Кинетика образования и свойства промежуточных и неправильно свернутых мономерных и агрегированных форм актина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Поварова, Ольга Игоревна

• Поварова, Ольга Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Поварова, Ольга Игоревна

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность исследования.

Цели и задачи исследования.

Научная новизна исследований.

Теоретическое и практическое значение работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о структуре и фолдинге белков. Промежуточные и неправильно свернутые состояния, их роль в образовании нативного белка и нарушениях фолдинга.

1.1.1. Первичная структура белка определяет его нашивную пространственную структуру и путь сворачивания.

1.1.2. Особенности фолдинга белков в клетке.

1.1.3. Одностадийное кооперативное сворачивание небольших белков.

1.1.4. Сворачивание белков через образование промежуточных состояний

1.1.5. Модель энергетической воронки.

1.1.6. Переходное состояние и ядро сворачивания.

1.1.7. Развернутое состояние белка.

1.1.8. Нативное состояние — отвечает ли оно глобальному минимуму свободной энергии?.

1.1.9. Промежуточные состояния, их роль в образовании агрегированных форм белков.

1.2. Свойства актина в различных структурных состояниях.

1.2.1. Собственная флуоресценция нативного актина. Микроокружение триптофановых остатков и их вклад во флуоресценцию белка.

1.2.2. Инактивированный актин - термодинамически стабильное промежуточное состояние белка.

1.2.3. Вторичная структура нативного и инактивированного актина.

1.2.4. Диэлектрические и релаксационные свойства микроокружения триптофановых остатков нативного и инактивированного актина

1.2.5. Локализация триптофановых остатков в инактивированном актине.

1.2.6. Гидродинамические размеры инактивированного актина.

1.2.7. Внутримолекулярная подвижность триптофановых остатков нативного и инактивированного актина.

1.2.8. Свойства поверхности инактивированного актина.

1.2.9. Представляет ли инактивированныи актин структуру типа расплавленной глобулы?.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Получение, очистка и характеристика препаратов актина.

2.2. Флуоресцентные измерения.

4 2.3. Кинетические эксперименты по сворачиванию-разворачиванию актина

2.4. КД измерения.

2.5 Фосфоресцентные измерения.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Кинетика денатурации актина.

3.1.1. Существенно развернутый кинетический интермедиат, предшествующий образованию инактивированного актина.

3.1.2. Кинетические константы процесса денатурации актина

4 гуанидингидрохлоридом.

3.1.3. Кинетика разворачивания актина формамидом.

3.1.4. Кинетика образования инактивированного актина.

3.2. Специфические взаимодействия актина с гуанидингдрохлоридом.

3.3. Новая схема процессов сворачивания-разворачивания актина.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Кинетика образования и свойства промежуточных и неправильно свернутых мономерных и агрегированных форм актина»

Актуальность исследования

Вопрос о том, как белки сворачиваются в уникальное компактное высокоорганизованное функционально-активное состояние, является одним из центральных вопросов физико-химической и клеточной биологии. Основным подходом к решению проблемы фолдинга белков является изучение процессов их сворачивания-разворачивания и характеристика возникающих при этом промежуточных частично-свернутых и неправильно свернутых состояний.

Стабилизация структуры неправильно свернутых состояний, возникающих в процессе сворачивания-разворачивания белков, часто осуществляется за счет их ассоциации и агрегации. При этом могут возникать как неупорядоченные аморфные агрегаты, так и упорядоченные структуры - амилоидные фибриллы (Kelly, 2000; Fink, 1998). Возникновение неправильно свернутых аморфных агрегированных форм рекомбинантных белков и их аккумуляция в телах включения (Frankel et al., 1990; Wetzel, 1992; Speed et al., 1996) является существенной проблемой биотехнологии. Фибриллогенез является причиной возникновения ряда тяжких заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, прионные болезни и т.д., которые иногда называют конформационными болезнями (Carrell and Gooptu, 1998; Kelly, 1997; Harper and Lansbury 1997; Koo et al., 1999; Hashimoto and Masliah, 1999; Fink, 1998). Таким образом, изучение структуры и путей образования денатурированных частично-свернутых агрегированных (ассоциированных) форм белков важно не только для решения фундаментальной проблемы фолдинга белка, но имеет также большое практическое значение.

Большинство исследований по изучению фолдинга белков выполнено на небольших однодоменных белках, для которых процесс разворачивания является обратимым. Актуальным является изучение путей сворачивания более сложных мультидоменных белков, а также изучение возникающих при этом промежуточных и неправильно свернутых агрегированных форм белков. Актин, один из основных белков системы мышечного сокращения и цитоскелета эукариотических клеток, -чрезвычайно интересная модель для такого рода исследований.

Цель и задачи исследования

Цель работы состояла в изучении процессов сворачивания-разворачивания глобулярного актина. В задачи исследования входило:

1. Изучение кинетики разворачивания актина и образования инактивированного актина под действием гуанидингидрохлорида (GdnHCl) различной концентрации, поиск возможных кинетических интермедиатов, возникающих при реализации этих процессов.

2. Выяснение места инактивированного актина в процессах сворачивания-разворачивания белка.

3. Изучение влияния GdnHCl на свойства инактивированного актина.

4. Выяснение причин необратимости процесса разворачивания актина in vitro. Научная новизна

Показано существование двух ранее неизвестных кинетических интермедиатов, возникающих на ранних стадиях денатурации актина (N* и U*). Охарактеризован существенно развернутый интермедиат U* и, в частности, показано, что свойства этого интермедиата отличаются от свойств полностью развернутого актина. Предложена новая схема процессов сворачивания-разворачивания актина, согласно которой обнаруженные кинетические интермедиаты являются промежуточными состояниями на пути разворачивания актина, в то время как инактивированный актин является ассоциатом частично-свернутых денатурированных макромолекул белка.

Показано, что инактивированный актин является монодисперсным ассоциатом лишь в водном растворе. В присутствии GdnHCl происходит агрегация ассоциатов. Размеры агрегатов инактивированного актина зависят от концентрации денатуранта. Эффект объяснен изменением поверхностного заряда инактивированного актина при его взаимодействии с ионами GuH1".

Теоретическое и практическое значение

Новые представления о процессах сворачивания-разворачивания актина, полученные в настоящей работе, существенны для понимания процессов фолдинга этого белка. Обнаружение и характеристика ранее неизвестных интермедиатов, а также выяснение роли инактивированного актина в процессе сворачивания-разворачивания, может явиться основой для проведения дальнейших исследований, направленных на поиск путей ренатурации полностью развернутого актина in vitro. Результаты работы используются при проведении лекционно-практических занятий для студентов 4 курса Кафедры биофизики СПбГПУ.

Существенной методической разработкой является использование параметрического метода представления экспериментальных данных по денатурации белков (Бурштейн, 1976) для анализа результатов кинетических экспериментов. Этот подход, позволивший охарактеризовать свойства вновь обнаруженного кинетического интермедиата актина U*, не только широко используется в нашей лаборатории, но и другими исследователями (см. например, Altschuler et al., 2005).

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Поварова, Ольга Игоревна

ВЫВОДЫ

1. Показано, что разворачивание актина проходит через образование двух вновь обнаруженных кинетических интермедиатов N* и U*, возникающих на ранних стадиях денатурации актина.

2. Показано, что существенно развернутый кинетический интермедиат U*, предшествующий образованию инактивированного актина, имеет высокий уровень внутримолекулярной подвижности, но сохраняет элементы вторичной структуры и имеет несколько более коротковолновый, по сравнению с полностью развернутым состоянием, спектр флуоресценции.

3. Предложена и обоснована новая схема процессов сворачивания-разворачивания актина, согласно которой вновь обнаруженные кинетические интермедиаты N* и U* являются промежуточными состояниями на пути сворачивания-разворачивания актина, в то время как инакгивированный актин образуется в результате ассоциации частично-свернутых денатурированных макромолекул белка. Последнее является причиной необратимости процесса разворачивания актина in vitro.

4. Показано, что в присутствии GdnHCl происходит агрегация инактивированного актина (агрегация ассоциатов), обусловленная изменением поверхностного заряда инактивированного актина при его взаимодействии с ионами GuH*.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Поварова, Ольга Игоревна, 2005 год

1. Бландел Т. и Джонсон Л. 1979. Кристаллография белка. М: "Мир", 620 с.

2. Бычкова В.А. и Птщын О.Б. 1995. Функциональное состояние денатурированных белков: принципы моделирования и первые результаты. Цитология. 37: 12381250.

3. Гилъманшин Р.И., Долгих Д.А., Птщын O.E., Финкельштейн A.B. и Шахнович Е.И. 1982. Белковые глобулы без уникальной пространственной структуры: экспериментальные данные для а-лактальбуминов и общая модель. Биофизика. 27: 1005-1015.

4. Кузнецова И.М., Хайтлина С.Ю., Туроверов К.К. и Пинаев Г. П. 1981. Поляризация УФ-флуоресценции актина. Биофизика. 26: 762-764.

5. Кузнецова И.М. и Туроверов К.К. 1983. Поляризация собственной флуоресценции белков. III. Внутримолекулярная подвижность триптофановых остатков. Мол.биол. 17: 741-754.

6. Кузнецова И.М. и Туроверов К.К. 1998. Что определяет характеристики собственной УФ-флуоресценции белков? Анализ свойств микроокружения и особенностей локализации их триптофановых остатков. Цитология. 40(8/9): 747-762.

7. Кузнецова И.М., Хайтлина С.Ю. и Туроверов К.К. 1998. Структурные свойства инактивированного актина: интермедиат формируется в процессе сворачивания-разворачивания актина. Биоорганическая химия. 24:783-791.

8. Родионова H.A., Семисотнов Г.В., Кутышенко В.П., Уверский В.Н., Болотина H.A., Бычкова В.Е. и Птщын О.Б. 1989. Стадийность равновесного разворачивания карбоангидразы В сильными денатурантами. Мол. биол. 23: 683-692.

9. Татунашвили JI.B. и Привалов П.Л. 1984. Калориметрическое исследование денатурации G-актина. Биофизика 29: 583-585.

10. Тенфорд Ч. 1965. Физическая химия полимеров. Изд. "Химия". М.

11. Туроверов К. К. и Кузнецова И. М. 1983. Поляризация собственной флуоресценции белков. II. Использование для изучения равновесной динамики триптофановых остатков. Мол.биол. 17: 468-473.

12. Туроверов К.К., Бикташев А.Г., Дорофеюк А.В. и Кузнецова И. М. 1998. Комплекс аппаратных и программных средств для измерения спектральных, поляризационных и кинетических характеристик флуоресценции в растворе. Цитология. 40(8/9): 806-817.

13. Уверский В.Н. 1998. Разнообразие компактных форм денатурированных белков. Дисс. на соискание уч. степени докт. физ. мат. наук, Пущино.

14. Финкелыитейн А.В. 1976. Стереохимический анализ вторичной структуры полипептидной цепи при помощи пространственных моделей Курто. 1.Разрешенные конформации дипептидов. Мол.биол. 10: 507-513.

15. Финкелыитейн А.В. и Птицын О.Б. 2002. Физика белка. М: Книжный дом "Университет", 376 с.

16. Agekyan T.V., Bezborodova S.I., Kuznetsova I.M., Polyakov K.M. and Turoverov K.K. 1988. Spectral and polarizational characteristics of ribonuclease C2. Unusual fluorescence of tyrosine residues. Mol. Biol. 22: 612-623.

17. Akiyama S., Takahashi S., Ishimori K. and Morishima I. 2000. Stepwise formation of a-helices during cytochrome с folding. Nat. Struct. Biol. 7: 514-520

18. Altschuler G. M., Klug D.R., Willison K.R. 2005. Unfolding energetics of G-a-Actin: а discrete intermediate can be re-folded to the native state by CCT. J Mol. Biol. Available online at www.sciencedirect.com.

19. Anfinsen C.B. 1973. Principles that govern the folding of proteins chains. Science. 181: 223-230.

20. Arai M., Inobe Т., Maki K., Ikura Т., Kihara H., Amemiya Y., and Kuwajima K. 2003. Denaturation and reassembly of chaperonin GroEL studied by solution X-ray scattering, Protein Sci. 12,672-680.

21. Bader M.V. and Bardwell J.C.A. 2002. Catalysis of disulfide bond formation and isomerization in Escherichia coli. Adv. Protein. Chem. 59: 283-301.

22. Baldwin R.L. and Rose G.D. 1999. Is protein folding hierarchic? Trends Biochem. Sci. 24: 26-33; 77-83.

23. Bam N.B., Cleland J.L. and Randolph T.W. 1996. Molten globule intermediate of recombinant human growth hormone: stabilization with surfactants. Biotechnol. Prog. 12: 801-809.

24. Dobson C.M. 1992. Unfolded proteins, compact states and molten globules.

25. Curr.Opin.Struct.Biol. 2 :6-12. Dobson C.M. 2003. Protein folding and misfolding. Nature. 18; 426: 884-890.

26. Dobson C.M. 2004. Experimental investigation of protein folding and misfolding. Methods. 34: 4-14.

27. Eftink M. and Ghiron C. A. 1977. Exposure of tryptophanyl residues and proteindynamics. Biochemistry. 16: 5546-5551. Eftink M. and Ghiron C.A. 1981. Fluorescence quenching studies with proteins. Anal.

28. Biochem. 114: 199-227. Eisinger, J., Feuer B. and Lamola A.A. 1969. Intramolecular singlet excitation transfer.

29. Applications to polypeptides. Biochemistry. 8: 3908-3915. Ellis R.J. and Hartl F. U. 1999. Principles of protein folding in the cellular environment.

30. Fersht A. 1998. Structure and Mechanism in Protein Science: A Guide to Enzyme

31. Catalysis and Protein Folding. W.H. Freeman and Company, N. Y., p. 631. Forster Th. 1960. Transfer mechanisms of electronic excitation energy. Rad. Res. Suppl. 2: 326-339.

32. Frankel S., Condeelis J. and Leinwand L. 1990. Expression of actin in Escherichia coli: Aggregation, solubilization, and functional analysis. J. Biol. Chem. 265: 17980-17987.

33. Goldbeck R.A., Kim-Shapiro D.B. and Kliger D.S. 1997. Fast natural and magnetic circular dichroism spectroscopy. Annu. Rev. Phys. Chem.48,453-479.

34. Gezimati J., Singh H. and Creamer L.K. 1996. Heat-induced interactions and gelation of mixtures of bovine beta-lactoglobulin and serum albumin. J.Agricult. and Food Chem. 44: 804-810.

35. Gilbert H.F. 1994. Protein chaperones and protein folding. Cur. Opin. Struct. Biol. 5: 534539.

36. Goers J., Permyakov S.E., Permyakov E.A., Uversky V.N. and Fink A.L. 2002. Conformational prerequisites for alpha-lactalbumin fibrillation. Biochemistry. 41: 12546-12551.

37. Gokhale R.S., Agarwalla S., Santi D. V. and Balaram P. 1996. Covalent reinforcement of a fragile region in the dimeric enzyme thymidylate synthase stabilizes the protein against chaotrope-induced unfolding. Biochemistry. 35: 7150-7158.

38. Gonnelli M. and Strambini G.B. 1993. Glycerol effects on protein flexibility: a tryptophan phosphorescence study. Biophys J. 65: 131-137.

39. Harper J.D. and Lansbury P.T. Jr. 1997. Models of amyloid seeding in Alzheimer's disease and scrapie: mechanistic truths and physiological consequences of the time-dependent solubility of amyloid proteins. Ann. Rev. Biochem. 66: 385-407.

40. Hartl F. U. and Martin J. 1995. Molecular chaperones in cellular protein folding. Cur. Opin. Struct. Biol. 5:92-102.

41. Hashimoto M. and Masliah E. 1999. Alpha-synuclein in Lewy body disease and Alzheimer's disease. Brain Pathol. 9: 707-720.

42. Humphrey W., Dalke A. and Schulten K. 1996. VMD: visual molecular dynamics, J. Molec. Graphics. 14:33-38.

43. Jablonski A. 1957. Decay of fhotoluminescence of solutions. Acta Phys. Polon. 16: 471479.

44. Joly M. 1965. A Physico-Chemical Approach to the Denaturation of Proteins. In Molecular Biology an International Series of Monographs and Textbooks. Horecker B., Kaplan N.O. Scheraga H.A., editors. Vol. 6. Academic Press. London. New York.

45. Kabsch W., Mannherz H.G., Suck D., Pai E.F. and Holmes H.C. 1990. Atomic structure of the actin: DNase I complex. Nature. 347: 37-44.

46. Kelly J. W. 1997. Amyloid fibril formation and protein misassembly a structural quest for insight into amyloid and prion diseases. Structure. 5: 595-600.

47. Kelly J. W. 2000. Mechanisms of amyloidogenesis. Nature Struct. Biol. 7: 824-826.

48. Koo E.H., Lansbury P.T. Jr, Kelly J.W. 1999. Amyloid disease abnormal protein aggregation in neurodegeneration. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96: 9989-9990.

49. Kuznetsova I.M., Khaitlina S.Yu., Konditerov S.N., Surin A.M. and Turoverov K.K. 1988. Changes of structure and intermolecular mobility in the course of actin denaturation. Biophys. Chem. 32: 73-78.

50. Kuznetsova I.M., Biktashev A.G., Khaitlina S.Yu., Vassilenko K.S., Turoverov K.K. and Uversky V.N. 1999a. Effect of self-association on the structural organization of partially folded proteins: inactivated actin. Bioph. J. 77: 2788-2800.

51. Kuznetsova I.M., Turoverov K.K, Uversky V. N. 1999b. Inactivated actin, and aggregate comprised of partially-folded monomers, has a overall native-like packing density. Protein Peptide Lett. 6: 173-178.

52. Kuznetsova I.M., Yakusheva T.A., Turoverov K.K. 1999c. Contribution of separate tryptophan residues to intrinsic fluorescence of actin. Analysis 3D structure. FEBS Lett. 452: 205-210.

53. Kuznetsova I.M., Stepanenko O.V., Turoverov K.K., Zhu L., Zhou J.-M., Fink A.L. and Uversky V. N. 2002b. Unravelling multistate unfolding of rabbit muscle creatine kinase. Biochem. Biophys. Acta. 1596: 138-155.

54. Vine H 3rd. 1999. Quantification of beta-sheet amyloid fibril structures with thioflavin T. Methods Enzymol. 309: 274-84.1.vinthal C. 1968. Are there pathways for protein folding? J. Chim. Phys. 65: 44-45.

55. Marquardt D. W. 1963. An algorithm for least-squares estimation of non linear parameters. J. Soc. Ind. Appl. Math. 11: 431-441.

56. Matouschek A., Kellis J.T. Jr, Serrano L. and Fersht A.R. 1989. Mapping the transition state and pathway of protein folding by protein engineering. Nature. 340: 122-126.

57. Matouschek A., Kellis J.T. Jr, Serrano L., Bycroft M. and Fersht A.R. 1990. Transient folding intermediates characterized by protein engineering. Nature. 346: 440-445.

58. Matveyev V.V., Usmanova A.M., Morozova A.V., Collins J.H. and Khaitlina S.Yu. 1996. Purification and characterization of the proteinase ECP 32 from Escherichia coli A2 strain. Biochim. Biophys. Acta. 1296: 55-62.

59. Mazhul' V M., Zaitseva E.M., Shavlovsky M.M., Stepanenko Olesia V., Kuznetsova I.M., Turoverov K.K. 2003. Monitoring of Actin Unfolding by Room Temperature Tryptophan Phosphorescence. Biochemistry. 42: 13551-13557.

60. Melanie R.N. 2004. Techniques to study amyloid fibril formation in vitro, Methods. 34: 151-160.

61. Merritt E.A. and Bacon D.J. 1977. Raster3D: Photorealistic molecular graphics. Methods in enzymol. 277: 505-524.

62. McLaughlin P.J., GoochJ.T., Mannherz H.G. and Weeds A.G. 1993. Structure of gelsolin segment 1-actin complex and the mechanism of filament severing. Nature. 364: 685692.

63. Mulqueen P.M. and Kronman M.J. 1982. Binding of naphthalene dyes to the N and A conformers of bovine alpha-lactalbumin. Arch Biochem Biophys. 215: 28-39.

64. Nagy B. and Jencks W.P. 1962. Optical rotatory dispersion of G-actin. Biochemistry. 1: 987-996.

65. Nagy B. and Strzelecka-Golaszewska H. 1972. Optical rotatory dispersion and circular dichroic spectra of G-actin. Arch. Biochem. Biophys. 150: 428-435.

66. Netzer W.J. and Hartl F. U. 1998. Protein folding in the cytosol: chaperonin-dependent and-independent mechanisms. Trends Biochem. Sci. 23:2:68-73.

67. Otterbein L.R., Gracejfa P. and Dominquez R. 2001. The crystal structure of uncomplexed actin in the ADP state. Science. 293: 708-711.

68. Pardee J.D. and Spudich J. A. 1982. Purification of muscle actin. Meth. Enzymol. 85: 164181.

69. Permyakov E.A., Yarmolenko V.V., Emelyanenko V.I., Burstein E.A., Closset J. and Gerday C. 1980. Fluorescence study of the calcium binding to whiting (Gadus merlangus) parvalbumin. Eur. J. Biochem. 109: 307-315.

70. Plotkin S.S. and Onuchic J.N. 2002. Understanding prtein folding with energy landscape theory. Part I: Basic concepts Quart. Rev. Biophys. 35: 111-167.

71. Pollack L. 1999. Compactness of the denatured state of a fast-folding protein measured by submillisecond small-angle X-ray scattering. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 1011510117.

72. Pollard T.D., Blanchoin L. and Mullins R.D. 2000. Molecular mechanism controlling actin filament dynamics in nonmuscle cells. Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 29: 545576.

73. Ptitsyn O.B. 1995. Molten globule and protein folding. Adv.Protein.Chem. 47: 83-229.

74. Radford S.E. 2000. Protein folding: progress made and promises ahead. TIBS. 25: 611618.

75. Rees M.K. and Young M. 1967. Stadies on the isolation and molecular properties of homogeneous globular actin. Evidence for a single polypeptide chain structure. J. Biol. Chem. 242: 4449-4458.

76. Robinson R.G., Mejillano M., Le V.P., Burtnick L.D., Yin H.L. and Choe S. 1999. Domain movement in gelsolin: a calcium-activated switch. Science. 286: 1939-1942.

77. Roder H. andShastry M.C.R. 1999. Methods for exploring early events in protein folding. Curr. Opin. Struct. Biol. 9: 620-626.

78. Schuler H., Lindberg U., Schutt C. E., Karlsson R. 2000. Thermal unfolding of G-actin monitored with DNase-I-inhibition assay stabilities of actin isoforms. Eur. J. Biochem. 267:476-486.

79. Schutt C.E., Myslik J.C., Rozycki M.D., Goonesekere N.C. and Linberg U. 1993. The structure of crystalline profiling-P-actin. Nature. 365: 810-816.

80. Schmid F.X. 2002. Prolyl isomerases. Adv. Protein.Chem. 59: 243-282.

81. Sheterline P., Clayton J. and Sparrow J. 1998. Actin. Protein Profile. Oxford University Press, Oxford.

82. Turoverov K.K., Khaitlina S.Yu. andPinaev G.P. 1976. Ultra-violet fluorescence of actin.

83. Turoverov K.K., Verkhusha V.V., Shavlovsky M.M., Biktashev A.G., Povarova O.I., and Kuznetsova I.M. 2002. Kinetics of actin unfolding induced by guanidine hydrochloride. Biochemistry. 41: 1041-1019.

84. Uversky V. N. 1993. Use of fast-protein size-exclusion chromatography to study the unfolding of proteins which denature through the molten globule. Biochemistry. 32: 13288-13298.

85. Uversky V.N. and Ptitsyn O.B. 1996. Further evidence on the equibrium "pre-molten globule state": four-state GdmCl-induced unfolding opf carbonic anhydrase B at low temperature. J.Mol.Biol. 255: 215-228.

86. Uversky V.N., Winter S. and Lober G. 1996. Use of fluorescence decay times of 8-ANS-protein complexes to study the conformational transition in proteins which unfold through the molten globule state Biophys. Chem. 60: 79-88.

87. Uversky V.N., Narizhneva N.V., Ivanovo T.V., Kirkitadze M.D. and Tomashevski A.Y. 1997. Ligand-free form of human alpha-fetoprotein: evidence for the molten globule state. FEBS Lett. 410: 280-284.

88. Uversky V.N., Talapatra A., Gillespie J.R.and Fink A.L. 1999. Protein deposits as the molecular basis of amyloidoses. Part II. Localized amyloidoses and neurodegenerative disorders. Med. Sci. Monitor. 5: 1238-1254.

89. WestJ.J., Nagy B. and GergelyJ. 1967. Free adenosine diphosphate as an intermediary in the phosphorylation by creatine phosphate of adenosine diphosphate bound to actin. J. Biol. Chem. 242: 1140-1145.

90. Wetzel R. 1992. in Protein Engineering. A Practical Approach (Rees A.R., Sternberg A.R., Wetzel R., Eds.) pp 191-219, IRL Press, Oxford.

91. Wetzel R. 1994. Mutations and off-pathway aggregation of proteins. Trends Biotechnol. 12: 193-198.

92. Yamamoto Yu. and Tanaka J. 1970. Spectroscopic studies on the configurational structures of ribonuclease Tl. Biochim. Biophys. Acta. 207: 522-531.

93. Zahn R. 1999. Prion propagation and molecular caperons. Q. Rev. Biophys. 32: 309-370.

94. Zeeb M. and Balbach J. 2004. Protein folding studied by real-time NMR spectroscopy. Methods. 34: 65-74.

95. Я приношу глубокую благодарность моим научным руководителям К.К. Туроверову и И.М. Кузнецовой, за предоставленную возможность заниматься данной темой и внимательное научное руководство, постоянное внимание и заботу.

96. Я благодарна сотрудникам нашей Лаборатории Олесе и Оле Стапаненко за творческую атмосферу, способствовавшую работе.

97. Я также хочу выразить благодарность моей семье за постоянную поддержку и терпение.