Кинетика ферментативного гидролиза полипептидов и гидрофобные эффекты тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, доктор химических наук Воробьев, Михаил Михайлович

• Воробьев, Михаил Михайлович
• доктор химических наук
• 2009

Оглавление диссертации доктор химических наук Воробьев, Михаил Михайлович

ВВЕДЕНИЕ

СОДЕРЖАНИЕ

ГЛАВА I. Физико-химические предпосылки количественного описания гидролиза полипептидов и гидрофобные эффекты.

1.1.1. Особенности протеолиза как процесса превращения пептидного полимерного субстрата и возможности его описания методами химической кинетики.

1.1.2. Р-Казеин как субстрат протеолиза.

1.1.3. Свойства пептидов, полученных ферментативным гидролизом.

1.2.1. Основные подходы к описанию гидрофобных явлений.

1.2.2. Экспериментальные методы определения гидратации.

1.2.3. Гидратация белков, гидрофобный коллапс пептидов.

ГЛАВА II. Кинетика ферментативного гидролиза полипептидных субстратов.

2.1. Гидролиз Р-казеина трипсином.

2.2. Суммарная кинетика гидролиза химотрипсином.

2.3. Кинетика деградации исходной полипептидной цепи.

2.4. Гидролиз пептидов в реакторе открытого типа.

ГЛАВА III. Компьютерное моделирование протеолиза.

3.1. Компьютерное моделирование гидролиза пептидных цепей — программа Proteolysis.

3.2. Компьютерное моделирование гидролиза пепсином.

3.3. Компьютерное моделирование кинетики гидролиза трипсином и химотрипсином.

ГЛАВА IV. Изучение гидратации в различных аминокислотно-пептиднобелковых системах.

4.1. Шкалы гидрофобности аминокислот. Сравнение методов миллиметровой спектроскопии и дифференциальной сканирующей калориметрии.

4.2. Оценка ассоциации по изменению гидратации.

4.3. Гидратация белков, изменение гидратации при ферментативном гидролизе.

4.4. Реология и гидратация гелей, образованных агрегатами казеиновых мицелл.

4.5. Гидратация белковоподобных синтетических полимеров.

ГЛАВА V. Методы исследования.

5.1. Гидролиз полипептидов и анализ продуктов гидролиза.

5.2. Измерение параметров гидратации.

5.3. Программа Proteolysis.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Кинетика ферментативного гидролиза полипептидов и гидрофобные эффекты»

Актуальность проблемы. В настоящее время методы физической химии все шире применяются к комплексным объектам природного происхождения и сложным биохимическим процессам. Один из таких процессов -ферментативный гидролиз полимерных цепей полипептидов и белков (протеолиз) лежит в основе ряда биологических явлений, проявляющихся в широком диапазоне степени гидролиза пептидных связей от ограниченного протеолиза при активации ферментов до глубокого гидролиза при пищеварении. Протеолизу принадлежит важная роль в процессах модификации пищевых белков и производстве белковых гидролизатов в пищевой промышленности. Создание общей физико-химической модели протеолиза, включающей кинетическое описание процессов межцепочечных взаимодействий, приводящих к маскированию/демаскированию пептидных связей, и количественному выражению фермент-субстратного узнавания (специфичности) в отношении полимерного субстрата, является, таким образом, важнейшей задачей.

Водные растворы и дисперсные системы пептидов и аминокислот широко распространены в живой природе и находят все возрастающее применение в биотехнологии. Из многочисленных примеров выделим только два: пептидные гормоны, осуществляющие регуляторные функции и обладающие уникальным сродством к рецепторам; биосовместимые пептидные материалы, образованные самосборкой пептидов. Эти и другие примеры из «мира пептидов» требуют разработки общих методологических подходов, применения современных методов анализа и компьютерного моделирования.

Полипептиды, обладающие существенной конформационной подвижностью по сравнению с глобулярными белками, также как и белки проявляют физиологическую активность, поскольку определенные аминокислотные последовательности пептидов (сайты) обладают повышенным сродством к другим биополимерам и клеточным структурам. Полипептиды, не имеющие определенной третичной структуры, представляют преимущественно полимерные клубки и являются предметом изучения широкого круга специалистов, включая физиков, биохимиков и специалистов пищевой химии.

Белки (ферменты) обладают третичной структурой, которая определяет пространственное расположение функциональных групп, участвующих в катализе. Поэтому роль ферментов как катализаторов химических реакций является определяющей для биологических систем, и их изучение является одной из основных задач биохимии. Необходимо отметить, что интерес к ферментам проявляют и химики, использующие ферментативный синтез (гидролиз) как альтернативный химическому метод синтеза в мягких условиях.

Протеолиз участвует в огромном количестве биологических процессов, - обеспечивает активацию проферментов, участвует в процессах регуляции на различных уровнях, наконец, осуществляет деградацию «ненужных» белков и пептидов. Участие протеолиза в процессах пищеварения пищевых белков хорошо известно. Протеолиз лежит также в основе важнейших биотехнологических процессов, включая получение белковых гидролизатов и отдельных биологически-активных пептидов из неактивных белковых предшественников. Взглянем на протеолиз с точки зрения физической химии.

С этой точки зрения интерес представляют, прежде всего, кинетические закономерности ферментативного гидролиза полипептидных цепей, определяемые как фермент-субстратным связыванием (субстратной специфичностью), так и межсегментными и межцепочечными взаимодействиями, препятствующими доступу фермента к атакуемым пептидным связям. Если первое явление широко изучается биохимиками в рамках изучения субстратной специфичности различных протеаз, то второе явление, известное как маскирование пептидных связей, представляет интерес для науки о полимерах, поскольку маскирование определяется полимерной природой полипептидного субстрата.

Гидролиз полимерной цепи в нескольких местах дает набор фрагментов, которые в свою очередь являются субстратами для последующего гидролиза. Описание кинетики превращений таких субстрато-продуктов требует компьютерного моделирования, которое должно учесть весь огромный объем информации и представить результаты в форме, удобной для экспериментальной проверки.

Гидрофобно-управляемые процессы играют огромную роль в живой природе, в частности, определяя глобулярную конформацию белка. Также, гидрофобные взаимодействия определяют переходы клубок-глобула для синтетических термочувствительных полимеров, часто называемых белковоподобными. Общие физико-химические механизмы гидрофобных явлений в белковых системах и амфифильных синтетических полимерах требуют разработки универсальных подходов и одних и тех же методов анализа. В частности, представляется актуальным определять параметры гидрофобности по состоянию воды в гидратных оболочках растворенных молекул. Для этого ключевой идеей, по нашему мнению, является идея о клатратном упорядочении воды в гидратных оболочках неполярных групп полимеров. В диссертационной работе описан наш опыт по использованию миллиметровой спектроскопии, регистрирующей упорядочение сетки воды по поглощению электромагнитного излучения в сверхвысокочастотном (СВЧ) диапазоне.

В ходе гидролиза пептидных связей происходит разворачивание белковой глобулы, в результате чего меняется площадь поверхности групп, контактирующих с водой, т.е. меняться гидратация полипептидных цепей. Изменения гидратации сопровождаются конформационными изменениями и образованием агрегатов. Можно рассчитывать, что измерения гидратации позволят дополнить кинетические данные гидролиза пептидных связей и данные по реологии водно-пептидных систем.

Целью работы является изучение физико-химических закономерностей ферментативного гидролиза полимерных субстратов на примере протеолитических реакций, а также изучение гидратационных эффектов в водных аминокислотно-пептидных растворах и коллоидных системах.

В рамках этого в диссертации решались следующие задачи:

1. Разработать аналитические методы и подходы, позволяющие определять константы скорости гидролиза пептидных субстратов протеолитическими ферментами в кинетических экспериментах, анализирующих как суммарную кинетику гидролиза пептидных связей, так и индивидуальную кинетику изменения концентраций пептидов по данным разделительных методов (обращеннофазная ЖХВД, количественный электрофорез, аминокислотный анализ).

2. Разработать пакет компьютерных программ, позволяющих предсказывать кинетику протеолиза для пептидных цепей, имеющих произвольную аминокислотную последовательность, с базой данных кинетических параметров для ряда протеолитических ферментов.

3. Разработать количественный метод определения гидратации методом миллиметровой (микроволновой) спектроскопии, позволяющий изучать состояние воды в гидратных оболочках пептидов в различных водных системах и процессах, включая водные растворы глобулярных белков, протеолиз, взаимодействие полипептидов с казеиновыми мицеллами. Показать перспективность количественного изучения гидратации для определения шкал гидрофобности аминокислот, оценки стабильности полипептидных мицелл, оценки конформаций синтетических белковоподобных сополимеров.

Научная новизна работы заключается в следующем:

1. Впервые предложена общая физико-химическая модель протеолиза, позволяющая анализировать кинетику во всем диапазоне изменения степени гидролиза пептидных связей с помощью одних и тех же уравнений. Показано, что кинетика протеолиза в общем случае соответствует двухстадийной схеме, где первая кинетически значимая стадия представляет демаскирование пептидных связей, а вторая - гидролиз.

2. С использованием ЖХВД на обращенной фазе получены экспериментальные данные по константам скоростей гидролиза различных пептидных связей Р-казеина трипсином дикого типа и мутированными формами трипсина.

3. Впервые предложен механизм демаскирования гидрофобного С-концевого участка при гидролизе Р-казеина трипсином дикого типа и мутированными трипсинами.

4. Изучена суммарная кинетика гидролиза химотрипсином пептидных связей по поглощению N-тринитрофенильных производных образующихся аминогрупп. Впервые показано, что немонотонные участки нарастания аминного азота в ходе гидролиза связаны с маскированностью пептидных связей.

5. Изучена кинетика гидролиза панкреатином пептидов в реакторе открытого типа с удалением низкомолекулярных продуктов гидролиза. Экспериментально определены константы скорости выхода отдельных аминокислотных остатков в составе низкомолекулярных фракций.

6. Показано, что кинетика убывания исходной полипептидной цепи соответствует кинетике 1-го порядка. Получена оценка для отношения констант демаскирования и гидролиза глобулярных белков молока.

7. Впервые создана компьютерная программа PROTEOLYSIS, осуществляющая численное интегрирование дифференциальных уравнений, которые описывают демаскирование и гидролиз пептидных связей. Программа позволяет удовлетворительно предсказывать кинетику протеолиза с различными параметрами специфичности и маскированности, а также состав продуктов протеолиза (состав гидролизатов), полученных при различных кинетических условиях.

8. Разработан метод определения параметров гидратации с использованием миллиметровой (микроволновой) спектроскопии. Метод имеет различную чувствительность к гидрофобной и гидрофильной типам гидратации, что впервые позволило использовать его для построения шкалы гидрофобности аминокислот и оценки количества неполярных групп, участвующих в гидрофобной гидратации или исключенных за счет гидрофобного взаимодействия. Метод позволяет определять кинетику развертывания белковой глобулы в ходе протеолиза.

9. Миллиметровая спектроскопия наряду с реологическими методами позволяет контролировать взаимодействие пептидов с казеиновыми мицеллами, в частности определять концентрации пептидов, при которых имеет место увеличение стабильности мицелл.

10. С помощью миллиметровой спектроскопии впервые показано, что гидрофобная модификация синтетических полимеров, не являющихся термочувствительными, приводит к меньшему изменению гидратации по сравнению с переходом клубок глобула в термочувствительных полимерах.

Практическая значимость.

Кинетические параметры представлены в работе для таких практически важных протеаз как трипсин, химотрипсин, и пепсин при протеолизе белковых субстратов, выделенных из молока. Представленная общая методология анализа кинетики протеолиза дает возможность применить наработанные методы к другим белковым субстратам и протеазам, представляющим практический интерес. В работе рассмотрено применение модельных представлений для анализа кинетики образования низкомолекулярных продуктов протеолиза в реакторе открытого типа, моделирующего in vitro панкреатическую стадию пищеварения. Эта часть работы имеет практическое значение для количественных оценок пищевой ценности белков.

Детальное изложение принципов построения программы PROTEOLYSIS может быть полезным при разработке других компьютерных программ, моделирующих сложные биохимические процессы. Применение компьютерного моделирования протеолиза может быть использовано для предсказания оптимальных кинетических условий получения белковых гидролизатов.

Использование метода количественного определения гидратации с помощью миллиметровой спектроскопии открывает новые аналитические возможности при исследовании различных амфифильных систем (белковых и полимерных). Количественные измерения гидратации позволяют контролировать гидролиз пищевых белков и образование казеиновых гелей, что может быть использовано в пищевой промышленности. Защищаемые положения.

1. Расщепление пептидных связей в полипептидах происходит в две стадии: на первой осуществляется физический процесс конформационной перестройки пептидной цепи (демаскирование); на второй происходит собственно химический процесс - гидролиз пептидных связей.

2. Стадия демаскрования дает немонотонные участки увеличения аминного азота в ходе гидролиза и обеспечивает наличие кинетики накопления некоторых пептидов с лагом.

3. Отношение констант скоростей демаскирования и гидролиза является важным параметром при количественном описании протеолиза.

4. Компьютерное моделирование протеолиза дает возможность предсказывать состав (главные компоненты) гидролизатов для различных гипотетических механизмов протеолиза.

5. Количество связанной воды растет с увеличением доступной для воды поверхности молекул, в частности, в начальной стадии протеолизе.

6. Метод миллиметровой (микроволновой) спектроскопии имеет различную чувствительность к гидрофобной и гидрофильной типам гидратации.

7. Взаимодействие пептидов в небольшой концентрации с казеиновыми мицеллами приводит к увеличению стабильности мицелл, что определяется реологически и по изменению гидратации.

8. Гидратационные измерения позволяют дифференцировать конформационные состояния клубка и глобулы для синтетических белковоподобных полимеров.

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в формировании направления исследований, разработке экспериментальных и теоретических подходов, проведении исследований и обобщении полученных результатов. Апробация работы.

Результаты работы докладывались и обсуждались на Международном симпозиуме по компьютерным вычислениям в химических исследованиях (Москва, Россия, 1996 г.); на V Симпозиуме по пищевым белкам (Потсдам, Германия, 1997 г.); на XIII Конференции Европейского коллоидного и поверхностного общества (Дублин, Ирландия, 1999 г.); на IX Симпозиуме по пищевым коллоидным системам, биополимерам и материалам (Вагенинген, Голландия, 2002 г.); на VIII (Хельсинки, Финляндия, 1998 г.), IX (Зихрон Яков, Израиль, 2000 г.) Международных симпозиумах по свойствам воды; на Европейском полимерном конгрессе (Москва, Россия, 2005); на XII Европейской конференции по спектроскопии биологических молекул (Бобини, Франция, 2007 г.); на XXIX Европейском конгрессе по спектроскопии молекул (Опатия, Хорватия, 2008 г.); на семинаре в научно-исследовательском центре фирмы «Нестле» (Лозанна, Швейцария, 1996 г.), на семинаре в Немецком федеральном центре по исследованиям в молочной промышленности (Киль, Германия, 1994 г.); на семинарах в Университете Лаваля (Квебек, Канада, 1992), Университетского колледжа Дублина (Дублин, Ирландия, 2002); на семинарах лаборатории физической химии полимеров ИНЭОС РАН.

Работа была выполнена при поддержке ряда проектов РФФИ, в том числе под руководством диссертанта: 98-03-32230 (Количественное изучение гидратации амфифильных молекул) и 07-03-00131 (Количественное изучение гидратации ферментоподобных сополимеров с цвиттерионными группировками).

Публикации. Материалы диссертации изложены в 24 статьях, а также в 7 тезисах указанных выше конференций.

Диссертация построена следующим образом. Диссертационная работа представлена в 5-и главах, а также содержит введение, заключение, выводы и список цитируемой литературы. В первой главе анализируется литература по гидролизу пептидов и определению гидрофобности. Во второй главе изложен наш экспериментальный материал по кинетике гидролиза. В третьей главе описаны возможности программы и приведены результаты компьютерного моделирования. В четвертой главе описан метод миллиметровой спектроскопии и приведены экспериментальные данные по гидратации водных смесей аминокислот, пептидов, белков и синтетических водорастворимых полимеров. В пятой главе описаны методы исследования.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Воробьев, Михаил Михайлович

Основные выводы и результаты диссертационной работы перечислены ниже:

1. Впервые предложена общая физико-химическая модель протеолиза, позволяющая анализировать кинетику во всем диапазоне изменений степени гидролиза пептидных связей с помощью одних и тех же уравнений. Показано, что кинетика протеолиза в общем случае соответствует двухстадийной схеме, где первая кинетически значимая стадия представляет демаскирование пептидных связей, а вторая стадия соответствует собственно гидролизу пептидных связей.

2. С использованием ЖХВД на обращенной фазе определены кинетические кривые для отдельных пептидов, образованных гидролизом пептидных связей трипсином. Получены экспериментальные данные по константам скоростей гидролиза доступных и изначально маскированных пептидных связей |3-казеина трипсином дикого типа и мутированными формами трипсина.

3. Впервые детально исследовано демаскирование гидрофобного С-концевого участка при гидролизе Р-казеина трипсином дикого типа и мутированными трипсинами. Показано, что наличие кинетики накопления пептидов с лагом связаны с маскированностью пептидных связей. Предложен механизм демаскирования пептидных связей в кластере, образованном гидрофобными участками полипептидной цепи Р-казеина.

4. Изучена суммарная кинетика гидролиза всех пептидных связей по поглощению N-тринитрофенильных производных образующихся аминогрупп при гидролизе казеиновых полипептидов химотрипсином. Впервые показано, что немонотонные участки зависимости нарастания аминного азота от степени гидролиза связаны с демаскированием пептидных связей. Экспериментально и теоретически определены области степени гидролиза, где находятся локальные максимумы скорости.

5. Изучена кинетика гидролиза пептидов в реакторе открытого типа с непрерывным удалением низкомолекулярных продуктов гидролиза. Экспериментально определены константы скорости выхода отдельных аминокислотных остатков в составе низкомолекулярной фракции продуктов гидролиза. Распределение констант скорости было шире для более демаскированного субстрата, и уже - для более маскированного пептидного субстрата.

6. Количественным электрофорезом показано, что кинетика убывания исходной полипептидной цепи соответствует кинетике 1-го порядка по субстрату. Получена оценка для отношения констант скоростей демаскирования и гидролиза пептидных связей глобулярных белков молока.

7. Впервые создана компьютерная программа, осуществляющая численное интегрирование дифференциальных уравнений, описывающих демаскирование и гидролиз пептидных связей с учетом материального баланса по субстрату и ферменту.

8. Программа PPOTEOLYSIS удовлетворительно предсказывает места расщепления цепи (сайты) для протеолитических ферментов. Достоверность предсказания продуктов протеолиза увеличивается при учете сначала вторичной специфичности, а затем и маскирования связей.

9. Разработан метод определения параметров гидратации различных соединений с использованием миллиметровой (микроволновой) спектроскопии по эффекту упорядочения структуры воды в гидратной оболочке растворенной молекулы. Измеряемой величиной было число гидратации, которое показывает количество молекул воды, потерявших вращательную подвижность из-за взаимодействия с растворенной молекулой.

10. Поскольку метод миллиметровой спектроскопии имеет различную чувствительность к гидрофобной и гидрофильной типам гидратации, нами впервые построена шкала гидрофобности природных а-аминокислот в цвиттерионной форме, т.е. аминокислоты ранжированы в порядке увеличения гидрофобности. Для чисел гидратации и теплоемкостей гидратации было проведено сравнение вкладов в гидратацию, соответствующих гидрофобной гидратации, гидрофильной неионной и гидрофильной ионной типов гидратации. При гидролизе полипептидов и белков зарегистрировано увеличение удельной величины связанной воды.

11. Показано, что для ассоциирующих молекул по данным миллиметровой спектроскопии функциональные группы контактируют, а гидратные оболочки перекрываются с исключением молекул воды. Количественные соотношения для связанной воды рассмотрены в работе на примере ассоциации циклодекстринов с ароматическими аминокислотами. Миллиметровая спектроскопия была применена для анализа слипания казеиновых мицелл и образования гелей при медленном самопроизвольном гидролизе 5-глюконолактона, приводящем к снижению рН. Показано, что реологические параметры в рамках модели Максвелла и гидратационные параметры ведут себя согласованным образом. При добавлении в небольших концентрациях полипептидов мицеллы становятся более стабильными. В этом же диапазоне концентраций добавленных полипептидов наблюдается уменьшение концентрации связанной воды.

12. Впервые показано, что миллиметровая спектроскопия позволяет контролировать конформацию термочувствительных синтетических полимеров и белковоподобных сополимеров. Гидратационные изменения при переходах клубок-глобула сравнивали с изменением гидратации при введении гидрофобных групп в гидрофобно-модифицированные полимеры (гидрофобно-модифицированные хитозаны и полиакрил амиды). Введение гидрофобных групп в эти полимеры приводит к меньшему изменению связанной воды по сравнению с изменением гидратации при денатурации глобулярных белков (БСА) и переходе клубок-глобула термочувствительного поли-М-изопропилакриламида.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ферментативный гидролиз полипептидов важен с практической точки зрения, и интересен как процесс, где сосредоточены явления фермент-субстратного узнавания (количественного выражения специфичности полимерного субстрата), гидрофобной ассоциации, определяющей маскирование пептидных связей, а также имеет место сложная кинетика, требующая компьютерного моделирования. Кроме того, количественный анализ многокомпонентных пептидных смесей в водной среде представляет весьма актуальную задачу аналитической химии, требующую современных инструментальных методов анализа.

Работа над диссертацией убедила в том, что исследования на стыке наук, в данном случае в области физической химии, науки о полимерах, аналитической химии, биохимии и пищевой химии, требуют сочетания не обязательно большого числа методов, но максимально сочетаемых и дополняющих друг друга. В данном исследовании такими методами были миллиметровая спектроскопия, позволившая отслеживать гидратационные изменения в процессах, приводящих к существенным изменениям конформации, а также компьютерное моделирование гидролиза полипептидных цепей. Компьютерное моделирование дало в результате законченный программный продукт - программу PROTEOLYSIS, позволяющую даже неопытному пользователю (химику — экспериментатору) в диалоговом режиме получать кинетические кривые и списки образующихся пептидов для произвольной фермент-субстратной пары.

Специфика ферментативного гидролиза гетерополимерного субстрата заключалась в наличии большого количества различных пептидных продуктов, являющихся одновременно субстратами для последующего гидролиза. В работе продемонстрированы возможности описания кинетики процесса на уровне индивидуальных пептидов, исходной полипептидной цепи, группы продуктов в низкомолекулярных фракциях, а также суммы аминогрупп, образующихся при гидролизе всех пептидных связей. Разделительные методы анализа (ЖХВД на обращенной фазе, количественный электрофорез, аминокислотный анализ низкомолекулярных фракций) и определение аминного азота по поглощению N-тринитрофенильных производных продуктов гидролиза обеспечили достоверный экспериментальный материал по кинетике протеолиза. Теоретическое объяснение таких особенностей кинетики как наличие лага при образовании некоторых пептидов или немонотонное увеличение аминного азота в ходе реакции потребовало привлечения представлений о кинетически значимом процессе демаскирования пептидных связей. Детальный кинетический анализ гидролиза Р-казеина продемонстрировал роль гидрофобных взаимодействий, обеспечивающих маскирование/демаскирование в рамках двухстадийной схемы.

Моделирование на уровне индивидуальных пептидов и конкретных сайтов расщепления пептидных связей перспективно с точки зрения биологических приложений и формулировки тонких механизмов протеолиза. Кроме того, такой подход перспективен, учитывая огромный прогресс в методах ЖХВД и масс-спектрометрии, и востребован в связи с бурным развитием протеомики.

Метод миллиметровой (микроволновой) спектроскопии, основанный на том, что поглощение электромагнитного излучения в миллиметровом диапазоне различно для объемной воды, и связанной воды, был использован для построения шкалы гидрофобности аминокислот и определения гидратации в водных системах, содержащих пептиды. Измеряемой величиной были числа гидратации, показывающие количество молекул воды, потерявших вращательную подвижность из-за взаимодействия с данной молекулой.

Хорошая корреляция различных шкал гидрофобности аминокислот, соответствующих различным физико-химическим принципам, скорее исключение, чем правило. Коэффициент корреляции между шкалами, построенными с помощью миллиметровой спектроскопии и ДСК на базе теплоемкостей гидратации, был достаточно высок, поскольку обе эти шкалы основаны на измерениях динамических свойств воды, хотя и разными методами.

При гидролизе полипептидов и белков происходило увеличение удельной величины связанной воды, поскольку имело место развертывание белковой глобулы и увеличение поверхности контакта функциональных групп с водой. При гидролизе Р-казеина увеличение поверхности также происходило, что согласуется с полученными представлениями о роли демаскирования пептидных связей не только при гидролизе глобулярных белков, но и при гидролизе Р-казеина.

Гидратация неассоциирующих молекул была рассмотрена на примере цвиттерионов природных а-аминокислот и показано, что гидрофобность можно измерить по эффекту упорядочения структуры воды. В случае ассоциирующих молекул картина иная, поскольку при ассоциации функциональные группы контактируют друг с другом, а молекулы воды исключаются. Количественные соотношения для ассоциирующих молекул рассмотрены в работе на примере ассоциации циклодекстринов с ароматическими группами аминокислот.

При расщеплении пептидной цепи существенно меняется гидратация, однако, это слишком сложная система для количественного изучения закономерностей гидратации и протеолиза в одной системе. Более простая водно-пептидная система состояла из казеиновых мицелл, стабилизированных коллоидным фосфатом, в которую добавляли 8-глюконолактон. При медленном снижении рН, вызванном гидролизом 8-глюконолактона, происходило слипание мицелл с образованием частиц и вязкоупругого геля. Изменения реологических и гидратационных параметров в этой системе вели себя согласованным образом. Свойства гелей можно было менять при добавлении немицеллярных полипептидов. При их добавлении в небольших концентрациях мицеллы становились более стабильными, а количество связанной воды уменьшалось.

При изучении гидратации был применен один и тот же метод к веществам различной химической природы, поскольку изучалось воздействие этих веществ на окружающую воду, а сами вещества не поглощали в миллиметровом диапазоне электромагнитных волн. Изучение гидратации водорастворимых синтетических полимеров, в том числе термочувствительных полимеров, показало универсальность метода миллиметровой спектроскопии для регистрации процессов, проходящих с изменением конформации цепей полимеров. Этим методом была определена разница в гидратации, соответствующая переходам клубок-глобула, в синтетических белковоподобных полимерах.

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Воробьев, Михаил Михайлович, 2009 год

1. М. von Smoluchowski. Versuch einer mathematischen theorie der koagulationskinetik kolloider losungen // Zeitschrift fur Physikalische Chemie.-1917. - V.92. -P.129-168.

2. P. Meakin. Formation of fractal clusters and networks by irreversible diffusion-limited aggregation // Phys. Rev. Letter. 1983. - V. 51, N13. - P. 1119-1122.

3. P. Meakin. Fractal aggregation // Adv. Coll. Interface Science. 1988. - V. 28, N4.-P. 249-331.

4. W. Russel, D. Saville, W. Schowalter. Colloidal dispersions. London: Cambridge University Press, 1989.

5. S. Axford. Aggregation of colloidal silica: reaction-limited kernel, stability ratio and distribution moments // J. Chem. Soc. Faraday Trans. 1997. - V. 93. -P. 303-311.

6. M. Tirado-Miranda, A. Schmitt, J. Callejas-Fernandez, A. Fernandez-Barbero. Aggregation of protein-coated colloidal particles: Interaction energy, cluster morphology, and aggregation kinetics // J. Chem. Phys. 2003. -V. 119, N17. -P. 9251-9259.

7. G. Odriozola, R. Leone, A. Schmitt, J. Callejas-Fernandez, R. Martinez-Garcia, R. Hidalgo-Alvarez. Irreversible versus reversible aggregation: Mean field theory and experiments // J. Chem. Phys. 2004. - V. 121, N11. - P. 5468-5481.

8. P. Sandkuhler, J. Sefcik, M. Morbidelli. Kinetics of gel formation in dilute dispersions with strong attractive particle interactions // Adv. Coll. Interface Science. 2004. - V. 108-109, May. - P. 133-143.

9. M. Lattuada, H. Wu, P. Sandkuhler, J. Sefcik, M. Morbidelli. Modelling of aggregation kinetics of colloidal systems and its validation by light scattering measurements // Chem. Engineering Sc. 2004. - V. 59, N9. - P. 1783-1798.

10. M. Kolb, Herrmann. The sol-gel transition modeled by irreversible aggregation of clusters // J. Phys. A. 1985. - V. 18, N3. - P. 435-441.

11. M. Lattuada, P.Sandkuhler, H. Wu, J. Sefcik, M. Morbidelli. Aggregation kinetics of polymer colloids in reaction-limited regime: experiments and simulations // Adv. Coll. Interface Sc. 2003. - V. 103, N1. - P. 33-56.

12. M. Lattuada, H. Wu, M. Morbidelli. Hydrodynamic radius of fractal clusters // J. Coll. Interface Sc. 2003. - V. 268, N1. - P. 96-105.

13. J.M. Bailey, D. French. The significance of multiple reactions in enzyme — polymer systems // J. Biol. Chem. 1957. - V. 226, N1. - P. 1-14.

14. B.K. Антонов. Химия протеолиза. M. : Наука, 1983.

15. М. Диксон, Э. Уэбб. Ферменты. М.: Иностранная литература, 1961.

16. С. Niemann. Alpha-Chymotripsin and the nature of enzyme catalysis // Science. 1964. - V. 143, N 3612. - P. 1287-1296.

17. R.F. Rekker. The hydrophobic fragmental constants. Amsterdam: Elsevier, 1977.-P. 301-348.

18. C. Hansch, C. Grieco С., C. Silipo, A. Vittoria. Quantitative structure -activity relationship of chymotrypsin — ligand interaction // J. Med. Chem. — 1977.-V. 20, N 11.-P. 1420-1435.

19. M.M. Vorob'ev, E.A. Paskonova, S.V. Vitt, V.M. Belikov. Kinetic description of proteolysis, Part 2. Substrate regulation of peptide bond demasking and hydrolysis. Liquid chromatorgaphy of hydrolysis // Nahrung. 1986. - V. 30, №10.-P. 995-1001.

20. M.M. Vorob'ev, S.V. Vitt, V.M. Belikov. Kinetic description of proteolysis, Part 3. Total kinetics of peptide bonds hydrolysis in peptide mixtures // Nahrung. 1987. - V. 31, №4. - P. 331-340.

21. M.M. Vorob'ev, L.S. Slobodyanikova, S.V. Vitt, V.K. Latov, V.M. Belikov. Kinetic description of proteolysis. Part 4. Hydrolysis kinetics of partial protein hydrolysates //Nahrung. 1987. - V. 31, №8. - P. 777-782.

22. M.M. Воробьев. Кинетика и математическое моделирование протеолиза: Дисс. канд. хим. наук. М.: Химфак МГУ, 1987. - 143с.

23. А.Д. Неклюдов, А.Н. Иванкин, А.В. Бердутина. Свойства и применение белковых гидролизатов // Прикл. биохимия и микробиол. 2000. - Т. 36, №5. - С. 452-459.

24. М.П. Черников. Протеолиз и биологическая ценность белков (казенны как собственно пищевые белки). М.: Медицина, 1975.

25. В.К. Антонов. Специфичность и механизм действия протеолитических ферментов // Биоорган. Химия. 1980. - Т. 6, №6. - С. 805-839.

26. J. Adler-Nissen. Studies of intermediates produced during peptic digestion of bovine serum albumin, ribonuclease and trypsin // J. Agric. Food Chem. 1976. - V. 24, N6. - P. 1090-1093.

27. N.L. Klyachko, A.V. Levashov. Bioorganic synthesis in reverse micelles and related systems // Current Opin. Colloid Interface Sci. 2003. - V. 8, N 2. - P. 179-186.

28. K.U. Linderstrom-Lang. Lane Medical Lectures, v.6. Stanford: Stanford University Press, 1952. - P. 53-72.

29. G. Chabanon, I. Chevalot, X. Framboisier, S. Chenu, I. Marc. Hydrolysis of rapeseed protein isolates: Kinetics, characterization and functional properties of hydrolysates // Proc. Biochem. 2007. - V. 42, N10. - P. 1419-1428.

30. J. Srividhya, S. Schnell. Why substrate depletion has apparent first-order kinetics in enzymatic digestion // Сотр. Biol. Chem. 2006. - V. 30, N3. - P. 209-214.

31. R. Hinch, S. Schnell. Mechanism equivalence in enzyme-substrate reactions: distributed differential delay in enzyme kinetics // J. Math. Chem. 2004. - V. 35, N3.-P. 253-264.

32. S. Roufik, S.F. Gauthier, S.L. Turgeon. In vitro digestibility of bioactive peptides derived from bovine P-lactoglobulin // Int. Dairy J. 2006. - V. 16, N4. - P. 294-302.

33. Y.I. Kinekawa, N. Kitabatake. Purification of (3-lactoglobulin from whey protein concentrate by pepsin treatment // J. Dairy Sci. 1996. - V. 79, N3. - P. 350-356.

34. P.E. Groleau, S.F. Gauthier, Y. Pouliot. Effect of residual chymotryptic activity in a trypsin preparation on peptide aggregation in a p-lactoglobulin hydrolysate // Int. Dairy J. 2003. - V. 13, N11. - P. 887-895.

35. J.-M. Chobert, L. Briand, V. Tran, T. Haertle. How the substitution of K188 of trypsin binding site by aromatic amino acids can influence the processing of P~ casein // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1998. - V. 246, N3. - P. 847-858.

36. A. Vaintraub, D. Morari. Applying the increase in rate constants of cooperative proteolysis to the determination of transition curves of protein denaturation // J. Biochem. Biophys. Methods. 2003. - V. 57, N3. - P. 191201.

37. E. Dufour, G. Herve, T. Haertle. Hydrolysis of P-lactoglobulin by thermolysin and pepsin under high hydrostatic pressure // Biopolymers. 1995. - V. 35, N5. -P. 475-483.

38. С.Д. Варфоломеев. Химическая энзимология. M.: Academia, 2005.

39. E. Dickinson, S. Krishna. Aggregation in a concentrated model protein system: a mesoscopic simulation of P-casein self-assembly // Food Hydrocolloids. -2001.-V. 15,N2.-P. 107-115.

40. H.M. Farrel, T.F. Kumosinski, P. Paulaski, M.P. Thompson. Calcium induced association of the caseins: a thermodynamic linkage approach to precipitationand resolubilization // Arch. Biochem. Biophys. 1988. - V. 265, №1. - P. 146158.

41. L.K. Creamer, T. Richardson, D.A.D. Parry. Secondary structure of bovine asr and P-casein in solution // Arch. Biochem. Biophys. 1981. - V. 211. - P. 689-696.

42. D.M. Byler, H.M. Jr. Farrell, H. Susi. Raman spectroscopic study of casein structure // J. Dairy Sci. 1988. - V. 71. - P. 2622-2629.

43. T.F. Kumosinski, E.M. Brown, H.M. Farrell. Three-dimentional molecular modeling of bovine caseins: an energy-minimized P-casein structure // J. Dairy Sci. 1993. - V. 76. - P. 931-945.

44. P.F. Fox. Proteinases in dairy technology // Neth. Milk Dairy J. 1981. - V. 35. - P. 233.

45. S. Visser. Proteolytic enzymes and their actions on milk proteins. A review // Neth. Milk Dairy J. 1981. - V. 35. - P. 65.

46. L.K. Creamer. A study of the action of rennin on P-casein // N.Z. J. Dairy Sci. Technol. 1976. - V. 11.-P. 30.

47. M.S. Tai, G. Kegeles. A micelle model for the sedimentation behavior of bovine P-casein // Biophys. Chem. 1984. - V. 20, N1-2. - P. 81-87.

48. D.F. Waugh, L.K. Creamer, C.W. Slattery, G.W. Dresder. Core polymers of casein micelles // Biochemistry. 1970. - V. 9, N4. - P. 786-795.

49. S. Dauphas, N. Mouhous-Riou, B. Metro, A.R. Mackie, P.J. Wilde, M. Anton, A. Riaublanc. The supramolecular organization of P-casein: effect of interfacial properties // Food Hydrocolloids. 2005. - V. 19, N3. - P. 387-393.

50. D.V. Home. Casein micelle structure: Models and muddles // Current Opin. Colloid Interface Sci. 2006. - V. 11. - P. 148-153.

51. Т.А. Валуева, В.В. Мосолов. Роль ингибиторов протеолитических ферментов в защите растений // Успехи биол. химии. — 2002. — Т. 42. — С. 193-216.

52. S. Maruyama, Н. Suzuki. A peptide inhibitor of angiotensin I-converting enzyme in the tryptic hydrolysate of casein // Agricultural Biol. Chem. 1982. -V. 46,N2.-P. 393-1394.

53. H. Meisel, E. Schlimme. Inhibitors of angiotensin-converting-enzyme derived from bovine casein (casokinins) // P-Casomorphins and related peptides: Recent developments. V. Brantl, H. Teschemacher (Eds.) Weinheim: VCH, 1994. - P. 27-33.

54. R.J. FitzGerald, H. Meisel. Lactokinins: Whey protein-derived ACE inhibitory peptides //Nahrung. 1999. - V. 43, N3. - P. 165-167.

55. S.V. Silva, F.X. Malcata. Caseins as source of bioactive peptides // Int. Dairy J. 2005. - V. 15, N1.-P. 1-15.

56. A. Pihlanto-Leppala, T. Rokka, H. Korhonen. Angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from bovine milk proteins // Int. Dairy J. -1998.-V. 8, N4.-P. 325-331.

57. S. H. Maruyama, H. Mitachi, J. Awaja, M. Kurono, N. Tomizaka, H. Suzuki. Angiotensin I-converting enzyme inhibitor activity of the C-terminal hexapeptide of asl-casein // Agricultural Biol. Chem. 1987. - V. 51, N9. - P. 2557-2561.

58. Y. Nakamura, N. Yamamoto, K. Sakai, A. Okubo, S. Yamazaki, T. Takano. Purification and characterization of angiotensin-I-converting enzyme inhibitors from sour milk // J. Dairy Sci. 1995. - V. 78, N4. - P. 777-783.

59. M.M. Mullaly, H. Meisel, R.J. FitzGerald. Identification of a novel angiotensin-I-converting enzyme inhibitory peptide corresponding to a tryptic fragment of bovine P-lactoglobulin // FEBS Letters. 1997. - V. 402, N2-3. - P. 99-101.

60. M.M. Mullaly, H. Meisel, R.J. FitzGerald. Angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activities of gastric and pancreatic proteinase digests of whey proteins // Int. Dairy J. 1997. - V. 7, N5. - P. 299-303.

61. M.M. Mullaly, H. Meisel, RJ. FitzGerald. Synthetic peptides corresponding to a-lactalbumin and (3-lactoglobulin sequences with angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity // Biol. Chem. Hoppe-Seyler. 1996. - V. 377. - P. 259-260.

62. M. Kuba, C. Tana, S. Tawata, M. Yasuda. Production of angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides from soybean protein with Monascus purpures acid proteinase // Process Biochem. 2005. - V. 40, N6. - P. 21912196.

63. Y. Eto, T. Ito, S. Nishioka. Angiotensin I-converting enzyme inhibitory dipeptides in an alkaline protease hydrolysate of whey protein // J. Jpn. Soc. Nutr. Food Sci. 1998. - V. 51, N4. - P. 355-359.

64. C.C. Bigelow. On the average hydrophobicity of proteins, and the relation between it and protein structure / J. Theor. Biol. 1967. - V. 16, N 2. - P. 187211.

65. P. Antila, I. Paakkari, AJarvinen, M.J. Matilla, M. Laukkanen, A. Pihlanto-Leppala, P. Mantsalla, J. Hellman./ Opioid peptides derived from in-virto proteolysis of bovine whey proteins // Int. Dairy J. 1991. - V. 1, N4. - P. 215229.

66. A. Pihlanto-Leppala. Bioactive peptides derived from bovine whey proteins: Opioid and ACE-inhibitory // Tr. Food Sc. Tech. 2001. - V. 11, N9-10. - P. 347-356.

67. J.-F. Lapointe, S.F. Gauthier, Y. Pouliot, C.R. Bouchard. Effect of hydrodynamic conditions on fractionation of (3-lactoglobulin tryptic peptidesusing nanofiltration membranes // J. Membrane Sci. 2003. - V. 212, N1-2. - P. 55-67.

68. S. Roufik, S. F. Gauthier, S.L. Turgeon. In vitro digestibility of bioactive peptides derived from bovine P-lactoglobulin // Int. Dairy J. 2006. - V. 16, N4.- P. 294-302.

69. H. Teschemacher, G. Koch, V. Brantl. Milk protein-derived opioid receptor ligands //Biopolymers. 1997. - V. 43, N1. - P. 99-117.

70. H. Teschemacher. Opioid receptor ligands derived from food proteins // Cur. Pharmaceutical Design. 2003. - V. 9, N 16. - P. 1331-1344.

71. M. Tomita, M. Takase, W. Belllami, S. Shimamura. A review: The active peptide of lactoferrin // Acta Paediatrica Japonica. 1994. - V. 36, N6. - P. 585591.

72. H.D. Zucht, M. Raida, K. Adermann, H.J. Magert, W.G. Forssman. Casocidin I: A casein as2-derived peptide exhibits antibacterial activity // FEBS Let. -1995.-V.372.-P. 185-188.

73. P. Jolles, F. Parker, F. Floch, D. Migliore, P. Alliel, A. Zerial, G.H. Werner. Immunostimulating substances from human casein // J. Immunopharmacology.- 1981. -V. 3, N4. P. 363-369.

74. M. Kuba, K. Tanaka, S. Tawata, S. Takeda, M. Yasuda. Angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides isolated from tofuyo fermented soybean food // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. - V. 67, N6. - P. 1278-1283.

75. D.D. Kitts, K. Weiler. Bioactive proteins and peptides from food sources. Applications of bioprocesses used in isolation and recovery // Current Pharmaceutical Design. 2003. - V. 9, N16. - P. 1309-1323.

76. E. D. Marczak, H. Usui, H. Fujita, Y. Yang, M. Yokoo, A.W. Lipkowski. New antihypertensive peptides isolated from rapeseed // Peptides. 2003. - V. 24, N 6.-P. 791-798.

77. P.A. Nazarova, V.P. Yamskova, M.S. Krasnov, I.A. Yamskov. Analysis of regulatory protein isolated from the bovine prostate // Dokl. Biol. Sci. 2005. -V. 405.-P. 467-468.

78. T. Matsui. Production of hypotensive peptide, SVY, from 7S globulin of soybean protein and its physiological functions // Soy Protein Res. 2003. - V. 6, No 1. - P. 73-77.

79. O. Masuda, Y. Nakamura, T. Takano. Antihypertensive peptides are present in aorta after oral administration of sour milk containing these peptides to spontaneously hypertensive rats // J. Nutr. 1996. - V. 126, N 12. - P. 30633068.

80. J. Dziuba, P. Minkiewicz, D. Nalecz, A. Iwaniak. Database of biologically active peptide sequences //Nahrung. 1999. - V. 43, N3. - P. 190-195.

81. V. Vermerssen, J. V. Camp, K. Decroos, L. Van Wijmelbeke, W. Verstraete. The impact of fermentation and in vitro digestion on the formation of ACE inhibitory activity from pea and whey protein // J. Dairy, Sci. 2003. - V. 86, -P. 429-438.

82. J.S. Madsen, Т.О. Ahmt, J. Otte, T. Halkier, K.B. Qvist. Hydrolysis of P~ lactoglobulin by four different proteinases monitored by capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography // Int. Dairy J. -1997.-V. 7,N5. -P. 399-409.

83. J. Leaver, D.G. Dalgleish. The topography of bovine P-casein at an oil-water interface as determined by the kinetics of trypsin-catalysed hydrolisis // Biochim. Biophis. Acta. 1990. - V. 1041, N2. - P. 317-322.

84. В. Thiede, B. Wittmann-Liebold, M. Bienert, E. Krause. MALDI-MS for the C-terminal sequence determination of peptides and proteins degraded by carboxypeptidases Y and P // FEBS Lett. 1995. - V. 357. - P. 65-69.

85. O. Diaz, A.M. Gouldsworthy, J. Leaver. Identification of peptides released from casein micelles by limited trypsinolysis // J. Agric. Food Chem. 1966. -V. 44,N9.-P. 2517-2522.

86. C.E.H. Schmelzer, R. Schops, R. Ulbrich-Hofmann, R. Neubert, K. Raith. Mass-spectrometric characterization of peptides derived by peptic cleavage of bovine P-casein // J. Chromatography A. 2004. - V. 1055, N1-2. - P. 87-92.

87. J. Samskog, D. Bylund, S.P. Jacobsson, K.E. Markides. Miniaturized on-line proteolysis-capillary liquid chromatography mass spectrometry for peptide mapping of lactate dehydrogenase // J. Chromatography A. - 2003. - V. 998, N1-2.-P. 83-91.

88. H.W. Vesper, L. Mi, A. Enada, G.L. Myers. Assessment of microwave-assisted enzymatic digestion by measuring glycated hemoglobin Ale by massspectrometry // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005. - V. 19, N20. - P. 2865-287.

89. B. Pramanik, U. Mirza, Y. Ing, Y. Liu, P. Bartner, P. Weber, A. Bose. Microwave-enhanced enzyme reaction for protein mapping by mass spectrometry: A new approach to protein digestion in minutes // Protein Sci. -2002. V. 11, N10. - P. 2676-2687.

90. J.-C. Rochet, P.T. Lansbury. Amyloid fibrillogenesis: themes and variations // Current Opinion Structural Biol. 2000. - V. 10, N1. - P. 60-68.

91. J. Goers, S.E. Permyakov, E.A. Permyakov, V.N. Uversky, A.L. Fink. Conformational prerequisites for a-lactalbumin fibrillation // Biochemistry. -2002.-V. 41,N41.-P. 12546-12551.

92. R. Ipsen, J. Otte. Nano-structuring by means of proteolysis: rheology of novel gels from a-lactalbumin // Ann. Trans. Nordic Rheology Soc. 2003. -V.l 1, N1. - P. 89-93.

93. R. Ipsen, J. Otte, K.B. Qvist. Molecular self-assembly of partially hydrolysed a-lactalbumin resulting in strong gels with a novel microstructure // J. Dairy Res. 2001. - V.68. - P. 277-286.

94. R. Ipsen, J. Otte, K.B. Qvist. Protease-induced nano-tubular gels from a-lactalbumin // Food colloids, biopolymers and materials. E. Dickinson, T. van Vliet (Eds.) Cambridge: The Royal Society of Chemistry, 2003. - P. 84-92.

95. J. Otte, R. Ipsen, R. Bauer, MJ. Bjerrum, R. Waninge. Formation of amyloid-like fibrils upon limited proteolysis of bovine a-lactalbumin // Int. Dairy J. 2005. - V. 15, N3. - P. 219-229.

96. J. Otte, R. Ipsen, A.M. Ladefoged, J. Sorensen. Protease-induced aggregation of a-lactalbumin: identification of the primary associating fragment // J. Dairy Res. 2004. - V. 71. - P. 88-97.

97. M. Reches, Y. Porat, E. Gazit. Amyloid fibril formation by pentapeptide and tetrapeptide fragments of human calcitonin // J. Biol. Chem. 2002. -V.277, N38. - P. 35475-35480.

98. S. Vauthey, S. Santoso, H. Gong, N. Watson, S. Zhang. Molecular self-assembly of surfactant-like peptides to form nanotubes and nanovesicles // Proc. Natl. Acad. Science. 2002. - V. 99, N8. - P. 5355-5360.

99. I. Svendsen, K. Breddam. Isolation and amino acid sequence of glutamic acid specific endopeptidase from Bacillus licheniformis // Eur. J. Biochem.1992.-V. 204,N1. -P. 165-171.

100. L.C. Wu, P.S. Kim. A specific hydrophobic core in the a-lactalbumin molten globule // J. Mol. Biol. 1998. - V. 280, N1. - P. 175-182.

101. E.D. Chrysina, K. Brew, K.R. Acharya. Crystal structures of apo- and holo-bovine a-lactalbumin at 2. 2k resolution reveal an effect of calcium on inter-lobe interactions // J. Biol. Chem. 2000. - V. 275, N47. - P. 37021-37029.

102. J.T. Jarrett, P.T. Lansbury. Seeding "one-dimentional crystallization" of amyloid: a pathogenic mechanism in Alzheimer's disease and scrapie // Cell.1993. V. 73, No 6. - P. 1055-1058.

103. R.L. Baldwin. Temperature dependence of the hydrophobic interaction in protein folding // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83, N21. - P. 80698072.

104. P.L. Privalov. Stability of proteins. Small globular proteins // Adv. Protein Chem. 1979. - V. 33. - P. 167-241.

105. J.A. Schellman. Temperature, stability, and the hydrophobic interaction // Biophys. J. 1997. - V. 73, N6. - P. 2960-2964.

106. J.M. Sturtevant. Heat capacity and entropy changes in processes involving proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - V. 74, No 6. - P. 2236-2240.

107. P.J. Flory. Principles of polymer chemistry. Cornell University Press: Ithaca, NY, 1953.

108. G.I. Makhatadze, P.L. Privalov. Heat capacity of proteins. I. Partial molar heat capacity of individual amino acids residues in aqueous solution: hydration effect//J. Mol. Biol. 1990. - V. 213, No 2. - P. 375-384.

109. P.L. Privalov, G.I. Makhatadze. Contribution of hydration and non-covalent interactions to the heat capacity effect on protein unfolding // J. Mol. Biol. -1992. V. 224, No 3. - P. 715-723.

110. H.S. Chan, K.A. Dill. Polymer principles in protein structure and stability // Annu. Rev. Biophys. Biophys. Chem. 1991. - V. 20. - P. 447-490.

111. R.B. Hermann. Therory of hydrophobic bonding. II. Correlation of hydrocarbon solubility in water with solvent cavity surface area // J. Phys. Chem. 1972. - V. 76, N19. - P. 2754-2759.

112. A. Ben-Naim. Solvation thermodynamics. New York: Plenum Press, 1987.

113. T. Ooi, M. Oobatake, G. Nemethy, H.A. Scheraga. Accessible surface areas as a measure of the thermodynamic parameters of hydration of peptides // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - V. 84, N10. - P. 3086-3090.

114. M. Renner, H.-J. Hinz, M. Scharf, J.W. Engels. Thermodynamics of unfolding of the a-amylase inhibitor tendamistat. Correlation between accessible surface area and heat capacity // J. Mol. Biol. 1992. - V. 223, N3. -P. 769-779.

115. E. Gallicchio, M.M. Kubo, R.M. Levy. Enthalpy-entropy and cavity decomposition of alkane hydration free energies: numerical results and implications for theories of hydrophobic solution // J. Phys. Chem. B. 2000. -V. 104,N26.-P. 6271-6285.

116. H.S. Ashbaugh, S. Garde, G. Hummer, E.W. Kaler, M.E. Paulaitis. Conformational equilibria of alkanes in aqueous solution: relationship to waterstructure near hydrophobic solutes // Biophys. J. 1999. - V. 77, N2. - P. 645654.

117. H.S. Ashbaugh, E.W. Kaler, M.E. Paulaitis. A universal sufrace area correalation for molecular hydrophobic phenomena // J. Am. Chem. Soc. -1999. V. 121, N39. - P. 9243-9244.

118. W. Kauzmann. Some factors in the interpretation of protein denaturation // Adv. Prot. Chem. 1959. - V. 14. - P. 1-63.

119. C. Tanford. The hydrophobic effect formation of micelles and biological membranes, 2nd Ed. New York: Wiley, 1980.

120. A. Ben-Naim. Hydrophobic interactions. New York: Plenum Press, 1980.

121. K. Soda. Structural and thermodynamic aspects of the hydrophobic effects // Adv. Biophys. 1993. - V.29. - P. 1-54.

122. D. W. Urry, D.C. Gowda, T.M. Parker, C.H. Luan, M.C. Reid, C.M. Harris, A. Patanaik, R.D. Harris. Hydrophobicity scale for proteins based on inverse temperature transitions // Biopolymers. 1992. - V.32. - P.1243-1250.

123. K.A. Dill. Dominant forces in protein folding // Biochemistry. 1990. -V.29, No. 31. - P.7133-7155.

124. K.A. Dill. The meaning of hydrophobicity // Science. 1990. - V.250, (4978). - P.297-298.

125. M.M. Vorob'ev. Hydrophobicity scale of amino acids as determined by absorption millimeter spectroscopy: correlation with heat capacities of aqueous solutions // Z. Naturforsch. 1997. - V.52c. - P.227-234.

126. C. Tenford. Contribution of hydrophobic interactions to the stability of the globular conformation of proteins // J. Am. Chem. Soc. 1962. - V. 84, N22. -P. 4240-4247.

127. P.A. Karplus. Hydrophobicity regained // Prot. Sci. 1997. - V. 6, No. 6. - P. 1302-1307.

128. N.T. Southall, K.A. Dill, A.D.J. Haymet. A view of hydrophobic effect // J. Phys. Chem. B. 2002. - V. 106. - P. 521-533.

129. M. Munson, S. Balasubramanian, K.G. Fleming, A.D. Nagi, R. Obrien, J.M. Sturtevant, L. Regan. What makes a protein protein? Hydrophobic core designs that specify stability and structural properties // Protein Sci. 1996. - V. 5, No 8.-P. 1584-1593.

130. M. Munson, K.S. Anderson, L. Regan. Speeding up protein folding: mutations that increace the rate at which Rop folds and unfolds by over four orders of magnitude // Folding Des. 1997. - V.2. - P.77-87.

131. Y. Maeda, H. Kitano. The structure of water in polymer systems as. revealed by Raman spectroscopy // Spectrosc. Acta A. 1995. - V.51. No. 14. - P.2433-2446.

132. M. Ide, Y. Maeda, H. Kitano. Effect of hydrophobicity of amino acids on the structure of water // J. Phys. Chem. B. 1997. - V.101, No. 35. - P. 70227026.

133. G.E. Walrafen, M.R. Fisher, M.S. Hokmabadi, W.-H. Yang. Temperature dependence of the low- and high-frequency Raman scattering from liquid water // J. Chem. Phys. 1986. - V. 85. - P. 6070.

134. J.L. Green, A.R. Lacey, M.G. Sceats. Spectroscopic evidence for special correlations of hydrogen bonds in liquid water // J. Phys. Chem. 1986. - V.90, N17.-P. 3958-3964.

135. H. Kitano, M. Imai, K. Sudo, M. Ide. Hydrogen-bonded network structure of water in aqueous solution of sulfobetaine polymers // J. Phys. Chem. B. -2002. V.106, No. 43. - P. 11391-11396.

136. D. Hecht, L. Tadesse, L. Walters. Correlating hydration shell structure with amino acid hydrophobicity II J. Am. Chem. Soc. 1993. - V. 115, No. 8. - P. 3336-3337.

137. G.C. Pimentel, A. McClellan. The hydrogen bond. San Francisco, CA: W.H. Freeeman & Co., 1960.

138. D. Hecht, L. Tadesse, L. Walters. Defining hydrophobicity: probing the structure of solute-induced hydration shells by Fourier transform infrared spectroscopy // J. Am. Chem. Soc. 1992. - V. 114, No. 11. - P. 4336-4339.

139. R.A. Atkinson, B. Kieffer. The role of protein motions in molecular recognition: insights from heteronuclear NMR relaxation measurements // Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 2004. - V.44. - P. 141-187.

140. K. Hallenga, S.H. Koenig. Protein rotation relaxation as studied by solvent lH and 2H magnetic relaxation // Biochemistry. 1976. - V. 15. - P. 4255-4264.

141. С.И. Аксенов. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов. — М.: Наука, 1990.

142. В. Sierra-Martin, M.S. Romero-Cano, Т. Cosgrove, В. Vincent, А. Fernandez-Barbero. Solvent relaxation of swelling PNIPAM microgels by NMR// Colloids'Surf. A. -2005. V.270-271. - P. 296-300.

143. R.R. Ruan, J. Han, P.L. Chen, B.C. Martinez. Pulse NMR study of structural characteristic of temperature-sensitive hydrogel // Biotechnol. Techniques. -1997.-V. 11. P. 257-260.

144. U. Kaatze. The dielectric properties of water in its different states of interaction II J. Solution Chem. 1997. - V.26, No. 11. - P. 1049-1112.

145. U. Kaatze, H. Bieler, R. Pottel. Dielectric spectroscopy on aqueous solutions of some zwitterionic amino acids // J. Mol. Liquids. 1985. - V. 30, N2.-P. 101-113.

146. R. Buchner, J. Barthel. Dielectric relaxation in solutions // Annu. Rep. Prog. Chem., Sect. C. 2001. - V. 97. - P. 349-382.

147. А.К. Лященко, B.C. Харькин, А.С. Лилеев, П.В. Ефремов. Комплексная диэлектрическая проницаемость и релаксация в водных растворах метилэтилкетонаю // Журн. физ. химии. 2001. - Т. 75, № 2. - С. 250-256.

148. А. А. Потапов. Двухуровневая диполь-сольватонная модельгдиэлестрической поляризации (квазистатическое поведение) // Журн. физ. химии. 1996. - Т.15, № 12. - С. 45-55.

149. Т. Kamei, М. Oobatake, М. Suzuki. Hydration of apomyoglobin in native, molten globule, and unfolded states by using microwave dielectric spectroscopy // Biophys. J. 2002. - V. 82. - P. 418-425.

150. P. Potong, R. Pottel, U. Kaatze. Water-ethanol mixtures at different compositions and temperatures. A dielectric relaxation study // J. Phys. Chem. A. 2000. - V. 104. - P. 7420-7428.

151. E. Hanke, K. von Roden, U. Kaatze. Hydrogen network fluctuations of associating liquids: Dielectric relaxation of ethylene glycol oligomers and their mixtures with water // J. Chem. Phys. 2006. - V. 125, N8, P. 84507.

152. T. Sato, R. Buchner. Cooperative and molecular dynamics of alcohol/water mixtures: the view of dielectric spectroscopy // J. Mol. Liquids. 2005. - V. 117.-P. 23-31.

153. B.A. Гайдук, B.A. Кудряшова, Л.А. Паршина, А.С. Фалеев, Ю.И. Хургин. Поглощение ММ излучения водными растворами глицина. Влияние состояния ионизации аминокислот // Докл. Акад. Наук СССР. -1974.-Т. 214.-С. 135-138.

154. U. Kaatze, R. Behrends, R. Pottel. Hydrogen network fluctuations and dielectric apectrometry of liquids // J. Non-Crystalline Solids. 2002. - V. 305, N1-3.-P. 19-28.

155. R. Pottel, D. Adolph, U. Kaatze. Dielectric relaxation in aqueous solutions of some dipolar organic molecules // Ber. Bunsenges. Physik. Chem. 1975. -V. 79, N3. - P. 278-285.

156. Ю.И. Хургин. Гидратация глобулярных белков // Ж. Всесоюзного химического общества им. Д.И. Менделеева. — 1976. N 6. - 684-690.

157. А.С. Фалеев, В.А. Кудряшова, В.И. Гайдук, Н.М. Росуканый, А.Б. Григорьев. Исследование ближней гидратации ионов в водных растворах электролитов методом ММ спектроскопии. // Ж. физ. химии. 1977. - N 5. -С. 1153-1158.

158. Ю.И. Хургин, О.В. Лебедев, Е.Ю. Максарева, В.А. Завизион, В.А. Кудряшова, М.М. Воробьев, Г. А. Орехова, А.Н. Даниленко. Межмолекулярные взаимодействия в водных растворах мебикара // Известия АН, Сер. хим. 1995. - №6. - С. 1178-1179.

159. А.К. Lyashchenko, Т.А. Novskova. Structural dynamics of water and its dielectric and absorption spectra in the range 0-800 cm"1 // J. Mol. Liquids. -2006.- V. 125, N2-3.-P. 130-138.

160. В.Я. Малеев, В.А. Кашпур, Е.Ю. Щеголева. Диэлектриметрия в миллиметровом диапазоне длин волн как метод исследования взаимодействия биополимеров с водой // Нетепловые эффекты миллиметрового излучения (ред. Н.Д. Девятков) М: ИРЭ АН СССР, 1981.-С. 26-41.

161. Y.I. Khurgin, E.Y. Maksareva. Urea generated free rotating watermolecules are active in the protein unfolding process // FEBS Let. - 1993. -V. 315, N2. P. 149-152.

162. А.А. Замятнин, Дилатометрия растворов белков, Наука, Москва, 1973.

163. Ю.И.Хургин, А.А.Баранов, М.М.Воробьев. Гидрофобная гидратация алифатических аминокислот // Изв. АН. Сер. хим. 1994. - №11. - С. 20312033.

164. В.А. Завизион, В.А. Кудряшова, Ю.И.Хургин. Влияние а-аминокислот на взаимодействие ММ-излучения с водой // Миллиметровые волны в биологии и медицине. — 1994. №3. - С. 46-51.

165. М.М. Воробьев, А.Н.Даниленко, Ю.И.Хургин. Корреляция индексов гидрофобной гидратации с теплоемкостями водных растворов алифатических аминокислот //10 Конференция «Миллиметровые волны в медицине» М.: ИРЭ РАН, 1995. - С. 216.

166. М.М. Воробьев, А.А. Баранов, В.М. Беликов, Ю.И. Хургин. Исследование гидратации а-аминокислот методом абсорбционной миллиметровой спектроскопии // Изв. АН, Сер. хим. 1996. - Т. 45. - С. 618-622.

167. М.М. Vorob'ev. Bound water measurements for aqueous protein solutions and food gels//Colloids Surf. B. 2003.-V.31, No. 1-4.-P. 133-140.

168. J.B. Hasted // Aqueous Dielectrics A.D. Buckingham (Ed.) London: Chapman and Hall, 1973.

169. M. Kent. Complex permittivity of protein powders at 9.4 GHz as a function of temperature and hydration // J. Phys. D: Appl. Phys. 1972. - V. 5, No. 2. -P. 394-409.

170. F. Henry, A.J. Berteaud. New measurement technique for the dielectric study of solutions and suspensions // J. Microwave Power. 1980. - V.15. -P.65-72.

171. D. Rosen. Dielectric properties of protein powders with adsorbed water // Trans. Faraday Soc. 1963. - V. 59. - P.2178-2191.

172. A.W. Kraszewski, S.O. Nelson. Resonant cavity perturbation some new applications of an old measuring technique // J. Microwave Pow. Electromagn. Ener. - 1996. - V. 31, P. 178-187.

173. F. Henry, L.C. Costa, M. Serpelloni. Dielectric method for the determination of aw // Food Chem. 2003. - V.82, No. 1. - P.73-77.

174. F. Henry, M. Gaudillat, L.C. Costa, F. Lakkis. Free and/or bound water by dielectric measurements // Food Chem. 2003. - V.82, No. 1. - P. 29-34.

175. T.Sato, A.Chiba, R.Nozaki. Hydrophobic hydration and molecular association in methanol-water mixtures studied by microwave dielectric analysis // J. Chem. Phys. 2000. V. 112, No. 6. - P. 2924-2932.

176. H-X. Zhou. A unified picture of protein hydration: prediction of hydrodynamic properties from known structures // Biophys. Chem. 2001. - V. 93,No. 2-3.-P. 171-179.

177. M.M. Teeter. Water-protein interactions: theory and experiment // Annu. Rev. Biophys. Chem. 1991. - V. 20. - P. 577-600.

178. H. Durchschlag, P. Zipper. Modeling the hydration of proteins: prediction of structural and hydrodynamic parameters from X-ray diffraction and scattering data // Eur. Biophys. J. 2003. - V. 32, No. 5. - P. 487-502.

179. I.D. Kuntz, W. Kauzmann. Hydration of proteins and polypeptides // Adv. Protein Chem. 1974. - V. 28. - P. 239-345.

180. I.D. Kuntz. Hydration of macromiolecules. III. Hydration of polypeptides // J. Am. Chem. Soc. 1971. - V. 93. - P. 514-516.

181. S. Pal, J. Peon, A. Zewail. Biological water at the protein interface: dynamical solvation probed directly with femosecond resolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - V. 99, No. 4. - P. 1763-1768.

182. W. Kauzmann, K. Moore, D. Sculz. Protein densities from X-ray crystallographic coordinates //Nature. 1974. - V. 248, No. 5448. - P. 447-449.

183. Д.С. Чернавский, Ю.И. Хургин, С.Э. Шноль. Об упругих деформациях белка-фермента// Молекулярная биология. 1967. - Т. 1. - С. 419-424.

184. М.В. Волькенштейн. Молекулярная биофизика. М: Наука, 1975. - С. 616.

185. I.M. Klotz. Comparison of molecular structure of proteins: helix content, distribution of apolar residues // Arch. Biochem. Biophys. 1970. - V. 138, No. 2. - P. 704-706.

186. M. Oobatake, T. Ooi. Hydration and heat stability effects of protein unfolding // Prog. Biophys. Mol. Biol. 1993. - V. 59, No. 3. - P. 237-284.

187. N. Thanki, J. Thornton, J. Goodfellow. Distributions of water around amino acid residues in proteins // J. Mol. Biol. 1988. - V. 202, No. 3. - P. 637657.

188. L. Kuhn, M. Siani, M. Pique, C. Fisher, E. Getzoff, J. Tainer. The interdependence of protein sufrace topography and bound water molecules revealed by surface accessibility and fractal density measures // J. Mol. Biol. -1992.-V. 228, No. l.-P. 13-22.

189. H. Durchschlag, P. Zipper. Modelling of protein hydration // J. Phys. Condens. Matter. 2002. - V. 14. - P. 2439-2452.

190. M. Connolly. The molecular surface package // J. Mol. Graph. 1993. - V. 11.-P. 139-141.

191. Y. Vorobjev, SIMS: computation of a smooth invariant molecular surface // Biophys. J. 1997. - V. 73. - P. 722-732.

192. H. Durchschlag, P. Zipper. Modeling of protein hydration with respect to X-ray scattering and hydrodynamics // Prog. Colloid Polym. Sci. 2002. V. 119.-P. 131-140.

193. R.H. Henchman, J.A. McCammon. Extracting hydration sites around proteins from explicit water simulations // J. Comput. Chem. 2002. - V. 23. -P. 861-869.

194. C. Bon, M.S. Lehmann, C. Wilkinson. Quasi-Laue neutron diffraction study of the water arrangement in crystals of triclinic hen egg-white lysozyme // Acta Crystallogr. Sect. D. 1999. - V. 55. - P. 978-987.

195. Y. Tamai, H. Tanaka, K. Nakanishi. Molecular dynamics study of polymer-water interaction in hydrogels. 1. Hydrogen-bond structure // Macromolecules. -1996. V. 29, N21. - P. 6750-6760.

196. V.V. Vasilevskaya, P.G. Khalatur, A.R. Khokhlov. Conformational polymorphism of amphiphilic polymers in poor solvent // Macromolecules. -2003. V. 36, N26. - P. 10103-10111.

197. F. Bruge, S.L. Fornili, G.G. Malenkov, M.B. Palma-Vittorelli, M.U. Palma. Solvent-induced forces on a molecular scale: non-additivity, modulation and causal relation to hydration // Chem. Phys. Letters. 1996. - V. 254, N5-6. - P. 283-291.

198. C. Rocchi, A.R. Bizzarri, S. Cannistraro. Water residence times around copper plastocyanin: a molecular dynamics simulation approach // Chem. Phys. 1997.-V. 214. - P. 261-276.

199. F. Bruge, G. Cottone, S.L. Fornili. Solute-solute solvent-induced interaction: molecular dynamics simulation of a mixed model system in water // Chem. Phys. Letters. 1995. - V. 235, N5-6. - P. 402-409.

200. V. Martorana, G. Corongiu, M.U. Palma. Correlated solvent-induced forces on a protein at single residue resolution: relation to conformation, stability, dynamics and function // Chem. Phys. Letters. 1996. - V. 254. - P. 292-301.

201. R. W. Impey, P.A. Madden, I.R. McDonald. Hydration and mobility of ions in solution // J. Phys. Chem. 1983. - V. 87, N 8. - P. 5071-5083.

202. A.E. Garcia, L. Stiller. Computation of the mean residence time of water in the hydration shells of biomolecules // J. Comput. Chem. 1993. V. 14, N11. -P. 1396-1406.

203. C.L. Brooks, M. Karplus. Solvent effects on protein motion and protein effects on solvent motion: Dynamics of the active site region of lysozyme // J. Mol. Biol. 1989. - V. 208, N1. - P.159-181.

204. Y. Tamai, H. Tanaka, K. Nakanishi. Molecular dynamics study of polymer-water interaction in hydrogels: Hydrogen-bond structure // Macromolecules. -1996. -V. 29, N21. P. 6750-6760.

205. Y. Tamai, H. Tanaka, K. Nakanishi. Molecular dynamics study of polymer water interaction in hydrogels. 2. Hydrogen — bond dynamics // Macromolecules. - 1996. - V. 29, N21. - P. 6761-6769.

206. Y. Hirokawa, T. Tanaka. Volume phase transition in a nonionic gel // J. Chem. Phys. 1984. - V. 81, N12. - P. 6379-6380.

207. P.G. de Gennes. Kinetics of collapse for a flexible coil // Journal de Physique Lettres. 1985. - V. 46, N 14. - P. 639-642.

208. R. Motokawa, M. Annaka, T. Nakahira, S. Koizumi Small-angle neutron acattering study on microstructure of poly(N-isopropylacrylamide)-blok-poly(ethyleneglycol) in water // Colloids Surf. B. 2004. V. 38. - P. 213-219.

209. B. Zagrovic, C.D. Snow, M.R. Shirts, V.S. Pande. Simulation of folding of a small alpha-helical protein in atomistic detail using worldwide-distributed computing // J. Mol. Biol. 2002. - V. 323, N5. - P. 927-937.

210. S. Williams, T.P. Gausgrove, R. Gilmanshin, K.S. Fang, R.H. Callender, R.H. Woodruff, R.B. Dyer. Fast events in protein folding: Helix melting and formation in small peptide // Biochemistry. 1996. - V. 35, N3. - P. 691-697.

211. M.R. Caplan, E.M. Schwartzfarb, S. Zhang, R.D. Kamm, D.A. Lauffenburger. Control of self-assembling oligopeptide matrix formation through systematic variation of amino acid sequence // Biomaterials. 2002. -V.23, N1. - P.219-227.

212. Y. Zhu, X. Fu, T. Wang, A. Tamura, S. Takada, J.G. Saven, F. Dai. Guiding the search for a protein's maximum rate of folding // Chem. Physics. 2004. -V. 307.-P. 99-109.

213. M. Sadqi, L.J. Lapidus, V. Munoz. How fast is protein hydrophobic collapse //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - V. 100, N21. -P. 12117-12122.

214. Y. Duan, P.A. Kollman. Pathways to a protein folding intermediate observed in a 1-microsecond simulation in aqueous solution // Science. 1998. - V. 282, N5390.-P. 740-744.

215. J. Klein-Seetharaman, M. Oikawa, S.B. Grimshaw, J. Wirmer, E. Duchardt, T. Ueda. Long-range interactions within a non-native protein // Science. 2002. — V. 295,N5560. -P. 1719-1722.

216. S.S. Plotkin. Speeding protein folding beyond the Go model: how a little frustration sometimes helps // Proteins: Struct. Funct. Gent. 2001. V. 45. - P. 337-345.

217. M.M. Vorob'ev, M. Dalgalarrondo, J.-M. Chobert, T. Haertle. Kinetics of p-casein hydrolysis by wild-type and engineered trypsin // Biopolymers. 2000. -V. 54,N5.-P. 355-364.

218. V. Shellenberger, G.W. Turch, L. Hedstrom, W. Rutter, Mapping the S' subsites of serine proteases using acyl transfer to mixtures of peptide nucleophiles. Biochemistry, 1993, 32, N16, 4349-4353.

219. G.P. Hess, J. McConn, Ku.E. McConkey. Studies of the activity of a-chymotrypsin // Phil. Trans. Roy. Soc. London. 1970. - V. B257, N 813. - P. 89-104.

220. L. Hedstrom, T.-Y. Lin, W. Fast. Hydrophobic interactions control zymogen activation in the trypsin family of serine proteases // Biochemistry. — 1996. V. 35, N14. -P. 4515-4523.

221. A.R. Fersht. Conformational equlibria in a- anf 5-chymotiypsin: The energetics and importance of the salt bridge // J. Mol. Biol. 1972. - V. 64, N2. - P. 497-509.

222. E.T. Денисов. Кинетика гомогенных химических реакций. М.: Высшая школа, 1978.

223. М.М. Воробьев, Е.А. Пасконова, С.В. Витт, В.М. Беликов. Зависимость свойств хроматографических фракций протосубтилиновых гидролизатов казеина от условий протеолиза // Биотехнология. 1986. - №4. - С. 40-45.

224. М.М. Воробьев, И.Ю. Левичева, В.М. Беликов. Исследование начальной кинетики гидролиза белков молока химотрипсином // Прикл. биохимия микробиол. 1996. - Т. 32, №2, - С. 242-246.

225. A. Kato, К. Komatsu, К. Fujimoto, К. Kobayashi. Relationship between surface functional properties and flexibility of proteins detected by the protease susceptibility // J. Agric. Food Chem. 1985. - V. 33, N5. - P. 931-934.

226. L. Savoie, S.F. Gauthier. Dialysis cell for the in vitro measurements of protein digestibility // J. Food Sci. 1986. - V. 51. - P. 494-498.

227. M.M. Vorob'ev, G. Parent, L. Savoie. Quantitative comparison of casein and repeseed proteolysis by pancreatin // Nahrung. 1996. - V. 40, N 5. - P. 248-255.

228. M.M.Vorob'ev, I.A. Goncharova. Computer simulation of proteolysis. Peptic hydrolysis of partially demasked P-Lactoglobulin // Nahrung. 1998. -V. 42, N 2, - P. 60-66.

229. J.C. Powers, D. Harley, D.V. Myers. Substrate specificity of porcine pepsin //Adv. Exp. Biol. Med. 1977. - V. 95. N1. - P. 141-157.

230. M. Dalgalarrondo, E. Dufour, J.M. Chobert, C. Bertrand Harb, T. Haertle. Proteolysis of P-lactoglobulin and P-casein by pepsin in ethanolic media // Int. Dairy J. 1995.-V. 5,N l.-P. 1-14.

231. P. Minkiewicz, J. Dziuba, M. Darewicz, A. Iwaniak, M. Dziuba, D. Nalecz. Food peptidomics // Food Technol. Biotechnol. 2008. - V. 46, N 1. - P. 1-10.

232. S. Miller, J.Janin, A.M. Lesk, C. Chothia. Interior and surface of monomeric proteins // J. Mol. Biol. 1987. - V. 196, N 3. - P. 641-656.

233. R.D. Wanchope, R. Haque. Aqueous solutions of nonpolar compounds. Heat-capacity effects // Can. J. Chem. 1972. - V. 50, N1, - P. 133-138.

234. S. Cabani, P. Gianni, V. Mollica, L. Lepori. Group contributions to the thermodynamic properties of non-ionic organic solutions in dilute aqueous solutions//J. Sol. Chem.-1981.-V. 10, N8.-P. 563-595.

235. P.L. Privalov, G.I. Makhatadze. Contribution of hydration and non-covalent interactions to the heast capacity effect of protein unfolding // J. Mol. Biol. -1992. -V. 224, N 3. P. 715-723.

236. S.W. Benson. Thermochemical kinetics. New York: J.Wiley and Sons, INC., 1968. P. 308.

237. M.M. Воробьев, A.H. Даниленко. Оценка гидратации полярных групп а-аминокислот методом дифференциальной сканирующей калориметрии // Изв. АН, Сер. хим. 1996. - №9. - С. 2237-2242.

238. A.W. Hakin, M.M. Duke, S.A. Klassen, R.M. McKay, K.E. Prenss. Apparent molar heat capacities and volumes of some aqueous solutions of aliphatic amino acids at 288.15, 298.15, 313.15, and 328.15 К // Can. J. Chem. 1994. - V. 72, N 2. - P. 362-368.

239. S. Cabani, G. Conti, E. Matteoli, A.Tani. Apparent molal heat capacities of organic compounds in aqueous solution. Part 3. — co-Amino acids and related compounds // J. Chem. Soc., Faraday Trans. 1. 1977. - V. 73. - P. 476-486.

240. A. Cooper, D.D. MacNicol. Chiral host-guest complexes: interaction of a-cyclodextrin with optically active benzene derivatives // J. Chem. Soc. Perkin II.- 1978.-P 760-763.

241. A. Cooper, К. E. McAuley-Hecht. Microcalorimetry and the molecular recognition of peptides and proteins // Phil. Trans. R. Soc. London, A. 1993. -V. 345. - P. 23-35.

242. J. Janin. Surface area of globular proteins // J. Mol. Biol. 1976. - V. 105, Nl.-P. 13-14.

243. T. van Vliet, C.J.A.M. Keetels. Effect of preheating of milk on the structure of acidified milk gels // Neth. Milk Dairy J. 1995. - V. 49. - P. 27-35.

244. M. Kalab, D.B. Emmons, A.G. Sargant. Milk gel structure. V. Microstructure of yoghurt as related to heating of milk // Milchwissenscnschaft. 1976.-V. 31.-P. 402-408.

245. F.L. Davies, P.A. Shankar, P.E. Brooker, D.G. Hobs. A heat induced change in the ultrastructure of milk and its effect on gel formation in yoghurt // J. Dairy Res. 1978. - V. 45. - P. 53-58.

246. Б.И. Курганов. Оценка активности молекулярных шаперонов в тест-системах, основанных на подавлении агрегации белков // Успехи биол. химии. 2002. - Т. 42. - С. 89-138.

247. М. Meewes, J. Ricka, М. De Silva, R. Nyffenegger and T. Binkert, Coil-globule transition of the poly(N-isopropylacrylamide): a study of surfactant effects by light scattering // Macromolecules. 1991. - V. 24, N 21. - P. 58115816.

248. M.M. Vorob'ev, N.G. Faleev. Water ordering measurements in the aqueous polymer systems by waveguide dielectric resonance method // Mendeleev Commun. 2005. - N6. - P. 259-261.

249. M.M. Vorob'ev, N. Churochkina, A. Khokhlov, E. Stepnova. Hydration characterization of hydrophobically modified polymers by dielectric measurements in the millimeter range // Macromol. Bioscience. — 2007. V. 7, N4.-P. 475-481.

250. C.E. Flynn, J.W. Goodwin. Association of acrylamide dodecylmethacrylate copolymers in aqueous solution // Polymers as rheological modifiers. D.N. Schultz, J.E. Glass (Eds.) - New York: American Chemical Society, 1991. -P.191.

251. V.G. Babak, J. Desbrieres, V.E. Tikhonov. Dynamic surface tension and dilational viscoelasticity of absorption layers of a hydrophobically modified chitosan // Colloids Surfaces A. 2005. - V. 255, N1-3. - P. 119-130.

252. В.И. Лозинский, И.А. Сименел, E.A. Курская, B.K. Кулакова, В.Я. Гринберг, А.С. Дубовик, И.Ю. Галаев, Б. Маттиассон, А.Р.Хохлов. Синтез и свойства «белковоподобного» сополимера // Докл. Акад. наук. -2000. Т. 375. - С. 637-640.

253. V.I. Lozinsky, I.A. Simenel, E.A. Kurskaya, V.K. Kulakova, I.Yu. Galaev, B. Mattiasson, V.Ya. Grinberg, N.V. Grinberg, A.R. Khokhlov. Synthesis of N-vinylcaprolactam polymers in aqueous media // Polymer. 2000. - V. 41. - P. 6507-6518.

254. V.I. Lozinsky, I.A. Simenel, V.K. Kulakova, E.A. Kurskaya, T.A. Babushkina, T.P. Klimova, T.V. Burova, A.S. Dubovik, V.Ya. Grinberg, I.Yu.

255. Galaev, В. Mattiasson, A.R. KhokHIbv.^ Synthesis and studies of N-vinylcaprolactam / N-vinylimidazole copolymers that exhibit the "proteinlike" behaviour in aqueous media // Macromolecules. 2003. - V.36. - P. 73087323.

256. L. Briand, J.-M. Chobert, J. Tauzin, N. Declerck, J. Leonil, D. Molle, V. Tran, T. Haertle. Regulation of trypsin activity by Cu chelation of the substrate binding site // Protein Eng. 1997. - V. 10, N5. - P. 551-560.

257. C.A. Zittle, J.H. Custer. Purification and some of the properties of as-casein and к-casein//J. Dairy Sci. 1963. - V. 46, N 11.-P. 1183-1188.

258. H. Altschuler, Dielectric constant. Chapter 9 // Handbook of microwave measurements (M. Sucher and J. Fox, eds.) New York: Brooklyn Polytechnic Press, 1963.-P. 530-536.

259. H.E. Bussey. Measurement of RF properties of materials a survey // Proc. IEEE. - 1967. - V. 55, N6. - P. 1046-1053.

260. S. Trabelsi, S.O. Nelson. Temperature-dependent behaviour of dielectric properties of bound water in grain at microwave frequencies // Meas. Sci. Technol. 2006. - V.17, N8. - P. 2289-2293.

261. Беляков E.B. A.c. №1465749 // Изобретения и открытия. 1989. - №10. -С. 182-183.

262. А.А. Зинченко, Л.Д. Румш, В.К. Антонов Кинетический и термодинамический анализ специфичности пепсина // Биоорган, химия. -1977. Т. 3. № 12. С. 1663 - 1670.