Клеточные линии и растения-регенеранты как модель для изучения солеустойчивости тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Ларина, Светлана Николаевна

• Ларина, Светлана Николаевна
• кандидат биологических наук
• 1995

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ларина, Светлана Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Механизмы солеустойчивости.

2. Использование клеточной культуры для изучения солеустойчивости.

3. Получение солеустойчивых клеточных линий и растений регенерантов

4. Получение солеустойчивых растений-регенерантов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Характеристика исходной каллусной ткани и реакция на присутствие NaCl в среде

2. Получение солеустойчивых клеточных клонов.

3. Физиолого-биохимический анализ клонов.

4. Характеристика растений-регенерантов и их потомства

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клеточные линии и растения-регенеранты как модель для изучения солеустойчивости»

В результате исфкусйвенного орошения в возделываемых почвах возрастает содержание солей. Это делает их малопригодными для культивирования сельскохозяйственных растений,ограничивает естественные ареалы дикорастущих видов растений. В связи с этим актуальной задачей становится получение новых солеустойчивых форм растений. Эффективное получение таких солеустойчивых форм невозможно без глубокого знания физиологических и генетических процессов, лежащих в основе солеустойчивости.

Применение разнообразных физиологических,биохимических, генетических подходов в современных исследованиях выявило значительную сложность проблемы солеустойчивости.

Солеустойчивоеть растительного организма может обеспечиваться в результате самых разнообразных физиологических реакций, затрагивающих практически все метаболические процессы, происходящие в растительной клетке. По мнению современных исследователей солеустойчивоеть растений является полигенным признаком со сложной системой регуляции активности генов. Однако, "выделить" и локализовать эти отдельные гены в растениях пока не удалось.

Многосторонность проблемы солеустойчивости требует привлечения новых, перспективных подходов, направленных на ее решение. Одним из таких подходов может быть применение метода культивируемых клеток in vitro. Использование данного метода раскрывает широкие перспективы в изучении солеустойчивости.

Клеточная культура позволяет анализироватьфизиологические реакции происходящие на клеточном уровне вусловиях засоления. В условиях отсутствия координирующего и регулирующего влияния целого растительного организма более четко выявляются реакции собственно клетки. В культуре клеток in vitro эффективно анализируются цепи биохимических реакций и трансформации веществ. Выявление наиболее существенных физиологических реакций, связанных с солеустойчивостью, позволит использовать их в качестве маркерных для проведения тестирования и отбора солеустойчивых форм.

В результате разнообразных приемов селекции in vitro становится возможным получение различных культивируемых клеточных линий с заранее "заданными" характеристиками, в том числе, с конкретным изменением определенных метаболических процессов. Сомаклональная вариабельность in vitro позволяет выявить специфические варианты сочетания физиолого - биохимических реакций, связанных с солеустойчивостью, которые возможны только in vitro и не проявляются на уровне целого растения.

Свойство тотипотентности клеток растений позволяет получать растения-регенеранты из различных клеточных культур. Становится возможным получение растений-регенерантов сохраняющих признак солеустойчивости как на клеточном так и на организменном уровне. Изучение реализации и наследования данного признака межет ответить на вопросы, связанные с генетической основой солеустойчивости и влиянием эпигенетических факторов на проявление данного признака. Кроме того, получение солеустойчивых форм растений может иметь важное значение для создания новых сортов.

Т. о. методы культивирования in vitro занимают особое место в изучении проблемы солеустойчивости. Клеточнаякультура и получаемые из нее растения-регенеранты представляют собой модель для изучения физиологических основ солеустойчивости и ее реализации на клеточном уровне и на уровне целого растения.

Целью настоящего исследования было изучение модельной системы "клеточная культура in vitro и растения-регенеранты" применительно к проблеме солеустойчивости растений. Для ее решения были поставлены следующие задачи:- путем селекции in vitro получить клеточные клоны резистентные к действию высоких концентраций NaCl- провести оценку солеустойчивости полученных клонов- изучить физиолого-биохимические реакции полученных клонов и контрольной линии в условиях засоления и на пресном фоне- получить растения-регенеранты из солеустойчивой клеточной культуры- оценить солеустойчивость растений-регенерантов и их потомства- оценить возможность применил метода изоферментного анализа для тестирования солеустойчивости клеточных клонов и растений

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Ларина, Светлана Николаевна

- 98 -ВЫВОДЫ

1. Разработана схема двухступенчатой селекции in vitro на солеустойчивость.

2. Отбор устойчивых клеточных клонов проходил по двум показателям - рост и сохранение эмбриогенной способности в условиях засоления. Среди анализируемых клонов выделена уникальная клеточная линия, которая может длительно культивироваться в форме эмбриогенной суспензии.

3. Дана физиолого-биохимическая характеристика контрольного штамма и резистентных клеточных линий. Показано, что устойчивость к NaCl определяется разными факторами - повышенным внутриклеточным содержанием Na+, растворимых Сахаров, ряда аминокислот.

4. Установлено, что клеточные клоны обладают комплексным механизмом устойчивости, индивидуальным для каждого клона. Т. е. при использовании одного исходного клеточного материала и одиниковых условий клонирования изменения происходят случайно и независимо.

5. Из устойчивой к 1% NaCl клеточной линии получены со-леустойчивые растения-регенеранты. Показано сохранение признака солеустойчивости в первом и втором поколениях. Использование беккроссов позволило оценить доминантный характер наследования.

6. Сравнение изоферментных спектров эстераз и перокси-даз исходного штамма, клеточных клонов, растений-регенерантов в трех поколениях позволяет предложить этот метод для тестирования сомаклональной вариабельности.

- 96 -ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Культивируемые клетки и растения-регенеранты являются перспективной моделью для изучения солеустойчивости растений. Путем клеточной селекции получены солеустойчивые клеточные клоны с различными свойствами.

Применение физиолого-биохимических методов анализа выявило разнообразие реакций изучаемых клонов в ответ на воздействие одинаковых стрессовых условий. Каждый клон проявлял "индивидуальную" реакцию по изменению интенсивности роста, эмбриогенной способности, аминокислотного метаболизма, содержанию ионов, Сахаров, изоферментному спектру. Что позволяет сделать предположение о сочетании различных механизмов и метаболических путей в реализации солеустойчивости каждого клона. В то же время, большинство выявляемых реакций, в той или иной мере присущих каждому клону, характерны и для других объектов. К таким реакциям относится повышение содержания пролина, возрастание концентрации ионов Na в клетках каллусной ткани.

Проведение клеточной селекции в два этапа позволило получить солеустойчивые клеточные клоны, сохраняющие свойство эмбриогенности. В ходе отбора весьма существенное значение в оценке солеустойчивости наряду с ростовой характеристикой имеет показатель эмбриогенной способности каллусной ткани. Выявленное соответствие между высокой эмбриогенной способностью клона А 188 и его наибольшей солеустойчивостью, позволяет предположить, что эффективный отбор резистентных форм в исходно эмбриогененой клеточной линии затруднен без учета сохранения признака эмбриогенности ткани.

- 97

Получение растений-регенерантов кукурузы из солеустойчивых клеточных линий позволили оценить возможность реализации признака солеустойчивости клеток на уровне целого организма. Растения-регенеранты и их потомство, а так же гибриды, полученные в результате возвратного скрещивания с исходной несолеустойчивой линией проявляли признак солеустойчивости при тестировании в различных условиях. Солеустойчивость наследовалась как доминантный ядерный признак.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ларина, Светлана Николаевна, 1995 год

1. Бабурина О. К Возможная защитная роль бетаинов у растений люцерны (Месиса^о) в условиях засоления ИаС1: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М.: ИФР РАН, 1990. С. 25.

2. Балнокин Ю. В. , Мазель Ю. Я Проницаемость плазматической мембраны галофильных водорослей БипаПеПа для ионов Иа+. Физиол. Раст. , 1985, т. 32, вып. 1. С. 33. 3. Балнокин

3. Ю. В. , Строгонов Б. П. Значение солевого обменав солеустойчивости растений. Ташкент, изд-во "ФАН" УзССР, 1989, С. 3.

4. Белянская С. Л., Шамина 3. Б. Получение и характеристика клонов риса, резистентных к стрессовым факторам. Физиол. Раст. , 1993, т. 40, N4. С. 681.

5. Белянская С. Л , Шамина 3. Б. Морфогенез в клонах риса, резистентных к стрессовым факторам. Физиол. Раст. , 1994, т. 41, N4. С. 681.

6. Бородина Р. А. Свободный пролин и солеустойчивость озимого рапса. Физиол. и биохим. основы солеуст. растений. Тез. докл. , 1986, С. 60.

7. Ву Дык Куанг, Шамина 3. Б. Цитгенетический анализ клонов, полученных от индивидуальных клеток и протопластов кукурузы. Цитология и генетика, 1985, т. 19, N1. С. 26.

8. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. Т. 1. Под ред. Кретовича В. Л , М. , "Мир", 1986. С. 364.

9. Глазко В. И. , Созинов И. А. Генетика изоферментов животных и растений. Киев, "Урожай", 1993. 525 с.

10. Долгих Ю. И. , Ларина С. Е , Шамина 3. Б. Селекция на осмо- 100 устойчивость кукурузы in vitro и характеристика растений-ре-генерантов. Физиол. Раст. , 1994, т. 41, N1. С. 114.

11. Дридзе И. JL Использование аналога пролина для отбора стрессоустойчивых вариантов в культуре тканей сои и табака. Автореферат . канд. биол. наук. М. , ВНИИСБ, 1990. 24 с.

12. Завадская Е Г. , Шухтина Г. Г. Влияние комбинированного действия обезвоживания и супероптимальных температур на теплоустойчивость клеток листьев засухоустойчивого ячменя. Цитология, 1971, т. 13, N10. С. 1304.

13. Захарин А. А. О некоторых особенностях солевого обмена гликофитов при засолении среды. Агрохимия, 1980, N8. С. 139.

14. Калинкина JL Г. Накопление пролина и растворимых Сахаров у микроводорослей при длительном солевом стрессе. Физиол. и биохим. основы солеуст. растений. Тез. докл. , 1986, С. 57.

15. Калинкина JL Г. , Наумова Т. Г. Роль фотодыхания в накоплении пролина в клетках Chlorella stigmtophora при засолении. Физиол. Раст. , 1993, т. 40, N4. С. 577.

16. Кирьян И. Г. , Шевякова Е И. Пути накопления пролина у NaCl-резистентной клеточной линии Nicotiana sylvestris. Физиол. Раст., 1984, т. 31, N4. С. 712.

17. Клячко Е JL , Кулаева 0. Е Теплоустойчивость белковогфинтеза у листьев разного возраста. ДАН СССР, 1969, т. 188, N1. С.230.

18. Колупаев Ю. Е. , Трунова Т. И. Активность инвертазы и содержание углеводов в колеоптилях пшеницы при гипотермическом и солевом стрессах. Физиол. Раст. , 1994, т. 41, N4. С. 552.

19. Кузнецов Вл. В., Рошупкин Б. В. Стрессорный ответ клеток Nicotiana sylvestris на засоление и высокую температуру. 2. Синтез белков теплового шока и фосфорилирование полипептидов.

20. Физиол. Раст. , 1994, т. 41, N4, С. 566.

21. Кузнецов Вл. В. , Хыдыров Б. В. , Рошупкин Б. В. , Борисова Е Е Общие системы устойчивости хлопчатника к засолению и высокой температуре: факты и гипотезы. Физиол. Раст. , 1990, т. 37, вып. 5. С. 987.

22. Куркова Е. Б. , Балнокин Ю. В. Пиноцитоз и его возможная роль в транспорте ионов в клетках соленакапливающих органов галофитов. Физиол. Раст., 19946 т. 41, N4. С. 578.

23. Кучеренко JL А. Подходы к разработке технологии массовой регенерации растений in vitro. Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. Под ред. Бутенко. М. , "Наука", 1991. С. 232.

24. Кучеренко JL А. , Харченко П. Е , Ковалева Е. Е Использование методов биотехнологии в селекции риса. Состояние и развитие с. х. биотехнологии. Матер. Всесоюз. конф. , М. , июнь 1986. С. 92.

25. Лапина JL Е , Строгонов Б. П. Локализация солей в клетках в связи с приспособлением растений к условиям засоления. Успехи совр. биол. , 1979, т. 88, вып. 1. С. 93.

26. Люттге У., Хигинботам Е Передвижение веществ в растениях. М.: Колос, 1984. С. 408.

27. Маурер Т. Диск-электрофорез. Теория и практика электрофореза в полиакриламидном геле. М., "Мир", 1971.

28. Ошмарина В. И. , Шамина 3. Б. , Бутенко Р. Г. Получение резистентных к NaCl и этионину клеточных линий Nicotiana sylvestris и их характеристика. Генетика, 1983, т. 19, N5. С. 822.

29. Полевой В. В., Саламатова Т. С. Протонные насосы и их функциональная роль. Итоги науки и техн., Физиология расте- 102 ний. M. ВИНИТИ, 1980. 230 с.

30. Самыгин Г. А. Причины вымерзания растений. М. , Наука, 1971. С. 192.

31. Семихатова 0. А. , Иванова Т. И. , Щцина 0. С. Дыхательная цена произрастания в условиях засоления. Физиол. Раст. , 1994, т. 40, N4. 0. 558.

32. Сидоров В. А. Биотехнология растений. Клеточная селекция. Киев, "Наукова думка", 1990. 280 с.

33. Собко В. Г. , Шамина 3. Б. , Строгонов Б. П. Получение адаптированной к NaCl клеточной линии Crépis capillaris. Физиол. Раст. , 1981, т. 28, вып. 6. С. 1198-1203.

34. Строгонов Б. П. Физиологические основы солеустойчивости растений. М. Изд-во АН СССР, 1962. 366 с.

35. Строгонов Б. П. Солеустойчивость растений. Физиология сельскохозяйственных растений. М. Изд-во Моск. ун-та, 1967, т. 3. С. 270.

36. Строгонов Б. П. Метаболизм растений в условиях засоления. XXXIII Тимирязевские чтения. М. Наука, 1973. 52 с.

37. Удовенко Г. В. Солеустойчивость культурных растений. Л "Колос", 1977. 215 с.

38. Удовенко Г. В. Состояние и пути решения проблемы солеустойчивости растений. М., изд-во ВНИИТЭИСХ, 1978. 41 с.

39. Удовенко Г. В. Механозмы адаптации растений к засолению почвы: физиологические и генетические аспекты солеустойчивости. Проблемы солеустойчивости растений. Ташкент, "ФАН"1. УзССР, 1989. С. 113.

40. Хочачка П. , Сомеро Дж. Стратегия ббиохимической адаптации. Е: Мир, 1977. С. 124.

41. Чернышева В. Г. , Долгих Ю. И., Шамина 3. Б. , Бутенко Р. Г.- 103

42. Влияние генетических характеристик исходных растений на мор-фогенный потенциал каллусных клеток кукурузы. Докл. АН СССР, 1988, т. 300, N1. С. 227.

43. Шевякова Е И. Метаболизм серы в растениях. М. , "Наука", 1979. 186 с.

44. Шевякова Е И. Метаболическая роль ди- и полиаминов в растениях. Физиол. Раст. , 1981, т. 28, N6. С. 1052.

45. Шевякова Е И. Состояние и новые подходы к решению проблемы солеустойчивости растений. Физиол. и биохим. основы со-леуст. растений. , тез. докл. , 1986. С. 54.

46. Шевякова Е И. Хроника. Международная: конференция по полиаминам в естественных науках. Физиол. Раст. , 1987, т. 34, N3. С.

47. Шевякова Е И. Состояние и новые подходы к решению проблемы солеустойчивости растений. Проблемы солеустойчивости растений. Ташкент, изд-во "ФАН" УзССР, 1989. С. 95.

48. Шевякова Е И. , Кирьян И. Г. , Строгонов Б. П. Повышенная скорость образования спермидина у NaCl-резиетентной клеточной линии Nicotiana sylvestris. Физиол. Раст. , 1984, т. 31, вып. 5. С. 810.

49. Шевякова Е И. , Рощупкин Б. В. , Парамонова Е В. , Кузнецов Вл. В. Стресеорный ответ клеток Nicotiana sylvestris на засоление и высокую температуру. Аккумуляция пролина, полиаминов, бетаинов и Сахаров. Физиол. Раст., 1994, т. 41, N4. С. 558.

50. Abel G. Н. Inheritance of the capacity for chloride inclusion and chloride exclusion by soybeans. Crop Sei. , 1969, v. 9, N6. P. 697.

51. Anil D. , Noel E. Т. H. Deleted forms of plastid DNA inalbino plants from cereal anther culture. Curr. Genet. 1985, v. 9, N8. P. 671.

52. Ashraf M. The effect of NaCl on water relation, chlorophyl and proline contents of two cultivars of blackgram (Vigna mungo L.). Plant Soil, 1989, v. 119. P. 205.

53. Ashraf M. Organic substances responsible for salt tolerance in Eruca sativa. Biol. Plant., 1994, v. 91, N1. P. 255.

54. Austenfeld F. A. The effect of various alkaline salts on glycolate oxidase of Salicornia europaea and Pisum sativum in vitro. Physiol. Plant. ,1976, v. 36, N1. P. 82.

55. Bayliss M. H. Chromosomal variation in plant tissues in culture. Int. Rev. Cytol. , 1980, v. 11a, suppl. P. 113.

56. Ben-Hayyim G. , Kochba J. Aspects of salt tolerance in NaCl-selected stable cell line of Citrus sinensis. Plant Physiol. , 1983, v. 72. P. 685

57. Benzioni A. , Itai Ch. Preconditioning of tobacco and bean leaves to heat shock by high temperature or NaCl. Plant Physiol., 1975, v. 35, N2. P. 80.

58. Bernstein L. Osmotic adjastment of plants to saline media 2. Dinamic phase. Amer. J. Bot. , 1963, v. 50. P. 360.

59. Bernstein L. , Ayers A. D. Salt tolerance of five varietes of carrot. Proc. Am. Soc. Hortic. Sci. , 1953, v. 61. P. 360.

60. Billard J. B. , Boucard J. Effect of NaCl on te activities of glutamate syntase from a halophyte Suaeda maritima and from glycophyte Phaseolus vulgaris. Phytochemistry, 1980, v.19, N9. P. 1939.

61. Binzel M. L. , Hasegawa P.M., Rhodes D. Solute

62. Physiol. , 1987, v. 84. P. 1408.

63. Binzel M. L. , Hess F. D. , Bressan R. A. , Hasegawa P. № Intracellular compartmentation of ions in salt adapted tobacco cells. Plant Physiol., 1988, v. 86. P. 607.

64. Blumwald E. , Tel-Or E. Osmoregulation and cell composition in salt adaptation of Nostoc muscorum. Arc. Microbiol. , 1982, v. 132, N2. P. 168.

65. Borkird C. , Sung R. Z. Isolation and characterization of ABA-insensitive cell lines of carrot. Plant Physiol. , 1987, v. 84. P. 1001.

66. Boucard J. , Billard J. B. Characterization de la glutamate chez un halophyte obligatore: le Suaeda maritima var. microcarpa. Physiol. Plant. , 1978, v. 44, N1. P. 31.

67. Bressan R. A. , Singh N. K. , Handa A., K. Resistance of cultured higher plant cell to polyethyleneglycol-induced water stress. Plant Sci. Lett., 1981, v. 21. P. 23.

68. Bressan R. A., Singh N. K. , Handa A., K. et al. Stability of altered genetic expression in cultured plant cells adapted to salt. Drought Resistance in Plants. Physiological and Genetic Aspects. 1987. Eds.: L. Monti, Porceddu E. , Brussels: EEC. P. 41.

69. Brettel R. I. S. , Pallotta M. A. , Gustafson J. P. , Appels R. Variation at the Nor loci in Triticale derived from tissue culture. Theor. and Appl. Genet., 1984, v. 71, N4. P. 637.- 106

70. Briens M. , Larher F. Osmoregulation in halophytic higher plants: a comparative study of soluble carbohydrates, polyols, betaines and free proline. Plant Cell Environ., 1982, v. 5. P. 287.

71. Bright S. V. J. , Shwery P. R. Improvement of protein quality in cereals. Critical Reviewes in Plant Sciences. Boca Raton (Fl.): CRC Press, 1983, V. 1. P. 49.

72. Brugge man V. , Janiesh P. Comparison of plasma membrane ATP-ase from salt-treated and salt-free grown Plantago maritima L. J. Plant Physiol. , 1988, v. 134, N1. P. 26.

73. Chandler S. F. , Thorpe T. A. Characterization of growth, water relation and proline accumulation in sodium sulfate tolerant callus of Brassica napus L. cv. Westar. Plant Physiol. , 1987, v. 84. P. 106.

74. Cheesemann J. M. Mechanisms of salinity tolerance in plants. Plant Physiol. , 1988, v. 87, N3. P. 547.

75. Conti G. J. , Bocci A.M., Sprocati № T. Peroxidase and polyphenoloxydase isoenzymes, hypersensitive reaction and systemic induced reaction in Nicotiana glutinosa L. infected with tobacco mosaic virus. Rev. Patol. Veg. , 1982, v. 13, N1. P. 1.

76. Cooper D. B. , Sears R. G. , Lookhart G. L. , Jones B. L. Heritable somaclonal variation in gliadin proteins of wheat plants derived from immature embryo callus culture. Theor. and Appl. Genet., 1986, v. 71, N6. P. 784.

77. Crougham T. P. , Stavarek S. J. , Rains D. W. Selection of NaCl-tolerant line of cultured alfalfa cells. Crop Sci., 1978, v. 18. P. 959.

78. Curtiss C. D. , Widholm J. M. , Gonzales R. A. Selection and characterization of methionine and tryptophane analog resistant asparagus cells. J. Plant Physiol. , 1987, v. 130, N213. P. 125.

79. Daines R. J. , Gould A. R. The cellular basis of salt tolerance studied with tissue cultures of the halophytic grass Distichlis spicata. Plant Physiol. , 1985, v. 119, N3. P. 269.

80. Das N. , Misra M. , Misra A. N. Sodium chloride salt stress indused metabolic changes in callus culture of pearl millet (Pennisetum americanum L. Leche): free solute accumulation. J. Plant Physiol. , 1990, v. 137, N2. P. 244.

81. DixP. J. Chilling resistance is not transmitted sexually in plant regenerated from Nicotiana sylvestris cell lines. Z. Pflanzenphysiol. , 1977, v. 84. P. 223.

82. DixP. J. Cell line selection. Plant Cell Culture Technology. Oxford, London; Blackwell Sci.Publ. , 1986. P. 143.

83. Dix P.J. , Joo F. , Maliga P. A cell line of Nicotiana sylvestris with resistance to kanamicin and streptomycin. Molec. and Gen. Genet. , 1977, v. 157. P. 285.

84. DixP. J., Pearce R. S. Proline accumulation in NaCl-resistant and sensitive cell lines of Nicotiana sylvestris. Z. Pflanzenphysiol., 1981, v. 102. P. 243.- 108

85. Dix P. J., Street H. E. Sodium chloride resistant cultured cell lines from Nicotiana sylvestris and Capsicum annuum. Plant Sci. Lett., 1975, v. 5. P. 231-237.

86. Dubois M. , Gilles K. A., Hamilton I.K. , Rebers P. A. , Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Analyt. Chen , 1956, v. 28, N2. P. 350.

87. Duran M. , Lakan D. Sodium prtitioning within the shoot of soybean. Biol. Plant., 1994, v. 91, N1. P. 65.

88. Eberhardt H.-J. , Wegmann K. Effect of abscisic acid and proline on adaptation of tobacco callus cultures to salinity and osmotic shock. Physiol. Plant., 1989, v. 76. P. 283.

89. Edwards D. , Reel R. , Foster R. , Stewart W. Organic solute accumulation in osmotucally stressed Enteromorpha intestinal is. Mar. Biol., 1987, v. 95, N4., P. 583.

90. Ehrey D. , Ho L. The effect of salinity on dry matter partitioning and fruit growth in tomatoes grown in nutrient film culture. J. Hort. Sci., 1986, v. 61. P. 361.

91. Epstein E. Responses of plants to saline environments. In: Genetic engineering of osmoregulation. Eds: Rains D. W. , Valentine R. C. , Polyakoff-Mayber A. Plenum Press. New York, 1980. P. 7.

92. Erdei L. , Kuiper P. G. C. Substrate dependent modulation of ATP-ase activity by Na+ and K+ in roots of piantago species. Physiol. Plant., 1980, v. 49, N1. P. 71

93. Erdei L. ,Trivedi S. , Takeda K. , Matsumoto H. Effect of osmotic and salt stress on the accumulation of polyamines in leaf segments from wheat variétés differing in salt and drought tolerance. J. Plant Physiol. , 1990, v. 137, N2. P.

94. Evans D. A., Sharp W. R. , Medina-Filho H. R. Somaclonal and gametoclonal variation. Am. J. Bot. , 1984, v. 71. P. 759.

95. Flowers T.J. Physiology of halophytes. Plant Soil, 1985, v. 89. P. 41.

96. Flowers T. J., Troke P. F. , Yeo A. R. The mechanisms of salt tolerance in halophytes. Ann. Rev. Plant Physiol. ,1977, v. 28. P. 89.

97. Flowers T. J. , Yeo A. R. Ion relation of plants under drought and salinity. Australian J. Plant Physiol. , 1986, v.13. P. 75.

98. Friedman R. , Altman A. , Levin N. The effect of salt stress on polyamine biosynthesis and content in mung bean plants and in halophytes. Physiol. Plant. , 1989, v. 76. P. 295.

99. Galiba G. , Erdei L. , Sarcadi L. , Salgo A. , Kocsy G. Genotype dependent responses of wheat varietes to water and salt stresses in vitro. Abst. VII th Intern. Congress Plant Tissue and Cell Cult. , Amsterdam. 1990. P. 561.

100. Gettys K. L. , Hancock Y. F. , Cavalieri A.J. Salt tolerance of in vitro activity of leucine aminopeptidase, peroxidase and malate dehydrogenase in halophytes Spartina alterniflora and S. patents. Bot. Gas., 1980,v. 141, N4. P. 453.

101. Gibbs J. , Draucup M. , Greenway H. , McComb J. A. Effect of high NaCl on growth, turgor and internal solutes of tobacco callus. J. Plant Physiol., 1989, v. 134, N1. P. 61.

102. Gonzales R. A. , Das P. K. , Widholm J. M. Characterization of cultured tobacco cell lines resistant to ethionine, a methionine analog. Plant Physiol., 1984, v. 74. P. 640.- 110

103. Godoy J. A. , Padro J. M. , Pintor-Toro J. A. A tomato c-DNA inducible de salt stress and abscisic acid: nucleotide sequence and expression pattern. Plant Mol. Biol. ,1990, v. 15, N5, pp. 695-700.

104. Gorham J. , Bristol A. , Young E. M. , Jones R. G. W. The presence of the enhanced K/Na discrimination trait in diploid Triticum species. Theor. Appl. Genet. ,1991, v. 82, N6, pp. 729-736.

105. Green C. E. , Phillips R. Plant regeneration from tissue culture of maize. Crop Sci. , 1975, v. 15. P. 417.

106. Green C. E. , Rhodes C. A. Plant regeneration in tussue culture of maize. Eds: V. Sheridan, Maize for biological research. Un. Press, Grand Forks, ND, 1982. P. 367.

107. Greenway H. , Gunn A. , Pitman N. , Thomas D. A. Plant responce to saline substrates. VI. Chloride, sodium, and potassium uptake and distribution within the plant during ontogenesis of Hordeum vulgare. Aust. J. Biol. Sci. , 1965, v. 18. P. 525.

108. Greenway H. , Munns R. Mechanisms of salt tolerance in nonhalopytes. Annu. Rev. Plant Physiol. ,1980, v. 31. P. 417.

109. Hale H. B. Cross adaptation. Environ. Res., 1969, v. 2, v. 2, N2. P. 324.

110. Hansen C. E. , Meins F.J. Evidence for a cellular gene with potential oncogenic activity in plants. PNAS USA. , 1986, v. 83. P. 2492.

111. Harms C.T. , Oertly J.J. The use of osmotically adapted cell cultures to study salt tolerance in vitro. Plant Physiol. , 1985, v. 120. P. 29.

112. Hasegawa P. M. , Bressan R. A. , Handa A. K. Growth- Ill characteristics of NaCl-selecte4d and nonselected cells of Nicotiana tabacum L. Plant and Cell Physiol., 1980, v. 21, N8. P. 1347-1355.

113. Hasegawa P. M. , Bressan R. A. , Handa A. K. Cellular machanisms of salinity tolerance. Hort. Sci. , 1986, v. 21, N6. P. 1317.

114. Heisher J. W. , Nabors M. W. Osmotic ajustment of cultured tobacco cells grown on sodium chloride. Plant Physiol., 1981, v. 67. P. 720.

115. Hibberd K. A. , Green C. E. Inheritance and expression of lysine plus threonine resistance selected in maize tissue culture. PNAS USA, 1982, v. 79. P. 559.

116. Hibberd K. A., Walter T. , Green C. E. , Gengenback B. G. Selection and characterization of a feedback-insensitive tissue culture of maize. Planta, 1980, v. 148. P. 183.

117. Hughes K. Selection for herbicide resistance. Handbook of Plant Cell Culture. Techniques for propagation and Breeding. New York, London: Macmillan, 1983, v. 1. P. 442.

118. Hurkman W. J. , Tanaka C. K. The effect of salt on the pattern of protein synthesis in barley roots. Plant Physiol. , 1986, v. 83. P. 517.

119. Jones W. , Storey R. Salt stress and comparative physiology in the Gramineae. II. Glycinebetaine and proline accumulation in two salt- and waterstressed barley cultivars. Aust. J. Plant Physiol., 1978, v. 5. P. 817.

120. Kalir A. , Poliakoff-Mayber A. Effect of salinity on respiratory pathways in root tips of Tamarix Tetragyna. Plant Physiol. , 1976, v. 57, N2. P. 167.

121. Kamo K. K. , Becwar M.R. , Hodges T. K. Regeneration of Zeamays L. from embryogenic callus. Bot. Gas., 1985, v. 146, N3. P. 327.

122. Kirti P. B. , Hadi S. , Kumar P. A. , Choprav Z. Production of sodium chloride-tolerant Brassica Juncea plants by in vitro selection at the somatic embryo level. Theor. Appl. Genet. ,1991, v. 83, N2. P. 233.

123. Kochba J. , Ben-Hayyim G. , Spiegel-Roy P. et al. Selection of stable salt tolerant callus cell lines and embryos in Citrus sinensis and C. aurantium. Z. Pflanzenphysiol. , 1982, v. 106. P. 111.

124. Koyro H. -W. , Stelzer R. Ion concentration in the cytoplasm and vacuoles of rhisodermis cells from NaCl treated Sorghum, Spartina and Puccinellia plants. J. Plant Physiol. , 1988, v. 133, N4. P. 441.

125. Koster K. L. , Lynch D. V. Solute accumulation and compartmentation during eld acclimation of Puma Rye. Plant Physiol. , 1992, v. 98, N1. P. 108.

126. Lark in P. J. , Ryan S. A. , Brettel R. I.S. , Scowcroft W. R. Heritable somaclonal variation in wheat. Theor. and Appl. Genet. , 1984, V. 67, N5. P. 443.

127. Lark in P. J. , Scowcroft W. R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell cultures for plant improvement. Theor. and Appl. Genet., 1981, v. 60, N4. P. 197.127. La Rosa P. C. et al.

128. Abscisic acid stumulated osmotic ajustment and its involvement in adaptation of tobacco cells to NaCl. Plant Physiol., 1987, v. 85. P. 174.

129. La Rosa P. C. , Singh N. K. , Hasegawa P. M. , Bressan R. A. Stable NaCl tolerance of tobacco cells is associated with- 113 enhanced accumulation of osmotin. Plant Physiol., 1989, v. 91, N3. P. 855.

130. Laughli A. Salt exclusion: on adaptation of legumes for crops and pastures under saline conditions. Salinity tolerance in plants. Eds: Staples R. S. , Toennienssen G. H. , 1984. P. 171.

131. Le Rudulier D. , Strom A. R. , Dandekar A.M. et al. Molecular biology of osmoregulation. Science, 1984, v. 224, N 4553. P. 1064.

132. Levitt J. Responses of plants to envirinmental stress. Chilling, freezing and temperature stresses. N. Y.: Acad. Press, 1980, v. 1. P. 497.

133. Lupotto E. , Locatelly F. , Lusardi M. C. In vitro selection for salt tolerance in maize. Biotechn. in Agricult. and Forestry. Maize. Ed.: Bajaj, Springer-Verlag, 1994. P.

134. Matsumoto T. , Ikeda T. , Kanno L. et al. Selection of high ubiquinone-10 producing of tobacco cultured cells by cell cloning technique. Agr. and Biol. Chem. , 1980, v. 44. P. 967.

135. Maliga P. , Breznovits S. A. , Marton L. Streptomycin-resistant plants from callus culture of haploid tobacco. Nature, 1973, v. 244. P. 29.

136. McCoy T. J. , Phillips R. L. , Rines H. V. Cytogenetic analysis of plant regenerated from oat (Avena sativa) tissue cultures; High frequency of partial chromosome loss. Can. J. Genet, and Cytol. ,1982 v. 24. P. 37.

137. McCoy T.J. Characterization of alfalfa (Medicago sativa L.) plants regenerated from selected NaCl tolerant cell lines. Plant Cell Reports, 1987, v. 6. P. 417.

138. McHughen A. A salt tolerance through increased vigor in flax line (STS-II) selected for salt tolerance in vitro. Theor and Appl. Genet. , 1987, v. 74, N6. P. 727.

139. McHughen A. , Swartz M. A tissue culture derived salt tolerant line of flax (Linum ussitatissimum). J. Plant Physiol. , 1984, v. 117. P. 109.

140. Mittal R. , Dubey R. S. Behavior of peroxidases of rice: changes in enzyme activity and isoforms in relation to salt tolerance. Plant Physiol, and Biochem. , 1991, v. 29, N1. P.31.

141. Munns R. Physyological processes limiting plan growth in saline soils some dogmas and hypothesis. Plant Cell Environ. , 1993, v. 16, pp. 15-24.

142. Murasige T., Nakano R. Tissue culture as potential tool in obtaining poliploid plants. J. Hered. ,1966, v. 57. P. 114.

143. Nabors M. W. , Gibbs S. E. , Bernstein S. , Meis EE. NaCl-tolerant tobacco plants from cultured cells. Z. Pflanzenphysiol. , 1980, v. 97, P. 13.

144. Novak F. J. Phenotype and cytological status of plants regenerated from callus cultures of Allium sativum L. Z. Pflanzenzucht. , 1980, v. 84. P. 250.

145. Pesci P. Ion fluxes and abscisic acid-indused proline accumulation in barley ladf segments. Plant Physiol. , 1988, v. 86. P. 927.

146. Polyakoff-Maiber A. Biochemical and physiological responses of higher plant to salinity stress. Biosaline research. Eds.: A. Hollander. 1982. P. 145.

147. Ramagopal S. Differential mRNA transcription during salinity stress in barley. PNAS USA, 1987, v. 84. P. 94.- 115

148. Ramagopal S. Salinity stress induced tissue-specific proteins in barley seedlings. Plant Physiol. , 1987, v. 84. P. 324.

149. Ramagopal S. Protein synthesis in maize callus exposed to NaCl and mannitol. Plant Cell Rep., 1986, v. 5. P. 430.

150. Reddy P. J. , Vaidyanath K. In vitro characterization of salt stress effects and the selection of salt tolerant plants in rice (Oryza sativa L.). Theor. and Appl. Genet. , 1986, v. 71, N5. P. 757-760.

151. Reisch B. , Bingham E. T. Plants from ethionine resistant alfalfa tissue cultures: variation in growth and morphological characteristics. Crop Sci. , 1981, v. 21. P. 783.

152. Riccardi G. , Cella R. , Camerino G. , Ciferri 0. Resistance to azetidine-2-carbixylic acid and sodifcim chloride tolerance in carrot cell cultures and Spirullina platensis. Plant and Cell Physiol., 1983, v. 24. P. 784.

153. Robinson S. R. , Downtown W. J. S, Millhouse J. A. Photosynthesis and ion content of leaves and isolated chloroplasts of salt-stressed spinach. Plant Physiol. , 1983, v. 73. P. 238.

154. Rosema J. , Gude H. , Bijl F. , Wesselmann H. Sodium concentration in xylem sap in relation to ion exclusion, accumulation and secretion in halophytes. Acta Bot. Neerl. , 1981, v. 30. P. 309.

155. Rus-Alvarez, Guerrier G. Proline metabolic pathways in calli from Lycopersicon esculentum and Lycopersicon pennellii under salt stress. Biologia plantarum, 1994, v. 36, N2. P. 277.

156. Sabbah S. , Tal M. Development of callus and suspension cultures of potato resistant to NaCl and mannitol and theirresponce to stress. Plant Cell Tissue and Organ Culture, 1990, v. 21, N2. P. 119.

157. Salgado-Garsiglia R. , Lopez-Gutierres F. , Ochoa-Alejo N. Nacl-resistant variant cells isolated from sweet potato cells. Plant Cell Tissue and Organ Culture, 1985, v. 5. P. 3-12.

158. Secor G. A. , Shepard J. F. Variability of protoplast derived potato clones. Crop. Sci. , 1981, v. 21. P. 102.

159. Shannon M. C. Breeding, selection and the genetics of salt tolerance in plants. Eds: Staples R. S. , Toennienssen G. H. , 1984. P. 231.

160. Shevyakova N. I. , Strogonov B. P. , Kiryan I. G. Metabolism of poliamines in NaCl-resistant cell lines from Nicotiana sylvestris. Plant Growth Regulation, 1985, v. 3. P. 365.

161. SingerS. R. , McDaniel C.N. Selection of glyphosate tolerant tobacco calli and the expression of this tolerance in regenerated plants. Plant Physiol., 1985, v. 78, N2. P. 411.

162. Singh N. K. , Handa A. K. , Hasegawa P. M. , Bressan R. A. Proteins associated with adaptation of cultured tobacco cells to NaCl. Plant Physiol. , 1985, v. 79, N1. P. 126.

163. Singh N. K. , Nelson D. E. , Kuhn D. et al. Molecular cloning of osmotin and regulation of its expression by ABA and adaptation to low water potentials. Plant Physiol. , 1989, v. 90. P. 1096.

164. Singh M. , Singh B. B. , Ram P. C. Effect of iso-osmotic- 117 levels of salts and PEG-6000 on Saccharides, free proline and nitrogen content during early seedling growth of pea (Pisum sativum L.). Biologia plant. , 1990, v. 32, N3. P. 232.

165. Singh N. K. , Nelson D. E. , La Rosa P. C. et al. Osmotin: A protein associated with osmotic stress adaptation in plant cells. Environ. Stress Plants: Biochem. and Physiol. Mech. Proc. NATO Adv. Res. Workshop, Berlin, 1987. P. 67.

166. Smith R. H. , Bhaskaran S. , Miller F. R. Screening for drought tolerance in sorgum using cell culture. In vitro Cell and Dev. Biol., 1985, v. 21, N10. P. 541.

167. SreeR. K. , Dijakhuis P. , Cate Ch. , Hanisch Ten, Groot B. D. Pattern of DNA and chromosome variation during in vitro growth in various genotypes of potato. Plant Sci. , 1985, v. 41, N1. P. 69.

168. Sree Ramulu K. , Dijakhuis P., Roest S. Genetic instability in protoclones of potato (Solanum tuberosum L. cv. "Bintje"): new types of variation after vegetative propagation. Theor. and Appl. Genet. ,1984, v. 68, N6. P. 515.

169. Stewart C. R. , Lee J. A. The role of proline accumulation in halophytes. Planta, 1974, v. 120. P. 279.

170. Storey R. , Jones R. G. V. Betaine and choline levels in plants and their relationship to sodium chloride stress. Plant. Sci. Lett. , 1975, v. 4. P. 161.

171. Sung Z. R. , Smith R. , Horowitz J. Quantitative studies of embriogenesis in normal and 5-methyltriptophan resistant cell lines of wild carrot. Planta, 1979, v. 147. P. 236.

172. Swaaij A. C. , Jacobsen E. , Keil J. A. , Feenstra W.J. Selection, characterization and regeneration of hvdroxyproline-resistant cell ines of Solanum tuberosum:- 118 tolerance to NaCl and freezing stress. Physiol. Plant. , 1986, v. 68. P. 359.

173. Sze H. H+ translocating ATP-ases of the plasma membrane and tonoplast of plant cells. Physiol. Plant. , 1984, v. 61, N14. P. 4376.

174. Tam V. H. J. , Constabel F. , Kurz V. G. V. Codeine from cell suspension culture of Papaver somniferurn. Phytochemistry, 1980, v. 19. P. 486.

175. Tal M. Physiological genetics of salt resistance in higher plants studied in the level of the whole plant and isolated organs, tissues and cells. Salinity tilerance in plants. Eds: Staples R. S. , Toennienssen G. H. , 1984. P. 321.

176. Thomas B. P. , Pratt D. Isolation of paraquat tolerant mutants from tomato cell cultures. Theor. and Appl. Genet. , 1982, v. 63. P. 169.

177. Treichel S. , Hettfleisch H. , Eilhardt S. et al. A possible induction of CAM by NaCl-stress in heterotrophic cell suspension cultures of Mesembryanthemum crystallinum. J. Plant Physiol. , 1988, v. 133, N4. P. 419.

178. Tyagi A. K. , Rashid A., Maheshwari S. C. Sodium chloride resistant cell line from haploid Datura innoxia Mill. A resistance trait carried from cells to plantlet and vise versa in vitro.

179. Vanlerberghe G. C. , Brown L. M. Inhibition of celldivision by proline analogues: reversal by proline and high salinity. Plant Physiol., 1986, v. 123. P. 229.

180. Voetberg G. , Stewart C. R. Stedy-state proline levels in salt-shocked barley leaves. Plant Physiol. , 1984, v. 76. P. 567.

181. Vunsh R. , Aviv D. , Galun E. Valine resistant plants derived from mutated haploid and diploid protoplasts of Nicotiana sylvestris and N. tabacum. Theor. and Appl. Genet. , 1982, v. 64. P. 51.

182. Wakasa K. , Widholm J. M. 5-methyltryptophane resistant rice mutant selected in tissue culture. Abst. 6th Int. Congr. of Plant Tissue and Cell Culture. Minneapolis, 1986. P. 440.

183. Vatad A. N. , Reinholi H. R. , Lerner H. R. Comparison between a stsble NaCl-selected Nicotiana cell line and the wild type. Plant Physiol., 1983, v. 73, N3. P. 624.

184. Widholm J. M. Tryptophan biosynthesis in Nicotiana tabacum and Daucus carota cell cultures: site of action of inhibitory tryptophan analogs. Biochim. et Biophys. Acta, 1972, v. 261. P. 44.

185. Widholm J. M. Selection and characterization of aminoacid analog resistant plant cell cultures. Crop Sci., 1977, v. 17. P. 597.

186. Winicov I. Characterization of salt tolerant alfalfa (Medicago sativa L.) plant regenerated from salt tolerant cell lines. Plant Cell Rep., 1991, v. 10, N 11. P. 561.

187. Winicow I., Seeman J. R. Expression of genes for photisynthesis and the relationships to salt tolerance of alfalfa (Medicago sativa) cells. Plant Cell Physiol. , 1990, v. 31, N8. P. 1155.- 120

188. Yeo A. R. , Kramer D. , Laughli A., Gullash J. Ion distribution in salt stressed Zea mays roots in relation to ultrastructure and retention of sodium. J. Exp. Bot. , 1977, v. 27. P. 17.

189. Yeo A. R. , Flowers T.J. Accumulation and localization of sodium ions within the shoots of rice (Oryza sativa) varietes differing in salinity resistance. Physiol. Plant. , 1982, v. 56. P. 343.

190. Yeo A. R. Salinity resistance: physiology and prices. Physiol. Plant. , 1983, v. 58. P. 214.

191. Yeschke W. D. K+ Na+ exchange at cellular membranes, intracellular compartmentation of cations and salt tolerance. Salinity tolerance in plants. Eds. R. S. Staples, G. H. Toenniensen. , 1984. P. 37.

192. Zenk M. H. , El-shagi H. , Arens H. et al. Formation of the indole alkaloids serpentine and ajmalicine in cell suspension culture of Catharanthus roseus. Plant Tissue Culture and its Biotechnological Application. Berlin: Springer, 1977. P. 27.