Клинико-генетические особенности формирования хронической обструктивной болезни легких в Республике Башкортостан тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.05, кандидат медицинских наук Байнак, Олеся Владимировна

• Байнак, Олеся Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Байнак, Олеся Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНЫ Е,.,.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.ДЗ

1.1 Обшая характеристика, классификация и эпидемиология ХОБЛ.

1.2 Патогенез ХОБЛ.

1.3 Генетические и иммунологические факторы формирования ХОБЛ.

1.3.1 Гены ферментов протеолиза-антипротеояиэа. „. .,,

1-3.2 Гены ifiimoK и на во и сети. „.

1-3-3 Особенности илсиунного статуса при ХОБЛ. .„.„.,.

1.4 Диагностика ХОБЛ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Объект исследования.

2.2 Оценка интокннового статуса.

2.3 Выделение ДНК.

2.4 Проведение полнмеразной цепной реакции и ПДРФ-анализд.

2.5 Проведение электрофореза н визуализация результатов.

2.6 Статистические методы обработки результатов анализа.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1 Клинико-лабораторная характеристика больных ХОБЛ.

3.2 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов ферментов протеолиза-энтипротеолиза с предрасположенностью к ХОБЛ.

3.2I Пол и.\IорфиЗМ гена аj -актитрипсtut а у больных ХОБЛ.

3.2.2 Полиморфизм гена ац-антихимотрипечнау больных ХОБЛ.

3.23 Иоли.»орфизм гена интерстициалыюй коллагеназыу больных ХОБЛ.-.*.-.

3.3 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов цитокннов с предрасположен костью к ХОБЛ.

3.3.1 Полиморфизм генов фактора некроза опухолей а и лимфотоксина ау больных ХОБЛ.*.

3,2 Полиморфизм генов сиисиетво интерлеикииа 1 у больных

3. 3.3 Полиморфизм гена чнтерлейкина б у больных ХОБЛ.

3.3-4 Полиморфизм гена интерлейкина 8у больных ХОБЛ.

3.4 Генетически! чпркйру ХОБЛ и анализ ассоциаций геноу-канлидатов с риском рцантич заболевания.

3.5 Цмтокнипродуцнрующая способность нМкдоюпоыютентныя клеток крови больник ХСКЛ."')

ГЛАВА 4. Обсуждение.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-генетические особенности формирования хронической обструктивной болезни легких в Республике Башкортостан»

Актуальность

Хроническая обетруктнвная болезнь легких (ХОБЛ) - хроническое заболевание респираторной системы, характеризующееся неуклонным прогрессировал нем и нарастающей дыхательной недостаточностью, проявляющееся, преимущественно но второй полоняне жизни. ХОБЛ относится к числу наиболее распространенных заболеваний человека. По оценкам ВОЗ, ХОБЛ является одной из важнейших причин заболеваемости и смертности во всем мире, приводящей к значительному экономическому и социальному ущербу. В структуре заболеваемости ХОБЛ входит в число лидирующих причин по числу дней нетрудоспособности, инвалидности и смертности (Хронические обструктивные болезни легких. Федерат ьная программа, ] 999), По данным Всемирной Организации Здравоохранения, летальность от ХОБЛ в XXI веке может выйти на пятое место (Чучалин А.Г-, 2004). Эпидемиологические исследования показывают, что 4-10% взрослого населения страдают от ХОБЛ (World Health Report, 2000; European Lung While Book, 2003). В России, по результатам подсчетов, около 11 млн больных ХОБЛ. Одной из причин роста рапространенностн и заболеваемости ХОБЛ+ несмотря на принимаемые меры, является н отсутствие программ первичной профилактики и реабилитации (Чучалин А.Г., 2004).

Актуальность проблемы подчеркивает и пристальное внимание ВОЗ к ХОБЛ, которая за пять с небольшим лет создала три документа, посвященных вопросам этого заболевания: Global initiative for Obstructive Lung Disease, (GOLD), 1998; 2001; 2003. Приняты федеральные программы по ХОБЛ и н РФ (1998; 2003), Большинство имеющихся данных по распространенности, заболеваемости н смертности при ХОБЛ получены для развитых стран. Нельзя не отметить, что получение точных эпидемиологических сведений о ХОБЛ - трудоемкий и дорогостоящий процесс. Показатели распространенности и заболеваемости ХОБЛ не дают полного представления об объеме ущерба, наносимого заболеванием, потому нто болезнь обычно диагностируется не на ранних стадиях., а лишь при развернутой клинической картине заболевания, вынуждающей больного обращаться за медицинской помощью. Данные о смертности при ХОБЛ также недооценивают заболевание как причину смерти, поскольку при наличии у больного нескольких болезней (что вполне естественно во второй половине жизни), ХОБЛ нередко рассматривается как сопутствующая болезнь, либо вообще игнорируется в посмертном диагнозе (Шмелев Е.И., 2003).

Учитывая данные официальной медицинской статистики, свидетельствующие о том, что заболевание диагностируется на поздних стадиях, вопросы ранней диагностики н прогнозирования риска развития ХОБЛ являются актуальной проблемой пульмонологии (Чучалнн А. Г., Сахарова Г.М„ 1998), Сложность задачи своевременной диагностики и профилактики ХОБЛ обусловлена как лолмгенностью заболевания, когда риск развития патологического процесса определяется комплексом факторов (внешнесредовых, иммунологических, генетических и т,д.)+ так и, возможно, недостаточным вниманием к роли наследственных факторов в формировании иммунологического статуса и развитии болезни (Sandford A., Pare Р,, 2002), Известно, что в основе хроннзацин воспалительного промесса в легких лежит иммунный дисбаланс (местный, цитокиновый, системный). Однако характер и причины дисбаланса нуждаются в уточнении с позиции значимости цнтокннов в иммунном ответе при ХОБЛ. Перснстениия воспаления и снижение функции внешнего дыхания в результате обструкции дыхательных путей является следствием гнперюоепалнтельного ответа на воздействие патогенных частиц, которая может быть обусловлена i-енетнчсской предрасположенностью (Barnes Р. 2000; GOLD Workshop Repon, 2003),

В настоящее время не вызывает сомнения, что, наряду с внешне срсдовымн факторами, существенную роль в развитии ХОБЛ играет наследственная предрасположенность н сложная система взаимодействия между генотипом н средой (Barnes Р., 2000; Joos L,, Pare P., Sand ford Л., 2002). В последнее время пристальное внимание уделяется поиску генов-кандидатов, ассоциированных с этой патологией. (Sandford A., Pare Р., 2002). Различия в воспалительном ответе могут быть объяснены наличием ал дельных вариантов генов, кодирующих ферменты протеолнза-антнлротеолиза и цитокнновой сети (Sandford AJ-, Pare P.D., 2002,), Накапливается все больше данных, свидетельствующих о том, что полиморфизм единичных нуклеотндов вносит вклад в персональные особенности развития защитных реакций, а также предрасположенность к целому ряду заболеваний (Симбнрцев A.C., Громова А.Ю., 2005). Изучение, так называемого, функционального полиморфизма генов, влияющего на скорость транскрипции генов» стабильность м-РНК и, тем самым, приводящего к увеличению нли уменьшению количества и уровня биологической активности синтезируемого пептида, приобретает особую актуальность (Cargill М, Altshulcr О,, Ireland J„ 2003). Таким образом, полиморфизм единичных нуклеотидов в генах, ответственный за измененную продукцию, обуславливают функциональные нарушения, которые приводят к количественным изменениям протекания защитных реакций (но не к полному генетическому дефекту), что сказывается на развитии иммунопатологических процессов (Снмбирцсв A.C., Громова А.Ю., 2005).

Выявление иммунологических и генетических маркеров ХОБЛ и их ассоциаций со сроками клинической манифестации, воздействием экзогенных факторов, тяжестью течения и прогнозом заболевания, является актуальной задачей пульмонологии и клинической генетики, решение которой позволит прогнозировать индивидуальную предрасположенность и формировать группы риска развития ХОБЛ (Ивчнк Т.В., 1998, 2003).

Цель исследования:

Оптимизация диагностики и профилактики хронической обструктиаиой болезни лёгких на основе выявления новых критериев риска развития и прогнозирования тяжести заболевания, в внле молекулярно-генетнчсскнх и иммуннологическнх маркеров.

Задачи:

1. Изучить особенности течения хронической обструктмвнон болезни лёгких с учетом клинической стадии заболевания и статусом курения.

2. Изучить полиморфизм генов ферментов протеолиз-антипротеолиза н генов ннтоки новой сети у больных ХОБЛ и в контрольной группе.

3. Исследовать ассоциации полиморфных вариантов геной-канлндатов н нх сочетаний с предрасположенностью к ХОБЛ, клиническими стадиями заболевания, а также статусом курения больного.

4. Исследовать способность клеток крови к продукции цитокннов ФНО, ИЛ-1, РАИЛ-1 у больных ХОБЛ с различными клиническими стадиями и статусом курения,

5. Оценить взаимосвязь генетических маркеров и показателен цитоки новой системы и определить нх значение в нммуннопатогенезе ХОБЛ.

Научная новизна:

Впервые у больных ХОБЛ изучен полиморфизм генов, кодирующих ферменты системы протсолиза-антипротсолнза и питокннов, н показана взаимосвязь сочетаний генотипов полиморфных локусов генов с предрасположенностью к ХОБЛ, тяжестью клинического течения, статусом курения и показателями цитокиновой системы. На основании оценки состояния системы цитокннов у больных ХОБЛ определена зависимость цктокнн продуцирующей функции нейтрофилов от генетического фактора. Определены показатели относительного риска заболевания, как по отдельным полиморфным л оку сам. так и по их сочетаниям и выявлены генетические маркеры предрасположен мости к ХОБЛ.

Практические значимость

В результате проведенных научных исследований разработаны принципиально новые подходы к прогнозированию вариантов клинической картины хронической обструктивиой болезни легких на основе оценки индивидуальной предрасположенное™,

Результаты работы предегааляют интерес для понимания молекулярно-генетическнх механизмов развития ХОБЛ, а также могут быть использованы при формировании групп риска, при разработке основ профилактической медицины и диагностики.

Установлено, что одним из важных факторов, обуславливающих повышенную вероятность развития ХОБЛ, является наличие генотипов риска по генам, колирующим ферменты системы протеолнза-антипротеолнза и цнтокннов. На основании полученных данных показана целесообразность определения полиморфных вариантов генов, кодирующих протеолнтнчсскне и антилротеолитнчсские ферменты и цнтокнны, с целью прогнозирования вариантов клинического течения ХОБЛ на ранних стадиях заболевания

Материалы работы могут быть использованы в учебно-методическом процессе на биологических и медицинских факультетах, а также на курсах ностднпломного образования врачей общей практики.

Положений, иы носимые на защиту:

1. Хроническая обструктнвная болезнь легких является мульфакториальным заболеванием с медленно-прогреенрующнм течением, клинически проявляющимся на поздних стадиях болезни, что требует оптимизации методов диагностики и поиска новых прогностических критериев,

2. Исходя из современных представлений о патофизиологических механизмах ХОБЛ, наличие определенных генотипов и их комбинаций по полиморфным ло кусам генов-кандидатов, кодирующих ферменты протеолиза-антнпротеолнза и питокинов. может оказывать сушественное влияние на предрасположенность к формированию ХОБЛ.

Молекул ярно-генетический анализ полиморфизма псион-кандидатов, кодирующих а>ггипротеолитические (PI и ААСТ) и лротеолитическне (AfAfPÍ) ферменты и цнтокины (TNF, ¿ТА, ILL ILS и ¡¿1RS, ¡L6), позволяет прогнозировать риск развития ХОБЛ и течение заболевания,

4, ХОБЛ характеризуется нарушением цнтокиновой регуляции иммунного ответа и возникновением дисбаланса про- и противовоспалительных цитокинов при воспалении.

5. На нарушение цнтокиновой системы регуляции процессов иммунной зашиты при ХОБЛ может оказывать влияние полиморфизм генов, кодирующих цитокнны ИЛ-S, ФНОа и РА ИЛ-К и курение.

Синеок работ* онубл икона иных по теме диссертации;

1. Полиморфизм генов фактора некроза опухолей при хронической обструктивной болезни легких /1113. Загндуллин, О.В. Байнак, ДТ Янбаева [н др.] // Пульмонология. Приложение. Сборник резюме 13 национального конгресса по болезням органов дыхания. - Санкт-Петербург. - 2003. - С.327.

2, Асссоинация промоторного полиморфизма гена ШНр с тяжестью течения ХОБЛ / ILI.3. Загидуллнн, О-В. Байнак, Д.Г. Янбаева (и др.] И Пульмонология. Приложение. Сб. резюме 14 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. - Москва, - 2004. - С. 425

3. Полиморфные варианты генов провоепалительных цнтокинов как маркеры предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких / О-В Байнак, Д,Г, Янбаева, Т В. Викторова, Ш.З. Загндуллин // Успехи современного естествознания. - Москва. - 2005. -Хв4 - С.43.

4. Байнак» О.В. Полиморфные варианты генов провоепалительных интокннов как маркеры предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких / ДГ, Янбаева, Г.Ф. Корыгнна // Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение. - Уфа. - 2005. - Часть II -С, 136-138,

5. Полиморфизм генов фактора некроза опухолей при хронической обструктивной болезни легких t Ш.З. Загндуллин, Д.Г. Янбаева, O B. Байнак [и др.] // Пульмонология. - Москва - 2004. - №5 - С.17-22.

6. Байнак, О.В. Роль генов провоепалительных цнтокинов в развитии предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких / Д,Г. Янбаева, Г.Ф, Корыгнна ff Сб, матер, конф. «Вопросы теоретической н практической медицины». - Уфа, - 2004, - С, (40-141,

7. Байнак, О-В. Роль полиморфных вариантов генов провоепалительных цнтокинов в развитии хронической обструктивной болезни легких / Д.Г. Янбаева // Здравоохранение Башкортостана. - Уфа. -2004.-№2~С.29-31.

8. Association between IL-IB promoter polymorphism and COPD severty / Sh, Z, Zagidullin, O.V, Bainak, D,G, Yanhacva {et al.] Н Сборник резюме J4 национального конгресса по болезням органов дыхания. - Москва. -2004.-С. 169.

9. TNF and LTA genes and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease / O.V, Batnak, D.G. Yanbaeva, G,F, Korytina [el al,] U 14"' European Respiratory Society Annua! Congress, - Glasgow. - 2004, - P. J 80,

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на 13 и 14 Национальных конгрессах по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 2003; Москва. 2004): республиканской научно-практмческой конференции «Интеллектуальные системы управления и обработки информации» (Уфа, 2003); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы внутренних болезней» (Уфа, 2003); научно-практической конференции «Вопросы теоретической н практической медицины» (Уфа, 2004); 14 ежегодном конгрессе Европейского респираторного общества (Глазго, 2004); республиканской научно-практической конференции «Рациональная фармакотерапия заболевании внутренних органов» (Уфа, 2005); Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня основания НПО "'Иммунопрепарат" (Уфа, 2005); межкафедральном заседании кафедры пропедевтики внутренних болезней с курсом физиотерапии и лабораторий молекулярной и экологической генетики человека ИБГ УНЦ РАН совместно с проблемной комиссией "Внутренние болезни".

Внедрение в практику. Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедрах пропедевтики внутренних болезней и нормальной физиологии ГОУ В ПО «Башкирский государственный меди ни некий университет)» Роездрава. Результаты исследования внедрены в практику работы пульмонологического отделения ГКБ №21 г Уфы,

Заключение диссертации по теме «Внутренние болезни», Байнак, Олеся Владимировна

ВЫВОДЫ.

1. Установлено, что большинство пациентов, находившихся на стационарном обследовании и лечении, составили курящие больные с тяжелым течением ХОБЛ с выраженной одышкой, кашлем в течение дня с отделением мокроты преимущественно гнойного характера, высокой активностью воспалительного процесса и повышением температуры тела.

2, Выявлены генетические маркеры предрасположенности к ХОБЛ: ннсерцня в гомозиготном варианте 2С/20 полиморфного локуса -16070/20 гена иитерстицнальной коллагеназы; гомозигота по мутации Ой полиморфного локуса А2520 гена лимфотокенна-о; генотип А1А1 УМТЕ?-полиморфизма гена рецепторного антагониста нитерлейкнна-1; комбинация СТ-А1А1 генов интерлейкина-1 # рецепторного антагониста интерлейки на-1.

3- Обнаружена ассоциация тяжелой формы хронической обструкгивиой болезни легких с гомозиготным генотипом по мутации СО полиморфного локуса А2520 гена лнмфотоксина-а и комбинацией генотипов БА-СО генов фактора некроза опухолей-а и лимфотоксниц-а.

4. Выявлены протективные генетические маркеры формирования ХОБЛ (полиморфные варианты генов иитерстицнальной коллагеназы, рецепторного антогоннста интерлейкина-1, I г нт ерл с й ки н а-1Д) н тяжелого течения заболевания (полиморфные варианты генов лимфотокеннв-о, фактора некроза опухолей-а).

5. Установлено, «гго у больных ХОБЛ воспаление сопровождается дисбалансом цнтокнновой регуляции, проявляющееся увеличением способности клеток к продукции противовоспалительного цнтокнна рецепторного антагониста интерлейкина-1, особенно у курильщиков н при тяжелом течении заболевания.

6. Показано, что повышенная способность нммуннокомпетентных клеток к продукции противовоспалительного цитокина РАИЛ-1 у больных ХОБЛ ассоциируется с генотипом А2А2 полиморфного локуса гена рецепторного антагониста ннтерлсйкнна-1.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕ КОМ ЕНДЛЦИ И

I. У лиц, относящихся к группам риска развития ХОБЛ (злостных курильщиков. работников вредных производств) и индивидов, родственники которых страдали ХОБЛ, целесообразно проводить тестирование генетических маркеров предрасположенности к ХОБЛ по генотипам для профилактики действия факторов риска (отказ от курения, переход на другую работу):

- Генотип 2G/2G полиморфного локуса -I6Ö7G/2G гена MMPI,

- Генотип GG полиморфного локуса A252G гена LT А.

- Генотип АIАI VNTR-полиморфизма гена ILIRN,

- Сочетание генотипов СТ-А1АI генов ILIB и ILIRN.

1. У лиц с выявленной хронической обструктнвной болезнью легких, для выбора своевременных и адекватных методов терапии ХОБЛ, рационально генотипировать маркеры тяжести течения заболевания:

• Маркеры риска развития Пи 1П стадии ХОБЛ:

- Генотип AG полиморфного локуса A252G гена LT А. Сочетание GA-AG генов TNF» LTA.

Сочетание генотипов CT-AIAI генов ILJВ и ILIRN.

• Маркеры риска развития IV стадии ХОБЛ;

Генотип GG полиморфного локуса A252G гена LT А.

- Сочетание генотипов GA-GG генов TNF и LTA.

3. Лицам, страдающим хронической обструктнвной болезнью легких целесообразно исследовать способность клеток крови к продукции противовоспалительного цитокина (рецепторного антагониста интерлейкнна -I) и провоспалитсльных цнтокинов (фактора некроза опухолей, нтерлсйкина-8) для своевременной диагностики дисбаланса в цнтоки новой регуляции и проведения специфической нммуннокоррекиин,

114

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Хроническая обструктианая болезнь легких также относится к группе многофакторных заболеваний. По экспертным оценкам, в мире диагностируются только 25% от всех случаев ХОБЛ, причем, в основном на стадиях, когда болезнь приняла клинически выраженную форму (Cou)tas D, et al,, 2003), Сложность задачи своевременной диагностики и профилактики ХОБЛ обусловлена как полигенностью заболевания, когда '"риск заболеть" определяется комплексом факторов (внещнесредовыми, иммунологических), так и, возможно, недостаточным вниманием к роли наследственных факторов в формировании иммунологического статуса и развитии болезни (Sandford Ai., Pare P.D., 2002,), Генетическая природа многофакторных заболеваний с полигенным наследованием до сих пор остается нераскрытой (Пузырев В.П., 2003). Чтобы приблизиться к раскрытию механизмов, лежащих в основе нх развития научное сообщество предпринимает попытки понять биохимические и патогенетические пути нх развития, с тем, чтобы очертить круг потенциальных генов-каид платов (Кузьмина Л.П., 2001). В генетике ХОБЛ к сегодняшнему дню сформировалась гипотеза вовлеченности множества генов, совместное действие которых приводит к формированию заболевания (Hoidal J., 2001). Предполагается, что генетические факторы риска ХОБЛ представляют собой совокупность нескольких генов, каждый нз которых вносит незначительный вклад в развитие симптомов заболевания (Joos L-, Pare P., Sanford A., 2002).

В связи с вышеизложенной целью нашей работы были изучены полиморфизмы генов, белковые продукты которых относятся к основным комплексам ферментов и медиаторов, задействованных в патогенезе ХОБЛ.

Для реализации поставленной цели была сформирована выборка нз 215 больных ХОБЛ в возрасте от 38 до 89 лет (средний возраст 61,17±13,16), находившихся на стационарном лечении в пульмонологических отделениях клинических больниц г. Уфы №21, а период с 2002 по 2004 год. Согласно кр1гтериям GOLD все больные были разделены на группы в соответствии с тяжестью течения заболевания (II, III, IV стадии). У всех больных учитывался статус и стаж курения, количество потребляемого табака. В контрольную группу вошли 227 неродственных индивидов (146 мужчин н S] женщина), проживающих в Уфе и не имеющих в анамнезе хронических заболеваний, в том числе патологии дыхательной системы, Средний возраст индивидов контрольной группы составил 46, f 2±8,57

Для молскулярно-генетнческого анализа ассоциаций полиморфных вариантов различных генов нами были выбраны гены, кодирующие ферменты системы нротеолнза-антнпротеолнза н цнтокнны.

Материалом для исследования служили образцы ДНК, выделенные из лимфоцитов периферической венозной крови больных ХОБЛ и здоровых индивидов. Для изучения полиморфизма гена 1LIRN (VNTR), применяли метод ПЦР- Аллельные варианты локусов генов Pf, A ACT, TNF, ITA, III, 116. исследовались методом ПДРФ-анапнза (полиморфизм длин рестрикцнонных фрагментов). Амплнфнцированные фрагменты ДНК разделяли эле ктрофоретн чески в 7-8%-ном полнакриламидном недснатурнрованном геле (ПААГ)- После окончания электрофореза гель окрашивали раствором бромистого эти дня и анализировали в проходящем ультрафиолетовом свете на трансиллюмннаторе.

Математическую обработку результатов исследования проводили на IBM Pentium Ш с использованием пакетов статистических программ: STATISTICA v.5,0, RxC, а также программ Microsoft Excel и Microsoft Access. Силу ассоциаций гено- и фенотнпнческнх характеристик изученных ферментов и медиаторов с риском развития и клиническими особенностями ХОБЛ оценивали по значениям показателя отношения шансов (odds ralio, OR). Анализ ассоциаций полиморфных локусов генов-кандидатов с ХОБЛ проводили по схеме, отвечающей современным требованиям приложения метода ассоциаций к исследованию предрасположенности к ХОБЛ (Silverman Е.г Palmer L„ 2000; Hall I., 2002).

Исследовав полиморфные варианты генов, колирующих протеолитнческне н аитипротеолитнчеекие ферменты, мы выявили следующие маркеры риска, У больных ХОБЛ по сравнению с группой контроля достоверно выше оказалась частота генотипа 2С/2С (30,6% против 18,0% в контроле. ^5,6193. р-0,0183). Показатель отношения шансов, указывающий на риск развития ХОБЛ у индивидов с генотипом 20/20 составил 2,00 (95% СГ 1,12-3,63). В то же время, в группе больных ХОБЛ снижена частота гетероэнгот С/Ю за счет увеличения частоты гомозигот по мутации ЮИЪ. Риск формирования ХОБЛ у гетерозигот понижен (ОК"0,57, 95%С1 035-0,94).

При анализе ассоциаций генов про- и противовоспалительных цнтокинов с риском развития ХОБЛ выявлены генотипы, свята иные с повышенным риском развития ХОБЛ. Это генотип СО полиморфного локуса А252С гена лимфотоксина IТА (ОК.=2,91 раза, 95%С1 1,05-8,43). При анализе полиморфизма в группах больных ХОБЛ с различным клиническим течением показано, что у больных с генотипом 00 в гене НА риск развития крайне тяжелой стадии ХОБЛ был повышен почти в 5 раз (ОЯ-4,86, 95%С1 1,25-22,03), в то время как генотип АС является маркером более благоприятного течения заболевания {^=6,7300, р=0,0103 для стадии IV по сравнению со стадиями 11+1II) и снижает риск развития тяжелой формы ХОБЛ (011=0,45). Комбинация О А-АС по генам ТИР-ЬТА является маркером более благоприятного течения ХОБЛ (ОЯвО,39, 95%С! 0,180,84); наряду с этим, риск развития крайне тяжелого течения заболевания почти в 11 раз повышен у индивидов с сочетанием генотипов СА-СО (011=10,5, 95%С1 1*35-226,26). Наличие генотипа А1А1 в гене ШЯЫ увеличивает риск развития ХОБЛ почти в 2 раза (ОЯ=1,75, 95%С1 1,132,69), а у гетерозигот А1А2 риск формирования заболевания снижен (ОК=0,42, 95%С1 0,2743,67).

При анализе иитокинпродуцнрующей способности у больных ХОБЛ выявлена выраженное увеличение уровня спонтанной продукции протнвоспаянтельвого цнтокнна РАИЛ-1 3485,23± 177,27 пкг/мл против 2208,69±295,40 пкг/мл, р<0,0001 (III степень иммунологических расстройств). При более тяжёлом течении ХОБЛ с III и IV стадиями заболевания наблюдается тенденция к снижению синтеза провоспалнтельных цнтокннов ИЛ-8 и ФНОа и статистически достоверное повышение (3154±428,1 и 3455+264,9 пкг/мл соответственно) по сравнению с контрольной Группой (2028± 304,1 пкг/мл, р<0,05) противовоспалительного цнтокнна РАИЛ-1. Изучая цитокнипродупирующую способ>юсть клеток крови у больных ХОБЛ в зависимости от статуса курения, установлена повышенная спонтанная продукция клеток крови у курящих больных к РАИЛ-1 (3403±177,28 пкг/мл) по сравнению с лицами контрольной группой (2208±295,4 пкг/мл, р<0,000]). Анализ полиморфных вариантов генов ILS. TNFa и ILIRN показал достоверные различия только для генотипа 44 полиморфного лохуса IL1RN. Отмечено повышение содержания противовоспалительного цнтокнна РАИЛ-1 (3332±289,б пкг/мл) у больных с генотипом 44 полиморфного лохуса ILÍRN по сравнению с показателями (1824±361,б пкг/мл) в группах контроля (i=-3,213, ра0,005), особенно у куряшнх больных (3403± 177,8 пкг/мл у больных и 2304±4t7 пкг/мл в контроле, р<0,05. Данные проведенного анализа позволили нам представить взаимосвязь между цитокин продуцирующей способностью нммуннокомпетентных клеток и полиморфизмом генов цнтокннов

Таким образом, наличие определенных генотипов н их комбинаций по полиморфным локуса.м генов систем ферментов протеолнза-антнпротеолнза и цнтокннов может оказать существенное влияние на предрасположенность н тяжесть течения ХОБЛ. Тестирование генов-кандидатов у ЛИЦ групп риска (злостных курильщиков, работников вредных производств, лиц, родственники которых страдали ХОБЛ) позволяет уже сегодня проводить раннюю, доснмнтоматическую диагностику подверженности ХОБЛ (что особенно актуально в связи с медленно прогрессирующим течением болезни и манифестацией клинических признаков на поздних стадиях).

Полученные результаты раскрывают некоторые аспекты генетики ХОБЛ и свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез заболевания, с целью выявления генетических маркеров предрасположенности к данному заболеванию и, возможно, конструкции «генных сетей»». Всесторонний анализ генов-кандидатов и их сочетаний, составляющих «генные сети», позволит разработать комплекс лечебно-профилактических мероприятий для конкретного пациента.

112

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Байнак, Олеся Владимировна, 2006 год

1. Баранов, B.C. Опредленне генетической предрасположенности к некоторым мультфакторнальным заболеваниям Генетический паспорт. Методические рекомендации / B.C. Баранов, В.Х. Хавинсон. ■ СПб.: ИКФ Фолиант, 2001, 48 с.

2. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в преднктивную медицину) / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э, Иващенко, MB. Асеев. СПб.: Интермедиа, 2000. - 272 с.

3. Генетические маркеры и хронические болезни органов дыхания f М О. Мхеидзе, Т.В. Ивчнк, А.Н. Кокосов, А.К Фридлянд // Пульмонология. -1994. Т.4. - С. 42-46.

4. Гинтер, Е,К, Популяционная генетика и медицина / Е.К. Гинтер Н Вестник РАМН. 200!, - № 10. - С. 25-31.

5. Ивчик, Т.В. О роли генетических факторов в развитии болезней органов дыхания на примере хронической обструктнвной болезни легких И Актуальные вопросы внутренней патологии: сб. науч. тр. Омск, 1998. -Вып.4.-58-59с.

6. Калинина, Е.П., Цитокнновый дисбаланс у больных хроническим обструктнвным бронхитом / ETI. Калинина, Е.В. Исаченко, Г,И. Цьсвкина // Клиническая медицина. 2003. ■ №7.

7. Кашкин, К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность (лекция) / К,П. Кашкин // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - № 11. - С. 21-32.

8. Кетлинский. С. А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, Н.М-Калиннна СПб, 1998. - 28-33, 119-121 с.

9. Кузьмина, Л.П. Генетико-биохимические исследования в медицине труда / Л.П. Кузьмина // Вестник РАМН. 2001. - С.89-91.

10. Кокосов, А.И. Хронический бронхит и обструктивная болезнь легких, СПб.: «Лань». 2002.- 121-126 с.

11. Лифшнц, В.М. Медицинские лабораторные анализы / В.М. Лифшнц, В. И Сидел ьникова. М.: Триада, 2003. - 139 с.

12. Рычков, Ю.Г. Генофонд и геногсографня народонаселения. СПб.: Наука. 2000 -Т. 1- 611с.

13. Сидорова. Л.Д. Изучение реактивных нейтрофнлов в целях профилактики обострений хронического бронхита / Л.Д. Сидорова, Д. Н. Мая некий, П.О. Кузнецов // Ранняя диагностика и профилактика нсспсиифичсских заболеваний легких, Л,, 1987. - С. 88-92,

14. Снмбирцев, А.С. Цнтокниы новая система регуляции защитных реакций организма У А.С. Снмбирцев // Цнтокнны и воспаление. - 2002. -ТЛ,Аа1.-С. 9-15,

15. Снмбирцев, А.С. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления / А.С. Симбнрцсв, А.Ю. Громова П Цнтокниы и воспаление. -2005. Т,4т № I - - 3-8 с.

16. Соколов, ЕМ- Клиническая иммунология. Руководство для врачей. -М.: Медицина, 1998. 68-70 с.

17. Соколов, Е.И. Эмфизема легких / Е.И. Соколов, И.В. Маев, Г,А, Бусарова. М.:ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ. - 2000 - 432 с.

18. Шмелев, Е.И. Хроническая обструктнвная болезнь легких. М.: 2003.-3-33 с.

19. Федорова, Т.А. Хроническое легочное сердце / Т.А. Федорова, А.Г. Чучалнн // Хроническая обструктияная болезнь легких. М, 1998. - 192-216 с.

20. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции (лекция) / P.M. Хаитов, Б.В. Пннегии И Иммунология. -2000. -№1, -С. 61-64.

21. Хронический бронхит (вопросы патоморфологии и патогенеза) / А-Г. Бабков, H.A. Рябуха, X. Эккерт и др. Н Современные проблемы клинической н профилактической пульмонологии: сб. ВНИИГ1. СПб., 1992. -73-81 с.

22. Хронические обструктнвные болезни легких. Федеральная программа. / МЗ РФ Всероссийское научное общество пульмонологов. М, -1999. - 6-23 с.

23. Хроническая обструктнвная болезнь легких. Практическое руководство для врачей. / Научно-исследовательский институт пульмонологии МЗ РФ. М. 2004. - 7-25 с,

24. Чучалнн, А.Г. Болезни легких курящего человека / АХ. Чучалнн, Г.М. Сахарова// Хроническая обструктнвная болезнь легкнх.-М, 1998.-338 с,

25. Чучалнн, А.Г. Пульмонология в России и пути ее развития / А.Г. Чучалнн И Пульмонология, Т.8, -1998. - С, 6-22,

26. I. Чучалнн, А.Г. Хронические обструктнвные болезни легких. -М.: БИНОМ.- 1999.-5 1 2с.

27. Ярилни, A.A. Основы иммунологии. М.: Медицина. - 1999, - 156160,237-262,270-277 с.

28. Abraham, L Polymorphic MHC ancestral haplotypes affect the activity of tumour necrosis factor-or/ L, Abraham, M, French, R, Dawkins// Clin, Exp.Immunol, 1993. - Vol, 92, - P 14-18.

29. Acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary' disease are accompanied by elevations of plasma fibrinogen and serum IL-6 levels ! J. A. Wedzicha. T.A. Seemungal, P.K. MacCallum et aLJ // Thromb. Haemost, -2000. -Vol. 84.-P. 210-215,

30. Airway epithelium injury' and repair / E. Puchelle Jet at.) // Eur. Resp. Rev. -1997. Vol, 7. - № 45. - P. 240-242.

31. Airway inflammation in COPD assessed by sputum levels of inicrteukin-8 f C- Yamamoto, T. Yoneda, M. Yoshikawa et al,J // Chest. -1997. Vol. 112. - P. 505-510.

32. A polymorphism in the tumor necrosis factor-alpha gene promoter region may predispose to a poor prognosis in COPD / V.M, Keatings, S,J. Cave, M.J, Henry et al.J // Chest. 2000, - Vol. 118 - P, 971 - 975.

33. A single nucleotide polymorphism in the matrix metalloproteinase-1 promoter creates an Ets binding site and augments transcription / J.L, Rutter, T.I Mitchell, G. Buttice let al. // Cancer Res. 1998. - Vol. 58. - P. 5321-5325.

34. A single nucleotide polymorphism in the matrix metal Ioproteinase-1 promoter in endometrial carcinomas / Y. Nishioka, K. Kobayashi, S. Sagae et al. H Jpn. J Cancer Res, 2000, - Vol. 91. - P. 612615.

35. Association between air pollution exposure and exhaled nitric oxide in an elderly population / G. Adamkiewicz, S, Ebelt, M. Syring et al,. // Thorax. 2004 - Vol. 59(3). - P, 204-209.

36. Association between alpha-1-anlichymoirypsin polymorphism and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease / T. Ishii, T. Matsusc, S. Teramoto et al.) // Eur. J. Clin. Invest. 2000. - Vol. 30. - P. 543-548.

37. Association of 1L-Ibeta and IL-1 receptor antagonist haptotypes with rate of decline in lung function in smokers / L. Joos, L- Mclntyre, J, Ruan et al . П ThOiax. 2001. - Vol, 56. - P. 863-866.

38. Association of tumor necrosis factor alpha gene promoter polymorphism with the presence of chronic obstructive pulmonary disease / S-Sakao, K, Tatsumí, H. Igari et a. J // Am. J. Respir. С lit. Care Med. 2001. -Vol. 163, - P, 420-422.

39. Attfield, M, Pulmonary function of US coal miners related to dust exposure estimates / M. Attfield, T. Hodus U Am. Rev. Respir. Dis. * 1992. -Vol. 145. P. 605-609.

40. Barnes, P.J. Genetics and pulmonary medicine. 9. Molecular genetics of chronic obstructive pulmonary disease / PJ, Barnes // Thorax, 1999. - Vol, 54(3), - P. 245-252.

41. Barnes, PJ. Chronic obstructive pulmonary disease: molecular and cellular mechanisms / P,J. Barnes, S.D. Shapiro, R.A. Pauwels И Eur. Respir. J. 2003. - Vol. 22(4). - P. 672-688.

42. Barnes. P.J, Chronic obstructive pulmonary disease / P.J Barnes И N. Engl, J. Med. 2000, - Vol. 343(4), - P, 269-80,

43. Bazzoni, F. The Tumor Necrosis Factor Ligand and Receptor Families I F, Bazzoni. B, Beutler//N, Engl. J. Med 1996. - Vol. 334. - P. 1717-1725,

44. Beck. GJ. Smoking and lung function / GJ. Beck, C.A. Doyle, E.N. Schachtcr // Am, Rev. Respir. Dis, 1981, - Vol. 123(2). - P. 149-155.

45. Becklake, M R. Occupational exposures: evidence for a causal association with chronic obstructive pulmonary disease / M.R. Becklake II Am. Rev. Respir. Dis. 1989. - Vol. 140. - P. 85-91.

46. Behera, D, Respiratory symptoms in Indian women using domestic cooking fuels t D, Bchcia, S.K. Jindal // Chest. 1991. - Vol. 100. - P. 385-388.

47. Blanco, I. Alpha--antitrypsin PI phenotypes S and Z in Europe: an analysis of the published surveys 11. Blanco, E. Fernandez, E.F. BustiElo // Clin. Genet. -2001.- VoL 60(1- P. 31-41.

48. BTS guidelines for the management of chronic obstructive pulmonary disease it Ibid, 1997. Vol. 5. - P. 1-28.

49. Change in obstructive pulmonary function as a result of cumulative exposure to welding fumes as determined by magnetopneumography in Japanese arc welders / T. Nakadate, Y. Aizawa, T. Yagami Jet ah) tl Occup. Environ. Med, -1998. Vol, 55- - P. 673-677.

50. Characterization of singl-nucleoiide polymorphisms in coding regions of human genes I M. Cargillt O. Aitshuler. J, Ireland et aL. It Nat Genet. 1999. -VoL 22.-P. 231-238.

51. Chen, J.C. Worldwide epidemiology of chronic obstructive pulmonary disease / J.C, Chen, M.D. Mannino // Current Opinion in Pulmonary Medicine. 1999. - Vol, 5.- P. 93-99.

52. Chung, K.F. Cytokmes in chronic obstructive pulmonary disease / K.F. Chung// Eur. Respir. J. 2001. - Vol. 34. - P. 50-59.

53. Churg, A. Functional and morphologic comparison of silica and elastase-induced airflow obstruction / A- Churg, J. Hobson, J. Wright // Exp. Lung Res. - 1989 - Vol. 15, - P, 813-822,

54. Coggon, D. Coal mining and chronic obstructive pulmonary disease: a review of the ev idence / D. CoggonT A.N. Taylor I! Thorax. 1998, - Vol. 53. - P. 398-407.

55. Col.agen content of alveolar wall tissue in emphysematous and non-emphysematous lungs / M R. Lang, Y.W. Ftanx, M. Yilloy el al.J ll Thorax- -1994. -Xa 49. P.319-326.

56. Combined effect of silica dust exposure and tobacco smoking on the prevalence of respiratory impairments among gold miners i E, Hnizdo. E. Baskind, O.K. Sluis-Cremer, J. Scand // Work Environ. Health. 1990. - Vol. 16. - P. 411-422.

57. Correlation between expression of the matrix metalloproteinase-1 gene in ovarian cancers and an insertion/deletion polymorphism in its promoter region / Y. Kanamori. M. Matsushima, T. Minaguchi et a.] H Cancer Res. -1999. Vot. 59. - P. 4225-4227,

58. Coultas, D.B. Undiagnosed airflow obstruction: prevalence and implications / D.B. Couttas, D.W, Mapel t/Curr. Opin. Pulm, Med. 2003. - Vol. 9. - P, 96-103.

59. De Boer, W.L Cytokines and therapy in CQPD: a promising combination? / W.I. De Boer // Chest. 2002. - Vol, 121, Suppl. 5. - P. 209218.

60. Declinc in FEVi and airflow limitation related to occupational exposures in men of an urban community / S. Humerfelt, A. Gulsvik, R. Skjaerven let al.) !l Eur. Respir. J. 1993. - Vol. 6. - P. 1095-1103.

61. DeMeo, D.L. Alpha l-intitrypsin deficiency. 2: genetic aspects of alpha (l)-antitrypsin deficiency: phenotypes and genetic modifiers of emphysema risk / D.L. DeMco, E,K. Silverman // Thorax 2004 - Vol. 59. - P 259-264.

62. Devot, H-i. Family resemblance for normal pulmonary function / E.J. Devor, M.H. Crawford // Ann. Hum. BioL- 1984. Vol. 11. - P. 439-448.

63. Dinarello, C.A. The role of interleukin-1 in disease / C.A. Dinarctlo, SM. Wolff// N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 328. - P. 106-113.

64. Early-onset chronic obstructive pulmonary disease (COPD): preliminary evidence for genetic factors other than Pi type / E.K. Silverman, H. Chapman, J. Drazen et al.) // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996. - Vol. 153. - P. 48

65. Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation / A.G, Wilson, J.A. Symon, T.L. McDowel et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. 1997. - Vol. 94. - P.3195-3199.

66. Eosinophilic and neutrophilic inflammation in asthma, chronic bronchitis, and chronic obstructive pulmonary disease / J.Y, Lacoste, J, Bousquet, P. Chanez et al . // J. Allergy Clin. Immunol. 1993 - Vol. 93, - P. 537-548,

67. European Lung White Book // Under R. Loddenkemper reduction.2003.

68. Expression and release of interleukin-8 by human bronchial epithelial cells from patients with chronic obstructive pulmonary disease, smokers, and never-smokerb t C. Schulz, K. Wolf, M, Harm el al. // Respiration. 2003. -Vol. 70.-P 254-261.

69. Ezine, S. Haemopoiesis and early T-cell differentiation / S. Ezine, R. Ceredag // Immun. Today. 1994. - Vol. 4. - P 151-154.

70. Familial factors related to lung function in children aged 6-10 years / F. Kauffmann, I.B. Tager, A, Munoz, F E. Speizer // Am. J. Epidemiol. -1989.-Vol. 129. P. 1289-1299.

71. Familial prevalence of chronic obstructive pulmonary disease in a matched pair study / F. Kueppers, R.D- Miller, H. Gordon et a.J // Am. J. Med. 1977. - Vol. 63. P. 336- 342.

72. Genetic and environmental influences on pulmonary function in adult twins / H.B. Hubert, R.R. Fabsitz, M. Feinleib, C. Gwinn //Am, Rev Respir. Dis. 1982, - Vol. 125, - P. 409-415.

73. Genetic control of postoperative systemic inflammatory reaction and pulmonary and renal complications after coronary artery surgery / Gaudino M., Di Castelnuovo A., Zamparellt R (et al. // J. Thorac. Cardiovasc. Surg.- 2003. -Vol. 126.-P. 1107-1112.

74. Genetic markers in chronic airflow limitation. A genetic epidemiologic study / F. Kauffmann, J P Klcisbauer, A, Cambon-De-Mouzon et al . //Am. Rev, Respir, Dis. 1983. - Vol. 127. - P. 263-269,

75. Genome-wide linkage analysis of severe, early-onset chronic obstructive pulmonary disease: airflow obstruction and chronic bronchitis phenotypes / E.K-Silverman, J.D. Mosley, L.J. Palmer et al.J// Hum. Mol. Genet. 2002. - Vol. 11- P. 623-632.

76. GOLD Workshop Report: Global Strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease. Updated 2003. Available from: URL: wwwjioldcopd.com.

77. Hall, 1. Candidate gene studies in respiratory disease: avoiding the pitfalls / L Hall it Thorax. 2002. - Vol. 57(5). - P. 377-378.

78. Hall, l.P. Pharmacogenetics, pharmacogenomics and airway disease / LP. Hall // Respir. Res. 2002. - Vol. 3. - P. 10.

79. Higgins. M. Familial occurrence of chronic respiratory disease and familial resemblance in ventilatory capacity / M, Higgins, J. Keller // J. Chron, Dis- 1975.-Vol. 28, P. 239-251.

80. High levels of interleukin-6 in the exhaled breath condensate of patients with COPD / E- Bucchtoni, S.A. Kharitonov, L. Allegra, PJ. Barnes // Respir. Med 2003. - Vol. 97(12). - P. 1299-1302.

81. Hogg, J.C. Chronic obstructive pulmonary disease part 2: pathology and biochemistry of emphysema / J.C, Hogg, R„M, Senior // Thorax, - 2002. -Vol. 57. - P. 830-834,

82. Hoidal, JR. Genetics of COPD: present and future/J.R. Hoidal // Eur. Respir. J. 2001. - Vol. 18. - P. 741-743.

83. Huang, S.L. Tumor necrosis factor-a gene polymorphism in chronic bronchitis / S.L. Huang, C,H, Su. S,C, Chang // Am. J, Respir, Crit. Care Med, 1997. - Vol, 156. - P. 1436-1439.

84. Hull, J. Association of respiratory syncytial virus bronchiolitis with the interleukin 8 gene region in UK families / J. Hull, A. Thomson, D, Kwtatkowski //Thorax 2000. - Vol. 55. - P. 1023-1027.

85. Human collagenase (matrix metalloproteinase-1) expression in the lungs of patients with emphysema t K, Imai, S.S. Dalai, E.S, Chen et aLJ // Am J, Respir. Grit- Care Med. 2001. - Vol. 163. - P 786-791.

86. Hurme, M- IL-1 receptor antagonist (IL-IRA) plasma levels are co-ordinately regulated by both IL-IRA and IL-Iß genes / M. Hurme, S. Santtila // Eur. J, Immunol. 1998. - Vol. 28. - P. 2598-2602.

87. Identification of three new single nucleotide polymorphisms in the human tumor necrosis factor-a gene promoter / A.M. Uglialoro, D. Turhay, P.A. Pesavento et at. tt Tissue Antigens. 1998. - Vol. 52, - P. 359-367.

88. Increased MCP-1 and MlP-lbeta in bronchoatveotar lavage fluid of chronic bronchi?ics / A. Capelli, A, Di Stefano, I. Gnemmi et at.} H Eur, Respir. J, 1999,-Vol, 14. - P. 160-165.

89. Independent mutations in the flanking sequence of the al-antiirypsin gene are associated with chronic obstructive airways disease / N.A. Kalsheker. G.L. Watkins, S, Hill {et al. // Dis. Markers. Vol. 8. - P. 151-157,

90. Interleukin-I beta gene and receptor antagonist gene polymorphisms in patients with calcium oxalate stones ) W.C. Chen, H.C, Wu, H.Y. Chen et al.J // Urol. Res. 2001. - Vol. 29(5), - P, 321-324.

91. Ishihara, K. IL-6 in autoimmune disease and chronic inflammatory proliferative disease / K. Ishihara, T. Hirano // Cytokine Growth, Factor Rev. 2002. - Vol. 13. -P. 357-368.

92. Krugtyak, L, Variation is the spice of life ( L. Krugtyak, D. Nickerson // Nai. Genet 2001. - Vol. 27. - P. 234-236.

93. Lack of association of group specific component haplotypes with tung function in smokers /1. Kasuga, P. Pare, J. Ruan {et al. H Thorax. 2003 -Vol. 58. - P, 790-793,

94. Laurcll, C.C. The electropborectic alpha-1-globulin pattern of serum in alpha-1-antitrypsin deficiency / C.C. Laurell, S. Eriksson // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1963. - Vol. 15.- P. 132-140.

95. Lieberman, J. eri -antitrypsin Pi-types in 965 COPD patients / J. Lieberman, B. Winter. A. Sastre II Chest. 1986. - Vol. 89. - P. 370-373.

96. Lomas, D.A. The genetics of chronic obstructive pulmonary disease / D.A. Lomas, E,K. Silverman ft Respir. Res, 2001. - Vol. 2. - P, 2026.

97. Lymphocyte expression of human leukocyte antigen class II molecules in patients with chronic obstructive pulmonary disease / H, Recalde, M. Cuccia, T. Oggionni et aJ. U Monaldi Arch. Chest. Dis. 1999. -Vol. 54. - P. 384-389,

98. S. MacN'ee, W. Oxidants/antioxidants and COPD / W. MacNee II Chest. 2000. - Vol. 117, 5, Suppl L - P. 303-317.

99. Mutation in the 3'region of the a-1-antitrypsin gene and chronic obstructive pulmonary disease / A.J. Sand ford, J.J. Spinelli. T.D. Weir, P.D. Pare ft J. Med. Genet. 1997. - Vol, 34. - P. 874-875,

100. Nagase, H. Matrix Metalloproteinases / H. Nagase, J.F. Woessner // The journal of biological chemistry. 1999. - Vol, 274, - P. 21491-21494.

101. Novel polymorphisms and the definition of promoter alleles of the tumor necrosis factor and lymphotoxin alpha loci: inclusion in HLA haplotypes / P.E. Posch. I, Cruz, D. Bradshaw, B A. Medhekar // Genes Immun. -2003. Vol, 4, - P. 547-558.

102. Parks, W.C. Matrix metalloproteinases in lung biology / W.C. Parks, S,D, Shapiro//Respir. Res 2001. - Vol. 2. - P. 10-19.

103. Passive smoking in obstructive respiratory disease in an industrialized urban population / H,H. Dayal, S. Khuder, R. Sharrar, N. Trieff// Environ. Res. 1994. - Vol. 65. - P 16I-I7L

104. Polymorphism in human IL-I receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numbers of an 86-bp tandem repeat / J,K. Tarlow, A.L Blakemore, A Lcnnard etal . //Hum. Genet 1993. - Vol,91. - P. 403-404.

105. Poller, W. DNA polymorphisms of the «1 -antitrypsin gene region in patients with chronic obstructive pulmonary disease / W- Poller, C. Me ¡sen, K. Olek // Eur. J. Clin, Invest. 1990. - Vol. 20. - P. 1-7.

106. Priority among air pollution factors for preventing chronic obstructive pulmonary disease in Shanghai / X, Tao. CJ. Hong, S. Yu et al. // Sci, Total Environ. 1992. - Vol. 127. - P. 57-67.

107. Pulmonary function in identical twins' comparison of nonsmokers and smokers / P.M. Webster, E.G. Lorimer, S.F. Man el al,. U Am, Rev. Rcspir. Dis. 1979. - Vol. 119. - P. 223- 228.

108. Rahman, I. Lung glutathione and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease / I. Rahman, W. MacNee // Am. J. Physiol 1999. - Vol.277. - P 1067-1088.

109. Relevance of the tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) -308 promoter polymorphism in TNF alpha gene regulation / B.M. Brinkman, D. Zuijdees, E.L. Kaijzcl el al. // J, In flamm. 1995. - Vol, 46. - P. 32-41.

110. Rcnnard, S. Pathophysiological mcchanisms of COPD, / Eur, Reap, Rev. 1997. - Suppl. A - P. 2-8.

111. Ricciardolo, F, L. Multiple roles of nitric oxide in the airways !l Thorax. 2003, - Vol. 58, - P, 175-182.

112. Risk of hospital admission for obstructive pulmonary disease in alpha {1 ^antitrypsin heterozygotes of phenotype PiMZ / N. Seersholm, J,T. Wilcke, A. Kox-Jensen, A. Dirkscn H Am, J, Rcspir, Crit Care, 2000, - Vol. 161. - P. 81-84.

113. Riva, A, SNPper; retrieval and analysis of human SNPs / A. Riva, 1, Kohane it Bioinformatics, 2002. - Vol. 18. - P. 1681-1685,

114. Roff, D.F. The statistical analysis of mitochondrial DNA: x* and problem of small samples / D.F. Roff, P. Bensen // Mol. Biol. Evol. 1989. -Vol,6.-P. 539-545.

115. Saetta, M. Central airways inflammation in the development of COPD, / Eur. Resp. Rev, 1997. - P, 7,43,109-110

116. Sandford, A.J. Chronic obstructive pulmonary disease. I: Susceptibility factors for COPD the genotype-environment interaction / AJ. Sandford, E.K. Silverman // Thorax. 2002. - Vol. 57. - P. 736-741.

117. Sandford, A.J. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease I A,J, Sandford, T.D. Weir, P,D. Pare // Eur. Respir, J, -1997.-Vol. 10. 'P. 1380-1391.

118. Schwartz, D,A, The Genetics of Innate Immunity / D.A. Schwartz // Chest. 2002. - Vol, 121. - P. 62-68.

119. Schlcsselman, J, Case-control studies. Design, conduct» analysis / J, Schlcsselman // New York. Oxford: Oxford University Press, -1982. P, 58-96.

120. Shapiro, S.D. Proteolysis in lung // Eur, Respir J. 2003. - Vol. 22. Suppl. 44. - P. 30-32.

121. Silverman, E. K, Genetic Epidemiology of COPD // Chest. 2002. -Vol. 121.-P. 1-6,

122. Silverman, E-K. Case-control association studies for the genetics of complex respiratory diseases ! E.K. Silverman, L,J, Palmer t! Am. J. Respir, Cell Mol. Biol. -2000. Vol.22.- P. 645-648.

123. Song, W. Inter leu kin-6 in bronchoalveolar la%rage fluid from patients with COPD / W. Song, J. Zhao, 2. Li // Chin. Med. J. 2001. - Vol. 114,-P. 1140-1142.

124. Spcizer, F.E. Familial aggregation of chronic respiratory disease: use of national health interview survey data for specific hypothesis testing t F E. Speister, B. Rosner, I. Tager // Int. J, Epidemiol. 1976. - Vol, 5. - P. 167.

125. Sputum endothelin-1 is increased in cystic fibrosis and chronic obstructive pulmonary disease / G,W. Chalmers, K.J. Macleod, S. Sriram Jet al.J // Eur. Respir, J. 1999. - Vol. 13. - P. 1288-1292,

126. Standards for the Diagnosis and Care of patients with chronic obstructive pulmonary disease. American Journal of Resp.Crit. Care Med. 1995. - VoM52.Jfe5.-P. 78-121,

127. Stocklcy. R,A, Cellular mechanisms in pathogenesis of COPD // Eur, Rcsp, Review, -1996. Vol. 6, № 39. - P. 264-270,

128. Stocklcy, RA. Neutrophils and the pathogenesis of COPD t! Chest. -2002. Vol. 121. - P. 151-155.

129. Stricter, R-M. Cytokines in innate host defense in the lung i R,M. Stricter, J.A. Belperio. M P. Keanc // Clin, Invest. 2002. - Vol, 109 - P 699705.

130. Susceptibility Genes for Rapid Decline of Lung Function in the Lung Health Study / A J. Sandford, T. Chagant, T.D. Weir et al. U Am. J. Respir. Crit, Care Med, 2001. - Vol, 163, - P 469-473.

131. The gene polymorphism of tumor necrosis factor-/?, but not that of tumor necrosis factor-«, js associated with the prognosis of sarcoidosis / E. Yamaguchi, A, Itoh, N. Hizawa et al,. II Chest. 2001. - Vol, 119, - P. 753-761.

132. The interleukin-6 G(-174)C promoter polymorphism docs not determine plasma interleukin-6 concentrations in experimental endoloxemia in humans / G- Ettdler, C. Marsik, C. Joukhadar ¡et al. II Clin. Chem 2004. - Vol. 50. - P. 195-200.

133. The molecular basis of alpha I- antichymotrypsin defciency in a helcrozygotc with liver and lung disease / J.P. Faber, W. Poller., K. Olek et at. H J. Hepatol. 1993. - Vol. 18. - P. 313-321.

134. The natural history of forced expiratory volumes. Effect of cigarette smoking and respiratory symptoms / I.B. Tager, M.R. Segal, F,E. Speizcr, S.T. Weiss//Am, Rev Respir. Dis. 1988. - Vol 338. - P. 837-849.

135. The occupational burden of chronic obstructive pulmonary disease / L. Trupin, G. Earrust, M. San Pedro et al. II Eur, Respir. J. 2003. - Vol, 22(3). -P, 462-469.

136. The role of matrix metatloproteinase polymorphisms in the rate of decline in lung function / L. loos, J,Q, He, M,B. Shcphcrdson ctal.j // Hum. Mol. Genei. 2002. - Vol, II. - P. 569-576.

137. Transforming growth factor betal and recruitment of macrophages and mast cells in airways in chronic obstructive pulmonary disease / W.J. Dc Boer, A. van Schadewijk, J.K. Son I et a!. It Am. J. Respir. Crit. Care Med. -1998. Vol, 158.-P. 1951-1957.

138. Tumour necrosis factor-alpha gene promoter polymorphism and decreased insulin resistance / C, Day, J. Grove, A. Daly et al,. It Diabetologia, -1998 Vol, 41.- P. 430-434.

139. Tumour necrosis factor family genes in a phenotype of COPD associated with emphysema / L Perraroiti, M. Zorzetto, M. Beccaria et at . J fl Eur. Respir i 2003, - Vol. 21(3). - P. 444-449,

140. Tumor necrosis factor gene complex in COPD and disseminated bronchiectasis IC. Patuzzo, L S. Gilc, M. Zorzetto fct al.J 1/ Chest- 2000. - Vol. 117. - P. 1353-1358.

141. Tumor necrosis factor-a gene promoter polymorphism in chronic obstructive pulmonary disease t M.A. Higham, N.B. Pride, Alikhan {et al. ft Eur. Respir, J. 2000. - Vol 15 - P. 281-284.

142. Tumor Necrosis Factor-a +489G/A gene polymorphism is associated with chronic obstructive pulmonary disease t M. Kiictikaycan, M. Van Krugten, H-J. Pennings et al.J ii Respir. Res.- 2002. Vol. 3. - P.29.

143. Unusual haplotypic structure of IL8, a susceptibility locus for a common respiratory virus / J. Hull, H, Ackerman, K. Isles et al. II Am. J. Hum. Genet, 200L - Vol, 69, - P. 413-419.

144. Upregulation of gelatinases A and B, collagenases I and 2, and increased parenchymal cell death in COPD I L, Segura-Valdez, A. Pardo, M. Gaxiola et al.JH Chest. 2000. - Vol. 117. - P, 684-694.

145. J 79. Use of a highly purified al-anti trypsin standard to establish ranges for the common normal and deficient al-antitrypsin phenotypes / ML. Branily, J.T-Wittes, C.F. Vogelmeier et al. 1/ Chest. 1993. - Vol. 100. - P- 703-708.

146. Woessner, J. Matrix mecalloproteinases and their inhibitors in connective tissue remodeling I J, Woessner // Faseb. J. 1991. - Vol. 5. - P. 21452154.

147. World Health Organization Report, Alpha-1-antitrypsin deficiency,1996.

148. World Health Report, World Health Organisation, Geneva. 2000. -Available from URL: httpi//www.who.intAvhr/2000/en/stausties,htm.