Хроматографическое исследование физико-химических процессов получения агара тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Суховерхов, Святослав Валерьевич

• Суховерхов, Святослав Валерьевич
• кандидат химических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат химических наук Суховерхов, Святослав Валерьевич

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Высокоэффективная эксклюзионная хроматография биополимеров

1.1.1. Механизм эксклюзионного разделения

1.1.2. Сорбенты для эксклюзионной хроматографии 10 1.1.3. Неэксклюзионные взаимодействия при анализе белков и полисахаридов

1.1.3.1. Ионные эффекты

1.1.3.2. Гидрофобные взаимодействия

1.1.3.3. Адсорбция

1.1.3.4. Внутримолекулярные и межмолекулярные взаимодействия

1.1.4. Калибровка хроматографической системы и расчет молекулярно-массовых характеристик

1.1.4.1. Калибровка колонок по коммерческим стандартам полисахаридов

1.1.4.2. Калибровка колонок по узким фракциям данного полисахарида

1.1.4.3. Калибровка колонок по полидисперсным образцам данного полисахарида

1.1.4.4. "Универсальная" калибровка

1.2. Строение агара и агарозы

1.3. Методы исследования строения агара и агарозы 30 1.3.1. Химические методы

1.3.2. Спектральные методы

1.4. Производство агара и агарозы

1.4.1. Технология получения агара из A. tobuchiensis

1.4.2. Технология получения агара из G. amansii

1.4.3. Способы получения агарозы

Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1. Объекты исследования

2.1.1. Получение агара из A. tobuchiensis

2.1.2. Получение агара из G. amansii

2.2. Методы исследования

2.2.1. Источники случайных и систематических ошибок в хроматографическом анализе и методы их устранения

2.2.2. Методика исследования основных физико-химических процессов получения агара

2.2.3. Определение молекулярной массы полисахаридов

2.2.4. Определение структуры полисахаридов

2.2.5. Физико-химическая характеристика полисахаридов

Глава 3. Результаты и их обсуждение

3.1. Разделение и идентификация смесей белков и полисахаридов методом ВЭЭХ 54 3.2 Исследование основных физико-химических процессов получения агара из A. tobuchiensis

3.2.1. Исследование процесса предварительной обработки водоросли

3.2.2. Исследование процесса экстракции агара

3.2.3. Исследование процесса очистки гелей экстрактов

3.2.4. Физико-химическая характеристика фракций агара из A. tobuchiensis IS

3.3. Исследование влияния условий экстракции на физикохимические свойства агара из G. amansii

3.4. Получение агарозы из A. tobuchiensis 92 Выводы 95 Список литературы 97 Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Хроматографическое исследование физико-химических процессов получения агара»

Актуальность проблемы. Агар и агароза - это гелеобразующие полисахаридные препараты, получаемые из некоторых видов красных водорослей относящихся к родам Gelidium, Gracilaria, Pterocladia и Ahnfeltia [16]. Агар и агарозу широко используют в биохимии, иммунохимии, молекулярной биологии, микробиологии, производстве сорбентов для аффинной, ионообменной и эксклюзионной хроматографии, а также в пищевой и фармацевтической промышленности.

В России основным источником агара являются красные водоросли Ahnfeltia plicata, произрастающая в Белом море, и Ahnfeltia tobuchiensis, произрастающая в дальневосточных морях [2, 7, 8]. Существуют технологии получения из A. tobuchiensis агара пищевого, микробиологического и особой очистки. Однако, без дополнительной очистки эти препараты не пригодны для проведения электрофореза, иммунологических, вирусологических и биохимических исследований. Потребности в высокоочищенном агаре и агарозе удовлетворяются за счет импорта.

В ряде публикаций [9-12] была эмпирически показана возможность

13 получения из A. tobuchiensis не только агара, но и агарозы. Методами С ЯМР-спектроскопии и рентген-дифракционного анализа было доказано, что полисахарид из A. tobuchiensis лишь незначительно отклоняется от структуры истинной агарозы [10, 12, 13]. Основываясь на этих данных, с 1992 г. в ТИНРО-центре была начата разработка технологии получения агарозы из А. tobuchiensis. Для разработки данной технологии потребовалось исследовать процессы предварительной обработки водоросли, экстракции и очистки агара, так как они, в основном, определяют выход и качество продукта. Однако стандартные методы анализа агара [2, 14, 15] не подходили для таких исследований.

Проблема анализа состава углеводов в продукции на разных стадиях технологического процесса является актуальной не только в агаровом производстве, но и в других отраслях пищевой промышленности [16-19]. В настоящее время для анализа и разделения смесей углеводов наиболее перспективной считается высокоэффективная эксклюзионная хроматография (ВЭЭХ) [18-23]. Поэтому для изучения основных физико-химических процессов, протекающих при предварительной обработки водоросли, экстракции и очистки агара решено было использовать метод ВЭЭХ.

Цель работы: исследовать основные физико-химические процессы получения агара.

Основные задачи работы:

Подобрать условия хроматографического анализа смесей белков и полисахаридов.

Методом ВЭЭХ исследовать физико-химические процессы, протекающие при предварительной обработки, экстракции и очистки агара из красной водоросли Ahnfeltia tobuchiensis.

Методом ВЭЭХ изучить влияние условий экстракции на физико-химические свойства агара из красной водоросли Gelidium amansii. Научная новизна. Впервые методом ВЭЭХ исследованы основные физико-химические процессы, протекающие при предварительной обработки, экстракции и очистке агара из красной водоросли A. tobuchiensis. Изучено влияние условий экстракции на физико-химические свойства агара из G. amansii.

Практическая значимость работы. Разработана методика хроматографического анализа смесей белков и полисахаридов, применимая для исследования и контроля физико-химических процессов получения агара. Разработан простой и недорогой способ получения агарозы из красной водоросли A. tobuchiensis.

На защиту выносятся:

Методика хроматографического анализа смесей белков и полисахаридов, применимая для исследования физико-химических процессов получения агара.

Результаты исследования основных физико-химических процессов получения агара из A. tobuchiensis.

Результаты исследования влияния условий экстракции на физико-химические свойства агара из G. amansii.

Способ получения агарозы из A. tobuchiensis.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Суховерхов, Святослав Валерьевич

Выводы

1. Методом ВЭЭХ исследованы основные физико-химические процессы, протекающие при получении агара из красных водорослей А. tobuchiensis и G. amansii.

2. Разработана методика хроматографического анализа смесей белков и полисахаридов, применимая для исследования физико-химических процессов получения агара. Показано, что применение ВЭЭХ позволяет глубоко понять и эффективно контролировать основные процессы технологии получения агара из красных водорослей.

3. Исследован процесс предварительной обработки A. tobuchiensis. Установлено, что в процессе предварительной обработки водоросли под действием Са(ОН)2 и температуры происходит разрушение внутри- и межмолекулярных связей белков и полисахаридов в тканях водоросли и начинается их диффузия в раствор.

4. Исследован процесс экстракции агара из A. tobuchiensis. Установлено, что в процессе экстракции происходит окончательное разрушение внутри- и межмолекулярных связей белков и полисахаридов в тканях водоросли и идет их молекулярная диффузия из сырья в экстрагент. Лимитирующей стадией процесса экстракции агара является молекулярная диффузия, а процесс экстракции белковых примесей лимитирует стадия разрушения внутри- и межмолекулярных связей.

5. Исследован процесс очистки агара из A. tobuchiensis. Установлено, что при промывании водой гелей экстрактов за счет диффузии происходит удаление белковых и низкомолекулярных примесей, а также сульфатрованной фракции агара (агаропектина).

6. Исследованы физико-химические свойства и структура фракций агара из A. tobuchiensis. Установлено, что из первого экстракта получается фракция агара, а из второго и третьего экстрактов - фракции агарозы.

7. Методом ВЭЭХ исследовано влияние условий экстракции на физико-химические свойства агара из G. amansii. Установлено, что при предварительной обработке водоросли раствором ИагСОз происходит удаление белковых примесей, повышается выход и улучшаются гелеобразующие свойства агара. При экстракции 0,01 N раствором H2SO4 происходит деструкция агара, что приводит к снижению гелеобразующих свойств вплоть до их полного исчезновения.

8. На основании полученных данных разработан способ получения агарозы из A. tobuchiensis.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Суховерхов, Святослав Валерьевич, 2000 год

1. Кизеветтер И.В. Технология дальневосточного агара // Известия ТИНРО. 1952. Т. 36.-310 С.

2. Кизеветтер И.В., Грюнер B.C., Евтушенко Л.А Переработка морских водорослей и других промысловых водных растений. М.: Пищевая промышленность, 1967. - 416 С.

3. Возжинская В.Б., Цапко А.С., Блинова Е.И., Калугина А.А., Петров Ю.Е. Промысловые водоросли СССР: Справочник. М.: Пищевая промышленность, 1971. С. 172-189.

4. Барашков Г.К. Сравнительная биохимия водорослей. М.: Пищевая промышленность, 1972. -336 С.

5. Зайцев В.П., Ажгихин КС., Ганделъ В.Г. Комплексное использование морских организмов. -М.: Пищевая промышленность, 1980. С. 26-38.

6. Богданов В. Д., Сафронова Т. М. Структурообразователи и рыбные композиции. М.: ВНИРО, 1993. С. 34-38.

7. Кизеветтер И.В. Промысел и обработка морских растений в Приморье. Владивосток: Дальневосточное книжное издательство, 1966. С. 72-85.

8. Арзамасцев И. С. Атлас промысловых морских беспозвоночных, водорослей и трав Приморского края. Владивосток: Арт-Пилот, 1997. -52 С.

9. Коллист А., Парцис А., Пюсса Г. Выделение, характеристика и использование полисахаридов агароносных водорослей // Изв. АН ЭССР. Сер. Химия. 1980. Т. 29. № 2. С. 123-150.

10. Труус К, Вялимяэ Т. , Вахер М., Коллист А. Выделение, характеристика и использование полисахаридов агароносныхводорослей. 13С ЯМР- спектроскопия агарозных носителей // Изв. АН ЭССР. Химия. 1988. Т. 37. №3. С. 190-194.

11. Труус К. Исследование строения и модификации агарозы из красной водоросли Ahnfeltia tobuchiensis: Автореф. дис. . канд. хим. наук. М., 1994.- 26 С.

12. Aabloo A., Haav A., Tipp Н., Truus К. Agaroosi rontgenograafilisest uurimisest // Eesti Fiiusikka Seltsi Aastaraamat 1989/90. Tartu: Eesti Futisikka Selts, 1991. P. 89-97.

13. Головин A.H. Контроль производства продукции из морских водорослей и трав. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984. 156 С.

14. ГОСТ 26185-84. Водоросли морские, травы морские и продукты их переработки. Методы анализа. Взамен ГОСТ 13929-68, ГОСТ 1393068, ГОСТ 22455-77, ГОСТ 6730-75, ГОСТ 16280-70; Введ. с 7.05.84. -54 С.

15. Нифантъева JI.B. Хроматографическое определение основных компонентов пищевых продуктов. В кн.: Методы анализа пищевых продуктов: Проблемы аналитической химии. Т. VIII. - М.: Наука, 1988. С. 92-104.

16. Попадич И. А., Маслова Л.Г. Некоторые аспекты применения физических и физико-химических методов для анализа пищевыхпродуктов. В кн.: Методы анализа пищевых продуктов: Проблемы аналитической химии. Т. VIII. - М.: Наука, 1988. С. 9-14.

17. Рудаков О.Б., Полянский К.К. Современная жидкостная хроматография углеводов // Молочная промышленность. 1999. № 4. С. 25-27.

18. Рудаков О.Б., Соколов М.И., Болдырев С.Ю., Шестаков А.С. Гель-проникающая хроматография смесей олиго-, ди- и моносахаридов // Изв. вузов. Пищевая технология. 1999. № 5. С. 92-94.

19. Honda S. Review. High performance liquid chromatography of mono- and oligosaccharides// Anal. Biochem. 1984. V. 140. P. 1-47.

20. Членов М.А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в разработке медицинских препаратов на основе биополимеров: Автореф. дис. .докт. хим. наук. М., 1991. - 48 С.

21. Rochas С., Lahaye М. Average molecular weight and molecular weight distribution of agarose and agarose-type polysaccharides // Carbohyd. Polymers. 1989. V. 10. P. 289-298.

22. Murano E., Brandolin C., Zanetti F., Paoletti S., Rizzo R. Characterization of an agar fraction extracted from Gracilaria dura (Gracilariales, Rhodophyta) // Hydrobiologia. 1990. V. 204/205. P. 567-571.

23. Murano E., Toffanin R., Pedersini C., Carabot-Cuervo A., Blunden G., Rizzo R. Structure and properties of agar from two unexploited agarophytes from Venezuela//Hydrobiologia. 1996. V. 326/327. P. 497-500.

24. Sousa-Pinto /., Murano E., Coelho S., Felga A., Pereira R. The effect of light on growth and agar content of Gelidium pulchellum (Gelidiaceae, Rhodophyta) in culture //Hydrobiologia. 1999. V. 398/399. P. 329-338.

25. Членов M.A., Малолетнева О.Ю., Гаврилова Е.Ф., Коротаев Г.К. Применение ВЭЖХ для анализа альгинов // Тез. докл. Всесоюзн. конф. "Научно-технические проблемы марикультуры в стране". -Владивосток, 1989. С. 216-217.

26. Martinsen A., Skjak-Brcek, Sm ids rod О., Zanetti F., Paoletti S. Comparison of different methods for determination of molecular weight and molecular weight distribution of alginates // Carbohydr. Polym. 1991. V. 15. P. 171193.

27. Barth H.G. High-performance gel permeation chromatography of pectins // J. Liq. Chromatogr. 1980. V. 3. № Ю. P. 1481-1496.

28. Ekstrom L., Kuiviner J. Molecular weight distribution and hydrolysis behavior of carrageenans// Carbohydr. Res. 1983. V. 116. P. 89-94.

29. Ekstrom L. Molecular weight distribution and the behavior of kappa-carrageenans // Carbohydr. Res. 1985. V. 135. P. 283-285.

30. Lecacheux D., Panaras R., Brigand G., Martin G. Molecular weight distribution of carrageenans by size exclusion chromatography and low angle laser light scattering // Carbohydr. Polym. 1985. V. 5. P. 423-440.

31. Singh S., Jacobsson S. Kinetics of acid hydrolysis of k-carrageenan as determined by molecular weight (SEC-LALLS-RI), gel breaking strength, and viscosity measurements // Carbohydr. Polym. 1994. V. 23. P. 89-103.

32. Singh S.K., Shen B.C., Chon S.T., Fan L.T. Acid hydrolysis of k-carrageenan in a batch reactor: stochastic simulation of change of molecular weight distribution with time // Biotech. Prog. 1994. V. 10. P. 389-397.

33. Суховерхое С.В., Кадникова И.А. Использование УФ-спектроскопии и эксклюзионной ВЭЖХ для исследования свойств каррагинана // Тез. докл. конф. молодых ученых "Биоресурсы морских и пресноводных экосистем". Владивосток, 1995. С. 120-121.

34. Naohara J., Manabe М. Molecular mass and solubility changes in pectins during storage of satsuma mandarin fruits (Citrus unshiu Marc.) // J. Food Sci. 1994. V. 59. № 3. P. 578-580.

35. Стыскин E. JI., Ициксон JI. Б., Брауде Е. В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986. -288 С.

36. Детерман Г. Гель-хроматография. М.: Мир, 1970. - 252 С.

37. Томашек В. Гель-хроматография. В кн.: Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам: Пер. с англ. / Под ред. О. Микеша. - М.: Мир, 1982. Ч. 1. С.339-391.

38. Уотерфилд М.Д. Разделение смесей белков и пептидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии В кн.: Практическая химия белка: Пер. с англ. / Под ред. А. Дарбре. - М.: Мир, 1989. С. 197222.

39. Скоупс Р. Методы очистки белков. Пер. с англ. М.: Мир, 1985. 358 С.

40. Porath J., Flodin P. Gel filtration: A method for desalting and group separation//Nature. 1959. V. 183. P. 1657-1659.

41. Flodin P. Dextran gels and their application in gel filtration. Pharmacia. Uppsala. 1961.

42. Flodin P., Porath J. Molecular sieve process. In book: Chromatography. / Ed. Heftmann - New York, 1961. P. 328.

43. Porath J. Cross-linked dextrans as molecular sieves // Adv. Prot. Chem. 1962. V. 17. P. 209.

44. Barth H.G. A practical approach to steric exclusion chromatography of water-soluble polymers // J. Chromatogr. Sci. 1980. V. 18. № 9. P. 409-429.

45. Andersson Т., et al. Agarose-based media for high-resolution gel filtration of biopolymers // J. Chrom. 1985. V. 326. P. 33-44.

46. Коликов B.M., Мчедлишвили Б.В. Хроматография биополимеров на макропористых кремнеземах. JL: Наука, 1986. - 190 С.

47. Лисичкин Г.В., Кудрявцев Г.В., Сердан А.А., Староверов С.М., Юффа А.Я. Модифицированные кремнезёмы в сорбции, катализе и хроматографии. / под ред. Г.В. Лисичкина М.: Химия, 1986. - 248 С.

48. Энгельгард X., Мюллер X., Шён У. Хроматографическая колонка. В кн.: Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. Пер. с англ. / под ред. А Хеншен, К.-П. Хупе, Ф. Лотшпайх, В. Вёльтер -М.: Мир, 1988. С. 22-99.

49. Barth H.G., Regnier F.E. High-performance gel permeation chromatography of water-soluble cellulosics // J. Chromatogr. 1980. Vol. 192. P. 275-293.

50. Тенников М.Б., Нефедов П.П., Лазарева М.А., Френкель С.Я. О едином механизме жидкостной хроматографии макромолекул на пористых сорбентах//Высокомол. соед. 1977. Т. А19. № 3. С. 657-660.

51. Нефедов П.П., Лавренко П.Н. Транспортные методы в аналитической химии полимеров Л.: Химия, 1979. - 232 С.

52. Pfannkoch Е., Ln К.С., Regnier F.E., Barth H.G. Characterization of some commercial high performance size-exclusion chromatography columns for water-soluble polymers //J. Chromatogr. Sci. 1980. V. 18. P. 430-441.

53. Лотшпайх Ф., Хеншен А. Аминокислоты, пептиды, белки В кн.: Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. Пер. с англ. / под ред. А Хеншен, К.-П. Хупе, Ф. Лотшпайх, В. Вёльтер - М.: Мир, 1988. С. 171-260.

54. Stenlund В. Polyelectrolyte effects in gel chromatography // Adv. Chromatogr. 1976. V. 14. P. 37-74.

55. Schmidt D.E., Giese Jr. R.W., Connor D., Karger B.L. High-performance liquid chromatography of proteins on a diol-bonded silica gel stationary phase // Anal. Chem. 1980. V. 52. P. 177-182.

56. Mizutani Т., Mizutani A. Estimation of adsorbtion of drugs and proteins on glass surfaces with controlled pore glass // J. Pharm. Sci. 1978. V. 67. P. 1102-1105.

57. Беленький Б. Г., Вшенчик Л. 3. Хроматография полимеров. М.: Химия, 1978. - 344 С.

58. Cooper A.R., Matzinger D.P. Aqueous GPC: the effect of solvent ionic strength//J. Appl. Polym. Sci. 1979. V. 23. P. 419-427.

59. Domard A., Rinaudo M., Rochas C. Application of GPC to poly electrolytes: salt rejection mechanism and molecular weight distribution // J. Polym. Sci., Polym. Phys. Ed. 1979. V. 17. P. 673-681.

60. Griffiths A.J., Kennedy J.F. Biotechnology of polysaccharides. In book: Carbohydrate chemistry. / Ed. J.F. Kennedy - Oxford: Clarendon Press, 1988. P. 595-635.

61. Беленький Б.Г., Ганкина Э.С., Мальцев В.Г. Капиллярная жидкостная хроматография. Л.: Наука, 1987. С. 172-178.

62. Садлсет А. Взаимодействие воды с углеводами. В кн.: Вода в пищевых продуктах. Пер. с англ. / под ред. Дакуорта Р.Б. - М.: Пищевая промышленность, 1980. С. 32-44.

63. Усов A.M. Полисахариды красных морских водорослей. В кн.: Прогресс химии углеводов. - М.: Наука, 1985. С.77-96.

64. Березин И.В., Савин Ю.В. Основы биохимии. М.: Изд-во МГУ, 1990. -254 С.

65. Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование: Теория, методы и применение. Пер. с англ. М.: Мир, 1986. С.164-166.

66. Маршелл Р. К., Инглис А. С. Определение состава белковых олигомеров. Получение мономеров и полипептидных цепей. В кн.: Практическая химия белка. Пер. с англ. / Под ред. А. Дарбре. - М.: Мир, 1989. С. 15-81.

67. Моравец Г. Макромолекулы в растворе. Пер. с англ. М.: Мир, 1967. 398 С.

68. Прузик 3. Белки. В кн.: Жидкостная колоночная хроматография. Пер. с англ. / Под ред. Дейла 3., Мацека К., Янака Я. - М.: Мир, 1978. Том 2. С.421-462.

69. Каменская Э.В., Султыгова З.Х. Дифференциация и анализ полисахаридов, белков и их компонентов в фруктово-ягодных соках. -В кн.: Методы анализа пищевых продуктов: Проблемы аналитической химии. Т. VIII. М.: Наука, 1988. С. 86-91.

70. Каменская Э.В., Захарова Е.В. Гибридные методы анализа высокомолекулярных веществ в пищевых жидкостях. В кн.: Методы анализа пищевых продуктов: Проблемы аналитической химии. Т. VIII. -М: Наука, 1988. С. 125-132.

71. Шатенштейн А.И., Вырский Ю.П., Правикова Н.А., Алиханов П.П., Жданова К.И., Изюмников A.JI. Практическое руководство по определению молекулярных весов и молекулярно-весового распределения полимеров. -М.: Химия, 1964. 188 С.

72. Хувинк Р., Ставерман А. Химия и технология полимеров: В 2-х т. Пер. с нем. Л.: Химия, 1965. Т. I. С. 342-390.

73. Кочетков Н.К, Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А., Усов А.И., Чижов О.С., Шибаев В.Н. Химия углеводов. М.: Химия, 1967. С. 513-516.

74. Захарченко В.Н. Коллоидная химия. М.: Высш. шк., 1989. С. 211-214.

75. Гааль Э., Медъеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул: Пер. с англ. М.: Мир, 1982. - 448 С.

76. Чапек К., Станек Я. Полисахариды. В кн.: Жидкостная колоночная хроматография. Пер. с англ. / Под ред. 3. Дейла, К. Мащека, Я. Янака. - М.: Мир, 1978. Т. 2. С. 129-135.

77. Членов М.А., Титова Е.В., Кудряшов Л.И., Peuiemoe А.С. Применение высокоэффективной эксюпозионной хроматографии для характеристики препаратов декстрана // Хим.-фарм. журн. 1985. № 7. С. 876-880.

78. Телкова Т.Н., Членов М.А., Малолетнева О.Ю., Петров П.Т., Домбровский В.А. Определение молекулярно-массовых характеристик оксиэтилированного крахмала с помощью высокоэффективной эксклюзионной хроматографии // Хим.-фарм. журн. 1987. № 11. С. 1384-1388.

79. Chaplin R.P., Ching W. Accurate calibration of a gel-permeation chromatograph by use of broad molecular weight distribution standards // J. Macromol. Sci.-Chem. 1980. V. A14. № 2. P. 257-263.

80. Yau W., Kirkland J., Bly D. Modern Size-Exclusion Liquid Chromatography. New York: J. Wiley and Sons, 1979. - 476 P.

81. Грюнер В. С. Агар, его применение и производство. М., Д.: Госторгиздат, 1931. -24 С.

82. Рапопорт A.JI. Товароведение пищевых продуктов применяемых в кондитерском производстве. Л.: Пищепромиздат, 1936. С. 510-529.

83. Чэпмен В. Морские водоросли и их использование. Пер. с англ. М.: И.-Л., 1953. С. 81-110.

84. Lewis G., Stanley N., Guist G. Commercial production and application of algal hydrocolloids. In book: Algae and human affairs. /Ed. C. Lemby. -Seattle: University of Washington, 1988. P. 206-232.

85. Neuberg C., Ohle H. Uber einen schwefelgehalt des agars // Biochem. Z. 1921. V. 125. P. 311.

86. Fairbrother F., Mastin H. The swelling of agar-agar // J. Chem. Soc. 1923. V. 123. P. 1412-1424.

87. Araki С. Agar-agar. III. Acetylation of the agar-like substance of Gelidium amansii (L.) //J. Chem. Soc. Japan. 1937. V. 58. P. 1338-1350.

88. Hands S., Peat S. Isolation of an anhydro-/-galactose derivative from agar // Nature. 1938. V. 142. P. 797.

89. Araki C. Isolation to agarobiose // J. Chem. Soc. Japan. 1944. V. 65. P. 533.

90. Hirase S. Studies on the chemical constitution of agar-agar. XIX. Pyruvic acid as a constituent of agar-agar. I. Identification and estimation of pyruvic acid in the hydrolysate of agar // Bull. Chem. Soc. Japan. 1957. № 1. P. 68.

91. Бемиллер Дж. H. Агар: Приготовление агара и агарозы; метанолиз; меркаптолиз. В кн.: Методы химии углеводов: Пер. с англ. / Под ред. Н.К. Кочеткова - М.: Мир, 1967. С. 314-317.

92. Rees D.A. Structure, conformation and mechanism in the formation of polysaccharide gels and networks // Advances in Carbohyd. Chem Biochem. 1969. V. 24. P. 267-315.

93. Izumi K. A new method for fractionation of agar // Agr. Biol. Chem. 1970. V. 34. P. 1739-1740.

94. Duckworth M., Yaphe W. The structure of agar. Part I. Fractionation of a complex mixture of polysaccharides // Carbohydr. Res. 1971. V. 16. P. 189198.

95. Young K., Duckworth M., Yaphe W. The structure of agar. III. Pyruvic acid, a common feature of agars from different agarophytes // Carbohydr. Res. 1971. V. 16. P. 446-448.

96. Izumi K. Chemical heterogeneity of the agar from Gelidium amansii // Carbohyd. Res. 1971. V. 17. P. 227-230.

97. Araki C. Structure of the agarose constituent of agar-agar I I Bull. Chem. Soc. Japan. 1956. V. 29. P. 543-544.

98. Araki С. Some recent studies of the polysaccharides of agarophytes. In book: Proceedings of the fifth international seaweed symposium - Oxford-London-New York-Paris: Pergamon Press, 1966. P. 3-17.

99. Falshaw R., Furneaux R.H., Pickering T.D., Stevenson D.E. Agars from three Fijian Gracilaria species // Bot. Mar. 1999. V. 42. P. 51-59.

100. Ng Ying Kin N. M. K, Yaphe W. Properties of agar: Parameters affecting gel-formation and the agarose-iodine reaction I I Carbohydr. Res. 1972. V. 25. P. 379-385.

101. Иванова E. Г. Новые полисахариды группы агара из красных водорослей Японского моря: Автореф. дис. . канд. хим. наук. М., 1986. - 23 С.

102. Lahaye М., Rochas С., Yaphe W. A new procedure for determining the heterogeneity of agar polymers in cell walls of Gracilaria spp. (Gracilariaceae, Rhodophyta) // Can. J. Bot. 1986. V. 64. P. 579-585.

103. Furneaux R. H., Miller I. J., Stevenson Т. T. Agaroid from New Zealand of the Gracilariaceae (Gracilariales, Rhodophyta) a novel dimethylated agar // Hydrobiologia. 1990. V. 204/205. P. 645-654.

104. Nelson W.A., Knight G.A., Falshaw R. A new agarophyte, Curdiea balthazar sp. nov. (Gracilariales, Rhodophyta), from the Tree Kigs Islands, northern New Zealand//Hydrobiologia. 1999. V. 398/399. P. 57-63.

105. Anderson N. S., Dolan Т. C. S., Lcrwson C. J., Penman A., Rees D. A. Carrageenans. V. The masked repeating structures of X- and ц-carrageenans // Carbohydr. Res. 1968. V. 7. P. 468-473.

106. Cote G. L., HanisakM. D. Production and properties of native agars from Gracilaria tikvahiae and other red algae // Bot. Mar. 1986. V. 29. P. 359366.

107. Rees D. A. Estimation of the relative amounts of isomeric sulphate esters in some sulphated polysaccharides // J. Chem. Soc. 1961. P. 5168-5171.

108. Rees D. A. Enzymatic synthesis of 3:6-anhydro-L-galactose within porphyran from L-galactose 6-sulfate units // Biochem. J. 1961. V. 81. P. 347-352.

109. Furneaux R. H., Stevenson Т. T. The xylogalactan sulfate from Chondria macrocarpa (Ceramiales, Rhodophyta) // Hydrobiologia. 1990. V. 204/205. P. 615-620.

110. Усов A.M., Кочетков Н.К. Полисахариды водорослей. II. Полисахариды красной водоросли Odonthalia corymbifera (Gmel.) J. Ag. Выделение б-О-метил-О-галактозы // Журн. общ. химии. 1968. Т. 38. №2. С. 234-238.

111. Кочетков Н.К., Усов A.M., Мирошникова JI.M. Полисахариды водорослей. V. Дальнейшее изучение состава и строения сульфатированного полисахарида из Laingia pacifica Yamada // Журн. общ. химии. 1970. Т. 40. № 11. С. 2473-2478.

112. Усов A.M., Мирошникова Л.М., Кочетков Н.К. Полисахариды водорослей. IX. Сольволитическое десульфатирование полисахарида из красной водоросли Laingia pacifica Yamada // Журн. общ. химии. 1972. Т. 42. №4. С. 945-949.

113. Усов A.M., Адамянг/ КС. Сольволитическое десульфатирование декстрансульфата//Биоорган, химия. 1975. Т. 1. № 5. С. 659-664.

114. Кочетков Н.К, Усов A.M., Мирошникова JI.M. Полисахариды водорослей. XI. Изучение полисахарида из Laingia pacifica Yamada методом метилирования // Журн. общ. химии. 1972. Т. 42. № 10. С. 2309-2315.

115. Барбакадзе В.В., Усов А.И. Полисахариды водорослей. XXVI. Метилирование и периодатное окисление полисахарида из красной водоросли Grateloupia divaricata Okam. // Биоорган, химия. 1978, Т. 4. №8. С. 1100-1106.

116. Усов А.И., Рехтер М.А., Кочетков Н.К. Полисахариды водорослей. III. Выделение и предварительное изучение ^-полисахарида из Tichocarpus crinitus (Gmel.) Rupr. // Журн. общ. химии. 1969. Т. 39. № 4. С. 905-911.

117. Усов А.И, Мироишикова Л.И., Кочетков Н.К Полисахариды водорослей. X. Периодатное окисление полисахарида из Laingia pacifica Yamada //Журн. общ. химии. 1972. Т. 42. № 7. С. 1623-1630.

118. Dodgson K.S. Determination of inorganic sulphate in studies on the enzymic and non-enzymic hydrolysis of carbohydrate and other sulphate esters // Biochem. J. 1961. V. 78. P. 312-319.

119. Усов А.И, Рехтер M.A., Кочетков Н.К. Полисахариды водорослей. VI. Изучение х-полисахарида из Tichocarpus crinitus (Gmel.) Rupr. // Журн. общ. химии. 1970. Т. 40. № 12. С. 2732-2737.

120. Усов А.И, Козлова Е.Г. Полисахариды водорослей. Изучение одонталана сульфатированного полисахарида из красной водоросли Odonthalia corymbifera (Gmel.) J. Ag. // Биоорган, химия. 1975. Т. 1. № 7. С. 912-918.

121. Кочетков Н.К, Усов А.И, Мироишикова Л.И. Полисахариды водорослей. IV. Фракционирование и метанолиз сульфатированного полисахарида из Laingia pacifica Yamada II Журн. общ. химии. 1970. Т. 40. №11. С. 2469-2473.

122. Chizhov O.S., Zolotarev B.M., Usov A.I., Rechter M.A., Kochetkov N.K. Mass-spectrometric characterization of 3,6-anhydro-galactose derivatives // Carbohydr. Res. 1971. V. 16. №1. P. 29-38.

123. Чижов О.С., Шаткое А.С. Масс-спектрометрия и ЯМР-спектроскопия в установлении структуры полисахаридов. В кн.: Прогресс химии углеводов. М.: Наука, 1985. С. 30-54.

124. Yaphe W., Arsenault G.P. Improved resorcinol reagent for the determination of fructose and 3,6-angydrogalactose in polysaccharides 11 Anal. Biochem. 1965. V. 13. №1. P. 143-148.

125. Оводов Ю.С. Газожидкостная хроматография углеводов: Обзор. -Владивосток, 1970. 120 С.

126. Elkin Yu.N. Gas chromatographic separation of the methyl ether methylglycopyranoside series hexose, 6-deoxyhexose and pentose acetates // J. Chromatogr. 1979. V. 180 P. 163-169.

127. Kanan R., Seng P.N., Debuch H. Evaluation of a gas chromatigraphic method for the quantitative estimation of hexoses from neutral glycolipids // J. Chromatogr. 1974. V. 92. P. 95-103.

128. Mollion J., Andriantsiferana M., Sekkal M. A study of the phycocolloids from Gelidium madagascariense and Eucheuma denticulatum (Rhodophyta) collected on south coasts of Madagascar // Hydrobiologia. 1990. V. 204/205. P. 655-659.

129. Stevenson T.T., Furneaux R.H. Chemical method for the analysis of sulphated galactans from red algae // Carbohydr. Res. 1991. V. 210. P. 277298.

130. Seymour F.R., Chen E.C.M., Bishop S.H. Identification of aldoses by use of their peracetylated aldononitrile derivatives: A GLS-MS approach // Carbohydr. Res. 1979. V. 73. P. 19-45.

131. Jankowski К., Gaudin D. Critical examination of the use of gas chromatography-mass spectrometry in the identification of persillyated saccharides //Biomedical Mass Spectrometry. 1978. V. 5. № 5. P. 371-372.

132. Cahour A., Hartmann L. Study of neutral and aminomonosaccharides by gas-liquid differential chromatography: Application to three reference glycoproteins//J. Chromatogr. 1978. V. 152. P. 475-486.

133. Iverson J.L., Bueno M.P. Evaluation of high pressure liquid chromatography and gas-liquid chromatography for quantitative determination of sugars in foods //J. Assoc. Anal. Chem. 1981. V. 64. № 1. P. 139-143.

134. Arakawa Y., Imanari Т., Tamura Z. Determination of neutral and amino sugars in glycoproteins by gas chromatography // Chem. Pharm. Bull. 1976. V. 24. № 9. P. 2032-2037.

135. Gerwig G.J., Kamerling J.P., Vliegenthart J.F.G. Determination of the D and L configuration of neutral monosaccharides by high-resolution capillary GLC // Carbohyd. Res. 1978. V. 62. P. 349-357.

136. Чармс Ш. Углеводы. В. кн.: Хроматография: Практическое приложение метода. Пер. с англ. / Под ред. Э. Хефтмана. - М.: Мир, 1986. Ч. 2. С. 5-87.

137. Усов А.И., Элашвили М.Я. Количественное определение производных 3,6-ангидрогалактозы и специфическое расщепление галактанов красных водорослей в условиях восстановительного гидролиза // Биоорган, химия. 1991. Т. 17. № 6. С. 839-848.

138. Usov A.I. A new chemical tool for characterization and partial depolymerization of red algal galactans // Hydrobiologia. 1993. V. 260/261. P. 641-645.

139. Garegg P.J., Lindberg В., Konradsson P., Kvanstrom I. Hydrolysis of glycosides under reducing conditions I I Carbohyd. Res. 1988. V. 176. P. 145-148.

140. Rochas С., Lahaye М., Yaphe W. Sulfate content of carrageenan and agar determined by infrared spectroscopy // Bot. Mar. 1986. V. 24. P. 99-108.

141. Fostier A.H., Kornprobst J.M., Combaut G. Chemical composition and rheological properties of carrageenans from two Senegalese Soleriaceae Anatheca montagnei Schmitz and Meristotheca senegalensis Feldmann // Bot. Mar. 1992. V. 35. P. 351-355.

142. Usov A.I., Ivanova E.G., Sashkov A.S. Polysaccharides of algae. XXXIII. Isolation and 13C-NMR spectral stady of some new gel-forming polysaccharides from Japan sea red seaweeds // Bot. Mar. 1983. V. 26. P. 285-294.

143. Usov A.I. NMR spectroscopy of red seaweed polysaccharides: agars, carrageenans andxylans //Bot. Mar. 1984. V. 27. P. 189-202.

144. Lahaye M., Yaphe W., Rochas C. 13C NMR spectral analysis of sulfated and desulfated polysaccharides of the agar type I I Carbohydr. Res. 1985. V. 143. P. 240-245.

145. Chiles T.C., Bird K.T., Koehn F.E. Influence of nitrogen availability on agar-polysaccharides from Gracilaria verrucosa strain G-16: structural analysis by NMR spectroscopy II J. Appl. Phycol. 1989. V. 1. P. 53-58.

146. Rochas С., Lahaye M. Solid state I3C NMR spectroscopy of red seaweeds, agars and carrageenans // Carbohydr. Polym. 1989. V. 10. P. 189-204.

147. Gordon-Mills E., Tate M., Hounslow A. Use of solid and gel state 13C NMR spectroscopy for differentiation between agarophytes and carrageenophytes //Hydrobiologia. 1990. V. 204/205. P. 629-636.

148. Lloyd A.G., Dodgson K.S., Price R.G., Rose F.A. Infrared studies on sulphate esters. I. Polysaccharide sulphates //Biochim. Biophys. Acta. 1961. V. 46. №1. P. 108-115.

149. Яроцкий С.В., Шашков А.С., Усов А.И. Анализ спектров 13С-ЯМР некоторых галактанов красных водорослей // Биоорган, химия. 1977. Т. 3. № 8. С. 1135-1137.

150. Шашков А.С., Усов А.И., Яроцкий С.В. Полисахариды водорослей.

151. XXIV. Применение спектроскопии 13С-ЯМР для анализа структуры полисахаридов группы агара // Биоорган, химия. 1978. Т. 4. № 1. С. 7481.

152. Яроцкий С.В., Шашков А.С., Усов А.И. Полисахариды водорослей.1 ^

153. XXV. Применение спектроскопии С-ЯМР для анализа структуры полисахаридов типа х-каррагинана // Биоорган, химия. 1978. Т. 4. № 5. С. 745-751.

154. Usov A.I., Yarotsky S. V., Shashkov A.S. 13C NMR spectroscopy of red algal galactans //Biopolymers. 1980. V. 19. № 5. P. 977-990.

155. Falshaw R., Furneaux R.H. Carrageenan from the tetrasporic stage of Gigartina decipiens (Gigartinaceae, Rhodophyta) // Carbohydr. Res. 1994. V. 252. P. 171-182.

156. Miller I .J., Falshaw R., Furneaux R.H. Structural analysis of the polysaccharide from Pachymenia lusoria (Cryptonemiaceae, Rhodophyta) // Carbohydr. Res. 1995. V. 268. P. 219-232.

157. Miller I.J. The structure of a pyruvylated carrageenan extracted from Stenogramme interrupta as determined by 13C NMR spectroscopy // Bot. mar. 1998. V. 41. P. 305-315.

158. Miller I.J. Further evaluation of the structure of the polysaccharide from Plocamium costatum with the use of set theory // Hydrobiologia. 1999. V. 398/399. P. 385-389.

159. Трейман И. Проблема Дальневосточного агар-агара. Применение и физико-химические свойства агар-агара // Вестник Дальневосточного филиала Академии наук СССР. 1933. № 1-3. С. 109-114.

160. Зинова Е.С. Морская капуста (Laminaria) и другие водоросли, имеющие промысловое значение // Известия ТОНПС. 1928. Т. 1. Вып. 1. С. 77-142.

161. Кинтаро-Кимура Обработка рыбы и других водных промысловых. -M.-JL: Пищепромиздат, 1939. Часть 1. С. 172-190.

162. Тапикава И. Продукты морского промысла Японии: Пер. с англ. М.: Пищевая промышленность, 1975. С.169-177.

163. Кизеветтер К.В., Суховеева М.В., Шмелькова Л.П. Промысловые водоросли и травы дальневосточных морей. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. С. 58-94.

164. Микулич Д.В., Красилъникова С.В., Дырикова С.Г. Исследование состава сточных вод производства студнеобразователей и возможныенаправления снижения их загрязнённости // Биотехнология. 1997. №2. С. 53-58.

165. ГОСТ 16280-88. Агар пищевой. Технические условия. Взамен ГОСТ 16280-70; Введ. С 01.01.90 - 7 С.

166. ГОСТ 17206-96. Агар микробиологический. Технические условия. -Взамен ГОСТ 17206-84; Введ. с 01.01.98. 9 С.

167. ТУ 9284-095-00472012-97. Агар особой очистки. Технические условия. Взамен ТУ 15-01-469-86; Введ. с 01.04.97. - 8 С.

168. Уитон Ф.У., Лосон Т.Б. Производство продуктов питания из океанических ресурсов. Пер. с англ. М.: Агропромиздат, 1989. Т. 2. С. 351-353.

169. Durrant N., Sanford В. Phycocolloids // Fish. Ind. Res. 1970. Vol. 6. № 1. P. 15-51.

170. Hjerten S. Some new methods for preparation of agarose // J. Chromatogr. 1971. V. 16. P. 73-80.

171. Russell В., Mead Т.Н., Poison A. A method of preparing agarose // Biochim. Biophys. Acta. 1964. V. 86. P. 169.

172. Tagawa Sh. Chemical studies on manufacture of agar-agar // The Journal of the Shimonoski University of Fisheries. 1968. V. 17. № 2. P. 1-52.

173. Guiseley K.B., Kirkpatrick F.H., Provonchee R.B., Dumais M.M., Nochumson S. A further fractionation of agarose // Hydrobiologia. 1993. V. 260/261. P. 505-511.

174. Чарыков A.K. Математическая обработка результатов химического анализа. JL: Изд-во Ленингр. ун-та, 1977. - 120 С.

175. Суховерхое С.В., Усов А.И., Подкорытова А.В., Кадникова И.А. Хроматографическое исследование агаровых экстрактов из краснойводоросли Ahnfeltia tobuchiensis II Биоорган. Химия. 1999. Т. 25. № 3. С. 211-215.

176. Хупе К.-Л., Розинг Г., Шренкер X. Аппаратура. В кн.: Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. Пер. с англ. / под ред. А Хеншен, К.-П. Хупе, Ф. Лотшпайх, В. Вёльтер - М.: Мир, 1988. С. 100-170.

177. Трубицына Е.С., Власова Е.Г., Клячко Ю.А. Современные методы определения белка в соках, молоке и других пищевых продуктах. В кн.: Методы анализа пищевых продуктов: Проблемы аналитической химии. Т. VIII. - М.: Наука, 1988. С. 216-226.

178. Дарбре А. Аналитические методы. В кн.: Практическая химия белка. Пер. с англ. / Под ред. А. Дарбре. - М.: Мир, 1989. С. 243-333.

179. Суховерхое С.В., Долгов Д.А. Применение высокоэффективной эксклюзионной хроматографии в технологии агара // Тез. докл. конф. молодых ученых "Биомониторинг и рациональное использование гидробионтов". Владивосток, 1997. С. 151-152.

180. Суховерхое С.В., Кадникова И.А., Kyuieea О.А., Подкорытова А.В. Обоснование технологии получения агарозы из красной водоросли Ahnfeltia tobuchiensis II Известия ТИНРО. 1999. Т. 125. С. 282-286.

181. Суховерхое С.В. Современные методы исследования и контроля технологии получения полисахаридов // Тез. докл. Международной научно-практической конф. "Человек-Экология-Культура на пороге XXI века". Находка, 2000. 1 часть. С. 44-45.

182. Суховерхое С.В., Кадникова И.А., Подкорытова А.В. Получение агара и агарозы из красной водоросли Ahnfeltia tobuchiensis II Прикладная биохимия и микробиология. 2000. Т. 36. № 2. С. 238-240.

183. Судъина Е.Г., Шнюкова Е.И., Костлан Н.В., Мушак П.А., Тупик Н.Д. Биохимия синезеленых водорослей. Киев: Наукова думка, 1978. -246 С.

184. Суховерхое С.В., Кадникова И.А., Подкорытова А.В. Разработка технологии получения высокоочищенного агара и агарозы // Материалы докл. Второго международного симпозиума

185. Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре". Адлер, 1999. С. 246-247.

186. Суховерхое С.В., Кадникова И. А. Исследование кинетики экстракции агара из красной водоросли Ahnfeltia tobuchiensis П Тез. докл. Международной научно-практической конф. "Человек-Экология-Культура на пороге XXI века". Находка, 2000. 1 часть. С. 24-26.

187. Труус К.Э., Вялимяэ Т.К. , Вахер М.Э., Коллист А.П. 13С ЯМР-спектроскопия агарозной матрицы из разных коммерческих препаратов носителей // Тез. докл. VIII Всесоюзн. конф. "Химия и биохимия углеводов". Тбилиси, 1987 г.-Пущино, 1987. С. 105-106.