Характеризация новых лейкоцитарных рецепторов человека FCRL1, FCRL4 и FCRL6 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.07, кандидат наук Баранов, Константин Олегович

• Баранов, Константин Олегович
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Баранов, Константин Олегович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные принципы структурной организации лейкоцитарных рецепторов

1.1.1. Структура ИГ-домена

1.1.2. Способы закрепления лейкоцитарных поверхностных молекул на клеточной мембране

1.1.3. Гликозилирование лейкоцитарных рецепторов

1.1.4. Сигнальные мотивы в цитоплазматических районах лейкоцитарных рецепторов

1.2. Fc-рецепторы млекопитающих

1.2.1. Семейство лейкоцитарных FcR человека и мыши

1.2.2. Структура рецепторных комплексов лейкоцитарных FcR человека

1.2.3. Активация и инактивация клеток FcR-комплексами человека

1.3. Семейство лейкоцитарных FcR-подобных молекул - FCRL (CD307)

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы и реактивы

2.2. Биологический материал

2.3. Выделение и очистка плазмидной ДНК

2.3.1. Выделение плазмидной ДНК

2.3.2. Препаративное выделение плазмидной ДНК с помощью катионного детергента - ЦТАБ

2.3.3. Удаление примесей бактериальной геномной ДНК из раствора плазмидной ДНК при помощи кислого фенола

2.4. Методы, используемые для клонирования ДНК-фрагментов

2.4.1. Основные методы работы с рекомбинантной ДНК

2.4.2. Приготовление и трансформация химически компетентных клеток Е. coli

2.4.3. Приготовление и электропорация электрокомпетентных клеток Е. coli

2.5. Полимеразная цепная реакция и олигонуклеотиды

2.6. Определение нуклеотидной последовательности ДНК

2.7. Дот-гибридизация ДНК

2.7.1. Приготовление радиоактивно меченых зондов

2.7.2. Гибридизация мембран с радиоактивно мечеными зондами

2.8. Получение рекомбинантных конструкций

2.8.1. Создание рекомбинантных конструкций на основе pT7ZZ

и рТ7АВР векторов

2.8.2. Создание рекомбинантных конструкций на основе рЕТ-21 вектора

2.8.3. Создание рекомбинантных конструкций на основе pCI-neo вектора

2.8.4. Создание рекомбинантных конструкций на основе pAP-tag вектора

2.9. Очистка рекомбинатных белков

2.10. Иммунизация животных

2.10.1. Иммунизация кроликов

2.10.2. Иммунизация мышей

2.11. Иммуноферментный анализ

2.12. Иммуноблоттинг

2.13. Получение моноклональных антител

2.14. Получение антипептидных антител

2.14.1. Получение конъюгата белок-пептид

2.14.2. Изготовление аффинного сорбента для очистки антител против FCRL1

2.14.3. Выделение антипептидных антител из антисыворотки кролика

2.15. Транзитная трансфекция эукариотических клеток

2.16. Иммуноцитохимический анализ мазков клеток

2.17. Иммунофлуоресцентное окрашивание суспензий клеток

2.18. Иммуногистохимический анализ

2.19. Ферментативное дегликозилирование

2.20. Количественное измерение фосфатазной активности АР-содержащих белков

2.21. Создание кДНК-библиотеки миндалины человека в эукариотическом экспрессирующем векторе pcDNA I/Amp и её нормализация

2.22. Иммуноферментное окрашивание криосрезов миндалины человека и трансфицированных клеток при помощи АР-содержащих белков

2.23. Метод скрининга антител к эпитопам нативных белков

2.24. Компьютерный анализ последовательностей

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Анализ экспрессии рецепторов человека - FCRL1, FCRL4 и

FCRL6

3.1.1. FCRL1

3.1.1.1. Экспрессия FCRL1 в тканях человека

3.1.1.2. Получение поликлональных и моноклональных антител kFCRLI

3.1.1.3. Анализ экспрессии белка FCRL1 в клетках и тканях человека

3.1.2. FCRL4

3.1.2.1. Экспрессия FCRL4 в тканях человека

3.1.2.2. Получение поликлональных и моноклональных антител

к FCRL4

3.1.2.3. Анализ экспрессии белка FCRL4 в клетках и тканях человека

3.1.3. FCRL6

3.1.3.1. Получение поликлональных и моноклональных антител

к FCRL6

3.1.3.2. Анализ экспрессии белка FCRL6 в клетках и тканях человека

3.2. Поиск лигандов к FCRL1 и FCRL4

3.2.1. Получение молекулярных зондов на основе FCRL и плацентарной щелочной фосфатазы

3.2.2. Выявление связывающих FCRL1 и FCRL4 клеток в миндалине человека и экспрессионное клонирование потенциального лиганда FCRL4

3.3. Разработка метода скрининга антител к эпитопам нативных белков

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АР термостабильная щелочная фосфатаза

FcR Fc-рецептор

FCKL/FCRL FCRL рецептор/ген

FcR-подобный подобный Fc-рецепторам

IMDM модифицированная среда Дульбекко

ITAM иммунорецепторный тирозин активирующий мотив

ITIM иммунорецепторный тирозин ингибирующий мотив

PBS фосфатно-солевой буфер

ТМ трансмембранный

AT антитела

БСА бычий сывороточный альбумин

BKP/BCR В-клеточный антиген-связывающий рецепторный комплекс

дНТФ 2'-дезоксирибонуклеозидтрифосфат

ДСН додецилсульфат натрия

ЗЦ зародышевый центр

ИГ/Ig иммуноглобулин

ИФА иммуноферментный анализ

кДНК комплементарная ДНК

ЛФ лимфоидный фолликул

МКА моноклональные антитела

ПААГ полиакриламидный гель

ПАЛМ периартериолярная лимфоидная муфта

ПКА поликлональные антитела

ПЦР полимеразная цепная реакция

TKP/TCR Т-клеточный рецептор

ЧСА человеческий сывороточный альбумин

ЭСТ эмбриональная сыворотка телёнка

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеризация новых лейкоцитарных рецепторов человека FCRL1, FCRL4 и FCRL6»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Инициация, развитие и завершение иммунного ответа против чужеродных организмов у позвоночных определяются балансом разнонаправленных сигналов, получаемых клетками иммунной системы через поверхностные и внутриклеточные рецепторы. Нарушения регуляции иммунного ответа лежат в основе этиологии и патогенеза многих заболеваний, включая хронические инфекционные болезни, аллергические, аутоиммунные реакции, а также злокачественные новообразования. Выяснение роли отдельных рецепторов в сети регуляторных сигналов имеет важнейшее значение для понимания функционирования иммунной системы и создания методов коррекции иммунного ответа (Murphy, 2011).

По своим сигнальным функциям все иммунорегуляторные рецепторы делятся на два основных класса: ингибирующие и активирующие. Ингибирующие рецепторы экспрессируются в виде мономеров и несут в цитоплазматических доменах тирозин-содержащие ингибирующие сигнальные мотивы - ITIM (Daeron et al., 1995; Gergely et al., 1999). Активирующие рецепторы несут тирозин-содержащие активирующие мотивы ITAM - либо в своём цитоплазматическом домене, либо в сигнальной субъединице, в комплексе с которой рецептор экспрессируется на поверхности клетки (Reth, 1989; Cambier, 1995).

К настоящему времени у человека описано более десятка семейств иммунорегуляторных рецепторов. Помимо собственно антиген-распознающих рецепторов В- и Т-клеток, важную роль в регуляции иммунитета играют такие семейства как FcR, KIR, SLAM, Siglec, CEACAM, CD28, B7 и ряд других, каждое из которых содержит до нескольких десятков структурно и функционально различающихся молекул (Barclay et al., 1997, Neuberger et al., 1993; Borges and Cosman, 2000; Xu et al., 2000; Barrow and Trowsdale, 2008; Barton and Kagan, 2009; Guy and Vignali, 2009; Campbell and Purdy, 2011; Veillette and Latour, 2003). Наиболее изученным из них является семейство лейкоцитарных Fc-рецепторов (FcR), члены

которого, взаимодействуя со своими лигандами-константными областями иммуноглобулинов, являются ключевыми регуляторами гуморального и клеточного иммунного ответа (Ravetch and Bolland, 2001).

В лаборатории иммуногенетики параллельно с несколькими зарубежными группами, было обнаружено новое, ранее неизвестное семейство генов человека и мыши, структурно родственных генам лейкоцитарных Fc-рецепторов, которое было названо «Fc-receptor like», FCRL (Guselnikov et al., 2002; Mechetina et al., 2002; Chikaev et al., 2005; Maltais et al., 2006). Это семейство было идентифицировано в результате поиска в EST-базах данных последовательностей, гомологичных gp42 (Seaman et al., 1991), первый домен, которого имеет 35% гомологии с третьим доменом FcyRI. У человека в состав семейства FCRL входит 8 генов, шесть из которых кодируют трансмембранные белки, получившие по новой номенклатуре наименование FCRL1-FCRL6, и два других кодируют внутриклеточные белки FCRLA и FCRLB (Maltais et al., 2006). FCRL1-FCRL6 отличаются количеством и комбинацией внеклеточных иммуноглобулин (ИГ)-подобных доменов, а также паттернами ITAM- и ITIM-подобных сигнальных мотивов в цитоплазматических доменах (Davis et al., 2002). Для данного исследования были выбраны три наименее изученных членов семейства FCRL человека: FCRL1, FCRL4 и FCRL6. К моменту начала работы вся имеющаяся о них информация ограничивалась структурой гена и отдельными данными по экспрессии мРНК (Hatzivassiliou et al., 2001; Davis et al., 2002). Характер экспрессии рецепторов FCRL1, FCRL4 и FCRL6 в тканевых и клеточных компартментах, их функция, их лиганды, а также связь с заболеваниями оставались неизвестными. Идентификация, характеризация и изучение функции любого нового белка актуальны. Изучение рецепторов нового семейства FCRL человека представляет особый интерес. Его члены имеют консервативную структурную организацию, родственную генам FcR, разный набор сигнальных последовательностей и специфичный для иммунной системы

профиль экспрессии в органах и тканях человека. Это дает основание предполагать участие рецепторов БСКЬ в сигнальных каскадах клеток иммунной системы, регулировании дифференцировки этих клеток и модулировании иммунного ответа в норме и при патологиях.

Цели и задачи исследования. Целью данного исследования являлись характеризация трех членов РСЯЬ-семейства (РСКЕЛ, РСЛЬ4 и РСЯЬб) на белковом уровне и изучение их роли в иммунном ответе. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Провести анализ экспрессии мРНК БСКЫ и РС11Ь4 в клетках и тканях человека в норме и при патологиях крови.

2. Получить моноклональные и поликлональные антитела против РСЯЫ, РС11Ь4 и РСЯЬб. Используя полученные антитела, провести анализ экспрессии и биохимических характеристик этих рецепторов.

3. Провести поиск лигандов для рецепторов РСЯЫ и РСКЬ4 методом экспрессионного клонирования.

Научная новизна. В настоящей работе с помощью полученных моноклональных и поликлональных антител белки нового семейства РС11Ь человека, РСЫЛ, РСКЬ4 и РСМД впервые охарактеризованы на белковом уровне. Установлено, что РСЫЛ - это белок с молекулярной массой 57 кДа, который экспрессируется исключительно зрелыми СИ 19+ В-клетками. Показано, что в селезёнке и миндалине человека РСМЛ+ клетки сосредоточены в мантии вторичных лимфоидных фолликулов, а в миндалине, кроме того, в зоне лимфоидного эпителия. РСЯЬб продуцируется в виде гликопротеина с молекулярной массой 63 кДа на поверхности цитотоксических СБ8+ Т-клеток и СБ56+ 1ЧК-клеток в периферической крови и вторичных лимфоидных органах. Впервые обнаружены достоверные изменения уровня экспрессии гена РСМЛ при некоторых аутоиммунных и гематологических заболеваниях. Разработан

новый метод выявления антител против нативных эпитопов в антисыворотках, полученных при иммунизации рекомбинантными белками и пептидами.

Научно-практическая значимость исследования. Результаты данной работы расширяют фундаментальные знания о лимфоцитах человека, механизмах дифференцировки В- и Т-клеток и управления гуморальным и клеточным иммунитетом. Полученные FCRL1-, FCRL4- и FCRL6-специфичные антитела могут быть использованы в качестве инструмента для дальнейших исследований роли этих рецепторов в иммунной системе, а также могут иметь диагностический потенциал при ряде аутоиммунопатологий. Новый метод иммуноанализа может существенно упростить задачу получения моноклональных антител против нативных эпитопов при иммунизации антигенами, наработанными в бактериальных клетках.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, а также выводов и списка цитируемой литературы, в котором содержится 161 ссылка. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста, содержит 1 таблицу, 43 рисунка.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи в рецензируемых журналах, статья в коллективной монографии и 13 тезисов конференций. Статьи:

1. Baranov К., Volkova О., Chikaev N., Mechetina L., Laktionov P., Najakshin A., Taranin A. A direct antigen-binding assay for detection of antibodies against native epitopes using alkaline phosphatase-tagged proteins // J Immunol Methods. 2008. V. 332. P. 73-81.

2. Баранов К.О., Мечетина Л.В., Чикаев Н.А., Волкова О.Ю., Таранин А.В., Наякшин A.M. Поиск лигандов рецепторов FCRL-семейства // Фундаментальные науки - медицине. Новосибирск, Россия. 2-5 сентября 2008 г. С. 99-101.

3. Kulemzin S.V., Zamoshnikova A.Y., Yurchenko M.Y., Vitak N.Y., Najakshin A.M., Fayngerts S.A., Chikaev N.A., Reshetnikova E.S., Kashirina N.M., Peclo M.M., Rutkevich P.N., Shevelev A.Y., Yanushevskaya E.V., Baranov K.O., Mamonkin M., Vlasik T.N., Sidorenko S.P., Taranin A.V., Mechetina L.V. FCRL6 receptor: expression and associated proteins // Immunol Lett. 2011. V. 134 P. 174-182.

4. Баранов K.O., Волкова О.Ю., Мечетина JI.B., Чикаев Н.А., Решетникова Е.С., Никулина Г.М., Таранин А.В., Наякшин A.M. Экспрессия гена FCRL1 человека в норме и при аутоиммунных заболеваниях // Молекулярная биология. 2012. V. 46 №2 С. 1-8.

Тезисы конференций:

1. Алябьев Б.Ю., Гусельников С.В., Ершова С.А., Баранов К.О., Горчаков Р.В. Структурно-функциональный анализ FcR-подобных GBS/IFGP рецепторов человека и мыши // Материалы отчетной конференции молодых ученых-грантодержателей биологических институтов СО РАН посвященной М. А. Лаврентьеву. Новосибирск, Россия, 4-7 декабря, 2001, часть II, С. 9-11.

2. Taranin A.V., Volkova O.Y., Mechetina L.V., Najakshin A.V., Faizulin R.Z., Baranov K.O., Gorchakov R.V., Chikaev N.A., Guselnikov S.V., Ershova S.A. Generation and characterization of monoclonal and polyclonal antibodies against novel human В-cell antigens // Proceedings of the 14th International Conference on Lymphatic Tissues and Germinal

Centers in Immune Reactions. Groningen, Netherlands. 23-27 June, 2002. P. 42.

3. Taranin A.V., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Ershova S.A., Volkova O.Y., Chikaev N.A., Baranov K.O., Guselnikov S.V., Bykova E.A. The human and mouse FcR-like molecules: species-specific architecture and cell distribution // Proceedings of the EURESCO conference "B cells in health and disease". Maratea, Italy. 10-15 May 2003.

4. Taranin A.V., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Volkova O.Yu., Chikaev N.A., Ershova S.A., Guselnikov S.V., Baranov K.O. The newly defined human and mouse FcR-like proteins: diverse architecture and species-specificity of expresión patterns // Proceedings of the 12th Symposium on signals and signal processing in the immune system. Sopron, Hungary. 3-7 September, 2003, P. 37-38.

5. Ершова C.A., Баранов K.O., Гусельников C.B. Функциональный анализ рецепторов IFGP семейства // Материалы отчетной конференции молодых ученых-грантодержателей биологических институтов СО РАН посвященной М. А. Лаврентьеву. Новосибирск, Россия, 1-3 декабря, 2003, часть II, С. 155.

6. Таранин А.В., Наякшин A.M., Мечетина Л.В., Волкова О. Ю., Чикаев Н.А., Ершова С.А., Гусельников С.В., Баранов К.О. FcR-подобные белки: новое семейство маркеров В-лимфоцитов человека // Материалы Объединенного иммунологического форума. Екатеринбург, Россия. 31 мая - 4 июня 2004. Российский иммунологический журнал. Т. 9. С. 81.

7. Гусельников С.В., Ершова С.А., Баранов К.О. Функциональный анализ рецепторов IFGP семейства, экспрессирующихся в В-клетках // Материалы отчетной конференции молодых ученых-

грантодержателей биологических институтов СО РАН посвященной М. А. Лаврентьеву. Новосибирск, Россия, 17-19 ноября, 2004. часть II, С. 142.

8. Taranin A.V., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Volkova O.Y., Chikaev N.A., Ershova S.A. Baranov K.O., Guselnikov S.V. FcR-like proteins: a newly defined group of remarkably diverse molecules differentially expressed in lymphocytes // Proceeding of 7th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology. Moscow, Russia. 5-9 September 2005. P. 7.

9. Baranov K.O., Mechetina L.V., Volkova O.Y., Chikaev N.A., Taranin A.V., Najakshin A.M. Searching for ligands of the FcR-like В cell-specific receptors // Proceedings of the 13th International Congress of Immunology. Rio de Janeiro, Brazil, 21-25 August 2007. P. 54.

10.Baranov K.O., Mechetina L.V., Volkova O.Y., Chikaev N.A., Taranin A.V., Najakshin A.M. Human В cell-specific receptors FCRL1 and FCRL4: ligand identification //Proceeding of 8th John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology. Moscow, Russia. 10-14 September 2007. P. 7.

11.Baranov K., Mechetina L., Volkova O., Chikaev N., Taranin A., Najakshin A. Human FcR-like В cell specific receptors: ligand searching // Proceedings of the 21st International Mammalian Genome Conference. Kyoto, Japan. 28 October - 1 November 2007. P. 178.

12.Баранов K.O., Волкова О.Ю., Наякшин A.M., Мечетина Л.В. Новый метод скрининга антител против нативных эпитопов редких антигенов // Материалы Объединенного иммунологического форума. Санкт-Петербург, Россия. 30 июня - 5 июля 2008. Российский иммунологический журнал. Т. 2 № 2-3 С. 14

13.Konstantin О. Baranov, Ludmila V. Mechetina, Olga Y. Volkova, Nikolai A. Chikaev, Alexander V. Taranin, Alexander M. Najakshin.

Searching for ligands of the FcR-like В cell-specific receptors //

th

Proceedings of the 9 International Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigens. Barcelona, Spain. 11-13 March 2010.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: конференциях молодых учёных-грантодержателей биологических институтов СО РАН (Новосибирск, 2001, 2003, 2004), 14-й Международной конференции «Лимфатические ткани и зародышевые центры в иммунных реакциях» (Гронинген, Нидерланды, 2002), EURESCO конференции «В-клетки в норме и при заболеваниях» (Маратея, Италия, 2003), 12-м Международном симпозиуме «Сигналы и сигнальная трансдукция в иммунной системе» (Шопрон, Венгрия, 2003), отчетных сессиях аспирантов Института цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск, 2003, 2005), Объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004; Санкт-Петербург, 2008), 7-й и 8-й Международной летней школе по иммунологии имени Джона Хемфри (Москва, 2005, 2007), 13-м Международном иммунологическом конгрессе (Рио-де-Жанейро, Бразилия, 2007), 21-й Международной конференции по геному млекопитающих (Киото, Япония, 2007), 4-й конфереции «Фундаментальные науки - медицине» (Новосибирск, 2008), 9-й Международной конференции «Дифференцировочные антигены лейкоцитов человека» (Барселона, Испания, 2010).

Вклад автора. Основная часть экспериментов была выполнена автором самостоятельно. Получение МКА и ПКА против FCRL4 было сделано совместно с Р.В. Горчаковым. Работа по конъюгированию FCRL-пептидов к белку носителю была проведена под руководством П.П. Лактионова. Бакуловирусный продуцент FCRL6 был получен совместно с

JI.В. Мечетиной. Создание кДНК библиотеки в эукариотическом экспрессирующем векторе проводилось совместно с A.M. Наякшиным.

Благодарность. Автор глубоко признателен всем сотрудникам лаборатории иммуногенетики за помощь при выполнении и оформлении настоящей работы. Особую благодарность автор выражает своему научному руководителю д.б.н. A.B. Таранину за постановку задачи, научное руководство и всестороннюю поддержку. Также автор выражает огромную благодарность Л.В. Мечетиной за помощь в подготовке данной диссертации. Кроме того, автор хочет поблагодарить д.б.н. Е.Ю. Рыкову, к.б.н. A.B. Катохина, д.б.н. С.А. Демакова, к.б.н. H.A. Попову за внесение ценных замечаний при рецензировании работы. Автор также весьма признателен Р.В. Горчакову за участие в выполнении настоящей работы, к.б.н. П.П. Лактионову за помощь в конъюгировании пептидов к белку носителю, проф. д.б.н. Н.Б. Рубцову за помощь в проведении микродиссекции, а также к.б.н. A.A. Горчакову, к.б.н. В.В. Шломе, к.б.н. С.Н. Белякину за предоставление необходимых антител и реактивов для выполнения работы. Данная работа поддержана Российским Фондом Фундаментальных Исследований, проекты №03-04-48531-а, №06-04-49606-а, №10-04-01074-а и комплексным интеграционным проектом СО РАН №5.6.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные принципы структурной организации лейкоцитарных рецепторов

Лейкоциты представляют собой гетерогенную группу клеток иммунной системы, главная роль которых заключается в обеспечении защиты организма от внешних и внутренних патогенных агентов, а также в реализации типичных патологических процессов. Лейкоциты могут принимать участие, как в неспецифичной, так и специфичной иммунной защите. Неспецифичную защиту осуществляют фагоцитирующие лейкоциты - моноциты, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы и базофилы. Они способны связывать микроорганизмы на своей поверхности, а затем поглощать и уничтожать их. Эта функция основана на простых, неспецифических механизмах распознавания, позволяющая связывать самые разнообразные микробные продукты, и относится к проявлениям врожденного иммунитета. За специфическую защиту отвечает другая группа лейкоцитов: В-лимфоциты (В-клетки), Т-лимфоциты (Т-клетки) и естественные киллеры (№С-клетки). Функциональные различия между разными типами лейкоцитов определяются различным профилем экспрессии белков - внутриклеточных и белков находящихся на поверхности клеточной мембраны.

Аминокислотные последовательности большинства лейкоцитарных рецепторов содержат в своём составе участки, имеющие сходство с последовательностями других белков. Подобные последовательности могут образовывать дискретные структурные единицы или домены. На настоящее время выделяют около 20 основных групп доменов, имеющих подобную третичную структуру фооНШе, 1995). Когда у изучаемых белков третичная структура неизвестна, сравниваются первичные аминокислотные последовательности. Для описания сходства между такими белками были

введены термины «надсемейство» и «семейство» с гомологией по аминокислотным остаткам между белками менее 50% и более 50%, соответственно (Dayhoff et al., 1983; Williams et al., 1989). Обычно внутри надсемейства степень гомологии между представителями граничит между 15-25%. Первое надсемейство лейкоцитарных белков было описано как надсемейство иммуноглобулинов (IgSF), которое содержит хотя бы один ИГ-подобный домен (Kaas et al., 2007). В настоящий момент, это самое большое семейство и насчитывает более 100 белков на различных клетках (рис. 1, Barclay, 2003; Litman et al., 2005; Srinivasan and Roeske, 2005). Среди молекул IgSF выделяют следующие формы: секретируемые или внеклеточные, внутриклеточные, а также ассоциированные с клеточной мембраной. Молекулы IgSF выполняют целый спектр функций: у беспозвоночных молекулы IgSF выполняют функции адгезинов, мышечных белков, сигнальной трансдукции, а также участвуют в развитии нервной системы (Teichmann and Chothia, 2000; Zhang et al., 2004; Boulin et al., 2006; Funada et al., 2007). У позвоночных IgSF-молекулы участвуют также и в развитии специфичного иммунного ответа (Xu and Jin, 2010). Большинство таких молекул экспрессируется на поверхности лейкоцитов, клеток иммунной системы. На сегодняшний день на лейкоцитах идентифицировано более 200 видов поверхностных рецепторов и более половины их них содержит ИГ-подобные структуры (Lodish et al., 2012). Характерным признаком для IgSF-белков, экспрессирующихся на поверхности лейкоцитов, является наличие хотя бы одного ИГ-домена во внеклеточной части рецептора, прикрепление к мембране, гликозилирование внеклеточных областей, а также наличие сигнальных мотивов в цитоплазматических областях (Kaas et al., 2007).

ГсТ)

jcnr«

!см 8

соон

соон

СООН NH, СООН

соон

¡Э 23 -а 28 В 24 Т 29

F3

соон соон соон соон соон соон

соон

»4.25 Т 30

№ 26 I ^ 31 £ 27 32

соон соон соон

Рис. 1. Схематическое изображение некоторых лейкоцитарных поверхностных молекул, относящихся к IgSF. 1-5 - TCR (слева направо: CD3e, CD3y, CD3S, гетеродимеры с-П и TCRap), 6-7 - BCR (CD79, mlgM), 8-10 - FceRI (y-y гомодимер, а и b субъединицы), 11 - CD90, 12 - CD28, 13 - CD8, 14 - CD7, 15 - CD2, 16 - CD121a, 17 - МНС I, 18 - МНС II, 19 - IL-1R, 20 - IL-3R, 21 - IL-6R, 22 - CD47. Условные обозначения: 23-25 - ИГ-подобные домены V-, С1- и С2- типов, 26 - сайты N-гликозилирования, 27 - сайты О-гликозилирования, 28 - домены надсемейства МНС, 29 - домены надсемейства цитокиновых рецепторов, 30 - домены надсемейства фибронектина III типа, 31 - GPI-якорь, 32 - трансмембранный домен. (Barclay et al., 1997)

1.1.1. Структура ИГ-домена

ИГ-домен представляет собой белковый домен, полипептидная цепь которого образована приблизительно из 100 аминокислотных остатков и уложена в «сэндвич» структуру из двух ß-слоев, которые в свою очередь состоят из антипараллельных ß-нитей длиной в 5-10 аминокислотных остатков (рис. 2, Hill et al., 1966; Amzel and Poljak, 1979). Третичная структура домена стабилизируется с помощью дисульфидной связи между цистеинами из противоположных ß-слоев. Охарактеризовано три основных типа ИГ-доменов: V, С1 и С2 (Smith and Xue, 1997). Домен С1-типа содержит четыре ß-нити в одном и три в другом ß-слое (ABED/GFC). В доменах С2 и V-типов содержится по четыре ß-нити в каждом ß-слое (ABED/GFCC'). Кроме того, в домене V-типа имеется дополнительная короткая нить, пересекающая верхнюю часть домена (ABED/GFCC'C"). Наиболее значительные отличия между V и С1 доменами наблюдается в средней части: полипептидная цепь V-типа содержит 65-75 аминокислот между цистеиновыми остатками, тогда как у С1-типа их 55-65. Домен С2-типа является промежуточным, он характеризуется схожим количеством аминокислотных остатков между цистеинами С1-типа и одновременно имеет высокую гомологию последовательностей ß-нитей Е и F доменов V-типа (Lesk and Chothia, 1982). Аминокислотные остатки ß-слоев, принимающие участие в образовании третичной структуры домена, и цистеины, образующие дисульфидную связь, обладают наибольшей консервативностью. Тем не менее, описаны несколько белков надсемейства, у которых ИГ-подобные домены (V- и С-типа) не имеют дисульфидной связи, при этом стабильность третичной структуры обеспечивается отстатками гидрофобных аминокислот (Amzel and Poljak, 1979; Bork et al., 1994).

V-тип

С-тип

(3-нить

СООН

_у

(3-нить

Рис. 2. Третичная структура ИГ-доменов V- (а) и С-типов (б) легких цепей иммуноглобулинов, (в) - показано соединение (3-нитей (A-G) в двух (З-слоях V- (ABED и GFCC'C") и С- (ABED и GFC) доменов. Консервативный S-S мостик соединяет В и F (3-нити (Kaas et al., 2007; Barclay, 2003).

Главная функция ИТ-подобного домена заключается в связывании лиганда. В качестве лиганда могут выступать молекулы белкового и небелкового происхождения. Несмотря на высокую гомологию в третичной структуре всех ИТ-подобных доменов, белки, содержащие их, обладают широким набором функций: распознование и презентация антигена, сигнальной трансдукции, адгезии и факторы роста (Owen et al., 2013). Столь значительное разнообразие объясняется вариабельностью аминокислотных остатков, экспонированных наружу ИГ-домена, а также остатков в петлях, соединяющих ß-нити (Doolittle, 1995).

1.1.2. Способы закрепления лейкоцитарных поверхностных молекул на клеточной мембране

Описано шесть основных способов закрепления белков на клеточной поверхности (рис. 3, Nelson and Сох, 2012). Белки I- и Ii-типа содержат по одному трансмембранному району, тогда как Ill-типа содержат несколько трансмембранных районов. Прикрепление к мембране IV-типа формируется несколькими белками, каждый из которых имеет по одному ТМ-району. Белки V-типа лишены TM-районов и для закрепления на мембране используют липидные якоря. Для белков VI-типа характерно закрепление посредством TM-района и с помощью липидного якоря. Сами участки, соответсвующие трансмембранным районам рецепторов, можно предсказать исходя из анализа гидрофобности аминокислотной последовательности (von Heijne, 1992; Jones et al., 1994). Один из самых часто встречающихся способов интеграции лейкоцитарных поверхностных белков в мембрану является способ крепления I-типа (Barclay, 2003). При этом типе крепления С-конец белковых молекул находится в цитоплазме, а N-конец располагается снаружи клетки. Первично белковые молекулы

Межклеточное пространство

I II III IV V VI

Цитоплазма

Рис. 3. Способы прикрепления белков к липидному бислою клеточной мембраны. Трансмембранные рецепторы I- и II-типа пронизывают мембрану один раз и различаются только положением NH2- и СООН-концов. Трансмембранные рецепторы Ill-типа пронизывают клеточную мембрану несколько раз. Прикрепление к мембране IV-типа образуется несколькими белками, при этом формируется трансмембранный канал. Белки V-типа прикрепляются к липидам через GPI-якорь. Прикрепление VI-типа формируется посредством ТМ-петель и с помощью липидов. (Nelson and Сох, 2012).

содержат в N-концевом участке сигнальную последовательность (10-20 аминокислотных остатка), которая отрезается при их транспорте через бислой эндоплазматического ретикулума (Rapoport et al., 1996; Bendtsen et al., 2004). Размер трансмембранного района поверхностных молекул I типа приблизительно состоит из 25 аминокислотных остатков. Как правило, заряженные аминокислотные остатки Asn, Asp, Glu, Gin, His, Lys и Arg не встречаются в трансмембранных районах. Исключением являются случаи, когда белковые молекулы могут образовывать мультимерные мембранные рецепторные комплексы. Типичным примером подобных комплексов являются Т-клеточный рецепторный комплекс. У Т-клеточного рецепторного комплекса трансмембранные районы а- и ß-цепи TCR содержат положительно заряженные аминокислотные остатки, тогда как в CD3 у, ô, s и Ç субъединицах они отрицательно заряжены (Call and Wucherpfennig, 2005). Наличие положительно заряженных остатков в трансмембранных районах лиганд-связывающей субъединицы и отрицательно заряженных аминокислотных остатков в сигнальных субъединицах является характерным для подобных мультимерных комплексов (Lanier, 2008). Для белков Ii-типа характерно обратная ориентация по отношению к молекулам I-типа. У них N-концевая часть находится в цитоплазме, а С-концевая - снаружи клетки. Характерной особенностью этих белков заключается в наличии коротких цитоплазматических районов и, как правило, трансмембранные участки представляют собой неотрезанные сигнальные последовательности (Scanlan et al., 1994). К белкам Ill-типа относятся молекулы, которые пронизывают мембрану от 2 до 12 раз. Отличительной особенностью белков IV-типа является наличие трансмембранного канала, заполненного водой. Среди белков V-типа выделяют два класса. Для одного класса характерна ассоциация с липидным бислоем через остаток миристиловой кислоты на N-конце, а для другого - связь через гликозил-фосфадитилинозитольный (GPI) якорь (Ferguson and Williams, 1988; Low and Saltiel, 1988). У последних С-

концевой аминокислотный остаток посредством фосфоэтаноламинного мостика прикрепляется к гликану ((манноза)З-глюкозамин), который, в свою очередь, связывается с фосфадитилинозитолом. Определить GPI-якорь возможно предсказать путем компьютерного анализа белковой последовательности молекулы. GPI-связанные молекулы содержат на N-конце сигнальную последовательность, определяющую секрецию, и на С-конце последовательность, которая отрезается в эндоплазматическом ретикулуме и меняется на GPI-якорь (Udenfriend and Kodukula, 1995; Yan et al., 1998). Отрезанный пептид структурно не отличим от трансмембранного района. В месте гидролиза обычно располагается несколько остатков с малыми радикалами (Gly, Ala, Ser).

1.1.3. Гликозилирование лейкоцитарных рецепторов

Характерная особенность поверхности клеточной мембраны является наличие углеводных структур на липидах и белках (Spiro, 2002). Для большинства лейкоцитарных поверхностных молекул характерно наличие углеводных структур в их внеклеточной части (рис. 1). В результате посттрансляционной модификации белковых молекул происходит гликозилирование по соответствующим сайтам (рис. 4). N-гликозилирование проходит по остаткам Asn в мотивах Asn-X-Thr или Asn-X-Ser, Х- любая аминокислота. Последовательности Asn-Pro-Thr/Ser и Asn-X-Thr/Ser-Pro являются исключением и обычно не гликозилируются. О-гликозилирование происходит по остаткам Ser и Thr в последовательностях, богатых Ser, Thr и Pro. Степень гликозилирования мембранных белков варьирует, и одна и та же молекула может нести различные олигосахаридные структуры в зависимости от фенотипических свойств клетки, в которых она экспрессируется (Kleinberg et al., 1989). Отличия в гликозилировании поверхностных молекул могут приводить к изменениям

Asn

Ser

у

/ н

HOH2CH2C\

HN. .CH3

T

Рис. 4. N- и О-гликозилирование белков. При N-гликозилировании углеводный комплекс (изображен только N-ацетилглюкозамин) присоединяется за счет взаимодействия с амидной группой остатка аспарагина (а). В результате О-гликозилирования углеводы присоединяются через гидроксильную группу остатков серина или треонина (б). (Berg, 2006)

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Баранов, Константин Олегович, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. 288 с.

2. Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р., Гордон Д., Арвие Ж., Уильяме А.Ф. Антитела. Методы: Кн. 1. М.: Мир, 1991. 287 с.

3. Мазин А.В., Кузнеделов К.Д., Краев А.С., Холодилов Н.Г. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука, 1990. 248 с.

4. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. Пер. с англ. М.: Мир, 1984. 479 с.

5. Остерман Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М., Наука, 1985,536 с.

6. Под ред. Гловера Д. Клонирование ДНК. М.: Мир, 1988. 538 с.

7. Под ред. Клауса Дж. Лимфоциты: Методы. М.: Мир, 1990. 394 с.

8. Под ред. Фрешни Р. Культура животных клеток. М.: Мир, 1989. 333 с.

9. Под ред. Фримеля Г. Иммунологические методы. Пер. с англ. М.: Мир, 1987.518 с.

10. Alberola-Ila J., Takaki S., Kerner J.D., Perlmutter R.M. Differential signaling by lymphocyte antigen receptors // Annu Rev Immunol. 1997. V. 15. P. 125-154.

11. Amzel L.M., Poljak R.J. Three-dimensional structure of immunoglobulins // Annu Rev Biochem. 1979. V. 48. P. 961-997.

12.Baniyash M., Garcia-Morales P., Bonifacino J.S., Samelson L.E., Klausner R.D. Disulfide linkage of the zeta and eta chains of the T cell receptor Possible identification of two structural classes of receptors // J Biol Chem. 1988. V. 263. P. 9874-9878.

13.Baranov K., Volkova O., Chikaev N., Mechetina L., Laktionov P., Najakshin A., Taranin A. A direct antigen-binding assay for detection of antibodies against native epitopes using alkaline phosphatase-tagged proteins // J Immunol Methods. 2008. V. 332. P. 73-81.

14.Barclay A. N., Brown M. H., Law S. K. A., McKnight A. J.,Tomlinson M. G., van der Merve P. A. The Leucocyte antigen factsbook the 2nd edition. London: Academic press. 1997. 613 P.

15.Barclay A.N. Membrane proteins with immunoglobulin-like domains—a master superfamily of interaction molecules // Semin Immunol. 2003. V. 15. P. 215-223.

16. Barrow A.D., Trowsdale J. The extended human leukocyte receptor complex: diverse ways of modulating immune responses // Immunol Rev. 2008. V. 224. P. 98-123.

17. Barton G.M., Kagan J.C. A cell biological view of Toll-like receptor function: regulation through compartmentalization // Nat Rev Immunol. 2009. V. 9. P. 535-542.

18.Bendtsen J.D., Nielsen H., von Heijne G., Brunak S. Improved prediction of signal peptides: SignalP 3 0 // J Mol Biol. 2004. V. 340. P. 783-795.

19.Berg J.M., Tymoczko J.L., Stryer L. Biochemistry. Palgrave MacMillan. 2006. 1026 P.

20.Borges L., Cosman D. LIRs/ILTs/MIRs, inhibitory and stimulatory Ig-superfamily receptors expressed in myeloid and lymphoid cells // Cytokine Growth Factor Rev. 2000. V. 11. P. 209-217.

21.Bork P., Holm L., Sander C. The immunoglobulin fold Structural classification, sequence patterns and common core // J Mol Biol. 1994. V. 242. P. 309-320.

22.Boulin T., Pocock R., Hobert O. A novel Eph receptor-interacting IgSF protein provides C. elegans motoneurons with midline guidepost function // Curr Biol. 2006. V. 16. P. 1871-1883.

23. Call M.E., Wucherpfennig K.W. THE T CELL RECEPTOR: Critical Role of the Membrane Environment in Receptor Assembly and Function // Annual Review of Immunology. 2005. V. 23. P. 101-125.

24.Cambier J.C. New nomenclature for the Reth motif (or

ARH1 /TAM/ARAM/YXXL) // Immunol Today. 1995. V. 16. P. 110.

25.Campbell J.A., Davis R.S., Lilly L.M., Fremont D.H., French A.R., Carayannopoulos L.N. Cutting edge: FcR-like 5 on innate B cells is targeted by a poxvirus MHC class I-like immunoevasin // J Immunol. 2010. V. 185. P. 28-32.

26. Campbell K.S., Purdy A.K. Structure/function of human killer cell immunoglobulin-like receptors: lessons from polymorphisms, evolution, crystal structures and mutations // Immunology. 2011. V. 132. P. 315-325.

27. Cannon J.P., Haire R.N., Mueller M.G., Litman R.T., Eason D.D., Tinnemore D., Amemiya C.T., Ota T., Litman G.W. Ancient divergence of a complex family of immune-type receptor genes // Immunogenetics. 2006. V. 58. P. 362-373.

28.Chikaev N.A., Bykova E.A., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Volkova O.Y., Peklo M.M., Shevelev A.Y., Vlasik T.N., Roesch A., Vogt T., Taranin A.V. Cloning and characterization of the human FCRL2 gene // Genomics. 2005. V. 85. P. 264-272.

29.Chikaev N.A., Bykova E.A., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Volkova O.Y., Peklo M.M., Shevelev A.Y., Vlasik T.N., Roesch A., Vogt T., Taranin A.V. Cloning and characterization of the human FCRL2 gene // Genomics. 2005. V. 85. P. 264-272.

30. Clark G.J., Rao M., Ju X., Hart D.N.J. Novel human CD4+ T lymphocyte subpopulations defined by CD300a/c molecule expression // J Leukoc Biol. 2007. V. 82. P. 1126-1135.

31.Colonna M. TREMs in the immune system and beyond // Nat Rev Immunol. 2003. V. 3. P. 445-453.

32.Davis R.S. Fc receptor-like molecules // Annu Rev Immunol. 2007. V. 25. P. 525-560.

33.Davis R.S., Li H., Chen C.-C., Wang Y.-H., Cooper M.D., Burrows P.D. Definition of an Fc receptor-related gene (FcRX) expressed in human and mouse B cells // Int Immunol. 2002. V. 14. P. 1075-1083.

34.Davis R.S., Stephan R.P., Chen C.-C., Dennis Jr G., Cooper M.D. Differential B cell expression of mouse Fc receptor homologs // Int Immunol. 2004. V. 16. P. 1343-1353.

35.Davis R.S., Wang Y.H., Kubagawa H., Cooper M.D. Identification of a family of Fc receptor homologs with preferential B cell expression // Proc Natl Acad Sci U S A. 2001. V. 98. P. 9772-9777.

36.Dayhoff M.O., Barker W.C., Hunt L.T. Establishing homologies in protein sequences // Methods Enzymol. 1983. V. 91. P. 524-545.

37.Daeron M. Building up the family of ITIM-bearing negative coreceptors // Immunol Lett. 1996. V. 54. P. 73-76.

38.Daeron M., Latour S., Malbec O., Espinosa E., Pina P., Pasmans S., Fridman W.H. The same tyrosine-based inhibition motif, in the intracytoplasmic domain of Fc gamma RIIB, regulates negatively BCR-, TCR-, and FcR-dependent cell activation // Immunity. 1995. V. 3. P. 635-646.

39.Doolittle R.F. The multiplicity of domains in proteins // Annu Rev Biochem. 1995. V. 64. P. 287-314.

40.Du X., Nagata S., Ise T., Stetler-Stevenson M., Pastan I. FCRL1 on chronic lymphocytic leukemia, hairy cell leukemia, and B-cell non-Hodgkin lymphoma as a target of immunotoxins // Blood. 2008. V. 111. P. 338-343.

41.Ed. Dieffenbach C.W., Dveksler G.S. PCR primer: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1995. 714 P.

42.Ehrhardt G.R.A., Davis R.S., Hsu J.T., Leu C.-M., Ehrhardt A., Cooper M.D. The inhibitory potential of Fc receptor homolog 4 on memory B cells // Proc Natl Acad Sci USA. 2003. V. 100. P. 13489-13494.

43.Ershova S.A., Naiakshin A.M., Mechetina L.V., Peklo M.M., Shevelev A.I., Vlasik T.N., Chikaev N.A., Taranin A.V. [Expression patterns of the human and mouse IFGP family genes] // Mol Biol (Mosk). 2005. V. 39. P. 776-785.

44.Falini B., Tiacci E., Pucciarini A., Bigerna B., Kurth J., Hatzivassiliou G., Droetto S., Galletti B.V., Gambacorta M., Orazi A., Pasqualucci L., Miller I., Kuppers R., Dalla-Favera R., Cattoretti G. Expression of the IRTA1 receptor identifies intraepithelial and subepithelial marginal zone B cells of the mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) // Blood. 2003. V. 102. P. 3684-3692.

45.Ferguson M.A., Williams A.F. Cell-surface anchoring of proteins via glycosyl-phosphatidylinositol structures // Annu Rev Biochem. 1988. V. 57. P. 285-320.

46. Flanagan J.G., Cheng H.J. Alkaline phosphatase fusion proteins for molecular characterization and cloning of receptors and their ligands // Methods Enzymol. 2000. V. 327. P. 198-210.

47.Flanagan J.G., Cheng H.J., Feldheim D.A., Hattori M., Lu Q., Vanderhaeghen P. Alkaline phosphatase fusions of ligands or receptors as in situ probes for staining of cells, tissues, and embryos // Methods Enzymol. 2000. V. 327. P. 19-35.

48.Funada M., Hara H., Sasagawa H., Kitagawa Y., Kadowaki T. A honey bee Dscam family member, AbsCAM, is a brain-specific cell adhesion molecule with the neurite outgrowth activity which influences neuronal wiring during development // Eur J Neurosci. 2007. V. 25. P. 168-180.

49.Gergely J., Pecht I., Sarmay G. Immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif-bearing receptors regulate the immunoreceptor tyrosine-based activation motif-induced activation of immune competent cells // Immunol Lett. 1999. V. 68. P. 315.

50.Gornik O., Pavic T., Lauc G. Alternative glycosylation modulates function of IgG and other proteins - implications on evolution and disease // Biochim Biophys Acta. 2012. V. 1820. P. 1318-1326.

51.Guselnikov S.V., Bell A., Najakshin A.M., Robert J., Taranin A.V. Signaling FcRgamma and TCRzeta subunit homologs in the amphibian Xenopus laevis // Dev Comp Immunol. 2003. V. 27. P. 727-733.

52.Guselnikov S.V., Ershova S.A., Mechetina L.V., Najakshin A.M., Volkova O.Y., Alabyev B.Y., Taranin A.V. A family of highly diverse human and mouse genes structurally links leukocyte FcR, gp42 and PECAM-1 // Immunogenetics. 2002. V. 54. P. 87-95.

53.Guselnikov S.V., Laktionov P.P., Najakshin A.M., Baranov K.O., Taranin A.V. Expansion and diversification of the signaling capabilities of the CD2/SLAM family in Xenopodinae amphibians // Immunogenetics. 2011. V. 63. P. 679-689.

54. Guselnikov S.V., Ramanayake T., Erilova A.Y., Mechetina L.V., Najakshin A.M., Robert J., Taranin A.V. The Xenopus FcR family demonstrates continually high diversification of paired receptors in vertebrate evolution // BMC Evol Biol. 2008. V. 8. P. 148.

55. Guselnikov S.V., Ramanayake T., Robert J., Taranin A.V. Diversity of the FcR-and KIR-related genes in an amphibian Xenopus // Front Biosci (Landmark Ed). 2009. V. 14. P. 130-140.

56. Guselnikov S.V., Reshetnikova E.S., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Robert J., Taranin A.V. The amphibians Xenopus laevis and Silurana tropicalis possess a family of activating KIR-related Immunoglobulin-like receptors // Dev Comp Immunol. 2010. V. 34. P. 308-315.

57. Guy C.S., Vignali D.A.A. Organization of proximal signal initiation at the TCR:CD3 complex // Immunol Rev. 2009. V. 232. P. 7-21.

58.Haruta C., Suzuki T., Kasahara M. Variable domains in hagfish: NICIR is a polymorphic multigene family expressed preferentially in leukocytes and is related to lamprey TCR-like // Immunogenetics. 2006. V. 58. P. 216-225.

59.Hatzivassiliou G., Miller I., Takizawa J., Palanisamy N., Rao P.H., Iida S., Tagawa S., Taniwaki M., Russo J., Neri A., Cattoretti G., Clynes R., Mendelsohn C., Chaganti R.S., Dalla-Favera R. IRTA1 and IRTA2, novel immunoglobulin superfamily receptors expressed in B cells and involved in chromosome lq21 abnormalities in B cell malignancy // Immunity. 2001. V. 14. P. 277-289.

60. Hill R.L., Delaney R., Fellows R.E., Lebovitz H.E. The evolutionary origins of the immunoglobulins // Proc Natl Acad Sci USA. 1966. V. 56. P. 1762-1769.

61.Hirashima M., Ueno M., Kamiya K., Higuchi S., Matsumoto R. Functional heterogeneity of human eosinophil chemotactic lymphokines // Lymphokine Cytokine Res. 1991. V. 10. P. 481-486.

62. Humphrey M.B., Lanier L.L., Nakamura M.C. Role of ITAM-containing adapter proteins and their receptors in the immune system and bone // Immunol Rev. 2005. V. 208. P. 50-65.

63.1kari K., Momohara S., Nakamura T., Hara M., Yamanaka H., Tomatsu T., Kamatani N. Supportive evidence for a genetic association of the FCRL3 promoter polymorphism with rheumatoid arthritis // Ann Rheum Dis. 2006. V. 65. P. 671-673.

64.Inozume T., Matsuzaki Y., Kurihara S., Fujita T., Yamamoto A., Aburatani H., Shimada S., Kawakami Y. Novel melanoma antigen, FCRL/FREB, identified by cDNA profile comparison using DNA chip are immunogenic in multiple melanoma patients // Int J Cancer. 2005. V. 114. P. 283-290.

65.1shida H., Komiya S., Inoue Y., Yutani S., Inoue A., Itoh K. Expression of the SART1 tumor-rejection antigen in human osteosarcomas // Int J Oncol. 2000. V. 17. P. 29-32.

66. Johnson S.A., Pleiman C.M., Pao L., Schneringer J., Hippen K., Cambier J.C. Phosphorylated immunoreceptor signaling motifs (ITAMs) exhibit unique

abilities to bind and activate Lyn and Syk tyrosine kinases // J Immunol. 1995. V. 155. P. 4596-4603.

67. Jones D.T., Taylor W.R., Thornton J.M. A Model Recognition Approach to the Prediction of All-Helical Membrane Protein Structure and Topology // Biochemistry. 1994. V. 33. P. 3038-3049.

68.Kaas Q., Ehrenmann F., Lefranc M.-P. IG, TR and IgSF, MHC and MhcSF: what do we learn from the IMGT Colliers de Perles? // Brief Funct Genomic Proteomic. 2007. V. 6. P. 253-264.

69. Kane L.P., Lin J., Weiss A. Signal transduction by the TCR for antigen // Curr Opin Immunol. 2000. V. 12. P. 242-249.

70.Kasahara M. What do the paralogous regions in the genome tell us about the origin of the adaptive immune system? // Immunol Rev. 1998. V. 166. P. 159175.

71 .Kashiwada M., Giallourakis C.C., Pan P.Y., Rothman P.B. Immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif of the IL-4 receptor associates with SH2-containing phosphatases and regulates IL-4-induced proliferation // J Immunol. 2001. V. 167. P. 6382-6387.

72.Kimura T., Kihara H., Bhattacharyya S., Sakamoto H., Appella E., Siraganian R.P. Downstream signaling molecules bind to different phosphorylated immunoreceptor tyrosine-based activation motif (ITAM) peptides of the high affinity IgE receptor // J Biol Chem. 1996. V. 271. P. 27962-27968.

73.Kinet J.P. The high-affinity IgE receptor (Fc epsilon RI): from physiology to pathology // Annu Rev Immunol. 1999. V. 17. P. 931-972.

74.Klausner R.D., Lippincott-Schwartz J., Bonifacino J.S. The T Cell Antigen Receptor: Insights into Organelle Biology // Annual Review of Cell Biology. 1990. V. 6. P. 403-431.

75.Kleinberg M.E., Rotrosen D., Malech H.L. Asparagine-linked glycosylation of cytochrome b558 large subunit varies in different human phagocytic cells // J Immunol. 1989. V. 143. P. 4152-4157.

76.Kochi Y., Yamada R., Suzuki A., Harley J.B., Shirasawa S., Sawada T., Bae S.-C., Tokuhiro S., Chang X., Sekine A., Takahashi A., Tsunoda T., Ohnishi Y., Kaufman K.M., Kang C.P., Kang C., Otsubo S., Yumura W., Mimori A., Koike

T., Nakamura Y., Sasazuki T., Yamamoto K. A functional variant in FCRL3, encoding Fc receptor-like 3, is associated with rheumatoid arthritis and several autoimmunities // Nat Genet. 2005. V. 37. P. 478-485.

77.Kohashi K., Oda Y., Yamamoto H., Tamiya S., Matono H., Iwamoto Y., Taguchi T., Tsuneyoshi M. Reduced expression of SMARCB1/INI1 protein in synovial sarcoma//Mod Pathol. 2010. V. 23. P. 981-990.

78.Kurosaki T., Gander I., Ravetch J.V. A subunit common to an IgG Fc receptor and the T-cell receptor mediates assembly through different interactions // Proc Natl Acad Sci USA. 1991. V. 88. P. 3837-3841.

79.Kurosaki T., Ravetch J.V. A single amino acid in the glycosyl phosphatidylinositol attachment domain determines the membrane topology of Fc gamma RIII // Nature. 1989. V. 342. P. 805-807.

80.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.

81.Lander R.J., Winters M.A., Meacle F.J., Buckland B.C., Lee A.L. Fractional precipitation of plasmid DNA from lysate by CTAB // Biotechnol Bioeng. 2002. V. 79. P. 776-784.

82. Lanier L.L. Natural killer cell receptor signaling // Curr Opin Immunol. 2003. V. 15. P. 308-314.

83.Lanier L.L. Up on the tightrope: natural killer cell activation and inhibition // Nat Immunol. 2008. V. 9. P. 495-502.

84.Larsson M., Brundell E., Nordfors L., Hoog C., Uhlen M., Stahl S. A general bacterial expression system for functional analysis of cDNA-encoded proteins // Protein Expr Purif. 1996. V. 7. P. 447-457.

85.Laun K., Coggill P., Palmer S., Sims S., Ning Z., Ragoussis J., Volpi E., Wilson N., Beck S., Ziegler A., Volz A. The leukocyte receptor complex in chicken is characterized by massive expansion and diversification of immunoglobulin-like Loci // PLoS Genet. 2006. V. 2. P. e73.

86.Lesk A.M., Chothia C. Evolution of proteins formed by beta-sheets II The core of the immunoglobulin domains // J Mol Biol. 1982. V. 160. P. 325-342.

87.Leu C.-M., Davis R.S., Gartland L.A., Fine W.D., Cooper M.D. FcRHl: an activation coreceptor on human B cells // Blood. 2005. V. 105. P. 1121-1126.

88.Levy S., Todd S.C., Maecker H.T. CD81 (TAPA-1): a molecule involved in signal transduction and cell adhesion in the immune system // Annu Rev Immunol. 1998. V. 16. P. 89-109.

89.Li F.J., Ding S., Pan J., Shakhmatov M.A., Kashentseva E., Wu J., Li Y., Soong S.-j., Chiorazzi N., Davis R.S. FCRL2 expression predicts IGHV mutation status and clinical progression in chronic lymphocytic leukemia // Blood. 2008. V. 112. P. 179-187.

90.Litman G.W., Cannon J.P., Dishaw L.J. Reconstructing immune phylogeny: new perspectives // Nat Rev Immunol. 2005. V. 5. P. 866-879.

91.Litman G.W., Cannon J.P., Rast J.P. New insights into alternative mechanisms of immune receptor diversification // Adv Immunol. 2005. V. 87. P. 209-236.

92.Lodish H., Berk A., Kaiser C.A., Krieger M., Bretscher A., Ploegh H., Amon A., Scott M.P. Molecular Cell Biology. W. H. Freeman. 2012. 973 P.

93.Low M.G., Saltiel A.R. Structural and functional roles of glycosyl-phosphatidylinositol in membranes // Science. 1988. V. 239. P. 268-275.

94.Maltais L.J., Lovering R.C., Taranin A.V., Colonna M., Ravetch J.V., Dalla-. Favera R., Burrows P.D., Cooper M.D., Davis R.S. New nomenclature for Fc receptor-like molecules // Nat Immunol. 2006. V. 7. P. 431-432.

95.Masir N., Jones M., Pozzobon M., Marafioti T., Volkova O.Y., Mechetina L.V., Hansmann M.-L., Natkunam Y., Taranin A.V., Mason D.Y. Expression pattern of FCRL (FREB, FcRX) in normal and neoplastic human B cells // Br J Haematol. 2004. V. 127. P. 335-343.

96.Masuda K., Davis R.S., Maruyama T., Zhang J., He T., Cooper M.D., O-Wang J., Burrows P.D. FcRY, an Fc receptor related gene differentially expressed during B lymphocyte development and activation // Gene. 2005. V. 363. P. 3240.

97.Matsumoto R., Matsumoto H., Seki M., Hata M., Asano Y., Kanegasaki S., Stevens R.L., Hirashima M. Human ecalectin, a variant of human galectin-9, is a novel eosinophil chemoattractant produced by T lymphocytes // J Biol Chem. 1998. V. 273. P. 16976-16984.

98.Mechetina L.V., Najakshin A.M., Volkova O.Y., Guselnikov S.V., Faizulin R.Z., Alabyev B.Y., Chikaev N.A., Vinogradova M.S., Taranin A.V. FCRL, a novel

member of the leukocyte Fc receptor family possesses unique structural features // Eur J Immunol. 2002. V. 32. P. 87-96. 99. Miller I., Hatzivassiliou G., Cattoretti G., Mendelsohn C., Dalla-Favera R.

IRTAs: a new family of immunoglobulinlike receptors differentially expressed in B cells // Blood. 2002. V. 99. P. 2662-2669.

100. Mostov K.E. Transepithelial transport of immunoglobulins // Annu Rev Immunol. 1994. V .12. P. 63-84.

101. Murphy K. Janeway's Immunobiology (Immunobiology: The Immune System (Janeway)). Garland Science. 2011. 888 P.

102. Mussmann R., Wilson M., Marcuz A., Courtet M., Du Pasquier L. Membrane exon sequences of the three Xenopus Ig classes explain the evolutionary origin of mammalian isotypes // Eur J Immunol. 1996. V. 26. P. 409-414.

103. Muta T., Kurosaki T., Misulovin Z., Sanchez M., Nussenzweig M.C., Ravetch J.V. A 13-amino-acid motif in the cytoplasmic domain of Fc gamma RIIB modulates B-cell receptor signalling // Nature. 1994. V. 368. P. 70-73.

104. Nakayama Y., Weissman S.M., Bothwell A.L. BXMAS1 identifies a cluster of homologous genes differentially expressed in B cells // Biochem Biophys Res Commun. 2001. V. 285. P. 830-837.

105. Nelson D.L., Cox M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. W. H. Freeman. 2012. 1100P.

106. Neuberger M.S., Patel K.J., Dariavach P., Nelms K., Peaker C.J., Williams G.T. The mouse B-cell antigen receptor: definition and assembly of the core receptor of the five immunoglobulin isotypes // Immunol Rev. 1993. V. 132. P. 147-161.

107. Nunomura S., Gon Y., Yoshimaru T., Kashiwakura J., Kawakami T., Ra C. FcepsilonRI beta-chain ITAM amplifies PI3K-signaling to ensure synergistic degranulation response via FcepsilonRI and adenosine receptors // Eur J Immunol. 2010. V. 40. P. 1205-1217.

108. Owen J., Punt J., Stranford S. Kuby Immunology (Kindt, Kuby Immunology). W. H. Freeman. 2013. 574 P.

109. Pancer Z., Mayer W.E., Klein J., Cooper M.D. Prototypic T cell receptor and CD4-like coreceptor are expressed by lymphocytes in the agnathan sea lamprey //Proc Natl Acad Sci USA. 2004. V.101. P. 13273-13278.

110. Perry M., Whyte A. Immunology of the tonsils // Immunol Today. 1998. V. 19. P. 414-421.

111. Platzer B., Fiebiger E. The signal peptide of the IgE receptor alpha-chain prevents surface expression of an immunoreceptor tyrosine-based activation motif-free receptor pool//J Biol Chem. 2010. V. 285. P. 15314-15323.

112. Poison A.G., Zheng B., Elkins K., Chang W., Du C., Dowd P., Yen L., Tan C., Hongo J.-A., Koeppen H., Ebens A. Expression pattern of the human FcRH/IRTA receptors in normal tissue and in B-chronic lymphocytic leukemia // Int Immunol. 2006. V. 18. P. 1363-1373.

113. Radbruch A. Flow Cytometry and Cell Sorting (Springer Lab Manuals). 2010. 355 P.

114. Rapoport T.A., Jungnickel B., Kutay U. Protein Transport Across the Eukaryotic Endoplasmic Reticulum and Bacterial Inner Membranes // Annual Review of Biochemistry. 1996. V. 65. P. 271-303.

115. Ravetch J.V., Bolland S. IgG Fc receptors // Annu Rev Immunol. 2001. V. 19. P. 275-290.

116. Ravetch J.V., Lanier L.L. Immune inhibitory receptors // Science. 2000. V. 290. P. 84-89.

117. Reth M. Antigen receptor tail clue // Nature. 1989. V. 338. P. 383-384.

118. Robinson D.R., Wu Y.M., Lin S.F. The protein tyrosine kinase family of the human genome // Oncogene. 2000. V. 19. P. 5548-5557.

119. Roopenian D.C., Akilesh S. FcRn: the neonatal Fc receptor comes of age // Nat Rev Immunol. 2007. V. 7. P. 715-725.

120. Santiago T., Kulemzin S.V., Reshetnikova E.S., Chikaev N.A., Volkova O.Y., Mechetina L.V., Zhao M., Davis R.S., Taranin A.V., Najakshin A.M., Hendershot L.M., Burrows P.D. FCRLA is a resident endoplasmic reticulum protein that associates with intracellular Igs, IgM, IgG and IgA // Int Immunol. 2011. V. 23. P. 43-53.

121. Scanlan M.J., Raj B.K., Calvo B., Garin-Chesa P., Sanz-Moncasi M.P., Healey J.H., Old L.J., Rettig W.J. Molecular cloning of fibroblast activation protein alpha, a member of the serine protease family selectively expressed in stromal

fibroblasts of epithelial cancers // Proc Natl Acad Sci USA. '1994. V. 91. P. 5657-5661.

122. Schreeder D.M., Cannon J.P., Wu J., Li R, Shakhmatov M.A., Davis R.S. Cutting edge: FcR-like 6 is an MHC class II receptor // J Immunol. 2010. V. 185. P. 23-27.

123. Schreeder D.M., Pan J., Li F.J., Vivier E., Davis R.S. FCRL6 distinguishes mature cytotoxic lymphocytes and is upregulated in patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia//Eur J Immunol. 2008. V. 38. P. 3159-3166.

124. Seaman W.E., Niemi E.C., Stark M.R., Goldfien R.D., Pollock A.S., Imboden J.B. Molecular cloning of gp42, a cell-surface molecule that is selectively induced on rat natural killer cells by interleukin 2: glycolipid membrane anchoring and capacity for transmembrane signaling // J Exp Med. 1991. V. 173. P. 251-260.

125. Sinclair N.R. Immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs on activating molecules // Crit Rev Immunol. 2000. V. 20. P. 89-102.

126. Sive H.L., St John T. A simple subtractive hybridization technique employing photoactivatable biotin and phenol extraction // Nucleic Acids Res. 1988. V. 16. P. 10937.

127. Smith D.K., Xue H. Sequence profiles of immunoglobulin and immunoglobulin-like domains // J Mol Biol. 1997. V. 274. P. 530-545.

128. Spiro R.G. Protein glycosylation: nature, distribution, enzymatic formation, and disease implications of glycopeptide bonds // Glycobiology. 2002. V. 12. P. 43R-56R.

129. Srinivasan M., Roeske R.W. Immunomodulatory peptides from IgSF proteins: a review // Curr Protein Pept Sci. 2005. V. 6. P. 185-196.

130. Stiiber D., Matile H., Garotta G. System for high-level production in Escherichia coli and rapid purification of recombinant proteins: application to epitope mapping, preparation of antibodies, and structure-function analysis. Immunological Methods.Academic Press. New York. 1990. P. 121-152.

131. Suresh M.R., Milstein C. A direct antigen-binding assay to screen hybridoma supernatants // Anal Biochem. 1985. V. 151. P. 192-195.

132. Taylor L.S., Paul S.P., McVicar D.W. Paired inhibitory and activating receptor signals // Rev Immunogenet. 2000. V. 2. P. 204-219.

133. Tedder T.F., Schlossman S.F. Phosphorylation of the B1 (CD20) molecule by normal and malignant human B lymphocytes // J Biol Chem. 1988. V. 263. P. 10009-10015.

134. Tefferi A., Nichols W.L. Acquired von Willebrand disease: concise review of occurrence, diagnosis, pathogenesis, and treatment // Am J Med. 1997. V. 103. P. 536-540.

135. Teichmann S.A., Chothia C. Immunoglobulin superfamily proteins in Caenorhabditis elegans / J Mol Biol. 2000. V. 296. P. 1367-1383.

136. Trowbridge I.S., Collawn J.F., Hopkins C.R. Signal-dependent membrane protein trafficking in the endocytic pathway // Annu Rev Cell Biol. 1993. V. 9. P. 129-161.

137. Tung W.L., Chow K.C. A modified medium for efficient electrotransformation of E. coli//Trends Genet. 1995. V. 11. P. 128-129.

138. Udenfriend S., Kodukula K. How glycosylphosphatidylinositol-anchored membrane proteins are made // Annu Rev Biochem. 1995. V. 64. P. 563-591.

139. Veillette A., Latour S. The SLAM family of immune-cell receptors // Curr Opin Immunol. 2003. V. 15. P. 277-285.

140. Vely F., Vivier E. Conservation of structural features reveals the existence of a large family of inhibitory cell surface receptors and noninhibitory/activatory counterparts // J Immunol. 1997. V. 159. P. 2075-2077.

141. Volkova O.Y., Reshetnikova E.S., Mechetina L.V., Chikaev N.A., Najakshin A.M., Faizulin R.Z., Duzhak T.G., Taranin A.V. Generation and characterization of monoclonal antibodies specific for human FCRLA // Hybridoma. 2007. V. 26. P. 78-85.

142. Volz A., Wende H., Laun K., Ziegler A. Genesis of the ILT/LIR/MIR clusters within the human leukocyte receptor complex // Immunol Rev. 2001. V. 181. P. 39-51.

143. von Heijne G. Membrane protein structure prediction Hydrophobicity analysis and the positive-inside rule // J Mol Biol. 1992. V. 225. P. 487-494.

144. Wada J., Kanwar Y.S. Identification and characterization of galectin-9, a novel beta-galactoside-binding mammalian lectin // J Biol Chem. 1997. V. 272. P. 6078-6086.

145. Wada J., Ota K., Kumar A., Wallner E.I., Kanwar Y.S. Developmental regulation, expression, and apoptotic potential of galectin-9, a beta-galactoside binding lectin // J Clin Invest. 1997. V. 99. P. 2452-2461.

146. Weir D.M., Herzenberg L.A., Blackwell C., Herzenberg L.A. Handbook of Experimental Immunology. Applications of Immunological Methods in Biomedical Sciences. Oxford: Alden Press, 1987. P. 107.1-133.36.

147. Weiss A., Littman D.R. Signal transduction by lymphocyte antigen receptors // Cell. 1994. V. 76. P. 263-274.

148. Williams A.F., Barclay A.N. The immunoglobulin superfamily—domains for cell surface recognition // Annu Rev Immunol. 1988. V. 6. P. 381-405.

149. Williams A.F., Davis S J., He Q., Barclay A.N. Structural diversity in domains of the immunoglobulin superfamily // Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1989. V. 54 Pt 2. P. 637-647.

150. Wilson M.J., Torkar M., Haude A., Milne S., Jones T., Sheer D., Beck S., Trowsdale J. Plasticity in the organization and sequences of human KIR/ILT gene families // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. V. 97. P. 4778-4783.

151. Wilson T.J., Colonna M. A new Fc receptor homolog, FREB2, found in germinal center B cells // Genes Immun. 2005. V. 6. P. 341-346.

152. Wilson T.J., Presti R.M., Tassi I., Overton E.T., Cella M., Colonna M. FcRL6, a new ITIM-bearing receptor on cytolytic cells, is broadly expressed by lymphocytes following HIV-1 infection // Blood. 2007. V. 109. P. 3786-3793.

153. Wingfield P.T., Palmer I., Liang S.M. Folding and purification of insoluble (inclusion-body) proteins from Escherichia coli. Current protocols in protein science. New York. 1995. P. 6.5.1-6.5.27.

154. Wu G.J., Cannon R.E. An economical large scale procedure to purify E coli amplifiable plasmids for DNA sequencing, in vitro transcription and in vitro mutagenesis//Experientia. 1985. V. 41. P. 1488-1490.

155. Xu M., Zhao R., Zhao Z.J. Identification and characterization of leukocyte-associated Ig-like receptor-1 as a major anchor protein of tyrosine phosphatase SHP-1 in hematopoietic cells // J Biol Chem. 2000. V. 275. P. 17440-17446.

156. Xu M.-j., Zhao R., Cao H., Zhao Z.J. SPAP2, an Ig family receptor containing both ITIMs and ITAMs // Biochem Biophys Res Commun. 2002. V. 293. P. 1037-1046.

157. Xu M.J., Zhao R., Zhao Z.J. Molecular cloning and characterization of SPAP1, an inhibitory receptor // Biochem Biophys Res Commun. 2001. V. 280. P. 768775.

158. Xu Z., Jin B. A novel interface consisting of homologous immunoglobulin superfamily members with multiple functions // Cell Mol Immunol. 2010. V. 7. P. 11-19.

159. Yan W., Shen F., Dillon B., Ratnam M. The hydrophobic domains in the carboxyl-terminal signal for GPI modification and in the amino-terminal leader peptide have similar structural requirements // J Mol Biol. 1998. V. 275. P. 2533.

160. Yoder J.A., Litman R.T., Mueller M.G., Desai S., Dobrinski K.P., Montgomery J.S., Buzzeo M.P., Ota T., Amemiya C.T., Trede N.S., Wei S., Djeu J.Y., Humphray S., Jekosch K., Hernandez Prada J.A., Ostrov D.A., Litman G.W. Resolution of the novel immune-type receptor gene cluster in zebrafish // Proc Natl Acad SciU S A. 2004. V. 101. P. 15706-15711.

161. Zhang S.-M., Adema C.M., Kepler T.B., Loker E.S. Diversification of Ig superfamily genes in an invertebrate // Science. 2004. V. 305. P. 251-254.