Характеристика культивируемых гетеротрофов микробного сообщества кишечника дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.08, кандидат биологических наук Богатыренко, Елена Александровна

• Богатыренко, Елена Александровна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Богатыренко, Елена Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Сохранение водных биоресурсов за счёт аквакультуры

1.2. Дальневосточный трепанг и особенности его выращивания в искусственных

условиях

1.2.1. Морфология, биология, экология

1.2.2. Особенности выращивания в искусственных условиях

1.3. Пробиотики в аквакультуре

1.4. Пищеварительные ферменты дальневосточного трепанга

1.4.1. Ферменты эндогенного происхождения

1.4.2. Хитин и хитиназа

1.4.3. Мукополисахариды и ферменты, катализирующие их распад

1.4.4. Альгинаты и альгинатлиазы

1.4.5. Крахмал и ферменты, катализирующие его распад

1.4.6. Липидные субстраты и липаза

1.4.7. Протеолитические ферменты

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Выделение и идентификация микрофлоры дальневосточного трепанга и грунта из мест его обитания

2.2. Питательные среды

2.3. Определение активности амилаз и хондроитинсульфатаз

2.4. Определение хитинолитической активности

2.5. Определение активности альгинатлиаз

2.6. Определение липолитической активности

2.7. Определение протеолитической активности

2.8. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БАКТЕРИАЛЬНОГО СОСТАВА И ЧИСЛЕННОСТИ КИШЕЧНОЙ МИКРОФЛОРЫ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО ТРЕПАНГА И ГРУНТОВ ИЗ МЕСТ ЕГО ОБИТАНИЯ

3.1. Идентификация культивируемых бактерий микрофлоры дальневосточного трепанга и грунта из мест его обитания

3.2. Характеристика состава и численности кишечной микрофлоры трепанга и грунта из мест его обитания

ГЛАВА 4. ФЕРМЕНТАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ МИКРОФЛОРЫ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО ТРЕПАНГА

4.1. Амилолитическая активность

4.2. Хондроитинсульфатазная активность

4.3. Хитинолитическая активность

4.4. Альгинатлиазная активность

4.5. Липолитическая активность

4.6. Протеолитическая активность

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЯ

ИЗ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика культивируемых гетеротрофов микробного сообщества кишечника дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus»

ВВЕДЕНИЕ

Дальневосточный трепанг Apostichopus japonicus относится к важным объектам промысла в морях Дальнего Востока, являясь одним из самых дорогих и востребованных на международном рынке морепродуктов. Несмотря на то, что у побережья Китая обитает около 20 видов голотурий, в том числе и таких коммерчески важных, как Thelenota ananas, Actinopyga miliaris, Holothuria nobilis, наиболее высоко ценится продукт, получаемый именно из дальневосточного трепанга, поэтому он пользуется повышенным спросом в Китае, Корее, Японии. Ткани гидробионта содержат богатый набор биологически активных химических соединений, что обуславливает высокую фармакологическую ценность получаемых из трепанга продуктов (Левин, 2000). Пищевая и целебная ценность голотурии привела к интенсификации промысла и несоблюдению норм вылова, а с начала 90-х годов прошлого столетия, и к массовому браконьерскому вылову дальневосточного трепанга, что, в конечном счете, сказалось на значительном сокращении численности популяций этого животного во всех районах его обитания. При наметившейся тенденции уменьшения запасов данного биоресурса вполне, очевидно, что за счет естественного воспроизводства численность беспозвоночного восстановиться не сможет, что в итоге приведет к исчезновению вида Apostichopus japonicus (Сергеенко, Дубровский, 1994).

На сегодняшний день одним из способов восстановления численности популяции дальневосточного трепанга является марикультура. В Приморском крае России уже существуют десятки акваферм, занимающихся искусственным разведением голотурии. Одной из ключевых проблем подобных морских хозяйств является высокая смертность трепанга на ранних стадиях его развития, что, по мнению некоторых ученых, связано со снижением иммунитета гидробионта и его подверженности различным инфекционным заболеваниям из-за постоянно действующих факторов стресса: высоких нагрузок биомассы на единицу объёма, органических

загрязнений воды, перепадов концентрации кислорода (Захарова, Шатковская, 2008). Тем не менее, в литературе отсутствуют данные о влиянии искусственных условий воспроизводства на изменение состава и численности бактериальных сообществ кишечной микрофлоры трепанга, также как и отсутствуют данные о составе нормальной кишечной микрофлоры этого гидробионта. Известно, что дальневосточный трепанг по способу питания является детритофагом-грунтоедом, и в среднем за год через его кишечник проходит огромное количество грунта вместе с различными микроорганизмами и останками морских растений и животных (Левин, 1982). Таким образом, становится очевидным огромное значение собственной микрофлоры трепанга в переработке и усвоении попадающей с пищей органики.

Как показывает зарубежный и отечественный опыт, одним из наиболее перспективных способов снижения смертности промысловых видов рыб, моллюсков и ракообразных при их искусственном разведении является использование препаратов на основе пробиотиков, которые представляют собой живые организмы и (или) вещества микробного или иного происхождения, повышающие активность иммунной системы, принимающие активное участие в процессах пищеварения, способствующие восстановлению естественной микрофлоры (Бурлаченко и др., 2006). В настоящее время известно несколько механизмов положительного -воздействия пробиотиков на организм, одним из которых является синтез пищеварительных ферментов, улучшающих деятельность желудочно-кишечного тракта (УегзсЬиеге а1., 2000).

На сегодняшний день в литературе наиболее полно описаны эколого-географические аспекты использования ресурсов АрозИскориз ]аротст для сохранения и восстановления его численности (Лебедев, 2002). Что же касается изучения микробного сообщества кишечника дальневосточного трепанга, то информация по данному вопросу практически отсутствует. В работе Шульгиной Л.В. (1982) приведены данные только о сезонной

динамике численности бактерий в пищеварительном тракте голотурии, детрите и морской воде из мест обитания животного. О ферментативной активности выделенных из дальневосточного трепанга микроорганизмов упоминается лишь в некоторых работах, целью которых был поиск источников биологически активных ферментов (Урванцева и др., 2006; Беленева и др., 2010; НштиЙпщоёа е1 а1., 2007).

Цель данной работы - изучить качественный, количественный состав и биохимические свойства бактериального сообщества кишечника дальневосточного трепанга из естественной среды обитания.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Дать сравнительную характеристику численности и видового состава культивируемых гетеротрофных бактерий, выделенных из кишечников трепангов б. Алексеева и б. Киевка Японского моря.

2. Дать сравнительную характеристику численности и видового состава культивируемых гетеротрофных бактерий, выделенных из грунтов с мест обитания трепангов б. Алексеева и б. Киевка Японского моря.

3. Изучить активность пищеварительных ферментов бактерий, выделенных из кишечника трепанга.

Научная новизна работы

Впервые изучены видовой состав и численность культивируемых бактерий, входящих в состав кишечной микрофлоры дальневосточного трепанга. Установлено, что бактериальное сообщество кишечника трепанга формируется за счет микробиоты грунта из мест обитания голотурии.

Впервые представлена качественная и количественная характеристика амилолитической, хондроитинсульфатазной, хитинолитической, альгинатлиазной, липолитической и протеолитической активности кишечной микрофлоры трепанга.

Практическая значимость работы

Впервые получена коллекция штаммов бактерий, населяющих кишечник дальневосточного трепанга Арозйскорш ]аротст. Полученные микроорганизмы обладают высокой биохимической активностью, что делает их весьма ценными для использования в биотехнологии. Кроме того, ряд выделенных штаммов с высокими значениями активности пищеварительных ферментов, рекомендован для применения в качестве пробиотиков при искусственном разведении голотурий. Фрагменты работы используются в качестве материалов для лекций учебной дисциплины «Морская микробиология» и летней практики студентов Дальневосточного федерального университета.

Защищаемые положения:

1. Видовой состав бактериального сообщества кишечника дальневосточного трепанга специфичен, так как формируется за счет только факультативно анаэробных бактерий, населяющих грунты в местах обитаний голотурии.

2. Бактерии кишечной микрофлоры трепанга характеризуются высокой активностью пищеварительных ферментов как потенциальные пробиотики для использования в марикультуре.

Апробация работы

Основные результаты работы докладывались на Всероссийской научной школе для молодежи «Перспективы развития инноваций в биологии», г. Владивосток, 2009; IX региональной конференции студентов, аспирантов вузов и научных организаций Дальнего Востока России «Актуальные проблемы экологии, морской биологии и биотехнологии», г. Владивосток, 2010; I Дальневосточной междисциплинарной молодежной научной конференции «Современные методы научных исследований», г. Владивосток, 2011; 3-ем Байкальском микробиологическом симпозиуме с международным участием «Микроорганизмы и вирусы в водных экосистемах», г. Иркутск, 2011. Результаты исследований были

представлены на VI Межрегиональной экологической научно-практической конференции «Экологические аспекты региона», г. Воронеж, 2010; Всероссийской конференции молодых ученых и специалистов, посвященная 125-летию со дня рождения И.И. Месяцева, г. Мурманск, 2010; I Международной научно-практической конференции «Экологическая безопасность и устойчивое развитие территорий», Чебоксары, 2011; XIII международной научно-практической конференции

"Фундаментальные и прикладные исследования, разработка и применение высоких технологий в промышленности и экономике", Санкт-Петербург, 2012.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 2 статьи, опубликованные в ведущих рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации

Работа состоит из введения; обзора литературы, посвященного актуальности искусственного воспроизводства дальневосточного трепанга, проблемам, связанным с его культивированием, а также международному опыту успешного применения пробиотиков в марикультуре; главы, содержащей описание использованных в работе материалов и методов; двух экспериментальных глав, посвященных изучению бактериального состава микрофлоры кишечника трепанга, а также характеристике активности пищеварительных ферментов, полученных из него штаммов бактерий; выводов; списка литературы, который включает 147 источника, в том числе 83 иностранных, и 19 приложений.

Диссертация изложена на 128 страницах, иллюстрирована 8 рисунками, 9 таблицами и 19 приложениями. Данная работа выполнена при финансовой поддержке фондов Министерства образования и науки по проектам: 1.2.09; АВЦП 2.1.1./4793; Правительства РФ для государственной поддержки научных исследований, проводимых под

руководством ведущих ученых в российских образовательных учреждениях высшего профессионального образования, дог. № 11.034.31.0010

Благодарности

Автор искренне благодарит своего научного руководителя Бузолеву Любовь Степановну, д.б.н., профессора за всестороннюю помощь, поддержку и за помощь в освоении экспериментальных методов, а также ценные консультации на всех этапах работы. Особую благодарность автор выражает профессору Чши Чжемину, заведующему лаборатории морских микроорганизмов Океанологического университета г. Циндао (Китая), а также всем сотрудникам указанной лаборатории за помощь в проведении экспериментов и постоянный интерес к работе.

Заключение диссертации по теме «Экология (по отраслям)», Богатыренко, Елена Александровна

ВЫВОДЫ:

1. Кишечная микрофлора трепанга имеет определенный таксономический состав, который формируется за счет микрофлоры грунтов соответствующих районов.

2. В состав кишечной микрофлоры дальневосточного трепанга входят представители следующих родов факультативно анаэробных культивируемых бактерий: Aeromonas, Bacillus, Enterobacter, Flavobacterium, Micrococcus, Pseudoalteromonas, Pseudomonas, Halomonas и Vibrio. Бактерии родов Acinetobacter, Flexibacter и Arthrobacter, относящиеся к строгим аэробам и населяющие грунты в местах обитания голотурии, не характеры для микробных сообществ кишечника гидробионта.

3. Доминирование представителей тех или иных родов бактерий в видовой структуре микробных сообществ кишечника трепанга зависит от таксономических групп, доминирующих в структуре микробных сообществ грунтов. Для кишечной микрофлоры голотурий из б. Алексеева, как и для микрофлоры грунтов этого района характерно преобладание представителей рода Pseudomonas (50 и 54.55% от общего числа штаммов сообществ соответственно). Для кишечной микрофлоры голотурий из б. Киевка, как и для микрофлоры грунтов этого района характерно преобладание представителей рода Bacillus (46.16 и 41.03% от общего числа штаммов сообществ соответственно).

4. Общая численность гетеротрофных бактерий в кишечнике трепангов из обоих районов исследования выше численности гетеротрофных бактерий из грунтов с соответствующих мест обитания голотурий, а, следовательно, полученные из кишечника трепангов бактерии можно отнести к его симбионтной микрофлоре.

5. Из кишечника дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus выделено 67 штаммов бактерий, из них амилолитической активностью

обладают 12% штаммов, альгинатлиазной - 7.5%, хондроитинсульфатазной и хитинолитической - по 6%, липолитической - 16.4%, протеолитической - 4.5%.

6. Активность амилаз микрофлоры трепанга составляет 0.46 - 0.593 ед. (мколь/мл-мин), активность хондроитинсульфатаз - 0.124 - 0.412 ед. (мколь/мл-мин), хитиназ - 0.29 - 2.09 ед. (мг ред. сахаров/мл-ч), альгинатлиаз - снижение вязкости тест-раствора на 29.7 - 78.1%, липаз -22 - 316 ед./мл, протеаз - 0.098 - 0.237 ед. (мколь/мл-мин).

7. Из коллекции бактерий, выделенных из трепанга, различную степень ферментативной активности проявили 32.8% штаммов, из них подавляющее большинство - 54.5 % представители рода Bacillus.

8. Для сохранения численности дальневосточного трепанга могут быть использованы пробиотические препараты на основе выделенных штаммов: Pseudomonas stutzeri А8, Bacillus coagulans K2, Bacillus megaterium K13, Bacillus pumilus A27.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Богатыренко, Елена Александровна, 2013 год

Литература

1. Авдеева Л.В., Осадчая А.И., Сафронова Л.А., Иляш В.М., Хархота М.А. Липолитическая активность бактерий рода Bacillus // Микробиология и биотехнология. 2010. № 3. С. 41-49.

2. Агеев Е.П., Котова С.Л., Скорикова Е.Е., Зезин А.Б. Хитин и его производные // Высокомолекулярные соединения. 1996. Т. 38, № 2. С. 323-329.

3. Алексеев В. А. Общая характеристика состояния водных биологических ресурсов // Водный мир. 2005. № 4. С. 44-49.

4. Антонов В.К. Химия протеолиза. М.: Наука, 1983. 367 с.

5. Башкатова H.A., Северина Л.О. Влияние условий культивирования на биосинтез липазы у Serratia marcescens/УМикробиология. - 1979.- Т. 68, Вып. 5. - С. 826.

6. Беленева И.А., Агаркова В.В., Кухлевский А.Д., Звягинцева Т.Н. Распространение ферментов углеводноо обмена среди морских микроорганизмов в Японском и Южно-Китайском морях // Микробиология. 2010. Т. 79, № 6. С. 793-800.

7. Безбородов A.M. Биотехнология продуктов микробного синтеза. - М.: Агропромиздат, 1991. - 238 с.

8. Бирюлина М. Г. Биолого-экологические особенности, распределение и запасы промысловых беспозвоночных в заливе Петра Великого. Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. Владивосток: ДВГУ, 1972. 25 с.

9. Бурлаченко И. В., Судакова Н.В., Балакирев Е. И., Мордовцев Д. А., Малик Е. В. Перспективные пробиотики для осетровых рыб // Рыбное хозяйство. 2006. № 3. С. 12-16.

Ю.Васьковский В. Е. Морские макрофиты. Систематика, биохимия, использование // Соровский образовательный журнал. 1998. № 7. С. 5157.

П.Вихорева Г.А., Горбачева И.Н., Гальбрайх JI.C. Химические волокна // Высокомолекулярные соединения. 1994. № 5. С. 37-45.

12.Возжинская В. Б., Каменев А. Н. Эколого-биологические основы культивирования и использование морских донных водорослей. M.i Наука, 1994. 121с.

13.Воропаев И. П. Углеводный и липидный состав тканей дальневосточного трепанга// Соровский образовательный журнал. 2002. №19.С. 53-59.

Н.Выдрякова Г. А., Чугаева Ю. В., Тюлькова Н. А. Трансформация биополимеров светящимися бактериями // Сибирский экологический журнал. 2002. № 2. С. 137-144.

15.Гаврилова Г.С., Курганский Г.Н. Временная инструкция по биотехнологии заводского способа получения и выращивания молоди дальневосточного трепанга. Владивосток: ТИНРО-Центр, 2003. 49 с.

16.Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л.: Медицина, 1973. 140 с.

17.Еворская Т. К. Технологии искусственного выращивания ценных объектов аквакультуры // http://www.extech.ru/s e/min s/niokr/krittech/annot /4-13.htm. 2004.

18.Елинов Н. П. Общие закономерности строения и развития микробов-продуцентов биологически активных веществ. Д.: Медицина, 1977. 285с.

19.Елисеева И.И., Рукавишников В.О. Группировка, корреляция, распознавание образов: (статистические методы классификации и измерения связей). М.: Статистика, 1977. 143 с.

20.Животные и растения залива Петра Великого / Под ред. Жирмунского А. В. и др. Д.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1976. 363 с.

21.Захарова Е.А., Шатковская О.В. Использование дрожжей Rhodotorula spp в качестве корма при искусственном выращивании личинок дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus // Дальневосточный регион - Рыбное хозяйство. 2008. Вып. 4, № 13. С. 4-6.

22.Иванова Е.П., Романенко Л.А., Михайлов В.В. Морские бактерии семейства Alteromonadaceae. Владивосток: Дальнаука. 2001. 122 с.

23.Ивановский К. А., Крымов Е. А. На морских фермах // Газета «Природа». 2003. №43. С. 4-7.

24.Исаченко, Б.Л. Микробиологическая характеристика грунтов и воды Карского моря // Тр. Аркт. ин-та. 1937. - Т. 82. - С. 1 - 30.

25.Компанец Э.В., Исаева М.Н., Балахнин И.А. Бактерии рода Aeromonas и их роль в аквакультуре // Микробиол. журн. 1992. Т.54, № 4. С.89-99.

26.Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир. 1980. 495 с.

27.Кузнецова Т. А. Химические исследования тритерпеновых гликозидов дальневосточной голотурии Stichopus japonicus Selenka. Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. хим. наук. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1972. 24 с.

28.Латышев Н. А., Васьковский В. Е. Фосфолипазы морских беспозвоночных. Распространение лизофосфолипаз // Биология моря. 1977. №3. С. 72-74.

29. Лебедев A.M. Эколого-географические аспекты использования ресурсов дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus в Приморском крае: дис. .. .канд. геогр. наук / A.M. Лебедев. - Владивосток, 2002. - 150 с.

30.Левин В. С. Дальневосточный трепанг. Владивосток: Дальневост. книжное изд-во, 1982. 192 с.

31. Левин B.C., Дальневосточный трепанг. Биология, промысел, воспроизводство. Санкт- Петербург: "Голанд", 2000. 200 с.

32.Левин В. С., Воронова Е. И. Усвоение бактериальной пищи дальневосточным трепангом. - В кн.: Материалы IV Всесоюзного коллоквиума по иглокожим. Тбилиси. 1979. С. 121-123.

33.Ленинджер А. Биохимия. М.: Изд-во «Мир», 1976. 957 с.

34.Малик Н.И., Панин А.Н., Малик Е.В. Пробиотики в промышленном животноводстве // Животноводство. 2000. №3. С. 10-16.

35.Малик Н.И., Панин H.A. Ветеринарные пробиотические препараты// Ветеринария. 2001. №1. С. 46-51.

36.Марченкова А.И., Лобырева Л.Б. Липолитическая активность спорооьразующих бактерий Bacillus subtilis 100 и 207 // Биосинтез и метаболизм липидов у микроорганизмов: Тез. докл. III Всес. Конф. (1214 ноября 1979 г., М.). 1979. С. 130-132.

37.Михайлов В.В., Кузнецова Т.А., Еляков Г.Б. Морские микроорганизмы и их вторичные биологически активные метаболиты. Владивосток: Дальнаука. 1999. 132 с.

38.Моисеев П. А., Карпевич А.Ф., Романычева О. Д. Морская аквакультура. М.: Агропромиздат, 1985. 205 с.

39.Мокрецова Н. Д. Биология размножения трепанга Stichopus japonicus Selenka как основа биотехники его разведения. Автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1978.

40.Мокрецова Н.Д., Гаврилова Г.С., Авраменко С.Ф. Временная инструкция по биотехнологии заводского способа получения и выращивания личинок трепанга до стадии оседания. // Владивосток. ТИНРО. 1988. С.12-15.

41.Морской бизнес / Под ред. Романова С. С. Калининград: Новый мир, 2005. 43 с.

42.Немченко М. А. Фермы надежды // Наука Урала. 2003. №14 (842). С. 5-6.

43.Нестерова О.В. Особенности процессов гумусообразования в морской среде на примере залива Петра Великого: Дис. ...канд. биол. наук. Владивосток: ДВГУ. 2005. 128 с.

44.0садчая А.И., Сафронова Л.А., Полтавский А.Н., Иляш В.М. Гидролазная активность антарктических бацилл // Микробиология и технология. 2009. № 8. С. 33-39.

45.Патент № 2198509, А01К61/00. Способ выращивания личинок трепанга до жизнестойкой стадии / Гостюхина О.Б., Бровкина Е.П., Осьмачко В.А., Шатковская О.В. (Государственное образовательное учреждение

Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет). Заявка № 2001115546/13 от 05.06.2001 // Изобретения (Заявки и патенты). - 2003.

46.Плиско Е. А., Нудьга JI. А., Данилов С. Н. Строение хитина и целлюлозы // Успехи химии. 1977. Т. 46, № 8. С. 1470-1487.

47.Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской микробиологии. Санкт-Петербург. 2002. 80 с.

48.Проскуренко И.В. Авторское свидетельство СССР 789073 «Способ выращивания личинок трепанга до стадии оседания», кл. А 01 К 61/00, опубл.23.12.80

49.Прохоров СВ. Продовольственная безопасность России и задачи управления аквакулыурой // Финансовый эксперт. 2006, № 1. С. 20-38.

50.Рубан E.JL Микробные липиды и липазы. М.: Наука. 1977. 218 с.

51.Санданова И.Б., Буянтуева Л.Б. Ферментативная активность микроорганизмов степных биогеоценозов Юго-Восточного Забайкалья // Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии: материалы Всероссийской конференции с международным участием. Т.2.- Улан-Удэ, 2006. - С. 7677.

52.Сергеенко В. А., Дубровский С. В. Влияние промысла на состояние популяции трепанга дальневосточного Stichopus japonicus лагуны Буссе (о. Сахалин) // "Экосистемы морей России в условиях антропогенного фактора" Тез. Докладов Всероссийской научной конференции г. Астрахань, КаспНИРХ. 1994. С. 65-73.

53.Слабоспицкая А. Т., Крымовская С. С. Хитиназы аэробных спорообразующих бактерий, выделенных из разных экологических источников // Микробиологический журнал. 1992. 54, № 6. С. 16-22.

54.Степаненко Б. Н. Углеводы. Успехи в изучении строения и метаболизма. М.: Наука, 1968. 145 с.

55.Урванцева A.M., Бакунина И.Ю., Недашковская О.И., Ким С.Б., Звягинцева Т.Н. Распространение внутриклеточных фукоидангидролаз

среди морских бактерий семейства Flavobacteriaceae // Прикладная биохимия и микробиология. 2006. Т. 42, № 5. С. 552-559.

56. Урсова Н. И. Перспективы применения пробиотиков метаболитного типа в педиатрии// Журнал Consilium-medicum. 2003. Т5. №6. С. 3-6.

57.Ханайченко. А. Н. , Битюкова Ю. Е., Найданова О. Г., Ткаченко Н. К., Пантелеева О. Д., Белоиваненко Т.Г. Мониторинг микрофлоры в системе выращивания личиночный стадий камбалы калкана Psetta Maeoitica Pallas // Экология моря. 2000. № 53. С. 82-87.

58.Цихон-Луканина Е.А., Солдатова И.Н. Усвоение пищи водными беспозвоночными // Трофология водных животных. Итоги и задачи. М.: Наука, 1973. С. 108-121.

59.Шагжина А.П., Лаврентьева Е.В., Базаржапов Б.Б. Протеазная активность в щелочных гидротермах Прибайкалья // Биология микроорганизмов и их научно-практическое использование: материалы Межрегиональной научно-практической конференции. - Иркутск, 2004. С. 185-187.

60.Шакуров H. Е. Аквакультура как способ восстановления биоресурсов // Биотехнология. 2007. №4. С. 13.

61.Шульгина Л. В. Микрофлора кишечника трепанга Stichopus japonicus Selenka, морской воды и детрита залива Петра Великого // Экология и условия воспроизводства рыб и беспозвоночных. Владивосток, 1982. С. 152-156.

62.Чжан Я Цин, Вэй Дэн и др. Трепанг и морской еж. Биология, исследование и разведение. Далянь, 2004. 205 с.

бЗ.Чигалейчик А. Г., Пириева Д. А. Внеклеточная хитиназа Aeromonas liquefaciens // Прикладная биохимия. 1976. Т. 12, № 2. С. 238-242.

64.Чиж Е. А. Питание личинок и ранней молоди трепанга (Apostychopus japonicus) в искусственных условиях. Тезисы совета молодых учёных ПЦН РАН. Владивосток: ТИНРО-центр, 2003.

65.Abeles F. В., Bosshart R. P., Farrence L. E., Habib W. H. Role of chitin for plant physiology // Plant Physiol. 1970. Vol. 47. P. 129.

66.Ackefors H. Environmental impacts of different farming technologies//Hydrobiology. 1999. Vol. 469. P. 145-169.

67.Austin B. & Billaud A. C. Inhibition of the fish pathogen, Serratia liquefaciens, by an antibiotic-producing isolate of Planococcus recovered from seawater// Journal Fish Diseases. 1990. Vol. 13. P. 553-556.

68.Bennet C. B., Hood M. A. Effects of cultural conditions on the modulation of chitinase by Bacillus megaterium // Develop. Ind. Microbiol. 1980. Vol. 21. P. 357-363.

69.Bergh Q. Bacteria associated with early life stages of halibut, Hippoglossus hippoglossus L., inhibit growth of a pathogenic Vibrio sp. // Journal Fish Diseases. 1995. Vol. 18. P. 31-40.

70.Brimacombe J. S., Webber J. M. Mucopolysaccharides. NY: American Elsevier Publishing Company, 1964. 386 p.

71.Brock TD. A textbook of industrial microbiology. Sunderland, MA: Sinauer Associates Inc., 1989. P. 306-316.

72.Bruno M. E. C. & Montville T. J. Common mechanistic action of bacteriocins from lactic acid bacteria // Appl. Environ. Microbiol. 1993. Vol. 59. P. 30033010.

73.Calloway DH. The place of single cell protein in man's diet. In: Davis P., editor.nSingle cell protein. NY: Academic Press, 1974. P. 129-131.

74.Choe S. Biology of the Japanese common sea cucumber Stichopus japonicus Selenka. Tokyo: Kaibundo, 1963. 226 p.

75.Claus L. Biosynthesis of chitinase by chitinolitic bacteria // Arch. Microbiol. 1961. Vol. 40. P. 17.

76.Cody R. M. Distribution of chitinase and chitobiase in bacillus // Curr. Microbiol. 1989. Vol. 19. P. 201-205.

77.Dopazo C. P., Lemos M. L., Lodeiros C., Bolinches J., Barja J. L. & Toranzo A. E. Inibitory activity of antibiotic-producing marine bacteria against fish pathogens // Journal Applied Bacteriology. 1988. Vol. 65. P. 97-101.

78. Elwan S.H., El-Hoseiny M., Amnar M.S., Mostafa S.A. A lypases production by Bacillus circulans under mesophilic and osmophilic conditions, factors affecting lipases production // J. bacterial, virol. et immunol. 1983. Vol. 76, № 7/12. P. 187-199.

79. Elyakova I. A., Shirokova N. I., Oshitok G. I., Uvarova N. I. A quest for glycosidases that hydrolyze certain triterpene and steroid glycosides in marine invertebrates // Biochem. and Physiol. 1974., 48B. Vol.2. P. 181184.

80. Favorov V. V. Vaskovsky V. E. Alginases of marine invertebrates // Biochem. and Physiol. 1971. Vol. 38. P. 689-696.

81. Franzke CW, Bruckner P, Bruckner-Tuderman L. Collagenous transmembrane proteins: recent insights into biology and pathology // J Biol Chem. 2005. Vol. 280(6). P. 4005-4008.

82.Frazier WC, Westhoff DC. Food microbiology. New Delhi: Tata McGraw Hill Publishing Company Limited. 1990. P. 398-415.

83.Hagiwara A., Hamada K., Hori S. & Hirayama K. Increased sexual reproduction in Brachionus plicatilis (Rotifera) with the addition of bacteria and rotifer extracts // J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 1994. Vol. 181. P. 1-8.

84.Harzevili A. R. S., Van Duffel H., Dhert P., Swings J. & Sorgeloos P. Use of a potential probiotic Lactococcus lactis AR21 strain for the enhancement of growth in the rotifer Brachionus plicatilis (Muller) // Aquacult. Res. 1998. Vol. 29. P. 411-417.

85.Hirimuthugoda N.Y., Chi Zh., Wu L. Probiotic yeasts with phytase activity identified from the gastrointestinal tract of sea cucumbers // SPC Beche de Mer Information Bulletin. 2007. Vol. 26. P. 31-33.

86.Holme E., Linstedt S. Tyrosinemia Type I adn NTBC (2-(2-nitro-4-triflourom othylbenoyl)-1,3-cyclohexanedione) // J. Inherit. Metab. Dis. 1998. Vol. 21. P! 507-517.

87.Holzapfel W. H., Haberer P., Snel J., Schillinger U. & Huis in't Veld J. Overview of gut flora and probiotics // Int. J. Food Microbiol. 1998. Vol. 41. P. 85-101.

88.1mada C., Maeda M. & Taga N. Purification and characterization of the protease inhibitor "monastatin" from a marine Alteromonas sp. with reference to inhibition of the protease produced by a bacterium pathogenic to fish // Can. J. Microbiol. 1985. Vol. 31. P. 1089-1094. 89.1mada C., Simidu U. & Taga N. Isolation and characterization of marine bacteria producing alkaline protease inhibitor // Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish. 1985a. Vol. 51. P. 799-803.

90.1rianto A., Austin B. Probiotics in aquaculture// Journal offish diseases.2002. Vol.25. P. 1-10.

91.Jeuniaux C. Chitinase // Meth. Enzymol. 1966. Vol. 8. P. 645-650.

92.Kitamikado M., Yamaguchi K., Tseng C. H. & Okabe B. I. Method of alginatelyase activity determination // Appl. Environ. Microbiol. 1990. Vol. 56. P. 2939-2940.

93.Krovacek K., Faris A., Ahne W. & Mansson I. Adhesion of Aeromonas hydrophila and Vibrio anguillarum to fish cells and to mucus-coated glass slides //FEMS Microbiol. Lett. 1987. Vol. 42. P. 85-89.

94.Lane D.J. 16S/23S sequencing//Nucleic acid techniques in bacterial systematics / Eds. Stackebrandt E., Goodfellow M. Chichester: John Wiley and sons, Ltd., 1991. P. 115-175.

95.Lemos M. L., Toranzo A. E. & Barja J. L. Antibiotic activity of epiphytic bacteria isolated from intertidal seaweeds // Microb. Ecology. 1985. Vol. 11. P. 149-163.

96.Li Hui-Rong, YuYong, Ji Wei-Shang & Xu Huai-Shu. The Effect of ALKEN CLEAR-FLO 1200 Used in Grow-out Ponds of Penaeus japonicus // Aquaculture. 1999. Vol. 31. P. 43-54.

97.Li Zhoujia, Zhang Qing & Yang Huaquan. The affect of the probiotics to the shrimp ponds // Aquaculture of China. 1997. Vol. 5. P. 30-31.

98.Molise E. M., Drake C. N. Chitinolysis by Serratiae including Serratia liquefaciens (Enterobacter liquefaciens) // Int. J. Syst. Bacteriol. 1973. Vol. 23. P. 278-280.

99.Montes A. J. & Pugh D. G. The use of probiotics in food-animal practice // Vet. Med. 1993. Vol. 88. P. 282-288.

100. Nair S., Tsukamoto K. & Shimidu U. Distribution of bacteriolytic bacteria in the coastal marine environments of Japan // Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish. 1985. Vol. 51. P. 1469-1473.

101. Nogami K. & Maeda M. Bacteria as biocontrol agents for rearing larvae of the crab Portunus trituberculatus // Can. J. Fish. Aquacult. Soc. 1992. Vol. 49. P. 2373-2376.

102. Ohtahara A., Mitsutomi M, Uchida Y. Purification and some properties of chitinase from Vibrio sp. // J. Ferment. Technol. 1979. Vol. 51. P. 169-177.

103. Olafsen J.A. Marine animals as hosts for fish-pathogenic vibrios // Marine Biotechnology. 1994. Vol. 3. P. 92.

104. Olafsen J. A. Interactions between hosts and bacteria in aquaculture // European Commission, Brussels, Belgium. 1998. P. 127-145.

105. Onarheim A. M. & Raa J. Characteristics and possible biological significance of an autochthonous flora in the intestinal mucosa in sea-water fish // International Symposium on Microbiology. 1990. P. 197-201.

106. Ota V., Yamada Y. Lipase from Candida paralipolytica. Part 1. Anionic surfactans as the essential activator in the systems emulsified by polyvinyl alcohol // Agric. Biol. Chem. - 1966. -V. 30, № 4. _p. 351-358.

107. Pel R., van der Wingaard A. J., Epping E., Gottschal J. C. Comparison of the chitinolytic properties of Clostridium sp. strain 9.1 and chitin-degrading bacterium from the intestinal tract of the place, Pleuronectes platessa (L.) // J. Gen. Microbiol. 1990. Vol. 136, № 4. P. 695-704.

108. The Prokariotes. A handbook on the biology of bacteria: ecophisiology, isolation, identification, application. Second ed./ Ed. Balows A. et. al. Baltimore: Springer-Verlag, 1992.

109. Pybus V., Loutit M. W., Lamont I. L. & Tagg J. R. Growth inhibition of the salmon pathogen Vibrio ordalii by a siderophore produced by Vibrio anguillarum strain VL4335 // Journal Fish Diseases. 1994. Vol. 17. P. 311-324.

110. Raa J. The use of immunostimulatory substances in fish and shellfish farming // Rev. Fish. Sc. 1996. Vol. 4. P. 229-288.

111. Rapp P. Production, regulation and some properties of lipase activity from Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum/ZEnzyme and Microbial Technology. 1995.-Vol. 17. P. 832- 838.

112. Rengpipat S., Phianphak W., Piyatiratitivorakul S. & Menasveta P. Effects of a probiotic bacterium in black tiger shrimp Penaeus monodon survival and growth//Aquaculture. 1998. Vol. 167. P. 301-313.

113. Reid J. D., Ogrydziak D. M. Chitinase-overproducing mutant of Serratia marcescens // Appl. Environ. Microbiol. 1981. Vol. 41, № 3. P. 664-669.

114. Reinolds D. M. Role of chitin as a substrate for chitinolitic enzymes adaptation//Journal General Microbiology. 1954. Vol. 11. P. 150.

115. Reissing J. L., Strominger J. L. & Leloir L. F. Sugar determination // J. Biol. Chem. 1955. Vol. 217. P. 959-966.

116. Rico-Mora R., Voltolina D. & Villaescusa-Celaya J. A. Biological control of Vibrio alginolyticus in Skeletonema costatum (Bacillariophyceae) cultures // Aquacult. Eng. 1998. Vol. 19. P. 1-6.

117. Ringo E. & Gatesoupe F. J. Lactic acid bacteria in fish: a review // Aquaculture. 1998. Vol. 160. P. 177-203.

118. Sakai M. Current research status of fish immunostimulants // Aquaculture. 1999. Vol. 172. P. 63-92.

119. Sambrook J.F., Fristch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edn. New-York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

120. Sekhon Anurag, Dahiya Neetu, Tiwari Ram P., Hondal Jurinder S. Properties of termostable extracellular lipase from Bacillus megaterium AKJ-1 //J. Basic. Microbiol. 2005. Vol. 45, № 2. P. 147-154.

121. Somogyi M. Notes on sugar determination // Journal of Biological Chemistry. 1952. Vol. 195. P. 19-23.

122. Sova V. V., Elyakova L. A., Vaskovsky V. E. The distribution of laminarinases in marine invertebrates // Biochem. and Physiol. 1970. Vol. 32. P. 459-464.

123. Sugita H., Mitsuya T., Amanuma K. Ultraviolet susceptibility of three marine fish pathogens //Aquaculturing veterinary. 1992. Vol. 49. P. 117 - 121.

124. Sugita H., Matsuo N., Hirose Y., Iwato M. & Deguchi Y. Vibrio sp. strain NM10, isolated from the intestine of a Japanese coastal fish, has an inhibitory effect against Pasteurella piscida // Appl. Environ. Microbiol. 1997. Vol. 63. P. 4986-4989.

125. Sundarray N., Bhat J. V. Breakdown of chitin by Cytophaga johnsonii // Arch. Microbiol. 1972. Vol. 85. P. 159-167.

126. Tanikawa E. & Wacasa T. Inorganic matter in the meat of Stichopus japonicus // Bull. Fac. Fich. Hoc. Univ. 1985. Vol. 6, № 1. P. 49-51.

127. Tanaka Y. Feeding and digestive processes of Stichopus japonicus. - Bull. Fac. Hokkaido Univ., 1958, Vol. 9, P. 14-28.

128. Ten Brink B., Minekus M., Bol J. & Huis in 't Veld J. Production of antibacterial compounds by lactobacilli // FEMS Microbiol. Reviews. 1987. Vol. 46. P. 64.

129. Tovar D., Zambonino J., Cahu C, Gatesoupe F. J., Vazquez-Juarez R. & Lesel R. Effect of yeast incorporation in compound diet on digestive enzyme activity in sea bass (Dicentrarchus labrax) larvae// Aquaculture. 2002. vol. 204. P. 113-123.

130. Tunnicliffe V., Risk M. J. Relationships between the bivalve Macoma baltica and bacteria in intertidal sediments: Minas Basin, Bay of Fundy // J. Marine Resources. 1977. Vol. 35. № 3. P. 499-507.

131. Vandenbergh P. Lactic acid bacteria, their metabolic products and interference with microbial growth // FEMS Microbiol. Rev. 1993. Vol. 12. P. 221-238.

132. Vaskovsky V. E., Suppes Z. S. Phospholipases of marine invertebrates. Distribution of phospholipase A // Biochem. and Physiol. 1972. Vol. 43. P. 601609.

133. Verschuere L., Rombaut G., Huys G., Dhont J., Sorgeloos P. & Verstraete W. Microbial control of the culture of Artemia juveniles through pre-emptive colonization by selected bacterial strains // Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65. P. 2527-2533.

134. Verschuere L., Heang H., Criel G., Dafnis S., Sorgeloos P. & Verstraete W. Protection of Artemia against the pathogenic effects of Vibrio proteolyticus CW8T2 by selected bacterial strains // Appl. Environ. Microbiol. 2000a. Vol. 66. P. 1139-1146.

135. Verschuere L., Rombaut G., Sorgeloos P. & Verstraete W. Probiotic Bacteria as biological control agents in aquaculture // Microbiology and Molecular Biology Reviews. 2000. Vol. 64, № 4. P. 655-671.

136. Wang Yanbo & Xu Zirong Effect of probiotics for common carp (Cyprinus carpio) based on growth performance and digestive enzyme activities // Aquaculture. 2005. Vol. 43. P. 32-35.

137. Wache Y., Auffray F., Gatesoupe F.-J., Zambonino J., Gayet V., Labbe L., Quentel C. Cross effects of the strain of dietary Saccharomyces cerevisiae and rearing conditions on the onset of intestinal microbiota and digestive enzymes in rainbow trout, Onchorhynchus mykiss, fiy // Aquaculture. 2006. Vol. 258. P. 470-478.

138. Ward-Rainey, N., Rainey F.A., Stackebrandt E. A study of the bacterial flora associated with Holothuria atra II J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 1996. Vol. 203. P. 11-26.

139. Williams S. T. & Vickers J. C. The ecology of antibiotic production // Microb. Ecology. 1986. Vol. 12. P. 43-52.

140. Woodard C. Past and future of aquaculture // Global problems. 2004. Vol. 4. P. 44-52.

141. Wonger B. Amylase and chondroitynsulfatase activity of Vibrio sp. // Aquaculture. 2003. V. 22. P. 53-58

142. Yingst J. Y. The utilization of organic matter in shallow marine sediments by an epibentic deposit-feeding holothurian // J. Exp. Mar. Biol, and EcoL 1976. Vol.23. № l.P. 55-69.

143. Yokoe Y., Yasumasu I. The distribution of cellulose in invertebrates // Biochem. and Physiol. 1964. Vol. 13. P. 323-338.

144. Youchimizu M., Kimura T. Study of intestinal microflora of Salmonids // Fish Pathol. 1976. V. 10. № 2. P. 243-259.

145. Yunwei Dong, Shuanglin Dong, Xiangli Tian, Fang Wang and Meizhao Zhang. Effects of diel temperature fluctuations on growth, oxygen consumption and proximate body composition in the sea cucumber Apostichopus japonicus Selenka //Aquaculture. 2005. Vol. 12. P. 32-34.

146. Ziaei-Nejad S., Rezaei M. H., Takami G. A. & Lovett D.L. The effect of Bacillus spp. bacteria used as probiotics on digestive enzyme activity, survival and growth in the Indian white shrimp Fenneropenaeus indicus // Biotechnology. 2005. Vol. 16. P. 65-67

147. Ziino M, Curto RBL, Salvo F., Signorino D., Chifalo B., Giuffrida D.

t

Lipid composition of Geotrichum candidum single cell protein grown in continuos submerged culture // Biores Technology. 1999. Vol.65. P. 7-11.