Характеризация противовирусной активности химически синтезированного соединения НИОХ-14 для создания противооспенного препарата тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Кабанов, Алексей Сергеевич

• Кабанов, Алексей Сергеевич
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Кабанов, Алексей Сергеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

Главы Стр.

ВВЕДЕНИЕ

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: АНТИОРТОПОКСВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ ХИМИЧЕСКИ СИНТЕЗИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

1.1 Разрабатываемые химические препараты, обладающие антиортошксвирусным действием

1.2 Противовирусная активность препаратов ST-246 и CMX001 в отношении ортопоксвирусов в экспериментах in vitro и ex vivo

1.3 Эффективность препаратов ST-246 и CMX001 в отношении вирусов эктромелии, оспы коров, оспы кроликов и осповакцины in vivo

1.4 Защитная эффективность препаратов ST-246 и CMX001 при заражении животных вирусами оспы обезьян и натуральной оспы

1.5 Некоторые структурные аналоги химического соединения ST-246 и виды

их биологической активности

1.6 Заключение по обзору литературы

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Лабораторные животные

2.2 Клеточная культура

2.3 Вирусы и определение их концентрации

2.4 Исследованные химически синтезированные соединения

2.5 Определение цитотоксичности и противовирусной активности химических соединений in vitro

2.6 Оценка изменения инфекционности вируса эктромелии в опытах in vitro

под влиянием препаратов НИОХ-14 и ST-246

2.7 Определение 50 %-й летальной дозы вирусов оспы коров и эктромелии

при интраназальном заражении мышей

2.8 Определение 50 %-й инфицирующей дозы вируса оспы обезьян при интраназальном заражении мышей и сурков

2.9 Определение 50 %-й инфицирующей дозы вируса натуральной оспы при интраназальном заражении мышей

2.10 Оценка противовирусного действия препаратов в экспериментах на мышах, инфицированных вирусами оспы коров и эктромелии

2.11 Оценка противовирусного действия препаратов у мышей и степных сурков, инфицированных вирусом оспы обезьян

2.12 Оценка противовирусного действия препаратов у мышей, инфицированных вирусом натуральной оспы

2.13 Определение концентрации ортопоксвирусов в культуральной жидкости и

в гомогенатах органов животных

2.14 Гистологические исследования

2.15 Статистическая обработка результатов

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение антиортопоксвирусной активности различных химических соединений в экспериментах in vitro и in vivo

3.1.1 Скрининг и оценка противовирусной активности химических соединений в отношении вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии в культуре клеток Vero

3.1.2 Изучение противовирусного действия выбранных химических соединений в отношении вирусов оспы обезьян и натуральной оспы в культуре клеток Vero

3.1.3 Изучение противовирусного действия химических соединений у мышей аутбредной популяции ICR, инфицированных вирусами эктромелии и оспы коров

3.2 Сравнительная оценка противовирусной активности химических соединений НИОХ-14 и ST-246 в отношении вируса эктромелии in vitro и

in vivo

3.2.1 Изучение влияния препаратов НИОХ-14 и ST-246 на инфекционность вируса эктромелии в культуре клеток Vero

3.2.2 Изучение противовирусного действия НИОХ-14 и ST-246 у мышей аутбредной популяции ICR, инфицированных вирусом эктромелии

3.3 Исследование противооспенной активности химического соединения НИОХ-14 в сравнении с ST-246 в экспериментах in vivo в отношении высокопатогенных для человека ортопоксвирусов

3.3.1 Оценка противовирусного действия химических соединений НИОХ-14 и ST-246 у мышей аутбредной популяции ICR и степных сурков, инфицированных вирусом оспы обезьян

3.3.2 Оценка противовирусного действия химических соединений НИОХ-14 и ST-246 у мышей иммунодефицитной линии SCID и аутбредной популяции ICR, инфицированных вирусом натуральной оспы

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеризация противовирусной активности химически синтезированного соединения НИОХ-14 для создания противооспенного препарата»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. После завершения на Земле программы глобальной ликвидации натуральной оспы и отмены вакцинации против нее в 1980 году в мире сложилась опасная ситуация, когда более половины населения планеты не имеет иммунитета против ортопоксвирусных инфекций. При этом угроза возникновения натуральной оспы существует до настоящего времени при преднамеренном или случайном распространении возбудителя этого заболевания, источником которого потенциально могут являться:

- возможно, существующие нелегальные его хранилища [62, 71, 29];

- останки людей, умерших от натуральной оспы, при археологических раскопках в мерзлотных грунтах, где вирус может сохраняться длительное время [37, 64, 90];

- искусственно созданный вирус на основе данных первичной структуры его дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) [98].

Кроме того, отмечается увеличение в последние десятилетия масштабности и частоты эпидемических вспышек других ортопоксвирусных инфекций: оспы обезьян и оспы коров [108, 47, 33, 56, 143]. Вместе с тем, в настоящее время в мире не существует официально зарегистрированных химиопрепаратов для защиты людей от ортопоксвирусных инфекций. В связи с этим необходимость обеспечения противооспенной безопасности людей и животных делает актуальной проблему разработки новых антиортопоксвирусных препаратов.

Степень разработанности. За последние 50 лет определено несколько

и и и и х Г

субстанций, в той или иной степени обладающих антиортопоксвирусной активностью. К ним относятся тиосемикарбазоны, аналоги нуклеозидов, нуклеотидов, ациклические нуклеозиды и нуклеотиды, интерфероны и их индукторы [48, 123, 99]. Однако в настоящее время на стадии клинических испытаний находятся только два современных эффективных и биодоступных при пероральном (п/о) введении противовирусных химических соединения: СМХ001 (ВппшдоЮук, БСУ, Ьехадесу1охургору1-с1до1оу1г [HDP-CDV]), который является эфирно-липидным аналогом цидофовира, и ST-246 (Тесоутша!, 4-трифторметил-Ы-(3,3а,4,4а,5,5а,6,6а-октагидро-1,3-диоксо-4,6-

етеноциклопроп[1]изоиндол-2(1Н)-ил)-бензамид) [45, 119]. При этом оба препарата, являющиеся разработками США и различающиеся по механизмам действия, успешно

прошли этапы научно-исследовательских работ и доклинических испытаний, проявив специфическую антиортопоксвирусную активность в экспериментах ex vivo и in vitro на органных культурах, перевиваемых и первичных культурах клеток животных и человека, а также in vivo на разных видах модельных животных. Данный эффект был продемонстрирован при использовании вирусов осповакцины (ВОВ), оспы коров (ВОК), эктромелии (ВЭ), а также высокопатогенных для человека вирусов оспы обезьян (ВОО) и натуральной оспы (ВНО). Тем не менее, в связи с возросшей актуальностью принятия мер по защите людей от ортопоксвирусных инфекций и со способностью возбудителей этих заболеваний мутировать и приобретать устойчивость к лекарственным препаратам [124, 125, 144, 34, 84] необходимо проводить поиск новых химических соединений с различными механизмами действия и создавать на их основе противовирусные средства новой генерации. В ряде исследований была выявлена серия производных

2 4

трицикло[3.2.2.0 , ]нон-8-ен-6,7-дикарбоновой кислоты - N-амидов 3,5-диоксо-4-азатетрацикло[5.3.2.026.08,10]додек-11-ен-3,5-диона, проявляющих активность в отношении ортопоксвирусов [31, 92, 75, 13, 14]. Поэтому дальнейший поиск и изучение химических соединений, обладающих высокой антиортопоксвирусной активностью, с целью создания новых противооспенных препаратов является актуальным.

В связи с этим, в данной работе были поставлены следующие цель и задачи исследования.

Цель исследования. Провести сравнительное изучение противовирусной активности химически синтезированных соединений, в том числе аналогов ST-246, и выбрать наиболее эффективное соединение в отношении ортопоксвирусов in vitro и in vivo для создания на его основе отечественного противооспенного препарата.

Задачи исследования:

1) провести скрининг и расширенное тестирование in vitro противовирусной активности различных химических соединений, в том числе производных трициклодикарбоновой кислоты и конденсированных производных пирролдиона (аналогов ST-246) в отношении вирусов осповакцины, оспы коров и эктромелии;

2) исследовать противовирусную активность химических соединений, выбранных по результатам скрининга и расширенного тестирования in vitro, в экспериментах на культуре клеток Vero в отношении вирусов оспы обезьян и натуральной оспы;

3) изучить противовирусное действие химических соединений, проявивших высокую антиортопоксвирусную активность in vitro, в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, инфицированных вирусами оспы коров и эктромелии;

4) провести сравнительное исследование защитной эффективности ST-246 и выбранных химических соединений, наиболее активных в отношении ортопоксвирусов in vivo, в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR и степных сурках, инфицированных вирусом оспы обезьян;

5) изучить протективное действие выбранного наиболее высокоактивного в отношении ортопоксвирусов in vivo химического соединения в сравнении с ST-246 в экспериментах на мышах иммунодефицитной линии SCID и аутбредной популяции ICR, инфицированных вирусом натуральной оспы.

Научная новизна работы

В данной работе впервые исследованы и проанализированы показатели противовирусной активности в отношении ортопоксвирусов in vitro более 100 новых производных трициклодикарбоновой кислоты, полициклических гидрированных функциональных производных изоиндола и их аналогов, близких по химической структуре ST-246, синтезированных в НИОХ им. Н.Н. Ворожцова СО РАН. При проведении последовательной оценки показателей 50 %-й ингибирующей концентрации (IC50) химических препаратов в отношении вирусов осповакцины, оспы коров, эктромелии, оспы обезьян и натуральной оспы было выявлено 9 соединений, которые имели значения IC50 меньше 0,5 мкг/мл. Наиболее высокую антиортопоксвирусную активность in vitro проявляло соединение НИОХ-14.

Кроме того, на примере 10 выбранных наиболее активных химических соединений, включая ST-246, с помощью корреляционного анализа показателей IC50 в отношении всех исследованных ортопоксвирусов in vitro впервые была показана их корреляционная связь в диапазоне от средней до очень высокой степени корреляции по шкале Чеддока.

Впервые продемонстрировано, что у мышей аутбредной популяции ICR, интраназально инфицированных вирусом оспы коров (штамм Гришак), сравнимую защитную эффективность при пероральном введении проявили 3 соединения (НИОХ-14, НИОХ-32 и ST-246), судя по снижению летальности и увеличению средней продолжительности жизни относительно контрольной группы мышей. Однако при

использовании для заражения мышей этой же популяции естественного для них патогена - вируса эктромелии (штамм К-1) снижение процента гибели и увеличение средней продолжительности жизни, а также уменьшение продукции вируса и патологических изменений в легких инфицированных мышей происходило только при воздействии НИОХ-14 и ST-246, тогда как НИОХ-32 оказался неэффективным.

Впервые проведена сравнительная оценка противовирусного действия химических соединений НИОХ-14 и ST-246 в отношении вируса оспы обезьян (штамм V79-1-005) при использовании разных модельных животных. Обнаружено, что у мышей аутбредной популяции ICR, интраназально инфицированных вирусом оспы обезьян и перорально получавших эти препараты, доля инфицированных мышей и продукция вируса в легких была ниже, чем в контроле. Вместе с тем, пероральное введение НИОХ-14 и ST-246 степным суркам, аналогично инфицированным этим же вирусом, защищало их от развития заболевания, судя по отсутствию внешних оспоподобных признаков, в отличие от контроля.

В экспериментах на мышах иммунодефицитной линии SCID и аутбредной популяции ICR, интраназально инфицированных вирусом натуральной оспы (штамм Ind-3a), впервые показано, что химические соединения НИОХ-14 и ST-246 при их пероральном введении проявляют сравнимую противооспенную эффективность, регистрируемую по уменьшению доли инфицированных животных, продукции вируса и патоморфологических изменений в легких по сравнению с контролем.

В данной работе впервые были исследованы противовирусные свойства химического соединения НИОХ-14, являющегося близким структурным аналогом ST-246 и обладающего патентной чистотой, которое проявляет высокую, сравнимую с ST-246, антиортопоксвирусную активность in vitro и in vivo.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость данной работы заключается в том, что для достижения цели и выполнения задач нами была разработана и использована методология поиска, выбора и исследования антиортопоксвирусной активности новых химических соединений, основанная на последовательной оценке их ингибирующего действия в отношении слабопатогенных и высокопатогенных для человека ортопоксвирусов in vitro и in vivo. Благодаря такому подходу нам удалось из более 100 новых производных трициклодикарбоновой кислоты, полициклических гидрированных функциональных

производных изоиндола и их аналогов, близких по химической структуре ST-246, выбрать наиболее высокоэффективное антиортопоксвирусное химическое соединение НИОХ-14. Доказанная нами целесообразность и правомерность применения данной методологии позволяет руководствоваться ею при проведении поиска и разработки препаратов, эффективных в отношении других инфекционных патогенов.

Практическая значимость данной работы заключается в том, что определена и изучена противовирусная активность химического соединения НИОХ-14, обладающего патентной чистотой и являющегося субстанцией для отечественного противооспенного препарата. На основании модифицированных нами методов и полученных результатов были разработаны и утверждены стандартные операционные процедуры и методические рекомендации (МР), которые могут быть использованы при исследованиях, в том числе доклинических, антиортопоксвирусной эффективности не только химически синтезированных, но и других препаратов. Разработанные нами модельные биосистемы «мышь аутбредной популяции ICR - штамм К-1 ВЭ», «мышь аутбредной популяции ICR - штамм Гришак ВОК», «мышь аутбредной популяции ICR - центральноафриканский штамм V79-1-005 вируса оспы обезьян» (МР 4.2.001-16), «степной сурок -центральноафриканский штамм V79-1-005 вируса оспы обезьян» (МР 4.2.002-16), «мышь иммунодефицитной линии SCID - штамм 1^-3а вируса натуральной оспы» (МР 4.2.003-16), «мышь аутбредной популяции ICR - штамм 1^-3а вируса натуральной оспы» (МР 4.2.005-16) были использованы при выполнении Госконтрактов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» в рамках федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009 - 2014 годы)». Кроме того, основные результаты данной диссертационной работы вошли в «Отчет о доклиническом изучении безвредности, специфической активности и фармакокинетики препарата НИОХ-14 (субстанция)» ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор».

Методология и методы исследования

В процессе проведения поиска, выбора и исследования антиортопоксвирусной активности новых химических соединений нами была разработана и использована методология, заключающаяся в логически обоснованной, последовательной оценке их ингибирующего действия в отношении вирусов осповакцины, оспы коров, эктромелии, оспы обезьян и натуральной оспы сначала в экспериментах на культуре клеток, а затем на модельных животных.

При проведении скрининга и расширенного тестирования противовирусной активности новых химически синтезированных соединений в отношении ортопоксвирусов in vitro в работе использовали адаптированный и модифицированный нами колориметрический метод определения оптической плотности раствора красителя, поглощенного живыми клетками в монослое на 96-луночных планшетах [32]. Исследование противовирусного действия химических соединений в отношении ортопоксвирусов in vivo проводили в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, инфицированных ВОК (штамм Гришак), ВЭ (штамм К-1), ВОО (штамм V79-1-005) и ВНО (штамм Ind-3a), а также на степных сурках, инфицированных ВОО (штамм V79-1-005), и мышах иммунодефицитной линии SCID, инфицированных ВНО (штамм Ind-3a). В работе были применены традиционные вирусологические, культуральные, гистологические и статистические методы исследований.

Положения, выносимые на защиту:

1) среди всех исследованных новых производных трициклодикарбоновой кислоты, полициклических гидрированных функциональных производных изоиндола и их аналогов, близких по химической структуре ST-246, наиболее высокой активностью в отношении вирусов осповакцины, оспы коров, эктромелии, оспы обезьян и натуральной оспы in vitro обладает соединение НИОХ-14;

2) в экспериментах на мышах, инфицированных вирусом оспы коров (штамм Гришак), выраженной протективной эффективностью обладают НИОХ-14, НИОХ-32 и ST-246, тогда как при заражении мышей вирусом эктромелии (штамм К-1), который является для них естественным патогеном, только применение НИОХ-14 и ST-246 приводит к уменьшению летальности и продукции вируса в легких инфицированных мышей;

3) у мышей аутбредной популяции ICR и степных сурков, инфицированных вирусом оспы обезьян (штамм V79-1-005), препарат НИОХ-14, так же как ST-246, при пероральном введении проявляет лечебно-профилактическое действие;

4) при заражении мышей иммунодефицитной линии SCID и аутбредной популяции ICR вирусом натуральной оспы (штамм Ind-3a) пероральное введение препаратов НИОХ-14 и ST-246 по лечебно-профилактической схеме приводит к уменьшению доли инфицированных животных, продукции вируса и патоморфологических изменений в легких;

5) химическое соединение НИОХ-14 по своей антиортопоксвирусной активности in vitro и in vivo не уступает ST-246 и является субстанцией для разработки на ее основе отечественного противооспенного химиопрепарата.

Степень достоверности и апробация результатов. Статистическую обработку и сравнение экспериментальных данных проводили стандартными методами [3] с помощью пакета компьютерных программ «Statistica 6.0» (StatSoft Inc. 1984-2001) [17]. Основные результаты данной диссертационной работы были представлены на 10 российских и международных научных форумах: WHO Advisory Committee on Variola Virus Research Report of the Thirteenth Meeting, Geneva, 31 Oct. - 1 Nov. 2011; WHO Advisory Committee on Variola Virus Research Report of the foureenth Meeting, Geneva, 1617 Oct. 2012; Всероссийская научно-практическая конференция «Диагностика и профилактика инфекционных болезней», Новосибирск, 26-28 сентября 2013; WHO Advisory Committee on Variola Virus Research Report of the Fifeenth Meeting, Geneva, 2425 Sep. 2013; XII Межгосударственная научно-практическая конференция «Вклад государств-участников содружества независимых государств в обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия населения в современных условиях», г. Саратов, 2526 ноября 2014; WHO Advisory Committee on Variola Virus Research Report of the Sixeenth Meeting, Geneva, 20-21 Oct. 2014; VII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно -приспособительных процессов», Новосибирск, 21-22 апреля 2015; II Международная конференция молодых ученых биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов «OpenBio 2015», наукоград Кольцово, 1 октября 2015; WHO Advisory Committee on Variola Virus Research Report of the Seventeenth Meeting, Geneva, 12-13 Jan. 2016; Всероссийская научно-практическая конференция «Диагностика и профилактика инфекционных болезней на современном этапе», Новосибирск, 26-27 сентября 2016. Кроме того, по материалам диссертации опубликовано 14 научных статей, из них 8 - в отечественных журналах из списка ВАК и 5 - в зарубежных изданиях, а также 22 тезиса в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях. По результатам диссертации получено 5 патентов Российской Федерации на изобретение.

Личный вклад автора в диссертационную работу. Результаты диссертации получены и проанализированы лично автором под руководством д.б.н. Шишкиной Л.Н. и к.м.н. Сергеева Ар.А. Автор принимал непосредственное участие в скрининге и

расширенном исследовании противовирусной активности химических соединений в отношении ВОВ, ВОК, ВЭ, ВОО и ВНО in vitro или in vivo. Все эксперименты с ВОО и ВНО были проведены лично автором в лаборатории с максимальным уровнем биологической защиты в изолирующих пневмокостюмах совместно с сотрудниками отдела «Коллекция микроорганизмов» ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора. Автор глубоко признателен своим научным руководителям д.б.н. Шишкиной Л.Н. и к.м.н. Сергееву Ар.А., а также д.м.н., профессору Сергееву А.Н., к.б.н. Булычеву Л.Е. и д.б.н. Агафонову А.П. за содействие и помощь, оказанные при планировании, проведении, описании, обсуждении и анализе результатов данной диссертационной работы. Автор также горячо благодарит сотрудников отделов профилактики и лечения особо опасных инфекций и «Коллекция микроорганизмов» Бормотова Н.И., Скарнович М.О., Мазуркова О.Ю., Серову О.А., Сергеева Ал.А., Боднева С.А., Пьянкова О.В., Туманова Ю.В., Титову К.А., Юрганову И.А., Галахову Д.О., Овчинникову А.С., всех инженеров и лаборантов, которые участвовали вместе с автором в экспериментах с использованием ВОВ, ВОК, ВЭ, ВОО и ВНО. Особую благодарность автор выражает Таранову О.С. за помощь, которую он оказал при патоморфологическом изучении органов инфицированных ВЭ, ВОО и ВНО животных, а также Лобановой Т.П. и Митюниной М.П. за содействие в поиске зарубежной и отечественной научной литературы по теме диссертации.

Работа была выполнена при финансовой поддержке федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009 - 2014 годы)».

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, заключение и выводы, список сокращений и условных обозначений, список литературы и список иллюстративного материала. Диссертация содержит 23 таблицы и 16 рисунков. Список литературы включает 144 источников, в том числе 127 статей в зарубежных журналах.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: АНТИОРТОПОКСВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ ХИМИЧЕСКИ СИНТЕЗИРОВАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

1.1 Разрабатываемые химические препараты, обладающие антиортопоксвирусным действием

Снижение противооспенного иммунитета среди населения, связанное с отменой оспопрививания после элиминации вируса натуральной оспы (ВНО) из окружающей среды, циркуляция вирусов оспы обезьян (ВОО), верблюдов (ВОВр), буйволов (ВОБ) и коров (ВОК), а также спорадические вспышки ортопоксвирусных инфекций среди животных создают реальные предпосылки для эпизоотий и заболеваний людей, вызванных патогенными для человека ортопоксвирусами [1, 33, 56, 99, 124]. Кроме того, в настоящеее время, человеческая популяция подвергается потенциальной опасности возникновения оспы, поскольку невозможно исключить наличие нелегального хранения ВНО и преднамеренного использования против населения природных или рекомбинантных штаммов вируса ВНО и ВОО в качестве биологического оружия [98]. В связи с этим разработка высокоэффективных противовирусных лекарств, обладающих лечебно-профилактическим действием при заражении человека и животных патогенными ортопоксвирусами, является важной задачей для медицины и ветеринарии.

В 20 веке были найдены химические вещества, обладающие противооспенным действием. Так, в период проведения компании ликвидации оспы в серии исследований в Индии с профилактической целью был использован препарат Метисазон [57]. В настоящее время известен препарат Марборан® (Метисазон) и противовирусное лекарственное средство для ветеринарии, содержащее диметилсульфоксид, полиэтиленгликоль и Метисазон [32, 5]. В связи с тем, что Метисазон, блокирующий синтез поздних белков вируса и сборку вириона, был умеренно эффективным против ортопоксвирусов, причем только в максимальной переносимой концентрации, его применение было прекращено [2]. Вместе с тем, проводится поиск более эффективных антиортопоксвирусных препаратов среди большого количества близких соединений класса тиосемикарбазонов.

Поскольку разработка лекарств с самого начала является дорогостоящим и длительным по времени процессом [63], использование лицензированных лекарств, утвержденных для иных целей, выглядело привлекательной возможностью получения антивирусных средств против натуральной оспы. Так, противооспенная активность была определена для ряда зарегистрированных ранее в FDA препаратов.

Гливек (обозначаемый STI-571, или иматиниба мезилат), являющийся утвержденным FDA лекарством для лечения хронического миелолейкоза, проявляет также антивирусную активность против поксвирусов. Гливек блокирует действие тирозинкиназы Abl-семейства [52] и тем самым блокирует выход вируса вакцины из инфицированных клеток in vitro [91, 109, 144]. Лечение Гливеком обеспечивает выживание мышей интраназально зараженных вирусом вакцины [109]. Однако эффективность лечебного действия Гливека наблюдается лишь при низких заражающих дозах вируса и в случаях, когда лекарство вводили менее чем через 48 часов после заражения. Исследования лечебно-профилактического действия Гливека на кроликах, инфицированных высоковирулентным штаммом вируса оспы кроликов, и на мышах, инфицированных высоковирулентным штаммом вируса эктромелии, выявили гораздо меньшую его эффективность, чем у животных, инфицированных низко вирулентными для них штаммами ортопоксвирусов. Кроме того, при применении Гливека могут развиваться побочные эффекты, такие как водянка, цитопения и токсическое поражение печени.

Осознавая важность проблемы возникновения устойчивости ортопоксвирусов к противовирусным препаратам, исследователи во всем мире продолжают интенсивный поиск новых противооспенных химических соединений. Так, был проведен высокопропускной скрининг природных и синтетических химических продуктов, в том числе непатентованных веществ, разрешенных для применения в медицине и ветеринарии, с целью поиска антагонистов ортопоксвирусов. В результате этого было выявлено 13 химических соединений, имеющих ранее не установленные для них антипоксвирусные свойства [51]. При этом одно из них - известный противоопухолевый препарат Митоксантрон, ингибирующий, как было установлено, ДНК-лигазу вируса и образование внутриклеточного зрелого вируса, был наиболее активным не только в отношении вируса вакцины, но также блокировал размножение вирусов оспы коров и обезьян in vitro [51, 27]. Кроме того, внутрибрюшинное введение Митоксантрона

мышам, зараженным вирусом оспы коров, приводило к увеличению их выживаемости и продолжительности жизни [27]. Продолжаются дальнейшие исследования активности Митоксантрона в отношении других ортопоксвирусов.

Другой препарат (S)-HPMPA, показал свою антиортопоксвирусную эффективность in vitro, тем не менее, оказался не эффективным in vivo. Однако соединение (S)-HPMPA с липидными эфирами, такими как гексадецил пропандиол алкоксиалканол (HDP-CDV), привело к усилению его противоортопоксвирусной активности in vitro и обеспечило эффективность in vivo в отношении заболеваний у мышей, вызванных вирусами оспы коров и вакцины [103]. Связывание соединений с липидами подобными HDP является перспективным направлением по усилению биодоступности препаратов.

Начиная с 2001 г. и по настоящее время проводятся исследования еще двух потенциальных противооспенных соединений - ингибиторов вирусной ДНК-полимеразы: Vistide® (Цидофовир), разрешенный для лечения герпесного ретинита, и СМХ001 - липидное пролекарство Цидофовира, биодоступное при пероральном использовании [98].

Было обнаружено, что Цидофовир проявляет в лабораторных условиях антивирусную активность против ортопоксвирусов, и эффективен против оспы коров и инфекции, вызванной вирусом вакцины у мышей [87, 32, 104, 89]. Однако существенным недостатками Цидофовира считаются высокая нефротоксичность и низкая биодоступность, в результате чего терапевтический эффект достигается только при внутривенном введении препарата.

В то же время при ковалентном связывании Цидофовира с HDP-CDV недавно получено новое липидное пролекарство Цидофовира - СМХ001 [98]. Полученный конъюгат СМХ001 аналогичен натуральному липиду и конкурирует с лизофосфодитилхолином в организме. В отличие от Цидофовира, CMX001 обладает высокой биодоступностью при оральном применении и накапливается в плазме крови и/или лимфе в высоких концентрациях, не аккумулируясь при этом в почках, тем самым, исключая их токсическое поражение. Компания Chimerix (NC, USA) получила лицензию (IND) для препарата CMX001 и с 2006 года проводит его клинические испытания.

В начале 2002 г. в №АГО (Национальный институт аллергии и инфекционных болезней, США) в ходе выполнения программы по созданию противовирусных препаратов, биодоступных при пероральном применении, для предотвращения и лечения ортопоксвирусных инфекций, в том числе, и вследствие биотерроризма, была проведена огромная работа по выявлению противовирусных свойств большого числа органических соединений [78]. При этом было исследовано 356240 соединений. Среди них выявлено 759 препаратов, показавших отсутствие цитотоксичности, и не менее чем 50 % - ингибирующую активность в отношении вируса осповакцины (ВОВ) и вируса оспы коров (ВОК) по сравнению с контролем. Указанные соединения были разбиты по структурным признакам на 9 различных групп и подвергнуты тщательному исследованию, в процессе которого была выявлена серия производных

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кабанов, Алексей Сергеевич, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Борисевич С.В., Маренникова С.С., Махлай А.А. и др. Оспа обезьян: особенности распространения после отмены обязательного оспопривания // ЖМЭИ.-2012.- №2.- С. 69-73.

2. Всемирная организация здравоохранения. Научный обзор исследований вируса натуральной оспы, 1999-2010 г. URL: http://whqlibdoc.who.int/hq/2010/WHO_HSE_GAR_BDP_2010.3_rus.pdf [цит. 25.11.16].

3. Закс Л. Статистическое оценивание.- М.: Статистика, 1976.- 598 С.

4. Кабанов А.С., Шишкина Л.Н., Мазурков О.Ю. и др. Оценка лечебно-профилактической эффективности химического соединения НИОХ-14 в отношении вируса эктромелии in vivo // ЖМЭИ.- 2015.- № 1.- С. 58-65.

5. Онищук Ф.Д., Лозюк Л,В., Лозюк Р.А. Лекарственное средство для профилактики и лечения вирусных болезней животных. Патент 2168988 РФ (A61K31/175, A61K31/41).

6. Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР. 12.08.1977 г. № 755.

7. Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных. -Washington, D.C.: National Academy Press, 1996.- 138 Р.

8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева.- М.: Медицина, 2005.- 832 С.

9. Сергеев, А.А. Сурок - модельное животное для оспы обезьян: исследование и использование при оценке эффективности противовирусных препаратов: дисс. ... канд. мед. наук: 03.00.06/ Сергеев Александр Александрович. - Кольцово Новосибирской обл., 2015. - 133 С.

10. Сергеев А.А., Кабанов А.С., Булычев Л.Е. и др. Способ оценки активности лечебно-профилактических препаратов против вируса натуральной оспы. Патент 2522483 РФ (A61K 35/76 A61P 31/12/ d2N 7/00).

11. Сергеев Ал.А., Кабанов А.С., Булычев Л.Е. и др. Использование мыши в качестве модельного животного для оценки эффективности лечебно-профилактического действия препаратов против оспы обезьян // Пробл. особо опасных инф.- 2013.- № 2.- С. 60-65.

12. Селиванов Б.А., Беланов Е.Ф., Бормотов Н.И. и др. Производные трицикло[3.2.2.02,4]нон_8_ен_6,7_дикарбоновой кислоты высоко эффективно ингибируют репликацию различных видов ортопоксвирусов // ДАН.- 2011.- Т. 441, № 3.-С. 414-418.

13. Селиванов Б.А. Тихонов А.Я., Беланов Е.Ф. и др. Гидрат К-{3,5-диоксо-4-азатетрацикло-[5.3.2.02,6.08,10]додец-11-ен-4-ил}-2-гидроксибензамида, обладающий противовирусной активностью в отношении ортопоксвирусов. Патент 2412168 РФ (C07D209/56).

14. Селиванов Б.А. Тихонов А.Я., Беланов Е.Ф. и др. Метил, хлор и нитропроизводные К-{3,5-диоксо-4-азатетрацикло-[5.3.2.02,6.08,10]додец-11-ен-4-ил}-2-гидроксибензамида - противовирусные препараты, ингибирующие репликацию различных видов ортопоксвирусов. Патент 2440983 РФ (C07D209/56, A61P31/00).

15. Селиванов Б.А. Тихонов А.Я., Беланов Е.Ф. и др. К-{3,5-Диоксо-4-азатетрацикло-[5.3.2.02,6.08,10]додец-11-ен-4-ил}-4-гидроксибензамид -противовирусный препарат, ингибирующий репликацию различных видов ортопоксвирусов. Патент 2424800 РФ (A61K31/403, A61P31/12, C07D209/00).

16. Селиванов Б.А. Тихонов А.Я., Беланов Е.Ф. и др. 4-{3,5-Диоксо-4-азатетрацикло-[5.3.2.02,6.08,10]додец-11-ен-4-ил}-4-

азатетрацикло[5.3.2.02,6.08,10]додец-11-ен-3,5-дион - противовирусный препарат, ингибирующий репликацию различных видов ортопоксвирусов и обладающий сниженной токсичностью для животных. Патент 2423359 РФ (C07D403/02, A61K31/403).

17. Статистический анализ данных Statistica 6 // под ред. А.А. Халафяна.- 2-е изд.- М.: Бином-Пресс, 2010.- 528 С.

18. Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Агафонов А.П., Сергеев А.А., Кабанов А.С., Булычев Л.Е., Сергеев А.А., Горбатовская Д.О., Пьянков О.В., Бормотов Н.И., Щукин Г.И., Селиванов Б.А., Тихонов А.Я. Лечебно-профилактическое средство против вируса натуральной оспы и способы его получения и применения. Патент RU № 2543338, опубл. 27.02.2015, Бюл № 6.

19. Abou-Gharbia M.A., Patel U.R., Webb M.B. et al. Polycyclic aryl- and heteroarylpiperazinyl imides as 5-HT1A receptor ligands and potential anxiolytic agents: synthesis and structure-activity relationship studies // J. Med. Chem.- 1988.- Vol. 31, N 7.- P. 1382-1392.

20. Abou-Gharbia M.A., Wilmington D. 1,4-Diazines derivatives. Patent US no. 4851533, 1988.

21. Abou-Gharbia M.A., Wilmington D. Fused bicyclic imides with psychotropic activity. Patent US no. 4892943, 1990.

22. Abou-Gharbia M.A., Mills G., Stack G.P. et al. Antihypertensive polycyclic imides. Patent US no. 4957913, 1990.

23. Abou-Gharbia M., Moier J.A., Nielsen S.T. et al. New antihistamine piperazines and piperidine derivatives // J. Med. Chem.- 1995.- Vol. 38, N 20.- P. 4026-4032.

24. Abou-Gharbia M., Wilmington D., Nielsen S.T. Cyclic imidea as H1-antagonists. Patent US no. 4777254, 1988.

25. Adams M.M., Rice A.D., Moyer R.W. Rabbitpox virus and vaccinia virus infection of rabbits as a model for human smallpox // J. Virol.- 2007.- Vol. 81, N 20.- P. 11084-11095.

26. Aldern K.A., Ciesla S.L., Winegarden K.L. et al. Increased antiviral activity of 1-O-hexadecyloxypropyl-[2-(14)C]cidofovir in MRC-5 human lung fibroblasts is explained by unique cellular uptake and metabolism // Mol. Pharmacol.- 2003.- Vol. 63, P. 678-681.

27. Altmann S.E., Smith A.L., Dyall J. et al. Inhibition of cowpox virus and monkeypox virus infection by mitoxantrone // Antivir. Res.- 2012.- Vol. 93, N 2.- P. 305-308.

28. Americo J.L., Moss B., Earl P.L. Identification of wild-derived inbred mouse strains highly susceptible to monkeypox virus infection for use as small animal models // J. Virol.- 2010. Vol. 84, N 16.- P. 8172-8180.

29. Anderson P.D., Bokor G. Bioterrorism: Pathogens as weapons // J. Pharm. Pract.-2012.- Vol. 25, P. 521-529.

30. Arya V. P., Shenoy S. J. Synthesis of new heterocycles: Part XIX. Syntheses of novel heterocycles by 1,4-cycloaddition reaction of 1,3-cyclohexadiene, 1,3,5-cycloheptatriene, cyclooctatetraene, 1-methyl-2-pyridone and anthranil with maleimides // Indian J. Chem.- 1976.- Vol. 14B, P. 780-783.

31. Bailey T.R., Rippin S.R., Opsitnick E. et al. N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-Octahydro-1,3-dioxo-4,6-ethenocycloprop[f]isoindol-2-(1H)-yl)carboxamides: identification of novel orthopoxvirus egress inhibitors // J. Med. Chem.- 2007.- Vol. 50, N 7.- P. 1442-1444.

32. Baker R.O., Bray M., Huggins J.W. Potential antiviral therapeutics for smallpox, monkeypox and other orthopoxvirus infections // Antivir. Res. - 2003.- Vol. 57, N 1-2.- P. 1323.

33. Baxby D., Bennett M., Getty B. Human cowpox 1969-93: a review based on 54 cases // Brit. J. Dermatol.- 1994.- Vol. 131, N 5.- P. 598-607.

34. Becker M.N., Obraztsova M., Kern E.R. et al. Isolation and characterization of cidofovir resistant vaccinia viruses // Virol. J.- 2008.- Vol. 5.- P. 58.

35. Berhanu A, King D.S., Mosier S. et al. ST-246 inhibits in vivo poxvirus dissemination, virus shedding, and systemic disease manifestation // Antimicrob. Agents Chemother.- 2009.- Vol. 53.- P. 4999-5009.

36. Bhattacharjee G., Singh A.K., Saikia R. Kinetics of the reaction of 2,3-[3-norcaren-endo-2,5-diyl]-N-(2',4'-dinitrophenoxy)succinimide with hydroxide ion, piperidine, morpholine and cyclohexylamine. Base catalysis with hydroxide ion and piperidine // J. Ind. Chem. Soc.- 1991.- Vol. 68, N 7.- P. 407-410.

37. Biagini P., Theves C., Balaresque P. et al. Variola virus in a 300-year-old siberian mummy // N. Engl. J. Med.- 2012.- Vol. 367.-P. 2057-2059.

38. Bray M., Martinez M., Kefauver D. et al. Treatment of aerosolized cowpox virus infection in mice with aerosolized cidofovir // Antivir. Res.- 2002.- Vol. 54.- P. 129-142.

39. Bray M., Martinez M., Smee D.F. et al. Cidofovir protects mice against lethal aerosol or intranasal cowpox virus challenge // J. Infect. Dis.- 2000.- Vol. 181.- P. 10-19.

40. Brechbuchler H.U., Petitpierre J.C. Dicarboximide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung. Patent FRG an 2417839, 1974.

41. Buller R.M., Owens G., Schriewer J. et al. Efficacy of oral active ether lipid analogs of cidofovir in a lethal mousepox model // Virology.- 2004.- Vol. 318.- P. 474-481.

42. Centers for Disease Control and prevention smallpox vaccine adverse events monitoring and response system for the first stage of the smallpox vaccination program // Morb. Mortal. Wkly. Rep.- 2003.- Vol. 52, N 88.- P.89-99.

43. Chapman J.L., Nichols D.K., Martinez M.J. et al. Animal models of orthopoxvirus infection // Vet. Path.- 2010.- Vol. 47, N 5.- P. 852-870.

44. Chen Y., Honeychurch K.M., Yang G. et al. Vaccinia virus p37 interacts with host proteins associated with LE-derived transport vesicle biogenesis // Virol. J.- 2009.- Vol. 6.- P. 44.

45. Chimerix. CMX001 for treatment of smallpox. URL: http://www.fda.gov/downloads/AdvisoryCommittees/CommitteesMeetingMaterials/Drugs/Ant iviralDrugsAdvisoryCommittee/UCM283285.pdf ^ht. 11.01.17].

46. Chinsangaram J., Honeychurch K.M., Tyavanagimatt S.R. et al. Pharmacokinetic comparison of a single oral dose of polymorph form I versus form V capsules of the antiorthopoxvirus compound ST-246 in human volunteers // Antimicrob. Agents Chemother.-2012.- Vol. 56.- P. 3582-3586.

47. Damaso C.R., Esposito J.J., Condit R.C. et al. An emergent poxvirus from humans and cattle in Rio de Janeiro State: Cantagalo virus may derive from Brazilian smallpox vaccine // Virology.- 2000.- Vol. 277, N 2.- P. 439-449.

48. De Clercq E. Vaccinia virus inhibitors as a paradigm for the chemotherapy of poxvirus infections // Clin. Microbiol. Rev.- 2001.- Vol. 14, N 2.- P. 382-397.

49. De Clercq E. Clinical potential of the acyclic nucleoside phosphonatescidofovir, adefovir, and tenofovir in treatment of DNA virus and retrovirus infections // Clin. Microbiol. Rev.- 2003.- Vol. 16.- P. 569-596.

50. De Clercq E. Therapeutic potential of HPMPC as an antiviral drug // Rev. Med. Virol.- 1993.- Vol. 3.- P. 85-96.

51. Deng L., Dai P., Ciro A. et al. Identification of novel antipoxviral agents: mitoxantrone inhibits vaccinia virus replication by blocking virion assembly // Virol J.- 2007.-Vol. 81, N 24.- P. 13392-13402.

52. Druker B.J., Tamura S., Buchdunger E. et al. Effects of a selective inhibitor of the Abl tyrosine kinase on the growth of Bcr-Abl positive cells // Nat Med.- 1996.- Vol. 2, N 5.- P. 561-566.

53. Duraffour S, Andrei G, Snoeck R. Tecovirimat, a p37 envelope protein inhibitor for the treatment of smallpox infection // IDrugs.- 2010.- Vol. 13. N 3.- P.181-191.

54. Duraffour S., Snoeck R., Krecmerova M. et al. Activities of several classes of acyclic nucleoside phosphonates against camelpox virus replication in different cell culture models // Antimicrob. Agents Chemother.- 2007.- Vol. 51, N 12.- P. 4410-4419.

55. Duraffour S., Snoeck R., de Vos R. et al. Activity of the anti-orthopoxvirus compound ST-246 against vaccinia, cowpox and camelpox viruses in cell monolayers and organotypic raft cultures // Antivir. Ther.- 2007.- Vol. 12.- P. 1205-1216.

56. Favier A.L., Flusin O., Lepreux S. et al. Necrotic ulcerated lesion in a young boy caused by cowpox virus infection // Case Rep. Dermatol.- 2011.- Vol. 3. N 3.- P. 186-194.

57. Fenner F., Henderson, Donald A Arita, Isao J. et al. Smallpox and its eradication // Geneva: World Health Organization.- 1988.- P. 1793. URL: http://www.who.int/iris/handle/10665/39485 ^ht. 25.11.16].

58. Geerinck K., Lukito G., Snoeck R. et al. A case of human orf in an immunocompromised patient treated successfully with cidofovir cream // J. Med. Virol.-2001.- Vol. 64.- P. 543-549.

59. Goff A., Twenhafel N., Garrison A. et al. In vivo imaging of cidofovir treatment of cowpox virus infection // Virus Res.- 2007.- Vol. 128, N 1-2.- P. 88-98.

60. Grosenbach D.W., Berhanu A., King D.S. et al. Efficacy of ST-246 versus lethal poxvirus challenge in immunodeficient mice // Proc. Natl. Acad. Sci.- 2010.- Vol. 107.- P. 838-843.

61. Grosenbach D.W., Jordan R., Hruby D.E. Development of the small-molecule antiviral ST-246® as a smallpox therapeutic // Fut. Virol.- 2011.- Vol. 6, N 5.- P. 653-671.

62. Henderson D.A., Inglesby T.V., Bartlett J.G. et al. Smallpox as a biological weapon: medical and public health management. Working Group on Civilian Biodefense // J. Am. Med. Assoc.- 1999.- Vol. 281.- P. 2127-2137.

63. Henderson D.A., Fenner F. Recent events and observations pertaining to smallpox virus destruction in 2002 // Clin. Infect. Dis.- 2001.- Vol. 33, N 7.- P. 1057-1059.

64. Herrlich A. Die Pocken. Stuttgart: Georg Thieme Verlag.- 1960.- P. 285.

65. Hostetler K.Y., Beadle J.R., Trahan J. et al. Oral 1-O-octadecyl-2-O-benzyl-sn-glycero-3-cidofovir targets the lung and is effective against a lethal respiratory challenge with ectromelia virus in mice // Antivir. Res.- 2007.- Vol. 73.- P. 212-218.

66. Huggins J.W., Baker R.O., Beadle J.R. et al. Orally active ether lipid pro-drugs of cidofovir for the treatment of smallpox // Antivir. Res.- 2002.- Vol. 53, N A66.- P. 104.

67. Huggins J., Goff A., Hensley L., et al. Nonhuman primates are protected from smallpox virus or monkeypox virus challenges by the antiviral drug ST-246 // Antimicrob. Agents Chemother.- 2009.- Vol. 53, N 6.- P. 2620-2625.

68. Huggins J.W., Martinez M.J., Hartmann C.J. et al. Successful cidofovir treatment of smallpox-like disease in Variola and monkeypox primate models // Antivir. Res.- 2004.-Vol. 62.- P. 56-57.

69. Hutson C.L., Damon I.K. Monkeypox virus infections in small animal models for evaluation of anti-poxvirus agents // Viruses.- 2010.- Vol. 2.- P. 2763-2776.

70. Israely T., Paran N., Lustig S. et al. A single cidofovir treatment rescues animals at progressive stages of lethal orthopoxvirus disease // Virology J.- 2012.- Vol. 9.- P. 119.

71. Jahrling P.B., Fritz E.A., Hensley L.E. Countermeasures to the bioterrorist threat of smallpox // Curr. Mol. Med.- 2005.- Vol. 5.- P. 817-826.

72. Jordan R., Bailey T.R., Rippin S.R. Compounds, compositions and methods for treatment and prevention of orthopoxvirus infections and associated diseases. Patent WO no. 112718, 2005.

73. Jordan R., Bailey T.R., Rippin S.R. Compounds, compositions and methods for treatment and prevention orthopoxvirus infections and associated diseases. Patent US no. 0235051, 2006.

74. Jordan R., Bailey T.R., Rippin S.R. Compounds, compositions and methods for treatment and prevention orthopoxvirus infections and associated diseases. Patent US no. 0103181, 2008.

75. Jordan R., Bailey T.R., Rippin S.R. et al. Compounds, compositions and methods for treatment and prevention of orthopoxvirus infections and associated deseases. Patent US no.0020922, 2012.

76. Jordan R., Chinsangaram J., Bolken T.C. et al. Safety and pharmacokinetics of the antiorthopoxvirus compound ST-246 following repeat oral dosing in healthy adult subjects // Antimicrob. Agents Chemother.- 2010.- Vol. 54, N 6.- P. 2560-2566.

77. Jordan R., Goff A., Frimm A. et al. ST-246 antiviral efficacy in a nonhuman primate monkeypox model: determination of the minimal effective dose and human dose justification // Antimicrob. Agents Chemother.- 2009.- Vol. 53, N 5.- P. 1817-1822.

78. Jordan R., Leeds J.M., Tyavanagimatt S. et al. Development of ST-246 for treatment of poxvirus infections // Viruses.- 2010.- Vol. 2, N 11.- P. 2409-2435.

79. Keith K.A., Hitchcock M.J.M., Lee W.A. et al. Evaluation of nucleoside phosphonates and their analogs and prodrugs for inhibition of orthopoxvirus replication // Antimicrob. Agents Chemother.- 2003.- Vol. 47, N 7.- P. 2193-2198.

80. Kern, E.R. In vitro activity of potential anti-poxviral agents // Antivir. Res.-2003.- Vol. 57.- P. 35-40.

81. Kern E.R., Hartline C., Harden E. et al. Enhanced inhibition of orthopoxvirus replication in vitro by alkoxyalkyl esters of cidofovir and cyclic cidofovir // Antimicrob. Agents Chemother.- 2002.- Vol. 46.- P. 991-995.

82. Kern E.R., Prichard M.N., Quenelle D.C. et al. Activities of certain 5-substituted 4_-thiopyrimidine nucleosides against orthopoxvirusinfections // Antimicrob. Agents Chemother.- 2009.- Vol. 53, N 2.- P. 572-579.

83. Knorr C.W., Allen S.D., Torres A.R. et al. Effects of cidofovir treatment on cytokine induction in murine models of cowpox and vaccinia virus infection // Antiviral Res.-2006.- Vol. 72.- P. 125-133.

84. Kornbluth R.S., Smee D.F., Sidwell R.W. et al. Mutations in the E9L polymerase gene of cidofovirresistantvaccinia virus strain WR are associated with the drug resistance phenotype // Antimicrob. Agents Chemother.- 2006.- Vol. 50.- P. 4038-4043.

85. Lebeau I., Andrei G., Dal Pozzo F. et al. Activities of alkoxyalkyl esters of cidofovir (CDV), cyclic CDV, and (S)-9-(3-hydroxy-2-phosphonylmethoxypropyl) adenine against orthopoxviruses in cell monolayers and in organotypic cultures // Antimicrob. Agents Chemother.- 2006.- Vol. 50, N 7.- P. 2525-2529.

86. Lederman E.R., Davidson W., Groff H.L. et al. Progressive vaccinia: case description and laboratory-guided therapy with vaccinia immune globulin, ST-246, and CMX001 // J. Infect. Dis.- 2012.- Vol. 206.- P. 1372-1385.

87. LeDuc J.W., Jahrling P.B. Strengthening national preparedness for smallpox: an update // Emer. Infect. Dis.- 2001.- Vol. 7.- P. 155-157.

88. Magee W.C., Aldern K.A., Hostetler K.Y. et al. Cidofovir and (S)-9-[3-hydroxy-(2-phosphonomethoxy)propyl]adenine are highly effective inhibitors of vaccinia virus DNA polymerase when incorporated into the template strand // Antimicrob. Agents Chemother.-2008.- Vol. 52.- P. 586-597.

89. Magee W.C., Hostetler K.Y., Evans D.H. Mechanism of inhibition of vaccinia virus DNA polymerase by cidofovirdiphosphate // Antimicrob. Agents Chemother.- 2005.-Vol. 49.- P. 3153-3162.

90. McCollum A.M., Li Y., Wilkins K. et al. Poxvirus viability and signatures in historical relics // Emerg. Infect. Dis.- 2014.- Vol. 20, N 2.- P. 177-184.

91. McFadden G. Poxvirus tropism // Nat. Rev. Microbiol.- 2005.- Vol. 3, N 3.- P. 201-213.

92. Ming-xin D., Jian Z., Xu-qing P. et al. Tricyclononene carboxamide derivatives as novel anty-HIV-1 agents // Eur. J. Med. Chem.- 2010.- Vol. 45, N 10.- P. 4096-4103.

93. Mucker E.M., Goff A.J., Shamblin J.D. et al. Efficacy of tecovirimat (st-246) in nonhuman primates infected with Variola virus (smallpox) // Antimicrob. Agents Chemother.-2013.- Vol. 57, N 12.- P. 6246-6253.

94. Nalca A., Hatkin J.M., Garza N.L. et al. Evaluation of orally delivered ST-246 as postexposure prophylactic and antiviral therapeutic in an aerosolized rabbitpox rabbit model // Antiviral. Res.- 2008.- Vol. 79.- P. 121-127.

95. Neyts J., Leyssen P., Verbeken E. et al. Efficacy of cidofovir in a murine model of disseminated progressive vaccinia // Antimicrob. Agents Chemother.- 2004.- Vol. 48, N 6.-P. 2267-2273.

96. Olson V.A., Smith S.K., Foster S. et al. In vitro efficacy of brincidofovir against variola virus // Antimicrob. Agents Chemother.- 2014.- Vol. 58, N 9.- P. 5570 -5571.

97. Painter W., Robertson A., Trost L.C. et al. First pharmacokinetic and safety study in humans of the novel lipid antiviral conjugate CMX001, a broad-spectrum oral drug active against double-stranded DNA viruses // Antimicrob. Agents. Chemother.- 2012.- Vol. 56, N 5.- P. 2726-2734.

98. Parker S., Chen N.G., Foster S. et al. Evaluation of disease and viral biomarkers as triggers for therapeutic intervention in respiratory mousepox - an animal model of smallpox // Antivir. Res.- 2012.- Vol. 94, N 1.- P. 44-53.

99. Parker S, Handley L, Buller R.M. Therapeutic and prophylactic drugs to treat orthopoxvirus infections // Fut. Virol.- 2008.- Vol. 3, N 6.- P. 595-612.

100. Parker S., Schriewer J., Oberle C. et al. Using biomarkers to stage disease progression in a lethal mousepox model treated with CMX001 // Antivir. Ther.- 2008.- Vol. 13, N 7.- P. 863-873.

101. Parker S., Siddiqui A.M., Oberle C. et al. Mousepox in the C57BL/6 strain provides an improved model for evaluating anti-poxvirus therapies // Virology.- 2009.- Vol. 385, N 1.- P. 11-21.

102. Parker S., Touchette E., Oberle C. et al. Efficacy of therapeutic intervention with an oral ether-lipid analog of cidofovir (CMX001) in a lethal mousepox model // Antivir. Res.-2008. - Vol. 77.- P. 39-49.

103. Quenelle D.C., Buller R.M., Parker S. et al. Efficacy of delayed treatment with ST-246 given orally against systemic orthopoxvirus infections in mice // Antimicrob. Agents Chemother.- 2007.- Vol. 51.- P. 689-695.

104. Quenelle D.C., Collins D.J., Kern E.R. Efficacy of multiple- or single-dose cidofovir against vaccinia and cowpox virus infections in mice // Antimicrob. Agents Chemother.- 2003.- Vol. 47.- P. 3275-3280.

105. Quenelle D.C., Collins D.J., Wan W.B. et al. Oral treatment of cowpox and vaccinia virus infections in mice with ether lipid esters of cidofovir // Antimicrob. Agents Chemother.- 2004.- Vol. 48.- P. 404-412.

106. Quenelle D.C., Kern E.R. Treatment of vaccinia and cowpox virus infections in mice with CMX001 and ST-246 // Viruses.- 2010.- Vol. 2, N 12.- P. 2681-2695.

107. Quenelle D.C., Prichard M.N., Keith K.A. et al. Synergistic efficacy of the combination of ST-246 with CMX001 against orthopoxviruses // Antimicrob. Agents Chemother.- 2007.- Vol. 51.- P. 4118-4124.

108. Reed K.D., Melski J.W., Graham M.B. et al. The detection of monkeypox in humans in the Western Hemisphere // N. Engl. J. Med.- 2004.- Vol. 350.- P. 342-350.

109. Reeves P.M., Bommarius B., Lebeis S. et al. Disabling poxvirus pathogenesis by inhibition of Abl-family tyrosine kinases // Nat. Med.- 2005.- Vol. 11, N 7.- P. 731-739.

110. Rice A.D., Adams M.M., Lampert B. et al. Efficacy of CMX001 as a prophylactic and presymptomatic antiviral agent in New Zealand white rabbits infected with rabbitpox virus, a model for orthopoxvirus infections of humans // Viruses.- 2011.- Vol. 3.- P. 3-82.

111. Rice A.D., Adams M.M., Wallace, G. et al. Efficacy of CMX001 as a post exposure antiviral in New Zealand white rabbits infected with rabbitpox virus, a model for orthopoxvirus infections of humans // Viruses.- 2011.- Vol. 3.- P. 47-62.

112. Roy C.J., Voss T.G. Use of the aerosol rabbitpox virus model for evaluation of anti-poxvirus agents // Viruses.- 2010.- Vol. 2.- P. 2096-2107.

113. Safrin S., Cherrington J., Jaffe H.S. Clinical uses of cidofovir // Rev. Med. Virol.- 1997.- Vol. 7.- P.145-156.

114. Sbrana E., Jordan R., Hruby D.E. et al. Efficacy of the antipoxvirus compound ST-246 for treatment of severe orthopoxvirus infection // Am. J. Trop. Med. Hyg.- 2007.- Vol. 76, N 4.- P. 768-773.

115. Schultz D.A., Sagartz J.E., Huso D.L. et al. Experimental infection of an African dormouse (Graphiurus kelleni) with monkeypox virus // Virology.- 2009.- Vol. 383.- P. 86-92.

116. Selivanov B.A., Belanov E.F., Bormotov N.I. et al. Tricyclo[3.2.2.02,4]non-8-en-6,7-Dicarbonic acid derivatives efficiently inhibits the replication of different orthopoxvirus species // Doklady Biological Sciences.- 2011.- Vol. 441, N 1.- P. 424-428.

117. Sergeev A.A., Kabanov A.S., Bulychev L.E. et al. The Possibility of using the ICR mouse as an animal model to assess anti-monkeypox drug efficacy // Transbound. Emerg. Dis.- 2015.- doi: 10.1111/tbed.12323.

118. Sergeev A.A., Kabanov A.S., Bulychev L.E. et al. Using the ground squirrel (marmota bobak) as an animal model to assess monkeypox drug efficacy // Transbound. Emerg. Dis.- 2015.- doi: 10.1111/tbed.12364.

119. SIGA Technologies Inc. Advisory committee briefing book. Human BioArmor. Background package for FDA Advisory committee meeting on December 14-15, 2011. Vol. 1. USA. URL: http://www.fda.gov/downloads/AdvisoryCommittees/CommitteesMeetingMaterials/Drugs/Ant iviralDrugsAdvisoryCommittee/UCM283286.pdf ^ht. 11.01.17].

120. Smee D.F., Bailey K.W., Sidwell R.W. Treatment of lethal vaccinia virus respiratory infections in mice with cidofovir // Antivir. Chem. Chemother.- 2001.- Vol. 12.- P. 71-76.

121. Smee D.F., Bailey K.W., Wong M.H. et al. Effects of cidofovir on the pathogenesis of a lethal vaccinia virus respiratory infection in mice // Antivir. Res.- 2001.-Vol. 52, N 1.- P. 55-62.

122. Smee D.F., Bailey K.W., Wong M. et al. Intranasal treatment of cowpox virus respiratory infections in mice with cidofovir // Antivir. Res.- 2000.- Vol. 47.- P. 171-177.

123. Smee D.F., Sidwell R.W. A review of compounds exhibiting anti-orthopoxvirus activity in animal models // Antivir. Res.- 2003.- Vol. 57, N 1-2.- P. 41-52.

124. Smee D.F., Sidwell R.W., Kefauver D. et al. Characterization of wild-type and cidofovir-resistant strains of camelpox, cowpox, monkeypox, and vaccinia viruses // Antimicrob. Agents Chemother.- 2002.- Vol. 46.- P. 1329-1335.

125. Smee D.F., Wandersee M.K., Bailey K.W. et al. Characterization and treatment of cidofovir-resistant vaccinia (WR strain) virus infections in cell culture and in mice // Antivir. Chem. Chemother.- 2005.- Vol. 16.- P. 203-211.

126. Smee D.F., Wong M.H., Bailey K.W. et al. Effects of four antiviral substances on lethal vaccinia virus (IHD strain) respiratory infections in mice // Int. J. Antimicrob. Agents.-2004.- Vol. 23.- P. 430-437.

127. Smith S.K., Olson V.A., Karem K.L. et al. In vitro efficacy of ST-246 against smallpox and monkeypox // Antimicrob. Agents Chemother.- 2009.- Vol. 53.- P. 1007-1012.

128. Smith S.K., Self J., Weiss S. et al. Effective antiviral treatment of systemic orthopoxvirus disease: ST-246 treatment of prairie dogs infected with monkeypox virus // J. Virol.- 2011.- Vol. 85, N 17.- P. 9176-9187.

129. Snoeck R., Holy A., Dewolf-Peeters C. et al. Antivaccinia activities of acyclic nucleoside phosphonate derivatives in epithelial cells and organic cultures // Antimicrob. Agents Chemother.- 2002.- Vol. 46.- P. 3356-3361.

130. Song H., Janosko K., Johnson R.F. et al. Poxvirus antigen staining of immune cells as a biomarker to predict disease outcome in monkeypox and cowpox virus infection in non-human hrimates // PloS One.- 2013.- Vol. 8, N 4.- P. e60533. doi: 10.1371/journal.pone.0060533.

131. Srivastava V., Srivastava A., Verma S. M. An NMR study of HN2..n-electron interaction: conformational analysis about the nitrogen-carbon(phenyl) bond in N-(o-aminophenyl)succinimides // Pol. J. Chem.- 1992.- Vol. 66, N 3.- P. 477-480.

132. Stabenow J., Buller R.M., Schriewer J. et al. A mouse model of lethal infection for evaluating prophylactics and therapeutics against monkeypox virus // J. Virol.- 2010.- Vol. 84, N 8.- P. 3909-3920.

133. Stanovnik B., Tisler E.M. Structural assignment of cyclic products from 1,2-dicarboxylic anhydrides and hydrazine. S,S-Dimethyl sulfoximides // Org. Prep. Proceed. Int.-1973.- Vol. 5, N 2.- P. 283-293.

134. Stittelaar K.J., Neyts J., Naesens L. et al. Antiviral treatment is more effective than smallpox vaccination upon lethal monkeypox virus infection // Nature.- 2006.- Vol. 439.-P. 745-748.

135. Titova K.A., Sergeev Al.A., Kabanov A.S. et al. Possibility of using a mouse SCID as a model animal to variola virus for evaluating anti-smallpox drug efficacy // Rus. J. Gen.: Appl. Res.- 2016.- Vol. 6, N 4.- P. 477-484.

136. Titova K.A., Sergeev A.A., Zamedyanskaya A.S. et al. Using the ICR and SCID mice as animal models for smallpox to assess antiviral drug efficacy // J. Gen.Virol.- 2015.-doi: 10.1099/vir.0.000216.

137. Verma S. Restricted rotations in configurational assignments: The Diels-Alder adduct of 1,3,5-cycloheptatriene and maleic anhydride // Recl. Trav. Chim. Pays-Bas.- 1978.-Vol. 97.- P. 238-243.

138. Verma S.M., Ashok K. Stereochemical studies by PMR spectroscopy: configurational assignment of tricyclo[4.2.2.02,5]deca-3,9-diene-7,8-dicarboxylic anhydride // Indian J. Chem.- 1984.- Vol. 23, N 7.- P. 639-645.

139. Verreault D., Sivasubramani S.K., Talton J.D. et al. Evaluation of inhaled cidofovir as postexposure prophylactic in an aerosol rabbitpox model // Antivir. Res.- 2012.-Vol. 93, N 1.- P. 204-208.

140. Virology Methods Manual. Edited by: Brian W.J. Mahy and Hillar O. Kangro. Academic Press.- 1996.- P. 374.

141. Vora S., Damon I., Fulginiti V. et al. Severe eczema vaccinatum in a household contact of a smallpox vaccinee // Clin. Infect. Dis.- 2008.- Vol. 46.- P. 1555-1561.

142. Wei H., Huang D., Fortman J. et al. Coadministration of cidofovir and smallpox vaccine reduced vaccination side effects but interfered with vaccine-elicited immune responses and immunity to monkeypox // J. Virol.- 2009.- Vol. 83, N 2. P. 1115-1125.

143. Wienecke R., Wolff H., Schaller M. et al. Cowpox virus infection in an 11-year-old girl // J. Am. Acad. Dermatol.- 2000.- Vol. 42, N 5.- P. 892-894.

144. Yang G., Pevear D.C., Davies M.H. et al. An orally bioavailable antipoxvirus compound (ST-246) inhibits extracellular virus formation and protects mice from lethal orthopoxvirus challenge // J. Virol.- 2005.- Vol. 79, N 20.- P. 13139-13149.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Таблица 1.1 Данные о противовирусной активности Цидофовира (CDV), CMX001 (BCV и HDP-CDV) и ST-246 в отношении различных ортопоксвирусов в экспериментах с использованием органных культур, перевиваемых и первичных клеточных культур

Таблица 1.2 Данные о лечебно-профилактической активности Цидофовира (CDV и NanoFovir™), CMX001 и ST-246 в экспериментах на модельных видах животных, инфицированных вирусами эктромелии, осповакцины, оспы коров и кроликов

Таблица 1.3 Данные о защитной эффективности Цидофовира (CDV), CMX001 и ST-246 в экспериментах на модельных видах животных, инфицированных вирусами натуральной оспы (ВНО) или оспы обезьян (ВОО)

Таблица 3.1 Результаты скрининга противовирусной активности химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса осповакцины (штамм ЛИВП) в культуре клеток Vero

Таблица 3.2 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса оспы коров (штамм Гришак) в культуре клеток Vero

Таблица 3.3 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса эктромелии (штамм К-1) в культуре клеток Vero

Таблица 3.4 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса оспы обезьян (штамм V79-1-005) в культуре клеток Vero

Таблица 3.5 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса натуральной оспы (штамм India-3a) в культуре клеток Vero

Таблица 3.6 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса натуральной оспы (штамм 6-58) в культуре клеток Vero

Таблица 3.7 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса натуральной оспы (штамм Congo-9) в культуре клеток Vero

Таблица 3.8 Данные тестирования противовирусной активности выбранных химически синтезированных соединений, близких по структуре к ST-246, в отношении вируса натуральной оспы (штамм Butler) в культуре клеток Vero

Таблица 3.9 Корреляционная связь между значениями 50%-х ингибирующих концентраций (IC50) 8 химических соединений (НИОХ-4, НИОХ-14, НИОХ-32, НИОХ-80, НИОХ-91, НИОХ-92, НИОХ-98 и ST-246) в отношении вирусов осповакцины (ВОВ), оспы коров (ВОК), эктромелии (ВЭ), оспы обезьян (ВОО) и натуральной оспы (ВНО)

Таблица 3.10 Данные тестирования защитной эффективности некоторых химических соединений в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, интраназально зараженных вирусом эктромелии (штамм К-1) в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50)

Таблица 3.11 Титры вируса эктромелии (ВЭ, штамм К-1) в слизистой носа и легких у мышей аутбредной популяции ICR через 6 сут после интраназального инфицирования ВЭ в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50) при пероральном введении некоторых химических соединений

Таблица 3.12 Данные тестирования защитной эффективности некоторых химических соединений в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, интраназально зараженных вирусом эктромелии (штамм К-1) в дозе 3,27 lg БОЕ (50 ЛД50)

Таблица 3.13 Данные тестирования защитной эффективности некоторых химических соединений в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, интраназально зараженных вирусом оспы коров (штамм Гришак) в дозе

Таблица 3.15

Таблица 3.16

Таблица 3.17

Таблица 3.18

Таблица 3.19

Таблица 3.20

Рисунок 1.1 Рисунок 3.1

3,85 lg БОЕ (10 ЛД50)

Данные о влиянии НИОХ-14 и ST-246 в концентрациях 0,0125 и 0,0250 мкг/мл на инфекционность (титр) вируса эктромелии (штамм К-1) в культуре клеток Vero при трех схемах применения препаратов* Данные о влиянии НИОХ-14 и ST-246 в концентрациях 0,025 и 0,050 мкг/мл на инфекционность (титр) вируса эктромелии (штамм К-1) в культуре клеток Vero при трех схемах применения препаратов* Данные тестирования защитной эффективности химических соединений НИОХ-14 и ST-246 в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, интраназально зараженных вирусом эктромелии (ВЭ, штамм К-1) в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50)

Показатели противовирусной активности НИОХ-14, НИОХ-32 и ST-246 в экспериментах на мышах аутбредной популяции ICR, интраназально инфицированных вирусом оспы обезьян (ВОО, штамм V79-1-005) в дозе 3,35 lg БОЕ (10 ИД50)

Показатели защитной эффективности НИОХ-14 и ST-246 в экспериментах на степных сурках, интраназально инфицированных вирусом оспы обезьян (ВОО, штамм V79-1-005) в дозе 3,7 lg БОЕ (30 ИД50)

Показатели защитной эффективности НИОХ-14 и ST-246 в экспериментах на мышах иммунодефицитной линии SCID, интраназально инфицированных вирусом натуральной оспы (ВНО, штамм Ind-3a) в дозе 4,5 lg БОЕ (10 ИД50)

Показатели защитной эффективности НИОХ-14 и ST-246 в экспериментах на аутбредной популяции мышей ICR, интраназально инфицированных вирусом натуральной оспы (ВНО, штамм Ind-3a) в дозе 3,7 lg БОЕ (10 ИД50)

Химические структуры CMX001 (А) и ST-246 (Б)

Диаграмма цитотоксичности (круг, TC50 > 100 мкг/мл) и противовирусной активности соединения НИОХ-14 в отношении вирусов осповакцины (квадрат, IC50 = 0,005 мкг/мл), оспы коров (треугольник, IC50 = 0,05 мкг/мл) и эктромелии (ромб, IC50 = 0,009

Рисунок 3.3

Рисунок 3.4

Рисунок 3.5

Рисунок 3.6

Рисунок 3.7

Рисунок 3.8

мкг/мл) в культуре клеток Vero (программа SoftMax 4.0) Диаграмма цитотоксичности (круг, TC50 > 100 мкг/мл) и противовирусной активности соединения НИОХ-4 в отношении вирусов осповакцины (квадрат, IC50 = 0,03 мкг/мл), оспы коров (треугольник, IC50 = 0,12 мкг/мл) и эктромелии (ромб, IC50 = 0,04 мкг/мл) в культуре клеток Vero (программа SoftMax 4.0)

Диаграмма цитотоксичности (круг, TC50 > 100 мкг/мл) и противовирусной активности соединения НИОХ-36 в отношении вирусов осповакцины (квадрат, IC50 = 0,05 мкг/мл), оспы коров (треугольник, IC50 = 0,22 мкг/мл) и эктромелии (ромб, IC50 = 0,14 мкг/мл) в культуре клеток Vero (программа SoftMax 4.0) Диаграмма цитотоксичности (круг, TC50 = 20,6 мкг/мл) и противовирусной активности соединения НИ0Х-80 в отношении вирусов осповакцины (квадрат, IC50 = 0,003 мкг/мл), оспы коров (треугольник, IC50 = 0,01 мкг/мл) и эктромелии (ромб, IC50 = 0,005 мкг/мл) в культуре клеток Vero (программа SoftMax 4.0) Диаграмма цитотоксичности (круг, TC50 > 100 мкг/мл) и противовирусной активности соединения НИОХ-270 в отношении вирусов осповакцины (квадрат, IC50 = 0,59 мкг/мл), оспы коров (треугольник, IC50 = 4,81 мкг/мл) и эктромелии (ромб, IC50 = 3,83 мкг/мл) в культуре клеток Vero (программа SoftMax 4.0) Титры вируса в гомогенатах органов мышей аутбредной популяции ICR через 6 сут после интраназального инфицирования вирусом эктромелии (штамм К-1) в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50) при пероральном введении химических соединений НИОХ-14 и ST-246 через 1 час и далее ежедневно в течение 5 сут после заражения

Ткань легкого мыши аутбредной популяции ICR контрольной группы (получавшей плацебо) через 6 сут после заражения вирусом эктромелии (штамм К-1) в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50)

Ткань легкого мыши аутбредной популяции ICR опытной группы (получавшей НИОХ-14) через 6 сут после заражения вирусом эктромелии (штамм К-1) в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50)

Рисунок 3.9 Ткань легкого мыши аутбредной популяции ICR опытной группы (получавшей ST-246) через 6 сут после заражения вирусом эктромелии (штамм К-1) в дозе 2,57 lg БОЕ (10 ЛД50) Рисунок 3.10 Передняя часть головы степного сурка контрольной группы (получавшей плацебо) через 10 сут после заражения вирусом оспы обезьян (штамм V79-1-005) в дозе 3,7 lg БОЕ (30 ИД50) Рисунок 3.11 Передняя часть головы степного сурка опытной группы (получавшей НИОХ-14) через 10 сут после заражения вирусом оспы обезьян (штамм V79-1-005) в дозе 3,7 lg БОЕ (30 ИД50) Рисунок 3.12 Ткань легких мыши иммунодефицитной линии SCID контрольной группы (получавшей плацебо) через 4 сут после заражения вирусом натуральной оспы (штамм Ind-3a) в дозе 4,5 lg БОЕ (10 ИД50) Рисунок 3.13 Ткань легких мыши иммунодефицитной линии SCID опытной группы (получавшей НИОХ-14) через 4 сут после заражения вирусом натуральной оспы (штамм Ind-3a) в дозе 4,5 lg БОЕ (10 ИД50) Рисунок 3.14 Ткань легких мыши иммунодефицитной линии SCID опытной группы (получавшей ST-246) через 4 сут после заражения вирусом натуральной оспы (штамм Ind-3a) в дозе 4,5 lg БОЕ (10 ИД50) Рисунок 4.1 Структуры химических соединений НИОХ-14 и НИОХ-32