пациентов с БАС, принимающих статины (Drory et al. 2008; Nefussy et al. 2011). Данные сообщения рассматривались в качестве подтверждения роли дислипидемии в качестве некоего протективного фактора при БАС (Goldstein et al. 2008). При этом в ряде исследований протекторное значение гиперлипидемии у пациентов с БАС было доказано (Dupuis et al. 2008). В качестве гена-кандидата, объясняющего защитную роль гиперлипидемии при БАС, был выбран ген АРОЕ, так как полиморфизмы именно в этом гене являются рисковыми при развитии ишемической болезни сердца и ассоциируются с толщиной комплекса интима-медиа в сосудистой стенке (Paternoster et al. 2010; Tanguturi et al. 2013). Однако данные о влиянии полиморфизмов в гене АРОЕ на развитие БАС и о патологической роли статинов при БАС остаются противоречивыми (Jawaid et al. 2011; Zheng et al. 2012).

Убедительная связь апоЕ с нейродегенеративной патологией продемонстрирована при болезни Альцгеймера (БА). Так, в различных популяциях мира выявлена выраженная ассоциация аллеля апоЕ-Е4 с данным заболеванием, а также «неблагоприятный» дозозависимый эффект аллеля Е4 в отношении возраста манифестации БА. Как было показано в исследованиях, каждая копия аллеля апоЕ-Е4 приближает начало болезни на 7—9 лет (Higgins et al. 1997; Mahley et al. 2006). Подтверждением патогенетической значимости ассоциаций аллелей апоЕ и Б А являются данные (Strittmatter and Roses, 1996) о взаимосвязи различных генетических вариантов апоЕ с особенностями

клинической картины заболевания, интенсивностью депонирования ß-амилоида в сенильных бляшках и стенках церебральных сосудов, реакцией на проводимое лечение. Повышенная частота аллеля апоЕ-Е4 обнаружена также у больных кортико-базальной дегенерацией, болезнью Пика и прогрессирующим надъядерным параличом (Schneider et al. 1995). При деменции с тельцами Леви у носителей апоЕ-Е4 выявлена более высокая плотность телец Леви по сравнению с больными, имеющими другие аллели гена апоЕ (Mann et al. 1998). Противоречивы данные о связи апоЕ-е4 с болезнью Паркинсона (Zareparsi et al. 1997; Загоровская с соавт. 2003), но некоторыми исследователями (Kruger et al. 1999) такая связь была выявлена, особенно при комбинации апоЕ-Е4 с определенным гаплотипом гена а-синуклеина. Предполагается также существенное влияние апоЕ на интенсивность течения нейродегенеративного процесса (Higgins et al. 1997; Sporis et al. 2005).

Данные упомянутых выше исследований, показавших заинтересованность апоЕ при ряде нейродегенеративных заболеваний в сочетании с противоречивыми сообщениями о роли апоЕ в патогенезе БАС позволяют предполагать если не ключевое, то хотя бы модулирующее влияние апоЕ при БАС.

Таким образом, в настоящее время накоплено большое количество фактов, подтверждающих роль генетических факторов в развитии БАС. Они включают как гены, обуславливающие развитие моногенных форм заболевания, так и предрасполагающие локусы, составляющие некий генетический фон и модифицирующие действие остальных генов. При этом степень значимости генетических факторов и вклад конкретных локусов варьирует в зависимости от популяции. Для пациентов, страдающих, БАС, принадлежащих к российской, преимущественно, славянской этнической группе роль данных факторов и место генетического исследования в структуре обследования пациентов с БАС не определены. Поэтому проведение мутационного скрининга и анализ генетических ассоциаций ряда генов, белковые продукты которых вовлечены в патологические каскады при БАС,

имеет большое значение и позволит определить профиль генетической предрасположенности к БАС в России.

Заключение диссертации по теме «Нервные болезни», Лысогорская, Елена Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В обследованной невыборочной серии случаев БАС, представляющей все основные клинические варианты заболевания, частота семейных форм составила 4,3%, а частота спорадической формы болезни - 95,7%. Для семейного БАС характерным оказался более ранний возраст дебюта симптомов по сравнению со спорадической формой заболевания (40,5 уб 48 лет), других клинических различий между указанными группами больных не выявлено.

2. При анализе клинико-генетических корреляций установлено, что БАС характеризуется выраженным полиморфизмом клинических проявлений как в рамках конкретных молекулярных форм болезни (АЬ81, АЬБ9), так и у носителей одной и той же мутации (например, мутации Ьеи84Уа1 и АБп868ег в гене БОЭ!, Рго218ег в гене АЫС). При этом вариабельность симптоматики БАС касается возраста дебюта заболевания, его формы и темпа прогрессирования

3. При спорадической форме БАС установлены спектр и частота мутаций в генах БОИ 1 и АМО, составившие в российской популяции 3% и 1,5% соответственно, и не обнаружены кодирующие мутации в 6-м (наиболее часто мутирующем) экзоне гена ТА1ЮРВ. Выявленные частоты мутаций в изученных генах отражают особенность российской выборки пациентов с БАС, которую необходимо учитывать при проведении ДНК-тестирования.

4. Большинство наследуемых форм БАС связано с повреждениями гена БОИ!, частота мутаций в котором составила 50% в обследованных случаях БАС в российских отягощенных семьях.

5. В славянской популяции европейской части России риск развития БАС ассоциирован с:

• носительством А-аллеля и А/А-генотипа в полиморфном сайте -2578А/С гена УЕОБ (соответственно, 51% уб. 44% в контроле, р=0,008 и 28% уб. 19% в контроле, р=0,001);

• носительством делеции с.715-126с1еЮ в пятом интроне гена ТАКОВР (20% уб. 14,5% в контроле, р=0,002);

• носительством 28-32 копий тандемных тринуклеотидных С АО-повторов в гене АТХЫ2 (5% уб. 1,7% в контроле, р=0,048).

6. Проведенное исследование позволило уточнить ряд патогенетических механизмов гибели мотонейронов при БАС:

• роль конформационных изменений белка 8СЮ1 обоснована данными молекулярного моделирования (понижение энергии мутантного белка в результате выявленных точковых мутаций гена);

• нарушения метаболизма РНК при БАС подтверждено наличием мутаций в гене АИС и ассоциаций болезни с генами АТХЫ2 и ТАЯОВР.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные результаты комплексного клинико-генетического исследования позволяют обосновать необходимость проведения скрининга на наличие мутаций в гене 80й1 и процедуры медико-генетического консультирования ближайшим кровным родственникам больных БАС при наличии семейного анамнеза заболевания с использованием разработанных в данном исследовании оригинальных протоколов молекулярно-генетического анализа. Вариабельность симптоматики семейных и спорадических форм БАС не позволяет сформулировать четкие рекомендации по отбору кандидатных генов для поиска мутаций в зависимости от фенотипа, поэтому при необходимости осуществления медико-генетического консультирования и ДНК-диагностики у российских пациентов следует проводить тотальный мутационный скрининг основных генов БАС, начиная с генов ЯОИ! и АЫС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Лысогорская, Елена Владимировна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андерсен П.М. (2001). "Генетика бокового амиотрофического склероза." Журнал неврологии и психиатрии им.С.С.Корсакова (3): 54-63.

2. Брусов О.С, Шадрина М.И., Сломинский П.А., В.И. Скворцова, М.М. Герасимова, Кондратьева Е.А., Левицкая Н.И., Левицкий Г.Н., Алёхин A.B., Ботвинко Т.М., Карахан В.Б., Сердюк A.B. (2003). "Ассоциация гомозиготности по коротному аалелю (S) гена тяжелых нейрофиламентов с болезнью двигательного нейрона и развитием оксидантного стресса " Журнал неврологии и психиатрии им.С.С.Корсакова(2): 38-44.

3. Васильев A.B., Шмаров М.М„ Тутыхина И.Л., Воробьева A.A., Народицкий Б.С., Захарова М.Н. (2008). "Роль фактора роста эндотелия сосудов в развитии бокового амиотрофического склероза." Нейрохимия 25(4): 331-334.

4.Васильев A.B. (2008). Клинико-юиохимические особенности бокового амиотрофиечского склероза у лиц молодого возраста. Канд.Дисс.

5. Завалишин, И.А. (2007). Клиника, классификация, диагностика. . Москва, Евразия+.

6. Завалишин, И.А. (2009). Боковой амиотрофический склероз. Москва, ГЭОТАР-Медиа.

7.3агоровская Т.Б., Маркова Е.Д., Иванова-Смоленская И.А. (2003). "Модифицирующий эффект гена аполипопротеина Е при болезни Паркинсона. Медицинская генетика(7): 320-323.

8. Захарова, М.Н. (2001). Боковой амиотрофический склероз и окислительный стресс. Докт.Дисс.

9. Захарова, М.Н. (2007). Этиология и патогенез. Боковой амиотрофический склероз. Завалицин И.А. Москва, Евразия+. 8: 354-423.

10. Иллариошкин, С.Н. (2003). Конформационные болезни мозга. Москва, Янус-К.

11 .Иллариошкин, С.Н. (2004). ДНК-диагностика и медико-генетическое консультирование. Москва, МИА.

12. Иллариошкин, С.Н. (2007). Генетика. Боковой амиотрофический склероз. Москва, Евразия+. 6: 230-255.

13. Инге-Вечтомов, С. Г. (1989). Генетика с основами селекции. Москва, Высшая школа.

14. Кондратьева Е.А., Сломинский П.А., Шадрина М.И., Левицкий Г.Н., Скворцова В.И., Лимборская С.А. Спорадический боковой амиотрофический склероз у пациентов с Asp90Ala мутацией медь-цинксодержащей супероксиддисмутазы в России.. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова, 2000, №1, стр. 44;47.

15. Лимборская С..А., Скворцова В.И., Левицкий Г.Н. (2005). "Современные представления об этиологии, патогенезе и лечении болезни двигательного неврона." Журнал неврологии и психиатрии им.С.С.Корсакова(1): 4-12.

16. Попова, Л.М. (1998). Амиотрофический боковой склероз в условиях продленной жизни. Москва, Медицина.

17. Скворцова В.И., Брусов О. С., Лимборская С.А., Шадрина М.И., Сломинский П.А., Кондратьева Е.А., Левицкая Н.И., Левицкий Г.Н., Карахан В.Б.. Сердюк A.B., Алехин A.B., Лыско А.И. (2003). " Особенности спорадическо болезни двигательного нейрона , ассоциированной с мутациями D90A и G12R,B российской популяции. Журнал неврологии и психиатрии им.С.С.Корсакова(11): 46-52.

18. Скворцова В.И., Смирнов А.П., Алехин A.B., Ковражкина Е.А. (2009). "Факторы риска бокового амиотрофического склероза: исследвоание "случай-контроль"." Журнал неврологии и психиатрии имени С.С.Корсакова 109(2): 69-72.

19. Скворцова В.И., Брусов О.С., Лыско А.И., Карахан В.Б., Левицкая Н.И., Левицкий Г.Н., Алёхин A.B., Сердюк A.B. Активность супероксиддисмутаз и маркеры оксидатного стресса при болезни двигательного нейрона. Сборник "Актуальные вопросы научно-практической медицины", Орёл, 2003, стр. 411415.

20. Скворцова В.И., Смирнов А.П., Алехин A.B., Ковражкина Е.А. (2009) «Клинико-эпидемиологическое исследование болезни двигательного нейрона в Москве». Журнал неврологии и психиатрии имени С.С.Корсакова 109(3): 53-55.

21. Скворцова В.И., Сломинский П.А., Шадрина М.И., Левицкий Г.Н, Левицкая Н. И., Алехин A.B., Жеребцова А.Л., Сердюк A.B., Лимборская С. А. (2006) «Полиморфизм генов системы детоксикации и предрасположенность к болезни двигательного нейрона» Журнал неврологии и психиатрии имени С.С.Корсакова 106(1): 4-13.

22. Суслина З.А., Иллариошкин С.Н., Завалишин И.А., Захарова М.Н., Народицкий Б.С., Шмаров М.М., Тарантул В.З. с соавт. (2008). "Генная терапия бокового амиотрофического склероза." Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 145(4): 467-470.

23.Шелковникова, Т.А. Цветков Ф.О. (2012). "Протеинопатии - формы нейродегенеративных заболеваний, в основе которых лежит патологическая агрегация белков." Молекулярная биология 46(402-415).

24. Al-Chalabi, А., Р. М. Andersen, В. Chioza, С. Shaw, Р. С. Sham, W. Robberecht, G. Matthijs, W. Camu, S. L. Marklund, L. Forsgren, G. Rouleau, N. G. Laing, P. V. Hurse, T. Siddique, P. N. Leigh and J. F. Powell (1998). "Recessive amyotrophic lateral sclerosis families with the D90A SOD1 mutation share a common founder: evidence for a linked protective factor." Hum Mol Genet 7(13): 2045-2050.

25. Al-Kateb, H., A. P. Boright, L. Mirea, X. Xie, R. Sutradhar, A. Mowjoodi, B. Bharaj, M. Liu, J. M. Bucks a, V. L. Arends, M. W. Steffes, P. A. Cleary, W. Sun, J. M. Lachin, P. S. Thorner, M. Ho, A. J. McKnight, A. P. Maxwell, D. A. Savage, K. K. Kidd, J. R. Kidd, W. C. Speed, T. J. Orchard, R. G. Miller, L. Sun, S. B. Bull and A. D. Paterson (2008). "Multiple superoxide dismutase 1/splicing factor serine alanine 15 variants are associated with the development and progression of diabetic nephropathy: the Diabetes Control and Complications Trial/Epidemiology of Diabetes Interventions and Complications Genetics study." Diabetes 57(1): 218-228.

26. Aman, P., I. Panagopoulos, C. Lassen, T. Fioretos, M. Mencinger, H. Toresson, M. Hoglund, A. Forster, T. H. Rabbitts, D. Ron, N. Mandahl and F. Mitelman (1996). "Expression patterns of the human sarcoma-associated genes FUS and EWS and the genomic structure of FUS." Genomics 37(1): 1-8.

27. Andersen, P. M. and A. Al-Chalabi (2011). "Clinical genetics of amyotrophic lateral sclerosis: what do we really know?" Nat Rev Neurol 7(11): 603-615.

28. Andersen, P. M., P. Nilsson, V. Ala-Hurula, M. L. Keranen, I. Tarvainen, T. Haltia, L. Nilsson, M. Binzer, L. Forsgren and S. L. Marklund (1995). "Amyotrophic lateral sclerosis associated with homozygosity for an Asp90Ala mutation in CuZn-superoxide dismutase." Nat Genet 10(1): 61-66.

29. Andersen, P. M., K. B. Sims, W. W., Xin, R. Kiely, G. O'Neill, J. Ravits, E. Pioro, Y. Harati, R. D. Brower, J. S. Levine, H. U. Heinicke, W. Seltzer, M. Boss and R. H. Brown, Jr. (2003). "Sixteen novel mutations in the Cu/Zn superoxide dismutase gene in amyotrophic lateral sclerosis: a decade of discoveries, defects and disputes." Amyotroph Lateral Scler Other Motor Neuron Disord 4(2): 62-73.

30. Aoki, M., K. Abe, K. Houi, M. Ogasawara, Y. Matsubara, T. Kobayashi, S. Mochio, K. Narisawa and Y. Itoyama (1995). "Variance of age at onset in a Japanese family with amyotrophic lateral sclerosis associated with a novel Cu/Zn superoxide dismutase mutation." Ann Neurol 37(5): 676-679.

31. Arai, T., M. Hasegawa, H. Akiyama, K. Ikeda, T. Nonaka, H. Mori, D. Mann, K. Tsuchiya, M. Yoshida, Y. Hashizume and T. Oda (2006). "TDP-43 is a component of ubiquitin-positive tau-negative inclusions in frontotemporal lobar degeneration and amyotrophic lateral sclerosis." Biochem Biophys Res Commun 351(3): 602-611.

32. Ay, I., J. W. Francis and R. H. Brown, Jr. (2008). "VEGF increases blood-brain barrier permeability to Evans blue dye and tetanus toxin fragment C but not adeno-associated virus in ALS mice." Brain Res 1234: 198-205.

33. Azzouz, M., G. S. Ralph, E. Storkebaum, L. E. Walmsley, K. A. Mitrophanous, S. M. Kingsman, P. Carmeliet and N. D. Mazarakis (2004). "VEGF delivery with retrogradely transported lentivector prolongs survival in a mouse ALS model." Nature 429(6990): 413417.

34. Banks, G. T., A. Kuta, A. M. Isaacs and E. M. Fisher (2008). "TDP-43 is a culprit in human neurodegeneration, and not just an innocent bystander." Mamm Genome 19(5): 299305.

35. Battistini, S., F. Giannini, G. Greco, G. Bibbo, L. Ferrera, V. Marini, R. Causarano, M. Casula, G. Lando, M. C. Patrosso, C. Caponnetto, P. Origone, A. Marocchi, A. Del Corona, G. Siciliano, P. Carrera, V. Mascia, M. Giagheddu, C. Carcassi, S. Orru, C. Garre and S. Penco (2005). "SOD1 mutations in amyotrophic lateral sclerosis. Results from a multicenter Italian study." J Neurol 252(7): 782-788.

36. Beyer, K., J. I. Lao, M. Gomez, N. Riutort, P. Latorre, J. L. Mate and A. Ariza (2002). "Identification of a protective allele against Alzheimer disease in the APOE gene promoter." Neuroreport 13(11): 1403-1405.

37. Bogaert, E., P. Van Damme, K. Poesen, J. Dhondt, N. Hersmus, D. Kiraly, W. Scheveneels, W., Robberecht and L. Van Den Bosch (2010). "VEGF protects motor neurons against excitotoxicity by upregulation of GluR2." Neurobiol Aging 31(12): 2185-2191.

38. Boillee, S. and D. W. Cleveland (2004). "Gene therapy for ALS delivers." Trends Neurosci 27(5): 235-238.

39. Brannstrom T, E. K., Marklund S, Nilsson P (1998). Transgenic mice homozygous for the Asp90Ala human SOD1 mutation develop ALS clinically and histologically. Annual Meeting of the Society for Neuroscience. Los Angeles.

40. Brockington, A., J. Kirby, D. Eggitt, E. Schofield, C. Morris, C. E. Lewis, P. G. Ince and P. J. Shaw (2005). "Screening of the regulatory and coding regions of vascular endothelial growth factor in amyotrophic lateral sclerosis." Neurogenetics 6(2): 101-104.

41. Brooks, B. R., R. G. Miller, M. Swash, T. L. Munsat and D. World Federation of Neurology Research Group on Motor Neuron (2000). "El Escorial revisited: revised criteria for the diagnosis of amyotrophic lateral sclerosis." Amyotroph Lateral Scler Other Motor Neuron Disord 1(5): 293-299.

42. Brown, J. A., J. Min, J. F. Staropoli, E. Collin, S. Bi, X. Feng, R. Barone, Y. Cao, L. O'Malley, W. Xin, T. E. Mullen and K. B. Sims (2012). "SOD1, ANG, TARDBP and FUS mutations in amyotrophic lateral sclerosis: a United States clinical testing lab experience." Amyotroph Lateral Scler 13(2): 217-222.

43. Brown, R. C., A. H. Lockwood and B. R. Sonawane (2005). "Neurodegenerative diseases: an overview of environmental risk factors." Environ Health Perspect 113(9): 12501256.

44. Buratti, E. and F. E. Baralle (2008). "Multiple roles of TDP-43 in gene expression, splicing regulation, and human disease." Front Biosci 13: 867-878.

45. Byrne, S., C. Walsh, C. Lynch, P. Bede, M. Elamin, K. Kenna, R. McLaughlin and O. Hardiman (2011). "Rate of familial amyotrophic lateral sclerosis: a systematic review and meta-analysis." J Neurol Neurosurg Psychiatry 82(6): 623-627.

46. Cedazo-Minguez, A. (2007). "Apolipoprotein E and Alzheimer's disease: molecular mechanisms and therapeutic opportunities." J Cell Mol Med 11(6): 1227-1238.

47. Chang, S., T. ran Ma, R. D. Miranda, M. E. Balestra, R. W. Mahley and Y. Huang (2005). "Lipid- and receptor-binding regions of apolipoprotein E4 fragments act in concert to cause mitochondrial dysfunction and neurotoxicity." Proc Natl Acad Sci USA 102(51): 18694-18699.

48. Chen, D., L. Shen, L. Wang, A. Lu, H. Zhang, X. Zhang, Y. Zhang, W. Shui, L. Li, D. Fan and J. Zhang (2007). "Association of polymorphisms in vascular endothelial growth factor gene with the age of onset of amyotrophic lateral sclerosis." Amyotroph Lateral Scler 8(3): 144-149.

50. Clement, A. M., M. D. Nguyen, E. A. Roberts, M. L. Garcia, S. Boillee, M. Rule, A. P. McMahon, W. Doucette, D. Siwek, R. J. Ferrante, R. H. Brown, Jr., J. P. Julien, L. S. Goldstein and D. W. Cleveland (2003). "Wild-type nonneuronal cells extend survival of SOD1 mutant motor neurons in ALS mice." Science 302(5642): 113-117.

51. Cluskey, S. and D. B. Ramsden (2001). "Mechanisms of neurodegeneration in amyotrophic lateral sclerosis." Mol Pathol 54(6): 386-392.

52. Colombrita, C., E. Zennaro, C. Fallini, M. Weber, A. Sommacal, E. Buratti, V. Silani and A. Ratti (2009). "TDP-43 is recruited to stress granules in conditions of oxidative insult." J Neurochem 111(4): 1051-1061.

53. Corrado, L., L. Mazzini, G. D. Oggioni, B. Luciano, M. Godi, A. Brusco and S. D'Alfonso (2011). "ATXN-2 CAG repeat expansions are interrupted in ALS patients." Hum Genet 130(4): 575-580.

54. Cova, E., A. Ghiroldi, S. Guareschi, G. Mazzini, S. Gagliardi, A. Davin, M. Bianchi, M. Ceroni and C. Cereda (2010). "G93A SOD1 alters cell cycle in a cellular model of Amyotrophic Lateral Sclerosis." Cell Signal 22(10): 1477-1484.

55. Crabtree, B., N. Thiyagarajan, S. H. Prior, P. Wilson, S. Iyer, T. Ferns, R. Shapiro, K. Brew, V. Subramanian and K. R. Acharya (2007). "Characterization of human angiogenin variants implicated in amyotrophic lateral sclerosis." Biochemistry 46(42): 11810-11818.

56.Crow, J. P., J. B. Sampson, Y. Zhuang, J. A. Thompson and J. S. Beckman (1997). "Decreased zinc

affinity of amyotrophic lateral sclerosis-associated superoxide dismutase mutants leads to enhanced catalysis of tyrosine nitration by peroxynitrite." J Neurochem 69(5): 1936-1944.

57. Cudkowicz, M. E., D. McKenna-Yasek, P. E. Sapp, W. Chin, B. Geller, D. L. Hayden, D. A. Schoenfeld, B. A. Hosier, H. R. Horvitz and R. H. Brown (1997). "Epidemiology of

mutations in superoxide dismutase in amyotrophic lateral sclerosis." Ann Neurol 41(2): 210-221.

58. Daoud, H., V. Belzil, S. Martins, M. Sabbagh, P. Provencher, L. Lacomblez, V. Meininger, W. Camu, N. Dupre, P. A. Dion and G. A. Rouleau (2011). "Association of long ATXN2 CAG repeat sizes with increased risk of amyotrophic lateral sclerosis." Arch Neurol 68(6): 739-742.

59. Del Bo, R., M. Scarlato, S. Ghezzi, F. Martinelli-Boneschi, S. Corti, F. Locatelli, D. Santoro, A. Prelle, C. Briani, M. Nardini, G. Siciliano, M. Mancuso, L. Murri, N. Bresolin and G. P. Comi (2008). "Absence of angiogenic genes modification in Italian ALS patients." Neurobiol Aging 29(2): 314-316.

60. Deng, H. X., W. Chen, S. T. Hong, K. M. Boycott, G. H. Gorrie, N. Siddique, Y. Yang, F. Fecto, Y. Shi, H. Zhai, H. Jiang, M. Hirano, E. Rampersaud, G. H. Jansen, S. Donkervoort, E. H. Bigio, B. R. Brooks, K. Ajroud, R. L. Sufit, J. L. Haines, E. Mugnaini, M. A. Pericak-Vance and T. Siddique (2012). "Mutations in UBQLN2 cause dominant X-linked juvenile and adult-onset ALS and ALS/dementia." Nature 477(7363): 211-215.

61. Deng, H. X., J. A. Tainer, H. Mitsumoto, A. Ohnishi, X. He, W. Y. Hung, Y. Zhao, T. Juneja, A. Hentati and T. Siddique (1995). "Two novel SOD1 mutations in patients with familial amyotrophic lateral sclerosis." Hum Mol Genet 4(6): 1113-1116.

62. Dewil, M., D. Lambrechts, R. Sciot, P. J. Shaw, P. G. Ince, W. Robberecht and L. Van den Bosch (2007). "Vascular endothelial growth factor counteracts the loss of phospho-Akt preceding motor neurone degeneration in amyotrophic lateral sclerosis." Neuropathol Appl Neurobiol 33(5): 499-509.

63. Doi, H., K. Okamura, P. O. Bauer, Y. Furukawa, H. Shimizu, M. Kurosawa, Y. Machida, H. Miyazaki, K. Mitsui, Y. Kuroiwa and N. Nukina (2008). "RNA-binding protein TLS is a major nuclear aggregate-interacting protein in huntingtin exon 1 with expanded polyglutamine-expressing cells." J Biol Chem 283(10): 6489-6500.

64. Drory, V. E., T. Bronipolsky, I. Artamonov and B. Nefussy (2008). "Influence of statins treatment on survival in patients with amyotrophic lateral sclerosis." J Neurol Sci 273(1-2): 81-83.

65. Dupuis, L., P. Corcia, A. Fergani, J. L. Gonzalez De Aguilar, D. Bonnefont-Rousselot, R. Bittar, D. Seilhean, J. J. Hauw, L. Lacomblez, J. P. Loeffler and V. Meininger (2008). "Dyslipidemia is a protective factor in amyotrophic lateral sclerosis." Neurology 70(13): 1004-1009.

66. Elden, A. C., H. J. Kim, M. P. Hart, A. S. Chen-Plotkin, B. S. Johnson, X. Fang, M. Armakola, F. Geser, R. Greene, M. M. Lu, A. Padmanabhan, D. Clay-Falcone, L. McCluskey, L. Elman, D. Juhr, P. J. Gruber, U. Rub, G. Auburger, J. Q. Trojanowski, V. M. Lee, V. M. Van Deerlin, N. M. Bonini and A. D. Gitler (2010). "Ataxin-2 intermediate-length polyglutamine expansions are associated with increased risk for ALS." Nature 466(7310): 1069-1075.

fcr. .

* ^ 1

67. Ermilova, I. P., V. B. Ermilov, M. Levy, E. Ho, C. Pereira and J. S. Beckman (2005). "Protection by dietary zinc in ALS mutant G93A SOD transgenic mice." Neurosci Lett 379(1): 42-46.

68. Esteban, J., D. R. Rosen, A. C. Bowling, P. Sapp, D. McKenna-Yasek, J. P. O'Regan, M. F. Beal, H. R. Horvitz and R. H. Brown, Jr. (1994). "Identification of two novel mutations and a new polymorphism in the gene for Cu/Zn superoxide dismutase in patients with amyotrophic lateral sclerosis." Hum Mol Genet 3(6): 997-998.

69. Fernandez-Santiago, R., M. Sharma, J. C. Mueller, H. Gohlke, T. Illig, J. Anneser, C. Munch, A. Ludolph, C. Kamm and T. Gasser (2006). "Possible gender-dependent association of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene and ALS." Neurology 66(12): 1929-1931.

70. Ferraiuolo, L., J. Kirby, A. J. Grierson, M. Sendtner and P. J. Shaw (2011). "Molecular pathways of motor neuron injury in amyotrophic lateral sclerosis." Nat Rev Neurol 7(11): 616-630.

71. Friesen, W. J., S. Massenet, S. Paushkin, A. Wyce and G. Dreyfuss (2001). "SMN, the product of the spinal muscular atrophy gene, binds preferentially to dimethylarginine-containing protein targets." Mol Cell 7(5): 1111-1117.

72. Garden, D. P. and B. S. Zhorov (2010). "Docking flexible ligands in proteins with a solvent exposure- and distance-dependent dielectric function." J Comput Aided Mol Des 24(2): 91-105.

73. Gilhus N.E., В. M. P., Brainin M. (2012). Клинические рекомендации no неврологии Европейской федерации неврологических сообществ (пер. с англ.). Москва, АБВ-пресс.

74. Goldstein, М. R., L. Mascitelli and F. Pezzetta (2008). "Dyslipidemia is a protective factor in amyotrophic lateral sclerosis." Neurology 71(12): 956; author reply 956-957.

75. Golomb, В. A., E. K. Kwon, S. Koperski and M. A. Evans (2009). "Amyotrophic lateral sclerosis-like conditions in possible association with cholesterol-lowering drugs: an analysis of patient reports to the University of California, San Diego (UCSD) Statin Effects Study." Drug Saf 32(8): 649-661.

76. Greenberg, D. A. and K. Jin (2004). "VEGF and ALS: the luckiest growth factor?" Trends Mol Med 10(1): 1-3.

77. Greenway, M. J., P. M. Andersen, C. Russ, S. Ennis, S. Cashman, C. Donaghy, V. Patterson, R. Swingler, D. Kieran, J. Prehn, К. E. Morrison, A. Green, K. R. Acharya, R. H. Brown, Jr. and O. Hardiman (2006). "ANG mutations segregate with familial and 'sporadic' amyotrophic lateral sclerosis." Nat Genet 38(4): 411-413.

78. Gros-Louis, F., S. Laurent, A. A. Lopes, J. Khoris, V. Meininger, W. Camu and G. A. Rouleau (2003). "Absence of mutations in the hypoxia response element of VEGF in ALS." Muscle Nerve 28(6): 774-775.

79. Guerreiro, R. J., J. C. Schymick, C. Crews, A. Singleton, J. Hardy and B. J. Traynor (2008). "TDP-43 is not a common cause of sporadic amyotrophic lateral sclerosis." PLoS One 3(6): e2450.

80. Gupta, P. K., S. Prabhakar, S. Sharma and A. Anand (2011). "Vascular endothelial growth factor-A (VEGF-A) and chemokine ligand-2 (CCL2) in amyotrophic lateral sclerosis (ALS) patients." J Neuroinflammation 8: 47.

81. Gurney, M. E. (2000). "What transgenic mice tell us about neurodegenerative disease." Bioessays 22(3): 297-304.

82. Haley, R. (2003). "Excess incidence of ALS in young Gulf War veterans." Neurology 61 (6): 750-856.

83. Higgins, G. A., C. H. Large, H. T. Rupniak and J. C. Barnes (1997). "Apolipoprotein E and Alzheimer's disease: a review of recent studies." Pharmacol Biochem Behav 56(4): 675685.

84. Huang, Y. (2006). "Molecular and cellular mechanisms of apolipoprotein E4 neurotoxicity and potential therapeutic strategies." Curr Opin Drug Discov Devel 9(5): 627641.

85. Ilzecka, J. (2004). "Cerebrospinal fluid vascular endothelial growth factor in patients with amyotrophic lateral sclerosis." Clin Neurol Neurosurg 106(4): 289-293.

86. Imbert, G., F. Saudou, G. Yvert, D. Devys, Y. Trottier, J. M. Gamier, C. Weber, J. L. Mandel, G. Cancel, N. Abbas, A. Durr, O. Didierjean, G. Stevanin, Y. Agid and A. Brice (1996). "Cloning of the gene for spinocerebellar ataxia 2 reveals a locus with high sensitivity to expanded CAG/glutamine repeats." Nat Genet 14(3): 285-291.

87. Ischiropoulos, H. and J. S. Beckman (2003). "Oxidative stress and nitration in neurodegeneration: cause, effect, or association?" J Clin Invest 111(2): 163-169.

88. Jawaid, A., M. Poon, A. M. Strutt, L. K. Rice, E. J. McDowell, A. R. Salamone, S. U. Qureshi, E. Simpson, S. H. Appel, M. K. York and P. E. Schulz (2011). "Does apolipoprotein E genotype modify the clinical expression of ALS?" Eur J Neurol 18(4): 618-624.

89. Kidd, P. M. (2005). "Neurodegeneration from mitochondrial insufficiency: nutrients, stem cells, growth factors, and prospects for brain rebuilding using integrative management." Altern Med Rev 10(4): 268-293.

90. Kruger, R., A. M. Vieira-Saecker, W. Kuhn, D. Berg, T. Muller, N. Kuhnl, G. A. Fuchs, A. Storch, M. Hungs, D. Woitalla, H. Przuntek, J. T. Epplen, L. Schols and O. Riess (1999). "Increased susceptibility to sporadic Parkinson's disease by a certain combined alpha-synuclein/apolipoprotein E

genotype." Ann Neurol 45(5): 611-617.

91. Kunst, C. B. (2004). "Complex genetics of amyotrophic lateral sclerosis." Am J Hum Genet 75(6): 933-947.

92. Kwiatkowski, T. J., Jr., D. A. Bosco, A. L. Leclerc, E. Tamrazian, C. R. Vanderburg, C. Russ, A. Davis, J. Gilchrist, E. J. Kasarskis, T. Munsat, P. Valdmanis, G. A. Rouleau, B. A. Hosier, P. Cortelli, P. J. de Jong, Y. Yoshinaga, J. L. Haines, M. A. Pericak-Vance, J. Yan, N. Ticozzi, T. Siddique, D. McKenna-Yasek, P. C. Sapp, H. R. Horvitz, J. E. Landers and R. H. Brown, Jr. (2009). "Mutations in the FUS/TLS gene on chromosome 16 cause familial amyotrophic lateral sclerosis." Science 323(5918): 1205-1208.

93. Lagier-Tourenne, C. and D. W. Cleveland (2009). "Rethinking ALS: the FUS about TDP-43." Cell 136(6): 1001-1004.

94. Lai, S. L., Y. Abramzon, J. C. Schymick, D. A. Stephan, T. Dunckley, A. Dillman, M. Cookson, A. Calvo, S. Battistini, F. Giannini, C. Caponnetto, G. L. Mancardi, R. Spataro, M. R. Monsurro, G. Tedeschi, K. Marinou, M. Sabatelli, A. Conte, J. Mandrioli, P. Sola, F. Salvi, I. Bartolomei, F. Lombardo, G. Mora, G. Restagno, A. Chio and B. J. Traynor (2011). "FUS mutations in sporadic amyotrophic lateral sclerosis." Neurobiol Aging 32(3): 550 e551-554.

95. Lambrechts, D., K. Poesen, R. Fernandez-Santiago, A. Al-Chalabi, R. Del Bo, P. W. Van Vught, S. Khan, S. L. Marklund, A. Brockington, I. van Marion, J. Anneser, C. Shaw, A. C. Ludolph, N. P. Leigh, G. P. Comi, T. Gasser, P. J. Shaw, K. E. Morrison, P. M. Andersen, L. H. Van den Berg, V. Thijs, T. Siddique, W. Robberecht and P. Carmeliet (2009). "Meta-analysis of vascular endothelial growth factor variations in amyotrophic lateral sclerosis: increased susceptibility in male carriers of the -2578AA genotype." J Med Genet 46(12): 840-846.

96. Lambrechts, D., E. Storkebaum and P. Carmeliet (2004). "VEGF: necessary to prevent motoneuron degeneration, sufficient to treat ALS?" Trends Mol Med 10(6): 275-282.

97. Lambrechts, D., E. Storkebaum, M. Morimoto, J. Del-Favero, F. Desmet, S. L. Marklund, S. Wyns, V. Thijs, J. Andersson, I. van Marion, A. Al-Chalabi, S. Bornes, R. Musson, V. Hansen, L. Beckman, R. Adolfsson, H. S. Pall, H. Prats, S. Vermeire, P. Rutgeerts, S. Katayama, T. Awata, N. Leigh, L. Lang-Lazdunski, M. Dewerchin, C. Shaw, L. Moons, R. Vlietinck, K. E. Morrison, W. Robberecht, C. Van Broeckhoven, D. Collen, P. M. Andersen and P. Carmeliet (2003). "VEGF is a modifier of amyotrophic lateral sclerosis in mice and humans and protects motoneurons against ischemic death." Nat Genet 34(4): 383-394.

98. Leinweber, B., E. Barofsky, D. F. Barofsky, V. Ermilov, K. Nylin and J. S. Beckman (2004). "Aggregation of ALS mutant superoxide dismutase expressed in Escherichia coli." Free Radic Biol Med 36(7): 911-918.

99. Logroscino, G., B. J. Traynor, O. Hardiman, A. Chio, D. Mitchell, R. J. Swingler, A. Millul, E. Benn and E. Beghi (2009). "Incidence of amyotrophic lateral sclerosis in Europe." J Neurol Neurosurg Psychiatry 81(4): 385-390.

11 w t

Vl

100. Luigetti, M., A. Conte, F. Madia, G. Marangi, M. Zollino, I. Mancuso, M. Dileone, A. Del Grande, V. Di Lazzaro, P. A. Tonali and M. Sabatelli (2009). "Heterozygous SOD1 D90A mutation presenting as slowly progressive predominant upper motor neuron amyotrophic lateral sclerosis." Neurol Sci 30(6): 517-520.

101. Luquin, N., B. Yu, R. J. Trent, J. M. Morahan and R. Pamphlett (2008). "An analysis of the entire SOD1 gene in sporadic ALS." Neuromuscul Disord 18(7): 545-552.

102. Maciejek, Z., B. Jazdzewski, K. Nicpon and S. Ochmanski (1988). "[Plasma and erythrocyte lipids in amyotrophic lateral sclerosis]." Neurol Neurochir Pol 22(5): 387-393.

103. Mackenzie, I. R., R. Rademakers and M. Neumann (2010). "TDP-43 and FUS in amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal dementia." Lancet Neurol 9(10): 995-1007.

104. Mahley, R. W., K. H. Weisgraber and Y. Huang (2006). "Apolipoprotein E4: a causative factor and therapeutic target in neuropathology, including Alzheimer's disease." Proc Natl Acad Sci U S A 103(15): 5644-5651.

105. Mann, D. M., S. M. Brown, F. Owen, M. Baba and T. Iwatsubo (1998). "Amyloid beta protein (A beta) deposition in dementia with Lewy bodies: predominance of A beta 42(43) and paucity of A beta 40 compared with sporadic Alzheimer's disease." Neuropathol Appl Neurobiol 24(3): 187-194.

106. Martin, R., R. Lahlil, A. Damert, L. Miquerol, A. Nagy, G. Keller and T. Hoang (2004). "SCL interacts with VEGF to suppress apoptosis at the onset of hematopoiesis." Development 131(3): 693-702.

107. Matsumoto, T. and L. Claesson-Welsh (2001). "VEGF receptor signal transduction." Sci STKE 2001(112): re21.

108. Mattiazzi, M., M. D'Aurelio, C. D. Gajewski, K. Martushova, M. Kiaei, M. F. Beal and G. Manfredi (2002). "Mutated human SOD1 causes dysfunction of oxidative phosphorylation in mitochondria of transgenic mice." J Biol Chem 277(33): 29626-29633.

109. McLaughlin, R. L., J. Phukan, W. McCormack, D. S. Lynch, M. Greenway, S. Cronin, J. Saunders, A. Slowik, B. Tomik, P. M. Andersen, D. G. Bradley, P. Jakeman and O. Hardiman (2010). "Angiogenin levels and ANG genotypes: dysregulation in amyotrophic lateral sclerosis." PLoS One 5(11): el5402.

110. Meissirel, C., C. Ruiz de Almodovar, E. Knevels, C. Coulon, N. Chounlamountri, I. Segura, P. de Rossi, S. Vinckier, K. Anthonis, B. Deleglise, M. de Mol, C. Ali, K. Dassonville, E. Loyens, J. Honnorat, Y. Michotte, V. Rogemond, I. Smolders, T. Voets, D. Vivien, P. Vanden Berghe, L. Van den Bosch, W. Robberecht, A. Chedotal, S. Oliviero, M. Dewerchin, D. Schmucker, N. Thomasset, P. Salin and P. Carmeliet (2011). "VEGF modulates NMDA receptors activity in cerebellar granule cells through Src-family kinases before synapse formation." Proc Natl Acad Sci U S A 108(33): 13782-13787.

111. Meissner, F., K. Molawi and A. Zychlinsky (2010). "Mutant superoxide dismutase 1-induced IL-lbeta accelerates ALS pathogenesis." Proc Natl Acad Sci U S A 107(29): 13046-13050.

112. Millecamps, S., F. Salachas, C. Cazeneuve, P. Gordon, B. Bricka, A. Camuzat, L. Guillot-Noel, O. Russaouen, G. Bruneteau, P. F. Pradat, N. Le Forestier, N. Vandenberghe, V. Danel-Brunaud, N. Guy, C. Thauvin-Robinet, L. Lacomblez, P. Couratier, D. Hannequin, D. Seilhean, I. Le Ber, P. Corcia, W. Camu, A. Brice, G. Rouleau, E. LeGuern and V. Meininger (2010). "SOD1, ANG, VAPB, TARDBP, and FUS mutations in familial amyotrophic lateral sclerosis: genotype-phenotype correlations." J Med Genet 47(8): 554560.

113. Miller, R. G., J. D. Mitchell, M. Lyon and D. H. Moore (2007). "Riluzole for amyotrophic lateral sclerosis (ALS)/motor neuron disease (MND)." Cochrane Database Syst Rev(l): CD001447.

114. Nefussy, B., J. Hirsch, M. E. Cudkowicz and V. E. Drory (2011). "Gender-based effect of statins on functional decline in amyotrophic lateral sclerosis." J Neurol Sci 300(1-2): 2327.

115. Oates, N. and R. Pamphlett (2007). "An epigenetic analysis of SOD1 and VEGF in ALS." Amyotroph Lateral Scler 8(2): 83-86.

116. Oosthuyse, B., L. Moons, E. Storkebaum, H. Beck, D. Nuyens, K. Brusselmans, J. Van Dorpe, P. Hellings, M. Gorselink, S. Heymans, G. Theilmeier, M. Dewerchin, V. Laudenbach, P. Vermylen, H. Raat, T. Acker, V. Vleminckx, L. Van Den Bosch, N. Cashman, H. Fujisawa, M. R. Drost, R. Sciot, F. Bruyninckx, D. J. Hicklin, C. Ince, P. Gressens, F. Lupu, K. H. Plate, W. Robberecht, J. M. Herbert, D. Collen and P. Carmeliet (2001). "Deletion of the hypoxia-response element in the vascular endothelial growth factor promoter causes motor neuron degeneration." Nat Genet 28(2): 131-138.

117. Paternoster, L., N. A. Martinez-Gonzalez, R. Charleton, M. Chung, S. Lewis and C. L. Sudlow (2010). "Genetic effects on carotid intima-media thickness: systematic assessment and meta-analyses of candidate gene polymorphisms studied in more than 5000 subjects." Circ Cardiovasc Genet 3(1): 15-21.

118. Paubel, A., J. Violette, M. Amy, J. Praline, V. Meininger, W. Camu, P. Corcia, C. R. Andres and P. Vourc'h (2008). "Mutations of the ANG gene in French patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis." Arch Neurol 65(10): 1333-1336.

119. Phukan, J. (2010). "Arimoclomol, a coinducer of heat shock proteins for the potential treatment of amyotrophic lateral sclerosis." IDrugs 13(7): 482-496.

120. Pulst, S. M., A. Nechiporuk, T. Nechiporuk, S. Gispert, X. N. Chen, I. Lopes-Cendes, S. Pearlman, S. Starkman, G. Orozco-Diaz, A. Lunkes, P. DeJong, G. A. Rouleau, G. Auburger, J. R. Korenberg, C. Figueroa and S. Sahba (1996). "Moderate expansion of a normally biallelic trinucleotide repeat in spinocerebellar ataxia type 2." Nat Genet 14(3): 269-276.

121. Reed, D. M. and J. A. Brody (1975). "Amyotrophic lateral sclerosis and parkinsonismdementia on Guam, 1945-1972.1. Descriptive epidemiology." Am J Epidemiol 101(4): 287301.

122. Rosen, D. R., T. Siddique, D. Patterson, D. A. Figlewicz, P. Sapp, A. Hentati, D. Donaldson, J. Goto, J. P. O'Regan, H. X. Deng and et al. (1993). "Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis." Nature 362(6415): 59-62.

123. Rosenstein, J. M., N. Mani, A. Khaibullina and J. M. Krum (2003). "Neurotrophic effects of vascular endothelial growth factor on organotypic cortical explants and primary cortical neurons." J Neurosci 23(35): 11036-11044.

124. Ross, O. A., N. J. Rutherford, M. Baker, A. I. Soto-Ortolaza, M. M. Carrasquillo, M. DeJesus-Hernandez, J. Adamson, M. Li, K. Volkening, E. Finger, W. W. Seeley, K. J. Hatanpaa, C. Lomen-Hoerth, A. Kertesz, E. H. Bigio, C. Lippa, B. K. Woodruff, D. S. Knopman, C. L. White, 3rd, J. A. Van Gerpen, J. F. Meschia, I. R. Mackenzie, K. Boylan,

B. F. Boeve, B. L. Miller, M. J. Strong, R. J. Uitti, S. G. Younkin, N. R. Graff-Radford, R.

C. Petersen, Z. K. Wszolek, D. W. Dickson and R. Rademakers (2011). "Ataxin-2 repeat-length variation and neurodegeneration." Hum Mol Genet 20(16): 3207-3212.

125. Sahawneh, M. A., K. C. Ricart, B. R. Roberts, V. C. Bomben, M. Basso, Y. Ye, J. Sahawneh, M. C. Franco, J. S. Beckman and A. G. Estevez (2010). "Cu,Zn-superoxide dismutase increases toxicity of mutant and zinc-deficient superoxide dismutase by enhancing protein stability." J Biol Chem 285(44): 33885-33897.

126. Sanpei, K., H. Takano, S. Igarashi, T. Sato, M. Oyake, H. Sasaki, A. Wakisaka, K. Tashiro, Y. Ishida, T. Ikeuchi, R. Koide, M. Saito, A. Sato, T. Tanaka, S. Hanyu, Y. Takiyama, M. Nishizawa, N. Shimizu, Y. Nomura, M. Segawa, K. Iwabuchi, I. Eguchi, H. Tanaka, H. Takahashi and S. Tsuji (1996). "Identification of the spinocerebellar ataxia type 2 gene using a direct identification of repeat expansion and cloning technique, DIRECT." Nat Genet 14(3): 277-284.

127. Sato, T., T. Nakanishi, Y. Yamamoto, P. M. Andersen, Y. Ogawa, K. Fukada, Z. Zhou, F. Aoike, F. Sugai, S. Nagano, S. Hirata, M. Ogawa, R. Nakano, T. Ohi, T. Kato, M. Nakagawa, T. Hamasaki, A. Shimizu and S. Sakoda (2005). "Rapid disease progression correlates with instability of mutant SOD1 in familial ALS." Neurology 65(12): 1954-1957.

128. Schneider, J. A., M. Gearing, R. S. Robbins, W. de lAune and S. S. Mirra (1995). "Apolipoprotein E genotype in diverse neurodegenerative disorders." Ann Neurol 38(1): 131-135.

129. Schymick, J. C„ K. Talbot and B. J. Traynor (2007). "Genetics of sporadic amyotrophic lateral sclerosis." Hum Mol Genet 16 Spec No. 2: R233-242.

130. Skovronsky, D. M., V. M. Lee and J. Q. Trojanowski (2006). "Neurodegenerative diseases: new concepts of pathogenesis and their therapeutic implications." Annu Rev Pathol 1: 151-170.

131. Skvortsova, V., Shadrina, M., Slominsky, P., Levitsky, G., Kondratieva, E., Zherebtsova, A., Levitskaya, N., Alekhin, A., Serdyuk, A., Limborska, S. (2004)."Analysis of heavy neurofilament subunit gene polymorphism in Russian patients with sporadic motor neuron disease (MND)". Eur.J.Hum. Genet. V. 12(3). P. 241-244.

132. Smith, R. A. (1992). Handbook of Amiotrophic Lateral Sclerosis. New York, Marcel Dekker INC.

133. Sporis, D., J. Sertic, N. Henigsberg, D. Mahovic, N. Bogdanovic and T. Babic (2005). "Association of refractory complex partial seizures with a polymorphism of ApoE genotype." J Cell Mol Med 9(3): 698-703.

134. Sreedharan, J., I. P. Blair, V. B. Tripathi, X. Hu, C. Vance, B. Rogelj, S. Ackerley, J. C. Durnall, K. L. Williams, E. Buratti, F. Baralle, J. de Belleroche, J. D. Mitchell, P. N. Leigh, A. Al-Chalabi, C. C. Miller, G. Nicholson and C. E. Shaw (2008). "TDP-43 mutations in familial and sporadic amyotrophic lateral sclerosis." Science 319(5870): 16681672.

135. Stathopulos, P. B., J. A. Rumfeldt, G. A. Scholz, R. A. Irani, H. E. Frey, R. A. Hallewell, J. R. Lepock and E. M. Meiering (2003). "Cu/Zn superoxide dismutase mutants associated with amyotrophic lateral sclerosis show enhanced formation of aggregates in vitro." Proc Natl Acad Sci U S A 100(12): 7021-7026.

136. Storkebaum, E., D. Lambrechts, M. Dewerchin, M. P. Moreno-Murciano, S. Appelmans, H. Oh, P. Van Damme, B. Rutten, W. Y. Man, M. De Mol, S. Wyns, D. Manka, K. Vermeulen, L. Van Den Bosch, N. Mertens, C. Schmitz, W. Robberecht, E. M. Conway, D. Collen, L. Moons and P. Carmeliet (2005). "Treatment of motoneuron degeneration by intracerebroventricular delivery of VEGF in a rat model of ALS." Nat Neurosci 8(1): 85-92.

137. Strittmatter, W. J. and A. D. Roses (1996). "Apolipoprotein E and Alzheimer's disease." Annu Rev Neurosci 19: 53-77.

138. Subramaniam, J. R., W. E. Lyons, J. Liu, T. B. Bartnikas, J. Rothstein, D. L. Price, D. W. Cleveland, J. D. Gitlin and P. C. Wong (2002). "Mutant SOD1 causes motor neuron disease independent of copper chaperone-mediated copper loading." Nat Neurosci 5(4): 301-307.

139. Tanguturi, P., B. Pullareddy, P. Sampath Kumar and D. K. Murthy (2013). "Association Between Apolipoprotein E Gene Polymorphism and Myocardial Infarction." Biochem Genet.

Tenenbaum, L., A. Chtarto, E. Lehtonen, T. Velu, J. Brotchi and M. Levivier (2004). "Recombinant AAV-mediated gene delivery to the central nervous system." J Gene Med 6 Suppl 1: S212-222.

140. Terry, P. D., F. Kamel, D. M. Umbach, T. A. Lehman, H. Hu, D. P. Sandler and J. A. Taylor (2004). "VEGF promoter haplotype and amyotrophic lateral sclerosis (ALS)." J Neurogenet 18(2): 429-434.

141. Ticozzi, N., A. Ratti and V. Silani (2010). "Protein aggregation and defective RNA metabolism as mechanisms for motor neuron damage." CNS Neurol Disord Drug Targets 9(3): 285-296.

142. Tischer, E., R. Mitchell, T. Hartman, M. Silva, D. Gospodarowicz, J. C. Fiddes and J. A. Abraham (1991). "The human gene for vascular endothelial growth factor. Multiple protein forms are encoded through alternative exon splicing." J Biol Chem 266(18): 1194711954.

143. Tolar, M., M. A. Marques, J. A. Harmony and K. A. Crutcher (1997). "Neurotoxicity of the 22 kDa thrombin-cleavage fragment of apolipoprotein E and related synthetic peptides is receptor-mediated." J Neurosci 17(15): 5678-5686.

144. Valdmanis, P. N., H. Daoud, P. A. Dion and G. A. Rouleau (2009). "Recent advances in the genetics of amyotrophic lateral sclerosis." Curr Neurol Neurosci Rep 9(3): 198-205.

145. Van Damme, P., J. H. Veldink, M. van Blitterswijk, A. Corveleyn, P. W. van Vught, V. Thijs, B. Dubois, G. Matthijs, L. H. van den Berg and W. Robberecht (2011). "Expanded ATXN2 CAG repeat size in ALS identifies genetic overlap between ALS and SCA2." Neurology 76(24): 2066-2072.

146. Van Deerlin, V. M., J. B. Leverenz, L. M. Bekris, T. D. Bird, W. Yuan, L. B. Elman, D. Clay, E. M. Wood, A. S. Chen-Plotkin, M. Martinez-Lage, E. Steinbart, L. McCluskey, M. Grossman, M. Neumann, I. L. Wu, W. S. Yang, R. Kalb, D. R. Galasko, T. J. Montine, J. Q. Trojanowski, V. M. Lee, G. D. Schellenberg and C. E. Yu (2008). "TARDBP mutations in amyotrophic lateral sclerosis with TDP-43 neuropathology: a genetic and histopathological analysis." Lancet Neurol 7(5): 409-416.

147. Van Den Bosch, L., E. Storkebaum, V. Vleminckx, L. Moons, L. Vanopdenbosch, W. Scheveneels, P. Carmeliet and W. Robberecht (2004). "Effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) on motor neuron degeneration." Neurobiol Dis 17(1): 21-28.

148. Van Vught, P. W., N. A. Sutedja, J. H. Veldink, B. P. Koeleman, G. J. Groeneveld, C. Wijmenga, B. M. Uitdehaag, J. M. de Jong, F. Baas, J. H. Wokke and L. H. Van den Berg (2005). "Lack of association between VEGF polymorphisms and ALS in a Dutch population." Neurology 65(10): 1643-1645.

149. Vance, C., B. Rogelj, T. Hortobagyi, K. J. De Vos, A. L. Nishimura, J. Sreedharan, X. Hu, B. Smith, D. Ruddy, P. Wright, J. Ganesalingam, K. L. Williams, V. Tripathi, S. Al-Saraj, A. Al-Chalabi, P. N. Leigh, I. P. Blair, G. Nicholson, J. de Belleroche, J. M. Gallo, C. C. Miller and C. E. Shaw (2009). "Mutations in FUS, an RNA processing protein, cause familial amyotrophic lateral sclerosis type 6." Science 323(5918): 1208-1211.

150. Wang, Q., J. L. Johnson, N. Y. Agar and J. N. Agar (2008). "Protein aggregation and protein instability govern familial amyotrophic lateral sclerosis patient survival." PLoS Biol 6(7): el70.

151. Weiner J, K. P. A., Case D.A, Singh U.C, Chio C, Alagona G, Profeta S and Weiner P.K. (1984). "A new force field for molecular mechanical simulation of nucleic acids and proteins." J Am Chem Soc. 106: 765-784.

152. Wilson, J. M. and C. A. Shaw (2007). "Late appearance of glutamate transporter defects in a murine model of ALS-parkinsonism dementia complex." Neurochem Int 50(7-8): 1067-1077.

153.Wu, D., W. Yu, H. Kishikawa, R. D. Folkerth, A. J. Iafrate, Y. Shen, W. Xin, K. Sims and G. F. Hu (2007). "Angiogenin loss-of-function mutations in amyotrophic lateral sclerosis." Ann Neurol 62(6): 609-617.

154. Wu, R., H. Wang, X. Xia, H. Zhou, C. Liu, M. Castro and Z. Xu (2009). "Nerve injection of viral vectors efficiently transfers transgenes into motor neurons and delivers RNAi therapy against ALS." Antioxid Redox Signal 11(7): 1523-1534.

155. Zareparsi, S., J. Kaye, R. Camicioli, H. Grimslid, B. Oken, M. Litt, J. Nutt, T. Bird, G. Schellenberg and H. Payami (1997). "Modulation of the age at onset of Parkinson's disease by apolipoprotein E genotypes." Ann Neurol 42(4): 655-658.

156. Zelzer, E., W. McLean, Y. S. Ng, N. Fukai, A. M. Reginato, S. Lovejoy, P. A. D'Amore and B. R. Olsen (2002). "Skeletal defects in VEGF(120/120) mice reveal multiple roles for VEGF in skeletogenesis." Development 129(8): 1893-1904.

157. Zhang, Y., H. Zhang, Y. Fu, H. Song, L. Wang, J. Zhang and D. Fan (2006). "VEGF C2578A polymorphism does not contribute to amyotrophic lateral sclerosis susceptibility in sporadic Chinese patients." Amyotroph Lateral Scler 7(2): 119-122.

158. Zheng, Z., L. Sheng and H. Shang (2012). "Statins and amyotrophic lateral sclerosis: a systematic review and meta-analysis." Amyotroph Lateral Scler Frontotemporal Degener.