Клеточные технологии в регенерации пульпы зуба (экспериментальное исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.14, кандидат наук Гаджиев Абдулмуталип Курбанмагомедович

• Гаджиев Абдулмуталип Курбанмагомедович
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Гаджиев Абдулмуталип Курбанмагомедович

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Применение стволовых клеток в стоматологии

1.2. Особенности стволовых клеток пульпы

1.3. Опыт зарубежных исследователей при лечении острого и

хронического пульпита на экспериментальных моделях

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Материал исследования

2.2. Экспериментальное исследование

2.2.1. Экспериментальная модель травматического пульпита у крыс

2.2.2. Экспериментальная модель ампутации пульпы премоляров и моляров у миниатюрных свиней

2.2.3. Гистологическая проводка парафиновых срезов

2.2.4. Гистологическая проводка недекальцинированных шлифов

2.2.5. Окрашивание шлифов

2.2.6. Микроскопическое исследование и документирование

2.3. Создание тканеинженерной конструкции

2.3.1. Получение культуры клеток пульпы зуба миниатюрных свиней

2.3.2. Создание аллотканеинженерной конструкции

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Выбор биомодели для трансплантации клеток пульпы зуба

3.1.1. Экспериментальная модель травматического пульпита у крыс

3.1.1.1. Морфология пульпы крыс (группа контроля)

3.1.1.2. Морфология пульпы через 4 суток после моделирования травматического пульпита

3.1.1.3. Морфология пульпы через 7 суток после моделирования травматического пульпита

3.1.1.4. Морфология пульпы через 14 суток после моделирования

травматического пульпита

3.1.1.5. Морфология пульпы через 30 суток после моделирования

травматического пульпита

3.2. Экспериментальная модель ампутации пульпы (группа контроля)

3.2.1. Нормальное строение пульпы зуба у миниатюрных свиней

3.2.2. Ампутация пульпы зуба миниатюрной свиньи (14 суток после ампутации)

3.2.3. Ампутация пульпы зуба миниатюрной свиньи (30 суток после ампутации)

3.2.4. Ампутация пульпы зуба миниатюрной свиньи (60 дней после ампутации)

3.3. Экспериментальное исследование трансплантации клеточной культуры пульпы зуба миниатюрных свиней (основная группа)

3.3.1. 14 дней после трансплантации

3.3.2. 30 дней после трансплантации

3.3.3.60 дней после трансплантации

Глава 4. Обсуждение результатов собственных исследований и

заключение

4.1. Клеточный трансплантат для регенерации пульпы зуба

4.2. Биомоделирование при изучении регенерации пульпы

4.3. Регенерация пульпы зуба у млекопитающих и возможности ее стимуляции

4.4. Влияние трансплантации аллогенной клеточной культуры с аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмой на периодонт

4.5. Заключение

Выводы

Практические рекомендации

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клеточные технологии в регенерации пульпы зуба (экспериментальное исследование)»

Введение Актуальность темы исследования

В современной стоматологии острый и хронический пульпит остается важной и окончательно нерешенной проблемой. Развитие пульпита сопровождается болью и воспалением [6, 8, 30, 64]. Некроз пульпы, обусловленный инфекционным воспалением, возникающим чаще всего из-за длительно текущего кариеса, приводит к потере зуба и снижению качества жизни пациента [91]. Как правило, пораженная ткань пульпы удаляется при помощи эндодонтического подхода, а корневой канал заполняется синтетическим цементом, что приводит к формированию нежизнеспособного зуба [31, 63, 68, 131].

Другим методом лечения является биологический метод [1, 3, 5, 7, 14, 21, 22, 29]. В литературе встречаются экспериментальные исследования на животных моделях, посвященные использованию стволовых клеток (СК) пульпы для восстановления собственной пульпы зуба, которая может быть потеряна в связи с формированием пульпита [90, 112]. С открытием функции стволовых клеток в тканях пульпы зуба, поиск биологических подходов, использующих эти клетки для регенерации пульпы, вырос в геометрической прогрессии. С выделением постнатальных стволовых клеток из различных источников в ротовой полости и разработкой биосовместимых материалов для доставки клеток и фактора роста, возможности для альтернативных методов лечения, основанных на клеточной биологии становятся все более реальными.

В ряде публикаций приводится описание эктопической трансплантации пульпарных СК с целью регенерации собственной пульпы зуба, которую, как правило, проводят на мышах.

Эти исследования являются доказательством того, что новообразование пульпы и одонтобласт-подобных клеток, формирующих дентинные стенки, может быть индуцировано пульпарными СК в пустом пространстве корневого канала . S. Kim et al. (2015) в своей работе оценивали применение безматриксных 3D тканей,

полученных методом тканевой инженерии из СК пульпы, для регенерации пульпы зуба [96].

Иммунологический анализ выявил, что ткань, находящаяся в корневых каналах, содержащих 3D ткани из пульпарных СК, имела сосудистый характер, экспрессировала CD31 и содержала одонтобласт-подобные клетки, организованные вдоль стенок корневого канала, которые обнаруживались при окрашивании дентина сиалопротеином.

В ходе анализа зарубежных публикаций, выявлено, что экспериментальные работы по ортотопической трансплантации СК дентальной пульпы чаще всего проводились на собаках, которые многими авторами считаются идеальной животной моделью для стоматологических исследований из-за сходства с человеком в анатомии, принципах роста тканей и патофизиологии [96, 134].

Авторы сообщают, что на 14 день эксперимента корневой канал был успешно заполнен регенерированной пульпой, содержащей нервы и сосудистую сеть, при этом в дальнейшем наблюдалось новообразование дентина вдоль стенок канала.

Между тем, существуют исследования, не показавшие преимуществ СК пульпы, при восстановлении тканей пульпы зуба [96].

В связи с тем, что сведений по регенерации пульпы недостаточно и носят противоречивый характер, экспериментальное изучение этого вопроса является актуальным.

Степень разработанности темы исследования

Многими исследованиями показано, что СК дентальной пульпы имеют ряд важных преимуществ, к которым относятся доступность материала, активная пролиферация, широкие возможности дифференцировки [90]. Восстановление тканей зуба, а в особенности пульпы может быть привлекательной альтернативой более традиционным методам лечения, потому что поврежденные ткани заменяются натуральными. На настоящий момент имеются сведения об

экспериментальных исследованиях, подтверждающих возможность регенерации тканей пульпы посредством пульпарных СК, что в дальнейшем позволит изменить взгляды на лечение такой патологии, как острый и хронический пульпит [96]. Однако, для переноса этих знаний из лаборатории в клинику требуются дальнейшие экспериментальные и клинические исследования.

Цель исследования

Изучить возможность органотипической регенерации пульпы зуба при применении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток из пульпы (МСК).

Задачи исследования

1. Разработка экспериментальной модели по регенерации пульпы у лабораторного животного.

2. Разработать методические подходы по созданию клеточного трансплантата на основе стволовых клеток пульпы зуба.

3. Изучить особенности репаративной регенерации пульпы после ее ампутации при применении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток пульпы (МСК) с использованием обогащенной тромбоцитами плазмы крови (РЯР).

4. В эксперименте изучить динамику репаративного процесса в пульпе при применении данной тканеинженерной конструкции после ампутации пульпы.

5. Разработать практические рекомендации по применению тканеинженерной конструкции.

Научная новизна

В результате проведенного исследования впервые научно обоснована экспериментальная модель по регенерации пульпы зубов у миниатюрных свиней светлогорской породы.

Показано, что выявленные морфологические особенности регенерации пульпы резцов крыс, характеризующиеся спонтанной регенерацией после ее ампутации не позволяют рассматривать ее в качестве экспериментальной модели регенерации пульпы.

В результате проведенного исследования получены и охарактеризованы культуры мультипотентных стромальных клеток пульпы зуба (МСК), разработан протокол приготовления тканеинженерной конструкции с использованием обогащенной тромбоцитами плазмы крови (РЯР). Разработан безопасный и эффективный метод трансплантации клеток.

Впервые в эксперименте изучены особенности репаративных процессов в пульпе зуба после ее ампутации при применении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток (МСК) с применением обогащенной тромбоцитами плазмы крови (РЯР).

Установлено, что трансплантация тканеинженерной конструкции, содержащей клетки пульпы зуба, приводит к запуску процессов регенерации пульпы через образование грануляционной ткани, которые завершаются через 60 дней.

Теоретическая и практическая значимость

В результате проведенного экспериментального исследования изучены процессы регенерации пульпы после ее ампутации при применении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток (МСК) пульпы с применением обогащенной тромбоцитами плазмы крови (РЯР),

что позволило научно обосновать в перспективе применение метода в практической стоматологии.

Методология и методы исследования

Диссертация выполнена в соответствии с принципами и правилами доказательной медицины. Использованы морфологические (гистологические), рентгенологические и статистические методы исследования. Объектом изучения были 25 крыс линии УМаг и 6 миниатюрных свиней светлогорской породы, которым моделировали воспаление в пульпе зубов и проводили трансплантацию тканеинженерной конструкции с целью регенерации пульпы. Предмет исследования: экспериментально-моделированный пульпит, тканеинженерная конструкция, пульпа, регенерация.

Положения, выносимые на защиту

1. Трансплантация тканеинженерной конструкции, содержащей мультипотентные стромальные клетки пульпы (МСК) с использованием обогащенной тромбоцитами плазмы крови (РЯР) приводит к запуску процессов регенерации пульпы, характеризующихся образованием грануляционной ткани с вовлечением клеточного трансплантата.

2. Спустя 60 дней после трансплантации тканеинженерной конструкции с мультипотентными стромальными клетками пульпы (МСК) с использованием обогащенной тромбоцитами плазмы крови (РЯР) регенерация пульпы в целом завершается: грануляционная ткань замещается ретикулярной стромой, пролиферация одонтобластов приводит к формированию новообразованного дентина.

3. Выявлены морфологические особенности регенерации пульпы резцов крыс, заключающиеся в способности к спонтанной регенерации после ее ампутации,

что не позволяет рассматривать ее в качестве экспериментальной модели по изучению процессов регенерации пульпы.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов обеспечивается последовательным и логичным изложением задач исследования, их решением, использованием современных апробированных методов исследования, корректностью применения, достаточным объемом данных для каждой исследовательской группы, достаточным количеством групп контроля в экспериментах, оценкой полученных результатов при сравнении с данными современной научной литературы.

Материалы диссертации доложены на Всероссийской научной конференции «Регенеративная биология и медицина» (Москва, 2011), научной конференции «Морфометрия и применение IT-технологий в диагностике заболеваний» (Москва, 2014), на VIII конференции молодых ученых «Современные научные достижения в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии» (Москва, 2017), на 18 Европейском эндодонтическом конгрессе ESE (Брюссель, 2017).

Апробация диссертации проведена на совместном заседании сотрудников отдела терапевтической стоматологии, отделения профилактики стоматологических заболеваний, отдела общей патологии, отделения функциональной диагностики ФГБУ «ЦНИИС и ЧЛХ» Минздрава России 26 июня 2018 года.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в ФГБУ «ЦНИИС и ЧЛХ» Минздрава России. Материалы используются при обучении ординаторов и аспирантов.

Личный вклад автора в выполнение работы

Автор принимал непосредственное участие на всех этапах выполнения данного исследования: анализ научной литературы по выбранной теме, проведение экспериментальных исследований по моделированию пульпита у животных, составление плана экспериментальных исследований и проведение трансплантации тканеинженерной конструкции, последующего наблюдения и анализ полученных результатов.

Диссертационная работа выполнена в ФГБУ «Центральный научно-исследовательский институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии» Минздрава России в соответствии с планом научной работы по проблеме 19.02 -«терапевтическая стоматология» в отделении функциональной диагностики и лаборатории патологической анатомии.

Глава 1. Обзор литературы

Стволовые клетки (СК) - недифференцированные клетки, которые способны к самообновлению (деление путем митоза) и дают начало различным типам специализированных клеток организма [17]. Широко известно, что СК обладают рядом отличительных свойств: клоногенностью (происхождение популяции клеток из одной), самообновлением (способностью к самовоспроизведению в недифференцированном состоянии) и высокой потентностью (возможностью дифференцировки в разные типы клеток) [39, 98, 110]. Во многих источниках описана классификация СК в зависимости от их потентности [78, 82, 98]. Так, тотипотентные (или омнипотентные) СК могут дифференцироваться в эмбриональные и внеэмбриональные типы клеток. Такие СК образуются при сиянии яйцеклетки и сперматозоида и участвуют в формировании полноценного и жизнеспособного макроорганизма [82]. S. Mitalipov и D. Wolf (2009) отмечают, что клетки, полученные в результате первых нескольких делений оплодотворенной яйцеклетки также считаются тотипотентными [108]. Плюрипотентные СК являются потомками тотипотентных клеток и могут дифференцироваться в любые клетки трех зародышевых листков (эктодермы, мезодермы, энтодермы) [98, 130]. Мультипотентные СК способны специализироваться в несколько типов клеток в пределах одного зародышевого листка. Олигопотентные СК также дают начало только нескольким семействам клеток, таких как лимфоидные или миелоидные СК [117]. По данным зарубежных авторов унипотентные СК относятся к предшественникам клеток одного типа и имеют ограниченное число делений, являясь незрелыми тканеспецифичными клетками [78].

На сегодняшний день также принято разделять СК на эмбриональные, фетальные и взрослые (соматические) СК [17, 79, 80]. Известно, что эмбриональные СК являются плюрипотентными, обнаруживаются на самой ранней стадии развития зародыша и формируют эмбриобласт. Фетальные СК также плюрипотентны и включают три разновидности: гематопоэтические СК,

нейральные СК (и клетки нервного гребня) и СК-предшественники Ь-клеток поджелудочной железы, продуцирующих инсулин [12, 98]. Е.Л. Золотухина (2014) отмечает, что фетальные СК имеют некоторые преимущества перед взрослыми: можно выбрать СК, уже начавшие дифференцировку в определенном направлении, кроме того, их антигены гистосовместимости экспрессируются незначительно, поэтому фетальные СК не вызывают выраженную реакцию отторжения [32]. Выявлено, что взрослые СК, как правило, мульти-, олиго- или унипотентны, т. е. имеют узкий потенциал дифференцировки. Тканеспецифичные СК, которые требуются для восстановления тканей, формируются в процессе онтогенеза и находятся в состоянии покоя, пока местные раздражители не активируют их пролиферацию, дифференциацию или миграцию [132]. В.С. Лукьянчиков в своей работе рассматривает природу, назначение и свойства стволовых клеток и клеточной терапии, которые в настоящее время представляют собой одну из наиболее передовых, перспективных и актуальных областей фундаментальных исследований и прикладных разработок в биологии и медицине, а также подробно рассмотрена технология получения мезенхимальных стволовых клеток и биоинженерия [47].

В современной литературе также описаны индуцированные плюрипотентные СК, которые формируются из дифференцированных клетки, получающих характеристики эмбриональных СК. К. Takahashi е1 а1. (2007) в своей работе первыми описали получение репрограммированных плюрипотентные СК мыши при помощи 4 факторов: К^4,ОС:4, Sox2 и с-Мус, введенных в ядро на ретровирусных структурах. Кроме того, ими были получены индуцированные СК человека [129].

Важным вопросом в наши дни остается процесс получения СК из различных источников в организме [82, 98]. Традиционно описаны 3 доступных источника аутологичных взрослых СК в организме человека, к которым относятся костный мозг, кровь и жировая ткань [69]. Они обещают безграничные возможности клеточной медицине - с ней связывают излечение самых тяжелых болезней [60]. Экстракция СК из костного мозга производится путем бурения кости (как

правило, бедренной или гребня подвздошной кости). Сообщается, что СК липидного происхождения получают с помощью липосакции, а СК из крови добывают путем афереза, при котором кровь донора пропускается через специальный аппарат, извлекающий СК и возвращающие другие части крови. Кроме того, СК также могут быть взяты из пуповинной крови сразу после рождения [78].

Самым распространенным классом мультипотентных СК, которые могут развиваться адипогенном, остеогенном и хондрогенном направлении являются мезенхимальные СК, в настоящее время повсеместно применяемые для разработки новейших клеточных биомедицинских технологий [12, 79, 80]. Изучены иммунорегуляторные свойства культур стволовых клеток человека мезенхимального и эктодермального происхождения при введении в организм мыши [36]. В многочисленных публикациях описаны способы их получения из костного мозга, хрящей, жировой ткани, пуповины и пуповинной крови, плаценты, пульпы зубов и иных тканей человека [23, 62, 72, 140]. Выявлены иммунологические отличия стволовых клеток различного происхождения, которые следует учитывать при разработке методов клеточной терапии [48]. В.Н. Николенко и др. авторами подробно рассмотрены классификация и источники стволовых клеток, а также роль клеточной терапии в регенерации костной ткани. Особое внимание уделяется стволовым клеткам из зубных фолликулов, поскольку считается, что клетки зубного фолликула могут дифференцироваться в клетки тканей пародонта, в том числе в остеобласты и цементобласты [51]. По мнению некоторых исследователей одним из наиболее перспективных источников СК в современной медицине считаются ткани пульпы зуба [53]. В пульпе зуба присутствуют как минимум два типа стоволовых клеток мезенхимальные и эктомезенхимальные [66]. Эти клетки могут дифференцироваться в дентинформирующие одонотобласты что обосновывает их применение для восстановления тканей зуба [24]. Эксперименты по криоконсервации стволовых клеток из зачатков третьих моляров человека показали, что заморозка и хранение клеток не оказали существенного влияния на способность к пролиферации,

дифференцировке и нейропротекции на модели in vitro [9]. Большим преимуществом данного источника является доступность биологического материала, при этом СК пульпы по своим фенотипическим и морфологическим характеристикам аналогичны мезенхимным СК [100, 143]. Выявлены иммунологические отличия стволовых клеток различного происхождения, которые следует учитывать при разработке методов клеточной терапии [48].

Стоит добавить, что по данным ряда авторов, особенно актуальным считается применение СК пульпы зуба для регенерации костных и мягкотканых дефектов в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии [26, 93, 118]. В последнее время также разрабатываются подходы к лечению острого и хронического пульпита при помощи СК пульпы [85, 124].

1.1. Применение стволовых клеток в стоматологии

В современной медицинской литературе идет активное обсуждение возможностей применения СК в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии [70, 79, 80]. Известно, что клиническая эффективность терапии СК на современном этапе была показана главным образом при аугментации альвеолярного отростка, проводящейся с целью установки зубных имплантатов [16, 41, 44]. Использование стволовых клеток для восстановления и регенерации костной ткани, дентина и даже тканей периодонта открывает широкие перспективы для полноценного восстановления тканей краниофациальной области [33]. В настоящее время подходы, использующие СК для наращивания костной ткани, включают метод тканевой инженерии [4] и метод chair-side (в присутствии пациента) клеточного графтинга. Тканевая инженерия - это создание трехмерных органов при помощи биодеградирующих матриксов, создание органов из нескольких тканей. Использование стволовых клеток, особенно аутологичных, делает возможным выращивание функционирующих органов и хорошее их приживление. К настоящему времени методами тканевой инженерии удалось вырастить полноценный зуб (на крысах); участок сосуда; многослойный имплант кожи;

фалангу пальца из кости и хряща [61] . Представляется перспективным обширных костных дефектов тканеинженерных конструктов, состоящих из матриксов с заданной биодеградацией и внешних каркасов из титановых сетей с покрытием цитокинами - активаторами ангиогенеза и стимуляторами костной регенерации. Кроме того, для усиления эффективности любых видов конструкций в клинической практике возможно совместное применение аутологичной плазмы, обогащенной тромбоцитами, в качестве источника множества регенераторных сигнальных молекул [49]. В рамах обоих методик чаще всего применяют мезенхимальные СК костного мозга, получаемые из гребня подвздошной кости т.к они являются наиболее хорошо описанными и исследованными СК среди клинически доступных СК и, как было показано в ряде работ, обладают выраженным остеогенным потенциалом [15, 107, 143]. R. Schmelzeisen и R. ScЫmmmg (2003) в своем пилотном исследовании, включавшем 2 пациентов, впервые доказали целесообразность использования косного трансплантата, полученного при помощи тканевой инженерии из надкостничных СК/остеопрогениторных клеток для аугментации задней части верхней челюсти перед имплантацией (79, 80, 122). В следующем году та же группа ученых продемонстрировала результаты лечения 27 больных, у которых пластинчатая кость сформировалась в течение 3-х месяцев после трансплантации, обеспечивая надежную основу для введения зубных имплантатов [122]. В недавней работе М. Nagata et а1. (2012) при использовании гистоморфометрического анализа и компьютерной томографии КТ, было выявлено, что применение культивированных клеток надкостницы с костными частицами и обогащенной тромбоцитами плазмы (РЯР) в качестве аутологичного клеевидного трансплантационного материала индуцировало ремоделирование кости, тем самым повышая остеоинтеграцию и снижая время послеоперационного ожидания после установки имплантата [111]. Авторы высказали предположение о том, что имплантированный клеточный материал может служить в качестве источника СК, остеопрогениторных и ангиогенных клеток, а также факторов роста для ускорения регенерации кости. Y. Yamada et а1. (2004) продемонстрировали

успешную попытку тканевой инженерии альвеолярной костной ткани с одновременным размещением имплантата, применяя гелеобразную смесь мезенхимальных СК костного мозга и РЯР (79, 80, 138). В нашей стране проведено исследование экспериментального обоснования применения клеточных технологий при дентальной имплантации и оценки влияния на процесс остеоинтеграции нанесенных на имплантат аутологичных МСК, выделенных из жировой ткани и дифференцированных в остеогенном направлении [46]. Данный коллектив авторов впоследствии сообщил об успешном применении тканевой инженерии при периодонтальной потере костной массы [137], остеопластике альвеолярной расщелины [83] и подъеме дна верхнечелюстной пазухи [137]. Эффективность мезенхимальных СК костного мозга при регенерации костной ткани орофациальной области и установке имплантата также было продемонстрирована, когда СК использовались в комплексе с частицами гидроксиапатита (НА) [106], двухфазным НА / Ь-ТСР [123], желатиновой губкой [93] и замороженной аутологичной губчатой костью [102]. В дополнение к мезенхимальным СК костного мозга, мезенхимальные СК из жировой ткани в ряде работ показали хороший регенеративный потенциал при восстановлении костной ткани орофациальной зоны и установке имплантата [107]. Применение тканеинженерных конструкций на основе стромальных клеток из подкожной жировой клетчатки и синтетических остеоиндуктивных материалов (ГАП и Коллапан -Г) свидетельствуют о положительном влиянии на сроки заживления операционной раны [27].

Между тем, С. Zizelmann et а1. (2007) в своей работе сравнили скорость резорбции костных трансплантатов, полученных методом тканевой инженерии, и аутологичной губчатой кости в верхнечелюстной пазухе через 3 месяца после операции. Авторы сообщают, что трансплантаты, содержащие остеобласты полученные из надкостницы были менее надежны (уровень резорбции 90%), чем аутогенные трансплантаты кости (уровень резорбции 25%) при аугмнтации синуса [146].

В литературе описан другой подход к регенерации костной ткани, который основан на непосредственном использовании свежего клеточного трансплантата, полученного в присутствии пациента (chair-side) [118, 119, 121] или коммерчески подготовленного аллотрансплантата костной матрицы (трупного происхождения), которая содержит нативные мезенхимальные СК [105]. Стоит отметить, что данная процедура являются относительно удобной для врачей, поскольку она не требует применения лабораторных методов или дополнительного обучения [79, 80]. Одним из интересных направлений в тканевой инженерии, в том числе в челюстно - лицевой хирургии, является использование скаффолдов, которые выполняют функцию механического каркаса для клеток. К таким материалам относят натуральные полимеры (коллаген, целлюлоза, фибронектин, хитозан, альгинат и агароза, фиброин), синтетические полимеры (полилактид, полигликолид, полика - пролактон, поливиниловый спирт) и биокерамику (гидроксиапатит, трикальцийфорсфат и биоактивные стекла). Особое внимание в последнее время уделяется инновационным технологиям быстрого прототипирования — процессам формирования трехмерного объекта по цифровой модели, из которых наиболее удобными в применении для биополимеров являются лазерная стереолитография, селективное лазерное спекание, моделирование методом наплавления и 3Д - печать. В процессе получения биоинженерных конструкций на основе скаффолдов (посадке СК на матрицы перед трансплантацией их вместо дефекта) используют биоактивные вещества, индуцирующие остеогенную дифференцировку и привлекающие новые клетки носителя, а также стимулирующие ангиогенез. Данные вещества в основном представлены различными ростовыми факторами [56].

Получены и охарактеризованы культуры мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (SHED - клеток) пульпы молочного зуба человека. Клетки использовали для заселения трехмерных биодеградируемых скаффолдов на основе полилактогликолида, при этом сохранялся их остеогенный потенциал. Имплантация скаффолдов мышам не вызвала негативных реакций со стороны организма реципиента. Эти результаты свидетельствуют о перспективности

использования заселенных SHED - клетками полилактогликолидных скаффолдов при создании имплантов для замещения костных дефектов [11].

К тому же, по мнению ряда авторов, биоактивные вещества в идеале должны не только индуцировать остеогенную дифференцировку, но и привлекать новые стволовые клетки носителя, а также стимулировать ангиогенез. В группу данных веществ входят в основном различные ростовые факторы (TGF - p, в том числе и BMP, IGF, FGF, PDGF, VEGF и др.). Системное введение факторов роста обычно является малоэффективным, а иногда и опасным вследствие их короткого времени жизни (особенно в физиологических средах), неизбирательного биораспределения, потенциальной токсичности и риска канцерогенной активности. Таким образом, включение биоактивных веществ в скаффолд решает несколько основных задач: локализованная доставка оптимальной концентрации ростовых факторов внутрь имплантата, сохранение биологической активности молекул, контролируемое высвобождение веществ в течение необходимого периода времени.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гаджиев Абдулмуталип Курбанмагомедович, 2018 год

Список литературы

1. Аброкова, М.Ф. Лечение глубокого кариеса и инициального пульпита с применением иммобилизированных ферментов: автореф. дис....канд.мед.наук: 14.01.21 / Аброкова Мадина Фуадовна. - М, 2004. - 22с.

2. Алексеева, И.С. Восстановление костной ткани после удаления зубов при использовании тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток жировой ткани /И.С. Алексеева, А.А. Кулаков, А.В. Гольдштейн, А.В. Волков // Стоматология. - 2012. - № 4. - С. 32 - 35.

3.Алибеков, К.М. Эффективность применения лечебной пасты на основе биокерамики из ультрадисперсного фторапатита кальция и бета-трикальций фосфата при лечении глубокого кариозного поражения зубов в эксперементе / К.М. Алибеков // Эндодонтия сегодня. - 2007. - №1. - С.40-42.

4.Баринов, С.М. Трехмерная печать остеокондуктивных керамических матриксов для тканевой инженерии / С.М. Баринов, И.В. Вахрушев, А.А. Егоров, В.С. Комлев, В.Н. Кортунов, Л.И. Кротова, В.К. Попов, А.Ю. Федотов, К.Н. Ярыгин // Материалы 1-го Национального Конгресса по регенеративной медицине. - М.: МЕДИ Экспо, 2013. - С. 24.

5.Барышева, А.Б. Биологические методы лечения пульпы зуба при помощи универсальных препаратов / А.Б. Барышева, Ш.У. Тимербекова, О.А. Жунусова и соавт. //Стоматологический вестник. - 2007. - №3-4. - С.13.

6. Бир, Р. Эндодонтия / Р. Бир. - пер.с англ.; под общ. ред. Т.Ф. Виноградовой. - М.: МЕДпресс-информ, 2004. - 363с.

7.Борисенко, Л.Г. Гиперемия пульпы. Пути решения проблемы / Л.Г. Борисенко, П.А. Леус //Стоматологический журнал. - 2005. - №3. - С.4-11.

8. Боровский, Е.В. Кариес зубов: препарирование и пломбирование / Е.В. Боровский. - М.: АО Стоматология, 2001. - 144с.

9.Блатт, Н.Л. Выделение и анализ стволовых клеток из зачатков пульпы третьего моляра человека: автореф. дис. канд. биологических наук: 03.03.04 /Блатт Наталия Львовна. - Саранск, 2012. - 23 с.

10. Вахрушев, И.В. Мезенхимальные клетки пульпы молочного зуба: цитофенотип и первичная оценка возможности применения в тканевой инженерии костной ткани / И.В. Вахрушев //Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2010. - №1. - С. 55-60.

11. Вахрушев, И.В. Разработка тканеинженерных имплантов для регенерации костной ткани на основе полилактогликолидных скаффолдов нового поколения и мультиптентных мезенхимальных клеток пульпы молочного зуба (SHED -клеток) / И.В. Вахрушев, Е.Н. Антонов, А.В. Попова, Е.В. Константинова, П.А. Каралкин, И.В. Холоденко, А.Ю. Лупатов, В.К. Попов, В.Н. Баграташвилли, К.Н. Ярыгин // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2012. - № 1. - С. 2933.

12. Велиханова, Л.К. Применение стволовых клеток пульпы зуба в заместительной клеточной терапии / Л.К. Велиханова, И.В. Фирсова //Бюллетень медицинских интернет-конференций. - 2013. - Т. 3. - № 2. - С.346-348.

13.Вахрушев, И.В. Мезенхимальные стволовые клетки пульпы молочного зуба как материал для тканевой инженерии / И.В. Вахрушев, П.А. Каралкин, В.С. Комлев, А.Ю. Федотов, В.К. Попов, Е.Н. Антонов, К.Н. Ярыгин // Материалы 1 -го Национального Конгресса по регенеративной медицине. - М., 2013. - С. 47.

14.Воложин, Т.В. Изменение в пульпе зуба при формировании глубокой полости, применении различных лечебных паст в эксперементе / Т.В. Воложин, К.М. Алибеков, В.В. Геменов, Т.В. Белявская, С.Г. Курдюмов // Кафедра. - 2006. -№4. - С. 33-35.

15. Владимирская, Е.Б. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) в клеточной терапии / Е.Б. Владимирская //Онкогематология. - 2007. - №1. - С. 4-13.

16.Волков, А. В. Перспективы создания зуба методами тканевой инженерии / А.В. Волков //Гены и клетки. - 2005. - №1. - С. 44-45.

17. Волкова, Н.С. Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки и современные методы их получения / Н.С. Волкова, А.С. Ермаков //Царскосельские чтения. - 2016. - Т. 3. - №. 20. - С. 255-260.

18. Воложин, А.И. Использование мезенхимальных стволовых клеток для активизации репаративных процессов костной ткани челюсти в эксперименте / А.И. Воложин и др. // Стоматология. - 2010. - № 1. - С. 10-14.

19. Вольперт, У.В. Заживление костных дефектов ветви нижней челюсти кроликов под биоинженерными конструкциями из титана и золотого сплава с ксеногенными мезенхимальными стволовыми клетками / У. В. Вольперт и др. // Стоматология. - 2009. - № 1. - С. 4-8.

20. Гаджиев, А.К. Адаптационные механизмы защиты обнаженной пульпы у крыс: к вопросу о биомоделировании острого и хронического пульпита // А.К. Гаджиев, А.В. Волков, И.И. Бабиченко, Е.К. Кречина, Г.Д. Капанадзе, Н.В. Станкова // Биомедицина №3.- 2013. - С. 36-40.

21.Гиззатулина, Л.Л. Лечение глубокого кариеса и хронического фиброзного пульпита с использованием биоматериала аллоплант: автореф. дис...канд. мед. наук: 14.00.21 / Гиззатуллина Ляля Локмановна. - Пермь, 2008. - 24с.

22.Григорьева, Н.А. Клиническое обоснование выбора материала для лечения пульпита биологическим методом и методов витальной ампутации: автореф. дис.канд. мед. наук: 14.00.21 / Григорьева Наталья Анатольевна. - М., 2008. -24с.

23. Григорян, А.С. Выделение мультипотентных прогениторных клеток из фетальной печени человека / А.С. Григорян // Гены и клетки. - 2006. - Т. 1. - №4. - С.18-19.

24. Грудянов, А.И. Стволовые клетки и возможности их применения в пародонтологии / А.И. Грудянов, В.Ю. Сысоева, Ю.В. Тернова // Стоматология. -2012. - № 1. - Том 1. - С. 18-29.

25. Грудянов, А.И. Стволовые клетки в стоматологии / А.И. Грудянов, В.Ю. Сысоева, Ю.В. Тернова // Современная стоматология. - 2012. - № 2. - С. 71-75.

26. Деев, Р.В. Пути развития клеточных технологий в костной хирургии / Р.В. Деев //Травматология и ортопедия России. - 2008. - №1. - С. 65-71.

27. Дробышев, А.Ю. Клиническое исследование применения ткане-инженерной конструкции на основе аутологичных стромальных клеток их жировой ткани у пацеинтов с дефицитом костной ткани в области альвеолярного отростка верхней челюсти и альвеолярной части нижней челюсти / А.Ю. Дробышев, К.А. Рубина, В.Ю. Сысоева, Н.И. Калинина, О.А. Григорьева, А.В. Мелерзанов, С.А. Румянцев, И.Ю. Чаусская // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2011. - Том 4. - №4 - С. 764-772.

28. Ежедневные проблемы в клинике: Пульпит - Что делать? // Новое в стоматологии. - 2003. - №5(113). - С.15.

29.Ершова, Н.Б. Комплексное лечение обратимых форм пульпита биологическим методом / Н.Б. Ершова, Н.И. Перькова, Б.Т. Мороз //Современная стоматология. - 2004. - №3. - С.16.

30.Иванов, В.С. Воспаление пульпы зуба / В.С. Иванов, Ю.А. Винниченко, Е.В. Иванова. - М.: Медицинское информационное агенство, 2003. - 264с.

31.Лукиных, Л.М. Пульпит: клиника, диагностика и лечение / Л.М. Лукиных, Л.В. Шестопалова. - Нижний Новгород: НГМА, 2004. - 87с.

32. Золотухина, Е.Л. Стволовые клетки и перспективы их применения в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии / Е.Л. Золотухина //Молодий вчений. - 2014. - №6 (09). - С. 145-147.

33.Иорданишвили, А.К. Роль клеточных технологий в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии / А.К. Иорданишвили, А.Б. Смолянинов, Е.В. Жаров, Д.В. Булгин, И.Е. Жаров// АГ - Инфо. - 2006. - № 4. - С. 8-11.

34.Казакова, В.С. Использование факторов роста в восстановлении костной ткани / В.С. Казакова, В.П. Чуев, О.О. Новиков, Е.Т. Жилякова, Д.А. Фадеева // Научные ведомости. - 2011. - № 4-2(99). - Том 13. - С. 5-12.

35.Камалов, А.А. Стволовые клетки и их использование в современной клинической практике [Электронный ресурс]/ А.А. Камалов, Е.А. Ефремов, Д.А. Охоботов // Золотое здоровье. - 2007. - Режим доступа: кйр://аи-

health.ru/listview.php?part=67&nid= 1117.

36.Каралкин, П.А. Иммунорегуляторные свойства человеческих стволовых клеток мезенхимального и эктодермального происхождения, проявляющиеся при трансплантации мышам линии BALB/C / П.А. Каралкин, А.Ю. Лупатов, В.В. Бурунова, И.В. Холоденко, К.Н. Ярыгин, М.В. Молдавер, Р.А. Полтавцева, С.В. Павлович, Г.Т. Сухих // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2012. -№1. - С. 3-8.

37. Карпюк, В.Б. К изучению свежевыделенных аутологичных стромальных клеток подкожной жировой клетчатки для регенерации биологических тканей /

B.Б. Карпюк, М.Д. Перова, М.Г. Шубич // Институт стоматологии. - 2009. - № 3. -

C.74.

38.Карпюк, В.Б. Сравнительная характеристика мезенхимальных стволовых клеток костного мозга и жировой ткани / В.Б. Карпюк // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. - 2005. - №2. - С.46-50.

39. Киселев, С.Л. Молекулярная и клеточная биология линий эмбриональных стволовых клеток человека / С.Л. Киселев, П.Ю. Волчков, Е.С. Филоненко и др. // Молекулярная медицина. - 2006. - №2. - С.29-37.

40. Косенко, К.Н. Стволовые клетки в стоматологии (обзор литературы) / К.Н. Косенко // Вюник стоматологи. - 2011. - №3. - С.85-88.

41.Космачева, С.М. Технология приготовления in vitro клеточного трансплантата для замещения костного дефекта у экспериментальных животных / С.М. Космачева, Н.Н. Данилкович, В.С. Деркачев, С.А. Алексеев, М.П. Потапнев // Республиканский научно - практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий. - 2014. - С.1-5.

42. Кречина, Е.К. Применение биоматериалов при моделировании случайного вскрытия пульпы (экспериментальное исследование) / Е.К. Кречина, А.В. Волков, З.У. Абдурахманова, Г.Д. Капанадзе, А.К. Гаджиев, Е.В. Рожнова// Стоматология. - 2017. - №6. - С. 82.

43. Кречина, Е.К. Стимуляция репаративного дентиногенеза под влиянием различных биоматериалов в эксперименте / Е.К. Кречина, З.У. Абдурахманова, А.В. Волков, А.К. Гаджиев// Стоматология. - 2018. - №6. - Выпуск 2. - С. 70.

44.Кулаков, А.А. Влияние различных способов модификации поверхности дентальных имплантатов на их интеграционный потенциал / А.А. Кулаков, А.С. Григорьян, А.В. Архипов // Стоматология. - 2012. - № 6. - С.75-77.

45. Кулаков, А.А. Регенерация пульпы зуба с использованием аутологичных мезенхимальных стволовых клеток пульпы и обогащенной тромбоцитами плазмы / А.А. Кулаков, Е.К. Кречина, Т.Б. Бухарова, А.В. Волков, А.К. Гаджиев, Д.В. Гольдштейн// Стоматология. - 2017. - №6. - С. 12-16.

46. Лебеденко, И.Ю. Экспериментальное обоснование применения мезенхимальных стволовых клеток и усовершенствованных титановых имплантатов для ускорения остеоинтеграции / И.Ю. Лебеденко, А.И. Воложин, А.Ю. Васильев, Н.Н. Мальгинов, Е.В. Киселева, Н.С. Серова, С.Е. Черняев, В.В. Петровская, Н.Г. Перова // Российский стоматологический журнал. - 2011. - № 1. - С.13-15.

47.Лукьянчиков, В.С. Стволовые клетки с позиции практического врача: у всех на слуху, но в руках у немногих / В.С. Лукьянчиков // РМЖ. - 2013. - № 28. -С.1410.

48.Лупатов, А.Ю. Иммунорегуляторные свойства стволовых клеток различного происхождения в экспериментах IN VITRO / А.Ю. Лупатов, П.А. Каралкин, А.М. Савилова, А.В. Захаров, В.Н. Верясов, И.В. Вахрушев, О.А. Быстрых, Р.А. Полтавцева, К.Н. Ярыгин, Г.Т. Сухих // Материалы 1-го Национального Конгресса по регенеративной медицине. - М., 2013. - С.150-151.

49. Люндуп, А.В. Актуальные вопросы клеточной трансплантологии и тканевой инженерии / А.В. Люндуп, Ю.А. Медведев, К.В. Баласанова, Н.М. Золотопуп, С.Б. Бродская, П.А. Елистратов // Вестник РАМН. - 2013. - № 5. -С.10-15.

50.Манашев, Г.Г. Перспективы использования стволовых клеток в терапии заболеваний тканей пародонта / Г.Г. Манашев, Л.И. Лазаренко, Е.И. Ярыгин, Э.В.

Мутаев, В.С. Бондарь // Сибирское медицинское обозрение. - 2012. - № 4. - С.3-6.

51. Николенко, В.Н. Применение клеточных технологий в челюстно-лицевой хирургии. Ч. 1 / В.Н. Николенко, Ю.А. Медведев, А.В. Люндуп, К.В. Баласанова, Н.М. Золотопуп // Стоматология. - 2013. - № 4. - С.82-84.

52.Перова, М.Д. Оценка роста нового зубодесневого прикрепления после аутотрансплантации стромальных клеток ,выделенных из жировой ткани / М.Д. Перова //Пародонтология. - 2006. - №4. - С.28-31.

53. Полтавцева, Р.А. Мезенхимные стволовые клетки из пульпы зуба человека: получение, характеристика, возможности направленной дифференцировки / Р.А. Полтавцева, Ю.А. Никонова, И.И. Селезнева, А.К. Ярославцева, В.Н. Степаненко, Р.С. Есипов, С.В. Павлович, И.В. Климанцев, Н.В. Тютюнник, Т.К. Гребенник, А.В. Николаева, Г.Т. Сухих // Клеточные технологии в биологии и медицине. -2014. - № 3. - С.190-196.

54. Пулин А.А., Шаменков Д.А.,Репин В.С. Сабурина И.Н., Фатхудинов Т.Х. Биотрансплантат, способ его получения (варианты) и способ лечения заболеваний пародонта. Патент № 2265445 от 10.12.2005, Бюл. №34.

55.Сабурина, И.Н. Перспективы и проблемы применения культур клеток для регенеративной медицины / И.Н. Сабурина, Т.Д. Колокольцова, В.С. Репин, А.А. Кубатиев // Патогенез. — 2015. — Т. 13. - № 1. — С.60—73.

56.Семенов, М.Г. Перспективы применения стволовых клеток в реконструктивно - восстановительной хирургии челюстно - лицевой области / М.Г. Семенов, Ю.В. Степанова, Д.О. Трощиева // Ортопедия, травматология и восстановительная хирургия детского возраста. - 2016. -Том 4. - № 4. - С. 84- 92.

57.Сирак, С.В. Оптимизация репаративного дентиногенеза при биологических методах лечения пульпита / С.В. Сирак, Т.Л. Кобылкина, А.Г. Сирак // Современные проблемы науки и образования. - 2016. - № 3. - С. 44.

58.Смолянинов, А. Молочные зубы помогут взрослым / А. Смолянинов, А. Иорданишвилли, Д. Булыгин // Наука и жизнь. - 2006. - № 10. - С. 71-73.

59.Соловьева, О. Обзор матриц (scaffolds) для стволовых клеток /О. Соловьева //Эндодонтия Today. - 2010. - №4. - С.51-53.

60.Сорокин, В. Мифы и правда о лечении стволовыми клетками [Электронный ресурс] / В. Сорокин// Интернет журнал doctorhiter.ru. - 2017. - Режим доступа: http://doctorpiter.ru/articles/17246/.

61.Суханова, М. Применение клеточных технологий в клинике Ч. 4 [Электронный ресурс] / М. Суханова// Интернет - журнал «О коммерческих биотехнологиях». - 2005. - Режим доступа: http://cbio.ru/page/47/id/2237/.

62. Тепляшин, А.С. и др. Перспективы использования мультипотентных мезенхимных стро-мальных клеток костного мозга и жировой ткани в регуляции регенерации опорных тканей / А.С. Тепляшин //Аллергология и иммунология. -2006. - Т. 7. - №. 2. - С.189-198.

63.Файзулаева, Н.Н. Биологический метод лечения заболеваний пульпы зубов у детей и взрослых: Новая медицинская технология / Н.Н. Файзулаева, Ю.А. Винниченко. - М, 2008. - 12с.

64.Царицинский, М.М. Терапевтическая стоматология / М.М. Царицинский. -РнД: Феникс, 2008. - 508с.

65.Чергештов, Ю.И. Динамика репаративной регенерации дефектов нижней челюсти, замещенных различными имплантатами с использованием стволовых клеток по данным компьютерной томографии (Экспериментальное исследование) / Ю.И. Чергештов, Д.А. Лежнев, Л.В. Овчарова // Российская стоматология. -2014. - № 7(1). - С.8-15.

66. Шамсутдинов, М.И. Экспрессия эпителиальных (ЕМА, ББА) и мезенхимальных (А - SMA, CD31) антигенов в клетках пульпы зубов человека / М.И. Шамсутдинов, М.А. Титова, Г.Т. Салеева, А.П. Киясов // Гены & Клетки: Том IV. - 2009. - № 1. - С.52-58.

67. Шахпазян, Н.К. Мезенхимальные стволовые клетки из различных тканей человека: биологические свойства, оценка качества и безопасности для клинического применения / Н.К. Шахпазян, Т.А. Астрелина, М.В. Яковлева //Гены и клетки. - 2012. - Т. 7. - №1. - С.23-33.

68.Щетинин, Е.В. Репаративная регенерация тканей пародонта-результаты экспериментального исследования / Е.В. Щетинин и др.//Медицинский вестник Северного Кавказа. - 2015. - Т. 10. - №. 4 (38). - С.411-415.

69. Шумаков, В.И. Костный мозг как источник получения мезенхимальных клеток для восстановительной терапии поврежденных органов / В.И. Шумаков и др. //Вестник трансплантологии и искусственных органов. - 2002. - №. 4. - С. 3-6.

70.Яременко, А.И. Современные остеопластические и остеоиндуктивные материалы. Состояние проблемы. Перспективы применения в стоматологии и челюстно-лицевой хирургии / А.И. Яременко, Д.В. Галецкий, В.О. Королев //Институт стоматологии. - 2011. - Т. 2. - №51. - С. 70-71.

71. Alge, D.L. Donor-matched comparison of dental pulp stem cells and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in a rat model / D.L. Alge et al.//Journal of tissue engineering and regenerative medicine. - 2010. - Vol. 4. - N. 1. - P. 73-81.

72. Ballini, A. In vitro stem cell cultures from human dental pulp and periodontal ligament: new prospects in dentistry/ A. Ballini et al. //International journal of immunopathology and pharmacology. - 2007. - Vol. 20. - N. 1. - P. 9-16.

73. Bansal, R. Current overview on dental stem cells applications in regenerative dentistry / R. Bansal et al. //Journal of Natural Science, Biology and Medicine. - 2015. - Vol. 6. - N. 1. - P. 29.

74. Bruder, S.P. Growth kinetics, self-renewal, and the osteogenic potential of purified human mesenchymal stem cells during extensive subcultivation and following cryopreservation / S.P. Bruder, N. Jaiswal, S.E. Haynesworth //Journal of cellular biochemistry. - 1997. - Vol. 64. - N. 2. - P. 278-294.

75. d'Aquino, R. Human neural crest-derived postnatal cells exhibit remarkable embryonic attributes either in vitro or in vivo / R. d'Aquino et al. //Eur Cell Mater. -2011. - Vol. 21. - P. 304-316.

76. d'Aquino, R. Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications / R. d'Aquino et al. //Journal of Experimental Zoology Part B: Molecular and Developmental Evolution. - 2009. - Vol. 312. - N. 5. - P. 408-415.

77. Duailibi, M. T. Bioengineered teeth from cultured rat tooth bud cells / M.T. Duailibi et al. //Journal of Dental Research. - 2004. - Vol. 83. - N. 7. - P. 523-528.

78. Dulak, J. Adult stem cells: hopes and hypes of regenerative medicine / J. Dulak et al. //Acta Biochimica Polonica. - 2015. - Vol. 62. - N. 3. - P. 329-337.

79. Egusa, H. Stem cells in dentistry-part I: stem cell sources / H. Egusa et al. //Journal of prosthodontic research. - 2012. - Vol. 56. - N. 3. - P. 151-165.

80. Egusa, H. Stem cells in dentistry-Part II: Clinical applications / H. Egusa et al. //Journal of prosthodontic research. - 2012. - Vol. 56. - N. 4. - P. 229-248.

81. Galler, K.M. Bioengineering of dental stem cells in a PEGylated fibrin gel / K.M. Galler et al. //Regenerative medicine. - 2011. - Vol. 6. - N. 2. - P. 191-200.

82. Hans, R.S. The potential of stem cells: An inventory / R.S. Hans //Human biotechnology as Social Challenge, England, Ashgate Publishing, Ltd. - 2007. - P. 28.

83. Hibi, H. Alveolar cleft osteoplasty using tissue-engineered osteogenic material / H. Hibi et al. //International journal of oral and maxillofacial surgery. - 2006. - Vol. 35. - N. 6. - P. 551-555.

84. Hilkens, P. Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells / P. Hilkens et al. //Cell and tissue research. - 2013. - Vol. 353. - N. 1. - P. 65-78.

85. Holmgren, C.J. Minimal intervention dentistry: part 5. Atraumatic restorative treatment (ART) - a minimum intervention and minimally invasive approach for the management of dental caries / C.J.Holmgren, D.Roux, S. Doméjean // British Dental Journal. - 2013. - N.1. - P.11-18.

86. Hsu, S. The static magnetic field accelerates the osteogenic differentiation and mineralization of dental pulp cells/ S. Hsu, J.C. Chang //Cytotechnology. - 2010. -Vol. 62. - N. 2. - P. 143-155.

87. Huang, A.H.C. Isolation and characterization of dental pulp stem cells from a supernumerary tooth / A.H.C. Huang et al. //Journal of oral pathology & medicine. -2008. - Vol. 37. - N. 9. - P. 571-574.

88. Huang, G.T.J. Stem/progenitor cell-mediated de novo regeneration of dental pulp with newly deposited continuous layer of dentin in an in vivo model / G.T.J. Huang et al. //Tissue Engineering Part A. - 2009. - Vol. 16. - N. 2. - P. 605-615.

89. Hung, C.N. A comparison between adipose tissue and dental pulp as sources of MSCs for tooth regeneration / C.N. Hung et al. //Biomaterials. - 2011. - Vol. 32. -N.29. - P. 6995-7005.

90. Iohara, K. A novel combinatorial therapy with pulp stem cells and granulocyte colony-stimulating factor for total pulp regeneration/ K. Iohara et al. //Stem cells translational medicine. - 2013. - Vol. 2. - N. 7. - P. 521-533.

91. Iohara, K. Complete pulp regeneration after pulpectomy by transplantation of CD105+ stem cells with stromal cell-derived factor-1 / K. Iohara et al. //Tissue Engineering Part A. - 2011. - Vol. 17. - N. 15-16. - P. 1911-1920.

92. Jo, Y.Y. Isolation and characterization of postnatal stem cells from human dental tissues / Y.Y. Jo et al. //Tissue engineering. - 2007. - Vol. 13. - N. 4. - P. 767773.

93. Kaigler, D. Angiogenic and osteogenic potential of bone repair cells for craniofacial regeneration / D. Kaigler et al. //Tissue Engineering Part A. - 2010. - Vol. 16. - N. 9. - P. 2809-2820.

94. Kawashima, N. Characterisation of dental pulp stem cells: a new horizon for tissue regeneration? / N. Kawashima //Archives of oral biology. - 2012. - Vol. 57. - N. 11. - P. 1439-1458.

95. Kerkis, I. Isolation and characterization of a population of immature dental pulp stem cells expressing OCT-4 and other embryonic stem cell markers / I. Kerkis et al. //Cells Tissues Organs. - 2007. - Vol. 184. - N. 3-4. - P. 105-116.

96. Kim, S. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration/ S. Kim et al. //Mediators of inflammation. - 2015. - P.1466-1861.

97. Kodonas, K. Experimental formation of dentin-like structure in the root canal implant model using cryopreserved swine dental pulp progenitor cells / K. Kodonas et al. //Journal of endodontics. - 2012. - Vol 38. - N. 7. - P. 913-919.

98. Kolios, G. Introduction to stem cells and regenerative medicine / G. Kolios, Y. Moodley //Respiration. - 2012. - Vol. 85. - N. 1. - P. 3-10.

99. Krechina, E.K. Experimental substantiation of the use of biomaterials in the simulation of accidental opening of the pulp / E.K. Krechina, A.V. Volkov, Z.U.Abdurakhmanova // ROOTED IN THEheart OF EUROPE. - General Endodontic Posters. - 18 Biennial Congress. - 2017. - p. 103-104 (GE 114).

100. La Noce, M. Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy/ M. La Noce et al. //Journal of dentistry. - 2014. -Vol. 42. - N. 7. - P. 761-768.

101. Laino, G. A new population of human adult dental pulp stem cells: a useful source of living autologous fibrous bone tissue (LAB) / G. Laino et al. //Journal of bone and mineral research. - 2005. - Vol. 20. - N. 8. - P. 1394-1402.

102. Lee, J. Successful reconstruction of 15-cm segmental defects by bone marrow stem cells and resected autogenous bone graft in central hemangioma / J. Lee et al. //Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. - 2010. - Vol. 68. - N. 1. - P. 188-194.

103. Lee, U.L. Effect of platelet-rich plasma on dental stem cells derived from human impacted third molars / U.L. Lee et al. //Regenerative medicine. - 2011. - Vol. 6. - N. 1. - P. 67-79.

104. Liu, L. Stem cell regulatory gene expression in human adult dental pulp and periodontal ligament cells undergoing odontogenic/osteogenic differentiation / L. Liu et al. //Journal of endodontics. - 2009. - Vol. 35. - N. 10. - P. 1368-1376.

105. McAllister, B.S. Histologic evaluation of a stem cell-based sinus-augmentation procedure/ B.S. McAllister, K. Haghighat, A. Gonshor //Journal of periodontology. -2009. - Vol. 80. - N. 4. - P. 679-686.

106. Meijer, G.J. Cell based bone tissue engineering in jaw defects / G.J. Meijer et al. //Biomaterials. - 2008. - Vol. 29. - N. 21. - P. 3053-3061.

107. Mesimaki, K. Novel maxillary reconstruction with ectopic bone formation by GMP adipose stem cells / K. Mesimaki et al. //International journal of oral and maxillofacial surgery. - 2009. - Vol. 38. - N. 3. - P. 201-209.

108. Mitalipov, S. Totipotency, pluripotency and nuclear reprogramming / S. Mitalipov, D.Wolf //Engineering of stem cells. - Springer Berlin Heidelberg, 2009. - P. 185-199.

109. Mrozik, K.M. et al. Proteomic characterization of mesenchymal stem cell-like populations derived from ovine periodontal ligament, dental pulp, and bone marrow: analysis of differentially expressed proteins/ K.M. Mrozik et al. //Stem cells and development. - 2010. - Vol. 19. - N. 10. - P. 1485-1499.

110. Murphy, M.B. Mesenchymal stem cells: environmentally responsive therapeutics for regenerative medicine/ M.B. Murphy, K. Moncivais, A.I. Caplan //Experimental & molecular medicine. - 2013. - Vol. 45. -N. 11. - P. e54.

111. Nagata, M. A clinical study of alveolar bone tissue engineering with cultured autogenous periosteal cells: coordinated activation of bone formation and resorption/ M. Nagata et al. //Bone. - 2012. - Vol. 50. - N. 5. - P. 1123-1129.

112. Nakashima, M. Mobilized dental pulp stem cells for pulp regeneration: initiation of clinical trial / M. Nakashima, K. Iohara //Journal of endodontics. - 2014. -Vol. 40. - N. 4. - P. S26-S32.

113. Nakatsuka, R. 5-Aza-2'-deoxycytidine treatment induces skeletal myogenic differentiation of mouse dental pulp stem cells / R. Nakatsuka et al. //Archives of oral biology. - 2010. - Vol. 55. - N. 5. - P. 350-357.

114. Ohazama, A. Stem-cell-based tissue engineering of murine teeth/ A. Ohazama et al. //Journal of Dental Research. - 2004. - Vol. 83. - N. 7. - P. 518-522.

115. Paino, F. Histone deacetylase inhibition with valproic acid downregulates osteocalcin gene expression in human dental pulp stem cells and osteoblasts: evidence for HDAC2 involvement/ F. Paino et al. //Stem cells. - 2014. - Vol. 32. - N. 1. - P. 279-289.

116. Pivoriunas, A. Proteomic analysis of stromal cells derived from the dental pulp of human exfoliated deciduous teeth / A. Pivoriunas et al. //Stem Cells and Development. - 2009. - Vol. 19. - N. 7. - P. 1081-1093.

117. Ratajczak, M.Z. Pluripotent and multipotent stem cells in adult tissues / M.Z. Ratajczak et al. //Advances in medical sciences. - 2012. - Vol. 57. - N. 1. - P. 1-17.

118. Rickert, D. Maxillary sinus floor elevation with bovine bone mineral combined with either autogenous bone or autogenous stem cells: a prospective randomized clinical trial/ D. Rickert et al. //Clinical oral implants research. - 2011. - Vol. 22. - N. 3. - P. 251-258.

119. Sauerbier, S. Bone marrow concentrate and bovine bone mineral for sinus floor augmentation: a controlled, randomized, single-blinded clinical and histological trial— per-protocol analysis/ S. Sauerbier et al. //Tissue Engineering Part A. - 2011. - Vol. 17. - N. 17-18. - P. 2187-2197.

120. Schimming, R. Tissue-engineered bone for maxillary sinus augmentation/ R. Schimming, R. Schmelzeisen //Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. - 2004. -Vol. 62. - N. 6. - P. 724-729.

121. Schmelzeisen, R. Making bone II: maxillary sinus augmentation with mononuclear cells—case report with a new clinical method/ R. Schmelzeisen et al. //British Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. - 2011. - Vol. 49. - N. 6. - P. 480482.

122. Schmelzeisen, R. Making bone: implant insertion into tissue-engineered bone for maxillary sinus floor augmentation—a preliminary report / R. Schmelzeisen, R. Schimming, M. Sittinger //Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery. - 2003. - Vol. 31. -N. 1. - P. 34-39.

123. Shayesteh, Y.S. Sinus augmentation using human mesenchymal stem cells loaded into a P-tricalcium phosphate/hydroxyapatite scaffold/ Y.S. Shayesteh et al. //Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology, and Endodontology. -2008. - Vol. 106. - N. 2. - P. 203-209.

124. Sloan, A.J. Stem cells and the dental pulp: potential roles in dentine regeneration and repair/ A. J. Sloan, A. J. Smith //Oral diseases. - 2007. - Vol. 13. - N. 2. - P. 151-157.

125. Sloan, A.J. Dental pulp stem cells: what, where, how? / A.J. Sloan, R.J. Waddington //International Journal of Paediatric Dentistry. - 2009. - Vol. 19. - N. 1. -P. 61-70.

126. Smiler, D. Bone marrow aspiration: technique, grafts, and reports / D. Smiler, M. Soltan //Implant dentistry. - 2006. - Vol. 15. - N. 3. - P. 229-235.

127. Smiler, D. A histomorphogenic analysis of bone grafts augmented with adult stem cells / D. Smiler, M. Soltan, J.W. Lee //Implant Dentistry. - 2007. - Vol. 16. - N. 1. - P. 42-53.

128. Sonoyama,W. Characterization of the apical papilla and its residing stem cells from human immature permanent teeth: a pilot study/ W. Sonoyama et al. //Journal of endodontics. - 2008. - Vol. 34. - N. 2. - P. 166-171.

129. Takahashi, K. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors/ K. Takahashi et al. //cell. - 2007. - Vol. 131. - N. 5. - P. 861-872.

130. Ulloa-Montoya, F. Culture systems for pluripotent stem cells / F. Ulloa-Montoya, C.M. Verfaillie, W.S. Hu //Journal of bioscience and bioengineering. - 2005. - Vol. 100. - N. 1. - P. 12-27.

131. Volponi, A.A. Stem cell-based biological tooth repair and regeneration/ A.A. Volponi, Y. Pang, P.T. Sharpe //Trends in cell biology. - 2010. - Vol. 20. - N. 12. - P. 715-722.

132. Voog, J. Stem cells and the niche: a dynamic duo/ J. Voog, D.L. Jones //Cell stem cell. - 2010. - Vol. 6. - N. 2. - P. 103-115.

133. Wang, J. The odontogenic differentiation of human dental pulp stem cells on nanofibrous poly (L-lactic acid) scaffolds in vitro and in vivo/ J. Wang et al. //Acta biomaterialia. - 2010. - Vol. 6. - N. 10. - P. 3856-3863.

134. Wang, Y. Preliminary Study on Dental Pulp Stem Cell-mediated Pulp Regeneration in Canine Immature Permanent Teeth/ Y. Wang et al. //Journal of endodontics. - 2013. - Vol. 39. - N. 2. - P. 195-201.

135. Woods, E.J. et al. Optimized cryopreservation method for human dental pulp-derived stem cells and their tissues of origin for banking and clinical use / E.J. Woods et al. //Cryobiology. - 2009. - Vol. 59. - N. 2. - P. 150-157.

136. Yamada, Y. A novel approach to periodontal tissue regeneration with mesenchymal stem cells and platelet-rich plasma using tissue engineering technology:

A clinical case report / Y. Yamada et al. //International Journal of Periodontics & Restorative Dentistry. - 2006. - Vol. 26. - N. 4. - P.363-369.

137. Yamada, Y. Injectable tissue-engineered bone using autogenous bone marrow-derived stromal cells for maxillary sinus augmentation: clinical application report from a 2-6-year follow-up / Y. Yamada et al. //Tissue Engineering Part A. - 2008. - Vol. 14. - N. 10. - P. 1699-1707.

138. Yamada, Y. Translational research for injectable tissue-engineered bone regeneration using mesenchymal stem cells and platelet-rich plasma: from basic research to clinical case study/ Y. Yamada et al. //Cell transplantation. - 2004. - Vol. 13. - N. 4. - P. 343-355.

139. Yang, X. Mineralized tissue formation by BMP2-transfected pulp stem cells / X. Yang et al. //Journal of dental research. - 2009. - Vol. 88. - N. 11. - P. 1020-1025.

140.Yildirim, S. Dental pulp stem cells/ S. Yildirim. - Springer Science & Business Media, 2012. - 83p.

141.Young, C.S. Tissue-engineered hybrid tooth and bone / C.S. Young et al. //Tissue engineering. - 2005. - Vol. 11. - N. 9-10. - P. 1599-1610.

142.Yu, H. Distraction osteogenesis combined with tissue-engineered cartilage in the reconstruction of condylar osteochondral defect / H. Yu et al. //Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. - 2011. - Vol. 69. - N. 12. - P. e558-e564.

143. Zheng, L.W. Stem cells in dentistry / L.W. Zheng, L. K. Cheung //Stem cell and regenerative medicine. Bentham Science Publishers. - 2010. - P. 140-148.

144. Zhou, Y. Direct injection of autologous mesenchymal stromal cells improves myocardial function/ Y. Zhou et al. //Biochemical and biophysical research communications. - 2009. - Vol. 390. - N. 3. - P. 902-907.

145. Zhu, X. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration/ X. Zhu et al. //Journal of Endodontics. - 2012. - Vol. 38. - N. 12. -P. 1604-1609.

146. Zizelmann, C. Bone formation after sinus augmentation with engineered bone/ C. Zizelmann et al. //Clinical oral implants research. - 2007. - Vol. 18. - N. 1. - P. 6973.