Клиническое значение молекулярной визуализации в диагностике и контроле остаточных опухолевых клеток, вирусных инфекций и адоптивной клеточной терапии в гематологии/онкологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.13, кандидат наук Ликарь, Юрий Николаевич

• Ликарь, Юрий Николаевич
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Ликарь, Юрий Николаевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Молекулярная визуализация в онкогематологии для оценки инициального поражения, раннего ответа на терапию и остаточного заболевания у пациентов с лимфомами. Использование позитронно-эмиссионной томографии с З'-дезокси- 1Я 3'- F-флуоротимидином в диагностики онкологических заболеваний

1.2 Роль молекулярной визуализации в неинвазивной оценке новых методов лечения (адоптивная Т-клеточная терапия) при лечении онкологических заболеваний и для лечения вирусных осложнений у пациентов после ТГСК

1.3 Роль ген-направленной терапии фермент пролекарство для создаваемых ген-репортерных систем

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Характеристика больных включенных в данную работу, ПЭТ и анализ результатов, клиническая оценка и наблюдение

2.2 Характеристика методик использованных для выполнения in vitro и in vivo экспериментов

2.2.1 Ретровирусные векторы

2.2.2. Клеточные линии и их культивирование

2.2.3 Проточная цитофлуометрия и флуоресцентная микроскопия

2.2.4 Трансдукция и селекция Т-клеток

2.2.5 Анализ цитотоксической функции Т-клеток в отношении специфических клеток-мишеней

2.2.6 Стимуляция Jurkat клеток in vitro и in vivo

2.2.7 Оценка накопления радиофармпрепаратов: 2-флюоро-2'-деокси-1-P-D-

арабинофуранозил-5-этилурацила (FEAU) и пенцикловира (PCV) в трансдуцированных U87 клетках и накопления FEAU трансдуцированными Т-клетками in vitro

2.2.8 Оценка чувствительности к лекарственным препаратам

2.2.9 Экспериментальные группы животных

2.2.10 Компьютерная томография

2.2.11 Оценка накопления радиопроб, меченных изотопом l8F, - FEAU и 9-[4-флюоро-3-(гидроксиметил)бутил]гуанина (FHBG)

2.2.12 Измерение накопления радиомеченных проб в образцах тканей

2.2.13 Гистологический анализ

2.3 Статистическая обработка материала

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Прогностическое значение оценки инициального поражения и раннего ответа на терапию при помощи ПЭТ с ,8Р-ФЛТ у пациентов с неходжкинскими лим фомами

3.2. Создание и оценка ген-репортерных систем на основе человеческого гена деоксицитидинкиназы, для использования в клинических протоколах неинвазивной визуализации результатов клеточной терапии

3.2.1 Создание и in vitro оценка химерных ген-репортерных систем на основе деоксицитидинкиназы человека

3.2.2 In vivo неинвазивная оценка экспрессии химерных ген-репортерных систем на основе гена деоксицитидинкиназы человека, обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным пиримидинов в экспериментальных животных с помощью ПЭТ

3.3 In vitro оценка и неинвазивное мониторирование распределения и

локализации опухоль-специфических Т-клеток трансдуцированных CAR и ген-репортерной системой

3.3.1 In vitro оценка эффективности трансдукции человеческих Т-лимфоцитов ген-репортерной системой и CAR, и оценка их функциональной активности

3.3.2 ПЭТ/КТ визуализация локализации адоптивных опухоль-специфических Т-клеток трансдуцированных ген-репортерной системой и CAR

3.3.3 Гистология и иммунофлюоресцентный анализ образцов опухолевой ткани

3.4. Создание и оценка двойной ген-репортерной системы для визуализации двух независимых молекулярно биологических процессов в пределах одного организма (визуализация локализации и активация ген-модифицированных Т-клеток)

3.4.1 Создание и in vitro оценка химерных ген-репортерных систем обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным пуринов

3.4.2 Неинвазивная визуализация экспрессии ген-репортерных систем обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным пуринов в экспериментальных животных с помощью ПЭТ

3.4.3 Создание и in vitro оценка химерных ген-репортерных систем обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным пиримидинов

3.4.4 Неинвазивная визуализация экспрессии химерных ген-репортерных систем обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным пиримидинов в экспериментальных животных с помощью ПЭТ

3.4.5 Сравнительная, неинвазивная in vivo оценка экспрессии вновь созданных ген-репортерных систем на основе мутированного варианта HSVl-tk, обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным пуринов и/или пиримидинов в пределах одного организма с помощью ПЭТ

3.5 Создание и тестирование двойной ген-репортерной системы для визуализации локализации и оценки CD3 и/или CAR-зависимой активации Т-лимфоцитов

3.5.1 In vitro оценка эффективности флюоресцентной визуализации и количественной оценки CD3 и CAR-зависимой активации Т-лимфоцитов, трансдуцированных NFАТ-регулируемой ген-репортерной системой

3.5.2. ПЭТ визуализация локализации и СБЗ-зависимой активации Т-лимфоцитов на модели Jurkat инфильтратов используя двойную ген-репортерную систему

3.6. In vivo неинвазивная оценка возможности элиминации опухолевых клеток экспрессирующих ген-репортерные системы A167Ysr39tk и/или dCKDM

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СОКРАЩЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клиническое значение молекулярной визуализации в диагностике и контроле остаточных опухолевых клеток, вирусных инфекций и адоптивной клеточной терапии в гематологии/онкологии»

Введение

Актуальность проблемы

За последние десятилетия многообещающие методы лечения на основе генной и клеточной терапии перешли из лабораторной в клиническую стадию исследования. Значительную роль во внедрении данных методов в широкую практику играет прогресс в совершенствовании мониторинга терапевтического эффекта, в частности с помощью методов неинвазивной молекулярной визуализации. Молекулярная визуализация как комплекс методов может быть определена как «визуализация процессов на молекулярном уровне в реальном времени». Выделенная в отдельное направление около двадцати лет назад, в настоящее время молекулярная визуализация представляет собой сплав клиники, фармакологии, функциональной диагностики и ядерной медицины со значительным влиянием клеточной и молекулярной биологии, химии, радиохимии и физики элементарных частиц (1). Широкое использование молекулярной визуализации в лабораторной практике стало одним из основных источников получения информации о механизмах и путях регуляции практически всех значимых онкогенов и онкопротеинов (1, 2), факторов лекарственной устойчивости (3), неоангиогенеза (4) (5), пролиферации (6) и метастазирования злокачественных клеток (7), что способствует более глубокому пониманию биологических процессов гемопоэза и канцерогенеза, и созданию новых методов диагностики и лечения гематологических и онкологических заболеваний.

Биомаркерная, или «суррогатная», визуализация основана на мониторировании вторичных молекулярно-генетических мишеней и отражает внутренние молекулярно-генетические процессы. Примером подобного подхода является визуализация молекул фтордезоксиглюкозы меченной с помощью позитрон-эмиссионнои

томографии (ПЭТ) у пациентов с гематологическими и онкологическими заболеваниями

| о

(8). Использование Р-ФДГ у пациентов с опухолями различного генеза в том числе и с лимфомами, для инициальной диагностики и оценки ответа на терапию в настоящее время

1 я

становится неотъемлемой частью лечебных протоколов. Накопление F-ФДГ в тканях прямо пропорционально метаболизму глюкозы в клетках. Однако, повышенный метаболизм клетки далеко не всегда свидетельствует о ее злокачественности, что в свою очередь влияет на специфичность данного метода. В ряде доклинических и клинических исследований была показана зависимость между накоплением радиофармпрепарата аналога тимидина (3'-дезокси-3'-18Р-флуоротимидин (18Р-ФЛТ)) при ПЭТ и пролиферативной активностью клеток, что в отличии от метаболизма глюкозы можно

1 Я

считать более специфичным маркером для оценки роста опухоли (9). F-ФЛТ являясь производным тимидина и отражая активность клеточной пролиферации, может служить косвенным маркером для оценки механизмов транспорта и метаболизма целого ряда радиофармпрепаратов производных нуклеозидов создаваемых для других типов молекулярной визуализации в частности с использованием репортерных генов.

Поиск высокоспецифичных биологических методов лечения основанных на естественных механизмах распознавания и удаления чужеродного антигена без повреждения здоровых тканей организма, привел к разработке методов адоптивной клеточной иммунотерапии. Адоптивная иммунотерапия (от англ. adopt - усыновить) - это метод клеточной терапии, при котором пациенту вводятся иммунные эффекторные клетки крови, атакующие специфические мишени. Это отличает адоптивную иммунотерапию от клеточных вакцин, которые предполагают активную иммунизацию и, следовательно, образование эффекторных клеток in vivo. Примером адоптивной иммунотерапии может являться терапия лимфоцитами, активированными интерлейкином-2 (IL-2) ex vivo. Введение адоптивных опухолеспецифических Т-клеток пациентам с онкологическими заболеваниями является фундаментально новым экспериментальным методом, имеющим значение для изучения процессов опухолевой иммуно-патофизиологии. Введение антигенспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов оказалось эффективным в лечении инфекций, вызванных реактивацией цитомегаловируса (ЦМВ) и вируса

Эпштейна-Барр (ЭБВ) после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) при ряде онкологических заболеваний (10-17).

Необходимым условием адоптивной противоопухолевой терапии является мониторирование распространения, локализации и специфической активации вводимых пациентам с терапевтическими целями опухолеспецифических Т-клеток, которое позволяет проводить контроль и коррекцию иммунотерапии в режиме реального времени в соответствии с наблюдаемым терапевтическим эффектом и предотвращать развитие возможных нежелательных реакций.

Наиболее адекватным методом для мониторирования противоопухолевой клеточной терапии является неинвазивная молекулярная визуализация в частности с использованием репортерных генов (18-23). Общее научное направление применения репортерных генов для неинвазивной визуализации с использованием радиоактивно меченных проб было впервые описано в середине 90-х годов XX века, однако и по сей день ведется поиск оптимальных пар репортерный ген и репортерная проба для избирательной визуализации молекулярно-биологических процессов. Создание оптимальных моделей, в частности с применением репортерных генов, позволит проводить неинвазивную визуализацию (мониторирование) ген-модифицированных Т-клеток в клинических протоколах клеточной терапии у пациентов с гематологическими и онкологическими заболеваниями в режиме реального времени.

Цель исследования

Контроль эффективности противоопухолевой химио- и иммунотерапии у больных гематологическими и онкологическими заболеваниями с помощью неинвазивной оценки

L

биологических процессов онко-, гемо- и иммуно-генеза методами молекулярной

визуализации.

Задачи

1 б

1. Определить прогностическую взаимосвязь накопления ПЭТ с 'Т-ФЛТ (маркера пролиферации) при инициальной диагностике поражений у пациентов с диффузной В-клеточной крупноклеточной лимфомой и после 1-го курса лечения с результатами противоопухолевой терапии.

2. Оценить возможность неинвазивного определения пролиферативной активности опухоли при использовании радиофармпрепаратов - аналогов тимидина для стандартизации результатов ген-репортерной визуализации у пациентов.

3. Обеспечить повышение чувствительности и специфичности визуализирующих методов исследования биологии опухолей и противоопухолевого ответа путем создания комплексных ген-репортерных систем в том числе с генами человеческой природы, позволяющих осуществлять доклиническую разработку (in vitro, in situ (флуоресцентная микроскопия и FACS)), и клиническое тестирование in vivo неинвазивными методами радионуклидной диагностики с использованием позитрон-эмиссионной томографии.

4. Оценить сохранность функциональной активности и специфичности различных клеточных линий, включая человеческие Т-клетки трансдуцированные созданными ген-репортерными системами и химерным антиген специфическим рецептором.

5. Провести мониторинг локализации, персистенции и оценку активации ген-модифицированных Т-клеток используя созданные ген-репортерные системы с соответствующим радиофармпрепаратом путем неинвазивной ПЭТ-визуализации.

Оценить возможность суицидальной элиминации введенных клеток, трансдуцированных созданными ген-репортерными системами из организма пациента при необходимости. Научная новизна В данной работе впервые:

- была проанализирована эффективность использования ПЭТ с 18F-(MT для оценки пролиферативной активности клеток у пациентов с диффузной В-клеточной

1Я

крупноклеточной лимфомой в сравнении с ПЭТ с 1Т-ФДГ и выполнена оценка прогностического значения накопления 18Р-ФЛТ до начала лечения и после 1-го курса противоопухолевой терапии у данной группы пациентов.

- разработаны и испытаны ген-репортерные системы, на основе гена тимидин киназы вируса простого герпеса 1-го типа и гена деоксицитидинкиназы человека, обладающие специфичностью к радиофарпрепаратам производным пуринов A167Ysr39tk/GFP; и производным пиримидинов R176QYsr39tk/GFP и dCKDM для динамической, неинвазивной, оценки различных молекулярно-биологических процессов в пределах одного организма.

- продемонстрирована возможность стабильной, эффективной трансдукции Т-клеток, здоровых доноров, ген-репортерными системами A167Ysr39tk/GFP, dCKDM/GFP и химерным антиген специфическим рецептором; доказано сохранение функциональной активности ген-модифицированных Т-клеток.

- проведен долгосрочный неинвазивный мониторинг введенных ген-модифицированных Т-лимфоцитов трансдуцированных dCKDM/GFP ген-репортерной системой и химерным рецептором.

- создана NFAT-регулируемая двойная ген-репортерная система, позволяющая проводить неинвазивную оценку активации Т-лимфоцитов в режиме реального времени in vitro и in vivo при помощи ПЭТ.

- проведена оценка «суицидальной» активности в созданных ген-репортерных системах: A167Ysr39tk с ганцикловиром и dCKDM с цитарабином, на различных клеточных линиях, как in vitro, так и in vivo. Научно-практическая значимость

• Результаты выполненного анализа дают основания заключить, что использование ПЭТ/18Р-ФЛТ, не уСХуПает по своей диагностической значимости в определении инициальных очагов поражения при сравнении с ПЭТ/18Р-ФДГ, но позволяет в зависимости от интенсивности его накопления проводить неинвазивную дифференциальную диагностику различий пролиферативной активности опухолей и нормальных клеток.

• Установленная взаимосвязь между значениями инициального накопления 18F-OJIT и результатом лечения (достижение полной и/или парциальной ремиссии) помогает в стратификации пациентов на группы риска и как следствие, в выборе протокола лечения. Использование ПЭТ с 18F-®JIT дает возможность проводить раннюю оценку

1Я i-«

ответа на терапию и показывает взаимосвязь между накоплением F-ФЛТ с выживаемостью без прогрессии, помогает в определении группы пациентов с плохим прогнозом на ранних этапах проводимой терапии и дает возможность использования альтернативной терапии у таких пациентов для достижение лучших результатов лечения.

• Использование разработанных и протестированных ген-репортерных систем, обладающих специфичностью к радиофармпрепаратам производным ациклогуанозинов и/или пиримидинов, дает возможность изучать различные (два и более) молекулярно-биологические процессы в пределах одного организма с помощью ПЭТ. Созданная и апробированная в Т-клетках человека ген-репортерная система, на основе человеческого гена деоксицитидинкиназы, позволяет использовать ее для неинвазивного мониторирования Т-клеток при адоптивной Т-клеточной терапии.

• Наличие «суицидальной активности» в мутированных вариантах гена тимидинкиназы HSV-1 и деоксицитидинкиназы человека к пролекарствам ганцикловиру и цитарабину, соответственно, позволяет элиминировать введенные ген-модифицированные Т-клетки из организма при необходимости.

• Использование созданной NFAT-индуцированной двойной ген-репортерной системы, для ПЭТ, позволит осуществлять мониторинг локализации и количественной оценки CD3- и CAR - зависимой активации ген-модифицированных Т-лимфоцитов, что дает возможность проводить оценку эффективности Т-клеточной терапии и проводить ее коррекцию. Дополнительно, использование NFAT-индуцированной двойной ген-репортерной системы для визуализации и количественной оценки активации Т-лимфоцитов ш vivo в экспериментальных целях позволяет проводить как фундаментальные исследования молекулярно-биологических процессов, происходящих с Т-лимфоцитами in vivo, так и разрабатывать новые подходы к диагностике и лечению состояний, при которых информация о локализации и функциональном состоянии Т-клеток может влиять на прогноз и тактику терапии.

Внедрение в практику

1) Начаты клинические испытания репортерных систем для визуализации ген-модифицированных цитотоксических Т-лимфоцитов с искуственным рецептором в онкологическом Центре Мемориал Слоан-Кеттеринг, Нью-Йорк, США.

2) ПЭТ с l8F-OJIT предложен для включения в протокол клинических испытаний визуализации поражений у пациентов с лимфомами в онкологическом центре Мемориал Слоан-Кетткринг, Нью-Йорк, США.

3) Мультифункциональная репортерная система на основе гена деоксицитидинкиназы человека используется для неинвазивной визуализации и мониторирования экспериментальных моделей иммунного ответа в условиях адоптивной клеточной терапии

ген-модифицированными цитотоксическими Т-лимфоцитами в лаборатории Молекулярной Визуализации исследовательского центра М. Цукермана, Нью-Йорк, США. Основные положения выносимые на защиту

1. Использование ПЭТ с 18Р-ФЛТ, является эффективным методом инициальной диагностики поражений у пациентов с диффузной В-клеточной крупноклеточной

1Я

лимфомой. Оценка интенсивности накопления маркера пролиферации Б-ФЛТ в отличие от оценки метаболической активности опухолевых клеток используя ПЭТ с ,8Р-ФДГ позволяет оценить ранний ответ на проводимую химиотерапию у пациентов с диффузной В-клеточной крупноклеточной лимфомой, что может использоваться как прогностический фактор для стратификации пациентов на группы риска.

2. Основываясь на успехе молекулярной визуализации с аналогами нуклеозидов (ФЛТ), впервые разработаны ген-репортерные системы на основе гена тимидин киназы вируса простого герпеса (А167Узг391к, Я176С)зг391к) и гена человеческой деоксицитидинкиназы (ёСКЮМ) обладающие специфичностью к клинически

1 Я

апробированным радиофармпрепаратам производным пуринов ("Т-РНВО) и/или

1 Я

пиримидинов ( Б-РЕАЦ), для одновременной неинвазивной визуализации и изучения нескольких молекулярно-биологических процессов в пределах одного организма с помощью позитронно-эмиссионной томографии.

3. Проведенная оценка функциональной активности и специфичности клеток человеческой природы, экспрессирующих вновь созданные ген-репортерные системы показала их стабильность и инертность. В результате доклинических исследований доказана возможность удаления клеток, трансдуцированных вновь созданными ген-репортерными системами А167У8г391к или ёСКОМ путем введения низкотоксичных лекарственных веществ (ганцикловира и цитозин-арабинозида, соответвенно) с возможностью проведения неинвазивного контроля.

4. Используя репортерные гены человеческой природы впервые методами молекулярной визуализации in vitro (флоуцитометрия) и in vivo (ПЭТ) осуществлен неинвазивный мониторинг распределения вирусного вектора, локализации и уровня активации транскрипционно регулируемых репортерных и терапевтических генов, молекулярно-биологических процессов, вовлеченных в механизм активации Т-клеток на субклеточном уровне и перераспределения цитотоксических Т-лимфоцитов в реальном времени в течение определенного периода их существования в организме. Место выполнения работы

Исследование проведено в 2006-2012 гг. в рамках научного сотрудничества ФГБУ «ФНКЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России и Мемориал Слоан-Кеттеринг Онкологического Центра, США. Экспериментальная часть исследования выполнена на базе лаборатории молекулярной визуализации отдела радиологии Мемориал Слоан-Кеттеринг Онкологического Центра (руководитель отдела Dr. Н. Hricak). Клиническая часть работы, включая ретроспективный анализ популяций онкологических и гематологических пациентов проводилась на базе Мемориал Слоан-Кеттеринг Онкологического Центра, Нью-Йорк, США и ФГБУ «ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева». Автор глубоко благодарен за неоценимый вклад в представленную работу: В.Б. Пономареву, Hedvig Hricak, Steven М. Larson, Д.Н. Балашову. Апробация материалов диссертации

Основные результаты работы доложены в виде докладов и стендовых презентаций на международной конференции Общества Молекулярной Визуализации (Провиденс, 2007; Монреаль, 2009); на межлабораторной конференции Мемориал Слоан-Кеттеринг онкологического центра (Нью-Йорк, 2007-2009); на 56 и 57 ежегодных съездах Общества Ядерной Медицины (Торонто, 2009; Солт-Лейк-Сити, 2010); американском обществе

генной и клеточной терапии (Вашингтон, 2010); VI, VII и VTII международных симпозиумах «Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний». — Москва, 2009; Москва, 2011; Москва, 2013). Результаты исследований используются в лекциях и семинарах для подготовки гематологов, онкологов и радиологов на кафедре гематологии, онкологии и лучевой терапии ГБОУ ВПО Российский Национальный Исследовательский Медицинский Университет им. Н.И.Пирогова Минздрава России.

Материалы диссертации опубликованы в рецензируемых научных журналах, том числе в изданиях, рекомендованных в перечне ВАК. Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения (включающее цели и задачи диссертации, актуальность, практическое значение, внедрение), обзора литературы (220 источников), методической части (материалы и методы), шести разделов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка публикаций и списка сокращений. В тексте содержится 47 рисунков и 9 таблиц.

Обзор литературы

За последние десятилетия произошел переход исследований многообещающих методов лечения на основе генной и клеточной терапии из лабораторной в клиническую стадию. Значительную роль в адаптации данных методов к широкой клинической практике играет совершенствование мониторинга терапевтического эффекта, в частности с помощью комплекса методов неинвазивной молекулярной визуализации. Молекулярная визуализация, как комплекс методов может быть определена как «визуализация процессов на молекулярном уровне в режиме реального времени». Данное направление сформировано на основе исследований в области накопления и распределения в организме различных химических соединений (24). Выделенная в отдельное направление около 20 лет назад, в настоящее время молекулярная визуализация представляет собой синтез фармакологии, функциональной диагностики и ядерной медицины со значительным влиянием клеточной и молекулярной биологии, химии, радиохимии и физики элементарных частиц (1). Все большее значение в этом комплексе методов приобретает математика биологических процессов, что позволяет в условиях современных технологий проводить различные методы анализа, основанные на реконструировании данных и презентации их в легко читаемом формате (25).

Существуют 3 основные стратегии молекулярной визуализации: «прямая», «опосредованная» визуализация молекулярно-генетических процессов и так называемая «суррогатная» визуализация биомаркеров. Эти стратегии основаны на использовании таких методов диагностики, как радионуклидная, магнитно-резонансная и оптическая визуализация (26).

Метод «прямой» визуализации предполагает использование химических и радиохимических соединений-биоконъюгатов, содержащих парамагнитные частицы для ядерно-магнитной визуализации или радиоифармпрепараты для позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) и однофотонной эмиссионнной компьютерной томографии (ОФЭКТ),

которые способны образовывать комплексы с эндогенными молекулами. В настоящее время ведутся работы с целью создания, тестирования и внедрения новых компонентов, таких как активируемые ферментативные сигнальные системы, специфичные для определенных путей регуляции, а также веществ, имеющих узко направленную реактивность с различными молекулами, например, ДНК, мРНК, белками.

Биомаркерная или «суррогатная» визуализация основана на мониторировании вторичных молекулярно-генетических мишеней и отражает внутренние молекулярно-генетические процессы. Данный тип визуализации является наиболее привлекательным направлением для развития и клинического внедрения в ближайшее время. Главным основанием для этого является наличие большого числа радиофармпрепаратов и методов, которые можно использовать для мониторинга путей регуляции молекулярно-биологических процессов на молекулярном уровне, имеющих значение для развития онкологических заболеваний. Примером подобного подхода является визуализация молекул глюкозы, меченных изотопом 18Р, с помощью ПЭТ (27). В настоящее время 18Б-флуородеоксиглюкоза широко используется у пациентов с онкологическими заболеваниями, как с целью диагностики, так и для оценки ответа при назначении химио-и лучевой терапии (8, 28-30). Метод «опосредованной» неинвазивной молекулярной визуализации основан на использовании репортерных генов с соответствующей репортерной пробой, что значительно повышает специфичность и как следствие диагностическую значимость в сравнении с «суррогатной» визуализацией.

Именно гематология и онкология стали основными областями приложения достижений молекулярной визуализации. Так, применение молекулярной визуализация в гематологоии и онкологии играет существенную роль в инициальной диагностике, стадировании, оценки раннего ответа на терапию и определении остаточного заболевания. Метод молекулярной визуализации с использованием репортерных генов позволяет изучать процессы специфической активации, миграции и пролиферации Т-лимфоцитов,

при адоптивной клеточной терапии, что представляет особый интерес для фундаментальной и клинической гематологии, онкологии и иммунологии.

Неходжкинские лимфомы (НХЛ) представляют собой гетерогенную группу злокачественных лимфопролиферативных заболеваний, различающихся по биологическим свойствам, морфологическому строению, клиническим проявлениям, ответу на терапию и прогнозу. Диффузные В-крупноклеточные лимфомы (ДВККЛ) -самые частые виды НХЛ высокой степени злокачественности, для которых характерно агрессивное течение с плохим прогнозом. В последние годы возможности эффективного лечения НХЛ, особенно ДВККЛ, значительно улучшились с введением в практику комбинированной иммунохимиотерапии - сочетания курсов полихимиотерапии (ПХТ) с использованием химерного моноклонального анти-СБ20 антитела ритуксимаба, которая стала стандартом лечения этой опухоли (31, 32). Однако около 30% больных ДВККЛ не достигают стойкой ремиссии после терапии первой линии и, в конечном итоге, умирают от прогрессии заболевания. Современная терапия 2-й линии, базирующаяся на использовании высокодозной химиотерапии с последующей аутологичной трансплантацией стволовых клеток, эффективна у 30%-35% пациентов, не ответивших на терапию или рецидивировавших после терапии первой линии (33). Поэтому проблема повышения эффективности лечения все еще актуальна и продолжаются исследования в разных направления с целью решения этой задачи.

Очевидно, что клиницистам очень важно иметь надежные «прогностические маркеры», которые инициально можно использовать для выбора максимально эффективной программы лечения, а в динамике выполнения этой программы - как критерии оценки эффекта, основываясь на которых можно было бы проводить коррекцию терапии. Эти проблемы решают уже много лет, прогностические показатели постоянно обновлялись по мере появления все более информативных диагностических методик. На основании тщательного изучения всех проявлений НХЛ было установлено, что несмотря

на появление современных подходов, все еще значимыми факторами неблагоприятного прогноза остаются известные давно клинико-лабораторные показатели, такие как возраст больного (старше 60 лет), общее состояние больного, повышение уровня лактатдегидрогеназы в сыворотке крови, распространенность и локализация опухоли при наличии более одного экстранодального очага поражения. Эти показатели вошли в международный прогностический индекс (МПИ), определение которого является стандартным при оценке прогноза для пациента (34).

Однако, даже в рамках одной прогностической группы пациентов со сходным МПИ существуют значительные различия в результатах лечения, что дает основание продолжать поиск более четких прогностических критериев.

Мониторинг эффективности лечения, как правило, осуществляется по оценке размера опухоли с помощью компьютерной томографии (КТ). К сожалению, по данным КТ даже с использованием различных препаратов с целью контрастирования очагов поражения, невозможно определить различия между опухолевой тканью и остаточным образованием (фиброз, некроз). Кроме того, оценка раннего ответа на терапию при помощи КТ не является достоверной методикой, потому что для уменьшения размеров опухоли на фоне проводимой терапии может потребоваться длительное время. Разработка и использование методов молекулярной визуализщации, основанных на определении различных радиофармпрепаратов (РФП) при помощи позитрон-эмиссионной томографии (ПЭТ), в дополнении к существующим неинвазивным методам оценки параметров первичной опухоли, этапного или раннего ответа на терапию может стать тем «прогностическим маркером», значение которого будет, безусловно, коррелировать с

| о

исходом заболевания. Была показана эффективность ПЭТ с фтордезоксиглюкозой ( Б-ФДГ) в диагностике ДВККЛ и доказана высокая чувствительность данной методики в определении очагов опухолевого поражения (35-37). Показана взаимосвязь между накоплением 18Р-ФДГ в остаточной опухоли после окончания терапии и выживаемостью

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ликарь, Юрий Николаевич, 2014 год

Список литературы.

1. Blasberg RG, Gelovani-Tjuvajev J. In vivo molecular-genetic imaging. Journal of cellular biochemistry. 2002;39:172-83.

2. Blasberg R. Imaging gene expression and endogenous molecular processes: molecular imaging. J Cereb Blood Flow Metab. 2002 Oct;22(10):1157-64.

3. Bigott HM, Prior JL, Piwnica-Worms DR, Welch MJ. Imaging multidrug resistance P-glycoprotein transport function using microPET with technetium-94m-sestamibi. Mol Imaging. 2005 Jan-Mar;4(l):30-9.

4. Rossin R, Berndorff D, Friebe M, Dinkelborg LM, Welch MJ. Small-animal PET of tumor angiogenesis using a (76)Br-labeled human recombinant antibody fragment to the ED-B domain of fibronectin. J Nucl Med. 2007 Jul;48(7):1172-9.

5. Massague J. TGFbeta in Cancer. Cell. 2008 Jul 25;134(2):215-30.

6. Solit DB, Garraway LA, Pratilas CA, Sawai A, Getz G, Basso A, et al. BRAF mutation predicts sensitivity to MEK inhibition. Nature. 2006 Jan 19;439(7074):358-62.

7. Scholz M, Lorenz A, Pesavento A, Brendel B, Khaled W, Engelhardt M, et al. Current status of intraoperative real-time vibrography in neurosurgery. Ultraschall Med. 2007 Oct;28(5):493-7.

8. Hoekstra CJ, Paglianiti I, Hoekstra OS, Smit EF, Postmus PE, Teule GJ, et al. Monitoring response to therapy in cancer using [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose and positron emission tomography: an overview of different analytical methods. European journal of nuclear medicine. 2000 Jun;27(6):731-43.

9. Wagner M, Seitz U, Buck A, Neumaier B, Schultheiss S, Bangerter M, et al. 3'-[18F]fluoro-3-deoxythymidine ([18F]-FLT) as positron emission tomography tracer for imaging proliferation In a murine B-Cell lymphoma model and in the human disease. Cancer Res. 2003 May 15;63(10):2681-7.

10. Dudley ME, Rosenberg SA. Adoptive-cell-transfer therapy for the treatment of patients with cancer. Nature reviews. 2003 Sep;3(9):666-75.

11. Einsele H, Roosnek E, Rufer N, Sinzger C, Riegler S, Loffler J, et al. Infusion of cytomegalovirus (CMV)-specific T cells for the treatment of CMV infection not responding to antiviral chemotherapy. Blood. 2002 Jun l;99(ll):3916-22.

12. Gottschalk S, Rooney CM, Heslop HE. Post-transplant lymphoproliferative disorders. Annu Rev Med. 2005;56:29-44.

13. Straathof KC, Bollard CM, Popat U, Hüls MH, Lopez T, Morriss MC, et al. Treatment of nasopharyngeal carcinoma with Epstein-Barr virus-specific T lymphocytes. Blood. 2005 Mar l;105(5):1898-904.

14. Heslop HE, Slobod KS, Pule MA, Hale GA, Rousseau A, Smith CA, et al. Long-term outcome of EBV-specific T-cell infusions to prevent or treat EBV-related lymphoproliferative disease in transplant recipients. Blood. 2010 Feb 4;115(5):925-35.

15. Uhlin M, Okas M, Gertow J, Uzunel M, Brismar TB, Mattsson J. A novel haplo-identical adoptive CTL therapy as a treatment for EBV-associated lymphoma after stem cell transplantation. Cancer immunology, immunotherapy: Cll. 2010 Mar;59(3):473-7.

16. Feuchtinger T, Opherk K, Bethge WA, Topp MS, Schuster FR, Weissinger EM, et al. Adoptive transfer of pp65-specific T cells for the treatment of chemorefractory cytomegalovirus disease or reactivation after haploidentical and matched unrelated stem cell transplantation. Blood. 2010 Nov 18;116(20):4360-7.

17. Peggs KS, Thomson K, Samuel E, Dyer G, Armoogum J, Chakraverty R, et al. Directly selected cytomegalovirus-reactive donor T cells confer rapid and safe systemic reconstitution of virus-specific immunity following stem cell transplantation. Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 2011 Jan l;52(l):49-57.

18. Iyer M, Sato M, Johnson M, Gambhir SS, Wu L. Applications of molecular imaging in cancer gene therapy. Curr Gene Ther. 2005 Dec;5(6):607-18.

19. Jacobs A, Voges J, Reszka R, Lercher M, Gossmann A, Kracht L, et al. Positron-emission tomography of vector-mediated gene expression in gene therapy for gliomas. Lancet. 2001 Sep l;358(9283):727-9.

20. Penuelas I, Mazzolini G, Boan JF, Sangro B, Marti-Climent J, Ruiz M, et al. Positron emission tomography imaging of adenoviral-mediated transgene expression in liver cancer patients. Gastroenterology. 2005 Jun;128(7):1787-95.

21. Acton PD, Zhou R. Imaging reporter genes for cell tracking with PET and SPEC!". Q J Nucl Med Mol Imaging. 2005 Dec;49{4):349-60.

22. Minn AJ, Kang Y, Serganova I, Gupta GP, Giri DD, Doubrovin M, et al. Distinct organ-specific metastatic potential of individual breast cancer cells and primary tumors. J Clin Invest. 2005 Jan;115(l):44-55.

23. Doubrovin MM, Doubrovina ES, Zanzonico P, Sadelain M, Larson SM, O'Reilly RJ. In vivo imaging and quantitation of adoptively transferred human antigen-specific T cells transduced to express a human norepinephrine transporter gene. Cancer Res. 2007 Dec 15;67(24):11959-69.

24. Raskin NH, Sokoloff L. Ethanol-induced adaptation of alcohol dehydrogenase activity in rat brain. Nature: New biology. 1972 Apr 5;236(66):138-40.

25. Zanzonico PB, Nehmeh SA. Introduction to clinical and laboratory (small-animal) image registration and fusion. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2006;1:1580-3.

26. Gelovani Tjuvajev J, Blasberg RG. In vivo imaging of molecular-genetic targets for cancer therapy. Cancer cell. 2003 Apr;3(4):327-32.

27. Doubrovin M, Ponomarev V, Blasberg RG. PET-based reporter gene imaging. Assessment of endogenous molecular-genetic events. IEEE Eng Med Biol Mag. 2004 Jul-Aug;23(4):38-50.

28. Avril NE, Weber WA. Monitoring response to treatment in patients utilizing PET. Radiologic clinics of North America. 2005 Jan;43(l):189-204.

29. Ishimori T, Saga T, Nagata Y, Nakamoto Y; Higashi T, Mamede M, et al."18F-FDG and 11C-methionine PET for evaluation of treatment response of lung cancer after stereotactic radiotherapy. Annals of nuclear medicine. 2004 Dec;18(8):669-74.

30. Kumar R, Xiu Y, Potenta S, Mavi A, Zhuang H, Yu JQ, et al. 18F-FDG PET for evaluation of the treatment response in patients with gastrointestinal tract lymphomas. J Nucl Med. 2004 Nov;45(ll):1796-803.

31. Coiffier B, Lepage E, Briere J, Herbrecht R, Tilly H, Bouabdallah R, et al. CHOP chemotherapy plus rituximab compared with CHOP alone in elderly patients with diffuse large-B-cell lymphoma. The New England journal of medicine. 2002 Jan 24;346(4):235-42.

32. Pfreundschuh M, Trumper L, Osterborg A, Pettengell R, Trneny M, Imrie K, et al. CHOP-like chemotherapy plus rituximab versus CHOP-like chemotherapy alone in young patients with good-prognosis diffuse large-B-cell lymphoma: a randomised controlled trial by the MabThera International Trial (MlnT) Group. The lancet oncology. 2006 May;7(5):379-91.

33. Gisselbrecht C, Glass B, Mounier N, Singh Gill D, Linch DC, Trneny M, et al. Salvage regimens with autologous transplantation for relapsed large B-cell lymphoma in the rituximab era. J Clin Oncol. Sep 20;28(27):4184-90.

34. A predictive model for aggressive non-Hodgkin's lymphoma. The International Non-Hodgkin's Lymphoma Prognostic Factors Project. The New England journal of medicine. 1993 Sep 30;329(14):987-94.

35. Juweid ME, Stroobants S, Hoekstra OS, Mottaghy FM, Dietlein M, Guermazi A, et al. Use of positron emission tomography for response assessment of lymphoma: consensus of the Imaging Subcommittee of International Harmonization Project in Lymphoma. J Clin Oncol. 2007 Feb 10;25(5):571-8.

36. Cheson BD, Pfistner B, Juweid ME, Gascoyne RD, Specht L, Horning SJ, et al. Revised response criteria for malignant lymphoma. J Clin Oncol. 2007 Feb 10;25(5):579-86.

37. Cheson BD. Role of functional imaging in the management of lymphoma. J Clin Oncol. 2011 May 10;29(14):1844-54.

38. Hutchings M, Barrington SF. PET/CT for therapy response assessment in lymphoma. J Nucl Med. 2009 May;50 Suppl 1:21S-30S.

39. Jerusalem G, Beguin Y, Fassotte MF, Najjar F, Paulus P, Rigo P, et al. Persistent tumor 18F-FDG uptake after a few cycles of polychemotherapy is predictive of treatment failure in non-Hodgkin's lymphoma. Haematologica. 2000 Jun;85(6):613-8.

40. Spaepen K, Stroobants S, Dupont P, Vandenberghe P, Thomas J, de Groot T, et al. Early restaging positron emission tomography with ( 18)F-fluorodeoxyglucose predicts outcome in patients with aggressive non-Hodgkin's lymphoma. Ann Oncol. 2002 Sep;13(9):1356-63.

41. Itti E, Lin C, Dupuis J, Paone G, Capacchione D, Rahmouni A, et al. Prognostic value of interim 18F-FDG PET in patients with diffuse large B-Cell lymphoma: SUV-based assessment at 4 cycles of chemotherapy. J Nucl Med. 2009 Apr;50(4):527-33.

42. Haioun C, Itti E, Rahmouni A, Brice P, Rain JD, Belhadj K, et al. [18F]fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography (FDG-PET) in aggressive lymphoma: an early prognostic tool for predicting patient outcome. Blood. 2005 Aug 15;106(4):1376-81.

43. Moskowitz CH, Schoder H, Teruya-Feldstein J, Sima C, lasonos A, Portlock CS, et al. Risk-adapted dose-dense immunochemotherapy determined by interim FDG-PET in Advanced-stage diffuse large B-Cell lymphoma. J Clin Oncol. 2010 Apr 10;28(ll):1896-903.

44. Buck AK, Halter G, Schirrmeister H, Kotzerke J, Wurziger I, Glatting G, et al. Imaging proliferation in lung tumors with PET: 18F-FLT versus 18F-FDG. J Nucl Med. 2003 Sep;44(9):1426-31.

45. Kenny LM, Vigushin DM, Al-Nahhas A, Osman S, Luthra SK, Shousha S, et al. Quantification of cellular proliferation in tumor and normal tissues of patients with breast cancer by [18F]fluorothymidine-positron emission tomography imaging: evaluation of analytical methods. Cancer Res. 2005 Nov 1;65(21):10104-12.

46. Buck AK, Bommer M, Stilgenbauer S, Juweid M, Glatting G, Schirrmeister H, et al. Molecular imaging of proliferation in malignant lymphoma. Cancer Res. 2006 Nov 15;66(22):11055-61.

47. Eckel F, Herrmann K, Schmidt S, Hillerer C, Wieder HA, Krause BJ, et al. Imaging of proliferation in hepatocellular carcinoma with the in vivo marker 18F-fluorothymidine. J Nucl Med. 2009 Sep;50(9):1441-7.

48. van Oijen MG, Medema RH, Slootweg PJ, Rijksen G. Positivity of the proliferation marker Ki-67 in noncycling cells. American journal of clinical pathology. 1998 Jul;110(l):24-31.

49. Rubini JR, Cronkite EP, Bond VP, Fliedner TM. The metabolism and fate of tritiated thymidine in man. J Clin Invest. 1960Jun;39:909-18.

50. Faneyte IF, Schrama JG, Peterse JL, Remijnse PL, Rodenhuis S, van de Vijver MJ. Breast cancer response to neoadjuvant chemotherapy: predictive markers and relation with outcome. British journal of cancer. 2003 Feb 10;88(3):406-12.

51. Takeuchi H, Ozawa S, Ando N, Kitagawa Y, Ueda M, Kitajima M. Cell-cycle regulators and the Ki-67 labeling index can predict the response to chemoradiotherapy and the survival of patients with locally advanced squamous cell carcinoma of the esophagus. Annals of surgical oncology. 2003 Aug;10(7):792-800.

52. van Diest PJ, van der Wall E, Baak JP. Prognostic value of proliferation in invasive breast cancer: a review. Journal of clinical pathology. 2004 Jul;57(7):675-81.

53. Brown DC, Gatter KC. Ki67 protein: the immaculate deception? Histopathology. 2002 Jan;40(l):2-ll.

54. Pugsley JM, Schmidt RA, Vesselle H. The Ki-67 index and survival in non-small cell lung cancer: a review and relevance to positron emission tomography. Cancer journal (Sudbury, Mass. 2002 May-Jun;8(3):222-33.

55. Martin B, Paesmans M, Mascaux C, Berghmans T, Lothaire P, Meert AP, et al. Ki-67 expression and patients survival in lung cancer: systematic review of the literature with meta-analysis. British journal of cancer. 2004 Dec 13;91(12):2018-25.

56. Christman D, Crawford EJ, Friedkin M, Wolf AP. Detection of DNA synthesis in intact organisms with positron-emitting (methyl-11 CJthymidine. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1972 Apr;69(4):988-92.

57. Shields AF, Mankoff DA, Link JM, Graham MM, Eary JF, Kozawa SM, et al. Carbon-ll-thymidine and FDG to measure therapy response. J Nucl Med. 1998 Oct;39{10):1757-62.

58. Wells JM, Mankoff DA, Eary JF, Spence AM, Muzi M, O'Sullivan F, et al. Kinetic analysis of 2-[llCjthymidine PET imaging studies of malignant brain tumors: preliminary patient results. Mol Imaging. 2002 Jul;l(3):145-50.

59. Eary JF, Mankoff DA, Spence AM, Berger MS, Olshen A, Link JM, et al. 2-[C-ll]thymidine imaging of malignant brain tumors. Cancer Res. 1999 Feb 1;59(3):615-21.

60. Shields AF, Mankoff D, Graham MM, Zheng M, Kozawa SM, Link JM, et al. Analysis of 2-carbon-11-thymidine blood metabolites in PET imaging. J Nucl Med. 1996 Feb;37(2):290-6.

61. Mankoff DA, Shields AF, Graham MM, Link JM, Krohn KA. A graphical analysis method to estimate blood-to-tissue transfer constants for tracers with labeled metabolites. J Nucl Med. 1996 Dec;37(12):2049-57.

62. Mankoff DA, Shields AF, Link JM, Graham MM, Muzi M, Peterson LM, et al. Kinetic analysis of 2-[HCJthymidine PET imaging studies: validation studies. J Nucl Med. 1999 Apr;40(4):614-24.

63. Blasberg RG, Roelcke U, Weinreich R, Beattie B, von Ammon K, Yonekawa Y, et al. Imaging brain tumor proliferative activity with [124l]iododeoxyuridine. Cancer Res. 2000 Feb l;60(3):624-35.

64. Gardelle O, Roelcke U, Vontobel P, Crompton NE, Guenther I, Blauenstein P, et al. [76Br]Bromodeoxyuridine PET in tumor-bearing animals. Nuclear medicine and biology. 2001 Jan;28(l):51-7.

65. Toyohara J, Hayashi A, Sato M, Gogami A, Tanaka H, Haraguchi K, et al. Development of radioiodinated nucleoside analogs for Imaging tissue proliferation: comparisons of six 5-iodonucleosides. Nuclear medicine and biology. 2003 Oct;30(7):687-96.

66. Shields AF, Grierson JR, Dohmen BM, Machulla HJ, Stayanoff JC, Lawhorn-Crews JM, et al. Imaging proliferation in vivo with [F-18]FLT and positron emission tomography. Nat Med. 1998 Nov;4(ll):1334-6.

67. Machulla HJ BA, Kuntzsch M, Piert M, Wei R, Grierson J. Simplified labeling approach for synthesizing S'-deoxy-S'-flSFlfluorothymidine ([18FJFLT). J Radioanal Nucl Chem. 2000;243(3):843-6.

68. Hartmann H VM, Durno AG, et al. Enhanced in vitro inhibition of HIV-1 replicatio by 3'-fluoro-3'-deoxythymidine compered to several other nucleoside analogs. AIDS Res Hum Retroviruses. 1998(4):457-66.

69. Kong XB, Zhu QY, Vidal PM, Watanabe KA, Polsky B, Armstrong D, et al. Comparisons of antihuman immunodeficiency virus activities, cellular transport, and plasma and intracellular pharmacokinetics of 3'-fluoro-3'-deoxythymidine and 3'-azido-3'-deoxythymidine. Antimicrobial agents and chemotherapy. 1992 Apr;36(4):808-18.

70. Flexner C, van der Horst C, Jacobson MA, Powderly W, Duncanson F, Ganes D, et al. Relationship between plasma concentrations of 3'-deoxy-3'-fluorothymidine (alovudine) and antiretroviral activity in two concentration-controlled trials. The Journal of infectious diseases. 1994 Dec;170(6):1394-403.

71. Turcotte E, Wiens LW, Grierson JR, Peterson LM, Wener MH, Vesselle H. Toxicology evaluation of radiotracer doses of 3'-deoxy-3'-[18F]fluorothymidine (18F-FLT) for human PET imaging: Laboratory analysis of serial blood samples and comparison to previously investigated therapeutic FLT doses. BMC nuclear medicine. 2007;7:3.

72. Spence AM, Muzi M, Link JM, Hoffman JM, Eary JF, Krohn KA. NCI-sponsored trial for the evaluation of safety and preliminary efficacy of FLT as a marker of proliferation in patients with recurrent gliomas: safety studies. Mol Imaging Biol. 2008 Sep;10(5):271-80.

73. Vesselle H, Grierson J, Peterson LM, Muzi M, Mankoff DA, Krohn KA. 18F-Fluorothymidine radiation dosimetry in human PET imaging studies. J Nucl Med. 2003 Sep;44(9):1482-8.

74. Reske SN, Deisenhofer S. Is 3'-deoxy-3'-(18)F-fluorothymidine a better marker for tumour response than (18)F-fluorodeoxyglucose? Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2006 Jul;33 Suppl 1:38-43.

75. Belt JA, Marina NM, Phelps DA, Crawford CR. Nucleoside transport in normal and neoplastic cells. Advances in enzyme regulation. 1993;33:235-52.

76. Seitz U, Wagner M, Neumaier B, Wawra E, Glatting G, Leder G, et al. Evaluation of pyrimidine metabolising enzymes and in vitro uptake of 3'-[(18)F]fluoro-3'-deoxythymidine ([(18)F]FLT) in pancreatic cancer cell lines. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2002 Sep;29(9):1174-81.

77. Munch-Petersen B, Cloos L, Jensen HK, Tyrsted G. Human thymidine kinase 1. Regulation in normal and malignant cells. Advances in enzyme regulation. 1995;35:69-89.

78. Grierson JR, Shields AF. Radiosynthesis of 3'-deoxy-3'-[(18)F]fluorothymidine: [(18)F]FLT for imaging of cellular proliferation in vivo. Nuclear medicine and biology. 2000 Feb;27(2):143-56.

79. Muzi M, Mankoff DA, Grierson JR, Wells JM, Vesselle H, Krohn KA. Kinetic modeling of 3'-deoxy-3'-fluorothymidine in somatic tumors: mathematical studies. J Nucl Med. 2005 Feb;46(2):37l-80.

80. Rasey JS, Grierson JR, Wiens LW, Kolb PD, Schwartz JL. Validation of FLT uptake as a measure of thymidine kinase-1 activity in A549 carcinoma cells. J Nucl Med. 2002 Sep;43{9):1210-7.

81. de Langen A), Klabbers B, Lubberink M, Boellaard R, Spreeuwenberg MD, Slotman BJ, et al. Reproducibility of quantitative 18F-3'-deoxy-3'-fluorothymidine measurements using positron emission tomography. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2009 Mar;36(3):389-95.

82. Buchmann I, Neumaier B, Schreckenberger M, Reske S. [18F]3'-deoxy-3'-fluorothymidine-PET in NHL patients: whole-body biodistribution and imaging of lymphoma manifestations-a pilot study. Cancer biotherapy & radiopharmaceuticals. 2004 Aug;19(4):436-42.

83. Francis DL, Visvikis D, Costa DC, Arulampalam TH, Townsend C, Luthra SK, et al. Potential impact of [18F]3'-deoxy-3'-fluorothymidine versus [18F]fIuoro-2-deoxy-D-glucose in positron emission tomography for colorectal cancer. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2003 Jul;30(7):988-94.

84. Been LB, Eisinga PH, de Vries J, Cobben DC, Jager PL, Hoekstra HJ, et al. Positron emission tomography in patients with breast cancer using (18)F-3'-deoxy-3'-fluoro-l-thymidine ((18)F-FLT)-a pilot study. Eur J Surg Oncol. 2006 Feb;32(l):39-43.

85. Chen W, Cloughesy T, Kamdar N, Satyamurthy N, Bergsneider M, Liau L, et al. Imaging proliferation in brain tumors with 18F-FLT PET: comparison with 18F-FDG. J Nucl Med. 2005 Jun;46(6):945-52.

86. Jacobs AH, Thomas A, Kracht LW, Li H, Dittmar C, Garlip G, et al. 18F-fluoro-L-thymidine and HC-methylmethionine as markers of increased transport and proliferation in brain tumors. J Nucl Med.

2005 Dec;46(12):1948-58.

87. Schwartz JL, Tamura Y, Jordan R, Grierson JR, Krohn KA. Monitoring tumor cell proliferation by targeting DNA synthetic processes with thymidine and thymidine analogs. J Nucl Med. 2003 Dec;44(12):2027-32.

88. Toyohara J, Waki A, Takamatsu S, Yonekura Y, Magata Y, Fujibayashi Y. Basis of FLT as a cell proliferation marker: comparative uptake studies with [3H]thymidine and [3H]arabinothymidine, and cell-analysis in 22 asynchronously growing tumor cell lines. Nuclear medicine and biology. 2002 Apr;29(3):281-7.

89. Barthel H, Perumal M, Latigo J, He Q, Brady F, Luthra SK, et al. The uptake of 3'-deoxy-3'-[18F]fluorothymidine into L5178Y tumours in vivo is dependent on thymidine kinase 1 protein levels. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2005 Mar;32(3):257-63.

90. van Westreenen HL, Cobben DC, Jager PL, van Dullemen HM, Wesseling J, Eisinga PH, et al. Comparison of 18F-FLT PET and 18F-FDG PET in esophageal cancer. J Nucl Med. 2005 Mar;46(3):400-4.

91. Leyton J, Latigo JR, Perumal M, Dhaliwal H, He Q, Aboagye EO. Early detection of tumor response to chemotherapy by 3'-deoxy-3'-[18F]fluorothymidine positron emission tomography: the effect of cisplatin on a fibrosarcoma tumor model in vivo. Cancer Res. 2005 May 15;65(10):4202-10.

92. Dittmann H, Dohmen BM, Kehlbach R, Bartusek G, Pritzkow M, Sarbia M, et al. Early changes in [18F]FLT uptake after chemotherapy: an experimental study. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2002 Nov;29(ll):1462-9.

93. Buck AK, Kratochwil C, Glatting G, Juweid M, Bommer M, Tepsic D, et al. Early assessment of therapy response in malignant lymphoma with the thymidine analogue [18F]FLT. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2007 Nov;34(ll):1775-82.

94. Yang YJ, Ryu JS, Kim SY, Oh SJ, Im KC, Lee H, et al. Use of 3'-deoxy-3'-[18F]fluorothymidine PET to monitor early responses to radiation therapy in murine SCCVII tumors. Eur J Nucl Med Mol Imaging.

2006 Apr;33(4):412-9.

95. Sugiyama M, Sakahara H, Sato K, Harada N, Fukumoto D, Kakiuchi T, et al. Evaluation of 3'-deoxy-3'-18F-fluorothymidine for monitoring tumor response to radiotherapy and photodynamic therapy in mice. J Nucl Med. 2004 Oct;45(10):1754-8.

96. Molthoff CF, Klabbers BM, Berkhof J, Feiten JT, van Gelder M, Windhorst AD, et al. Monitoring response to radiotherapy in human squamous cell cancer bearing nude mice: comparison of 2'-deoxy-2'-[18F]fluoro-D-glucose (FDG) and 3'-[18F]fluoro-3'-deoxythymidine (FLT). Mol Imaging Biol. 2007 Nov-Dec;9(6):340-7.

97. Waldherr C, Meilinghoff IK, Tran C, Halpern BS, Rozengurt N, Safaei A, et al. Monitoring antiproliferative responses to kinase inhibitor therapy in mice with 3'-deoxy-3'-18F-fluorothymidine PET. J Nud Med. 2005 Jan;46(l):114-20.

98. Vesselle H, Grierson J, Muzi M, Pugsley JM, Schmidt RA, Rabinowitz P, et al. In vivo validation of 3'deoxy-3'-[(18)F]fluorothymidine ([(18)F]FLT) as a proliferation imaging tracer in humans: correlation of [(18)F]FLT uptake by positron emission tomography with Ki-67 Immunohistochemistry and flow cytometry in human lung tumors. Clin Cancer Res. 2002 Nov;8(ll):3315-23.

99. Francis DL, Freeman A, Visvikis D, Costa DC, Luthra SK, Novelli M, et al. In vivo imaging of cellular proliferation in colorectal cancer using positron emission tomography. Gut. 2003 Nov;52(ll):1602-6.

100. Cobben DC, Eisinga PH, Suurmeijer AJ, Vaalburg W, Maas B, Jager PL, et al. Detection and grading of soft tissue sarcomas of the extremities with (18)F-3'-fluoro-3'-deoxy-L-thymidine. Clin Cancer-Res. 2004 Mar l;10(5):1685-90.

101. Muzi M, Vesselle H, Grierson JR, Mankoff DA, Schmidt RA, Peterson L, et al. Kinetic analysis of 3'-deoxy-3'-fluorothymidine PET studies: validation studies in patients with lung cancer. J Nucl Med. 2005 Feb;46(2):274-82.

102. Choi SJ, Kim JS, Kim JH, Oh SI, Lee JG, Kim CJ, et al. [18F]3'-deoxy-3'-fluorothymidine PET for the diagnosis and grading of brain tumors. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2005 Jun;32(6):653-9.

103. Yamamoto Y, Nishiyama Y, Ishikawa S, Nakano J, Chang SS, Bandoh S, et al. Correlation of 18F-FLT and 18F-FDG uptake on PET with Ki-67 immunohistochemistry in non-small cell lung cancer. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2007 Oct;34(10):1610-6.

104. Herrmann K, Buck AK, Schuster T, Rudelius M, Wester HJ, Graf N, et al. A pilot study to evaluate 3'-deoxy-3'-18F-fluorothymidine pet for initial and early response imaging in mantle cell lymphoma. J Nucl Med. 2011 Dec;52(12):1898-902.

105. Yap CS, Czernin J, Fishbein MC, Cameron RB, Schiepers C, Phelps ME, et al. Evaluation of thoracic tumors with 18F-fluorothymidine and 18F-fluorodeoxyglucose-positron emission tomography. Chest. 2006 Feb;129(2):393-401.

106. Dittmann H, Dohmen BM, Paulsen F, Eichhorn K, Eschmann SM, Horger M, et al. [18FJFLT PET for diagnosis and staging of thoracic tumours. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2003 0ct;30(10):1407-12.

107. Buck AK, Hetzel M, Schirrmeister H, Halter G, Moller P, Kratochwil C, et al. Clinical relevance of imaging proliferative activity in lung nodules. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2005 May;32(5):525-33.

108. Shields AF, Lawhorn-Crews JM, Briston DA, Zalzala S, Gadgeel S, Douglas KA, et al. Analysis and reproducibility of 3'-Deoxy-3'-[18F]fluorothymidine positron emission tomography imaging in patients with non-small cell lung cancer. Clin Cancer Res. 2008 Jul 15;14(14):4463-8.

109. Stahle L, Borg N. Transport of alovudine (3'-fluorothymidine) into the brain and the cerebrospinal fluid of the rat, studied by microdialysis. Life sciences. 2000 Mar 31;66(19):1805-16.

110. Saga T, Kawashima H, Araki N, Takahashi JA, Nakashima Y, Higashi T, et al. Evaluation of primary brain tumors with FLT-PET: usefulness and limitations. Clinical nuclear medicine. 2006 Dec;31(12):774-80.

111. Pio BS, Park CK, Pietras R, Hsueh WA, Satyamurthy N, Pegram MD, et al. Usefulness of 3'-[F-18]fluoro-3'-deoxythymidine with positron emission tomography in predicting breast cancer response to therapy. Mol Imaging Biol. 2006 Jan-Feb;8(l):36-42.

112. Kenny L, Coombes RC, Vigushin DM, Al-Nahhas A, Shousha S, Aboagye EO. Imaging early changes in proliferation at 1 week post chemotherapy: a pilot study in breast cancer patients with 3'-deoxy-3'-[18F]fluorothymidine positron emission tomography. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2007 Sep;34(9):1339-47.

113. Herrmann K, Wieder HA, Buck AK, Schoffel M, Krause BJ, Fend F, et al. Early response assessment using 3'-deoxy-3'-[18F]fluorothymidine-positron emission tomography in high-grade non-Hodgkin's lymphoma. Clin Cancer Res. 2007 Jun 15;13(12):3552-8.

114. Kennedy-Nasser AA, Bollard CM, Myers GD, Leung KS, Gottschalk S, Zhang Y, et al. Comparable outcome of alternative donor and matched sibling donor hematopoietic stem cell transplant for children with acute lymphoblastic leukemia in first or second remission using alemtuzumab in a myeloablative conditioning regimen. Biol Blood Marrow Transplant. 2008 Nov;14(ll):1245-52.

115. Gratwohl A, Brand R, Frassonl F, Rocha V, Niederwieser D, Reusser P, et al. Cause of death after allogeneic haematopoietic stem cell transplantation (HSCT) in early leukaemias: an EBMT analysis of lethal infectious complications and changes over calendar time. Bone marrow transplantation. 2005 Nov;36(9):757-69.

116. Schönberger S, Meisel R, Adams 0, Pufal Y, Laws HJ, Enczmann J, et al. Prospective, comprehensive, and effective viral monitoring in children undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Biol Blood Marrow Transplant. 2010 Oct;16(10):1428-35.

117. Renaud C, Campbell AP. Changing epidemiology of respiratory viral infections in hematopoietic cell transplant recipients and solid organ transplant recipients. Current opinion in infectious diseases. 2011 Aug;24(4):333-43.

118. Leen AM, Myers GD, Sili U, Hüls MH, Weiss H, Leung KS, et al. Monoculture-derived T lymphocytes specific for multiple viruses expand and produce clinically relevant effects in immunocompromised individuals. Nat Med. 2006 Oct;12(10):1160-6.

119. Berger C, Jensen MC, Lansdorp PM, Gough M, Elliott C, Riddell SR. Adoptive transfer of effector CD8+ T cells derived from central memory cells establishes persistent T cell memory in primates. J Clin Invest. 2008 Jan;118(l):294-305.

120. Kapp M, Tan SM, Einsele H, Grigoleit G. Adoptive immunotherapy of HCMV infection. Cytotherapy. 2007;9(8):699-711.

121. Gerdemann U, Keirnan JM, Katari UL, Yanagisawa R, Christin AS, Huye LE, et al. Rapidly generated multivirus-specific cytotoxic T lymphocytes for the prophylaxis and treatment of viral infections. Mol Ther. 2012 Aug;20(8):1622-32.

122. Gerdemann U, Katari UL, Papadopoulou A, Keirnan JM, Craddock JA, Liu H, et al. Safety and clinical efficacy of rapidly-generated trivirus-directed T cells as treatment for adenovirus, EBV, and CMV infections after allogeneic hematopoietic stem cell transplant. Mol Ther. 2013 Nov;21(ll):2113-21.

123. Allport JR, Weissleder R. In vivo imaging of gene and cell therapies. Experimental hematology.

2001 Nov;29(ll):1237-46.

124. Blasberg R. PET imaging of gene expression. Eur J Cancer. 2002 Nov;38(16):2137-46.

125. Gambhir SS. Molecular Imaging of cancer with positron emission tomography. Nature reviews.

2002 Sep;2(9):683-93.

126. Gambhir SS, Herschman HR, Cherry SR, Barrio JR, Satyamurthy N, Toyokuni T, et al. Imaging transgene expression with radionuclide imaging technologies. Neoplasia (New York, NY. 2000 Jan-Apr;2(l-2):118-38.

127. Massoud TF, Gambhir SS. Molecular imaging in living subjects: seeing fundamental biological processes in a new light. Genes & development. 2003 Mar l;17(5):545-80.

128. Nichol C, Kim EE. Molecular imaging and gene therapy. J Nucl Med. 2001 Sep;42(9):1368-74.

129. Weissleder R, Mahmood U. Molecular imaging. Radiology. 2001 May;219(2):316-33.

130. Wunderbaldinger P, Bogdanov A, Weissleder R. New approaches for imaging in gene therapy. European journal of radiology. 2000 Jun;34(3):156-65.

131. Doubrovin M, Ponomarev V, Beresten T, Balatoni J, Bornmann W, Finn R, et al. Imaging transcriptional regulation of p53-dependent genes with positron emission tomography in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2001 Jul 31;98(16):9300-5.

132. Koehne G, Doubrovin M, Doubrovina E, Zanzonico P, Gallardo HF, Ivanova A, et al. Serial in vivo imaging of the targeted migration of human HSV-TK-transduced antigen-specific lymphocytes. Nature biotechnology. 2003 Apr;21(4):405-13.

133. Laxman B, Hall DE, Bhojani MS, Hamstra DA, Chenevert TL, Ross BD, et al. Noninvasive real-time imaging of apoptosis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2002 Dec 24;99(26):16551-5.

134. Ponomarev V, Doubrovin M, Lyddane C, Beresten T, Balatoni J, Bornman W, et al. Imaging TCR-dependent NFAT-mediated T-cell activation with positron emission tomography in vivo. Neoplasia (New York, NY. 2001 Nov-Dec;3(6):480-8.

135. De Clercq E. Discovery and development of BVDU (brivudin) as a therapeutic for the treatment of herpes zoster. Biochemical pharmacology. 2004 Dec 15;68(12):2301-15.

136. Kang KW, Min JJ, Chen X, Gambhir SS. Comparison of [14C]FMAU, [3H]FEAU, [14C]FIAU, and [3H]PCV for monitoring reporter gene expression of wild type and mutant herpes simplex virus type 1 thymidine kinase in cell culture. Molecular imaging and biology : MIB : the official publication of the Academy of Molecular Imaging. 2005 Jul-Aug;7(4):296-303.

137. Min JJ, Iyer M, Gambhir SS. Comparison of [18FJFHBG and [14CJFIAU for imaging of HSVl-tk reporter gene expression: adenoviral infection vs stable transfection. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2003 Nov;30(ll):1547-60.

138. Tjuvajev JG, Stockhammer G, Desai R, Uehara H, Watanabe K, Gansbacher B, et al. Imaging the expression of transfected genes in vivo. Cancer Res. 1995 Dec 15;55(24):6126-32.

139. Tjuvajev JG AN, Sater V, et al. Quantitative PET imaging of HSVI-TK gene

expression with (1-124) FIAU [abstract]. J Nucl Med 1997;38(suppl):239P.

140. Gambhir SS, Barrio JR, Wu L, Iyer M, Namavari M, Satyamurthy N, et al. Imaging of adenoviral-directed herpes simplex virus type 1 thymidine kinase reporter gene expression in mice with radiolabeled ganciclovir. J Nucl Med. 1998 Nov;39(ll):2003-ll.

141. Morin KW, Knaus EE, Wiebe LI. Non-invasive scintigraphic monitoring of gene expression in a HSV-1 thymidine kinase gene therapy model. Nuclear medicine communications. 1997 Jul;18(7):599-605.

142. Tjuvajev JG, Finn R, Watanabe K, Joshi R, Oku T, Kennedy J, et al. Noninvasive imaging of herpes virus thymidine kinase gene transfer and expression: a potential method for monitoring clinical gene therapy. Cancer Res. 1996 Sep 15;56(18):4087-95.

143. Tjuvajev JG, Avril N, Oku T, Sasajima T, Miyagawa T, Joshi R, et al. Imaging herpes virus thymidine kinase gene transfer and expression by positron emission tomography. Cancer Res. 1998 Oct 1;58(19):4333-41.

144. Dobrenkov K, Olszewska M, Likar Y, Shenker L, Gunset G, Cai S, et al. Monitoring the Efficacy of Adoptively Transferred Prostate Cancer-Targeted Human T Lymphocytes with PET and Bioluminescence Imaging. J Nucl Med. 2008 Jul;49(7):1162-70.

145. Doubrovina ES, Doubrovin MM, Lee S, Shieh JH, Heller G, Pamer E, et al. In vitro stimulation with WT1 peptide-loaded Epstein-Barr virus-positive B cells elicits high frequencies of WT1 peptide-specific T cells with in vitro and in vivo tumoricidal activity. Clin Cancer Res. 2004 Nov 1;10(21):7207-19.

146. Dubey P, Su H, Adonai N, Du S, Rosato A, Braun J, et al. Quantitative imaging of the T cell antitumor response by positron-emission tomography. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003 Feb 4;100(3):1232-7.

147. Shu G, Guo S, Kim YJ, Shelly SM, Nijagal A, Ray P, et al. Visualization of a primary anti-tumor immune response by positron emission tomography. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2005 Nov 29;102(48):17412-7.

148. Su H, Chang DS, Gambhir SS, Braun J. Monitoring the antitumor response of naive and memory CD8 T cells in RAG1-/- mice by positron-emission tomography. J Immunol. 2006 Apr l;176(7):4459-67.

149. Bennett JJ, Tjuvajev J, Johnson P, Doubrovin M, Akhurst T, Malholtra S, et al. Positron emission tomography imaging for herpes virus infection: Implications for oncolytic viral treatments of cancer. Nat Med. 2001 Jul;7(7):859-63.

150. Sun X, Annala AJ, Yaghoubi SS, Barrio JR, Nguyen KN, Toyokuni T, et al. Quantitative imaging of gene induction in living animals. Gene Ther. 2001 Oct;8(20):1572-9.

151. Qiao J, Doubrovin M, Sauter BV, Huang Y, Guo ZS, Balatoni J, et al. Tumor-specific transcriptional targeting of suicide gene therapy. Gene Ther. 2002 Feb;9(3):168-75.

152. Iyer M, Wu L, Carey M, Wang Y, Smallwood A, Gambhir SS. Two-step transcriptional amplification as a method for imaging reporter gene expression using weak promoters. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2001 Dec 4;98(25):14595-600.

153. Zinn KR, Chaudhuri TR, Krasnykh VN, Buchsbaum DJ, Belousova N, Grizzle WE, et al. Gamma camera dual imaging with a somatostatin receptor and thymidine kinase after gene transfer with a bicistronic adenovirus in mice. Radiology. 2002 May;223(2):417-25.

154. Yang H, Berger F, Tran C, Gambhir SS, Sawyers CL. MicroPET imaging of prostate cancer in LNCAP-SR39TK-GFP mouse xenografts. Prostate. 2003 Apr l;55(l):39-47.

155. Black ME, Kokoris MS, Sabo P. Herpes simplex virus-1 thymidine kinase mutants created by semi-random sequence mutagenesis improve prodrug-mediated tumor cell killing. Cancer Res. 2001 Apr l;61(7):3022-6.

156. Black ME, Newcomb TG, Wilson HM, Loeb LA. Creation of drug-specific herpes simplex virus type 1 thymidine kinase mutants for gene therapy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1996 Apr 16;93(8):3525-9.

157. Kokoris MS, Black ME. Characterization of herpes simplex virus type 1 thymidine kinase mutants engineered for improved ganciclovir or acyclovir activity. Protein Sci. 2002 Sep;ll(9):2267-72.

158. Gambhir SS, Bauer E, Black ME, Liang Q, Kokoris MS, Barrio JR, et al. A mutant herpes simplex virus type 1 thymidine kinase reporter gene shows Improved sensitivity for imaging reporter gene expression with positron emission tomography. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2000 Mar 14;97(6):2785-90.

159. Degreve B, Esnouf R, De Clercq E, Balzarini J. Selective abolishment of pyrimidine nucleoside kinase activity of herpes simplex virus type 1 thymidine kinase by mutation of alanine-167 to tyrosine. Molecular pharmacology. 2000 Dec;58(6):1326-32.

160. Likar Y, Dobrenkov K, Olszewska M, Vider E, Shenker L, Cai S, et al. A New Acycloguanosine-Specific Supermutant of Herpes Simplex Virus Type 1 Thymidine Kinase Suitable for PET Imaging and Suicide Gene Therapy for Potential Use in Patients Treated with Pyrimidine-Based Cytotoxic Drugs. J Nucl Med. 2008 May;49(5):713-20.

161. Balzarini J, Liekens S, Solaroli N, El Omari K, Stammers DK, Karlsson A. Engineering of a single conserved amino acid residue of herpes simplex virus type 1 thymidine kinase allows a predominant shift from pyrimidine to purine nucleoside phosphorylation. The Journal of biological chemistry. 2006 Jul 14;281(28):19273-9.

162. Likar Y, Dobrenkov K, Olszewska M, Shenker L, Cai S, Hricak H, et al. PET imaging of HSVl-tk mutants with acquired specificity toward pyrimidine- and acycloguanosine-based radiotracers. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2009 Aug;36(8):1273-82.

163. Alauddin MM, Shahinian A, Gordon EM, Conti PS. Direct comparison of radiolabeled probes FMAU, FHBG, and FHPG as PET imaging agents for HSVl-tk expression in a human breast cancer model. Mol Imaging. 2004 Apr;3(2):76-84.

164. Tjuvajev JG, Doubrovin M, Akhurst T, Cai S, Balatoni J, Alauddin MM, et al. Comparison of radiolabeled nucleoside probes (FIAU, FHBG, and FHPG) for PET imaging of HSVl-tk gene expression. J Nucl Med. 2002 Aug;43(8):1072-83.

165. Alauddin MM, Shahinian A, Park R, Tohme M, Fissekis JD, Conti PS. In vivo evaluation of 2'-deoxy-2'-[(18)F]fluoro-5-iodo-l-beta-D-arabinofuranosyluracil ([18F]FIAU) and 2'-deoxy-2'-[18F]fluoro-5-ethyl-l-beta-D-arabinofuranosyluracil ([18F]FEAU) as markers for suicide gene expression. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2007 Jun;34(6):822-9.

166. Jacobs A, Braunlich I, Graf R, Lercher M, Sakaki T, Voges J, et al. Quantitative kinetics of [124IJFIAU in cat and man. J Nucl Med. 2001 Mar;42(3):467-75.

167. Yaghoubi S, Barrio JR, Dahlbom M, Iyer M, Namavarl M, Satyamurthy N, et al. Human pharmacokinetic and dosimetry studies of [(18)F]FHBG: a reporter probe for imaging herpes simplex virus type-1 thymidine kinase reporter gene expression. J Nucl Med. 2001 Aug;42(8):1225-34.

168. Freeman SM, Whartenby KA, Freeman JL, Abboud CN, Marrogi AJ. In situ use of suicide genes for cancer therapy. Seminars in oncology. 1996 Feb;23(l):31-45.

169. Niculescu-Duvaz I, Springer G. Gene-directed enzyme prodrug therapy: a review of enzyme/prodrug combinations. Expert opinion on investigational drugs. 1997 Jun;6(6):685-703.

170. Moolten FL. Tumor chemosensitivity conferred by inserted herpes thymidine kinase genes: paradigm for a prospective cancer control strategy. Cancer Res. 1986 0ct;46(10):5276-81.

171. Beltinger C, Fulda S, Kammertoens T, Meyer E, Uckert W, Debatin KM. Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir-induced apoptosis involves ligand-independent death receptor aggregation and activation of caspases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1999 Jul 20;96(15):8699-704.

172. Culver KW, Ram Z, Wallbridge S, Ishii H, Oldfield EH, Blaese RM. In vivo gene transfer with retroviral vector-producer cells for treatment of experimental brain tumors. Science (New York, NY. 1992 Jun 12;256{5063):1550-2.

173. Freeman SM, Ramesh R, Shastri M, Munshi A, Jensen AK, Marrogi AJ. The role of cytokines in mediating the bystander effect using HSV-TK xenogeneic cells. Cancer letters. 1995 Jun 8;92(2):167-74.

174. Chen SH, Shine HD, Goodman JC, Grossman RG, Woo SL. Gene therapy for brain tumors: regression of experimental gliomas by adenovirus-mediated gene transfer in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1994 Apr 12;91(8):3054-7.

175. Cool V, Pirotte B, Gerard C, Dargent JL, Baudson N, Levivier M, et al. Curative potential of herpes simplex virus thymidine kinase gene transfer in rats with 9L gliosarcoma. Human gene therapy. 1996 Mar 20;7(5):627-35.

176. Izquierdo M, Cortes M, de Felipe P, Martin V, Diez-Guerra J, Talavera A, et al. Long-term rat survival after malignant brain tumor regression by retroviral gene therapy. Gene Ther. 1995 Jan;2(l):66-9.

177. O'Malley BW, Jr., Chen SH, Schwartz MR, Woo SL. Adenovirus-mediated gene therapy for human head and neck squamous cell cancer in a nude mouse model. Cancer Res. 1995 Mar l;55(5):1080-5.

178. Bonnekoh B, Greenhalgh DA, Bundman DS, Kosai K, Chen SH, Finegold MJ, et al. Adenoviral-mediated herpes simplex virus-thymidine kinase gene transfer in vivo for treatment of experimental human melanoma. The Journal of investigative dermatology. 1996 Jun;106(6):1163-8.

179. Kwong YL, Chen SH, Kosai K, Finegold MJ, Woo SL. Adenoviral-mediated suicide gene therapy for hepatic metastases of breast cancer. Cancer gene therapy. 1996 Sep-Oct;3(5):339-44.

180. Zhang L, Wikenheiser KA, Whitsett JA. Limitations of retrovirus-mediated HSV-tk gene transfer to pulmonary adenocarcinoma cells in vitro and in vivo. Human gene therapy. 1997 Mar 20;8(5):563-74.

181. Hall SJ, Mutchnik SE, Chen SH, Woo SL, Thompson TC. Adenovirus-mediated herpes simplex virus thymidine kinase gene and ganciclovir therapy leads to systemic activity against spontaneous and induced metastasis in an orthotopic mouse model of prostate cancer. International journal of cancer. 1997 Jan 17;70{2):183-7.

182. Rosenfeld ME, Wang M, Siegal GP, Alvarez RD, Mikheeva G, Krasnykh V, et al. Adenoviral-mediated delivery of herpes simplex virus thymidine kinase results In tumor reduction and prolonged survival In a SCID mouse model of human ovarian carcinoma. Journal of molecular medicine (Berlin, Germany). 1996 Aug;74(8):455-62.

183. Yee D, McGuire SE, Brunner N, Kozelsky TW, Allred DC, Chen SH, et al. Adenovirus-mediated gene transfer of herpes simplex virus thymidine kinase in an ascites model of human breast cancer. Human gene therapy. 1996 Jun 20;7(10):1251-7.

184. Tanaka T, Kanai F, Okabe S, Yoshida Y, Wakimoto H, Hamada H, et al. Adenovirus-mediated prodrug gene therapy for carcinoembryonic antigen-producing human gastric carcinoma cells In vitro. Cancer Res. 1996 Mar 15;56(6):1341-5.

185. Sutton MA, Berkman SA, Chen SH, Block A, Dang TD, Kattan MW, et al. Adenovirus-mediated suicide gene therapy for experimental bladder cancer. Urology. 1997 Feb;49(2):173-80.

186. Huber BE, Austin EA, Richards CA, Davis ST, Good SS. Metabolism of 5-fluorocytosine to 5-fluorouracil in human colorectal tumor cells transduced with the cytosine deaminase gene: significant antitumor effects when only a small percentage of tumor cells express cytosine deaminase. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1994 Aug 16;91(17):8302-6.

187. Freeman SM, McCune C, Robinson W, Abboud CN, Abraham GN, Angel C, et al. The treatment of ovarian cancer with a gene modified cancer vaccine: a phase I study. Human gene therapy. 1995 Jul;6{7):927-39.

188. Herman JR, Adler HL, Aguilar-Cordova E, Rojas-Martinez A, Woo S, Timme TL, et al. In situ gene therapy for adenocarcinoma of the prostate: a phase I clinical trial. Human gene therapy. 1999 May l;10(7):1239-49.

189. Klatzmann D, Cherin P, Bensimon G, Boyer O, Coutellier A, Charlotte F, et al. A phase l/ll dose-escalation study of herpes simplex virus type 1 thymidine kinase "suicide" gene therapy for metastatic melanoma. Study Group on Gene Therapy of Metastatic Melanoma. Human gene therapy. 1998 Nov 20;9(17):2585-94.

190. Sung MW, Yeh HC, Thung SN, Schwartz ME, Mandeli JP, Chen SH, et al. Intratumoral adenovirus-mediated suicide gene transfer for hepatic metastases from colorectal adenocarcinoma: results of a phase I clinical trial. Mol Ther. 2001 Sep;4(3):182-91.

191. Ram Z, Culver KW, Oshiro EM, Viola JJ, DeVroom HL, Otto E, et al. Therapy of malignant brain tumors by intratumoral implantation of retroviral vector-producing cells. Nat Med. 1997 Dec;3(12):1354-61.

192. Klatzmann D, Valery CA, Bensimon G, Marro B, Boyer 0, Mokhtari K, et al. A phase l/ll study of herpes simplex virus type 1 thymidine kinase "suicide" gene therapy for recurrent glioblastoma. Study Group on Gene Therapy for Glioblastoma. Human gene therapy. 1998 Nov 20;9(17):2595-604.

193. Shand N, Weber F, Mariani L, Bernstein M, Gianella-Borradori A, Long Z, et al. A phase 1-2 clinical trial of gene therapy for recurrent glioblastoma multiforme by tumor transduction with the herpes simplex thymidine kinase gene followed by ganciclovir. GLI328 European-Canadian Study Group. Human gene therapy. 1999 Sep 20;10(14):2325-35.

194. Rainov NG. A phase III clinical evaluation of herpes simplex virus type 1 thymidine kinase and ganciclovir gene therapy as an adjuvant to surgical resection and radiation in adults with previously untreated glioblastoma multiforme. Human gene therapy. 2000 Nov 20;11(17):2389-401.

195. Immonen A, Vapalahti M, Tyynela K, Hurskainen H, Sandmair A, Vanninen R, et al. AdvHSV-tk gene therapy with intravenous ganciclovir improves survival in human malignant glioma: a randomised, controlled study. Mol Ther. 2004 Nov;10(5):967-72.

196. Bonini C, Ferrari G, Verzeletti S, Servida P, Zappone E, Ruggieri L, et al. HSV-TK gene transfer into donor lymphocytes for control of allogeneic graft-versus-leukemia. Science (New York, NY. 1997 Jun 13;276(5319):1719-24.

197. Ciceri F, Bonini C, Marktel S, Zappone E, Servida P, Bernardi M, et al. Antitumor effects of HSV-TK-engineered donor lymphocytes after allogeneic stem-cell transplantation. Blood. 2007 Jun l;109(ll):4698-707.

198. Onodera M. Gene and cell therapy for relapsed leukemia after allo-stem cell transplantation. . Front Biosci. 2008;13:3408-14.

199. Edelstein ML, Abedi MR, Wixon J. Gene therapy clinical trials worldwide to 2007-an update. The journal of gene medicine. 2007 Oct;9(10):833-42.

200. Edelstein ML, Abedi MR, Wixon J, Edelstein RM. Gene therapy clinical trials worldwide 1989-2004-an overview. The journal of gene medicine. 2004 Jun;6(6):597-602.

201. Che J, Doubrovin M, Serganova I, Ageyeva L, Zanzonico P, Blasberg R. hNIS-IRES-eGFP dual reporter gene Imaging. Mol Imaging. 2005 Apr-Jun;4(2):128-36.

202. Moroz MA, Serganova I, Zanzonico P, Ageyeva L, Beresten T, Dyomina E, et al. Imaging hNET reporter gene expression with 1241-MIBG. J Nucl Med. 2007 May;48(5):827-36.

203. Buchsbaum DJ, Chaudhuri TR, Yamamoto M, Zinn KR. Gene expression imaging with radiolabeled peptides. Annals of nuclear medicine. 2004 Jun;18(4):275-83.

204. Ponomarev V, Doubrovin M, Shavrin A, Serganova I, Beresten T, Ageyeva L, et al. A human-derived reporter gene for noninvasive imaging in humans: mitochondrial thymidine kinase type 2. J Nucl Med. 2007 May;48(5):819-26.

205. Likar Y, Zurita J, Dobrenkov K, Shenker L, Cai S, Neschadim A, et al. A new pyrimidine-specific reporter gene: a mutated human deoxycytidine kinase suitable for PET during treatment with acycloguanosine-based cytotoxic drugs. J Nucl Med. 2010 Sep;51(9):1395-403.

206. Ponomarev V, Doubrovin M, Serganova I, Beresten T, Vider J, Shavrin A, et al. Cytoplasmically retargeted HSVl-tk/GFP reporter gene mutants for optimization of noninvasive molecular-genetic imaging. Neoplasia (New York, NY. 2003 May-Jun;5(3):245-54.

207. Gong MC, Latouche JB, Krause A, Heston WD, Bander NH, Sadelain M. Cancer patient T cells genetically targeted to prostate-specific membrane antigen specifically lyse prostate cancer cells and release cytokines in response to prostate-specific membrane antigen. Neoplasia (New York, NY. 1999 Jun;l(2):123-7.

208. Gade TP, Hassen W, Santos E, Gunset G, Saudemont A, Gong MC, et al. Targeted elimination of prostate cancer by genetically directed human T lymphocytes. Cancer Res. 2005 Oct l;65(19):9080-8.

209. Serganova I, Doubrovin M, Vider J, Ponomarev V, Soghomonyan S, Beresten T, et al. Molecular imaging of temporal dynamics and spatial heterogeneity of hypoxia-inducible factor-1 signal transduction activity in tumors in living mice. Cancer Res. 2004 Sep l;64(17):6101-8.

210. Alauddin MM, Conti PS. Synthesis and preliminary evaluation of 9-(4-[18F]-fluoro-3-hydroxymethylbutyl)guanine ([18FJFHBG): a new potential imaging agent for viral infection and gene therapy using PET. Nuclear medicine and biology. 1998 Apr;25(3):175-80.

211. Gregor PD, Wolchok JD, Turaga V, Latouche JB, Sadelain M, Bacich D, et al. Induction of autoantibodies to syngeneic prostate-specific membrane antigen by xenogeneic vaccination. International journal of cancer. 2005 Sep 1;116(3):415-21.

212. Kostakoglu L, Goldsmith SJ, Leonard JP, Chrlstos P, Furman RR, Atasever T, et al. FDG-PET after 1 cycle of therapy predicts outcome in diffuse large cell lymphoma and classic Hodgkin disease. Cancer. 2006 Dec l;107(ll):2678-87.

213. Terasawa T, Lau J, Bardet S, Couturier O, Hotta T, Hutchings M, et al. Fluorine-18-fluorodeoxyglucose positron emission tomography for interim response assessment of advanced-stage Hodgkin's lymphoma and diffuse large B-cell lymphoma: a systematic review. J Clin Oncol. 2009 Apr 10;27(11):1906-14.

214. Arner ES, Eriksson S. Mammalian deoxyribonucleoside kinases. Pharmacology & therapeutics. 1995;67(2):155-86.

215. Eriksson S, Munch-Petersen B, Johansson K, Eklund H. Structure and function of cellular deoxyribonucleoside kinases. Cellular and molecular life sciences : CMLS. 2002 Aug;59(8):1327-46.

216. Van Rompay AR, Johansson M, Karlsson A. Substrate specificity and phosphorylation of antiviral and anticancer nucleoside analogues by human deoxyribonucleoside kinases and ribonucleoside kinases. Pharmacology & therapeutics. 2003 Nov;100(2):119-39.

217. Sabini E, Ort S, Monnerjahn C, Konrad M, Lavie A. Structure of human dCK suggests strategies to improve anticancer and antiviral therapy. Nature structural biology. 2003 Jul;10(7):513-9.

218. lyidogan P, Lutz S. Systematic exploration of active site mutations on human deoxycytidine kinase substrate specificity. Biochemistry. 2008 Apr 22;47(16):4711-20.

219. Hazra S, Sabini E, Ort S, Konrad M, Lavie A. Extending thymidine kinase activity to the catalytic repertoire of human deoxycytidine kinase. Biochemistry. 2009 Feb 17;48(6):1256-63.

220. Chow CW, Rincon M, Davis RJ. Requirement for transcription factor NFAT in interleukin-2 expression. Molecular and cellular biology. 1999 Mar;19(3):2300-7.